CS200048B1 - Agent for dysentery and growth defects prevention of swine and method of producing the same - Google Patents

Description

POPIS VYNÁLEZU

K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU ČESKOSLOVENSKÁSOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 19 )

(61) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 07 78(21) PV 4806-78 200 048 (11) (B1) (51) lnt.Cl 3 C 12 N 1/20A 61 K 35/74A 61 K 31/415

ÚŘAD PRO VYNÁLEZY

A OBJEVY (40) Zverejncné30 11 79(45) Vydané w w &

Autor vynálezuDUBAJ JÚLIUS RNDr., NITRA SZÉCHENYI ŠTEFAN RNDfci, NITRA

HRUŠOVSKÁ ZUZANA RNDr., NITRA DUBAJOVÁ JUSTÍNA RNDr., NITRA

SPIŠÁK MICHAL MVDr., NITRA KRAVÁRIK DUŠAN MVDr., NITRA

RAJTÁR VOJTECH MVDr, CSe., NITRA FIŠERA JOZEF MVDr. PhMr., BRATISLAVA (54) Prípravok na prevenciu dyzentérle a rastovýoh porúch u ožípaných a apSsob jehovýroby 1

Vynález sa týká zloženia a přípravy výrobku, určeného na prevenciu dyzentérle a rasto-vých porúch u ořípanýoh v období mliečnej výživy a v prédvýkrme, s pracovným názvom Lazol.

Dyzentéria ořípanýoh je ochorenie, k-toré vo všetkých krajinách s významným chovom oří-paných eposobuje značné problémy. Vehladom k tomu, že dyzentéria očípaných aa vyskytujepredovřetkým ve velkochovooh a mortalita a morbidita je vysoká, je nutné věnoval· jej tlroe-niu zvýřenú pozornoal· /Harria D.L./tinyon J.M,t Swine disentery: History, recent discoverlesand conéepta. ^rooeedings 23-rd Annual Pfizer Research Conference, áy 11, 9-25, 1975»

Urban V.P., Šnur V.I.» 20-th World Veterinary Congreas Summariea, vol. 2, Theasaloniki,Oreece, 1975/.

Dyzentéria ořípaných aa najčaatejčie vyskytuje vo váhovej kategorii 15 až 70 kg, alem8že Sa objevil· aj u cicajúcioh praaiatok a výkrmových oČípaných. Přenos ochorenia aa dejenajčaatejřie ingeaoiou fekállí, alebo prenosom z nosičov, ktoré nejavia klinické příznaky. V prevádzkových podmienkach je morbidita okolo 90 % a mortalita v závislosti od účinnostiliečby móže dosiahnul· až 30 %. Za experimentálnych podmienok, ak zvieratá nie sú llečené,mortalita dosahuje až 50 % /Harris D.L., Qlock R.D.! Swine dysentery. ins Diaeaaeseř swine.Fourth Edition, The lowa State University Press, 1975/.

Na prevenoiu a terapiu dyzentérle ořípanýoh bol do dneěného dna navrhnutý celý rad liečiv, ktoré aa v praxi používali a rSznym úspechom rožne dlhú dobu. 200 048 V tejto indikácii holi eo skupiny antibiotik vyskúřané streptomyoín, bacitracín,chloramfenikol, erytrémyoín, tylozín, gentamyoín, linkomyoín, neomyoín, spiramycín avirginiamycín. Vzhladom na ponorné rýchlo narastujúcu rezietenoiu zérodkov na tieto enti-ta iotiká, začala sa v rázných krajinách upriamovat pozornost na aromatické arzénové zlúče-niny /kyselina arzanilová, kyselina 3-nitro-4*fenylarzonová a pod./, karbadox a najma naderiváty 5-nitroimidazolu, z ktorýoh najžiřile uplatnenle naoháďza v súčasnosti dimetri-dazol a ronidazol/ napr. Grifin R.M.t Iherapeutie and prophylaotio aetivity of dimetridazo-le agalnst experimentally transmitted swine dysentery, fet.Reo. 91/5/,349-353,1972; Cotte-reau F.: Traitement du syndrome entéritique hémorhagique du pere par la dimetridazole.

