CN214991486U - 用于提取质粒dna的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒，设置释放孔，并完全分隔为三个反应腔，放置不同的试剂缓冲液。在提取质粒DNA时，在悬浮液腔中加入样本液，完成反应后，再先后释放出裂解液和中和纯化液，搅动完成反应后，磁棒插入磁棒套，一起插入至磁珠孔，通过磁性吸附磁珠，再返回所述释放孔，磁珠从溶液中吸附质粒DNA，最后磁棒提起，插入洗脱孔，洗脱磁珠所吸附的质粒DNA。本实用新型的试剂盒，因为在释放孔中设置了由惰性固体层分隔开的独立的反应腔，分开存放不同的反应液体，就将质粒DNA提取时的不同反应液的加样时间先后，转换为对不同反应腔的击破时间先后，无须增加结构，即可完成不同缓冲液的先后加样操作，适合人工操作或机器操作，并降低了成本。

Description

用于提取质粒DNA的试剂盒

技术领域

本实用新型属于分子生物实验设备技术领域，具体涉及一种用于提取质粒DNA的试剂盒。

背景技术

提取细胞中的质粒，通常使用强碱裂解法，包括两步：第一步是在细胞悬浮液，即样本液中，依次加入三种试剂缓冲液，P1、P2、P3，以裂解细胞并释放核酸至外部水溶液中。具体地，P1为悬浮液，例如 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10 mM EDTA和50 mM 葡糖糖（Glucose）的混合液，用于将细胞沉淀悬浮在样本液中。通常P1中需要预先加入RNA酶（RNase A）,以清除样本液中的RNA。然后加入P2，即裂解液，使细胞裂解，具体可选用组份浓度 250 mM的NaOH和1％的（W/V）SDS（十二烷基硫酸钠），其中，氢氧化钠用于裂解细胞膜的结构，使细胞膜发生从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化，从而导致细胞裂解。而SDS则结合细胞液里的蛋白质，形成可溶的SDS2多肽复合体，其中的多肽链能更好地缠绕和结合基因组DNA（长链），方便后续去除基因组DNA。而P3为中和纯化液，例如选用组份浓度 3M的醋酸钾（potassium acetate）和5M的醋酸，其中，醋酸用于中和氢氧化钠，同时复活质粒DNA，因为质粒DNA为闭环结构，在被强碱失活，碱基对被破坏后，DNA双链仍然缠绕在一起，当PH恢复中性时，DNA双链之间的碱基配对，就会再次形成。而醋酸钾中的钾离子则用于与SDS结合生成PDS（十二烷基硫酸钾）沉淀，从而去除溶液中的SDS连同结合的基因组DNA。

当细胞中的质粒DNA被释放并溶解于水溶液中后，第二步就是使用离心或磁珠对细胞裂解后释放出来的质粒DNA加以收集并提纯。其中，第二步的收集和提纯释放在溶液中的质粒DNA，现在已经可以由自动化的核酸提取仪来完成。

现有的核酸提取仪，是应用其配套的核酸提取试剂来自动完成提取释放在样本液中的核酸，包括质粒DNA，的仪器。根据工作原理不同，可以分为离心柱法核酸提取仪和磁珠法核酸提取仪，两个大类。

其中，磁珠法核酸提取仪，以磁珠为载体，利用磁珠在高盐低PH值下吸附核酸，在低盐高PH值下与核酸分离的原理，再通过移动磁珠或转移液体来实现核酸的整个提取纯化过程。由于其原理的独特性，所以可设计成很多种通量，即既可以单管提取，也可以提取一次提取8-96个样本，操作简单快捷，提取96个样本仅需30-45min，大大提高了实验效率，且成本低廉，可以在不同实验室使用，是目前市场上的主流仪器。

