CN203144405U - 一种用于肺癌药敏检测的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供一种用于肺癌药敏检测的试剂盒，由盒体、药敏测试件、标示卡和说明书组成，其特征在于所述的药敏测试件包括肺癌药物药膜、空白药膜和细胞培养板，其中，肺癌药物药膜和空白药膜与细胞培养板按设定化疗方案预装形成预装培养板，或者肺癌药物药膜和空白药膜分别以独立包装和细胞培养板组成了可调式的套装培养板。本实用新型在进行肺癌抗肿瘤药敏检测中，不仅提高肿瘤药敏测试的操作效率，使操作简便，而且大大提高了药敏测试的准确性，大大减少测试药物用量，节约用药成本，提高药敏测试的经济性，特别是也适用于联合化疗的药敏检测。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种抗肿瘤药敏测试的装置，具体地说，涉及一种用于肺癌药敏检测的试剂盒。
背景技术
恶性肿瘤是严重危害人类生命和健康的常见病和多发病，是导致残疾和早死的主要疾病之一，在35～59岁年龄组中，恶性肿瘤居死因第一位。资料显示，我国恶性肿瘤年发病例数为200万，死亡约150万，并以3％的速度递增且呈年轻化趋势，居各类疾病中死亡率之最。
目前世界对恶性肿瘤的主要治疗手段包括手术、放疗、化疗、内分泌治疗及生物免疫治疗等。在恶性肿瘤治疗的诸多手段中，化疗作为一种全身性的治疗方法，较之其他方法有可能最大程度地杀灭患者体内的肿瘤细胞，因此，化疗在恶性肿瘤治疗中占有非常重要的地位。随着医学的发展，化疗已经不再是单纯起姑息性治疗作用的手段，正在从姑息向根治过渡。
1998年，世界卫生组织提出，使用适当，化疗在部分肿瘤(恶性滋养细胞肿瘤、急性淋巴细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、睾丸癌、急性粒细胞白血病、胚胎性横纹肌肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌和卵巢癌等)中已成为可以治愈肿瘤的根治性治疗手段。经辅助化疗后可能治愈的肿瘤有乳腺癌、成骨肉瘤、大肠癌、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、软组织肉瘤及肾母细胞瘤等。
尽管化疗在恶性肿瘤的治疗中占有非常重要的地位，但是在临床实践中，结果往往不尽如人意。其中，肿瘤细胞对化疗药物产生耐药是导致肿瘤化疗失败的常见因素，也是困扰肿瘤治疗的关键性难题。耐药问题是极为普遍的临床问题，据美国癌症协会估计，90％以上因肿瘤死亡的患者在不同程度上受到耐药影响。
肿瘤细胞耐药分为原发性和获得性耐药两大类。目前临床上通常的做法是，根据国际肿瘤临床试验的循证研究结果，得知不同的化疗药物对不同肿瘤的治疗敏感性不同，即每一种肿瘤有相应有效的化疗药物敏感谱，从而选择疗效最高的化疗单药或多种药物组成的联合方案进行治疗。但在临床上经常碰到这样的情况，经循证研究公认为对某种肿瘤有效的治疗方案，而对有的患者却毫无效果。如阿霉素对浸润性乳腺癌是一种具有里程碑意义的治疗药物，但仍有50％的浸润性乳腺癌病人对这种药不敏感。又如健择，对非小细胞肺癌公认的疗效明显，但也有60％以上的病人疗效并不明显。
肿瘤对各种化疗药物存在着明显的个体差异。即不同的肿瘤类型或同一类型的不同病人，甚至同一病人在不同的发病阶段，对化疗的敏感性并不完全相同，治疗效果差别也很大。至今还没有一种化疗药物或几种化疗药物的联合应用，能对某一种肿瘤100％有效。临床上，用同一种化疗药物或同一种化疗方案治疗不同的肿瘤患者，显然带有一定的盲目性。因此，在化疗前针对不同的患者进行肿瘤药敏试验来选择有效化疗药物进行化疗显得十分必要。为此，建立一种像细菌敏感试验一样，通过相对可靠的敏感试验方法，对不同的病人准确筛选敏感的化疗药物，并确定其剂量，真正实现临床的个体化用药。
目前肿瘤药敏试验操作所需的药物以临用现配为主，肿瘤药敏试验需要测试多种抗肿瘤药物，药液配制稀释繁琐，且肿瘤药敏试验所需抗肿瘤药物剂量小，取样不便。部分药物溶液状态下保存时间短，剩余部分只能报废，造成药物的浪费，尤其是价格昂贵的药物。
