CN214895342U - 一种新型冠状病毒s抗原检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，由胶体金免疫层析检测试纸条和检测夹组成，检测夹由表面张力减弱装置和检测结果观察组件可拆卸的连接；检测夹为空心结构，检测试纸条可拆卸的放置在检测夹内。该试剂盒灵敏度高、特异性好、使用便捷，采样简单方便，检测速度快(15～20分钟)；不需要特殊人员或设备辅助，检测成本低，可实时监测感染状态；特别适用于大规模自我检测，可以促进新型冠状病毒筛查效率。对英国新型冠状病毒变异株和国药集团灭活新型冠状病毒疫苗具有较好的灵敏度；所用胶体金颗粒小、假阳性极低；格栅型平台区用于唾液样本表面张力的减弱，能够快速准确的与胶体金颗粒标记得单抗结合形成复合物，实现后续检测目的。

Description

一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒

技术领域

本实用新型涉及临床医学检技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒。

背景技术

冠状病毒是自然界广泛存在的一个大型病毒家族，因其形态在电镜下观察似王冠而得名，主要引起呼吸系统疾病。新型冠状病毒是一种可引起人肺炎/肺部感染的新的冠状病毒，它与已知可引起感冒、严重急性呼吸综合症(SARS)和中东呼吸综合症(MERS)同属一个冠状病毒家族，世界卫生组织(WHO)已将其命名为2019新型冠状病毒，即2019-nCoV。新型冠状病毒肺炎是一种严重的Ⅱ类传染病，传染性强，死亡率3～6％，为2020年世界经济发展造成了巨大破坏。

新型冠状病毒检测目前有三种，分别为：核酸检测、抗体检测、抗原检测。三种检测方法的窗口期有所区别，核酸/抗体/抗原检测各有侧重，不能相互替代，应用多种方法联合检测，可有效缩短检测窗口期，提高阳性检出率，为各种可能的风险人群提供双重保障。现有新型冠状病毒病原体检测过度依赖核酸检测，且抗体/抗原检测试剂灵敏度和特异性还有限，因此，继续研究另一种检测方法与之互补，建立快速的新型冠状病毒S抗原的方法也迫在眉睫。另外，由于唾液及其他环境样本粘度大难以流入小孔，传统检测试剂盒无法做到唾液直接检测。

胶体金免疫层析试纸条将胶体金免疫层析和单克隆抗体结合起来，既具有快速简便、准确直观等优点，同时也具有的良好特异性和敏感性。是目前应用最广泛的一种用于临床快速诊断的方法。

实用新型内容

基于上述技术问题，本实用新型采用“双抗夹心法”，使用两种抗原特异性抗体去识别和结合一个靶点抗原的不同表位的检测原理。目的是提供一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒。

本实用新型保护的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，该检测试剂盒由胶体金免疫层析检测试纸条1和检测夹2组成，所述检测夹2由表面张力减弱装置21和检测结果观察组件22可拆卸的连接；所述胶体金免疫层析检测试纸条1包括PVC胶板11以及依次相互搭接粘贴在PVC胶板11上的样品垫12、胶体金垫13、包被抗体固相硝酸纤维素膜14和吸水垫15；所述检测夹2为空心结构，所述胶体金免疫层析检测试纸条1可拆卸的放置在检测夹2内，且所述胶体金免疫层析检测试纸条1上的包被抗体固相硝酸纤维素膜14正好对准检测结果观察组件22的观察窗口23处；所述样品垫12的上方为表面张力减弱装置21；所述检测试剂盒还包括与检测结果观察组件22配套使用的套管3。

进一步的，所述胶体金免疫层析检测试纸条1宽度为2.5～3.5mm；长度为75～85mm。

进一步的，所述胶体金垫13为单克隆抗体S003用胶体金颗粒标记后形成的复合物涂覆在玻璃纤维素膜上形成，其中，胶体金颗粒为粒径的5nm的橘红色。

进一步的，所述包被抗体固相硝酸纤维素膜14内包被有检测线16和质控线17，其中，所述检测线16由单克隆抗体S001包被于硝酸纤维素膜上作为检测线16；所述质控线17用羊抗鼠HRP-IgG二抗包被于硝酸纤维素膜作为质控线17。