Revue de médielne vétérinaire 122, 361-369, 1971$ Mesaersmith R.E.» Effect of ipronidpzolon swine dysentery. Vet. Red. email Anim. Clin. 68/9/,1021-1033» 1973$ Taylor D.J.» Roni-dazol e in the treatment of experimental swine dysentery. *et. Ree. 93/10/, 215-216, 1974$Williams B.J., Shively J.E. í In vitro antitreponemal activities of carbaddx, virginiamycín,alaquindox and tylosln as indiees of their effeotlveness for preventing swine dysentery.Vet. Med. email Anim. Clin. 73, 349-351, 1978/.

Ronidazol /l-methyl-2- C/karbamoyloxy/-methyl7 -5-nitroimidazol/ spolu s ďalřími 1lé-čiv ami zo skupiny derivátov 5-nitroimidazolu, ako sú« metronidazol, dimetridazol, ipronida-zol, omidazol a tinidazol, patří k moderným vysokoúčinným chemoterapeutikám s rozsiahlouantiprotozoárnou aktivitou. Je účinný aj voči mykoplazmám. Popři účinku proti mykoplazmáma protozoám má ronidazol aj význačné antibakteriálne vlastnosti, ktoré boli demonstrovanéin vitro ale aj in vivo v experimente na mySiaoh /Miller A.K. t Antibaoterial aetivity ofronidazole. Appl. Microbiol. 22/3/,480-481, 1971. In vitro je ronidazol najúčinnejčí protiTreponema hyodysenteriae, Campylobaoter coll a Clostridium perfringens. Vysoká účinnostronldazolu voči zárodkom T. hyodysenteriae vysvětluje rychle vymiznutle zérodkov z výkalovoéípanýoh llečených ronidazolom /Taylor D.J.i Ronidazole in the treatment and prophylaxisof experimental swine dysentery. Vet. Reo. 99, 453-456, 1976/.

Na stimuláoiu rastu oSípanýoh vo výkrme poučil ronidazol Box J.R. a kol. /Performanoeof pigs feed graded levels of ronidazole. J. Anim, Sol. 34/3/, 470-472, 1970/ a pri liečbe experimentálněj dyzentérie v roku 1974 Taylor D.J. /Ronidazole in the treatment of experi- / mental swine disentery. Vet.Ree. 95/10/, 215-216/. Od toho času sa s ronidazolom urobiliviaoeré Stúdie, ktoré sa snažili optimalizovat dávkovanie účinnej látky v pitnej vodě a vkrmivé pri experimentálně vyvolanom ochorení, ale aj v klinických podmienkach. Na základedoeiahnutých výsledkov autoři odporúčajú volit 0,006 % koncentráciu, pretože a/ recidivaoohorenia je minimálně, b/ použité koncentráoia dokáže eliminovat najviae spirochet z ko-lonu prasiat, o/ použije sa menej liečiva ako pri koncentráoii 0,012 %, d/ koncentráoia0,006 % ronldazolu neznlžuje příjem vody u oSípanýoh. V posledných rokoch sa venuje značná pozornost aj tzv. mikrobiotickým /problotickým/přípravkem, ovsahujúcim stabilizované živé zárodky baktérií mliečneho kvasenia, laktobaeil;a streptokoky. Perorálna aplikacia týohto konstruktivných črevnýoh zérodkov vyvolává pri-márné pozitivně kvalitativně změny črevnej bakteriálněj biocenozy / kvalitatívny poklespodmienečne patogénnyeh a metabolicky deStruktívnyoh kmenov/, ktoré sa sekundárné prejavla zlepšením celkového zdravotněho stavu, zvýšením odolnosti, zlepšením rastovej aktivitya výrazným zvýhodněním živin /Midan P., Boudka J.: Výsledky pokusů s použitím mikrobiotíkve výživě hospodářských zvířat. Veterinářství 26/8/,363-367,1976/.

Hlavná idea tzv. laktobaoilovej terapie spočívá v tom, že laktobaeily e iné nepatogén-ne dřevné zárodky rdznych druhov/najma streptokoky/ pSsobia na patogénne druhy, hlavně E.coli, nepriaznivo. Tvorbou kyseliny mliednej nestává posun pH zažívaoieho traktu na kyslústranu, a tým sa diastodne inhibuje ioh rast a aj tvorba toxínov.

