CN1984918A - 酮基内酯抗菌剂 - Google Patents

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CN1984918A CNA018207723A CN01820772A CN1984918A CN 1984918 A CN1984918 A CN 1984918A CN A018207723 A CNA018207723 A CN A018207723A CN 01820772 A CN01820772 A CN 01820772A CN 1984918 A CN1984918 A CN 1984918A
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Abstract

本发明包括所述结构式的化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药形式，其中：X为氢或者卤化物；R2为氢、酰基或羟基保护基团；R6为氢、羟基或－ORa，其中Ra为选自以下的取代或者未取代的部分，包括：C1－C10烷基、C2－C10链烯基、C2－C10炔基、芳基、杂环、芳基(C1－C10)烷基、芳基(C2－C10)链烯基、芳基(C2－C10)炔基、杂环(C1－C10)烷基、杂环(C2－C10)链烯基和杂环(C2－C10)炔基；R13为氢或取代或者未取代的部分，其中所述部分选自甲基、C3－C10烷基、C2－C10链烯基、C2－C10炔基、芳基、杂环、芳基(C1－C10)烷基、芳基(C2－C10)链烯基、芳基(C2－C10)炔基、杂环(C1－C10)烷基、杂环(C2－C10)链烯基和杂环(C2－C10)炔基；和R为氢或取代或者未取代的部分，其中所述部分选自C1－C10烷基、C2－C10链烯基、C2－C10炔基、芳基、杂环、芳基(C1－C10)烷基、芳基(C2－C10)链烯基、芳基(C2－C10)炔基、杂环(C1－C10)烷基、杂环(C2－C10)链烯基和杂环(C2－C10)炔基。这些化合物具有抗感染活性，因而用于治疗细菌和原虫感染。

Description

酮基内酯抗菌剂
本申请要求2000年4月13日递交的美国申请顺序号09/548568，2000年4月13日递交的美国申请顺序号09/548584，2000年4月14日递交的美国申请顺序号09/550045和2000年4月14日递交的美国申请顺序号09/551162的优先权，其全文通过引用结合到本文中。
发明领域
本发明涉及一系列大环内酯类的酮基内酯抗菌剂、用于制备它们的中间体和含有它们的药用组合物。化合物为用于治疗细菌和原虫感染和用于治疗包括胃动力在内的其它症状的红霉素类似物。
发明背景
聚酮化合物为一类包括具有抗菌和其它的药理性质的许多化合物的天然产物。红霉素为最初于1952年在红色链霉菌(Streptomyceserythreus)菌株的代谢产物中发现的一类大环内酯类抗生素。所属抗生素以命名为A、B、C和D的各种糖基化形式存在。自从它们发现之后，许多人已经开展工作来制备这个分子的衍生物以改善或者改进其性质。大多数这方面工作的焦点涉及天然产生的红霉素分子的化学修饰。例如，克拉霉素为通过把C-6位的羟基经化学修饰为-OMe的半合成抗生素。
酮基内酯为红霉素衍生物，其中C-3位克拉定糖被化学除去并使得到的游离羟基转变为酮基。例如，美国专利6124269号描述了C-11和C-12位具有环状氨基甲酸酯基和C-6位具有O-烷基芳基的酮基内酯。美国专利5635485号也描述了C-11和C-12具有环状氨基甲酸酯基但C-6位具有-OMe基团且氨基甲酸酯上的氮具有烷基芳基的酮基内酯。然而，由于大环内酯分子的复杂性，努力实现以产生衍生物的药物化学受到可以制备为天然来源的红霉素类及其前体的各种修饰的限制。
最近，组合式(modular)聚酮合酶(“PKS’s”)的发现和分离已经拓展了可以被制备的大环内酯结构的范围。PKS’s为与脂肪酸合成有关的多功能的酶，后者通过重复其酰基硫代酸酯之间的反应催化聚酮链的形成。
红色链霉菌PKS为由三种分开的基因编码的三个多功能蛋白的装配并且由美国专利5824513、6004787、6060234和6063561号描述。红色链霉菌PKS产物为6-脱氧红霉内酯环B(6-deoxyerythronolideB)，后者随后经另外的tailoring酶加工为红霉素A-D。PKS基因和tailoring酶的基因的总装配(collective assembly)称为生物合成基因簇。Donadio等在Industrial Microorganisms：Basic and AppliedMolecular Genetics，(1993)中，R.H.Balz，G.D.Hegeman和P.L.Skatrud(编辑)，在Amer.Soc.Microbiol中描述了红色链霉菌PKS生物合成基因簇。
美国专利5672491、5830750、5672491、5712146、5962290、6022731、6066721和6077696号描述了采用编码包括得自红色链霉菌的PKS在内的各种PKS’s的载体以制备新的聚酮化合物的重组方法。PCT申请WO 98/01546号描述了用于修饰载荷结构域因而改变启动聚酮化合物合成的启动子单位性质的另外的方法。例如，美国专利号6080555和PCT申请WO 97/02358号描述了在不含细胞的系统中制备聚酮化合物的方法。例如，在PCT申请WO 97/23630、WO98/01571、WO 99/35157、WO 00/03986和WO 00/44761中，采用这些技术，其中天然来源的C-13位乙基可被其它基团置换的红霉素类似物已被报道。
由于对目前所使用的抗生素耐药的菌株的发病率不断增加，存在对具有抗菌活性特别是对耐药菌株具有抗菌活性的新化合物的需求。通过提供新的红霉素衍生物，本发明满足了这个需求。这些化合物通常为得自PKS基因簇操作的非天然红霉素类似物的半合成或者化学修饰的产物。
发明概述
本发明涉及期待对广谱细菌菌株具有抗菌活性并且因而用于治疗人和动物体内细菌感染的新化合物。本发明涉及下式化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药形式：
Figure A0182077200111
其中：
X为氢或者卤化物；
R2为氢、酰基或羟基保护基团；
R6为氢、羟基或-ORa，其中Ra为选自以下的取代或者未取代的部分：C1-C10烷基、C2-C10链烯基、C2-C10炔基、芳基、杂环、芳基(C1-C10)烷基、芳基(C2-C10)链烯基、芳基(C2-C10)炔基、杂环(C1-C10)烷基、杂环(C2-C10)链烯基和杂环(C2-C10)炔基；
R13为氢或取代或者未取代的部分，其中所述部分选自甲基、C3-C10烷基、C2-C10链烯基、C2-C10炔基、芳基、杂环基、芳基(C1-C10)烷基、芳基(C2-C10)链烯基、芳基(C2-C10)炔基、杂环(C1-C10)烷基、杂环(C2-C10)链烯基和杂环(C2-C10)炔基；
和
R为氢或取代或者未取代的部分，其中所述部分选自C1-C10烷基、C2-C10链烯基、C2-C10炔基、芳基、杂环、芳基(C1-C10)烷基、芳基(C2-C10)链烯基、芳基(C2-C10)炔基、杂环(C1-C10)烷基、杂环(C2-C10)链烯基和杂环(C2-C10)炔基。
优选实施方案的详细描述
本发明涉及新的红霉素衍生物及其中间体。通常，本发明的化合物对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和厌氧菌具有抗菌活性，并且用作治疗人和动物体内细菌感染的广谱抗菌剂。这些化合物对多种菌株是有效的，包括(但不限于)金黄色葡萄球菌、流行病链球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、肠球菌、卡他莫拉菌和流感嗜血杆菌。可被治疗的示例性感染包括社区获得性肺炎、上和下呼吸道感染、皮肤和软组织感染、脑膜炎、医院获得性长期感染，和骨及关节感染。