优化的，所述试剂盒中采用的单克隆抗体对S001和S003由中国科学院西北高原生物研究所研发并生产，具体使用重组新型冠状病毒S1蛋白为免疫原，通过免疫balb/C小鼠，分离融合阳性脾成熟B细胞，使用小鼠腹水法制得。

进一步的，所述样品垫12为吸滤纸、滤油纸或玻璃纤维膜；所述吸水垫15为吸水纸。

进一步的，所述表面张力减弱装置21为格栅型平台区，所述格栅型平台区与观察窗口23处于同一水平面；所述检测结果观察组件22的端部为圆柱形密封结构。

进一步的，所述观察窗口23为长60～88mm，宽30～50mm的长方形凹槽，凹槽的下边缘设有用于衬托胶体金免疫层析检测试纸条1的横向托板24。

进一步的，上述检测试剂盒被包装在放入铝箔袋中封口；上述检测试剂盒检测包含新型冠状病毒Covid-19抗原的唾液或者环境样本或新型冠状病毒变异株抗原的唾液或者环境样本。

具体使用时：表面张力减弱装置21直接伸进口腔取唾液样本，环境样本可以通过其他方式采集，采集后的唾液或者环境样本通过格栅型平台区的格栅条流到样品垫12上；若样品中含有新型冠病毒S抗原时，抗原与金标单克隆抗体S003结合形成复合物，导致胶体金颗粒在检测线聚集，出现肉眼可见的条带，复合物继续通过毛细血管作用流动与羊抗鼠IgG结合，在质控线17聚集，出现质控线；若样本中没有新型冠病毒S抗原的话，检测线16不会聚集胶体金颗粒，而质控线17的羊抗鼠IgG依然可与标记的单抗形成复合物引起胶体金颗粒聚集，出现红色条带。

相比于现有的技术，本实用新型具有如下有益效果：

本实用新型一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，灵敏度为40pg/mL，高深圳市锦瑞生物科技有限公司的N抗原试剂盒55pg/mL的灵敏度，特异性好，使用便捷，采样简单方便，检测速度快(15～25分钟)；不需要特殊人员或设备辅助、检测成本低及可实时监测感染状态；特别适用于大规模自我检测，可以促进新型冠状病毒筛查效率。对英国新型冠状病毒变异株的灵敏度可达到10pg/mL；英国新型冠状病毒RBD区变异，对试剂盒的功能没有影响。试剂盒对国药集团灭活新型冠状病毒疫苗具有较好的灵敏度，表明试剂盒对真病毒敏感。试剂盒对新型冠状活病毒敏感，阳性样本检测为阳性的最低病毒滴度约为500～1000copies/mL。其中，具体装置中所用的胶体金溶液是自主研发的5nm橘红色胶体金，具有颗粒小、假阳性极低的优点。格栅型平台区，用于样本表面张力的减弱，能够快速，准确的与胶体金颗粒标记得单抗S003结合形成复合物，实现后续检测目的。

附图说明

图1为本实用新型试剂盒的结构示意图；

图2为本实用新型剂盒的正面结构示意图；

图3为本实用新型试剂盒的反面结构示意图；

图4为本实用新型试剂盒的胶体金免疫层析检测试纸条的侧面结构示意图；

图5为本实用新型试剂盒的胶体金免疫层析检测试纸条的俯视结构示意图；

图6为本实用新型试剂盒的灵敏度测试结果；

图7为用本实用新型试剂盒测试英国新型冠状病毒变异株的测试结果；

图8为用本实用新型试剂盒测试新型冠状病毒疫苗稀释50倍后的检测结果；

图9为用本实用新型试剂盒测试新型冠状病毒灭活疫苗稀释2500倍后的检测能力。

图中，1、胶体金免疫层析检测试纸条；2、检测夹；3、套管；11、PVC胶板；12、样品垫；13、胶体金垫；14、抗体固相硝酸纤维素膜；15、吸水垫；16、检测线；17、质控线；21、表面张力减弱装置；22、检测结果观察组件；23、观察窗口；24、横向托板。

