CN219434848U - 一种定量联检免疫层析试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种定量联检免疫层析试剂盒,包括壳体和试纸条,试纸条的底板上设有依序搭连的样本垫、结合垫、反应膜和吸水垫,所述反应膜上间隔依次设有第一检测线、第一质控线、第二检测线、第二质控线,所述第一检测线包被有第一待测物的捕获抗体层,第二检测线包被有第二待测物的捕获抗体层,第一质控线包被有识别第一待测物抗体的二抗层或抗原层,第二质控线包被有识别第二待测物抗体的二抗层或抗原层。本实用新型通过在反应膜上设置两个独立的检测线、质控线,从而不需要对第一待测物、第二待测物单独进行加样检测,节省时间且检测快速便捷。并且检测线和质控线相互独立且相对稳定,且相互之间互不影响干扰,能准确定量地同时测定两种待测物。
Description
技术领域
本实用新型涉及免疫层析技术领域,具体地涉及一种定量联检免疫层析试剂盒。
背景技术
免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的膜检测技术,其中的定量免疫层析是根据发光材料发光强度与待分析浓度呈现的比例关系进行定量分析,以固定有检测线(T线包被抗体)和质控线(C线包被抗抗体或待分析物抗原)的条状纤维层析材料为固定相,测试液为流动相,荧光微球、彩色微球或胶体金等发光材料标记抗体固定于结合垫,通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。测试液中的待分析物在层析过程中先与发光材料标记的待分析物抗体结合,然后继续往上层析,随后结合物会被包被在T线上的待分析物抗体结合,在T线位置会形成固相待分析物抗体-待分析物-标记待分析物抗体-发光材料复合物;多余未结合的发光材料标记的待分析物抗体,继续往上层析,被C线上的抗抗体结合,则在C线上形成固相抗抗体-标记待分析物抗体-发光材料复合物,或者多余未结合的发光材料标记的待分析物抗体,继续往上层析,与C线上的待测物抗原结合,则在C线上形成固相待测物抗原-标记待分析物抗体-发光材料复合物。然后用相应的定量免疫分析仪检测T线和C线发光材料的发光强度,根据T线光信号和C线光信号的比值(T/C)与测试液中的待分析物浓度关系曲线,可对测试液中的待分析物进行定量分析。
现有的定量联检免疫层析技术主要有:硝酸纤维素膜上包被多条检测线和一条质控线;硝酸纤维素膜上包被一条检测线(混合多个待测物抗体)和一条质控线;联检试剂盒壳体内设置有多条并列的单个层析试纸条。虽然上述定量联检免疫层析技术均能实现多项目定量联检,但仍存在以下缺点:一、当有多条检测线时,各个检测线的T线光信号与待分析物中对应各分析物浓度有关,而质控线C线光信号则与多条检测线T线总结合量有关,且受待分析物中各分析物浓度组合影响较大。二、同一条检测线混合多个待测物抗体,不同待测物对灵敏度、线性范围等要求不同,如何使同一条检测线混合多个待测物抗体能满足各个待测物的性能要求是该技术中一个难以解决的问题;因为该技术发光材料较为复杂,需要选取激发波长和发射波长不一样的不同发光材料标记不同的待测物抗体,将多联检项目分别包被形成不同的发光材料-抗体复合物;另外,该技术也对配套的定量免疫分析仪提出更高要求,需要发射不同激发波长,依次激发和接收不同发光基团的信号,实现联检的需求。三、在联检试剂盒壳体内设置有多条并列的单个层析试纸条,虽能独立检测多个待测物且避免多孔加样,但在生产组装过程中会有试纸条与对应卡槽位置装错的风险,同时从成本控制上分析,并不能有效的降低联检成本。
实用新型内容
本实用新型的目的是提供一种定量联检免疫层析试剂盒,用于克服上述现有联检技术的缺陷。
本实用新型通过如下技术方案实现:
一种定量联检免疫层析试剂盒,包括壳体和设在壳体内的试纸条,所述试纸条包括底板,所述底板上设有依序搭连的样本垫、结合垫、反应膜和吸水垫,所述反应膜上间隔依次设有第一检测线、第一质控线、第二检测线、第二质控线,所述第一检测线包被有第一待测物的捕获抗体层,第二检测线包被有第二待测物的捕获抗体层,第一质控线包被有识别第一待测物抗体的二抗层或抗原层,第二质控线包被有识别第二待测物抗体的二抗层或抗原层。
