CN1995328A - 嗜硒zm短杆菌及其在生物红硒制备方面的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种嗜硒ZM短杆菌及其在制备生物红硒方面的应用，该嗜硒ZM短杆菌保藏名称为：生孢噬纤维细菌(Sporocytophagasp.)，保藏日期：2006年04月21日，保藏号：CGMCC1694。上述短杆菌在制备生物红硒时，可采用下列步骤：(A)菌液制备：将嗜硒ZM菌接种于培养基中，备用。(B)生物红硒的制备：按下列顺序依次进行：1)于培养基中，分别加入上述菌液、亚硒酸钠溶液进行培养，发酵液由浅黄色变为红色，显微镜下可见红色ZM菌滑动；2)经浓缩处理可得到红色菌硒。本发明所得目标产物无毒，具有很高药理活性，能治疗多种疾病。它必将有效地参与癌症，艾滋病等重大疾患的攻克，并发挥其巨大威力。
Description
技术领域
本发明属生物制药领域，特别涉及一种嗜硒ZM短杆菌及其在生物红硒制备方面的应用。
背景技术
硒元素是瑞典化学家Bezeliu1817年发现并予以命名。1957年Schwarz和Foltz首先证明硒是动物和人体必需微量元素。80年代我国医学家最早应用补硒防治克山病，大骨节病取得举世瞩目的成果。大量的工作证实硒具有广泛生物学作用，缺硒会引起一系列疾病：癌症、艾滋病、心血管疾病、肝脏和胰脏疾病、高血压、糖尿病、贫血、克山病等。
硒所呈现出的一系列生化效应与其浓度密切相关，在硒的抗癌作用中需要较高浓度，硒化物毒性使得有效作用浓度范围极窄。从而使硒的利用受到较大局限，致力开发高效、低毒的硒源是研究的一个课题。
发明内容
本发明旨在提供一种嗜硒ZM短杆菌，并利用其制备生物红硒的工艺路线，所得目标产物具有很高药理活性，又不具有硒的毒性，能治疗多种疾病，安全有效。
本发明的目的是这样实现的：嗜硒ZM短杆菌保藏名称为：生孢噬纤维细菌(Sporocytophaga sp.)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2006年04月21日，保藏号：CGMCC1694。
本发明所述嗜硒ZM短杆菌，菌体长1～2μm，运动方式滑动，菌落平薄有光泽，边缘不整齐，半透明，格兰氏染色阴性，对抗菌素敏感性差别很大。
针对上述嗜硒ZM短杆菌，本发明还提供了一种其在生物红硒制备方面的应用，具体步骤可按如下顺序依次进行：
(A)菌液制备：
将嗜硒ZM短杆菌接种于1.5％蛋白胨液体培养基中，于37℃培养24小时，备用；
(B)生物红硒的制备：
按下列顺序依次进行：
1)于1～5％蛋白胨液体培养基50ml～1000ml中，分别加入上述菌液、4～5％的亚硒酸钠溶液1ml～10ml，在24℃～40℃环境下培养，发酵液由浅黄色变为红色，显微镜下可见红色ZM菌滑动；
2)经浓缩处理可得到以Na2SeO35H2O计20～50mg/ml的红色菌硒。
作为一种优选方案，本发明所述A项菌液制备中蛋白胨液体培养基中含有：0.1％磷酸氢二钾K2HPO4 3H2O。
生物硒作为主药用于抗癌的剂量，具有很高的药理活性，而不具有硒的毒性。该药在配以某些生命成分调整多种酶活性，改变肌体内环境，用生物化学或植物化学方法制成复方制剂，口服给药，用于多种癌症治疗，并将在预防及保健事业发挥重要作用。该药可显著提高肌体免疫力，增强食欲，改善睡眠，增强体力，调节精神，消除抑郁，提高生活质量。对癌细胞作用：逆转为正常细胞，阻断复发转移，加速其凋亡。