磁珠法核酸提取仪根据切换工作液体的方式，又分为抽吸法和磁棒法两种，其区别在于，抽吸法是固定磁珠的位置，但使用机械臂来转移与切换不同液体，以浸泡磁珠；而磁棒法，则是移动磁珠至各个固定位置的液体中。首先将不同操作阶段的各个液体，包括样本液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液等，依次放置于一多孔加样板上的各个液体加样孔中，然后控制磁棒，插入磁棒套后，通过磁性吸附上磁珠，再平移并依次浸入各个液体，由磁珠吸附核酸，洗涤后将核酸洗脱分离。具体为：磁棒首先通过磁力吸附磁珠，然后插入样本液中，从样本液中吸附提取核酸、在洗涤缓冲液中洗涤磁珠连同吸附于磁珠上的核酸、在洗脱缓冲液中将吸附的核酸从磁珠上洗脱。最后，磁棒提升，磁场撤离，磁珠就自动从磁棒套上落下并被回收。与磁珠法核酸提取仪相适配，通常需要使用一种多孔加样板，即一块板子，其上开有至少一排深孔加样孔（deep well），在核酸提取工作之前，就在所述加样孔中预先放置好相关的试剂缓冲液。这样，磁棒插入磁棒套后，就可以在控制下，携带磁珠，依次插入各个加样孔内的液体中，浸泡磁珠，分别完成吸附、清洗和洗脱核酸的操作，从而富集和提纯核酸。

现在普遍使用的磁珠法核酸提取仪所使用的深孔板，立体结构如图1所示，上表面均匀分布有多个方形深孔，例如96个，排成规则的12*8阵列，如图2的俯视图所示。这种多孔加样板，因为各个加样孔1是完全等同的，故而对磁棒的移动控制较为简单，只要移动步长配合好各个加样孔1的宽度及间隔距离的大小，就可以做到机械性地、等距离移动磁棒，并可以对应插入至各个加样孔1中。

但在提取质粒DNA时，因为首先需要先后依次加入P1，P2，P3三种不同的缓冲液，以释放质粒中的环状DNA至溶液中，然后才能执行后续的核酸提取操作。故现有技术中，通常都是在核酸提取仪工作的步骤之前，预先由人工操作，完成质粒DNA的释放工作。然后再将含有释放出来的质粒DNA的溶液放入核酸提取仪中，对其中的质粒DNA加以自动提取。不能够做到完全自动化，直接放入含有待提取质粒的细胞的培养液，就可以自动从细胞中提取出质粒DNA 。当然，也有通过复杂的设计方案来完成全程自动化提取操作的质粒提取仪，通常为增加设置一移液结构，来切换不同液体以先后侵泡磁珠，完成质粒DNA 释放的相关操作，而这将大大增加用于提取质粒DNA的质粒提取仪的成本，并增加故障率。

因此，现有技术有待于进一步改进和提高。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本实用新型的目的在于提供一种用于提取质粒DNA的试剂盒，可以通过简单操作，包括人工操作或机器操作，一步到位，完成从细胞到质粒DNA的整个提取过程。

本实用新型公开了一种用于提取质粒DNA的试剂盒，其中，包括加样板，所述加样板包括至少一组加样孔，每组加样孔至少包括释放孔、磁珠孔和洗脱孔；所述释放孔包括由惰性固体层完全分隔开的三个反应腔：悬浮液腔、裂解液腔、和中和纯化液腔，分别容纳有使细胞悬浮在溶液中的悬浮液、使细胞膜裂解以释放核酸的裂解液、和用于中和溶液并沉降细胞核DNA以及蛋白质的中和纯化液；所述惰性固体层易于破开；所述磁珠孔中容纳有磁珠，所述磁珠用于从溶液中吸附质粒DNA；所述洗脱孔中容纳有洗脱液，用于从磁珠上分离质粒DNA。本实用新型使用悬浮液悬浮细胞，使用裂解液裂解细胞，释放核酸，并使用中和纯化液中和裂解液的碱性，以复活质粒DNA，同时，将杂质，包括细胞核DNA和蛋白质，都加以沉淀，以保证溶液中溶解的质粒DNA的纯净。在手动操作时，三个反应腔的排列位置可不加限制，只要做好区别即可。但机器操作时，考虑到控制方便，三个反应腔的排列顺序应该和加样的时间顺序对应。