许多本发明的化合物含有一个或者更多个手性中心。所有的立体异构体作为纯化合物以及立体异构体的混合物包括在本发明的范围内。类似地，所有的几何异构体也包括在本发明的范围内。当本发明的化合物具有至少一个手性中心时，相应地它们可以作为对映体存在。当化合物具有两个或者更多个手性中心时，它们还可以作为非对映体存在。应理解所有这样的异构体及其混合物均包括在本发明的范围内。另外，化合物的一些结晶形式可以作为多晶形存在且因此打算包括在本发明的范围内。另外，一些化合物可以与水(即水合物)或者常见的有机溶剂形成溶剂合物，并且这样的溶剂合物也打算包括在本发明的范围内。
对在医学中的用途，本发明化合物的盐指非-毒性的“药学上可接受的盐”。然而，其它的盐可以用于制备本发明的化合物或其药学上可接受的盐。化合物的合适的药学上可接受的盐包括酸加成盐，后者例如可以通过使化合物的溶液与以下药学上可接受的酸的溶液混合形成，所述酸有例如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、枸橼酸、酒石酸、碳酸或者磷酸。另外，当本发明的化合物带有酸性部分时，它们的合适的药学上可接受的盐可以包括碱金属盐，例如钠或钾盐，碱土金属盐，例如钙或镁盐，以及与合适的有机配体形成的盐例如季铵盐。因此，代表性的药学上可接受的盐包括如下：乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、枸橼酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐(edisylate)、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(gluceptate)、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰基阿散酸盐、hexylresorcinate、海巴明青(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、isothionate、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺铵盐、油酸盐、双羟萘酸盐(恩波酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐(teoclate)、甲苯磺酸盐、triethiodide和戊酸盐。
本发明在其范围内包括本发明化合物的前药。通常，这样的前药应为化合物的功能衍生物，其在体内易于转变为需要的化合物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给药”应包括用具体公开的化合物或者用其未具体公开但给予患者后可以在体内转变为具体公开的化合物的化合物治疗各种被描述的疾病。例如，在“Design ofProdrugs”，H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述了选择和制备合适的前药衍生物的常规方法。
以下列出各种术语的定义用来描述本发明。当它们用于整个说明书时，或者是个体或者作为更大的基团的部分，除非另外在具体的事例中可受到限制，这些定义应用于术语。
当具体的基团被“取代”(例如，环烷基、芳基、杂环基、杂芳基)时，该基团可以具有一个或者更多个取代基，优选1-5个取代基，更优选为1-3个取代基，最优选为1-2个取代基，所述取代基独立选自取代基的条目。打算将分子中具体位置的任何取代基或者变量的定义独立于其在分子中其它位置上的定义。应理解本领域技术人员可以选择本发明化合物的取代基和取代方式，以提供化学上稳定且可通过本领域已知的技术以及在次概述的那些方法易于合成的化合物。除了那些在次特别指明的以外，合适的取代基的实例还包括烷基、链烯基、炔基、芳基、卤代、三氟甲氧基、三氟甲基、羟基、烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、烷酰基、烷酰氧基、氨基、烷基氨基、芳烷基氨基、环烷基氨基、杂环基氨基、二烷基氨基、烷酰氨基、硫代、烷硫基、环烷硫基、硫代杂环基、脲基、硝基、氰基、羧基、羧基烷基、氨基甲酰基、烷氧基羰基、烷基硫羰基、芳基硫羰基、烷基磺酰基、亚磺酰氨基(sulfonamindo)、芳氧基等。例如，取代基可以另外由卤代、羟基、烷基、烷氧基、芳基、取代的芳基、取代的烷基、取代的芳烷基等取代。
在本公开全文所采用的标准命名法下，首先描述所指定的侧链的末端部分，随后描述与连接点邻近的官能团。因此，例如“苯基(烷基)氨基(烷基)”取代基指下式的基团
如在此使用的术语“患者”指动物，优选哺乳动物，最优选为人，其为治疗、观察或者实验的对象。
如在此使用的术语“治疗有效量”意指在组织系统、动物或者人中激发生物或者药物应答(包括缓解受治疗的疾病或紊乱的症状)的活性化合物或者药物的量，这种有效量正由研究人员、兽医、医生或者其它的临床医师不断探索。
如在此使用的，术语“组合物”打算包括含有特定量的特定成分的产物，以及直接或者间接由特定量的特定成分组合的任何产物。
术语“烷基”指直链或支链的烃。“链烯基”指具有至少一个碳-碳双键的直链或支链的烃。“炔基”指具有至少一个碳-碳叁键的直链或支链的烃。
术语“取代的烷基”、“取代的链烯基”或“取代的炔基”分别指由一个或者更多个取代基取代的烷基、链烯基或者炔基。取代基的示例性实例包括(但不限于)烷基、链烯基、炔基、芳基、卤代；三氟甲基；三氟甲氧基；羟基；烷氧基；环烷氧基；杂环基氧基；氧代；烷酰基(-C(＝O)-烷基)；芳氧基；烷酰氧基；氨基；烷基氨基；芳基氨基；芳烷基氨基；环烷基氨基；杂环基氨基；二取代的胺，其中两个氨基取代基选自烷基、芳基或者芳烷基；烷酰氨基；芳酰氨基；芳烷酰氨基；取代的烷酰氨基；取代的芳基氨基；取代的芳烷酰氨基；硫羟基；烷硫基；芳硫基；芳硫烷基；环烷硫基；硫代杂环基；烷基硫羰基；芳基硫羰基；芳烷基硫羰基；烷基磺酰基；芳基磺酰基；芳烷基磺酰基；磺酰氨基(例如，SO2NH2)；取代的磺酰氨基；硝基；氰基；羧基；氨基甲酰基(例如，CONH2)；取代的氨基甲酰基(例如，-C(＝O)NRR’，其中R和R’每一个独立为氢、烷基、芳基、芳烷基等)；烷氧基羰基、芳基、取代的芳基、胍基和杂环基，例如吲哚基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基、吡啶基、嘧啶基等。当应用时，取代基可以由例如卤素、烷基、烷氧基、芳基或者芳烷基等进一步取代。
术语“酰基”指R-CO-基团，其中R为烷基，一般为C1-C6低级烷基。
术语“卤素”、“卤代”或者“卤化物”指氟、氯、溴和碘。
术语“芳基”指在环部分中具有6-12个碳原子的单环或者双环芳族烃基，例如苯基、萘基和联苯基等，它们中的每一个可以被取代。
术语“烷基芳基”或者“芳基烷基”指直接通过烷基结合的芳基，例如苄基。类似地，“芳基链烯基”和“芳基炔基”指分别直接通过链烯基或者炔基结合的芳基。
术语“取代的芳基”指由例如以下1-4个取代基取代的芳基：例如取代和未取代的烷基、链烯基、炔基和芳基；卤代；三氟甲氧基；三氟甲基；羟基；烷氧基；环烷基氧基；杂环基氧基；烷酰基；烷酰氧基；氨基；烷基氨基；芳烷基氨基；环烷基氨基；杂环基氨基；二烷基氨基；烷酰氨基；硫代；烷硫基；环烷硫基；硫代杂环基；脲基；硝基；氰基；羧基；羧基烷基；氨基甲酰基；烷氧基羰基；烷基硫羰基；芳基硫羰基；烷基磺酰基；磺酰氨基；芳氧基等。取代基可以由以下基团进一步取代：例如卤代、羟基、烷基、烷氧基、芳基、取代的芳基、取代的烷基、取代的芳烷基等。
术语“环烷基”指任选取代的、饱和的环状烃环系统，优选含1-3个环和每环含3-7个碳，所述可以另外与不饱和的C3-C7碳环稠合。示例性基团包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基和金刚烷基。示例性取代基包括一个或者更多个烷基或者一个或者更多个如上描述的作为烷基取代基的基团。