美国科学院FNB提出成人硒的需要量为50～200μg/d，硒摄入量超过0.1.～0.2mg/kg/d始有中毒现象。硒抗癌作用需要较高硒浓度，才能充分发挥疗效。市售硒制剂用于癌症预防和治疗剂量(以Se计)：
硒酵母片 200μg/d，900～1200μg/d(0.9～1.2mg/d)
硒卡拉胶 4000μg/d(4mg/d)
生物红硒 2000～2500μg/d(2～2.5mg/d)
为此通过自然选择得到嗜硒ZM菌用以制造生物红硒，时间证明安全有效。以生物红硒作为主药之一的复方抗癌制剂，硒用量2～3mg/d，未见有毒副作用、不良反应。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述，但本发明的保护范围不仅限于下列表述。
图1为本发明生物红硒红外光谱图。
具体实施方式
在哺乳动物体内硒功能主要是通过各种硒酶和硒蛋白(Selenoproteins)实现。体内的硒主要以硒代半胱氨酸(Se-Cys)与蛋白组成。金属硫蛋白的排列CYS-X-CYS，半胱氨酸-其他氨基酸-半胱氨酸，令人惊奇的是半胱氨酸的位置以及近旁的丝氨酸和碱性氨基酸位置，从微生物到人的进化过程中全无改变的保存了下来。这种相似性提示：由微生物产出菌硒的生物利用度和安全性，要优于其他人工合成的硒化合物。
通过大量自然选择及纯培养，分离得到可以利用化学能的ZM短杆菌，对硒元素具有特殊选择吸收、利用能力，称为嗜硒的ZM短杆菌。对硒承受力为耐受硒量较大的酵母菌的两千倍以上。
嗜硒的ZM短杆菌，菌体长1～2μm，运动方式滑动，菌落平薄有光泽，边缘不整齐，半透明，格兰氏染色阴性，对抗菌素敏感性差别很大，无抑菌作用，能分解琼脂及利用纤维素。吸收硒后菌体变红、缩小。
实施例1
一种嗜硒ZM短杆菌，该嗜硒ZM短杆菌为噬纤维菌属(Cytophaga)的短杆菌，保藏菌名称为：生孢噬纤维细菌(Sporocytophaga sp.)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2006年04月21日，保藏号：CGMCC1694。所述嗜硒ZM短杆菌，菌体长1～2μm，运动方式滑动，菌落平薄有光泽，边缘不整齐，半透明，格兰氏染色阴性，对抗菌素敏感性差别很大。
利用载体携带目的基因，靶向高效表达是基因治疗成功的关键。筛选出对人体无毒副作用、与硒具有高度亲和力，能利用化学能的菌种作为载体，硒结合到菌体上形成硒蛋白，并在靶器官肿瘤细胞表达，实现对肿瘤组织的特异性杀伤。
本发明经大量筛选工作，得到嗜硒ZM短杆菌，菌体无色，菌体长1～2μm，宽0.4～0.6μm，运动方式灵活，菌落平薄有光泽，边缘不整齐，耐干燥，对抗菌素敏感性差别很大，无抑菌作用。
上述的嗜硒ZM短杆菌在生物红硒制备方面的应用，可按如下顺序依次进行：
(A)菌液制备：
将嗜硒ZM菌接种于1.5％蛋白胨液体培养基中，于37℃培养24小时，备用。
(B)硒的制备：
按下列顺序依次进行：
1)于1％蛋白胨液体培养基50ml中，分别加入上述菌液、4％的亚硒酸钠溶液1ml，在24℃环境下培养，发酵液由浅黄色变为红色，显微镜下可见红色ZM菌滑动；
2)经浓缩处理可得到20mg/ml(以Na2SeO3 5H2O计)的红色菌硒。每个菌体都像一个盛硒的袋子，内里装着红色生物硒，为此也称为生物红硒，产量极高，十分罕见。
嗜硒ZM菌可在硒浓度为2％～4％的培养基中繁殖发酵，由于发酵液浓度高，一般微生物无法生存，因此制备过程中不会染杂菌。
上述A项菌液制备中蛋白胨液体培养基中含有：0.1％磷酸氢二钾K2HPO4 3H2O。
