CN2531391Y

CN2531391Y - 一种联合检测torch特异性抗体的酶免疫试剂盒

Info

Publication number: CN2531391Y
Application number: CN 01252075
Authority: CN
Inventors: 王滔
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2001-09-30
Filing date: 2001-09-30
Publication date: 2003-01-15
Anticipated expiration: 2011-09-30

Abstract

本实用新型涉及一种用于医学上联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒，它能方便、快捷、精确地联合检测TORCH 5种病原体的特异性的抗体。本实用新型是由外框支撑架及放置于其上的可拆酶标反应板条组成，在每个可拆酶标反应板条上设置有反应孔，在反应孔中涂布有已知的抗体或抗原，其特征在于：在外框支撑架上放置有3条以上的可拆酶标反应板条，每个可拆酶标反应板条上排列有4～10个反应孔，在每个反应孔的内表面与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一、二或数层膜。

Description

一种联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒

(一)技术领域：

本实用新型涉及一种用于医学上联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒。

(二)背景技术：

TORCH综合征是指弓形体、风疹、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒等感染性疾病。其中T指弓形体(toxoplisma)，O指其它，R指风疹病毒(rubella virus)，C指巨细胞病毒(cytonugalo virus)，H指单纯疱疹病毒1、2型(herpes simplexvirus 1，2)，俗称优生五项，因为这五项若在孕期感染，只其中一项即可使胎儿造成严重缺陷。TORCH感染也见于内科、儿科、神经科、风湿科、免疫科等，因此，开展该项检测有重要的临床意义。

TORCH检查有5种病原体，而每种都要检查该病原体特异性的IgG、IgM，共计10项。在目前的临床检测工作中，只有分散独立的10种检测试剂盒，它们是：抗弓形体IgG检测试剂盒、抗弓形体IgM检测试剂盒、抗风疹病毒IgG检测试剂盒、抗风疹病毒IgM等。而在实际临床工作中，医生常常要求将TORCH成套检测，每做一套TORCH检测，需使用10套试剂，非常繁琐，劳动强度大，且容易出错，导致实验误差。

另外，在包被酶标反应板时，多数厂家没有在反应孔的内表面预先包被(“涂膜”)，而直接将抗原或抗体包被在反应孔的内表面。该方法具有：①被包被的蛋白质生物活性丧失、②效率低、③重复性低等缺陷。从而使实验误差较大，难以达到理想的检测精度。

(三)发明内容：

本实用新型的目的在于提供能方便、快捷、精确地检测TORCH 5种病原体的特异性的抗体的一种联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒。

本实用新型目的通过如下技术方案实现：它是由外框支撑架及放置于其上的可拆酶标反应板条组成，在每个可拆酶标反应板条上设置有反应孔，在反应孔中涂布有已知的抗体或抗原，其特征在于：在外框支撑架上放置有3条以上的可拆酶标反应板条，每个可拆酶标反应板条上排列有4～10个反应孔，在每个反应孔的内表面与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一、二或数层膜。

本实用新型能联合检测TORCH 5种病原体的特异性的抗体，并且由于在酶标反应孔的内表面预先涂布了一、二或数层膜，从而提高了检测精度，降低了检测的劳动强度，实现方便、快捷、精确的检测目的。

(四)附图说明

图1为本实用新型的结构示意图。

图2为本实用新型实施例1的结构示意图，其中(a)为主视图，(b)为仰视图。

图3为本实用新型实施例2的结构示意图。

图4为本实用新型实施例3的结构示意图。

图5为本实用新型实施例4的结构示意图。

图6为本实用新型实施例5的结构示意图。

图7为本实用新型实施例6的结构示意图。

图8为本实用新型实施例7的结构示意图。

图9为本实用新型实施例8的结构示意图。

图10为本实用新型实施例9的结构示意图。

图11为本实用新型实施例10的结构示意图。

图12为本实用新型实施例11的结构示意图。

图13为本实用新型实施例12的结构示意图。

(五)具体实施方式：

如图1所示：本实用新型由外框支撑架1·1及放置于其上的可拆酶标反应板条2·2组成，在每个可拆酶标反应板条上设置有反应孔3·3，在反应孔中涂布有已知的抗体或抗原，其特征在于：在外框支撑架上放置有3条以上的可拆酶标反应板条2·2，每个可拆酶标反应板条2·2上排列有4～10个反应孔3·3，在每个反应孔3·3的内表面与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一、二或数层膜。根据所检测的抗原或抗体的不同，所涂布的膜的成分也不同。

对于IgG和IgM的检测目前国内主要采用ELISA方法，而该方法依据检测原理不同又可分为间接法和直接法。两种方法在实施时有所不同，故列举实施例分述如下：

一.间接ELISA方法

间接ELISA方法检测病原特异性抗体的原理是：将已知抗原包被于微孔板上，加入待测血清(含待测未知抗体)，孵育后洗板，洗去未结合的抗体；加入一定浓度酶标记抗入IgG或IgM，孵育后洗板，洗去未结合的抗体；加入酶反应底物，显色，根据颜色浓度，评定结果。