具体实施方式

下面将结合实施例对本实用新型的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

实施例1

一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，该检测试剂盒由胶体金免疫层析检测试纸条1和检测夹2组成，检测夹2由表面张力减弱装置21和检测结果观察组件22可拆卸的连接；胶体金免疫层析检测试纸条1包括PVC胶板11以及依次相互搭接粘贴在PVC胶板11上的样品垫12、胶体金垫13、包被抗体固相硝酸纤维素膜14和吸水垫15；检测夹2为空心结构，胶体金免疫层析检测试纸条1可拆卸的放置在检测夹2内，且胶体金免疫层析检测试纸条1上的包被抗体固相硝酸纤维素膜14正好对准检测结果观察组件22的观察窗口23处；样品垫12的上方为表面张力减弱装置21；检测试剂盒还包括与检测结果观察组件22配套使用的套管3。

优选的，胶体金免疫层析检测试纸条1宽度为2.5mm；长度为75mm。

优选的，胶体金垫13为单克隆抗体S003用胶体金颗粒标记后形成的复合物涂覆在玻璃纤维素膜上形成，其中，胶体金颗粒为粒径的5nm的橘红色。

优选的，包被抗体固相硝酸纤维素膜14内包被有检测线16和质控线17，其中，检测线16由单克隆抗体S001包被于硝酸纤维素膜上作为检测线16；质控线17用羊抗鼠HRP-IgG二抗包被于硝酸纤维素膜作为质控线17。

优选的，试剂盒中采用的单克隆抗体对S001和S003由中国科学院西北高原生物研究所研发并生产，具体使用重组新型冠状病毒S1蛋白为免疫原，通过免疫balb/C小鼠，分离融合阳性脾成熟B细胞，使用小鼠腹水法制得。

优选的，样品垫12为吸滤纸；吸水垫15为吸水纸。

优选的，表面张力减弱装置21为格栅型平台区，格栅型平台区与观察窗口23处于同一水平面；检测结果观察组件22的端部为圆柱形密封结构。

优选的，观察窗口23为长60mm，宽30mm的长方形凹槽，凹槽的下边缘设有用于衬托胶体金免疫层析检测试纸条1的横向托板24。

优选的，上述检测试剂盒被包装在放入铝箔袋中封口；上述检测试剂盒检测包含新型冠状病毒Covid-19抗原的唾液样本或新型冠状病毒变异株抗原的唾液样本。

具体使用时，表面张力减弱装置21直接伸进口腔取唾液样本，环境样本可以通过其他方式采集，采集后的唾液或者环境样本通过格栅型平台区的格栅条流到样品垫12上；若样本中含有新型冠状病毒S抗原时，抗原与金标单克隆抗体S003结合形成复合物，导致胶体金颗粒在检测线聚集，出现肉眼可见的条带，复合物继续通过毛细血管作用流动与羊抗鼠IgG结合，在质控线17聚集，出现质控线；若样本中没有新型冠状病毒S抗原的话，检测线16不会聚集胶体金颗粒，而质控线17的羊抗鼠IgG依然可与标记的单抗形成复合物引起胶体金颗粒聚集，出现红色条带。

结果，胶体金免疫层析检测试纸条1岀现两条线，即检测线16和质控线17，说明检测的样本为强阳性；若试纸条只出现一条线即质控线17，说明检测的样本为阴性样本；但是无论检测什么样本，都会有质控线17的出现，只有这样，试纸条才具有可行性，否则说明试纸条无效，需找岀原因，重新制备。

实施例2

一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，该检测试剂盒由胶体金免疫层析检测试纸条1和检测夹2组成，检测夹2由表面张力减弱装置21和检测结果观察组件22可拆卸的连接；胶体金免疫层析检测试纸条1包括PVC胶板11以及依次相互搭接粘贴在PVC胶板11上的样品垫12、胶体金垫13、包被抗体固相硝酸纤维素膜14和吸水垫15；检测夹2为空心结构，胶体金免疫层析检测试纸条1可拆卸的放置在检测夹2内，且胶体金免疫层析检测试纸条1上的包被抗体固相硝酸纤维素膜14正好对准检测结果观察组件22的观察窗口23处；样品垫12的上方为表面张力减弱装置21；检测试剂盒还包括与检测结果观察组件22配套使用的套管3。

优选的，胶体金免疫层析检测试纸条1宽度为3.5mm；长度为85mm。

优选的，胶体金垫13为单克隆抗体S003用胶体金颗粒标记后形成的复合物涂覆在玻璃纤维素膜上形成，其中，胶体金颗粒为粒径的5nm的橘红色。

优选的，包被抗体固相硝酸纤维素膜14内包被有检测线16和质控线17，其中，检测线16由单克隆抗体S001包被于硝酸纤维素膜上作为检测线16；质控线17用羊抗鼠HRP-IgG二抗包被于硝酸纤维素膜作为质控线17。