术语“杂环”、“杂环的”和“杂环基”指任选取代的、完全饱和的或者不饱和的芳族或者非芳族环状基团，例如，所述芳环状基团为4-7元单环、7-11元双环或10-15元三环系统，它们在含有至少一个碳原子的环上具有至少一个杂原子。含杂原子的杂环基的每个环可具有1、2或者3个选自氮原子、氧原子和硫原子的杂原子，其中氮和硫杂原子也可以任选被氧化。氮原子可以任选被季铵化。杂环基可以连接在任何杂原子或者碳原子上。
示例性的单环杂环基包括吡咯烷基、吡咯基、吲哚基、吡唑基、氧杂环丁烷基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、唑基、唑烷基、异唑啉基、异唑基、噻唑基、thiadazolyl、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧氮杂基、氮杂基、4-哌啶酮基、吡啶基、N-氧代-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢噻喃基砜、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜、1，3-二氧戊环、1-二氧代噻吩基、二烷基、thientanyl、硫杂丙环基、三嗪基、三唑基等。优选的杂环基包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、唑基、异唑基、噻二唑基、二唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基等。
示例性的双环杂环基包括苯并噻唑基、苯并唑基、苯并噻吩基、奎宁环基、喹啉基、喹啉基-N-氧化物、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、中氮茚基、苯并呋喃基、苯并-γ-吡喃酮基、香豆素基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(例如呋喃并[2，3-c]吡啶基、呋喃并[3，2-b]吡啶基或者呋喃并[2，3-b]吡啶基)、咪唑并吡啶基(例如咪唑并[4，5-b]吡啶基或者咪唑并[4，5-c]吡啶基)、二氢异吲哚基、二氢喹唑啉基(例如3，4-二氢-4-氧代-喹唑啉基)、苯并异噻唑基、苯并异唑基、苯并二嗪基、苯并呋咱基、苯并噻喃基、苯并吡唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噻喃基、二氢苯并噻喃基砜、二氢苯并吡喃基、二氢吲哚基、异苯并二氢吡喃基、异二氢氮杂茚基、萘啶基、2，3-二氮杂萘基、胡椒基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、喹唑啉基、四氢喹啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并吡啶基、噻吩并噻吩基等。
术语“杂芳基”指芳族杂环。
“取代的杂环基”或者“取代的杂芳基”指用一个或者更多个取代基取代的各自的部分(杂环基或者杂芳基)。示例性的取代基包括一个或者更多个烷基或者一个或者更多个如上描述的作为烷基取代基的基团。取代的杂环基或者杂芳基可以用单-氧代来取代，给出例子如4-氧代-1H-喹啉。取代的杂环基或者杂芳基也可以由取代的芳基或者第二个取代的杂环基取代，给出例子如4-苯基咪唑-1-基或者4-(吡啶-3-基)-咪唑-1-基。
术语“羟基保护基团”指用于这样的目的的本领域中已知的基团。例如，在T.H.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in OrganicSynthesis，第2版，John Wiley&Sons，New York(1991)中，其通过引用结合到本文中，公开了通常采用的羟基保护基团。示例性的羟基保护基团包括(但不限于)四氢吡喃基、苄基、甲硫基甲基、乙硫基甲基、新戊酰基、苯基磺酰基、三苯基甲基、三取代的甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三丁基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、三叔丁基甲硅烷基、甲基二苯基甲硅烷基、乙基二苯基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基等，酰基和芳酰基，例如乙酰基、新戊酰基苯甲酰基、4-甲氧基苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基和脂族酰基芳基等。
除了在以上描述的基团的明确的取代度以外，本发明化合物可包括其它的可以应用的取代度。例如，可以用一个或者更多个取代基，例如C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、苯基或者官能团另外取代红霉素骨架或者骨架取代基(例如通过替代一个氢或者通过衍生非氢基团)。示例性的合适的官能团的实例包括(但不限于)乙醇、磺酸、膦、膦酸酯、膦酸、硫醇、酮、醛、酯、醚、胺、季铵、亚胺、酰胺、二酰亚胺、亚氨基、硝基、羧酸、二硫化物、碳酸酯、异氰酸酯、碳二亚胺、烷氧羰基、氨基甲酸酯、缩醛、缩酮、硼酸酯、羟腈、腙、肟、酰肼、烯胺、砜、硫化物、氧硫基和卤素。
本发明的化合物
本发明化合物的优选实施方案包括式I化合物
Figure A0182077200181
其中：
X为氢或者氟化物；
R2为氢、-COCH3或者-CO苯基；
R13为甲基、丙基、乙烯基、丁基、3-丁烯基、3-羟基丁基、2-氟乙基或者2-叠氮基乙基；
R6为-ORa，其中Ra为氢、C1-C5烷基或者-YZ
其中Y为C1-C10烷基、C2-C10链烯基或者C2-C10炔基，更优选为C3-C6烷基、C3-C6链烯基或者C3-C6炔基，和Z为取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂环基或者未取代的杂环基，更优选为取代或者未取代的杂芳基；
R为氢或者Ra。
对R6或者R的优选的取代或者未取代的杂环的示例性实例包括(但不限于)
Figure A0182077200191
其中取代或者未取代的杂芳基或其互变异构形成可以连接在任何合适的原子上。
对R6或者R的取代或者未取代的杂环的另外的实例包括核酸碱及其衍生物，例如
其中核酸碱或者衍生物可以连接在任何合适的原子上。
本发明特别优选的化合物包括
其中
X为H或者F；
R13为甲基、丙基或乙烯基；和
Ra选自
本发明特别优选的化合物包括式III的那些化合物
Figure A0182077200212
其中X为氢或者氟化物和Ra选自
Figure A0182077200221
特别优选的是式I化合物，其中：
X为氢或者氟化物；
R为氢；
R2为氢、-COCH3或者-CO苯基；
R13为甲基、丙基或者乙烯基；和
R6选自3-(喹啉-3-基)丙-2-烯基、3-(喹啉-3-基)丙-2-炔基、3-(喹啉-6-基)丙-2-烯基、3-(喹啉-6-基)丙-2-炔基、3-(喹啉-7-基)丙-2-烯基、3-苯基丙-2-烯基、3-(萘-1-基)丙-2-烯基、3-(萘-1-基)丙-2-炔基、3-(萘-2-基)丙-2-炔基、5-苯基戊-4-烯-2-炔基、3-(呋喃-2-基)丙-2-炔基、3-(噻吩-2-基)丙-2-烯基、3-(咔唑-3-基)丙-2-烯基和3-(喹喔啉-6-基)丙-2-烯基。
R的特别优选的基团包括H、苯基、C1-C8-烷基或者C1-C8-链烯基，其由一个或者更多个选自苯基、羟基和以下的取代的杂环基的取代基任选取代。
生物合成
