CN207036859U - 一种胃蛋白酶与pH值双联检测卡 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种胃蛋白酶与pH值双联检测卡,包括检测卡本体;该检测卡本体包括背衬底板,该背衬底板上设置有pH值检测试纸、由玻璃纤维素膜或聚酯膜经缓冲液浸泡后冻干制成的微球结合垫、硝酸纤维素膜和吸水膜;该pH值检测试纸叠压在微球结合垫的一端,该微球结合垫的另一端叠压在硝酸纤维素膜的一端,该吸水膜叠压在硝酸纤维素膜的另一端;该微球结合垫上包被有经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体;该硝酸纤维素膜上设有包被有另一个表位的胃蛋白酶单克隆抗体的检测线和包被有羊抗鼠IgG的质控线。本实用新型能够同时测定胃蛋白酶与pH值,具有非侵入式、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点,对于快速诊断胃食管反流具有重要意义。
Description
技术领域
本实用新型属于胃食管反流诊断技术领域,具体涉及一种胃蛋白酶与pH值双联检测卡。
背景技术
胃食管反流是指胃液等胃内容物反流至食管、咽喉乃至口腔的疾病,常引起烧心、胸痛、咽异物感、咳嗽等症状,并可由于胃液中的胃蛋白酶破坏食管、咽喉、气道黏膜,损害细胞间或细胞膜上的蛋白,引起一系列并发症,是常见的消化科疾病之一。侵入式24小时食管pH值动态监测为以往国内外较公认的诊断胃食管反流病的诊断方法,但该方法侵入性大,患者较为痛苦,接受度差。近年来也逐渐认为唾液中的胃蛋白酶检测对胃食管反流有一定的诊断价值,但ELISA等胃蛋白酶检测方法操作繁琐,检测时间长,而且单纯使用胃蛋白酶也无法进行准确诊断,需要结合pH值检测的结果。而由于胃食管反流患者中唾液一般呈现pH值<4的酸性,不利于基于抗原抗体反应的胃蛋白酶检测,因此现有技术中胃蛋白酶和pH值检测无法同时进行,均是分开检测。因此,建立一种能够快速同时检测胃蛋白酶和pH值的检测手段对于诊断胃食管反流具有非常重要的意义。
实用新型内容
本实用新型的目的在于克服现有技术的不足之处,提供了一种胃蛋白酶与pH值双联检测卡,能够同时测定胃蛋白酶与pH值,具有非侵入式、灵敏度高、特异性强、稳定性好和无放射性污染等特点,对于快速诊断胃食管反流具有重要意义,也可广泛应用于胃蛋白酶的临床免疫检验和科学研究中。
本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种胃蛋白酶与pH值双联检测卡,包括检测卡本体;该检测卡本体包括背衬底板,该背衬底板上设置有pH值检测试纸、由玻璃纤维素膜或聚酯膜经缓冲液浸泡后冻干制成的微球结合垫、硝酸纤维素膜和吸水膜;该pH值检测试纸叠压在微球结合垫的一端,该微球结合垫的另一端叠压在硝酸纤维素膜的一端,该吸水膜叠压在硝酸纤维素膜的另一端;该微球结合垫上包被有经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体;该硝酸纤维素膜上设有包被有另一个表位的胃蛋白酶单克隆抗体的检测线和包被有羊抗鼠IgG的质控线。
一实施例中:所述经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体位于微球结合垫上靠近硝酸纤维素膜的一侧。
一实施例中:所述背衬底板上还设有用于判读pH值检测试纸的比色卡。
一实施例中:所述镧系元素为铕,铽,钐或镝中的一种。
一实施例中:所述pH值检测试纸下还加衬有玻璃纤维素膜,pH值检测试纸覆盖于该玻璃纤维素膜上,该通玻璃纤维素膜叠压在微球结合垫的一端。
一实施例中:还包括壳体,所述检测卡本体设在壳体内;该壳体在对应pH值检测试纸处开设有加样孔,该壳体在对应检测线和质控线处开设有观察窗。
一实施例中:还包括壳体,所述检测卡本体设在壳体内;该壳体在对应pH值检测试纸处开设有加样孔,该壳体在对应检测线和质控线处开设有观察窗;该壳体在对应该比色卡处开设有比色窗。
本技术方案与背景技术相比,它具有如下优点:
1.本实用新型能够实现胃蛋白酶与pH值的非侵入式双联检测,同时提供两种指标供参考,可以大大提高临床诊断胃食管反流的可信度。