优选的，试剂盒中采用的单克隆抗体对S001和S003由中国科学院西北高原生物研究所研发并生产，具体使用重组新型冠状病毒S1蛋白为免疫原，通过免疫balb/C小鼠，分离融合阳性脾成熟B细胞，使用小鼠腹水法制得。

优选的，样品垫12为玻璃纤维膜；吸水垫15为吸水纸。

优选的，表面张力减弱装置21为格栅型平台区，格栅型平台区与观察窗口23处于同一水平面；检测结果观察组件22的端部为圆柱形密封结构。

优选的，观察窗口23为长88mm，宽50mm的长方形凹槽，凹槽的下边缘设有用于衬托胶体金免疫层析检测试纸条1的横向托板24。

优选的，上述检测试剂盒被包装在放入铝箔袋中封口；上述检测试剂盒检测包含新型冠状病毒Covid-19抗原的唾液样本或新型冠状病毒变异株抗原的唾液样本。

具体使用时，表面张力减弱装置21直接伸进口腔取唾液样本，采集后的唾液或样本通过格栅型平台区的格栅条流到样品垫12上；若样本中含有新型冠状病毒S抗原时，抗原与金标单克隆抗体S003结合形成复合物，导致胶体金颗粒在检测线聚集，出现肉眼可见的条带，复合物继续通过毛细血管作用流动与羊抗鼠IgG结合，在质控线17聚集，出现质控线；若样本中没有新型冠状病毒S抗原的话，检测线16不会聚集胶体金颗粒，而质控线17的羊抗鼠IgG依然可与标记的单抗形成复合物引起胶体金颗粒聚集，出现红色条带。

结果，胶体金免疫层析检测试纸条1岀现两条线，即检测线16和质控线17，说明检测的样本为强阳性；若试纸条只出现一条线即质控线17，说明检测的样本为阴性样本；但是无论检测什么样本，都会有质控线17的出现，只有这样，试纸条才具有可行性，否则说明试纸条无效，需找岀原因，重新制备。

实施例3

一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，该检测试剂盒由胶体金免疫层析检测试纸条1和检测夹2组成，检测夹2由表面张力减弱装置21和检测结果观察组件22可拆卸的连接；胶体金免疫层析检测试纸条1包括PVC胶板11以及依次相互搭接粘贴在PVC胶板11上的样品垫12、胶体金垫13、包被抗体固相硝酸纤维素膜14和吸水垫15；所述检测夹2为空心结构，胶体金免疫层析检测试纸条1可拆卸的放置在检测夹2内，且胶体金免疫层析检测试纸条1上的包被抗体固相硝酸纤维素膜14正好对准检测结果观察组件22的观察窗口23处；样品垫12的上方为表面张力减弱装置21；检测试剂盒还包括与检测结果观察组件22配套使用的套管3。

优选的，胶体金免疫层析检测试纸条1宽度为3mm；长度为80mm。

优选的，胶体金垫13为单克隆抗体S003用胶体金颗粒标记后形成的复合物涂覆在玻璃纤维素膜上形成，其中，胶体金颗粒为粒径的5nm的橘红色。

优选的，包被抗体固相硝酸纤维素膜14内包被有检测线16和质控线17，其中，检测线16由单克隆抗体S001包被于硝酸纤维素膜上作为检测线16；质控线17用羊抗鼠HRP-IgG二抗包被于硝酸纤维素膜作为质控线17。

优选的，试剂盒中采用的单克隆抗体对S001和S003由中国科学院西北高原生物研究所研发并生产，具体使用重组新型冠状病毒S1蛋白为免疫原，通过免疫balb/C小鼠，分离融合阳性脾成熟B细胞，使用小鼠腹水法制得。