优选地，所述裂解液还包括RNA酶。从而降解去除溶液中的RNA。

优选地，所述悬浮液腔在所述释放孔中的容积占比最大，且位置最接近释放孔的开口。因为提取时，样本液要首先注入至悬浮液腔中，与悬浮液混合，细胞悬浮后，才能进行后续的裂解和提纯操作。

优选地，所述惰性固体层水平分隔所述释放孔，三个所述反应腔按照分别容纳悬浮液、裂解液和中和纯化液的顺序，从上至下依次排列。即按照加样的时间顺序，在空间上按照高低顺序、依次排列三种反应液，尤其方便自动控制下，依次击破所述惰性固体层，从而依次混入三种反应液，执行核酸裂解操作。

或优选地，所述惰性固体层竖直分隔所述释放孔，三个所述反应腔按照分别容纳悬浮液、裂解液和中和纯化液的顺序水平排列。即按照加样的时间顺序，在空间上按照水平顺序，依次排列三种反应液，这尤其方便在人工操作下，依次击破所述惰性固体层，从而依次混入三种反应液，执行核酸裂解操作。

优选地，每组加样孔还包括至少一用于容纳洗涤液的清洗孔，所述洗涤液用于清洗磁珠连同吸附的质粒DNA。在收集质粒DNA之前，进行至少一次的清洗操作，可以保证后续要提取的质粒DNA的纯度。

优选地，所述惰性固体层为石蜡层。石蜡属于软质惰性固体，不容易与其他化学品溶液发生反应，且很容易被破开，破开后也是浮于液面上，很容易与液体分层，不会影响到对溶液的操作。

优选地，所述加样孔为依次排列的深孔，所述深孔的横截面为方形。方形的横截面有助于各个加样孔相邻排列，减小试剂盒的总体长度，并方便安排多组加样孔矩阵排列。

更优选地，所述加样孔的底部中央设有弧形光滑的凹陷。底部中央设置凹陷，方便提取仪的磁棒插入，也方便富集固体沉淀。

进一步优选地，所述释放孔的底部为向下的拱形，拱形的最低部设置所述凹陷。因为释放孔较宽，故底部设置向下的拱形，进一步有助于富集固体沉淀，减少磁珠接触到细胞核DNA。

优选地，所述悬浮液包括Tris-HCl、EDTA、和葡萄糖；所述裂解液包括强碱和SDS；所述中和纯化液包括醋酸和醋酸钾。其中，SDS用于去除细胞核释放的核酸及细胞内的蛋白质，钾离子用于沉淀SDS连同所结合的蛋白质和遗传DNA。

优选地，所述加样板包括多于一排的所述加样孔，每排包括至少一组加样孔。

更优选地，每排加样孔中的释放孔、洗脱孔和磁珠孔都正对排列。从而与多磁棒的磁珠法质粒提取仪中各个磁棒位置对应，以加快提取速度。

更优选地，每组还包括一清洗孔，所述加样板包括8排加样孔，每排包括两组，每组包括依次排列的一释放孔、一磁珠孔、一清洗孔和一洗脱孔，所述释放孔的长度等于每组总长度的一半。本实施例可以通过对现有的96孔深孔板加以简单改造而成。

更优选地，每组还包括两清洗孔，所述加样板包括8排加样孔，每排包括两组，每组包括依次排列的一释放孔、一磁珠孔、两清洗孔和一洗脱孔，所述释放孔的长度等于每组总长度的三分之一。通过增加清洗孔，增加了对磁珠及其上的质粒DNA的清洗，帮助获得更纯净的质粒DNA。

优选地，所述洗脱孔和所述磁珠孔，大小相等，所述释放孔的长度大于每组加样孔中其他各孔的长度。通过增加释放孔的长度，增加了释放孔的容积，因此允许增加样本液的体积，有助于处理更低浓度的样本液。