通过在美国专利5672491、5830750、5843718、5712146、5962290、6022731、6066721、6077696和6080555号中描述的方法，其通过引用全部结合到本文中，可以制备苷元中间体。在一个实施方案中，通过这样的方法，其中合适的硫代酸酯二酮(diketide)底物被提供给6-脱氧红霉内酯环B合酶(“DEBS”)(由于DEBS的组件1的酮基合酶结构域的突变，所述合酶不能作用于其天然底物丙酰基CoA)，可以制备“非天然的”红霉素前体。在正常产生红霉素的天然宿主，即红色链霉菌中可以表达这个重组DEBS，或者通过在合适的宿主例如天蓝色链霉菌(S.Coelicolor)(参见例如Jacobsen等，Science 277：367-369(1997))或者其被修饰以消除其内源性放线菌红素聚酮合成机制的浅青紫链霉菌(S.Lividans)中的质粒，可以插入整个PKS基因簇。例如，合适的宿主应为天蓝色链霉菌CH999/pJRJ2，后者可表达含有灭活的组件1酮基合酶的突变体6-DEB合酶。
通过产生相应的PKS蛋白重组体和使它们分泌或者溶解含有它们的细胞，也可以使用如在美国专利6080555号和PCT申请WO97/02358号中描述的不含细胞系统。典型的不含细胞的系统包括合适的催化聚酮化合物合成所需要的PKS、NADPH和合适的缓冲液和底物。
另外，可以将合适的硫代酸酯二酮底物提供给红色链霉菌的PKS酶而不是6-DEB合酶。其他的PKS酶包括在美国申请顺序号60/190024和60/158305中描述的黑孢小单孢菌(Micromonosporamegalomicea)的6-DEB合酶及其KS1*衍生物，在PCT申请US99/24478号中描述的齐墩果烷苷(oleandolide)PKS及其KS1*衍生物，在PCT申请WO 99/61599号中描述的纳良果烷苷(narbonolide)PKS及其KS1*衍生物，所有这些文献通过引用结合到本文中。
对那些其中R13为甲基的苷元中间体，不需要供给二酮，因为通过如在此进一步描述的重组宿主细胞天蓝色链霉菌CH999/pCK7可以产生所要求的苷元。
然后，将由此制备的苷元加入到红色链霉菌菌株的发酵培养液中，依所采用的菌株而定，红色链丝菌在C-3和C-5位上糖基化，C-12位上羟基化和在C-6位上任选羟基化。羟基化和糖基化的优选实施方案为以下通式的化合物，
其中R13如先前描述。这些和以上详细描述的其它的“非天然”红霉素化合物用作进一步化学合成的起始原料。
化学合成
通过化学合成进一步修饰生物合成衍生的起始原料。随后的修饰包括C-2位的卤化、在C-3位的酮基形成、在C-11和C-12位的环状氨基甲酸酯形成、C-6位羟基(其中羟基存在于该位置)的衍化以及它们的组合。所有得到的化合物(包括所有的中间体)被考虑为本发明的一部分。
当羟基存在于生物衍生的起始原料的C-6位时，一般可用烷基修饰。流程1阐明了一种使自生物衍生的C-13修饰的红霉素A开始的C-6位羟基的烷基化的方法。
流程1
Figure A0182077200251
简言之，用酮基保护基团保护起始的红霉素化合物1的C-9位酮基，优选通过使酮基转变为衍生化的肟(＝NOR’，其中R’为取代或者未取代的部分，例如C1-C12烷基、C3-C12环烷基、C6-C10芳基和杂芳基)。一种优选的衍生化的肟具有式＝NOR’，其中R’为如在化合物3中的异丙氧基环己基。或者，代替形成肟，C-9位酮基可以被还原为羟基，后者在C-6羟基的烷基化反应前可以由选择性羟基保护基团任选保护。
采用在非质子惰性溶剂中的试剂例如乙酸酐、苯甲酸酐、氯代甲酸苄酯、六甲基二硅烷基胺或者三烷基甲硅烷基氯可保护糖羟基(2’和4”位)。非质子惰性溶剂的示例性的实例包括二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、N-甲基吡咯烷酮、二甲亚砜(“DMSO”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)和三甲基甲硅烷基咪唑。优选的保护剂包括在三甲基甲硅烷基咪唑中的三烷基甲硅烷基氯。
在碱存在下，使得到的化合物4与烷化剂例如烷基卤化物、磺酸酯和甲苯磺酸酯反应，形成化合物5。优选的烷化剂包括烷基溴化物RaBr，例如甲基溴、烯丙基溴、炔丙基溴、2-氟代乙基溴、肉桂基溴和巴豆基溴。合适的碱包括氢氧化钾、氢化钠、异丙醇钾、叔丁醇钾和非质子惰性溶剂。
一旦C-6-羟基的烷基化完成，糖残基和大环内酯环可以脱保护。如上文由T.H.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in OrganicSynthesis描述的，进行糖苷部分的脱保护。类似的条件导致使衍化的肟转变为＝NOH。如果未衍化的肟的形成与脱保护不同时进行，转变为肟可分开进行。
通过本领域已知的标准方法，除去肟并转变为酮基。脱肟剂包括无机硫氧化物化合物，例如亚硫酸氢钠、焦硫酸钠、硫代硫酸钠等。在这种情况下，可以使用质子溶剂，例如水、甲醇、乙醇、异丙醇、三甲基硅烷醇及其混合物。脱肟反应通常在有机酸例如甲酸存在下进行。脱肟反应的产物为化合物7，起始原料的C-6烷基化衍生物。
可以进一步修饰C-6烷基化的化合物7。例如，当Ra为烯丙基时，它可以用四氧化锇处理，得到2，3-二羟基丙基化合物，后者可在每个氧原子上被进一步酯化。在非质子惰性溶剂中，也可以用间-氯过苯甲酸氧化6-O-烯丙基化合物，得到环氧化合物，后者可用胺或者含N的杂芳基化合物开环。或者，在Wacker条件下，可以氧化烯丙基侧链，得到取代基-O-CH2C(＝O)CH3，或者臭氧化得到醛。然后醛可以被转变为肟，后者在非质子惰性溶剂中依次与脱水剂反应，得到腈。或者，所述醛可与合适的胺反应并在硼氢化物还原剂存在下还原得到胺。
化合物7的优选修饰是如流程2中阐明的在C-3位形成酮基。
流程2
用酸，优选用含水的HCl，或者去糖基化酶除去C-3位糖，得到相应的脱-克拉定糖(des-cladinose)衍生物8。合适的酸包括在醇和水存在下的盐酸、硫酸、氯代乙酸、三氟乙酸等。在介于约10-35℃的温度下，反应时间通常为0.5-24小时。用保护基团例如乙酸酐或者苯甲酸酐(其中R2为Ac或者Bz)选择性保护红霉素骨架的C-5位上的保留的糖部分(“脱氧氨基(desoamine)”)的游离羟基。将C-3位羟基氧化为酮基，得到化合物10。在这种方法中，氧化剂例如N-氯代琥珀酰亚胺-二甲硫或者碳二亚胺-二甲亚砜复合物被采用。通常，于10-25℃将化合物9加入到在氯化溶剂例如二氯甲烷中的预先形成的N-氯代琥珀酰亚胺和二甲亚砜复合物中。搅拌0.5-4小时后，加入叔胺例如三乙胺以产生相应的酮。
优选用C-11和C-12位的环状氨基甲酸酯也可以进一步修饰化合物10。通过流程3概述一种形成氨基甲酸酯部分的方法。
流程3
Figure A0182077200281
简言之，例如以两步骤方法，自化合物10可制备化合物11。首先，在有机碱像吡啶存在下，通过与烷基或者芳基磺酰氯例如甲磺酰氯反应，C-11位羟基可优先转变为离去基团。在下一步骤，在合适的溶剂像丙酮中，通过用二氮杂双环十一烷处理，可以消除离去基团，得到C-10与C-11位之间的双键。化合物11与1，1’-羰基二咪唑反应，随后与胺RNH2反应。用甲醇作用除去2’-羟基保护基团，得到化合物13。或者，在碱像氢化钠存在下，化合物10可与1，1’-羰基二咪唑反应，直接得到化合物12，后者然后可与RNH2反应，制备所需产物即化合物13。
本发明化合物的优选实施方案通常包括在R或者Ra上的取代的芳基或者杂环基。对其中R为取代的芳基或者杂环基的那些化合物，Ra优选为C1-C10烷基，更优选为C1-C5烷基，甲基为最优选。为得到其中R为取代的芳基或者杂环基的化合物，如通过流程3描述采用相应的胺RNH2。合适的-R基团的示例性的实例包括(但不限于)：喹啉-4-基丁基、4-苯基咪唑-1-基丁基、4-(吡啶-3-基)咪唑-1-基丁基、4-(吡啶-3-基)咪唑-1-基丁基、吡啶-4-基丁基、3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基丁基、1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基丁基、1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基丁基、3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基丁基、1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基丁基、嘌呤-7-基丁基、嘌呤-9-基丁基和1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基丁-2-烯基及4-(嘧啶-5-基)咪唑-1-基丁基。
