CN207611055U - 一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供了一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,包括盒体以及盖合所述盒体的盒盖,所述盒体内设有过敏原检测膜条、抗人IgE抗体试剂瓶、链霉亲和素试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶、浓缩洗涤液试剂瓶和反应槽;所述过敏原检测膜条包括混合组过敏原检测膜条、吸入组过敏原检测膜条和食入组过敏原检测膜条中的至少一种。本实用新型提供的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒可以根据需要进行选择检测食入类和/或吸入类过敏原,更加方便,具有针对性,检测全面,覆盖范围广。
Description
技术领域
本实用新型涉及生物医学技术领域,特别涉及一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒。
背景技术
变态反应又称为超敏反应,是机体受同一抗原再次刺激后所发生的一种表现为组织损伤或者生理功能紊乱的特异性免疫反应,是异常的、有害的、病理性的免疫反应。引起变态反应的抗原物质称为过敏原,又称为变应原或致敏原。在日常生活中,过敏原大致分为四大类,第一类为吸入类,例如花粉、柳絮、灰尘等;第二类为食入类,例如牛奶、鸡蛋、鱼虾、花生等;第三类为接触类,例如紫外线、辐射、重金属等;第四类为自身组织抗原,例如压力、精神紧张等造成自身组织抗原的结构或者构成发生改变等,其中,第一类过敏原和第二类过敏原是最常见也是最容易接触到的过敏原。
当吸入、摄入、食入或注入含有致敏成分的物质后触发机体B细胞产生特异性IgE抗体,IgE与肥大细胞或嗜碱粒细胞等效应细胞结合从而使机体处于致敏状态即为Ⅰ型变态反应,由IgE抗体介导的Ⅰ型变态反应相当普遍,会造成机体不适甚至严重时会危及生命。因此,鉴于IgE抗体介导的Ⅰ型变态反应的广泛存在,亟需一种检测过敏原特异性IgE抗体的试剂盒。
实用新型内容
有鉴于此,本实用新型提供了一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,包括过敏原检测膜条,所述过敏原检测膜条包括混合组过敏原检测膜条、吸入组过敏原检测膜条和食入组过敏原检测膜条中的至少一种,所述过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒检测范围广,方法简单,易于操作,反应迅速,灵敏度高,具有广泛的应用前景。
第一方面,本实用新型提供了一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,包括盒体以及盖合所述盒体的盒盖,所述盒体内设有过敏原检测膜条、抗人IgE抗体试剂瓶、链霉亲和素试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶、浓缩洗涤液试剂瓶和反应槽;所述过敏原检测膜条包括混合组过敏原检测膜条、吸入组过敏原检测膜条和食入组过敏原检测膜条中的至少一种。
可选的,所述混合组过敏原检测膜条设有第一质控区和第一检测区,所述第一检测区分别设有包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线、包被树木花粉过敏原的检测线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线;所述吸入组过敏原检测膜条设有第二质控区和第二检测区,所述第二检测区分别设有包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线和包被树木花粉过敏原的检测线;所述食入组过敏原检测膜条设有第三质控区和第三检测区,所述第三检测区分别设有包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线。
可选的,所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等。可选的,所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等。可选的,所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等。
可选的,所述第一质控区、所述第二质控区和所述第三质控区均设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线。
可选的,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线与所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行。可选的,所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线与所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行。可选的,所述食入组过敏原检测膜条上的质控线与所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行。
可选的,所述混合组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线、包被树木花粉过敏原的检测线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线。可选的,所述吸入组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线和包被树木花粉过敏原的检测线。可选的,所述食入组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线。
可选的,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线和所述混合组过敏原检测膜条上的包被尘螨过敏原的检测线之间的间隔与所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等。可选的,所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线和所述吸入组过敏原检测膜条上的包被尘螨过敏原的检测线之间的间隔与所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等。可选的,所述食入组过敏原检测膜条上的质控线和所述食入组过敏原检测膜条上的包被贝类过敏原的检测线之间的间隔与所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等。