本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒，设置释放孔，并通过惰性固体层完全分隔为三个反应腔，放置不同的试剂缓冲液。在提取质粒DNA时，在悬浮液腔中加入样本液，磁棒带动磁棒套，来回搅动设定时间，完成反应后，再击破惰性固体层，释放出裂解液，来回搅动设定时间，再释放中和纯化液，搅动完成反应后，磁棒插入磁棒套，一起移动并插入至磁珠孔，通过磁性吸附磁珠，再返回插入至所述释放孔，来回缓慢移动，磁珠从溶液中吸附质粒DNA，然后磁棒提起磁棒套后，插入洗脱孔，磁棒抽离，磁珠分散进洗脱液，洗脱液将磁珠所吸附的质粒DNA洗脱。本实用新型的试剂盒，因为在释放孔中设置了由惰性固体层分隔开的独立的反应腔，分开存放不同的反应液体，就将质粒DNA提取时的不同反应液在加样时间上的先后顺序，转换为对不同反应腔的击破时间顺序，实现了无须增加结构，即可完成不同缓冲液的先后加样操作，适合人工操作或机器操作，并降低了成本。

以下将结合附图对本实用新型的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本实用新型的目的、特征和效果。

附图说明

图1为现有技术中用于磁珠法核酸提取仪的96孔深孔板的立体结构图；

图2为现有技术中用于磁珠法核酸提取仪的96孔深孔板的俯视图；

图3为本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒的立体结构图；

图4为本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒的俯视图；

图5为本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒的第一实施例中一组加样孔放大后的立体结构图；

图6为本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒的第二实施例中一组加样孔放大后的立体结构图；

图中，1-加样孔；10-磁珠孔；11-清洗孔；12-洗脱孔；20-释放孔；21-石蜡层；22-悬浮液腔；23-裂解液腔；24-中和纯化液腔；25-凹陷；26-拱形。

具体实施方式

本实用新型提供了一种用于提取质粒DNA的试剂盒，为使本实用新型的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照附图并举实例对本实用新型作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。

本实用新型提供了一种用于提取质粒DNA的试剂盒，包括加样板以及所述加样板上预先存放的试剂缓冲液。具体地，所述加样板的立体结构如图3所示，包括至少一组加样孔，每组所述加样孔包括一释放孔20、一洗脱孔12和一磁珠孔10。使用时，在释放孔20中加入含细胞的样本液，细胞就在释放孔20中，接受预先存放的相关试剂缓冲液处理，将其中的质粒DNA释放出来，至释放孔20内的液体中。

如图4的俯视图所示，本实用新型中的所述释放孔20，因为需要预先存放相关的试剂缓冲液，并且在工作时，还需要容纳样本液，故而释放孔20的容积占比通常较大。并且，因为试剂缓冲液不止一种，而且加入的时间不同步，这在本实用新型中，就通过在所述释放孔20中设置相应数量的反应腔来实现。所述反应腔由一惰性固体层，例如石蜡层，完全分隔开。所述惰性固体层，优选为石蜡层，因为石蜡的化学性质很稳定，不容易与所分隔的试剂缓冲液发生化学反应；轻于水，被击破后，自动上浮，不影响溶液中的成分；而且是柔质的，很容易被破开，释放其中的反应试剂。

本实用新型的第一实施例，如图5的一组加样孔的立体结构图所示，所述释放孔20中的三个反应腔上下设置，具体为通过所述惰性固体层，本实施例中选择石蜡层21，完全分隔为上下三层。每层之间不连通，故各层中不同的试剂缓冲液在工作前，不会提前混合。本实施例中的三层反应腔，从上至下，具体为：悬浮液腔22、裂解液腔23、和中和纯化液腔24，分别容纳有使细胞悬浮在溶液中的悬浮液P1、使细胞膜裂解以释放核酸的裂解液P2、和用于中和溶液并沉降细胞核DNA以及蛋白质的中和纯化液P3。具体地，所述悬浮液P1包括Tris-HCl、EDTA、和葡萄糖；所述裂解液P2包括强碱和SDS；所述中和纯化液P3包括醋酸和醋酸钾。上下排列的三层反应腔，尤其方便使用于自动化的核酸提取仪中，因为对磁棒的移动控制较为简单，上下运动即可击破对应的惰性固体层，释放其中的试剂缓冲液，加入反应中。

