CN207143233U - 骨髓间充质干细胞的分离提取装置 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及细胞分离领域，公开了一种骨髓间充质干细胞的分离提取装置。该装置包括管盖、过滤组件以及一端开口的锥形管体；其中，管盖设于管体的开口端，用于闭合或打开开口；过滤组件包括支撑圈、与支撑圈内壁连接的过滤网、于支撑圈的边缘间隔设置若干个支撑条以及固定网；相邻的支撑条之间均固定设置有固定网；支撑条与固定网构成包围过滤网的围栏；管体具有一腔体，过滤组件固定于腔体内，支撑圈与腔体内壁抵触，并将腔体分割成组织容纳腔和细胞容纳腔。本实用新型的实施方式通过在腔体内设置过滤组件，这样放置有细小骨碎块的分离提取装置在离心分离的过程中，细小骨碎块中的骨髓间充质干细胞能够高效、快速的分离出来。

Description

骨髓间充质干细胞的分离提取装置

技术领域

本实用新型涉及细胞分离领域，特别涉及骨髓间充质干细胞的分离提取装置。

背景技术

近年来在国内外有众多的研究探索骨髓间充质干细胞的体外分离及培养方法，主要有细胞贴壁分离、密度梯度离心以及细胞分选等方法。这些方法的前提条件是必须先获取骨髓腔中的骨髓，这对于大段骨如大动物长骨等来说并不困难，但对于细小骨来说，特别是小动物的骨来说，获取骨髓腔中的骨髓却并不容易。为了解决这一问题，目前常用的方法有两种，一种是用注射器手工进行冲刷，但是这种方法操作要求精细、耗费时间精力、效率不高；比如在取1周龄小鼠的骨髓间充质干细胞时，肱骨、尺骨、桡骨、肩胛骨、股骨、胫骨、腓骨都需要冲刷，一般每根骨头至少需要反复冲刷3～5次，大概需要40～90分钟，且由于骨头细小，冲刷并不能彻底冲到每段骨头每一部分；另一种是用组织贴壁法，这种方法相对简单，虽然简单、耗时短，但是其细胞获取率并不高，且由于贴壁培养，成纤维细胞等细胞容易贴壁爬出，造成骨髓间充质干细胞纯度降低。

综上所述，提供一种能够高效、快速分离细小骨中骨髓间充质干细胞的提取装置是目前我们亟需解决的问题。

实用新型内容

本实用新型实施方式的目的在于提供一种骨髓间充质干细胞的分离提取装置，能够高效、快速的分离提取细小骨中骨髓间充质干细胞。

为解决上述技术问题，本实用新型的实施方式提供了一种骨髓间充质干细胞的分离提取装置，该装置包括管盖、过滤组件以及一端开口的锥形管体；其中，管盖设于管体的开口端，用于闭合或打开开口；过滤组件包括支撑圈、与支撑圈内壁连接的过滤网、于支撑圈的边缘间隔设置若干个支撑条以及固定网；相邻的支撑条之间均固定设置有固定网；支撑条与固定网构成包围过滤网的围栏；管体具有一腔体，过滤组件固定于腔体内，支撑圈与腔体内壁抵触，并将腔体分割成组织容纳腔和细胞容纳腔。。

本实用新型实施方式相对于现有技术而言，通过在腔体内设置有效固定细小骨组织的过滤组件，这样放置有细小骨碎块的分离提取装置在离心分离的过程中，细小骨碎块中的骨髓间充质干细胞能够高效、快速的分离出来。

另外，过滤网的滤孔直径为40～200μm。

另外，固定网的孔隙直径为1～5mm。

另外，支撑条的高度大于固定网的高度，便于后续取出过滤组件。

另外，支撑条的高度等于固定网的高度。

另外，管盖与管体通过螺纹或者卡扣的方式连接。

附图说明

图1是根据本实用新型第一实施方式中的管体与管盖的结构示意图；

图2是根据本实用新型第一实施方式中的过滤组件的结构示意图；

图3是根据本实用新型第一实施方式中的过滤组件的截面图；

图4是根据本实用新型第一实施方式中的骨髓间充质干细胞的分离提取装置的结构示意图；

图5是根据本实用新型第一实施方式中的骨髓间充质干细胞的表征；

图6是使用三种方法处理得到的骨髓间充质干细胞的显微镜观察图。

具体实施方式

为使本实用新型的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本实用新型的各实施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本实用新型各实施方式中，为了使读者更好地理解本申请而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本申请各权利要求所要求保护的技术方案。

本实用新型的第一实施方式涉及一种骨髓间充质干细胞的分离提取装置，如图1～4所示，该装置包括管盖2、过滤组件3以及一端开口的锥形管体1；其中，管盖2设于管体1的开口端，用于闭合或打开开口；过滤组件3包括支撑圈4、与支撑圈4内壁连接的过滤网5、于支撑圈4的边缘间隔设置若干个支撑条6以及固定网7；相邻的支撑条6之间均固定设置有固定网7；支撑条6与固定网7构成包围过滤网5的围栏；管体1具有一腔体，过滤组件3固定于腔体内，并将腔体分割成组织容纳腔1-1和细胞容纳腔1-2。