CN93111551.5公开了肿瘤化疗药物敏感预测试剂配制方法及试剂盒，该专利将8种常用抗肿瘤药物按设定剂量预装于标本瓶内。但该方法不便于联合化疗方案的测试，且不便于方案的剂量调整。
CN03102260.X采用预制药敏检测板的方法，将抗肿瘤药物按计算剂量加入检测板内，冻干、包装，用于肿瘤药敏试验。该方法同样不便于联合化疗方案的测试，且不便于方案的剂量调整。
临床目前有少量采用抗肿瘤药物临时配制的方法进行抗肿瘤药物药敏测试，但是，该方法存在许多问题：配制药物的准确浓度未知，所配制药液的准确性存疑；临床口服抗肿瘤药物的抗肿瘤药物药敏测试无法进行；个体操作误差大。
为了便于肿瘤药敏试验的操作以及节约成本，我们将各种常用的肺癌抗肿瘤药物制备成剂量准确、稳定性好、能够在肿瘤细胞培养液中快速溶解的无菌药膜，并将药膜按使用剂量进行准确的切片，分装。
实用新型内容
本实用新型涉及一种抗肿瘤药敏测试的装置，具体地说，涉及一种用于肺癌药敏测试的试剂盒。
本实用新型技术方案如下：
一种肺癌药敏检测的试剂盒，由盒体、药敏测试件、标示卡和说明书组成，药敏测试件、标示卡和说明书置于盒内，其特征在于所述的药敏测试件包括肺癌药物药膜、空白药膜和细胞培养板。
上述所述的试剂盒，其特征在于所述的药敏测试件还包括药物活化酶包装。
上述所述的试剂盒，其特征在于所述的药敏测试件中，肺癌药物药膜和空白药膜与细胞培养板按设定化疗方案预装形成预装培养板。
上述所述的试剂盒，其特征在于所述的药敏测试件中，肺癌药物药膜和空白药膜分别以独立包装和细胞培养板组成了可调式的套装培养板。
上述所述的试剂盒，其特征在于所述的肺癌药物药膜选自多西他赛药膜、紫杉醇药膜、培美曲塞药膜、吉西他滨药膜、拓扑替康药膜、长春瑞滨药膜、顺铂药膜、卡铂药膜、依托泊苷药膜、阿霉素药膜、环磷酰胺药膜、长春新碱药膜或伊立替康药膜中一种或者两种以上。
上述所述的试剂盒，其特征在于所述的细胞培养板为24孔细胞培养板。
作为优选，上述所述的试剂盒，其特征在于所述的预装培养板是非小细胞肺癌药敏检测板，其为预装24孔培养板，孔预装药膜如下：
2个孔中无药膜
2个孔中预装空白药膜
2个孔中预装紫杉醇药膜
2个孔中预装多西他赛药膜
2个孔中预装紫杉醇药膜和卡铂药膜
2个孔中预装紫杉醇药膜和顺铂药膜
2个孔中预装多西他赛药膜和卡铂药膜
2个孔中预装多西他赛药膜和顺铂药膜
2个孔中预装长春瑞滨药膜和卡铂药膜
2个孔中预装长春瑞滨药膜和顺铂药膜
2个孔中预装吉西他滨药膜和卡铂药膜
2个孔中预装吉西他滨药膜和顺铂药膜。
优选地，上述所述的试剂盒，其特征在于所述的预装培养板是小细胞肺癌药敏检测板，其为预装24孔培养板，孔预装药膜如下：
2个孔中无药膜
2个孔中预装空白药膜
2个孔中预装紫杉醇药膜
2个孔中预装依托泊苷药膜
2个孔中预装拓扑替康药膜
2个孔中预装依托泊苷药膜和顺铂药膜
2个孔中预装依托泊苷药膜和卡铂药膜
2个孔中预装伊立替康药膜和顺铂药膜
2个孔中预装伊立替康药膜和卡铂药膜
2个孔中预装环磷酰胺药膜、阿霉素药膜和长春新碱药膜
2个孔中预装环磷酰胺药膜、阿霉素药膜和依托泊苷药膜
2个孔中预装卡铂药膜、紫杉醇药膜和依托泊苷药膜。
本实用新型是一种用于肺癌抗肿瘤药敏测试的试剂盒，试剂盒中药敏测试件包装形式为将肺癌药物药膜与24孔细胞培养板按设定化疗方案预装的预装培养板和独立的药膜包装与空白24孔细胞培养板组合的可调式套装两种。
每个可调式套装中含有一个肺癌常用的抗肿瘤药物药膜包装盒、一个细胞培养板。药膜包装上有每一种药膜的代号，每个细胞培养板附带一张标示卡，用于标记各孔内的药物成分。
各种抗肿瘤药膜和空白药膜均分别置于独立的无菌有盖小塑料盒内，再将小塑料盒按顺序装入大塑料盒内。各种药物活化酶均分别置于独立的无菌有盖小塑料盒内，再将小塑料盒按顺序装入大塑料盒内。
药膜包装内有空白药膜和肺癌药物药膜，肺癌药物药膜包括但不限于多西他赛药膜、紫杉醇药膜、培美曲塞药膜、吉西他滨药膜、拓扑替康药膜、长春瑞滨药膜、顺铂药膜、卡铂药膜、依托泊苷药膜、阿霉素药膜、环磷酰胺药膜、长春新碱药膜、伊立替康药膜。
细胞培养板为24孔细胞培养板，标示卡为24格，用于标记各孔内的药物成分。
使用时，将空白对照、空白药膜对照和各种化疗方案分别标记于标示卡上，按标示卡内容向细胞培养板内添加药膜，加入肿瘤细胞悬液，振荡使药膜溶解混匀。
