CS195451B1 - Způsob děleni a čištění proteinů - Google Patents
Způsob děleni a čištění proteinů Download PDFInfo
- Publication number
- CS195451B1 CS195451B1 CS11477A CS11477A CS195451B1 CS 195451 B1 CS195451 B1 CS 195451B1 CS 11477 A CS11477 A CS 11477A CS 11477 A CS11477 A CS 11477A CS 195451 B1 CS195451 B1 CS 195451B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- proteins
- imidazole
- separation
- column
- purification
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 title description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 2
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 125000005397 methacrylic acid ester group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 8
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 8
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 7
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 7
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 3
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 3
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 2
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 102000014702 Haptoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 108010085838 cytochrome P420 Proteins 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 102200020326 rs121908517 Human genes 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu dělení a čištění proteinů, s výhodou hemoproteidů. Postup je použitelný v chemickém, farmaceutickém a biochemickém průmyslu, jakož i v klinické chemii, analytice a diagnostice.
K dělení, resp. čištění proteinů se používá různých metod, které využívají rozdílů ve fyzikálních a biochemických vlastnostech proteinů, které, se mají rozdělit, jako je · rozpustnost, stálost, velikost molekuly, elektrický náboj atd. /N. REHFELD, D. REICi-JELT: Analytische und práparative Methoden der klinísche.n Biochemie, Akad . Verlag Berlin 1972, S. SCHWIMMER a A. B. PARDEK: Adv. ín Enzyinology 14, 375/. Tyto způsoby jsou zčásti časově velmi náročné a materiálově nákladné a dostatečné čistoty lze často dosáhnout j -·- η z n v y s o k ý c. b ztrát n a v ý t ě ž k u V poslední době získávají rostoucí vý2 znám postupy afinitní chromato^rafíe, které spočívají na tvorbě specifických bioařinních proteinových komplexů. Tak je např. popsáno oddělení hemoglobinu /Hb/ na základě tvorby komplexu s haptoglobinem /m. KLEIN a C. ÍKAESCO: Biochem. biophys. Res. Commun. 52,
774 /1973/7'a s ímidazolem, popř. jeho deriváty.
Předmětem vynálezu je způsob dělení a čistění proteinů, jehož podstatou je, že se vodný roztok obsahující proteiny při\’ede do styku s imidazolovým sorbentem, který obsahuje imidazolový derivát vázaný na makromolekul ár n im ve vodě nerozpustném nosiči, přičemž nosičem jsou bud polymery esterů kyseliny methakryiové sírované ethylendimethakryláfcem obecného vzorce I
CH„
CH..-C-CO-OCH CHo-0-C-NH- (CH ) -N=CH-(CH? ) m-Cll=N-N~CH.,-CH ,-r——iN ’ II
NH kd e n /1/ nebo obecného vzorce II
CH0
I 2 ,
CH.-C-C- O-CH,~CH. 3 I li ' 2 2
kde n 1 až· 3 nebo polysachar idy jako celulóza nebo agaróza nebo sírované dextrany, a t:o při pK 7 až 11, popřípadě v přítomnosti detergentů nebo glycerinu při teplotě 0 až 30 °C, s výhodou při. teplotě místností, načež se proteiny obsažené v roztoku izolují.
Metoda podle vynálezu slouží zejména k dělení hemoglobinu od myoglobinu nebo cytochromu P 450 od cytochromu P 420 .
Základem vynálezu je využití, tvorby specifických bioafinních proteinových komplexů a nalezení vhodného způsobu dělení na bázi afinitní chromatografie. Jedná se o jednoduchý a obecně použitelný způsob dělení a Čištění proteinů, s výhodou hemoproteidů, který je použitelný analyticky i preparativně a dosahuje dobrých výtěžků.
Imidazol nebo jeho derivát se váže na nosič přímo nebo prostřednictvím spacerů. Styčnými místy jsou kruhový dusík v poloze -2 nebo 4 /5/ ímidazolového kruhu.
Výroba těchto imidazolových sorbentů spočívá na známých postupech. K realizací vynálezu lze použít imidazolové sorbenty připravené podle autorského osvědčení č. 186 929:
a/ imidazolový sorbent se vnese do roztoku obsahujícího proteiny a po době potřebné k adsorpci, asi po 1 až 24 hodinách se filtrací opět oddělí /postup vsádkový/;
b/ imidazolový sorbent je ve sloupci /v koloně/, na který se přivádí roztok obsahující proteiny /sloupcový způsob/.