进一步方案,所述结合垫包括基体,所述基体上附着有发光材料标记的第一待测物抗体和第二待测物抗体的混合层。
或者,结合垫的另一种结构为:所述结合垫包括附着有发光材料标记的第一待测物抗体层的第一结合垫、附着有发光材料标记的第二待测物抗体层的第二结合垫,所述第一结合垫和第二结合垫重叠组装于底板上。
进一步方案,所述捕获抗体层为单克隆抗体层或多克隆抗体层。
进一步方案,所述发光材料标记的第一待测物抗体和第二待测物抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
进一步方案,当所述的结合垫上附着有发光材料标记的第一待测物抗体层和第二待测物抗体层选用相同动物来源抗体,则所述的第一质控线包被有识别第一待测物的抗原层,第二质控线包被有识别第二待测物的抗原层。
进一步方案,当所述的结合垫上附着有发光材料标记的第一待测物抗体层和第二待测物抗体层选用不同动物来源抗体时,则所述的第一质控线包被有识别第一待测物抗体的二抗层或抗原层,第二质控线包被有识别第二待测物抗体的二抗层或抗原层。
进一步方案,所述发光材料包括荧光微球、彩色微球、量子点、生物素。
进一步方案,所述底板的材质为PVC,所述反应膜的材质为硝酸纤维素。
所述的第一检测线、第一质控线、第二检测线和第二质控线相互之间的间隔为3-8mm。
本申请在反应膜上设置独立的两条检测线和两条质控线,对两个待测物的混合物进行检测时,两个待测物的检测线和质控线相互独立且相对稳定,相互之间互不干扰。
在上述的定量联检免疫层析试剂盒中,当所述的结合垫中附着有发光材料标记的第一待测物抗体层和第二待测物抗体层选用相同动物来源抗体时,则所述的反应膜中第一质控线只能识别包被有第一待测物抗体的抗原层,第二质控线只能识别包被有第二待测物抗体的抗原层。
在上述的定量联检免疫层析试剂盒中,当所述的结合垫中附着有发光材料标记的第一待测物抗体层和第二待测物抗体层选用不同动物来源抗体时,则所述的反应膜中第一质控线和第二质控线可以为包被有识别第一待测物抗体的二抗层或抗原层、包被有识别第二待测物抗体的二抗层或抗原层,它们是自由组合模式。
需要说明的是,在本实用新型中,动物来源可以但不限于鼠源、兔源、羊源等。所述的发光材料可以但不限于荧光微球、彩色微球、量子点、生物素等。
本实用新型具有的优点是:
本实用新型的试剂盒通过在硝酸纤维素反应膜上设置独立的第一待测物的检测线、质控线和第二待测物的检测线、质控线,实现不需要对第一待测物、第二待测物单独进行加样检测,节省时间,检测快速便捷。并且第一待测物的检测线、质控线和第二待测物的检测线、质控线相互独立且相对稳定,相互之间互不影响干扰,能准确稳定的定量同时测定两种待测物。
本实用新型的试剂盒可配套微型免疫分析仪、全自动免疫分析仪等中小型设备,无需大型的仪器设备,有效的降低了成本。
本实用新型的试剂盒无需多条单个层析检测试纸条即可实现双项目的定量联检,有效的降低了制备成本。
附图说明
图1为本实用新型的实施例1中的试纸条结构示意图;
图2为本实用新型的实施例2中的试纸条结构示意图;
图中:1.样本垫;2.结合垫;21.第一结合垫;22.第二结合垫;3.反应膜;4.吸水垫;5.底板;6.第一检测线;7.第一质控线;8.第二检测线;9.第二质控线;
具体实施方式
下面结合具体实施例的方式对本实用新型的权利要求做进一步的详细说明,但并不构成对本实用新型的任何限制,任何人在本实用新型权利要求范围内所做的有限次的修改,仍在本实用新型的权利要求范围之内。
实施例1:
一种定量联检免疫层析试剂盒,包括壳体和设在壳体内的试纸条,所述试纸条的结构如图1所示,其包括底板5,所述底板5上设有依序搭连的样本垫1、结合垫2、反应膜3和吸水垫4,所述反应膜3上间隔依次设有第一检测线6、第一质控线7、第二检测线8、第二质控线9,所述第一检测线6包被有第一待测物的捕获抗体层,即将第一待测物的捕获抗体涂布在基体上形成捕获抗体层,即得第一检测线6。第二检测线8包被有第二待测物的捕获抗体层,第一质控线7包被有识别第一待测物抗体的二抗层或抗原层,第二质控线9包被有识别第二待测物抗体的二抗层或抗原层。所述结合垫2包括基体,所述基体上附着有发光材料标记的第一待测物抗体和第二待测物抗体的混合层。即发光材料标记的第一待测物抗体和发光材料标记的第二待测物抗体混合后涂布在基体上形成混合层,然后干燥即得结合垫2。
本实施例中,所述捕获抗体层为单克隆抗体层或多克隆抗体层。所述发光材料标记的第一待测物抗体和第二待测物抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
进一步方案,当所述的结合垫上附着有发光材料标记的第一待测物抗体层和第二待测物抗体层选用相同动物来源抗体,则所述的第一质控线7包被有识别第一待测物的抗原层,第二质控线9包被有识别第二待测物的抗原层。其中动物来源可以但不限于鼠源、兔源、羊源等,所述的发光材料可以但不限于荧光微球、彩色微球、量子点、生物素等。
进一步方案,当所述的结合垫上附着有发光材料标记的第一待测物抗体层和第二待测物抗体层选用不同动物来源抗体时,则所述的第一质控线7包被有识别第一待测物抗体的二抗层或抗原层,第二质控线9包被有识别第二待测物抗体的二抗层或抗原层。
进一步方案,所述底板5的材质为PVC,所述反应膜3的材质为硝酸纤维素。
所述的第一检测线6、第一质控线7、第二检测线8和第二质控线9相互之间的间隔为3-8mm。
实施例2:
试纸条的另一种结构如图2所示,所述结合垫2包括附着有发光材料标记的第一待测物抗体层的第一结合垫21、附着有发光材料标记的第二待测物抗体层的第二结合垫22,所述第一结合垫21和第二结合垫22重叠组装于底板5上。其他结构同实施例1。
实施例3:血红蛋白与转铁蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒
粪便潜血(FOB)(亦称大便隐血)是指消化道少量出血,红细胞被消化破坏,粪便外观无异常改变,肉眼和显微镜下均不能证实的出血。在临床消化道恶性肿瘤早期20%的患者可出现潜血试验阳性,晚期病人的潜血阳性率可达到90%以上,并且可呈持续性阳性;消化道出血,消化道溃疡病人粪便潜血(FOB)试验多呈间断性阳性;痢疾,直肠息肉、痔疮出血等也可使粪便中出现较多红细胞,导致潜血试验阳性。因此,粪便潜血(FOB)检查可作为检测各种原因所致的消化道出血及消化道恶性肿瘤早期筛查的重要检测试验,是发现便潜血的有效方法。
转铁蛋白(transferrin)主要存在于血浆中,在正常人的消化道中几乎不存在,因此只要在粪便或胃内容物中被检测到,即说明有消化道出血。其抵抗肠道中细菌能力较强,在粪便中稳定性较血红蛋白明显增高,可以克服被检测样本中的血红蛋白在胃肠道内滞留时间过长而被胃酸或肠道内细菌分泌的酶分解或破坏后出现的假阴性结果。有研究表明上消化道肿瘤患者粪便中的转铁蛋白含量要比正常人高。因此,粪便转铁蛋白检查是对上消化道出血早期筛查的有效方法。
在本实施例的定量联检免疫层析试剂盒中,所述的发光材料标记的第一待测物抗体或发光材料标记的第二待测物抗体是采用标记稀释液进行稀释,浓度均为50-250μg/ml,在试纸条上的用量为0.02-0.2μg/cm2。所述标记稀释液包括缓冲液、稳定剂、防腐剂;缓冲液为MES缓冲液、PBS缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液中的一种,缓冲液PH值为5.0-8.0;稳定剂为酪蛋白、牛血清白蛋白、甘露醇、蔗糖、海藻糖、葡聚糖中的一种或两种以上的混合物,浓度在0.2%-20%之间;防腐剂为叠氮化钠、对羟基苯甲酸、Proclin300中的一种,浓度在0.05%-0.1%之间。
