CN208125742U - B族链球菌量子点检测装置 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供了一种B族链球菌量子点检测装置。B族链球菌量子点检测装置旨在利用量子点荧光免疫发光技术和高度特异性的抗原抗体免疫反应研发出孕妇生殖道分泌物中B族链球菌抗原检测装置。该检测装置用量子点作为信号标记物,利用B族链球菌抗原与偶联量子点特异性抗体发生免疫夹心反应,根据荧光条带及荧光强弱可进行定性和定量检测。检测耗时短,可在10~15分钟内完成检测;特异性好,与类似物交叉反应小于10%;灵敏度高,可根据标准曲线定量检测样本中的抗原含量,适合我国广大中小医院对B族链球菌的检测和筛查。
Description
技术领域
本实用新型涉及免疫检测的技术领域,具体而言,涉及一种B族链球菌量子点检测装置。
背景技术
B族链球菌是一种革兰阳性球菌,在围产期和新生儿感染中占据重要地位,可导致多种不良结局。在妊娠期及产后女性中,B族链球菌可引发晚期流产、胎儿生长受限、胎膜早破、早产等不良妊娠结局。在新生儿中,B族链球菌感染最常见表现为败血症、肺炎、脑膜炎等,病死率高。可见,开展围产期B族链球菌早期检测筛查,对减少围产期B族链球菌感染和早发型新生儿感染具有重要意义。本项目拟采用全新量子点荧光免疫发光技术,研制出B族链球菌快速检测试剂盒,主要应用于围产期孕妇生殖道分泌物中的B族链球菌抗原的检测,适用于临床上B族链球菌感染的辅助诊断。该试剂盒能够满足各级医疗卫生服务机构对B族链球菌检测简便、快速、准确的要求。
B族链球菌筛查采用的检测方法主要有:细菌培养法、荧光PCR法、胶体金免疫层析法。传统细菌培养法,耗时长,培养难度高,假阴性率高造成漏诊率高。荧光PCR检测时间短、灵敏度高,但医疗成本高,需要专业操作人员,对实验室环境要求极高,无法在基层医疗机构开展;胶体金免疫层析法检测快速、简便,但灵敏度低,人为误差大,难以满足高灵敏度、定量检测等要求。
实用新型内容
针对上述不足,本实用新型研制出一种检测方法简单、快速、灵敏度高,稳定性强,检测结果可靠的B族链球菌量子点检测装置。
该B族链球菌量子点检测装置,所述的检测装置包括呈透明设置的盒体,以及位于盒体内的检测试纸,所述的检测试纸包括底基、以及从左到右依次连接并设置在所述底基上的样品垫、抗B族链球菌抗体量子点标记垫、包被膜和吸水垫;所述的检测试纸的包被膜上从左到右依次设有一道检测线(T)和一道质控线(C);所述的检测线(T)包被有固相化的抗B族链球菌单克隆抗体,所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体;
所述盒体开设有用于向所述样品垫添加样品液的加样孔;
还包括与所述盒体连接,并用于在使用前封装所述加样孔的封装结构;所述封装结构一经包装即不能随意开启。
在某些实施方式中,所述封装结构包括贴合于所述加样孔外周侧的底围,以及与所述底围可拆卸连接的撕开部;
所述撕开部的形状和大小与所述加样孔的形状和大小相对应;
所述撕开部凸设有拉手。
在某些实施方式中,所述撕开部与所述底围的连接处预设有便于撕开的凹痕。
在某些实施方式中,所述的样品垫右端具有搭接在所述的抗B族链球菌抗体量子点标记垫上的样品搭接部,所述的抗B族链球菌抗体量子点标记垫右端具有搭接在所述包被膜上的标记垫搭接部,所述的吸水垫左端具有搭接在包被膜上的吸水搭接部。
在某些实施方式中,所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的标记垫搭接部留有间距,所述的标记垫搭接部在其延伸方向上与所述的吸水搭接部留有间距。
在某些实施方式中,所述的检测线(T)和所述的质控线(C)平行设置。
在某些实施方式中,所述的检测试纸的样品垫是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫。
在某些实施方式中,所述的检测试纸的标记垫是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的标记垫。
在某些实施方式中,所述的检测试纸的包被膜由硝酸纤维素膜制成的包被膜。
在某些实施方式中,进一步包括一种或多种选自下组的组成部分:用于固定所述检测试纸的固定底座、上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。
本实用新型还提供了一种B族链球菌量子点检测方法,该方法依次包括下述步骤:
1)破坏封装结构打开加样孔后用移液枪吸取大约100微升样品液由加样孔加样到样品垫;