Pre potřeby humánnej medicíny sa v zahraničí vyrába celá paleta účinných mikroblotic-kých prípravkov, ktoré sú indikovaná na liedbu gastronintestinálnyoh poruch a infekčnýchenteritíd u kojencov. V oblasti veterináraej medicíny má využitie mikrobiotických príprav-kov kretěiu tradiciu. Prvé pokusy s mlkrobiotikami v terapii a výživě zvierat spadajú až dopolovice šesldesiatych rokóv predovšetkým na tlmenie enteritíd, liedbu kolibaóilózy a sti-mul áciu rastu /Kohler B.lí., Bohl E.M.i Prophylaxis of diarrhea in newborn pigs. J. Am. med.Ags. 144, 1294-1297, 1964$ Redmond H.B., llobre R.W.i Biological effeot of introducting Lbe.acidophilus into a large swine herd experiencing enteritis. Svést. Vet. 18, 287-288,1965$Bing J.O.I.» Laotobacillus aoidophilás as growth stimulants for pigs. Veterinaria, London,5/4/, 273-280, 1968$ Varga J., Mészáros J.: Kisérletek a szopos malaook és borjak bélfóra-janak befolyásolásá laktobacilusokat tartalmazó készítményel, Jjagy. Xllatorv. Lap. 5,301-303, 1974/.

Rozpiahlejšie zavedenie mikrobiotík do veterinárnej praxe bolo až do nedávná viazanéna zavedenie modemých konzervadnýoh mikrobiologických technik, umožňujúclch výrobu stabi-lizovaných koncentrovaných mikrobiálnych kultúr. S novou technologiou výroby mikrobiotíkpre veterinárske úděly prichádza švédská firma Medipharm. Základnou složkou přípravkuLactiferm tejto firmy je stabilizovaná kultúra zárodkov Streptocooous faecium. V exaktnýchtestech, robenýoh s týmto prípravkom, sa zistilo výrazné zníženie frekvencie gastrointesti-nálnyoh porúch, zlepřenie priemerných prírastkov hmotnosti, zvýhodnenie konverzie krmivá azlepřenie adaptability na nové podmienky /Mičan P. a kol.: Použití mikrobiotík pri odchovua výkrm prasat. Krmivářství 8, 180-183, 1976/.

Bevýhodou uvedeného spSsobu podávania mikrobiotík je, že v oblastiaoh s výskytom dy-zentérie ošípaných nie je možné plné využíval stimulačný rastový efekt uvedeného mikrobio-tlka, pretože samotný nepostačuje na terapiu ani na prevenciu dyzentérie. Preto predmetvynálezu navrhuje kombináciu mikrobiotika Streptococcus faecium s chemoterapeutikoml-methyl-2- [/karbamoyloxy/-methyll -5-nitroimidazol, voči kterému je tento kmen odolný,Možnoal kombinácie Streptooooous faecium s ronidazolom z hlediska prežívania a schopnostirozmnožovanla zárodkov Streptococcus faecium sa laboratorně testovala. Ronldazol neinhibu-je množenie zárodkov tohoto kmene. Schopnosl rýchlej kolonizácie zárodkov Streptococcusfaecium v zažívaoom trakte zostáva zachovaná pri súdasnej preventivnéj ochraně ořípanýchproti dyzántérli a iným gastroenteritídam. Výhodou kombinácie l-methyl-2-£/karbamoyloxy/--methylj -5-nltroimidazolu /ronidazolu/ s bakteriálnym kmeňom Streptococcus faeelua v pří-pravku Lazol je velmi dobrá preventivná ochrana ožípaných proti dyzeatárli za súdaanáj pre-ukaznej rastovej stlmuláoli a zlepřenej konverzil krmivá.

Kmen Streptoooocus faecium hol deponovaný do československej zbierky kultur prl Vý-skumnom ústave veterinárneho lekáretva v Brně pod číslom CCM 6142.

Prípravok podlá vynálezu obsahuje v 1 g 12 až 18 mg l-methyl-2- [’/karbamoyloxy/-methyí|-5-nitroimidazolu, minimálně 1.10 živých zárodkov kmene Streptoooccus faecium a 6 až 10 mgkysličníka zinočnatého. Prípravok sa aplikuje v 0,5 % konoentrácii v príslušnej krmnéj zme-si, dobré homogenizovaný. Používá sa preventivné v krmných Startérových mliečnyoh zmesiacha v predvýkrme nepřetržíte, alebo přerušované v desaldňovýoh intervalech. Příklad 1