实例1：氨基内酯聚苯乙烯(PVLA)法

如图2所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，其中，该层膜1由羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液与PVLA配制而成，膜2、3、4、5、6为已涂布的抗原，它们分别含弓形体(T)，风疹病毒(R)，巨细胞病毒(C)，单纯疱疹病毒1、2型(H1、H2)。

本实施例的试剂盒的具体使用方法如下：

1.加入待测血清：将待测血清用适当样本稀释液按1/100比例稀释，各取100μl加入反应孔内。置37℃，半小时。用0.05％吐温20的PBS(磷酸盐缓冲液)洗板。洗板三次，甩干。

注意：本试剂盒每一列即一个微孔板条为一个单元，检测一份标本或对照。本试剂盒设阴性、阳性和CUT-OFF三种对照，加样时，按抗原包被的顺序(也就是T、R、C、H1、H2顺序)依次加入相应病原体的对照血清。

2.适当浓度辣根过氧化物酶标记的抗人IgG，每孔加入100μl，置37℃，半小时。同前洗板，甩干。

3.显色：每孔加入100μl TMB底物溶液。室温反应15分钟后，加入50μl 2N硫酸终止反应。

4 结果判定：以酶联仪492nm波长测定各孔OD值(减去空白孔OD值后计算)。

临界值＝CUT-OFF孔的OD值，标本OD值小于临界值为阴性，标本OD值≥临界值为阳性。或者P/N＞2为阳性，P为待测样品OD值，N为阴性对照OD值。

注意本试剂盒结果判定的特点是纵向联合检测，横向联合比较。第N列检测一个标本的5种病原体的IgG，它的弓形体IgG结果，要根据该列的T反应孔的OD值与阴性对照或CUT-OFF列的T反应孔的OD值按上述方法比较而得出。以此类推。

以上是以检测TORCH特异的人IgG作的说明。当需检测IgM时，第1步的样本稀释液应含一定浓度的吸附剂，以去除IgG的干扰，可采用蛋白G、蛋白A等，样本稀释比率不变，对照改为病原体特异的IgM血清即可，反应条件不变；第2步将适当浓度辣根过氧化物酶标记的抗人IgG改为适当浓度辣根过氧化物酶标记的抗人IgM，反应条件不变；第3步和第4步不变。

为避免类风湿因子等的干扰，在第2步中也可采用辣根过氧化物酶标记的鸡抗入IgM来代替上述哺乳动物如羊、鼠等抗人IgM。其余不变。

实例2：“水包被”方法

如图3所示：在反应板条2·2上在反应孔3·3内与已涂布的抗体或抗原之间涂布有二层膜，其中，一层膜7含多聚赖氨酸，另一层膜8含活化葡聚糖，膜9、10、11、12、13为已涂布的抗原，它们分别为T、R、C、H1、H2。

以上操作完成对抗原的包被，以下步骤与实例1同，但是，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG或IgM的稀释度同样可能需作一些调整，应作棋盘点阵实验，进行优化。

实例3：链霉亲合素----生物素化抗原间接吸附法。

如图4所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，该层膜15含链霉亲合素，膜16、17、18、19、20为已涂布的抗原，它们分别为T、R、C、H1、H2。

该反应条的使用方法与实例1同，但是，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG或IgM的稀释度同样可能需作一些调整，应作棋盘点阵实验，进行优化。

实例4：甲基乙烯醚--顺丁烯二酸酐共聚体法(MMAC)

如图5所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与已涂布的抗体或抗原之间涂布有二层膜，一层膜21含MMAC，另一层膜22含己二胺，膜23、24、25、26、27为已涂布的抗原，它们分别为T、R、C、H1、H2。

实例5：戊二醛方法

如图6所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，该层膜28含戊二醛，膜29、30、31、32、33为已涂布的抗原，它们分别为T、R、C、H1、H2。

该反应条的使用方法与实例一同，但是，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG或IgM的稀释度同样可能需作一些调整，应作棋盘点阵实验，进行优化。

二.捕获ELISA方法

捕获ELISA方法检测病原特异性抗体的原理是：(以检测IgM作说明)将抗人IgM(μ链)的抗体包被于微孔板上，加入待测血清(含待测未知抗体)，孵育后洗板，洗去未结合的抗体；加入一定浓度已知的酶标记抗原，孵育后洗板，洗去未结合的抗原；加入酶反应底物，显色，根据颜色浓度，评定结果。IgG检测原理同IgM。

实例6：氨基内酯聚苯乙烯(PVLA)法

如图7所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，该层膜34由羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液与PVLA配制而成，膜35为已涂布的抗体，为羊(或其它种属)抗人IgM或IgG抗体。

本实施例的试剂盒的反应条的具体使用方法如下：

1.加入待测血清：将待测血清用适当样本稀释液按1/100比例稀释，各取100μl加入反应孔内。置37℃，半小时。同前洗板，甩干。

注意：本试剂盒每一列即一个微孔板条为一个检测单元，检测一份标本(或对照)。本试剂盒设阴性、阳性或CUT-OFF三种对照，加样时，按顺序(也就是T、R、C、H1、H2顺序)依次加入相应病原体的对照血清。