2.本实用新型采用pH试纸作为样品垫,加样后可以即刻显示样本的酸碱性,随后样本在层析过程中接触到缓冲液被稀释,中和了样本的酸性,解决了酸性反应环境不利于胃蛋白酶检测的问题,保证了后续利用双抗夹心法检测胃蛋白酶的准确性,实现了胃蛋白酶与pH值的双联检测。
3.本实用新型采用镧系元素荧光微球作为示踪物,镧系元素激发光与发射光之间的Stokes位移较大,避免了激发及发射光谱存在的重叠问题,排除激发光的干扰,通过波长分辨方式使其明显的区别于背景荧光;且镧系元素激发光光谱较宽,可采用只允许发射荧光通过的滤光片,从而进一步将抢特异性荧光和背景荧光区分开,消除干扰;荧光衰变时间长,为传统荧光的103~106倍,通过测定时间差可以实现高信噪比;同时其可以反复接受激发,从而大大提高仪器探测到的信号值,有效排除样品自然荧光的干扰,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好且无放射性污染的特点,对于快速诊断胃食管反流具有重要意义,也可广泛应用于胃蛋白酶的临床免疫检验和科学研究中。
附图说明
下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步说明。
图1为本实用新型的检测卡本体结构示意图。
图2为本实用新型的胃蛋白酶与pH值双联检测卡外观示意图。
附图标记:
检测卡本体10;背衬底板11;pH值检测试纸12;比色卡13;微球结合垫14,经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体141;硝酸纤维素膜15,检测线151,质控线152;吸水膜16;
壳体20;加样孔21;比色窗22;观察窗23。
具体实施方式
下面通过实施例具体说明本实用新型的内容:
在本实用新型的描述中,需要理解的是,术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“横”、“竖”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系是基于附图中的立体图所示的方位或位置关系,仅是为了便于描述本实用新型和简化描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本实用新型的限制。
请查阅图1和图2,一种胃蛋白酶与pH值双联检测卡,包括壳体20和设在壳体20内的检测卡本体10;该检测卡本体10包括背衬底板11,该背衬底板11上设置有pH值检测试纸12、比色卡13、微球结合垫14、硝酸纤维素膜15和吸水膜16;该比色卡13设在该pH值检测试纸12旁,该pH值检测试纸12叠压在微球结合垫14的一端,该微球结合垫14的另一端叠压在硝酸纤维素膜15的一端,该吸水膜16叠压在硝酸纤维素膜15的另一端;该微球结合垫14由玻璃纤维素膜或聚酯膜经缓冲液浸泡后冻干制成,其上包被有经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体141;该硝酸纤维素膜15上设有检测线(T线)151和质控线(C线)152,该检测线151包被有另一个表位的胃蛋白酶单克隆抗体,该质控线152包被有羊抗鼠IgG。
所述壳体20在对应pH值检测试纸12处开设有加样孔21,在对应比色卡13处开设有比色窗22,在对应检测线151和质控线152处开设有观察窗23。
本实用新型现场使用方式如下:
将唾液样本(可先用0.7%NaCl的生理盐水作为样品稀释液进行稀释后再加样)由加样孔21处滴加到pH值检测试纸12上,pH值检测试纸12根据唾液酸碱程度变色,检测样品pH值;然后样本在毛细作用下层析到微球结合垫14,与其上冻干的缓冲液接触,被缓冲液稀释并中和酸性,然后样本中的胃蛋白酶与微球结合垫14上的经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体141结合形成抗原-标记抗体复合物,随后继续沿硝酸纤维素膜15层析至检测线151与质控线152,抗原-标记抗体复合物分别与检测线151上另一个表位的胃蛋白酶单克隆抗体和质控线152上的羊抗鼠IgG抗体结合形成抗体-抗原-标记抗体复合物;最后被吸水垫吸附。
将pH值检测试纸12的颜色与旁边的比色卡13对比即可判读样本pH值;利用荧光分析仪激发镧系标记元素,显现荧光,结合的标记抗体越多,荧光强度越高,从而进行胃蛋白酶的定量检测,实现pH值与胃蛋白酶的双联检测。