Primárná bakterlálna kultúra kmeňa Streptocoocua faecium, CClí 6142, ktorého rozletěnoiana ronidazol holá získaná paaážováním cez toto chemoterapeutikum, aa pomnožuje na sojovomšivnom médiu v termostate pri teplote 37 °Č po dobu 16 hodin, pjričom vytvára bohatý sedimentRozmnoženou bakteriálnou kultúrou sa očkuje připravená aterilné modifikované mliečne médiumvo fermentori, obsahujúoe 20 hmotových percent sušeného odtučneného mlieka a 0,3 hmotovýchpercent sušeného kvasnicového autolyzátu. Inokulované médium sa kultivuje za prevzdušňova-nia a miešania pri teplote 37 °C až 45 °C po dobu 16 až 16 hodin. Takto připravená bakteri-élna kultúra, obsahujúca 10^ až 10^ živých zárodkov na 1 ml sa fixuje sušením /lyofili-zácia, fluidné sfcšenie, rozprašovacle sušeníe/. a zvýšenie stability a odolnosti voči ostatným zložkám přípravku a vplyvom prostředísa sušená bakterlálna kultúra stabilizuje fluidnou obdukciou /napr. na fluidnom granulátoriWSG Glatt/ 3%-ným vodným alebo etanolickým roztokom polyvinylpyrolidonu /Xollidon 30/.Pluidná obdukcia prebieha prl teplote 35 až 40 °C,

Stabilizovaná bakterlálna kultúra kmeňa Streptoooccus faecium, 'Sbsahujúoa minimálně 9 1.10 živých zárodkov /1 g sa zmieša s ronidazolom v takom pomere, aby hotový výrobok obsa-hoval v 1 grame 12 mg ronidazolu /l-methyl-2-f /karbamoyloxy/-methyl] -5-nitroimidazol/, 6 * minimálně 1.10 živých zárodkov kmena Streptoooocus faecium a 8 mg kysličníka zinočnatého.Před homogenizáciou sa uvedené množstvá technologicky upravla a doplnia na 1 g mikrobiálněnezávadným vehikulum modifikovaným škrobom /tepelne a enzymaticky upravený Škrob, ktorý sau nas vyrába pod názvom Solvarin M 20, Amylin/. Ako vehikulum samdže použit aj sacharózaa kaolín. Příklad 2 v

Primárná bakterlálna kultúra kmena Streptoooocus faecium, rezistentnéhó na ronidazol, sapomnožuje na sojovom živnom médiu v termostate pri teplote 37 °C po dobu 16 hodím, Pomno-ženú bakteriálnou kultúrou sa očkuje připravené vysterilizovené modifikované mlieČné médiumvo fermentori. kodifikované mliečné médium obsahuje 20 hmotových percent sušeného odtučne-ného mlieka, 0,1 hmotových percent sušeného kvasnicového autolyzátu a 1 % síranu amonného.Inokulováné médium sa kultivuje zá prevzdušňovania a miešania pri teplote 37 až 45 °C podobu 16 až 18 hodin, ^akto připravená bakterlálna kultúra sa fixuje sušením a stabilizujefluidnou obdukoiou ako je uvedené v bode 1,

Stabilizovaná bakterlálna kultúra kmeňa Streptoooocus faecium sa zmieša s ronidazoloma kysličníkom zinočnatým v takom pomere aby hotový prípravok obsahoval v 1 grame 14 mg l-methyl-2 -f /karbamoyloxy/-methyl^ -5-nitroimidazolu /ronidazolu/ a 10 mg. kysličníka 6 » zlnočnatého a minimálně 1.10 živých zárodkov Streptocoocue faecium. galej ea spravuje tahako bolo popíepné v příklade 1. Příklad 3

Primárná bakteriálně kultúra kmeňa Streptocoocue faecium sa pomnožuje na máeopepto-novom bujóne v termostate prl teplota 37 °C po dobu 16 hodin, ®alej ea apracuje ako je po-píaané v příklade 1 a výnimkou, že stabilizovaná bakteriálně kultúra kmea< Streptoooccuefaecium aa zmieéa a ronidazolom a kysličníkom zinočnatým v takóm" pomere, aby hotový prí-pravok obsahoval v 1 grame 16 mg l-methyl-2G-/karbamoyloxy/-methyl3-5-nitroimidazolu, mini g v málne 1.10 živých zárodkov kmena Streptocoocue faecium a 6 mg kyeličníka zinočnatého. Účinnost přípravku na prevenci® dyzentérie a rastových poruch ořípaných je dokumento-vaná následovnými tabulkami]

Tabulka č. lt Pokus v období akrmovanla krmnéj zmesi ČOS 2 /Komplexná z*ea pre skorý od-chov oiciakov - Startér/.