2)样品液通过吸水垫的吸水作用,沿着样品垫向与之搭接的抗B族链球菌抗体量子点标记垫移动,
当样品中有B族链球菌时,样品中的B族链球菌经过抽提液抽提后,可与抗B族链球菌多克隆抗体量子点标记探针发生特异结合,然后继续移动与包被在包被膜上的抗体结合,从而被抗B族链球菌的多克隆抗体识别,即发生双抗夹心的特异结合,用手持式紫外线灯照射观察窗口,检测线出现量子点荧光条带,从而通过检测样本中的B族链球菌,进行孕妇B族链球菌的早期筛查。
有益效果是:
1、与传统的细菌培养检测法相比:细菌培养需要几天出结果,本实用新型只需要10min,大大缩短了检测时间,提高了检测效率;
2、与PCR检测法相比:不需要大型仪器设备,无需专门技术人员操作,节约了成本;
3、与胶体金法相比:提高了灵敏度和检出率,胶体金检测试剂的灵敏度为105CFU/mL,本实用新型检测试剂的灵敏度为103CFU/mL,明显优于胶体金法。
尤其需要注意的是,本实用新型中采用透明材质的盒体容纳检测试纸,并与检测之后用手持式紫外线灯照射检测试纸进行观察,而无需如传统的试剂盒只能观察窗口观察结果,避免了浪费统计结果的时间,进一步的提高了工作效率。
再者,该检测装置还包括与盒体连接,并用于在使用前封装所述加样孔的封装结构;所述封装结构一经包装即不能随意开启。
该种封装结构可以有效的避免已被污染的检测装置仍然投入使用的问题。封装结构一旦由于外力收到破坏,则无法再恢复原有封闭的结构,便于使用者判断该检测装置是否受到过污染,甚至是回收的医用垃圾。进一步的,提高了该检测装置检测结果的可信度。
总之,该B族链球菌量子点检测装置使用方便,结构稳定性佳,易于操作。可以快速、方便的获得检测结果。极大提高了操作的便利性。更为符合实际应用过程中的需求。
综上所述,本实用新型提供的B族链球菌量子点检测装置的结构及操作方法其具有上述诸多的优点及价值,并在同类产品中未见有类似的方法公开发表或使用而确属创新,产生了好用且实用的效果,较现有的技术具有增进的多项功效,从而较为适于实用,并具有广泛的产业价值。
附图说明
应当理解的是,以下附图仅示出了本实用新型的某些实施例,因此不应被看作是对范围的限定,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本实用新型实施方式公开的B族链球菌量子点检测装置的结构示意图;
图2为本实用新型实施方式公开的B族链球菌量子点检测装置的结构示意图;
图3为本实用新型实施方式公开的B族链球菌量子点检测装置的检测试纸的结构示意图;
图4是本实用新型实施方式公开的B族链球菌量子点检测装置判定结果为阳性时俯视图;
图5是本实用新型实施方式公开的B族链球菌量子点检测装置判定结果为阴性时示意图;
图6是本实用新型实施方式公开的B族链球菌量子点检测装置判定结果为无效时示意图。
附图标记:
具体实施方式
在下文中,将结合附图更全面地描述本公开的各种实施例。本公开可具有各种实施例,并且可在其中做出调整和改变。因此,将参照在附图中示出的特定实施例更详细地描述本公开。然而,应理解:不存在将本公开的各种实施例限于在此公开的特定实施例的意图,而是应将本公开理解为涵盖落入本公开的各种实施例的精神和范围内的所有调整、等同物和/或可选方案。结合附图的描述,同样的附图标号标示同样的元件。
在下文中,可在本公开的各种实施例中使用的术语“包括”或“可包括”指示所公开的功能、操作或元件的存在,并且不限制一个或更多个功能、操作或元件的增加。
在本公开的各种实施例中,表述“或”或“A或/和B中的至少一个”包括同时列出的文字的任何组合或所有组合。例如,表述“A或B”或“A或/和B中的至少一个”可包括A、可包括B或可包括A和B二者。
在本公开的各种实施例中使用的表述(诸如“第一”、“第二”等)可修饰在各种实施例中的各种组成元件,不过可不限制相应组成元件。例如,以上表述并不限制所述元件的顺序和/或重要性。以上表述仅用于将一个元件与其它元件区别开的目的。例如,第一用户装置和第二用户装置指示不同用户装置,尽管二者都是用户装置。例如,在不脱离本公开的各种实施例的范围的情况下,第一元件可被称为第二元件,同样地,第二元件也可被称为第一元件。
应注意到:如果描述将一个组成元件“连接”到另一组成元件,则可将第一组成元件直接连接到第二组成元件,并且可在第一组成元件和第二组成元件之间“连接”第三组成元件。相反地,当将一个组成元件“直接连接”到另一组成元件时,可理解为在第一组成元件和第二组成元件之间不存在第三组成元件。