由于本实用新型使用镧系标记元素即时间分辨的荧光进行示踪,因此整个反应中pH试纸带来的颜色均不会对免疫检测的信号产生影响,可实现唾液pH值和胃蛋白酶的定量检测。
优选的,所述经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体141位于微球结合垫14靠近硝酸纤维素膜15的一侧,即微球结合垫14上靠近pH值检测试纸的一侧没有标记的胃蛋白酶单克隆抗体141。这样,当样本从pH值检测试纸12层析至微球结合垫14后,会先与微球结合垫14上的缓冲液接触并被稀释和中和酸性,然后再层析至与标记抗体141结合形成抗原-标记抗体复合物。这样能够保证抗原抗体反应在合适的pH值条件下进行,避免酸性样本对结果造成的影响。
进一步的,pH值检测试纸12下还可加衬有一层普通玻璃纤维素膜,pH值检测试纸12覆盖于该普通玻璃纤维素膜上,该普通玻璃纤维素膜叠压在微球结合垫14的一端。
本实用新型可按照以下方法制备后,按照常规技术组装得到:
微球结合垫的制备:
将胃蛋白酶单克隆抗体偶联至荧光微球,用缓冲液将已标记了胃蛋白酶单克隆抗体的荧光微球进行重悬稀释,再通过biodot公司划膜仪将稀释好的微球包被至玻璃纤维素膜(或聚酯膜),制备得到微球结合垫;缓冲液在层析过程中作为样品的缓冲成分,需将样本的pH值缓冲至适合抗原抗体反应的pH值。缓冲液成分:0.2M TB(pH 7.6)、2%BSA、0.1%T-20、15%蔗糖、0.1%NaN3;
硝酸纤维素膜上检测线和质控线的制备:
将另一个表位的胃蛋白酶单克隆抗体按1mg/ml的浓度包被至硝酸纤维素膜的T线位置,同时将羊抗鼠IgG多克隆抗体按1mg/ml浓度包被至硝酸纤维素膜C线位置,充分干燥后备用。
以上所述,仅为本实用新型较佳实施例而已,故不能依此限定本实用新型实施的范围,即依本实用新型专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰,皆应仍属本实用新型涵盖的范围内。
Claims (7)
1.一种胃蛋白酶与pH值双联检测卡,包括检测卡本体;其特征在于:该检测卡本体包括背衬底板,该背衬底板上设置有pH值检测试纸、由玻璃纤维素膜或聚酯膜经缓冲液浸泡后冻干制成的微球结合垫、硝酸纤维素膜和吸水膜;该pH值检测试纸叠压在微球结合垫的一端,该微球结合垫的另一端叠压在硝酸纤维素膜的一端,该吸水膜叠压在硝酸纤维素膜的另一端;该微球结合垫上包被有经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体;该硝酸纤维素膜上设有包被有另一个表位的胃蛋白酶单克隆抗体的检测线和包被有羊抗鼠IgG的质控线。
2.根据权利要求1所述的胃蛋白酶与pH值双联检测卡,其特征在于:所述经镧系元素荧光微球标记的胃蛋白酶单克隆抗体位于微球结合垫上靠近硝酸纤维素膜的一侧。
3.根据权利要求1所述的胃蛋白酶与pH值双联检测卡,其特征在于:所述背衬底板上还设有用于判读pH值检测试纸的比色卡。
4.根据权利要求1所述的胃蛋白酶与pH值双联检测卡,其特征在于:所述镧系元素为铕,铽,钐或镝中的一种。
5.根据权利要求1所述的胃蛋白酶与pH值双联检测卡,其特征在于:所述pH值检测试纸下还加衬有玻璃纤维素膜,pH值检测试纸覆盖于该玻璃纤维素膜上,该玻璃纤维素膜叠压在微球结合垫的一端。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的胃蛋白酶与pH值双联检测卡,其特征在于:还包括壳体,所述检测卡本体设在壳体内;该壳体在对应pH值检测试纸处开设有加样孔,该壳体在对应检测线和质控线处开设有观察窗。
7.根据权利要求3所述的胃蛋白酶与pH值双联检测卡,其特征在于:还包括壳体,所述检测卡本体设在壳体内;该壳体在对应pH值检测试纸处开设有加样孔,该壳体在对应检测线和质控线处开设有观察窗;该壳体在对应该比色卡处开设有比色窗。
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CN111067492A (zh) * | 2020-01-15 | 2020-04-28 | 河北医科大学第二医院 | 一种胃食管气体反流检测装置 |
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