对其中Ra为取代的芳基或者杂环基的那些化合物，R优选为氢。尽管通过任何合适的方法可以制备这些化合物，C-6位羟基上的两步骤修饰为优选。通常，如先前在流程1中描述的，除烷基溴化物YBr用于C-6位羟基初步的烷基化反应以外，其中Y为C2-C10链烯基或C2-C10炔基，更优选为C3-C6链烯基或者C3-C6炔基，可修饰C-6位羟基。
如通过流程2和3描述的，得到的产物被进一步修饰，得到化合物13a。
流程4
如通过流程4所示，于Heck(Pd(II)或者Pd(0)，膦和胺或者无机碱)条件下，化合物13a与Z-卤化物反应，提供其中Z偶合于Y的化合物14。在这些化合物中，基团-YZ一起为Ra。-YZ示例性的实例包括(但不限于)：3-(喹啉-3-基)丙-2-烯基、3-(喹啉-3-基)丙-2-炔基、3-(喹啉-6-基)丙-2-烯基、3-(喹啉-6-基)丙-2-炔基、3-(喹啉-7-基)丙-2-烯基、3-苯基丙-2-烯基、3-(萘-1-基)丙-2-烯基、3-(萘-1-基)丙-2-炔基、3-(萘-2-基)丙-2-炔基、5-苯基戊-4-烯-2-炔基、3-(呋喃-2-基)丙-2-炔基、3-(噻吩-2-基)丙-2-烯基、3-(咔唑-3-基)丙-2-烯基和3-(喹喔啉-6-基)丙-2-烯基。这些衍生物可以例如用氢和披钯碳任选还原，提供相应的化合物，其中Y上的一个或者更多个碳-碳双或者叁键变得完全饱和(例如丙烯基变为丙基)。
对那些其中R6为氢(替代ORa)的化合物，通过流程5描述了制备C-3酮基衍生物和C-11，12环状氨基甲酸酯衍生物的优选方法。
流程5
Figure A0182077200301
在这些化合物中，在C-3位的酮基形成之前，可以形成碳10和11之间的双键，得到化合物15。得到的酮基化合物在这一点上可以被任选卤化或者酮基化合物可以与1，1-羰基二咪唑反应，制备化合物12b。化合物12b与胺RNH2反应，随后除去脱氧氨基糖上的保护基团，得到环状氨基甲酸酯衍生物化合物13b。
当制备C-3位酮基衍生物和其中R13为乙烯基的C-11，12环状氨基甲酸酯衍生物时，这个修饰的方法也是优选的。对这些化合物，如流程1描述的，可实现C-6位羟基(在这个位置上优选得到-OCH3)的初步烷基化。然后，如通过流程5所述，制备C-3位酮基和C-11，12环状氨基甲酸酯衍生物。
从通过流程1-5描述的反应得到的所有的最终化合物可以在C-2位任选被卤化，提供相应的卤代对应物。优选的方法包括用碱和亲电卤化试剂例如吡啶过溴化物或者N-氟代苯磺酰亚胺(sulfonimide)处理所需化合物。通过使各自的化合物卤化或者在环状氨基甲酸酯形成前，通过使其各自的前体化合物11卤化，可以形成化合物13和14的卤代对应物。如果所需化合物为化合物14的卤代对应物，由卤代化合物14替代卤代化合物11是优选的。
使用方法
本发明还提供治疗细菌感染或者增强温血动物体内其它的抗菌药物的活性的方法，该方法包括单独或者与稀释剂混合或者以本发明的药物形式给予动物本发明的化合物。
当化合物用于以上用途时，它们可以与一种或者更多种药学上可接受的载体例如溶剂、稀释剂等组合，并且可以以此类形式如片剂、胶囊剂、可分散粉剂、颗粒剂或含例如约0.5％-5％悬浮剂的混悬剂、含例如约10％-50％糖的糖浆剂、含例如约10％-50％乙醇的酏剂等口服给药，或者以在等渗介质中含约0.5％-5％悬浮剂的灭菌注射溶液剂或混悬剂经非肠道给药。这些药用制剂可以含例如自约0.5％最多可达约90％的与载体组合的活性成分，更通常介于5％-60％(重量)。
局部应用的组合物可以采用液体、霜剂或者凝胶的形式，后者含与皮肤病学上可接受的载体混合的治疗有效浓度的本发明化合物。
在制备为口服剂型的组合物中，可以使用任何有用的药用介质。当适于活性成分的性质和所需给药的具体形式时，固体载体包括淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和高岭土，而液体载体包括灭菌水、聚乙二醇、非离子表面活性剂和食用油、例如玉米、花生油和芝麻油。通常在制备药用组合物中采用的佐剂可以有利地包括，例如矫味剂、着色剂、防腐剂和抗氧剂，例如维生素E、抗坏血酸、BHT和BHA。
基于易于制备和给药的基本点的优选药用组合物为固体组合物，特别是片剂和硬-填充或者液体填充的胶囊。化合物的口服给药为优选。
这些活性化合物也可以经非肠道或者腹膜内给药。在适宜与表面活性剂例如羟丙基纤维素混合的水中，可以制备作为游离碱或药理学上可接受的盐的这些活性化合物的溶液剂或者混悬剂。在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中，也可以制备分散液。在常规贮存和使用条件下，这些制剂可以包含防腐剂以阻止微生物的生长。
适于注射使用的药用形式包括灭菌水溶液或者分散液和用于灭菌注射溶液或者分散液的临时制剂的灭菌粉末。在所有的情况下，所述剂型必须是灭菌的并且必须是流体以达到具有可易于注射的程度。在制备和贮存条件下它必须是稳定的并且必须防止微生物例如细菌和真菌的损害作用。载体可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、它们的合适的混合物和植物油的溶剂或者分散介质。
所采用的活性成分的有效剂量可以依使用的具体化合物、给药模式和受治疗的疾病的严重性而变化。然而，通常，当本发明的化合物以约动物体重的约0.1mg/kg-约400mg/kg的日剂量给药时，优选每天给予一次，或者以分开的剂量每天给予2-4次，或者以持续释放的形式给予，可以得到满意的结果。对大多数哺乳动物，总日剂量为约0.07g-7.0g，优选约100mg-1000mg。适于内服用途的剂型包含与固体或者液体药学上可接受的载体紧密混合的约100mg-500mg的活性化合物。这个给药方案可以被调整以提供最佳治疗反应。例如，可以每天给予几个分开的剂量或者当指明治疗情况紧急时，可按比例减少剂量。
通过本领域任何已知的方法，例如通过使活性成分与稀释剂混合以形成药用组合物(例如颗粒)，然后使组合物形成药物(例如片剂)，可以进行以上提及的药用组合物和药物的生产。
通法
采用包括重组宿主细胞和有机化学方法学在内的化学生物合成方法产生的中间体，可以制备本发明的化合物。这种化学生物合成方法的步骤一般描述如下，随后在列举的实施例中详细描述每一步骤。