所述的检测线、质控线上包被的二抗或抗原均采用包被缓冲液进行稀释,其浓度为1.0-10.0mg/ml,所述包被缓冲液包括1%-3%甲醇、1%-5%蔗糖、余量为0.01-0.05M、PH7.0-8.0的磷酸盐缓冲液。
所述的样本垫经样本垫处理液进行预处理,样本垫处理液包括缓冲液、稳定剂、表面活性剂;缓冲液为MES缓冲液、PBS缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液中的一种,缓冲液PH值为5.0-8.0;稳定剂为酪蛋白、牛血清白蛋白、甘露醇、蔗糖、海藻糖、葡聚糖中的一种或两种以上的混合物,浓度在0.2%-20%之间;表面活性剂为吐温-20、曲拉通X-100、聚醚、RHODASURF ON-870中的一种或两种以上的混合物,浓度在0.2%-20%之间。
所述反应膜的材质为硝酸纤维素,该反应膜的爬速为95s-135s/4cm。
具体的制备过程如下:
1、制备结合垫
用微球分别标记血红蛋白鼠单克隆抗体和转铁蛋白鼠单克隆抗体。微球标记方法如下:使用0.05mol/L的PH为6.8的MES活化缓冲液洗涤微球,加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),终浓度为50mmol/L,室温反应20分钟后离心取沉淀用PB缓冲液充分洗涤,按照标记抗体与微球的质量比为1:50的比例加入对应的待测物抗体,室温反应2小时,加入含有1%BSA的0.02mol/L的PH7.2的磷酸盐缓冲液,室温反应15分钟,离心取沉淀,用标记稀释液重悬。标记稀释液含有5%蔗糖、1%BSA、0.05% Proclin300和0.05M PH8.0的HEPES缓冲液。待使用时,将已标记微球的两个待测物抗体混合并稀释得到胶乳混合物。将胶乳混合物均匀涂布在玻璃纤维上干燥形成混合层,密封保存。
2、制备硝酸纤维素反应膜
硝酸纤维素膜上共设置2条检测线和2条质控线,T1线上包被抗转铁蛋白多克隆抗体,T2线上包被抗血红蛋白单克隆抗体,C1线上包被转铁蛋白抗原,C2线上包被血红蛋白抗原。使用包被缓冲液分别稀释抗转铁蛋白多克隆抗体、转铁蛋白抗原、抗血红蛋白单克隆抗体、血红蛋白抗原作为检测线和质控线溶液,并将稀释后的检测线和质控线溶液依次平行地划线于硝酸纤维素膜上。包被缓冲液含有1%甲醇、5%蔗糖和0.05M PH 7.2的PBS。离加样孔从近至远依次设置T1、C1、T2、C2,在干燥箱中37℃干燥过夜,密封保存。
其中2条检测线和2条质控线相互间隔4mm。
3、制备样本垫
用样本垫处理液处理玻璃纤维,将处理好的玻璃纤维干燥过夜,密封保存。样本垫处理液含有1%BSA、0.5%吐温-20和0.01M PH8.0的磷酸盐缓冲液。
4、制备试纸条和试剂盒
将吸水纸、反应膜、结合垫、样本垫依次组装在底板上成试纸条,然后将其切割成合适宽度后装入壳体中,成试剂盒。
实施例4:血红蛋白与转铁蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒的制备
该实施例的试纸条结构与实施例3的试纸条结构相同。不同之处在于,在该实施例中,所述的结合垫中用微球分别标记血红蛋白鼠单克隆抗体和转铁蛋白羊多克隆抗体。所述硝酸纤维素反应膜中T1线上包被抗转铁蛋白单克隆抗体,C2线上包被羊抗鼠多克隆抗体。离试剂盒加样孔从近至远依次设置T2、C2、T1、C1。
实施例5:血红蛋白与转铁蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒的制备
该实施例的试纸条结构与实施例4的试纸条结构相同。不同之处在于,在该实施例中,所述硝酸纤维素反应膜中T1线上包被抗转铁蛋白多克隆抗体,C1线上包被兔抗羊多克隆抗体。
实施例6:检测试验
用血红蛋白抗原和转铁蛋白抗原的标准品配制一定浓度范围内的标准品溶液,配制浓度如表1:
表1
采用实施例3中试纸条对所述标准品溶液进行定量测定的结果如表2:表2
采用实施例4中试纸条对所述标准品溶液进行定量测定的结果如表3:表3
采用实施例5中试纸条对所述标准品溶液进行定量测定的结果如表4:
表4
从表2-4可以看出,本申请特殊结构的试剂盒(按实施例3-5制成的试纸条),由于在硝酸纤维素反应膜上设置两条检测线和两条质控线,各待测物检测信号T/C值与各待测物浓度呈线性关系,且互不干扰,说明本实用新型的血红蛋白与转铁蛋白联检荧光免疫层析试剂盒可以实现准确定量检测。
实施例7:临床样本验证
选用20例临床样本,对消化道出血(FOB、TRF)的联检试剂(采用本实用新型实施例3、4、5提供的定量联检荧光免疫层析试纸条)和FOB、TRF项目的单检荧光免疫层析试纸条(均为双抗体夹心法)进行比对检测。检检测结果如下表5、表6所示:
表5
表6
从表5、6可以看出:本实用新型的定量联检免疫层析试剂盒能够得到与单独检测单个项目一致的结果,说明该试纸条在硝酸纤维素反应膜上设置两条检测线和两条质控线互不干扰,且只需加样检测一次就可得到联检待测物的定量结果。
以上所述实施例仅表达了本实用新型的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本实用新型专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本实用新型构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本实用新型的保护范围。因此,本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (9)
1.一种定量联检免疫层析试剂盒,包括壳体和设在壳体内的试纸条,其特征在于:所述试纸条包括底板(5),所述底板(5)上设有依序搭连的样本垫(1)、结合垫(2)、反应膜(3)和吸水垫(4),所述反应膜(3)上间隔依次设有第一检测线(6)、第一质控线(7)、第二检测线(8)、第二质控线(9),所述第一检测线(6)包被有第一待测物的捕获抗体层,第二检测线(8)包被有第二待测物的捕获抗体层,第一质控线(7)包被有识别第一待测物抗体的二抗层或抗原层,第二质控线(9)包被有识别第二待测物抗体的二抗层或抗原层。
2.根据权利要求1所述的一种定量联检免疫层析试剂盒,其特征在于:所述结合垫(2)包括基体,所述基体上附着有发光材料标记的第一待测物抗体和第二待测物抗体的混合层。
3.根据权利要求1所述的一种定量联检免疫层析试剂盒,其特征在于:所述结合垫(2)包括附着有发光材料标记的第一待测物抗体层的第一结合垫(21)、附着有发光材料标记的第二待测物抗体层的第二结合垫(22),所述第一结合垫(21)和第二结合垫(22)重叠组装于底板(5)上。
4.根据权利要求1所述的一种定量联检免疫层析试剂盒,其特征在于:所述捕获抗体层为单克隆抗体层或多克隆抗体层。
5.根据权利要求2或3所述的一种定量联检免疫层析试剂盒,其特征在于:当所述的结合垫上附着有发光材料标记的第一待测物抗体层和第二待测物抗体层选用相同动物来源抗体,则所述的第一质控线(7)包被有识别第一待测物的抗原层,第二质控线(9)包被有识别第二待测物的抗原层。
6.根据权利要求2或3所述的一种定量联检免疫层析试剂盒,其特征在于:当所述的结合垫上附着有发光材料标记的第一待测物抗体层和第二待测物抗体层选用不同动物来源抗体时,则所述的第一质控线(7)包被有识别第一待测物抗体的二抗层或抗原层,第二质控线(9)包被有识别第二待测物抗体的二抗层或抗原层。
7.根据权利要求2或3所述的一种定量联检免疫层析试剂盒,其特征在于:所述发光材料包括荧光微球、彩色微球、量子点、生物素。
8.根据权利要求1所述的一种定量联检免疫层析试剂盒,其特征在于:所述底板(5)的材质为PVC,所述反应膜(3)的材质为硝酸纤维素。
9.根据权利要求1所述的一种定量联检免疫层析试剂盒,其特征在于:所述的第一检测线(6)、第一质控线(7)、第二检测线(8)和第二质控线(9)之间的间隔为3-8mm。
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