2.分别取适当浓度辣根过氧化物酶标记的5种病原体的抗原按顺序(也就是T、R、C、H1、H2顺序)依次加入，每孔加入100μl，置37℃，半小时。同前洗板，甩干。

4.结果判定

以酶联仪492nm波长测定各孔OD值(减去空白孔OD值后计算)。

临界值＝CUT-OFF孔的OD值，标本OD值∠临界值为阴性，标本OD值≥临界值为阳性。

或者P/N＞2为阳性，P为待测样品OD值，N为阴性对照OD值。

注意本试剂盒结果判定的特点是纵向联合检测，横向联合比较。第N列检测一个标本的5种病原体的IgM，它的弓形体IgM结果，要根据该列的T反应孔的OD值与阴性对照或CUT-OFF列的T反应孔的OD值按上述方法比较而得出。以此类推。

以上是以检测TORCH特异的人IgM作的说明。当需检测IgG时，第1步包被抗体改为羊抗人IgG即可，其余的检测方法不变。

实例7：“水包被”方法

如图8所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与或抗原之间涂布有二层膜，一层膜36多聚赖氨酸，另一层膜37含有活化葡萄糖，膜38为已涂布的抗体，为羊(或其它种属)抗人IgM或IgG抗体。

本实施例的试剂盒的反应条的具体使用方法与实施例6同；但是，辣根过氧化物酶标记的抗原的稀释度同样可能需作一些调整，应作棋盘点阵实验，进行优化。

实例8：蛋白A方法

如图9所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与或抗原之间涂布有一层膜，该层膜39蛋白A，膜40为已涂布的抗体，为羊(或其它种属)抗人IgM或IgG抗体。

实例9：链霉亲合素----生物素化抗体间接吸附法。

如图10所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，该层膜41含链霉亲合素，膜42为已涂布的抗体，为生物素标记的羊(或其它种属)抗人IgM或IgG抗体。

本实施例的试剂盒的反应条的具体使用方法与实施例6同，但是，辣根过氧化物酶标记的抗原的稀释度同样可能需作一些调整，应作棋盘点阵实验，进行优化。

实例10：第二抗体法

如图11所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，该层膜43含第二抗体，为抗第一抗体的抗体。第一抗体也就是已涂布的抗体，如第一抗体为羊(或其它种属)抗人IgM或IgG抗体，第二抗体则为鼠抗羊IgG抗体。膜44为已涂布的抗体，为羊(或其它种属)抗人IgM或IgG抗体。

实例11：甲基乙烯醚--顺丁烯二酸酐共聚体(MMAC)法

如图12所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与已涂布的抗体或抗原之间涂布有二层膜，一层膜45含甲基乙烯醚--顺丁烯二酸酐共聚体，另一层膜46含己二胺，膜47为已涂布的抗体，为羊(或其它种属)抗人IgM或IgG抗体。

实例12：戊二醛方法

如图13所示：在反应板条2·2上的反应孔3·3内与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，该层膜48含戊二醛，膜49为已涂布的抗体，为羊(或其它种属)抗人IgM或IgG抗体。本实施例的试剂盒的反应条的具体使用方法与实施例6同；但是，辣根过氧化物酶标记的抗原的稀释度同样可能需作一些调整，应作棋盘点阵实验，进行优化。

Claims

1一种联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒，它是由外框支撑架及放置于其上的可拆酶标反应板条组成，在每个可拆酶标反应板条上设置有反应孔，在反应孔中涂布有已知的抗体或抗原，其特征在于：在外框支撑架上放置有3条以上的可拆酶标反应板条，每个可拆酶标反应板条上排列有4～10个反应孔，在每个反应孔的内表面与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一、二或数层膜。

2根据权利要求1所述的联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒，其特征在于：在每个反应孔的内表面与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，其中一层膜由羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液与PVLA配制而成，或者含戊二醛，或者含链霉亲合素；且已涂布的抗原为T或R或C或H1或H2。

3根据权利要求1所述的联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒，其特征在于：在每个反应孔的内表面与已涂布的抗体或抗原之间涂布有一层膜，其中一层膜由羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液与PVLA配制而成，或者蛋白A，或者链霉亲合素，或者为第二抗体，或者为戊二醛；且已涂布的抗体为抗人IgG或IgM。

4根据权利要求1所述的联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒，其特征在于：在每个反应孔的内表面与已涂布的抗体或抗原之间涂布有二层膜，其中一层膜含多聚赖氨酸，另一层为活化葡聚糖；或者一层含MMAC，另一层含己二胺；且已涂布的抗原为T或R或C或H1或H2。

5根据权利要求1所述的联合检测TORCH特异性抗体的酶免疫试剂盒，其特征在于：在每个反应孔的内表面与已涂布的抗体或抗原之间涂布有二层膜，其中一层膜含多聚赖氨酸，另一层为活化葡聚糖；或者一层含MMAC，另一层含己二胺；且已涂布的抗体为抗人IgG或IgM。