可选的,所述链霉亲和素试剂瓶中装有碱性磷酸酶标记的链霉亲和素;所述样本稀释液试剂瓶中装有三羟甲基氨基甲烷缓冲液和牛血清白蛋白;所述显色底物试剂瓶中装有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐溶液和氯化硝基四氮唑蓝溶液;所述浓缩洗涤液试剂瓶中装有20倍浓缩的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
可选的,所述反应槽呈凹槽状,用于检测时放置所述过敏原检测膜条。即所述反应槽用于放置所述混合组过敏原检测膜条、所述吸入组过敏原检测膜条和所述食入组过敏原检测膜条中的至少一种。
可选的,所述试剂盒在检测过程中的反应温度为恒温37℃。
本实用新型具有以下有益效果:
(1)本实用新型提供的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒可以根据需要进行选择检测食入类和/或吸入类过敏原,更加方便,具有针对性;
(2)本实用新型提供的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒可以检测食入类和/或吸入类过敏原,检测全面,覆盖范围广;
(3)本实用新型提供的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒的操作简单,检测迅速,特异性强,利用待测样本中的抗体与检测试剂盒中的检测膜条上包被的抗原进行特异性结合形成抗原抗体复合物,并通过生物素标记的抗人IgE抗体与抗原抗体复合物结合,从而使检测信号放大,在经过与链霉亲和素和显色试剂的作用,提高了检测灵敏度和准确性。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型,并不用于限定本实用新型。
图1为本实用新型实施例中提供的一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒示意图。
图2为本实用新型实施例中提供的一种混合组过敏原检测膜条示意图。
图3为本实用新型实施例中提供的一种吸入组过敏原检测膜条示意图。
图4为本实用新型实施例中提供的一种食入组过敏原检测膜条示意图。
具体实施方式
下面将结合本实用新型实施例中的附图,对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本实用新型保护的范围。
本实用新型提供一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,包括盒体以及盖合所述盒体的盒盖,所述盒体内设有过敏原检测膜条、抗人IgE抗体试剂瓶、链霉亲和素试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶、浓缩洗涤液试剂瓶和反应槽;所述过敏原检测膜条包括混合组过敏原检测膜条、吸入组过敏原检测膜条和食入组过敏原检测膜条中的至少一种。
如图1所示,为本实用新型实施提供的一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,所述试剂盒包括盒体10以及盖合所述盒体10的盒盖20,所述盒体10内设有过敏原检测膜条11、抗人IgE抗体试剂瓶12、链霉亲和素试剂瓶13、样本稀释液试剂瓶14、显色底物试剂瓶15、浓缩洗涤液试剂瓶16和反应槽17;所述过敏原检测膜条11包括混合组过敏原检测膜条、吸入组过敏原检测膜条和食入组过敏原检测膜条中的至少一种。
在本实用新型实施方式中,所述盒盖与所述盒体的连接方式不做限制,所述盒盖可以与所述盒体相连接,或所述盒盖也可以与所述盒体成单独部件,所述盒盖能够盖合所述盒体即可,在此不再赘述。
在本实用新型实施例中,所述过敏原检测膜条可以储存在一存储瓶中,所述过敏原检测膜条以存储瓶的形式内设在所述试剂盒的盒体中。可选的,所述盒体内还设有用于固定所述试剂瓶、检查膜条和反应槽的固定件。所述固定件可以为纸板、塑料板或海绵,在此不再赘述。
在本实用新型实施方式中,所述混合组过敏原检测膜条设有第一质控区和第一检测区,所述第一检测区分别设有包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线、包被树木花粉过敏原的检测线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线。
在本实用新型实施方式中,所述吸入组过敏原检测膜条设有第二质控区和第二检测区,所述第二检测区分别设有包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线和包被树木花粉过敏原的检测线。
在本实用新型实施方式中,所述食入组过敏原检测膜条设有第三质控区和第三检测区,所述第三检测区分别设有包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线。
在本实用新型实施方式中,所述混合组过敏原检测膜条的第一检测区上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等。
在本实用新型实施方式中,所述吸入组过敏原检测膜条的第二检测区上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等。
在本实用新型实施方式中,所述食入组过敏原检测膜条的第三检测区上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等。
在本实用新型实施方式中,所述第一质控区、所述第二质控区和所述第三质控区均设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线。
在本实用新型实施方式中,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线与所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行。
在本实用新型实施方式中,所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线与所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行。
