CN212833832U - 共培养装置 - Google Patents
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Abstract
一种共培养装置，包括盛有培养液A的培养室、盛有培养液B的培养皿和盛有呼吸道上皮细胞的培养小室，在培养皿底部有免疫细胞或微生物，培养皿中插有培养室，培养室中插有培养小室，培养小室底壁为孔径0.4微米的聚碳酸酯膜，培养室底壁为孔径0.1‑0.22微米的聚碳酸酯膜，培养液A为BEGM支气管上皮细胞培养基，培养液B为免疫细胞培养基或微生物培养基。呼吸道上皮细胞与免疫细胞或微生物共培养时，一方面培养室底壁在一定程度上限制了双侧培养液的扩散速度，可减缓培养液B与培养液A的互相混合速度，减小培养液B对呼吸道上皮细胞的不利影响；另一方面培养室底壁可完全阻止培养皿中微生物进入培养室，从而减小了培养皿中内容物对呼吸道上皮细胞的损害。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种共培养装置。
背景技术
细胞共培养技术可以进一步模拟体内环境，研究免疫细胞或微生物的分泌因子、代谢产物对呼吸道上皮细胞生理结构和功能的影响，如图1所示的共培养装置，其包括培养皿 1A和transwell培养室1B。呼吸道上皮细胞的体外培养采用气液界面培养技术，是一种将呼吸道组织上的原代上皮细胞分离后，接种到transwell培养小室中进行培养，该培养小室的下层加入培养基，而培养小室中的细胞上层不加培养基直接暴露于空气。呼吸道上皮细胞的培养基为一种特殊的无血清培养基(BEGM支气管上皮细胞培养基)，针对性很强，与其他常规培养基的成分区别较大。并且由于transwell培养小室上层不加培养基，因此呼吸道上皮细胞的共培养不能采用图1所示装置。目前无呼吸道上皮细胞相关的共培养装置可用。
如果利用图1装置进行呼吸道上皮细胞与微生物共培养，则微生物极易穿过transwell 培养小室的底壁感染呼吸道上皮细胞，导致细胞死亡。如果利用图1装置进行呼吸道上皮细胞与免疫细胞共培养，由于二者培养基不通用，且成分区别大，会损害呼吸道上皮细胞的生理特性。我们实验发现，利用图1装置进行呼吸道上皮细胞与免疫细胞共培养，即在 transwell培养小室的下层加入混合培养基(呼吸道上皮细胞BEGM培养基与免疫细胞10％血清1640培养基＝1:1混合)，虽然两种细胞能够短暂共存，但是含10％血清的1640培养基严重损害了呼吸道上皮细胞的成活率和纯度：如图2所示，与单纯用BEGM培养基培养相比，图1装置的共培养导致呼吸道上皮细胞的成活率下降了8.6％，在统计学上有显著差异(p<0.01)；细胞纯度下降了17.5％，在统计学上有显著差异(p<0.01)。从而图1装置无法用于研究免疫细胞或微生物对呼吸道上皮细胞的作用。
实用新型内容
本实用新型的目的在于提供一种有效实现呼吸道上皮细胞的共培养装置。
为达成上述目的，本实用新型采用以下技术方案：
包括盛有培养液B的培养皿、盛有培养液A的培养室和盛有呼吸道上皮细胞的培养小室，在培养皿的底部有免疫细胞或微生物，该培养皿中插有培养室，该培养室中插有该培养小室，所述培养小室底壁为孔径0.4微米的滤膜，所述培养室底壁为孔径0.1-0.22微米的滤膜。
优选地，所述培养室的底壁为0.1-0.22微米的聚碳酸酯膜，可完全阻隔培养皿中的微生物进入培养室。
优选地，所述培养小室的底壁为0.4微米的聚碳酸酯膜，可帮助呼吸道上皮细胞吸收下面培养液A的养分。
优选地，培养液A为BEGM支气管上皮细胞培养基，培养液B为免疫细胞培养基或微生物培养基。
优选地，所述培养皿的上端设有六个卡槽，所述培养室的顶端外壁上均匀间隔设有三条支腿A，该三条支腿A插入其中三个卡槽上，在该培养小室的顶端外壁上均匀间隔设置三条支腿B，该三条支腿B插入另外三个卡槽上。
本实用新型的有益效果：呼吸道上皮细胞与免疫细胞或微生物共培养时，一方面培养室的底壁在一定程度上限制了双侧培养液的扩散速度，可减缓培养皿中的培养液B与培养室中的培养液A的互相混合速度，减小培养液B对呼吸道上皮细胞的不利影响；另一方面培养室的底壁可完全阻止培养皿中的微生物进入培养室，从而减小了培养皿中内容物对呼吸道上皮细胞的损害。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型的实施例，下面将结合附图对本实施例进行描述。
图1是现有技术的共培养装置的结构示意图。
图2是呼吸道上皮细胞单独培养或利用图1装置与免疫细胞共培养时的细胞成活率和上皮细胞纯度对比图。
图3是本实用新型的俯视结构示意图。
图4是图3中A-A向的剖视图。