优选的，样品垫12为滤油纸；吸水垫15为吸水纸。

优选的，表面张力减弱装置21为格栅型平台区，格栅型平台区与观察窗口23处于同一水平面；检测结果观察组件22的端部为圆柱形密封结构。

优选的，观察窗口23为长80mm，宽40mm的长方形凹槽，凹槽的下边缘设有用于衬托胶体金免疫层析检测试纸条1的横向托板24。

优选的，上述检测试剂盒被包装在放入铝箔袋中封口；上述检测试剂盒检测包含新型冠状病毒Covid-19抗原的环境样本或新型冠状病毒变异株抗原的环境样本。

具体使用时，环境样本通过其他方式采集，采集后的环境样本通过格栅型平台区的格栅条流到样品垫12上；若样本中含有新型冠状病毒S抗原时，抗原与金标单克隆抗体S003结合形成复合物，导致胶体金颗粒在检测线聚集，出现肉眼可见的条带，复合物继续通过毛细血管作用流动与羊抗鼠IgG结合，在质控线17聚集，出现质控线；若样本中没有新型冠状病毒S抗原的话，检测线16不会聚集胶体金颗粒，而质控线17的羊抗鼠IgG依然可与标记的单抗形成复合物引起胶体金颗粒聚集，出现红色条带。

结果，胶体金免疫层析检测试纸条1岀现两条线，即检测线16和质控线17，说明检测的样本为强阳性；若试纸条只出现一条线即质控线17，说明检测的样本为阴性样本；但是无论检测什么样本，都会有质控线17的出现，只有这样，试纸条才具有可行性，否则说明试纸条无效，需找岀原因，重新制备。

实施例4

本实用新型试剂盒胶体金免疫层析试纸条的鉴定

(1)特异性试验

对制备好的胶体金免疫层析试纸条进行特异性检测，结果见表1。试剂盒与新型冠状病毒重组N蛋白无交叉反应，判定为阴性，表明该胶体金试纸条的特异性良好。

表1特异性试验

(2)敏感试验

用Tris和PBS缓冲液稀释待检的新型冠状病毒S抗原，分别用制备好的胶体金免疫层析试纸条进行检测，结果见附图6。从200pg/mL至1000pg/mL，检测线相差不大，从40pg/mL开始逐渐变淡，到1pg/mL以后几乎看不见了。由此可得出，本试验的胶体金试纸条具有良好的敏感性。

如表2所示，新型冠状病毒S抗原检测试剂盒对S1蛋白RBD区域重组蛋白表现出很强的灵敏性，10ng/mL浓度抗原及可以达到10000RU以上的信号值，最低分辨率可以达到0.1ng/mL，属于非常灵敏的S抗原检测试剂盒。

表2敏感性试验

深圳市锦瑞生物科技有限公司可以制造新型冠状病毒N抗原胶体金检测试剂盒，并通过了人体实验，显示出98.3％的准确性。根据深圳市锦瑞生物科技有限公司工程师介绍，他们的试剂盒使用重组N蛋白试剂盒测试，灵敏度大约在55pg/mL。使用这种灵敏度的试剂盒即可以有效测定新型冠状病毒病人咽拭子上的新型冠状病毒N抗原，并且信号强度非常有利于判读。本实用新型S抗原试剂盒灵敏度为40pg/mL，高于深圳市锦瑞生物科技有限公司的N抗原试剂盒，应该会在临床测试中显示出更好的效果。

实施例5

本实用新型试剂盒环境样本新型冠状病毒S抗原测试

(1)实验目的

使用青海省疾病预防控制中心存留的新型冠状病毒活病毒咽拭子，使用抗原释放剂稀释5倍，使用稀释后的新型冠状活病毒测试试剂盒灵敏度

(2)实验材料

活新型冠状病毒，抗原释放剂。

(3)检测方法

1)样本制备方法

取200μL阳性环境咽拭子储存液，加入800μL抗原暴露剂，充分混匀后制得待测样本液。

2)检测方法

将试剂条平放于桌面上，使用移液枪向试剂盒样品口中滴入200μL待测样本液，静置20min后读取结果，每个样本重复5次。

(4)实验结果

1)阳性样本的核酸检测结果

该试剂盒的阳性判定阈值为38，也就是说2号和3号样本的CT值勉强达到阳性的标准。该试剂盒的检测限为500copies/mL，也就是说环境2号和3号样本的病毒滴度为500至1000copies/mL之间。而1号和4号样本的病毒滴度约分别为8000copies/mL和4000copies/mL。均属于病毒滴度极低的样本。根据青海省疾病预防控制中心核酸检测相关负责人介绍，上述4个样本的核酸检测重复性已出现问题，重复样本偶尔阴性偶尔阳性，核酸检测CT值时而高时而低，表明上述4个样本的病毒滴度太低，已不能满足重复样本之间的均一，已经逼近核酸检测灵敏度的极限。