本实用新型的第二实施例，如图6所示，所述释放孔20中的三个反应腔，采用竖直并排的形式设置。具体为，通过竖直设置的惰性固体层，分隔形成沿水平方向排列的所述三个反应腔。本实施例尤其适合使用手工提取质粒的操作，操作人员手工水平移动磁棒，根据加入反应的时间顺序，依次击碎所述惰性固体层，释放其中的试剂缓冲液，加入反应中即可。并且，所述三个反应腔的排列顺序，考虑到操作方便，优选为根据反应加样的先后，按照P1，P2、P3的顺序，依次排列。所述三个反应腔中，悬浮液腔22的容积占比最大，因为不但要容纳悬浮液P1，在工作时还要加入样本液，使得细胞悬浮，方便下一步操作。所述裂解液腔23中的裂解液P2，可选为强碱NaOH，以裂解细胞膜，释放质粒DNA。而所述中和纯化液P3，例如醋酸和醋酸钾的混合液等，既可以降低样本液的PH值，以复活质粒DNA，又可以通过钾离子沉淀SDS，从而将杂质，包括细胞核DNA和蛋白质等，都加以沉淀，以保证溶液中所溶解的质粒DNA的纯净。

在一组加样孔中，还包括磁珠孔10和洗脱孔12。其中，所述磁珠孔10容纳磁珠，所述洗脱孔12中容纳洗脱缓冲液。在一个更佳的实施例中，在所述释放孔20和所述洗脱孔12之间，还设置有容纳洗涤液的清洗孔11。并且，所述清洗孔11可设置不止一个，以多次清洗吸附了质粒DNA的磁珠，确保所要提取的质粒DNA的纯洁。

所述磁珠，用于从释放孔20内，经过了裂解反应后的溶液中，通过吸附以提取所溶解的质粒DNA。而所述洗脱缓冲液则用于从磁珠上分离质粒DNA。

在制作所述第一实施例中的用于提取质粒DNA的试剂盒时，首先在所述释放孔20中注入中和纯化液P3，当注入量足够后，就在中和纯化液P3的上方涂抹石蜡，形成由石蜡层22完全封闭的中和纯化液层24。然后等石蜡固化后，就在石蜡层22上再加入裂解液P2，构成裂解液层23，再同样用石蜡层22封闭所述裂解液层23，然后加入悬浮液P1，完成所述试剂盒中释放孔20的制备。

而当制作所述第二实施例中的用于提取质粒DNA的试剂盒时，就在所述释放孔20中，先使用石蜡层22，竖直分隔构成三个垂直放置的反应腔，然后在各个反应腔中注入相应的试剂缓冲液P1，P2和P3即可。

在释放孔20旁的磁珠孔10中加入磁珠，洗脱孔12中加入洗脱缓冲液。在一个更佳的实施例中，在所述释放孔20和所述洗脱孔12之间，还设置有容纳洗涤液的清洗孔11。并且，所述清洗孔11可设置不止一个，从而清洗所述磁珠连同所吸附的质粒DNA不止一次，以确保所要提取的质粒DNA的纯洁。

以上的准备工作，可以由工厂中工业化流水线完成，生产出用于提取质粒DNA的试剂盒，上市销售。

在使用本实用新型的试剂盒，进行提取质粒DNA时，就在所述悬浮液层22中，加入一定量的含有细胞的样本液，完成提取准备工作，然后或者由人工操作，或者将所述试剂盒放入至自动化的磁珠法质粒提取仪中，执行全自动的质粒DNA提取操作。在磁珠法质粒提取仪工作时，磁棒首先带动磁棒套，向下插入至所述释放孔20，并停留于所述悬浮液腔22中，在控制下作水平移动，起搅拌作用，帮助细胞完全悬浮。然后在完成所输入的第一预设时间后，磁棒带动磁棒套下行，击破所述石蜡层21，悬浮液腔22中的全部液体也落入下一层，即裂解液腔23中，与裂解液腔23中的裂解液反应，裂解细胞膜和质粒膜，释放细胞核内的核酸和质粒中的核酸。一定时间后，所述磁棒带动磁棒套下行，再次击破所述石蜡层21，与中和裂解液腔24中的中和裂解液混合，一方面恢复质粒DNA的生物活性，一方面沉降溶液中的蛋白质和细胞核中的长链核酸。从而得到基本仅仅含有质粒DNA的溶液。