Zloženie ČOS 2« rybia múčka, sudená torula, suřené odstr.mlleko, sušené zemiakové vločky,aojové pokrutiny, sladový kvet, technický cukor, obilné klíčky, přenica,•jačmeň, lúpaný ovoa, dikalciumfosfát, krmná sol, minerálna krmná přísada,vitamínový antibiotický doplnok.

Pokusná Kontrolnáaakupina skupina

Počet očípaných v skupině /ks/ 100 100 Priemerná živá hmotnos%/ž.h./na kus na začiatku pokusu 17,82 18,96 Počet krmných dní 93 93 Úhyn počas pokusu /ks/ 1 2 Počet očípanýoh na konci pokusu 99 98 Priemerná ž.h./ks na konod pokusu /kg/ 61,51 55,50 Absolútny prírastok ž.h. na kus /kg/ 43,69 36,54 Priemeraý prírastok ž.h./ks a den /kg/ 0,473 0,393 Index zvýčenia ž.h./ks a den/ /%/ 120,0 100,0 Spotřeba krmivá na kg ž.h. /kg/ 3,8 4,0 Index spotřeby krmivá na kg ž.h. /%/ 95,0 100,0

Poznámka] Kontrolná skupina bola pozitivna a medikáciou krmnej zmesi přípravkom Ridzol P, t.j. prípravkom s obsahom 12 % ronldazolu. Pokusy boli realizované na očípanýchv dyzenterlokej lokalitě. 7 prlebehu pokusu sa dyzentéria neprejavila ani v jed-nej skupině.

Tabulka č. 2 j I. Pokus v období krmnej zmesi ČOS 2.

Pokusná skupina Kontrolně skupina Počet olípanýoh v skupině /ks/ 321 321 Priemerná čivá hmotnost /ž.h./na kus na začiatku pokusu /kg/ 9,0 7,0 Počet krmných dní 18 36 Úhyn počas pokusu /ks/ 1 0 Počet olípaných na konci pokusu /ks/ 321 321 Priemerná ž.h.na nonci pokusu /kg/ 20,90 19,96 Absolútny prírastok ž.h. na kus /kg/ 11,50 12,96 Prlemeraý prírastok ž.h. na kus a deň /kg/ 0,673 0,370 Index zvýlenia ž.h. ha kus a deň /%/ 181,8 100,0 Spotřeba krmivá na kg ž.h. /kg/ 1,36 1,44 Index spotřeby krmivá na kg ž.h. /%/ 94,44 100,00 II. Pokus v období krmnej zmesi A 1/ Kompletně zmes pře olípané do 35 kg/· Zloženie tbielkovlnový koncentrát, vitaminózna lucerková múčka, žemlaková vločky, plenice, jačmeň, ovos, sol, minerálna krmná přísada. Pokusná Kontrolně skupina skupina Počet olípaných v skupině /ks/ 320 321 Priemerná živá hmotnost na kus na začiatku pokusu /kg/ 20,90 19,96 Počet krmných dní 91 92 Úhyn počas pokusu /ks/ 1 4 Kutné porážky počas pokusu /ks/ 1 17 Počet olípaných na konci pokusu /ks/ 318 300 Priemerná ž.h./ks na konci pokusu /kg/ 63 59 Absolútny prírastok ž.h. na kus /kg/ 42,10 39,04 Priemerný prírastok ž.h. na kus a deň /kg/ 0,473 0,405 Index zvýlenia ž.h. na kus a deň /%/ 116,79 100,00 Spotřeba krmivá na kg ž.h, /kg/ 2,90 3,70 Index spotřeb? krmivá na kg ž.h. /%/ - - - 76.38 100,00

Poznámkat Kontrolně skupina bola negativna, bez medikécie krmných zmesi, ale v případe výskykllnlckýoh priznakov dyzentárie bola liečená přípravkom Vibriogal, t.j. příprav-kom s obsahom 11 % dlmetridazolu, 6,5 % furazolldónu a 2 % kysličníka zinočnaté-ho.