表3本实验所用4例阳性样本的核酸检测结果

样本名称	C<sub>T</sub>值
		环境样本1	N33.88
环境样本2	N37.22
		环境样本3	N37.106
环境样本4	N35.08

2)本实用新型抗原检测试剂盒检测结果

①S蛋白定量

为了能够半定量地评价试剂盒性能，我们分别使用0pg/mL、10pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、200pg/mL和1000pg/mL重组S1蛋白测试试剂盒，在保证C线稳定的前提下，在6个不同的试剂盒上，留下了从无到有，从浅至深的6条T线，以上述6条T线为标尺线，通过对比可以得到待测样本大致的浓度。

由于在此实验中，预先使用抗原暴露剂进行阴性对照实验，重复5次，均只显示C线而不显示T线，阴性对照重复性非常好。

②样本测定

如表2所示，所有重复实验表现出很好的均一性，所有重复实验T线深浅均一，并且重复组使用的试剂盒为从74只试剂盒中随机选出，表示该试剂盒的量产工艺已经成熟，产品性能均一性佳。

表4阳性样本的测试结果(单位：pg/mL)

样本名称	重复1	重复2	重复3	重复4	重复5
						环境样本1	50-100	50-100	50-100	50-100	50-100
环境样本2	10-50	10-50	10-50	10-50	10-50
						环境样本3	10-50	10-50	10-50	10-50	10-50
环境样本4	50-100	50-100	50-100	50-100	50-100

所有阳性样本测试组均显示阳性结果，与核酸检测结果完全吻合，表示该试剂盒的检测结果准确度佳。上述4个样本的病毒滴度已经逼近核酸检测的检测限，但是在S蛋白抗原检测试剂盒上，依然显示出稳定的阳性条带，表明该试剂盒的灵敏度与核酸检测非常接近，阳性样本检测为阳性的最低病毒滴度约为500～1000copies/mL。

(5)实验结论

本实用新型环境样本新型冠状病毒S抗原检测试剂盒对新型冠状活病毒敏感。阳性样本检测为阳性的最低病毒滴度约为500～1000copies/mL。

实施例6

本实用新型试剂盒用于测试英国新型冠状病毒变异株抗原

(1)实验方法

1)实验材料

英国变异株S1蛋白(配成1000pg/mL、200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL和10pg/mL)，本实用新型检测试剂盒，PBS缓冲液。

2)检测方法

①分别配制1000pg/mL、200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL和10pg/mL浓度的英国变异株S1蛋白样品液；

②取6只试剂条，分别使用移液器分别滴入1000pg/mL、200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL和10pg/mL浓度的英国变异株S1蛋白样品液，并同时检测空白组。

③每只试剂条加样后需要静置15min后观察结果，在试剂条上用marker笔标记滴加的样本号后，同时拍照记录。

(2)实验结果

如附图7所示，使用1000pg/mL、200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL和10pg/mL浓度的英国变异株S1蛋白样品液，对试剂盒灵敏度进行测试，结果表明，试剂盒出现明显的阳性信号，对英国变异株的灵敏度可以达到10pg/mL。

从附图7可以看出，英国新型冠状病毒氨基酸N501Y变异后，与人类ACE2受体亲和力增强，毒力变强。但是没想到的是，变异之后反而试剂盒的测试灵敏性增强，由变异之前的40pg/mL升至10pg/mL。我们可以做一个大胆的假设，编译之后的英国新型冠状病毒与受体的结合能力增强，同时与抗体的结合能力也增强。

(3)实验结论

英国新型冠状病毒RBD区变异，对试剂盒的功能没有影响。

实施例7

本实用新型试剂盒用于测试国药集团灭活新型冠状病毒疫苗

(1)实验方法

1)实验材料

新型冠状病毒灭活疫苗(剩余约10μL)，本实用新型检测试剂盒，PBS缓冲液。

2)检测方法

①收集注射后剩余vaccine溶液1.0毫升；

②取2只试剂条，分别使用移液器滴入vaccine原溶液150μL，如果试剂条出现阳性(2条线)则继续第三步测试，如果为阴性，则中止实验。

③取vaccine溶液10μL，加490μL去离子水稀释，获得稀释50倍的vaccine(A)溶液，取2只试剂条，分别使用移液器滴入vaccine(A)溶液150μL，如果试剂条出现阳性(2条线)则继续第三步测试，如果为阴性，则中止实验。