在本实用新型实施方式中,所述食入组过敏原检测膜条上的质控线与所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行。
在本实用新型实施方式中,如图2所示,为一种混合组过敏原检测膜条的示意图,所述混合组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线、包被树木花粉过敏原的检测线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线,用图2中0-20依次表示。可选的,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线和所述混合组过敏原检测膜条上的包被尘螨过敏原的检测线之间的间隔与所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等;进一步可选的,所述间隔为1mm-5mm、2mm-4mm或2mm。
在本实用新型实施方式中,如图3所示,为一种吸入组过敏原检测膜条的示意图,所述吸入组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线和包被树木花粉过敏原的检测线,用图3中A-K依次表示。可选的,所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线和所述吸入组过敏原检测膜条上的包被尘螨过敏原的检测线之间的间隔与所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等;进一步可选的,所述间隔为1mm-5mm、2mm-4mm或2mm。
在本实用新型实施方式中,如图4所示,为一种食入组过敏原检测膜条的示意图,所述食入组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线,用图3中a-k依次表示。可选的,所述食入组过敏原检测膜条上的质控线和所述食入组过敏原检测膜条上的包被贝类过敏原的检测线之间的间隔与所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等;进一步可选的,所述间隔为1mm-5mm、2mm-4mm或2mm。
在本实用新型实施方式中,所述尘螨过敏原包括屋尘螨和粉尘螨中的一种或两种,所述屋尘螨和所述粉尘螨可以选自但不限于屋尘螨过敏原第1组分、屋尘螨过敏原第2组分、粉尘螨过敏原第1组分、粉尘螨过敏原第1组分。所述屋尘过敏原收集房屋灰尘并提取其中的蛋白质。所述霉菌过敏原包括点青霉过敏原、交链孢霉过敏原、烟曲霉过敏原和分枝孢霉过敏原中的至少一种。所述树木花粉过敏原包括栎树过敏原、榆树过敏原、梧桐过敏原、柳树过敏原和杨树过敏原中的至少一种。
在本实用新型实施方式中,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线与所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线的宽度相等。进一步可选的,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线和所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线的宽度为0.5mm-0.7mm。更进一步可选的,所述宽度为0.6mm。可选的,所述混合组过敏原检测膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端,且所述混合组过敏原检测膜条上的质控线和所述第一端的距离小于所述混合组过敏原检测膜条上的质控线和所述第二端的距离。进一步可选的,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线和所述第一端的距离为10mm-12mm。更进一步可选的,所述距离为11mm。
在本实用新型实施方式中,所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线与所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线的宽度相等。进一步可选的,所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线和所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线的宽度为0.5mm-0.7mm。更进一步可选的,所述宽度为0.6mm。可选的,所述吸入组过敏原检测膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端,且所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线和所述第一端的距离小于所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线和所述第二端的距离。进一步可选的,所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线和所述第一端的距离为10mm-12mm。更进一步可选的,所述距离为11mm。
在本实用新型实施方式中,所述食入组过敏原检测膜条上的质控线与所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线的宽度相等。进一步可选的,所述食入组过敏原检测膜条上的质控线和所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线的宽度为0.5mm-0.7mm。更进一步可选的,所述宽度为0.6mm。可选的,所述食入组过敏原检测膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端,且所述食入组过敏原检测膜条上的质控线和所述第一端的距离小于所述食入组过敏原检测膜条上的质控线和所述第二端的距离。进一步可选的,所述食入组过敏原检测膜条上的质控线和所述第一端的距离为10mm-12mm。更进一步可选的,所述距离为11mm。
在本实用新型实施方式中,所述混合组过敏原检测膜条、所述吸入组过敏原检测膜条和所述食入组过敏原检测膜条均为孔径大小是0.20μm-0.45μm的多孔硝酸纤维素膜,进一步的,所述孔径大小为0.22μm。可选的,所述混合组过敏原检测膜条、所述吸入组过敏原检测膜条和所述食入组过敏原检测膜条的长度均为70mm-90mm,宽度为2.0mm-5.0mm。进一步的,所述长度为80mm,所述宽度为3.0mm。