在完成质粒DNA释放至所述释放孔20内的溶液中后，所述磁棒连同磁棒套提升，然后磁棒下降至插入磁棒套中，再一起水平移动并插入至磁珠孔10中，通过磁性吸附磁珠。

吸附好磁珠后，磁棒连同磁棒套和磁珠返回至释放孔20，向下插入至其内的溶液中，来回缓慢移动。因为此时的释放孔20内液体，处于高盐低PH值的环境，故磁珠吸附溶液中的核酸，即吸附溶液中溶解的质粒DNA。设定时间后，磁棒连同磁棒套和磁珠一起提升，移动至洗脱孔12中，磁棒向上提起，磁棒套上的磁珠失去磁性吸附力，就落入洗脱液中，磁棒再带动空的磁棒套做平移搅拌，帮助洗脱液洗脱磁珠上的质粒DNA。所述洗脱液为低盐高PH值的环境。

最后磁棒向下插入磁棒套，再一起插入洗脱液中，将磁珠重新吸附并提升离开。而所要提取的质粒DNA就溶解于所述洗脱液中。

当设有清洗孔11时，在提取核酸时，磁棒连同磁棒套和磁珠，从所述释放孔2中提升后，首先移动并插入至所述清洗孔11中，接受洗涤液的清洗，将磁珠上粘附的样本液清洗干净后，再提升并水平移动后插入至所述洗脱孔12中，解脱下磁珠所吸附的核酸，从而使得得释放的核酸更纯净。

在操作人员手动执行质粒DNA提取操作时，大致过程与机器操作类似，也可以使用设置了上下排列的所述三个反应腔的深孔板。但优选为使用水平排列的三个反应腔的深孔板，方便控制手动击破所述惰性固体层的动作幅度，并且，也方便混合均匀反应液。

在一个更佳的实施例中，所述加样孔1，设置为依次排列的深孔，并且深孔的横截面选择为，但不限于，方形。因为方形的横截面，有助于各个加样孔1相邻排列，从而可以减小加样板的总体长度，并方便安排多组加样孔1，例如以如图4所示的矩阵排列，也方便对磁棒水平移动的控制。

在一个更佳的实施例中，如图5所示，在每个加样孔1的底部中央，各设置一个向下的凹陷25，可以方便所述磁棒插入，也方便富集在提取过程中，尤其是裂解过程中，所产生的固体沉淀，从而减小固体沉淀中、来源于细胞核的、长链DNA与磁珠的接触机会。

而对于释放孔20，因为其底部的长度比宽度大很多，故所述释放孔20的底部首先沿长度方向，设置向下拱起的拱形26，而所述凹陷25就设置在所述拱形26的中央最低部，这有助于进一步富集固体沉淀。

再一个更佳的实施例，为了加快提取效率，大部分的磁珠法质粒提取仪都设置有多根磁棒，例如常见的为8根磁棒，并且，8根磁棒排列为一列。相应地，本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒，也设置多组的加样孔。具体地，所述加样板设置多于一排的所述加样孔1，每排都包括至少一组加样孔，每组加样孔都如图5所示，至少包括释放孔20、洗脱孔12和磁珠孔10。更佳地，每排加样孔中的释放孔20、洗脱孔12和磁珠孔10都正对排列。当还设有一个或两个清洗孔11时，各个清洗孔11也正对排列，并且，都与排成一列的磁棒相对应。从而有效利用多磁棒的磁珠法质粒提取仪中的各个磁棒，并减少控制多个磁棒平移的复杂度，加快提取的速度。

其中每个加样孔的具体结构和作用，都如上所述，不再重复。

在实际操作中，在当前的实验室里，本实用新型的试剂盒，可以由现有的加样板加以简单改造而成。具体可以将现有加样板，例如96孔深孔板，的两个或两个以上的加样孔1无障碍连接，构成所述释放孔20。再在对应的加样孔1中分别加入相应的试剂溶液即可。