④取vaccine(A)溶液10μL，加490μL去离子水稀释，获得稀释2500倍的vaccine(B)溶液，取2只试剂条，分别使用移液器滴入vaccine(B)溶液150μL，如果试剂条出现阳性(2条线)则继续第三步测试，如果为阴性，则中止实验。

⑤继续试验，直至中止实验。

⑥每只试剂条加样后需要静置15min后观察结果，在试剂条上用marker笔标记滴加的样品号后，同时拍照记录。

(2)实验结果

如附图8所示，使用新型冠状病毒灭活疫苗50倍稀释的测试样品，对试剂盒灵敏度进行测试，结果表明，试剂盒出现明显的阳性信号，新型冠状病毒灭活疫苗稀释50倍后对本试剂盒来说依然属于高浓度样本。

由于新型冠状病毒灭活疫苗稀释50倍后信号太强，于是我们接着稀释50倍，得到稀释2500倍的真病毒样本液，继续对试剂盒进行测试，结果如附图9显示，新型冠状病毒灭活疫苗稀释2500倍后，试剂盒仍然显示较强信号，表明本试剂盒对新型冠状病毒真病毒依然较灵敏。

(3)实验结论

试剂盒对新型冠状病毒灭活疫苗具有较好的灵敏度，表明试剂盒对真病毒敏感。

尽管已经示出和描述了本实用新型的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本实用新型的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本实用新型的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒由胶体金免疫层析检测试纸条(1)和检测夹(2)组成，所述检测夹(2)由表面张力减弱装置(21)和检测结果观察组件(22)可拆卸的连接；所述胶体金免疫层析检测试纸条(1)包括PVC胶板(11)以及依次相互搭接粘贴在PVC胶板(11)上的样品垫(12)、胶体金垫(13)、包被抗体固相硝酸纤维素膜(14)和吸水垫(15)；所述检测夹(2)为空心结构，所述胶体金免疫层析检测试纸条(1)可拆卸的放置在检测夹(2)内，且所述胶体金免疫层析检测试纸条(1)上的包被抗体固相硝酸纤维素膜(14)正好对准检测结果观察组件(22)的观察窗口(23)处；所述样品垫(12)的上方为表面张力减弱装置(21)；所述检测试剂盒还包括与检测结果观察组件(22)配套使用的套管(3)。

2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金免疫层析检测试纸条(1)宽度为2.5～3.5mm；长度为75～85mm。

3.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金垫(13)为单克隆抗体S003用胶体金颗粒标记后形成的复合物涂覆在玻璃纤维素膜上形成，其中，胶体金颗粒为粒径的5nm的橘红色。

4.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，所述包被抗体固相硝酸纤维素膜(14)内包被有检测线(16)和质控线(17)，其中，所述检测线(16)由单克隆抗体S001包被于硝酸纤维素膜上作为检测线(16)；所述质控线(17)用羊抗鼠HRP-IgG二抗包被于硝酸纤维素膜作为质控线(17)。

5.根据权利要求4所述的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中采用的单克隆抗体对S001和S003由中国科学院西北高原生物研究所研发并生产，具体使用重组新型冠状病毒S1蛋白为免疫原，通过免疫balb/C小鼠，分离融合阳性脾成熟B细胞，使用小鼠腹水法制得。

6.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫(12)为吸滤纸、滤油纸或玻璃纤维膜；所述吸水垫(15)为吸水纸。

7.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，所述表面张力减弱装置(21)为格栅型平台区，所述格栅型平台区与观察窗口(23)处于同一水平面；所述检测结果观察组件(22)的端部为圆柱形密封结构。

8.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，所述观察窗口(23)为长60～88mm，宽30～50mm的长方形凹槽，凹槽的下边缘设有用于衬托胶体金免疫层析检测试纸条(1)的横向托板(24)。

9.根据权利要求1-8任意一项所述的一种新型冠状病毒S抗原检测试剂盒，其特征在于，上述检测试剂盒被包装在放入铝箔袋中封口；上述检测试剂盒检测包含新型冠状病毒Covid-19抗原的唾液或者环境样本或新型冠状病毒变异株抗原的唾液或者环境样本。

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