在本公开的各种实施例中使用的术语仅用于描述特定实施例的目的并且并非意在限制本公开的各种实施例。如在此所使用,单数形式意在也包括复数形式,除非上下文清楚地另有指示。除非另有限定,否则在这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本公开的各种实施例所属领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。所述术语(诸如在一般使用的词典中限定的术语)将被解释为具有与在相关技术领域中的语境含义相同的含义并且将不被解释为具有理想化的含义或过于正式的含义,除非在本公开的各种实施例中被清楚地限定。
参见图1至图6,在本实用新型某些实施例中,一种B族链球菌量子点检测装置1,所述的检测装置包括呈透明设置的盒体11,以及位于盒体11内的检测试纸12,
所述的检测试纸12包括底基121、以及从左到右依次连接并设置在所述底基121上的样品垫122、抗B族链球菌抗体量子点标记垫123、包被膜124和吸水垫125;所述的检测试纸12的包被膜124上从左到右依次设有一道检测线(T)和一道质控线(C);所述的检测线(T)包被有固相化的抗B族链球菌单克隆抗体,所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体;
所述盒体11开设有用于向所述样品垫122添加样品液的加样孔111;
还包括与所述盒体11连接,并用于在使用前封装所述加样孔111的封装结构13;所述封装结构13一经包装即不能随意开启。
上述,有益效果是:
1、与传统的细菌培养检测法相比:细菌培养需要几天出结果,本实用新型只需要10~15min,大大缩短了检测时间,提高了检测效率;
2、与PCR检测法相比:不需要大型仪器设备,无需专门技术人员操作,节约了成本;
3、与胶体金法相比:提高了灵敏度和检出率,胶体金检测试剂的灵敏度为105CFU/mL,本实用新型检测试剂的灵敏度为103CFU/mL,明显优于胶体金法。
尤其需要注意的是,本实用新型中采用透明材质的盒体11容纳检测试纸12,并与检测之后用手持式紫外线灯照射检测试纸12进行观察,而无需如传统的试剂盒只能观察窗口观察结果,避免了浪费统计结果的时间,进一步的提高了工作效率。
再者,该检测装置还包括与盒体11连接,并用于在使用前封装所述加样孔111的封装结构13;所述封装结构13一经包装即不能随意开启。
该种封装结构13可以有效的避免已被污染的检测装置仍然投入使用的问题。封装结构13一旦由于外力收到破坏,则无法再恢复原有封闭的结构,便于使用者判断该检测装置是否受到过污染,甚至是回收的医用垃圾。进一步的,提高了该检测装置检测结果的可信度。
在本实用新型某些实施例中,所述封装结构13包括贴合于所述加样孔111外周侧的底围131,以及与所述底围131可拆卸连接的撕开部132;
所述撕开部132的形状和大小与所述加样孔111的形状和大小相对应;
所述撕开部132凸设有拉手133。
上述,可以理解的是,拉住拉手133即可带动与之连接的撕开部132脱离底围131,暴露加样孔111。
可以理解的是,底围131置于加样孔111的外周侧,能够更好的保护加样孔111不收到污染,比常见的于加样孔111处设置盖体或塞盖密封性更好。
外界的细菌等污染物易于由盖体与加样孔111的连接处进入盒体11内部造成污染。
而底围131置于加样孔111的外周侧,其不存在与加样孔111的直接连接处。细菌等外界污染物能够被更好的隔离。从而避免了该B族链球菌量子点检测装置1受污染而失效,降低了制造者、运输者、使用者的经济成本。进一步的提高了检测结果的可信度。
在本实用新型某些实施例中,所述撕开部132与所述底围131的连接处预设有便于撕开的凹痕134。
在本实用新型某些实施例中,所述的样品垫122右端具有搭接在所述的抗B族链球菌抗体量子点标记垫123上的样品搭接部,所述的抗B族链球菌抗体量子点标记垫123右端具有搭接在所述包被膜124上的标记垫123搭接部,所述的吸水垫125左端具有搭接在包被膜124上的吸水搭接部。
在本实用新型某些实施例中,所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的标记垫123搭接部留有间距,所述的标记垫123搭接部在其延伸方向上与所述的吸水搭接部留有间距。
在本实用新型某些实施例中,所述的检测线(T)和所述的质控线(C)平行设置。
在本实用新型某些实施例中,所述的检测试纸12的样品垫122是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫122。
在本实用新型某些实施例中,所述的检测试纸12的标记垫123是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的标记垫123。