预装培养板包括非小细胞肺癌药敏检测板和小细胞肺癌药敏检测板，预装24孔培养板配置10个化疗方案、1个空白药膜方案、1个空白方案，每个方案2个复孔。
预装培养板所设定的化疗方案参考最新的诊疗指南的标准化疗方案制订。按设定方案将药膜装入培养板各孔中。
本实用新型中所述的药物药膜，通常地，药物药膜按重量百分比含0.0001％～30％抗肿瘤药物、50％～98％成膜材料和1％～20％增塑剂。其中，所述的成膜材料包括但不限于聚乙烯醇、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯胺类、聚乙烯氨基缩醛衍生物、聚乙烯吡啶衍生物、明胶、阿拉伯胶、虫胶、琼脂、海藻酸及其盐、玉米朊、淀粉、糊精、白芨胶等。优选使用聚乙烯醇04-88和聚乙烯醇05-88。所述的增塑剂选自甘油、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、山梨醇、柠檬酸三乙酯等。
本实用新型中所述的药物药膜，可以用本领域中常规方法制备，例如可以按如下方法制得肺癌药物药膜：
(1)将成膜材料加入水中，搅拌溶解或加热溶解；
(2)加入增塑剂和抗肿瘤药物，搅拌溶解均匀，采用加热、静置或超声等方式脱气；
(3)将上述溶液涂布于制膜设备，采用热风或冷风等方式干燥；
(4)脱膜，测定含量，并按照测定结果进行分剂量分割；
(5)将分割后的药膜采用放射线照射灭菌或环氧乙烷灭菌，优选放射线照射灭菌。
各种肿瘤化疗药物药膜参考药物在人体内的血浆峰值浓度制备，根据药膜含量测定结果，将每片药膜切割为含1ml血浆峰值浓度的化疗药物，空白药膜切割面积1cm2。
为了便于肿瘤药敏测试的操作，药膜需要能快速溶解于肿瘤细胞培养液中。因此成膜材料要易于溶解，膜的厚度和面积要控制在合适的范围，保证溶解速度和机械强度。厚度优选0.04mm～0.15mm。形状可为圆形、正方形或长方形，面积优选为0.5cm2～16cm2，以适应相应规格的细胞培养板。本发明1cm2大小的膜剂可在1ml培养液中于100秒内溶解。
所述的空白药膜，是指不含肺癌药物的药膜，可以按照上述肺癌药物药膜方法进行制备，但不加入肺癌药物。
本实用新型在进行肺癌药敏测试中，不仅提高肿瘤药敏测试的操作效率，使操作简便，剂量准确，而且大大提高了药敏测试的准确性，大大减少测试药物用量，节约用药成本，提高药敏测试的经济性，尤其是，本实用新型也特别适用于联合化疗的药敏测试。
附图说明
图1：实施例1试剂盒中非小细胞肺癌药敏检测预装24孔培养板俯视图；
图2：实施例1试剂盒中非小细胞肺癌药敏检测预装24孔培养板平视图；
图3：实施例1试剂盒中标示卡。
其中：
图1、2中，A-D为培养板的孔行号，1-6为培养板的孔列号，孔对应的行号和列号的组合即为孔的编号，例如：A6孔表示培养板的第A行第6列的孔。
图3中，标示卡中每格编号，对应于培养板的孔编号。
培养板各孔中，预装药膜如下：
A1-A2空白(无药膜，空白对照)
A3-A4空白药膜(药膜不含药物，空白药膜对照)
A5-A6紫杉醇药膜
B1-B2多西他赛药膜
B3-B4紫杉醇药膜和卡铂药膜
B5-B6紫杉醇药膜和顺铂药膜
C1-C2多西他赛药膜和卡铂药膜
C3-C4多西他赛药膜和顺铂药膜
C5-C6长春瑞滨药膜和卡铂药膜
D1-D2长春瑞滨药膜和顺铂药膜
D3-D4吉西他滨药膜和卡铂药膜
D5-D6吉西他滨药膜和顺铂药膜。
具体实施方式
实施例1：非小细胞肺癌药物药敏检测试剂盒
本实用新型试剂盒，由盒体、非小细胞肺癌药敏检测预装24孔培养板(图1、2)、标示卡(图3)和说明书组成。非小细胞肺癌药敏测试预装24孔培养板、标示卡和说明书置于盒中。说明书是解释和介绍试剂盒，便于使用者正确使用本试剂盒。
于化疗前取1例患者的非小细胞肺癌新鲜组织块(0.5～1cm3)，置于无菌生理盐水中(含20万单位/ml青霉素、25万单位/ml链霉素)，在超净工作台上，剪除脂肪、纤维等正常组织，以及坏死和血污组织，用带抗生素的生理盐水冲洗干净组织，加入组织消化酶(胰酶、胶原酶)消化2～3h，使组织块成为单个细胞漏过铜网，离心弃上清，加RPMI1640培养液吹打成细胞悬液，计数并调整细胞浓度至1×106/ml。