Claims (5)

1. Tabulka δ. 3t Pokus v období krmnéj zmeai A 1/Kompletná zmes pre očípané do 35 kg/. Pokusná Kontrolní skupina skupina Počet ošípanýoh v skupině /ks/ 447 455 Priemeraá ž.h. na kus na začlatku pokusu /kg/ 20,91 20,91 Počet krmnýoh dní 82 82 Úhyn počas pokusu /ks/ 7 20 Peroento úhynu počas pokusu /%/ 1,58 4,39 Počet ošípanýoh na konci pokusu /ks/ 440 435 Priemerhá ž.h. na konoi pokusu /kg/ 70,29 62,60 Absolůtny prírastok ž.h. + ks /kg/ 49,38 41,69 Priemerný prírastok ž.h. na kus a deň /kg/ 0,519 0,441 Index zvýšenia ž.h. /ks a deň /%/ 117,95 100,0 Spotřeba krmivá na kg ž.h. /kg/ 3,08 3,21 Index spotřeby krmivá na kg ž.h. /%/ ---22a$....... 100,0 Poznámkat Pokusná skupina bola v tomto pokuse vyrovnaná a počas celého priebehu nebole za-znamenaná žiadná chorobnosí. Ogípané boli čulé, bez príznakov hnačky a aj u celejskupiny bol zaznamenaný zníženy kašel. Příčiny úhynu v tejto skupině /1,58 %/boli zvačža bronohopneumónie. Liečba ani žiadne zákroky sa v tejto skupině ne-prevádzali. V kontrolnej skupině uhynulo spolu 20 ks ošípanýeh. V tejto skupiněpřetrvávala Salmonellóza, dyzentéria a ochorenia respiratorného aparátu, ώβ 1léč-bu sa použilo 76 kg přípravku Vibriogal, 1,5 1 červienkového séra a 500 ml Chro-nloinu, tj. přípravku s obsahem 15 % D-chloramfenikolu. PEE DME I ΪΪΕ JÍLE ŽU

   1. Prípravok na prevenoiu dyzentérie a rastovýoh poruch ošípanýoh, vyznačujúoi sa tým, že v 1 g obsahuje 12 až 18 mg l-methyl-2 G» /karbamoyloxy/-methyl 3 -5-nitroimidazolu, mini-6 » málne 1.10 živých zárodkov mikroořganizmov kmene Střeptocoocus faecium, 6 až 10 mgkysličníka zinočnatého a zvySok do 1 g mikrobiálně nezávadné vehikulum.
2. 2. Prípravok na prevenoiu dyzentérie a rastovýoh porúoh podlá bodu 1, vyznačujúoi sa tým,že mikroorganizmus kmeňa Streptocooous faecium představuje kmen Streptococcus faeciumC01Í 6142.
3. 3. Spísob výroby přípravku podlá bodu 1, vyznačujúoi sa tým, že sa pomnožená bakteriálněkultúra kmeňa Streptooooouš faecium kultivuje na mliečnom médiu modifikovanom kvasnico-vým autolyzétom v množstva 0,1 až 0,3 hmotovýoh peroent a síranom amonným v množstva 1 až 3 hmotovýoh peroent prl teploto 37 °C až 45 °0 po dobu 16 až 18 hodin a získaná15 bakteriálně kultúra, obsahujúoa 10 až 10 * živýoh zárodkov sa fixuje sušením a potom sa zmieěa a 1-methyl -2 C- /karbamoyloxy/-methyl} -5-nitroimidazolom, kysličníkem zinoč- natým a mikrobiálně nezávadným vehlkulom tak, aby 1 g přípravku obsahoval 12 až 18 mg l-methyl-2t /karbamoyloxy/-methyl3-5-nitroimidazolu, minimálně 1.10® živých zárodkov kmeňa Streptooooouš faeoium a 6 až 10 mg kysličníka zinočnatého.
4. 4. Spoaob výroby přípravku podlá bodu Z, vyznačujúci sa tým, že mliečne médium je modifi-kované kvasnicovým autolyzétom v množstva 0,3 hmotových % a síranom amonným v množstva1 hmotového peroanta, vztiahnuté na hmotnost mlléčného média*
5. 5. SpSsob výroby podlá bodu 3» vyznačujúci sa tým, že sa eužené bakteriálna kultúra stabi-lizuje fluidnou obdukoiou vodným alebo etanoliokým roztokom polyvinylpyrolldonu priteplota 35 až 45 °C.