目前实验室常用的96孔深孔板，由96个标准孔，如图2的俯视图所示，排列为8排A-F，每排12个1-12，紧密邻接构成。加以改造后，即可得到本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒的加样板。具体可以将每排的第1-3和第7-9个标准孔，完全打通，相互无障碍连接，构成两个释放孔20。改造后的96孔深孔板，如图4的俯视图所示，所述加样板包括8排加样孔，每排包括两组，每组包括依次排列的一释放孔20、一磁珠孔10、一清洗孔11和一洗脱孔12，所述释放孔20的长度等于每组总长度的一半。

或者，在一个更佳的实施例中，每组的清洗孔11，设为两个，即所述加样板包括8排加样孔，每排包括两组，每组包括依次排列的一释放孔20、一磁珠孔10、两清洗孔11和一洗脱孔12。考虑到96孔深孔板一排为12个孔，为了设置两组，故所述释放孔20选择为两个孔相连通，即所述释放孔20的长度，等于每组总长度的三分之一。通过增加清洗孔，增加了对磁珠及其上的质粒DNA的清洗，帮助获得更纯净的质粒DNA。

本实用新型的用于提取质粒DNA的试剂盒，设置释放孔20，并通过惰性固体层完全分隔为三个反应腔，放置不同的试剂缓冲液。在提取质粒DNA时，在悬浮液腔22中加入样本液，磁棒带动磁棒套，来回搅动设定时间，完成反应后，再释放出裂解液，来回搅动设定时间，再释放中和纯化液，搅动完成反应后，提起磁棒套，磁棒插入磁棒套后，一起插入至磁珠孔10，通过磁性吸附磁珠，再返回插入至所述释放孔20，并来回缓慢移动，磁珠从溶液中吸附质粒DNA，最后磁棒提起后，插入洗脱孔12，通过洗脱液将磁珠所吸附的质粒DNA洗脱。本实用新型的试剂盒，因为在释放孔20中设置了由惰性固体层分隔开的独立的反应腔，分开存放不同的反应液体，就将质粒DNA提取时的不同反应液在加样时间上的先后顺序，转换为对不同反应腔的击破时间顺序，实现了无须增加结构，即可完成不同缓冲液的先后加样操作，适合人工操作或机器操作，并降低了成本。

以上详细描述了本实用新型的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本实用新型的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本实用新型的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种用于提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于，包括：

加样板，所述加样板包括至少一组加样孔，每组加样孔至少包括释放孔、磁珠孔和洗脱孔；

所述释放孔包括由惰性固体层完全分隔开的三个反应腔：悬浮液腔、裂解液腔、和中和纯化液腔，分别容纳有使细胞悬浮在溶液中的悬浮液、使细胞膜裂解以释放核酸的裂解液、和用于中和溶液并沉降细胞核DNA以及蛋白质的中和纯化液；

所述惰性固体层易于破开；

所述磁珠孔中容纳有磁珠，所述磁珠用于从溶液中吸附质粒DNA；

所述洗脱孔中容纳有洗脱液，用于从磁珠上分离质粒DNA。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述悬浮液腔在所述释放孔中的容积占比最大，且位置最接近所述释放孔的开口。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述惰性固体层垂直分隔所述释放孔，三个所述反应腔按照分别容纳悬浮液、裂解液和中和纯化液的顺序，依次水平排列。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，每组加样孔还包括至少一用于容纳洗涤液的清洗孔，所述洗涤液用于清洗磁珠连同吸附的质粒DNA。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述惰性固体层为石蜡层。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述加样孔为依次排列的深孔，所述深孔的横截面为方形。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述加样孔的底部中央设有弧形光滑的凹陷。

8.根据权利要求1至7任一所述的试剂盒，其特征在于，所述加样板包括多于一排的所述加样孔，每排包括至少一组加样孔。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，每排加样孔中的释放孔、洗脱孔和磁珠孔都正对排列。

10.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，每组还包括一清洗孔，所述加样板包括8排加样孔，每排包括两组，每组包括依次排列的一释放孔、一磁珠孔、一清洗孔和一洗脱孔，所述释放孔的长度等于每组总长度的一半。

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