将细胞悬液种于非小细胞肺癌预装24孔培养板(图1或2)中(1ml/孔)，振荡使药膜溶解混匀，并在标示卡(图3)上记录。37℃、5％二氧化碳饱和湿度培养24小时。离心收集悬浮细胞，微量离心机转速2000RPM，离心时间5min，弃培养基。用冷PBS洗涤细胞两次(2000RPM，离心时间5min收集细胞)。用400μl1X Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1×106/ml。在细胞悬浮液中加入5μlAnnexin V-FITC，轻轻混匀后于2-8℃避光条件下孵育15分钟。加入10μl PI后轻轻混匀于2-8℃避光条件下孵育5分钟。在1小时内用流式细胞仪检测对照组及药物组细胞凋亡及坏死的数量，计算药物的抑制率，评估药物的敏感度。
肺癌药物对非小细胞肺癌药敏检测结果如下表1所示：
表1供筛选化疗方案的抑制率
| 药物 | 抑制率(％) |
| 紫杉醇药膜 | 35 |
| 多西他赛药膜 | 42 |
| 紫杉醇药膜+卡铂药膜 | 84 |
| 紫杉醇药膜+顺铂药膜 | 79 |
| 多西他赛药膜+卡铂药膜 | 91 |
| 多西他赛药膜+顺铂药膜 | 80 |
| 长春瑞滨药膜+卡铂药膜 | 76 |
| 长春瑞滨药膜+顺铂药膜 | 82 |
| 吉西他滨药膜+卡铂药膜 | 70 |
| 吉西他滨药膜+顺铂药膜 | 76 |
(抑制率＝〔(空白药膜对照组活细胞-实验组活细胞)/空白药膜对照组活细胞〕×100％)。
Claims (8)
1.一种用于肺癌药敏检测的试剂盒，由盒体、药敏测试件、标示卡和说明书组成，药敏测试件、标示卡和说明书置于盒内，其特征在于所述的药敏测试件包括肺癌药物药膜、空白药膜和细胞培养板。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，如果需要，所述的药敏测试件还可包括药物活化酶包装。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的药敏测试件中，肺癌药物药膜和空白药膜与细胞培养板按设定化疗方案预装形成预装培养板。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的药敏测试件中，肺癌药物药膜和空白药膜分别以独立包装和细胞培养板组成了可调式的套装培养板。
5.根据权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的肺癌药物药膜选自多西他赛药膜、紫杉醇药膜、培美曲塞药膜、吉西他滨药膜、拓扑替康药膜、长春瑞滨药膜、顺铂药膜、卡铂药膜、依托泊苷药膜、阿霉素药膜、环磷酰胺药膜、长春新碱药膜或伊立替康药膜中一种或者两种以上。
6.根据权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其特征在于所述的细胞培养板为24孔细胞培养板。
7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述的预装培养板是非小细胞肺癌药敏检测板，其为预装24孔培养板，孔预装药膜如下：
2个孔中无药膜
2个孔中预装空白药膜
2个孔中预装紫杉醇药膜
2个孔中预装多西他赛药膜
2个孔中预装紫杉醇药膜和卡铂药膜
2个孔中预装紫杉醇药膜和顺铂药膜
2个孔中预装多西他赛药膜和卡铂药膜
2个孔中预装多西他赛药膜和顺铂药膜
2个孔中预装长春瑞滨药膜和卡铂药膜
2个孔中预装长春瑞滨药膜和顺铂药膜
2个孔中预装吉西他滨药膜和卡铂药膜
2个孔中预装吉西他滨药膜和顺铂药膜。
8.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述的预装培养板是小细胞肺癌药敏检测板，其为预装24孔培养板，孔预装药膜如下：
2个孔中无药膜
2个孔中预装空白药膜
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2个孔中预装环磷酰胺药膜、阿霉素药膜和依托泊苷药膜
2个孔中预装卡铂药膜、紫杉醇药膜和依托泊苷药膜。
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