具体地，组织容纳腔1-1位于细胞容纳腔1-2的上方，这样当放置有细小骨碎块的分离提取装置在离心分离的过程中，由于离心分离的原因，细小骨碎块中的骨髓间充质干细胞和其他细胞被分离到细胞容纳腔1-2中，细小骨碎块中的组织残留在组织容纳腔1-1中。将组织容纳腔1-1中的组织取出来，即可将细胞容纳腔1-2中的骨髓间充质干细胞和其他细胞提取出来。

值得注意的是，支撑条6与固定网7构成包围过滤网5的围栏，该围栏可以有效的将需要分离的细小骨组织固定在组织容纳腔1-1中。避免细小骨组织在离心分离的过程中甩到细胞容纳腔1-2中。

优选地，过滤网5的滤孔直径可以为40～200μm，过滤网5可以由尼龙或不锈钢材质制取，固定网7的孔隙直径为1～5mm。

进一步地，支撑条6的高度大于固定网7的高度。这样便于过滤组件3的取出。

此外，管体1上设置有刻度。便于直观的观察管体1内溶液的多少。

优选地，管盖2与管体1通过螺纹或者卡扣的方式连接。

具体地，使用本实施方式中的分离提取装置分离提取骨髓间充质干细胞的方法包括以下步骤：

(1)选1w周龄的大鼠，通过手术解剖取大鼠的细小骨，将细小骨剪碎，为了使得骨髓腔充分暴露出来，将细小骨两端剪开，骨髓腔暴露；

(2)将步骤1中所述的细小骨放入分离提取装置的组织容纳腔中，加入培养液并覆盖所述细小骨；该分离提取装置中的固定网可以保证细小骨能够垂直位于组织容纳腔中，这样细小骨中的组织和细胞能够上下分离开来，使细小骨中的骨髓细胞更多离心的到细胞容纳腔中，同时避免破碎组织进入到细胞容纳腔内；

(3)将步骤2处理后的分离提取装置在离心机中离心、沉淀；为了使骨髓间充质干细胞和细小骨组织充分分离，使骨髓间充质干细胞进入细胞容纳腔，并沉淀下来；

(4)使用镊子将过滤组件取出，重悬管内的细胞并加入培养皿中。其中，细胞容纳腔里的细胞包括骨髓间充质干细胞和血细胞，通过贴壁法，用低糖培养液培养可以使其纯化，也可在离心步骤中加入梯度离心液，进行密度梯度离心；

(5)后续步骤与传统方法中的纯化步骤相同，主要为低糖培养液培养、传代，使骨髓间充质干细胞纯化。

值得注意的是，通过该装置分离出来的骨髓细胞，也可以通过其他纯化方式得到骨髓血干细胞、巨噬细胞等等。本实施方式在此不一一赘述。

此外，将步骤5得到的骨髓间充质干细胞进行表征，具体请见附图5。从附图可得知CD29、CD90阳性，而CD45、CD34阴性，说明了通过本专利取得的原代间充质干细胞纯度高。

为了与冲刷法、组织贴壁法进行比较，用冲刷法、组织贴壁法对细小骨进行处理，并将三种方法处理得到的骨髓间充质干细胞使用40倍倒置显微镜拍摄图片。具体如图6所示，从附图可知，说明了使用本实施方式中的提取装置获得的骨髓间充质干细胞数量更多、且在培养皿中分布更均匀、更便于直接用于后续实验操作。

与现有技术相比，由于在管体内设置过滤组件，这样使用该提取装置分离提取细胞的步骤1～6仅需要10～15分钟，且主要操作为实验室机器运作，同时可以批量进行分离，节省了人力和时间，还可以使细胞与原骨组织分离更充分，提高了骨髓间充质干细胞提取效率。

本实用新型的第二实施方式涉及一种骨髓间充质干细胞的分离提取装置。第二实施方式与第一实施方式大致相同，其主要不同之处在于：在第一实施方式中，支撑条的高度大于固定网的高度。而在第二实施方式中，支撑条的高度等于固定网的高度。

本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本实用新型的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本实用新型的精神和范围。

Claims (6)

1.一种骨髓间充质干细胞的分离提取装置，其特征在于，包括管盖、过滤组件以及一端开口的锥形管体；其中，

所述管盖设于所述管体的开口端，用于闭合或打开所述开口；

所述过滤组件包括支撑圈、与所述支撑圈内壁连接的过滤网、于所述支撑圈的边缘间隔设置若干个支撑条以及固定网；相邻的支撑条之间均固定设置有固定网；所述支撑条与所述固定网构成包围所述过滤网的围栏；

所述管体具有一腔体，所述过滤组件固定于所述腔体内，所述支撑圈与所述腔体内壁抵触，并将所述腔体分割成组织容纳腔和细胞容纳腔。

2.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞的分离提取装置，其特征在于，所述过滤网的滤孔直径为40～200μm。

3.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞的分离提取装置，其特征在于，所述固定网的孔隙直径为1～5mm。

4.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞的分离提取装置，其特征在于，所述支撑条的高度大于所述固定网的高度。

5.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞的分离提取装置，其特征在于，所述支撑条的高度等于所述固定网的高度。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的骨髓间充质干细胞的分离提取装置，其特征在于，所述管盖与所述管体通过螺纹或者卡扣的方式连接。