上述,由玻璃纤维制成量子点标记垫123的制备工艺,可防止标记量子点的特异性抗体发生聚集或沉底,提高B族链球菌检出率。
在本实用新型某些实施例中,所述的检测试纸12的包被膜124由硝酸纤维素膜制成的包被膜124。
本实用新型还提供了一种B族链球菌量子点检测方法,该方法依次包括下述步骤:
1)破坏封装结构13打开加样孔111后用移液枪吸取大约100微升样品液由加样孔111加样到样品垫122;
2)样品液通过吸水垫125的吸水作用,沿着样品垫122向与之搭接的抗B族链球菌抗体量子点标记垫123移动,
当样品中有B族链球菌时,样品中的B族链球菌经过抽提液抽提后,可与抗B族链球菌多克隆抗体量子点标记探针发生特异结合,然后继续移动与包被在包被膜124上的抗体结合,从而被抗B族链球菌的多克隆抗体识别,即发生双抗夹心的特异结合,用手持式紫外线灯照射观察窗口,检测线出现量子点荧光条带,从而通过检测样本中的B族链球菌,进行孕妇B族链球菌的早期筛查。
可以理解的是采用亚硝酸钠和醋酸作为标本提取液,检测样本经过提取液的处理,游离出B族链球菌抗原,能使量子点标记的抗体最大水平的结合B族链球菌抗原,提高灵敏度,降低漏检率。
本实用新型还提供了,检测试纸12的制备工艺
1、硝酸纤维素膜包被
1.1包被工作液的配制:用0.01M PBS缓冲液稀释使包被羊抗鼠IgG二抗浓度0.5mg/ml±5%和抗B族链球菌单克隆抗体浓度0.5mg/ml±5%,制备成包被工作液。
1.2包被硝酸纤维素膜:用点膜机将羊抗鼠IgG二抗和抗B族链球菌单克隆抗体在硝酸纤维素膜上点膜出检测线(T线)和质控线(C线)。
1.3硝酸纤维素膜干燥:包被好的硝酸纤维素膜,放入干燥间,37℃干燥2小时。
2、量子点标记垫123制备
2.1量子点工作液制备:在微量离心管中加入10ul羧基量子点(8umol/ml),然后加入7.5ul 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)溶液和400ul0.01M PBS,室温下振荡反应20min,成为量子点工作液。
2.2活化抗体:将需要活化的抗体量M(mg),加入1000*M(ul)量子点工作液的微量离心管中,室温振荡反应2小时。将反应完毕后的微量离心管中加入过量甘氨酸溶液,置于低温高速离心机中4℃,12000r/min离心20min。各沉淀分别加适量的0.01M PBS缓冲液,使其溶解。溶解后置4℃保存备用。
2.3量子点标记标记垫123制备:准备点膜机用0.01M PBS冲洗管道,排空冲洗管道、调整点膜机喷液膜式设备参数使泵头喷液范围为30ul/cm±3%。分别取溶解后的量子点偶联标志后的B族链球菌单克隆抗体按照一定比例稀释,用点膜机在玻璃纤维上连续均匀喷液;将喷液完毕的玻璃纤维标记垫123置干燥间37℃干燥2小时。
3、检测试纸12装配
撕去乙烯基贴条上端的胶纸,将吸水纸贴至乙烯基贴条的上端,并使其下端叠压包被膜124 2mm,撕去乙烯基贴条下端胶纸,贴胶体金标无纺布,叠压包被膜124 2mm。在胶体金标无纺布下方粘贴样品垫122,平齐乙烯基贴条的下端,使其叠压在胶体金标无纺布上约1/3处。粘贴好后置于切割机中,切成同等宽度为3.5mm的试剂条,即为检测试纸12。
4、标本提取液配制
用2M亚硝酸钠作为1号抽提液,冰醋酸为2号抽提液。
本实用新型还提供了,检测方法和结果判断
1、检测方法:
用棉拭子采集女性阴道口和直肠部位分泌物;
在塑料滴管内加入提取试剂1和提取试剂2各5滴,充分混匀,将已采样拭子放入。
室温静置10分钟后,挤出拭子上的液体后丢弃拭子,盖上滴管滴头。
取出本实用新型提供的检测装置,置于水平工作台面上。垂直地滴入提取液2滴(约100微升)于样品孔中,计时15分钟后进行结果判断。
2、结果判断:
紫外光下目测:可将加样15分钟后的检测试纸12置于365nm波长的紫外灯下照射,如检测线(T线)区域出现橘红色荧光条带,视为B族链球菌阳性结果。如无荧光条带,则为B族链球菌阴性结果。
3、荧光免疫分析仪检测:将检测试纸12置于干式荧光免疫分析仪Strep B模式下测读结果,B族链球菌的检测结果将自动显示在屏幕上。
4、检验结果的解释:
紫外光目测判断结果情况:
阳性:有一条橘红色条带出现在控制区(“C”),另一条出现在测试区(“T”)。样品应被视为B族链球菌阳性。
阴性:在控制区(“C”)出现一条橘红色条带,但没有明显的条带出现在测试区(“T”)。样品应被视为B族链球菌阴性。
无效:如果在控制区(“C”)没有出现橘红色条带,则该测试结果是无效的,建议重新测试。