V sád kovy postup je zvláště výhodný pro čisticí operace, tj. při oddělování nečistot. Po provedení tohoto způsobu zůstane jeden z proteinů vázaný na sorbentů, kdežto ostatní zůstanou v roztoku, který se má izolovat. Proteiň se izoluje z roztoku zahuštěním nebo vysrážením známým způsobem. Sloupcový způsob je zvláště výhodný pro dělicí operace, jsou-li proteiny vázány na sorbent různě silně, ale ne pevně. Roztok obsahující proteiny se přivádí na sloupec pH 7 až 10, popřípadě v přítomnosti detergentů nebo glycerinu, při teplotách 0 až 30 °C, s výhodou při teplotě místnosti. Potom se za týchž podmínek eluuje, přičemž proteiny se postupně objevují v eluční kapalině na základě různě pevné vazby k sorbentů. Odpovídající frakce se odebírají a izolace získaných čistých proteinů se provádí známým způsobem.
. Způsob podle vynálezu je jednoduchý svým provedením a je s výhodou obecně použitelný. Proteiny, které se mají dělit, resp. čistit, se získají v dobrých výtěžcích a ve vysoké čistotě. Tak např. ze směsi hemoglobinu a myoglobinu byl získán sloupcovým způsobem chromaLografícky čistý myoglobin s výtěžkem nad 90 %. Ze směsi cyto~ chrómu P45O a cytochromu P42O byl vsádkovým postupem odstraněn cytochrom P42O z 85 Z. Použité nosiče lze, popřípadě po jejich regeneraci, opakovaně použít.
Vynález je osvětlen na několika příkladech, které jej ovsem nijak neomezují.
Příklad 1
CH
CH „-C-CO-OCH . CH o-0-C-NH - ÍCH-N=CH-(CH. 3 i 2 2 j| k 2' n '2
I NH
-CH=N-CHO-CH m 2
/1/ n x 6 m - 3 se uvede ve sloupci s 0.1 M pufrem pH 8 do rovnovážného stavu. Na sloupec se přidá 1 ml roztoku hemoglobinu a myoglobinu /hovězí/ - koncentrace každého hemoproteidu 2,5.10“^ val - a potom se eluuje na sběrači frakcí pufrem pH 8.
V eluátu se získá přes 90 7, myoglobinu, kdežto hemoglobin zůstává adsorbován na sorbentů. Takto získaný myoglobin je gelchromatograficky jednotný.
Příklad2
3,0 g imidazolového sorbentů se strukturní jednotkou obecného vzorce II /n - 1,2/ Vzorec II:
se uvede do rovnovážného stavu s pufrem pH 8 na sloupci. Na sloupec se nadávkuje 1 ml směsí hemoglobinu /hovězí/ a myogloH binu /hovězí/ 1 : 1 s celkovou koncentrací 4-5.10-4 val/1 a potom se eluuje pufrem pH 8 na sběrači frakcí.
Ge1chromatografické stanovení proteinových frakcí ukazuje, že při použití imídazolového sorbentů, kde n = 2, se eluuje čistý myoglobin a v případě n = 1 se myoglobin v porovnání s hemoglobinem silně obohatí.
Příklad 3
100 mg, resp. 1 ml zbotnalého imidazolového sorbentů obecného vzorce II, kde n » 1 nebo 2, se uvede do rovnovážného stavu s pufrem pH 7,4, 0,1 M fosfátem, 6%ním cholátem sodným, 1 mM ethylendiamintetraocto vou kyselinou /EDTA/, 1 mM dithioer ythr i.tem, popřípadě 20% glycerinem. Přidá se 1 ml roztoku obsahujícího z králičích jater izolovaný Cyt P45Q/P42O /koncentrace 80 až 150 san, 13 až 36 % P 420/ a vzorek se třepe 18 hodin při 4 °C nebo dvě hodiny při teplute misLnosti. V e1u a l u je obsah Cyt P42O až z 87 % výchozí hodnoty odstraněn.