在所述方法的第一个通用步骤中，通过重组链霉菌属(Streptomyces)宿主细胞的发酵，可制备6-脱氧红霉内酯环B(“6-dEB”)衍生物化合物。产生15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B和14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B的发酵需要合成二酮中间体以喂饲发酵的细胞。在实施例1中描述了这些合成二酮化合物的制备。这些合成二酮为6-脱氧红霉内酯环B合酶(“DEBS”)的底物，后者不能作用于其天然底物(丙酰基CoA)，原因是DEBS的组件1的酮基合酶结构域中的突变。通过在天蓝色链霉菌CH999中的质粒pJRJ2提供这种重组DEBS。在美国专利5672491号中描述的天蓝色链霉菌CH999，其通过引用结合到本文中。在美国专利申请顺序号09/181833(其通过引用结合到本文中)中描述一种天蓝色链霉菌CH999的衍生物天蓝色链霉菌K39-02999，它通常被修饰以包括ptpA基因，也可以用于这个目的。质粒pJRJ2编码eryAI、eryAII和eryAIII基因；包含在质粒中的eryAI基因包含没有KS1的突变体。不含KS1的突变体预防形成经野生型基因产生的6-脱氧红霉内酯环B，除非外源性底物被提供。在PCT公布号99/03986和97/02358、美国专利6080555和6066721号，和在1999年5月14日递交的美国专利申请顺序号09/311756中，描述了质粒pJRJ2和使用这个质粒制备新的C-13-取代的红霉素的方法，其中每篇文献通过引用结合到本文中。通过这些方法可以制备所提供的外源性底物并且包括在PCT专利申请PCT/US00/02397号和美国专利申请顺序号09/492733(两者由发明人G.Ashley等于2000年1月27日递交)中描述的化合物，两者通过引用结合到本文中。也可以采用PKS基因而不是ery基因，合适的基因包括含齐墩果烷苷和纳良果烷苷PKS基因的没有KS1的突变体，这些PKS基因在由发明人Probert McDaniel和Yana Volchegursky于2000年10月4日中递交的美国专利申请顺序号09/__，__、1999年10月8日递交的60/158305、1999年10月28日递交的09/428517和1999年10月22日递交的PCT申请US99/24478号中被描述，标题为RecombinantMegalomicin Biosynthetic Genes(重组巨大霉素生物合成基因)，它们每一个通过引用结合到本文中。
产生14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B的发酵不需要二酮喂饲，因为通过重组宿主细胞天蓝色链霉菌CH999/pCK7可产生所需化合物。质粒pCK7在美国专利5672491号中被描述并包括DEBS基因。也可采用质粒pCK7的一种衍生物PKOS011-26。含PKOS011-26和重组ptpA的宿主细胞称作天蓝色链霉菌27-26/pKOS011-26。这些宿主细胞产生6-脱氧红霉内酯环B和14-去甲-6-脱氧红霉内酯环，原因是掺入了丙酰基CoA和乙酰基CoA，两者均用作DEBS的底物。
在实施例2中描述了天蓝色链霉菌CH999/pJRJ2和天蓝色链霉菌CH999/pCK7的发酵。在实施例2中也描述了得自该发酵液的6-脱氧红霉内酯环产物的分离。
然后，将分离的产物加入到红色糖单孢菌(Saccharopolysporaerythraea)菌株的发酵培养液中，以制备本发明其它的有用的中间体化合物。红色糖单孢菌(S.erythraea)菌株催化生物合成并使糖残基连接在6-dEB衍生物化合物的C-3和C-5位上。这些菌株也包括功能性eryK基因产物并且这样可在C-12位上使6-dEB衍生物化合物羟基化。菌株按照功能性eryF基因产物是否产生是不同的。如果产生，那么所产生的化合物也可以在C-6位羟基化。如果不产生，那么可产生6-脱氧红霉素A衍生物。这些红色糖单孢菌发酵与自发酵培养液中分离红霉素A衍生物化合物一起在实施例3中被描述。
然后，分离的产物用作本发明化合物的化学合成的起始原料。对本发明的含6-羟基的红霉素A衍生物化合物，实施例4-6、11和16描述了使化合物烷基化以制备C-6-O-烷基、C-6-O-烯丙基和C-6-O-炔丙基中间体的方法。
对包含C-6-O-烷基的本发明的红霉素A衍生物化合物，实施例7-9描述了制备本发明的10，11-脱水化合物的方法。
实施例10描述了制备本发明的C-2-卤代化合物的方法。具体地说，用碱和亲电卤化试剂例如吡啶过溴化物或者N-氟代苯磺酰亚胺处理待卤化的化合物。实施例12描述自含有C-6-O-烯丙基的红霉素A衍生物除去克拉定糖并把得到的C-3-羟基氧化成酮的方法。实施例13阐明把含C-6-O-烷基的化合物转变为几种在合成本发明化合物中有用的中间体。实施例14描述了式I化合物的合成，其中R＝H，R2＝H，X＝H和R6＝O-烯丙基。实施例15描述了通过Heck反应，随后使脱氧氨基糖脱保护把含6-O-烷基和11，12-环状氨基甲酸酯官能团的大环内酯转变为式I化合物的方法。实施例16描述了使化合物烷基化为6-O-炔丙基中间体，实施例17描述了将6-O-炔丙基转变为式I的6-O-丙炔基-杂芳基化合物。
对不合C-6位羟基的本发明的红霉素A衍生物化合物，实施例18-20描述制备本发明的10，11-脱水化合物的方法。在流程5和6中描述了这些反应顺序。
实施例21描述了合成1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-(4-氨基-2-丁烯)的方法，为一种用于合成本发明化合物的胺，其中R＝1H-咪唑并[4，5-b]吡啶。
在实施例22和23中描述了用于把10，11-脱水化合物转变成本发明的氨基甲酸酯衍生物化合物的方法。用于合成式I的氨基甲酸酯衍生物化合物的胺或者是市场上可以得到的或者可以如在Denis等，Bioorg.Med.Chem.Lett.9：3075-3080(1999)中所述而容易地制备。
实施例1
二酮硫代酸酯的制备
在这个实施例中，描述了制备用于喂饲重组链霉菌属宿主细胞以制备15-甲基和14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B中间体化合物的N-乙酰基半胱胺硫代酸酯(“NACS”)所用的方法。在U.S.专利申请系列号09/492,733(发明者G.Ashley，M.Burlingame和I.Chan-Kai)中，以下叙述的合成方法也被描述，其通过引用结合到本文中。
因此，由(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羟基己酰基]-4-苄基-2-唑烷酮(制备D)与N-乙酰基半胱胺(制备B)反应，可制备(2S，3R)-2-甲基-3-羟基己酸酯NACS(制备E)，其用于制备15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B中间体。依次，从N，S-二乙酰基半胱胺(制备A)制备N-乙酰基半胱胺。从(4S)-N-丙酰基-4-苄基-2-唑烷酮(丙酰基-Nox；制备C)制备(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羟基己酰基]-4-苄基-2-唑烷酮(制备D)。
以类似的方式，由(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羟基-4-戊酰基]-4-苄基-2-唑烷酮(制备F)与N-乙酰基半胱胺(制备B)反应，制备(2S，3R)-2-甲基-3-羟基-4-戊酸酯NACS(制备G)，其用于制备14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B中间体。从(4S)-N-丙酰基-4-苄基-2-唑烷酮(丙酰基-Nox；制备C)制备(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羟基-4-戊酰基]-4-苄基-2-唑烷酮(制备F)。
A：N，S-二乙酰基半胱胺的制备
将半胱胺盐酸盐(50.0g)加入到配备有一个磁力搅拌棒、2个加料漏斗和一个pH电极的1L3颈圆底烧瓶中。加入水(300mL)，把搅拌着的溶液在冰中冷却。通过加入8NKOH把pH调节到8.0。将乙酸酐(125mL)置于一个加料漏斗中，并把8NKOH(350mL)置于另一个加料漏斗中。将乙酸酐滴加到半胱胺溶液中，伴随加入8NKOH以使反应物pH保持在8+/-1。加入乙酸酐完成后，用1NHCl把pH调节到7.0并使混合物在冰上搅拌75分钟。加入固体NaCl至饱和，使用每份400mL的CH2Cl2把溶液提取4次。合并有机提取物，经MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到68.9g(97％收率)的浅黄色油，其在4℃下放置结晶。