在本实用新型实施方式中,所述链霉亲和素试剂瓶中装有碱性磷酸酶标记的链霉亲和素,所述链霉亲和素的浓度根据具体实验需要确定。
在本实用新型实施方式中,所述样本稀释液试剂瓶中装有三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液和牛血清白蛋白(BSA)。可选的,所述BSA的含量占所述样本稀释液含量的1%-5%。进一步可选的,所述BSA的含量占所述样本稀释液含量的3%。具体的,所述BSA的含量根据实际需要进行选择。可选的,所述Tris缓冲液的配制可以为称取2.42gTris、8g氯化钠至100mL去离子水中溶解,用HCl调节pH至7.4,定容至1000mL。具体的,所述Tris缓冲液的浓度以及pH可以根据实际需要进行选择,在此不作限定。
在本实用新型实施方式中,所述显色底物试剂瓶中装有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐溶液(BCIP)和氯化硝基四氮唑蓝(NBT)溶液。其中,BCIP与NBT的浓度根据具体实验需要确定。可选的,所述BCIP与NBT的摩尔比为1:2。
在本实用新型实施方式中,所述浓缩洗涤液试剂瓶中装有20倍浓缩的三羟甲基氨基甲烷缓冲液,所述Tris缓冲液可以为如上所述的配制方法,也可以根据实际需要进行配制,在此不再赘述。
在本实用新型实施方式中,所述反应槽呈凹槽状,用于放置所述过敏原检测膜条。即所述反应槽用于放置所述混合组过敏原检测膜条、所述吸入组过敏原检测膜条和所述食入组过敏原检测膜条中的至少一种。可选的,所述反应槽中设置有多个可以放置混合组过敏原检测膜条、所述吸入组过敏原检测膜条和/或所述食入组过敏原检测膜条的凹槽,且所述凹槽的深度不做限定,反应槽中的多个凹槽呈并列平行排布。所述反应槽可以进行多个不同样本的过敏原检测膜条的反应,且不同凹槽内的液体不会相互污染和干扰。
在本实用新型实施方式中,所述过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温,可加速抗原抗体的结合反应,试剂盒的检测过程更加迅速。
在本实用新型实施方式中,过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒可以根据需要进行选择检测食入类和/或吸入类过敏原,更加方便,具有针对性;检测食入类和/或吸入类过敏原,检测全面,覆盖范围广。
本实用新型试剂盒中过敏原检测膜条的制备方法为按照常规的制备膜条的方法进行制备,其中,配制点样溶液中是将本实用新型的过敏原制成相应的包被浓度,然后将配制好的点样溶液以一定的排列次序固定在膜片上,形成独立的检测线,后续再进行干燥、贴膜、切膜、组装、切条等操作以制备得到过敏原检测膜条。
本实用新型提供了上述过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒检测方法,包括以下步骤:
S10:检测前准备:将用于过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒和待测样本平衡至室温,将所述已平衡至室温的待测样本用样本稀释液进行稀释,获得待测稀释样本;将过敏原检测膜条放入反应槽中;将浓缩洗涤液进行稀释获得工作洗涤液。
在步骤S10中,待测样本与样本稀释液以1:2的比例进行稀释,得到待测稀释样本;将浓缩洗涤液与蒸馏水或去离子水以1:20的比例稀释成工作洗涤液。过敏原检测膜条根据实际需要进行选择,将混合组过敏原检测膜条、所述吸入组过敏原检测膜条、所述食入组过敏原检测膜条中的至少一种放入反应槽中。
S20:孵育待测稀释样本:取1mL待测稀释样本到反应槽中,37℃恒温孵育10min,待测稀释样本与过敏原检测膜条上相对应的抗原进行结合,获得检测膜条A。
S30:洗涤检测膜条A:倒掉反应槽内的待测稀释样本,加入2mL工作洗涤液,洗涤检测膜条A 1min,倒掉工作洗涤液,反复冲洗3次,获得检测膜条B。
S40:孵育检测膜条B:取1mL抗人IgE抗体到反应槽中,所述抗人IgE抗体与所述检测膜条B于37℃恒温孵育10min,获得检测膜条C。
S50:洗涤检测膜条C:倒掉反应槽内的抗人IgE抗体,加入2mL工作洗涤液洗涤检测膜条C 1min,倒掉所述工作洗涤液,反复冲洗3次,获得检测膜条D。
S60:链霉亲和素结合:将1mL链霉亲和素加入到所述反应槽中,所述链霉亲和素与所述检测膜条D于37℃恒温孵育进行反应,获得检测膜条E。
在步骤S60中,所述链霉亲和素为碱性磷酸酶标记的链霉亲和素。
S70:洗涤检测膜条E:倒掉反应槽内的所述链霉亲和素,加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条E 1min,倒掉所述工作洗涤液,反复冲洗3次,获得检测膜条F。
S80:显色检测膜条F:将1mL显色底物试剂(5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)与氯化硝基四氮唑蓝(NBT))加入到反应槽中,显色底物试剂与检测膜条F于37℃恒温孵育10min,获得检测膜条G。
S90:倒掉所述反应槽内所述显色底物试剂,加入蒸馏水洗涤检测膜条G,倒掉后获得检测膜条H。
在本实施例中还可对检测膜条H进行判读,将干燥的检测膜条H放入免疫印迹分析仪膜条固定架中,借助免疫印迹分析仪对检测膜条H进行判读,结果可判断划分为阴性、临界值、临界值的2倍值、4倍值、8倍值5个等级,输出为量化的数值。可选的,利用所述过敏原检测膜条分析大量正常人的样本的结果,将正常样本的分析强度平均值+3倍的相对偏差得到的数值设定为临界值。若临界值为A,临界值的2倍值、4倍值、8倍值分别为2A、4A、8A,当检测到的阳性结果分析的数值为X时,根据表1对阳性结果进行等级划分。
表1
其中,质控线均为阳性结果,保证试剂盒的有效性。
本实用新型提供的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒经过统计实验发现所述试剂盒的灵敏度可达95%以上,特异性达到95%以上,具有良好的检测效果,可以用于过敏原的检测。
本实用新型提供的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒的检测方法简单,易于操作,检测迅速,特异性强,利用待测样本中的抗体与检测试剂盒中的检测膜条上包被的抗原进行特异性结合形成抗原抗体复合物,并通过生物素标记的抗人IgE抗体与抗原抗体复合物结合,从而使检测信号放大,在经过与链霉亲和素和显色试剂的作用,提高了检测灵敏度和准确性。