5、荧光免疫分析仪检测情况:
根据仪器检测显示的结果进行判断。
应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施方式中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
实用新型人声明,本实用新型通过上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本实用新型的可行性实施方式的具体说明,但本实用新型并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程。并且即不意味着本实用新型应依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了,对本实用新型的任何改进,对本实用新型产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等,均落在本实用新型的保护范围和公开范围之内。
Claims (9)
1.一种B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:所述的检测装置包括呈透明设置的盒体,以及位于盒体内的检测试纸,
所述的检测试纸包括底基、以及从左到右依次连接并设置在所述底基上的样品垫、抗B族链球菌抗体量子点标记垫、包被膜和吸水垫;所述的检测试纸的包被膜上从左到右依次设有一道检测线(T)和一道质控线(C);所述的检测线(T)包被有固相化的抗B族链球菌单克隆抗体,所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体;
所述盒体开设有用于向所述样品垫添加样品液的加样孔;
还包括与所述盒体连接,并用于在使用前封装所述加样孔的封装结构;所述封装结构一经包装即不能随意开启;
所述封装结构包括贴合于所述加样孔外周侧的底围,以及与所述底围可拆卸连接的撕开部;
所述撕开部的形状和大小与所述加样孔的形状和大小相对应;
所述撕开部凸设有拉手。
2.如权利要求1所述的B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:所述撕开部与所述底围的连接处预设有便于撕开的凹痕。
3.如权利要求1所述的B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:所述的样品垫右端具有搭接在所述的抗B族链球菌抗体量子点标记垫上的样品搭接部,所述的抗B族链球菌抗体量子点标记垫右端具有搭接在所述包被膜上的标记垫搭接部,所述的吸水垫左端具有搭接在包被膜上的吸水搭接部。
4.如权利要求3所述的B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的标记垫搭接部留有间距,所述的标记垫搭接部在其延伸方向上与所述的吸水搭接部留有间距。
5.如权利要求1所述的B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:所述的检测线(T)和所述的质控线(C)平行设置。
6.如权利要求1所述的B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:所述的检测试纸的样品垫是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫。
7.如权利要求1所述的B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:所述的检测试纸的标记垫是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的标记垫。
8.如权利要求1所述的B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:所述的检测试纸的包被膜由硝酸纤维素膜制成的包被膜。
9.如权利要求1所述的B族链球菌量子点检测装置,其特征在于:进一步包括一种或多种选自下组的组成部分:用于固定所述检测试纸的固定底座、上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。
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Granted publication date: 20181120 Termination date: 20220130 |