B：N-乙酰基半胱胺的制备
将N，S-二乙酰基半胱胺(42.64g)置于配备有磁力搅拌器的2L圆底烧瓶中，并溶于1400mL水中。把烧瓶用N2清洗并将混合物在冰浴中冷却。加入氢氧化钾(49.42g)，把混合物在惰性气氛下于冰上搅拌2小时。使用6NHCl把pH调节到7并加入固体NaCl至饱和。用每份500mL的CH2Cl2把混合物提取7次。合并有机提取物，经MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到30.2g(96％收率)的产物。使用前把该物料立即蒸馏，bp138-140℃/7mmHg。
C：(4S)-N-丙酰基-4-苄基-2-唑烷酮(丙酰基-Nox)的制备
向配备有500mL加料漏斗和搅拌棒的一个干燥的1L三颈圆底烧瓶中加入20g的(4S)-4-苄基-2-唑烷酮，用隔膜加帽并用氮气吹洗。通过导管加入无水THF(300mL)并把生成的溶液用-78℃的干冰/异丙醇浴冷却。通过导管向加料漏斗中装入78mL的正丁基锂(1.6M在己烷中)，使其以缓慢液流的形式加入到反应物中。借助注射器快速加入蒸馏的丙酰氯(bp77-79℃)，8.0mL。使反应物在干冰/异丙醇浴中搅拌30分钟。
从冷却浴中移出反应物，使之温热至＞0℃，用50mL饱和NH4Cl水溶液猝灭。在旋转蒸发器上将混合物浓缩为浆状物。用每份250mL的乙醚把浆状物提取3次。合并有机提取物，用每份50mL的饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色油。该物料在放置下结晶。把结晶用冷的(-20℃)己烷研磨一次，得到21.0g(80％收率)的白色结晶物料，m.p.41-43℃。APCI-MS：m/z＝234(MH+)，178，117。1H-NMR(360MHz，CDCl3)：7.2-7.4(5H，m)；4.67(1H，m，H4)；4.14-4.22(2H，m，H5)；3.30(1H，dd，J＝3，13Hz，苄型的)；2.89-3.03(2H，m，H2’)；2.77(1H，dd，J＝9，13，苄型的)；1.20(3H，t，J＝7 Hz，H2’)。
D：(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羟基己酰基]-4-苄基-2-唑烷酮的制备
向配备有500mL加料漏斗、低温温度计和搅拌棒的一个干燥的2L三颈圆底烧瓶中加入19.84g的N-丙酰基-唑烷酮，用隔膜加帽并用氮气吹洗。通过导管加入无水二氯甲烷(100mL)，把生成的溶液在干冰/异丙醇浴中冷却至-65℃。通过导管向加料漏斗中装入100mL的二丁基硼三氟乙酸酯(1.0M在二氯甲烷中)，使其以缓慢液流的形式加入到反应物中。通过注射器滴加三乙胺(15.6mL)，把反应物保持在低于-10℃的温度下。然后，将反应物转移至冰浴中并在0℃下搅拌30分钟。在此期间后，将反应物放回到干冰/异丙醇浴中并使之冷却至-65℃。借助注射器快速加入丁醛(8.6mL)并使反应物搅拌30分钟。
将反应物转移至冰浴中并向加料漏斗加入100mL的1M磷酸盐水溶液，pH7.0(磷酸盐溶液包括等摩尔量的磷酸一钾和磷酸氢二钾)。尽可能快地加入磷酸盐溶液，同时把反应温度保持在低于10℃。然后，向加料漏斗中加入300mL甲醇，加入甲醇应尽可能快，同时把反应物温度保持在低于10℃。最后，向加料漏斗中加入300mL的2∶1甲醇∶30％过氧化氢。滴加时确保温度保持在低于10℃。加入完成后，将反应物搅拌1小时。然后，在旋转蒸发器上除去溶剂，直到留下浆状物。用每份500mL的乙醚提取浆状物4次。用每份250mL的饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤合并的有机提取物。然后，经MgSO4干燥提取物，过滤，浓缩，得到微黄色的油。然后，把物料在SiO2上层析，用2∶1 己烷∶乙酸乙酯(产物Rf＝0.4)洗脱，得到22.0g(85％收率)为无色油的标题化合物。
APCI-MS：m/z 306(MH+)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：7.2-7.4(5H，m，苯基)；4.71(1H，m，H4)；4.17-4.25(2H，m，H5)；3.96(1H，m，H3’)；3.77(1H，dq，J＝2.5，7Hz，H2’)；3.26(1H，dd，J＝4，13Hz，苄型的)；2.79(1H，dd，J＝9，13Hz，苄型的)；1.5-1.6(2H，m，H4’)；1.3-1.5(2H，m，H5’)；1.27(3H，d，J＝7 Hz，2’-Me)；0.94(3H，t，J＝7 Hz，H6’)。
E：(2S，3R)-2-甲基-3-羟基己酸酯N-乙酰基半胱胺硫代酸酯的制备
在室温下，将N-乙酰基半胱胺在130℃/7mm Hg下蒸馏，得到无色液体。将配备有500mL加料漏斗和搅拌棒的一个干燥的1L三颈圆底烧瓶用隔膜加帽并用氮气吹洗。然后，通过注射器向烧瓶中加入10.7mL的N-乙酰基半胱胺并通过导管加入400mL无水THF。用MeOH/冰浴冷却混合物。通过注射器滴加丁基锂(64mL的1.6M己烷溶液)，导致形成白色沉淀。搅拌30分钟后，通过注射器滴加三甲基铝(51mL的2.0M己烷溶液)。加入三甲基铝后反应液变为澄清，将其再搅拌30分钟。在此期间，在氮气覆盖下加入20.5g(0.068mol)的(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羟基己酰基]-4-苄基-2-唑烷酮并使之溶于100mL无水THF中；然后通过导管以缓慢液流的形式将该溶液转移到反应物中。生成的反应混合物变为黄绿色，将其搅拌1小时。当经薄层层析分析不再观察到起始原料时，反应完成(大约1小时)。
用足够饱和的草酸处理反应物以得到用pH试纸显示中性的反应物(大约90mL)。然后，在旋转蒸发器上除去溶剂，得到白色浆状物。用每份250mL的乙醚提取浆状物6次。合并有机提取物，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到微黄色的油。把硫代酸酯产物经SiO2上的快速层析纯化，用1∶1 己烷∶EtOAc洗脱直到得到4-苄基-2-唑烷酮的洗脱液。此时，把溶剂系统转变为100％EtOAc，得到二酮硫代酸酯的纯的流分。合并产物流分并浓缩，得到14.9g(89％收率)的标题化合物。该化合物在实施例2中称为丙基二酮硫代酸酯。APCI-MS：m/z248(MH+)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：5.8(brs，1H)；3.94(dt，1H)；3.46(m，2H)；3.03(dt，2H)；2.71(dq，1H)；1.97(s，3H)；1.50(m，2H)；1.37(m，2H)；1.21(d，3H)；0.94(t，3H)。F：(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羟基-4-戊酰基]-4-苄基-2-唑烷酮的制备
向配备有500mL加料漏斗、低温温度计和搅拌棒的一个干燥的2L三颈圆底烧瓶中加入20.0g的丙酰基唑烷酮A，用隔膜加帽并用氮气吹洗。加入无水二氯甲烷(100ml)并在甲醇/冰浴中把生成的溶液冷却至-15℃。在这样的速度下通过加料漏斗以缓慢液流的形式加入二丁基硼三氟乙酸酯(100mL的1.0M二氯甲烷溶液)以保持反应物温度低于3℃。通过注射器滴加二异丙基乙胺(17.9mL)，再次保持内部温度低于3℃。然后，使用干冰/异丙醇浴把反应物冷却至-65℃。通过注射器，于5分钟内加入丙烯醛。加入完成后，使反应物搅拌30分钟。