以上所述实施例仅表达了本实用新型的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本实用新型专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本实用新型构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本实用新型的保护范围。因此,本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,包括盒体以及盖合所述盒体的盒盖,所述盒体内设有过敏原检测膜条、抗人IgE抗体试剂瓶、链霉亲和素试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶、浓缩洗涤液试剂瓶和反应槽;所述过敏原检测膜条包括混合组过敏原检测膜条、吸入组过敏原检测膜条和食入组过敏原检测膜条中的至少一种。
2.如权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述混合组过敏原检测膜条设有第一质控区和第一检测区,所述第一检测区分别设有包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线、包被树木花粉过敏原的检测线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线;所述吸入组过敏原检测膜条设有第二质控区和第二检测区,所述第二检测区分别设有包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线和包被树木花粉过敏原的检测线;所述食入组过敏原检测膜条设有第三质控区和第三检测区,所述第三检测区分别设有包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线。
3.如权利要求2所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等;所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等;所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等。
4.如权利要求2所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述第一质控区、所述第二质控区和所述第三质控区均设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线。
5.如权利要求4所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线与所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行;所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线与所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行;所述食入组过敏原检测膜条上的质控线与所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线相互平行。
6.如权利要求4所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述混合组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线、包被树木花粉过敏原的检测线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线;所述吸入组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被尘螨过敏原的检测线、包被艾蒿过敏原的检测线、包被葎草过敏原的检测线、包被屋尘过敏原的检测线、包被猫毛皮屑过敏原的检测线、包被狗毛皮屑过敏原的检测线、包被矮豚草过敏原的检测线、包被蟑螂过敏原的检测线、包被霉菌过敏原的检测线和包被树木花粉过敏原的检测线;所述食入组过敏原检测膜条在沿长度方向上依次设有包被生物素标记的牛血清白蛋白的质控线、包被贝类过敏原的检测线、包被鸡蛋白过敏原的检测线、包被牛奶过敏原的检测线、包被蟹类过敏原的检测线、包被虾类过敏原的检测线、包被牛肉过敏原的检测线、包被羊肉过敏原的检测线、包被芒果过敏原的检测线、包被花生过敏原的检测线和包被黄豆过敏原的检测线。
7.如权利要求6所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述混合组过敏原检测膜条上的质控线和所述混合组过敏原检测膜条上的包被尘螨过敏原的检测线之间的间隔与所述混合组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等;所述吸入组过敏原检测膜条上的质控线和所述吸入组过敏原检测膜条上的包被尘螨过敏原的检测线之间的间隔与所述吸入组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等;所述食入组过敏原检测膜条上的质控线和所述食入组过敏原检测膜条上的包被贝类过敏原的检测线之间的间隔与所述食入组过敏原检测膜条上的各个检测线之间的间隔相等。
8.如权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述链霉亲和素试剂瓶中装有碱性磷酸酶标记的链霉亲和素;所述样本稀释液试剂瓶中装有三羟甲基氨基甲烷缓冲液和牛血清白蛋白;所述显色底物试剂瓶中装有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐溶液和氯化硝基四氮唑蓝溶液;所述浓缩洗涤液试剂瓶中装有20倍浓缩的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
9.如权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述反应槽呈凹槽状,用于检测时放置所述过敏原检测膜条。
10.如权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒在检测过程中的反应温度为恒温37℃。
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