Claims (1)
- PŘEDMĚTZpůsob dělení a čištění proteinů, s výhodou heraoproteidů, vyznačený tím, že se vodný roztok obsahu jící proteiny přivede do styku s imidazolovým sorbentem, který obsahuje imidazolový derivát vázaný na makroVYNÁLEZU molekulárním ve vodě nerozpustném nosiči přičemž nosičem jsou bud polymery esterů kyseliny methakrylové sítované ethylendi methakrylátem obecného vzorce I kde nCH3-C-CO-OCH2CH2-O~C-NH-|cH2)n-N=CH-(CH2 ’ NHH / X/ nebo obecného vzorce IICHCH (o-ch2~ch2 nebo polysacharidy jako celulóza nebo agaróza nebo sítov.ané dextrany, a to při pH 7 až 11, popřípadě v přítomnosti detergentů nebo glycerínu při teplotě 0 až 30 °C, s výhodou při teplotě místnosti, načež se proteiny obsažené v roztoku izoluji./11/ kde n 1 až 3
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS11477A CS195451B1 (cs) | 1977-01-07 | 1977-01-07 | Způsob děleni a čištění proteinů |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS11477A CS195451B1 (cs) | 1977-01-07 | 1977-01-07 | Způsob děleni a čištění proteinů |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS195451B1 true CS195451B1 (cs) | 1980-02-29 |
Family
ID=5332714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS11477A CS195451B1 (cs) | 1977-01-07 | 1977-01-07 | Způsob děleni a čištění proteinů |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS195451B1 (cs) |
-
1977
- 1977-01-07 CS CS11477A patent/CS195451B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hirs et al. | The chromatography of amino acids on ion exchange resins. Use of volatile acids for elution | |
| Belew et al. | High-performance analytical applications of immobilized metal ion affinity chromatography | |
| US20060070954A1 (en) | Methods and systems for protein separation | |
| JP6456376B2 (ja) | 組換えタンパク質の精製方法 | |
| Harris et al. | QUANTITATIVE CHROMATOGRAPHIC METHODS: PART 7. ISOLATION OF AMINO ACIDS FROM SERUM AND OTHER FLUIDS | |
| SU1523046A3 (ru) | Способ очистки человеческого @ -интерферона | |
| RU2001135838A (ru) | Способы очистки ДНК и очищенная ДНК | |
| Davison | Chromatography of histones | |
| CN101685051A (zh) | 一种富集磷酸肽或磷酸化蛋白质的开管毛细管柱及方法 | |
| Grinberg et al. | Protein aggregation in high-performance liquid chromatography: hydrophobic interaction chromatography of. beta.-lactoglobulin A | |
| Andersson | Fractionation of human serum proteins by immobilized metal affinity chromatography | |
| EP0416416B1 (en) | Method for purifying low molecular weight compounds of peptide or pseudo-peptide structure | |
| CN1175105C (zh) | 借助于膜色谱进行的维生素k依赖性蛋白的纯化 | |
| US5480542A (en) | Packings combining protein to a support via a spacer | |
| US3976767A (en) | Purification of hepatitis B surface antigen by chromatography on agarose containing aminoalkyl residues | |
| JP2573467B2 (ja) | 第ｉｘ因子タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物 | |
| GB1597182A (en) | Soluble complex former for the affinity specific separation of macromolecular substances its preparation and its use | |
| CS195451B1 (cs) | Způsob děleni a čištění proteinů | |
| CN101575370A (zh) | 一种富集血清中低丰度蛋白的方法 | |
| JP2007502970A (ja) | トロポロンをＣｕ（ＩＩ）と複合化させることを含むトロポロンを検出する方法 | |
| JP2010148442A (ja) | 硫酸化糖鎖を有する糖ペプチドを濃縮する方法及びそのためのキット | |
| JP6343675B2 (ja) | 界面活性剤により仲介される分取ｈｐｌｃによる有機化合物の精製 | |
| Cochet et al. | Chromatography of human immunoglobulin G on immobilized Drimarene Rubine R/K-5BL Study of mild, efficient elution procedures | |
| Shen et al. | Hydrazide as a ligand moiety in immobilized metal ion affinity chromatography: Separation of BO–IMI and BODIPY–hydrazide | |
| JP2001056326A (ja) | セロトニン及び５−ヒドロキシインドール酢酸の精製法及び測定方法 |