图5是使用0.22微米聚碳酸酯膜可以明显减缓4KDa荧光物质从培养液B进入培养液A的速度和浓度曲线图。
图6是呼吸道上皮细胞单独培养或利用本实用新型共培养装置与免疫细胞共培养时的对比图。
具体实施方式
如图3和图4所示，为本实用新型的一较佳实施例，一种细胞共培养装置，包括盛有培养液B(11)的培养皿1、盛有培养液A(21)的培养室2和盛有呼吸道上皮细胞31的培养小室3，在培养皿1培养液的底部盛有免疫细胞或微生物12，培养液A为BEGM支气管上皮细胞培养基，培养液B为免疫细胞培养基或微生物培养基，该培养皿1中插有培养室2，该培养室2中插有该培养小室3，所述培养小室3底壁为孔径0.4微米的聚碳酸酯膜，可帮助呼吸道上皮细胞31吸收下面培养液A的养分，所述培养室2底壁为孔径0.1-0.22微米的聚碳酸酯膜，所述培养室2的底壁一方面在一定程度上限制了双侧培养液的扩散速度，可减缓培养皿中的培养液B与培养室中的培养液A的互相混合速度，减小培养液B对呼吸道上皮细胞的不利影响；另一方面可完全阻止培养皿中的微生物进入培养室，从而减小了培养皿中内容物对呼吸道上皮细胞的损害。生长于培养皿1中的细胞，产生释放细胞因子、趋化因子的过程是一个缓慢的过程，所以培养室2的底壁对其向培养液A中的扩散无影响。
所述培养皿1的上端设有六个卡槽，所述培养室的顶端外壁上均匀间隔设有三条支腿A (4)，该三条支腿A插入其中三个卡槽上，在该培养小室的顶端外壁上均匀间隔设置三条支腿B(5)，该三条支腿B插入另外三个卡槽上。
本实用新型的共培养装置，用于研究免疫细胞的分泌因子或微生物的代谢产物对呼吸道上皮细胞的影响。利用0.1-0.22微米孔径的聚碳酸酯膜阻隔两种培养体系：
1、0.22微米滤膜可以达到药典规定的除度菌99.99％的要求，0.1微米滤膜可以有效去除支原体，因此该实用新型共培养装置所述培养室2底壁设计为孔径0.1-0.22微米的滤膜，用于限制双侧培养液的扩散速度以及阻隔微生物的侵染。
2、与微生物共培养时，可完全阻止培养皿中微生物对呼吸道上皮细胞的感染，仅允许小分子代谢产物通过，从而研究代谢产物对呼吸道上皮细胞的影响。
3、与免疫细胞共培养时，培养室的底壁在一定程度上限制了双侧培养液的扩散速度，可减缓培养皿中的培养液B与培养室中的培养液A的互相混合速度，减小培养液B对呼吸道上皮细胞的不利影响。
4、生长于培养皿1中的细胞或者微生物，产生和释放分泌因子、代谢产物的过程是一个缓慢的过程，所以培养室2的底壁对其向培养液A中的扩散无影响。
我们实验证实，0.22微米孔径的聚碳酸酯膜，可以显著减缓两种培养基成分的交换速度，以4KDa物质为例，如图5所示，0.22微米聚碳酸酯膜明显减缓了4KDa荧光物质从培养液B进入培养液A的速度和浓度，尽可能保证了两种培养体系的独立性。另外，我们使用本实用新型模拟装置进行共培养呼吸道上皮细胞与免疫细胞时，发现本实用新型装置对呼吸道上皮细胞的成活率和纯度没有明显不利影响：如图6所示，细胞成活率高达89.8％，无显著下降；上皮细胞纯度高达92.4％，无显著下降。因此，本实用新型装置满足呼吸道上皮细胞的共培养需求。
Claims (6)
1.一种共培养装置，其特征在于，包括盛有培养液B的培养皿、盛有培养液A的培养室和盛有呼吸道上皮细胞的培养小室，在培养皿的底部有免疫细胞或微生物，该培养皿中插有培养室，该培养室中插有该培养小室，所述培养小室底壁为孔径0.4微米的滤膜，所述培养室底壁为孔径0.1-0.22微米的滤膜，培养液A为BEGM支气管上皮细胞培养基，培养液B为免疫细胞培养基或微生物培养基。
2.根据权利要求1所述的共培养装置，其特征在于，所述培养室的底壁为聚碳酸酯膜。
3.根据权利要求1所述的共培养装置，其特征在于，所述培养小室的底壁为聚碳酸酯膜。
4.根据权利要求2所述的共培养装置，其特征在于，所述培养小室的底壁为聚碳酸酯膜。
5.根据权利要求1所述的共培养装置，其特征在于，所述培养液A为BEGM支气管上皮细胞培养基，所述培养液B为免疫细胞培养基或微生物培养基。
6.根据权利要求1至5任一项所述的共培养装置，其特征在于，所述培养皿的上端设有六个卡槽，所述培养室的顶端外壁上均匀间隔设有三条支腿A，该三条支腿A插入其中三个卡槽上，在该培养小室的顶端外壁上均匀间隔设置三条支腿B，该三条支腿B插入另外三个卡槽上。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN113278579A (zh) * | 2021-05-24 | 2021-08-20 | 华中科技大学 | 细胞三维培养体系、其制备方法及其应用 |
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