实施例2
如实施例1所述嗜硒ZM短杆菌在生物红硒制备方面的应用，可按如下顺序依次进行：
(A)菌液制备：
将嗜硒ZM菌接种于1.5％蛋白胨液体培养基中，于37℃培养24小时，备用。
(B)生物红硒的制备：
按下列顺序依次进行：
1)于1～2％蛋白胨液体培养基1000ml中，分别加入上述菌液、5％的亚硒酸钠溶液10ml，在40℃环境下培养，发酵液由浅黄色变为红色，显微镜下可见红色ZM菌滑动；
2)经浓缩处理可得到50mg/ml(以Na2SeO3 5H2O计)的红色菌硒。
上述A项菌液制备中蛋白胨液体培养基中含有：0.1％磷酸氢二钾K2HPO4 3H2O。
以生物硒作为主药制成的复方制剂(长寿饮)治疗肿瘤的疗效：
1)单独使用：手术患者(包括淋巴转移1/2)，如及时给药(手术后一、二月内)可阻断转移、复发，可达痊愈(五年以上生存)。无手术机会晚期患者，用药2～3月，可见肿瘤不同程度稳定、缩小、消失。带瘤生存或部分治愈(三年以上生存者不鲜见)。
2)联合用药：与放化疗联合使用，可减轻对骨髓粒系的毒性反应，肾毒性，胃肠反应等，增加肌体对放化疗的耐受性，提高疗效。
本品为广谱抗癌药，未发现不良反应和耐药性
选择嗜硒ZM菌经生物发酵制得产量高、毒性低、疗效好的生物红硒，是一种理想的硒源，可制成原料药，亦可制成单方或复方制剂，治疗多种疾病。
作为原料药：硒对人体健康有着重要作用，长寿老人血硒比正常高出3倍，硒与癌症、艾滋病等40多种疾病有关，且有良好预防和治疗作用，生物硒可作为单味药使用或作为原料药开发。
作为复方制剂：以生物红硒作为主药，配以某些生命成分调整多种酶系统，改变肌体内环境，用生物化学或植物化学方法制成复方制剂(口服给药)，用于多种癌症(广谱)治疗，收到理想疗效，未发现不良反应和耐药性。
对癌症治疗可显著提高肌体免疫力，缩小肿块，消除抑郁调节精神，明显缓解晚期癌症病人剧痛。对癌细胞作用：逆转癌细胞为正常细胞，阻断复发转移，加速其凋亡。
推测生物红硒类药物对艾滋病、自身免疫系统疾病也会有很好的疗效。
Claims (4)
1、一种嗜硒ZM短杆菌，其特征在于：该嗜硒ZM短杆菌保藏名称为：生孢噬纤维细菌(Sporocytophaga sp.)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2006年04月21日，保藏号：CGMCC1694。
2、根据权利要求1所述的嗜硒ZM短杆菌，其特征在于：所述嗜硒ZM短杆菌，菌体长1～2μm，运动方式滑动，菌落平薄有光泽，边缘不整齐，半透明，格兰氏染色阴性，对抗菌素敏感性差别很大，无抑菌作用。
3、根据权利要求1或2所述的嗜硒ZM短杆菌在生物红硒制备方面的应用，其特征在于：按如下顺序依次进行：
(A)菌液制备：
将嗜硒ZM短杆菌接种于1.5％蛋白胨液体培养基中，于37℃培养24小时，备用；
(B)生物红硒的制备：
按下列顺序依次进行：
1)于1～5％蛋白胨液体培养基50ml～1000ml中，分别加入上述菌液、4～5％的亚硒酸钠溶液1ml～10ml，在24℃～40℃环境下培养，发酵液由浅黄色变为红色，显微镜下可见红色ZM菌滑动；
2)经浓缩处理可得到以Na2SeO35H2O计20～50mg/ml的红色菌硒。
4、根据权利要求3所述的嗜硒ZM短杆菌在生物红硒制备方面的应用，其特征在于：所述A项菌液制备中蛋白胨液体培养基中含有：0.1％磷酸氢二钾K2HPO4 3H2O。
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