然后，把反应物转移至冰浴中并向加料漏斗中加入120mL(0.1mol)的1M磷酸盐水溶液，pH7.0(磷酸盐溶液包括等摩尔量的磷酸一钾和磷酸氢二钾)。尽可能快地加入磷酸盐溶液，同时把反应物温度保持在低于10℃。然后，向加料漏斗中尽可能快地加入400mL甲醇，同时把反应物温度保持在低于10℃。最后，通过开始滴加向加料漏斗中加入400mL的2∶1 甲醇∶30％过氧化氢，以保持温度低于10℃。将反应物搅拌1小时。用旋转蒸发器除去溶剂，留下浆状物。用每份500mL的乙醚提取浆状物4次。合并有机提取物，用每份250mL的饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到淡黄色的油。用己烷研磨诱导结晶。通过加入己烷从乙醚中重结晶，得到13.67g(55％收率)的产物。1H-NMR(360MHz，CDCl3)：7.2-74(m，5H)；5.86(ddd，1H)，5.35(dt，1H)，5.22(dt，1H)，4.71(m，1H)，4.51(m，1H)，4.21(m，2H)，3.89(dq，1H)，3.26(dd，1H)，2.80(dd，1H)，1.25(d，3H)。
G：(2S，3R)-2-甲基-3-羟基-4-戊烯酸酯N-乙酰基半胱胺硫代酸酯的制备
将N-乙酰基半胱胺在130℃/7mm Hg下蒸馏，在室温下得到无色液体。将配备有500mL加料漏斗和搅拌棒的干燥、1L三颈圆底烧瓶用隔膜加帽并用氮气吹洗。然后，通过注射器向烧瓶中加入7.5mL的N-乙酰基半胱胺并通过导管加入500mL无水THF。然后用MeOH/冰浴冷却反应物。通过注射器滴加丁基锂(44mL的1.6M的己烷溶液)。当加入n-BuLi时形成白色沉淀。搅拌30分钟后，通过注射器滴加35.5mL(0.071mol)的三甲基铝(2.0 M的己烷溶液)。加入三甲基铝后反应液变得澄清，将其搅拌另外30分钟。在氮气覆盖下加入来自制备F的(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羟基-4-戊烯酰基]-4-苄基-2-唑烷酮(13.6g)，使之溶于50mL无水THF中，然后通过导管以缓慢液流的形式将该溶液转移到反应物中。生成的反应混合物变为黄绿色并将其搅拌1小时。当经薄层层析不再观察到起始原料时，判断反应完成(大约30分钟)。
加入足够饱和的草酸，得到用pH试纸显示为中性的反应物(大约60mL)。然后，通过旋转蒸发器除去溶剂，得到白色浆状物。用每份250mL的乙醚提取浆状物6次。合并有机提取物，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到淡黄色的油。然后，使硫代酸酯经SiO2上的快速层析纯化，用1∶1己烷∶乙酸乙酯洗脱柱直到得到唑烷酮的洗脱液。此时，把洗脱剂换成100％乙酸乙酯，得到产物纯的流分。合并流分并浓缩，得到7.7g(71％收率)的标题化合物产物。该产物在实施例2中称作乙烯基二酮硫代酸酯。
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：5.82(ddd，1H)；5.78(brs，lH)；5.32(dt，1H)；5.21(dt，1H)；4.47(m，1H)；3.45(m，2H)；3.04(m，2H)；2.81(dq，1H)；1.96(s，3H)；1.22(d，3H)。
实施例2
红霉内酯环的制备
A：14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B的制备
在美国专利6066721和6080555号中，其每一个通过引用结合到本文中，描述了天蓝色链霉菌CH999/pJRJ2。质粒pJRJ2编码DEBS的突变形式，其中通过诱变(KS1°)使组件1(KS1)的酮基合酶结构域失活。含有供给按照实施例1制备的乙烯基二酮硫代酸酯的这个质粒的天蓝色链霉菌菌株产生14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B。
对天蓝色链霉菌CH999/pJRJ2的20种分离株测试它们使乙烯基二酮硫代酸酯转变为14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B的能力。将冷冻芽胞储备液稀释，在含50mg/L硫链丝菌肽的R2YE琼脂板上平铺培养，并于30℃生长5天，得到单一菌落。每升R2YE培养基含103g蔗糖、10g葡萄糖、10.12g MgCl2·6 H2O、0.25g K2SO4、0.1g水解酪蛋白氨基酸、5g酵母提取物、5.73g TES(N-三[羟甲基]甲基-2-氨基乙磺酸，得自Sigma)缓冲液、22g琼脂(当引入时)和2mL微量元素溶液。高压灭菌后，加入10mL 5g/L(0.5％)KH2PO4、8mL 2.5MCaCl2·2H2O、15mL 200g/L(20％)L-脯氨酸和7mL 1N NaOH。每升微量元素溶液含1mg ZnSO4、1mg FeSO4、1mg MnCl2和1mgCaCl2。当培养物在pH-控制的生物反应器中生长时，在R2YE培养基中TES可以省去。
将菌落转接(patched)到第二批培养板上以用于扩增，然后在含50mg/L硫链丝菌肽的新鲜的R2YE琼脂板上铺展，以建立丝状菌苔。如前所述进行把天蓝色链霉菌CH999/pJRJ2的二酮供给这些菌苔。通过均化作用，分离在这些培养基中产生的14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B和琼脂(培养物在琼脂上生长)的乙酸乙酯提取物。采用配备有Beckman Ultrasphere ODS柱(4.6mm×150mm)的Beckman127s溶剂组件和作为流动相的水-乙腈的梯度洗脱，进行这些提取物的反相HPLC/MS分析。通过质谱(PESciex APIl00LC)鉴定14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B并采用发散光(evaporative light)散射检测器(Alltech500ELSD)定量。将高产量的分离株在培养板上繁殖并作为冷冻芽胞悬浮液重新试验以测定它们储备期间的稳定性。
在试验用于使乙烯基二酮硫代酸酯转变为14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B的能力的天蓝色链霉菌CH999/pJRJ2的20种分离株中，5种分离株是无效的，且一种分离株产生＞6mg/L的产物。将高产量的分离株在琼脂培养基(大约每10天重新划线分离(restreaking))繁殖，并作为冷冻芽胞储备液。当该菌株作为冷冻芽胞储备液贮存时，重新分离的菌株引起很大的分离株与分离株(isolate-isolate)之间的变异。当菌株在室温下于R2YE琼脂上贮存时，未观察到这种变异性。作为冷冻芽胞悬浮液贮存期间，先前已观察到菌株的产生能力的分离，尽管赖以发生的机制还不清楚。
菌株在琼脂培养基上的繁殖并作为冷冻菌丝体悬浮液保留分离株的产生能力。结果，通过把约10mm2菌丝体膜接种到50mL含50μg/mL硫链丝菌肽的R2YE中，并于200-250rpm/28-30℃下，在250mL带当板的烧瓶(baffled flask)中振摇(系列25New Brunswick框式摇床)48小时，可制备细胞库。将细胞经显微镜检测，把25mL的90％甘油混合到培养物中，并在液氮下将1mL等分试样冷冻且于-80℃贮存。这个方法用于天蓝色链霉菌和红色链霉菌菌株两者的贮存。
在摇瓶中可产生14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B。通过将1mL的冷冻储备液加入到50mL含50μg/mL硫链丝菌肽和约1mL/L消泡剂B的R2YE(Baker)中，可以制备天蓝色链霉菌CH999/pJRJ2的接种培养物。天蓝色链霉菌K39-02/pJRJ2的接种培养物可以任选含有50μg/mL阿泊拉霉素。将该培养物于28-30℃以200-250rpm振摇约48小时(系列25New Brunswick框式摇床)。通过把10mL的接种培养物接种到500mL的含有50μg/mL硫链丝菌肽的SO1培养基(任选或者可以采用不含缓冲液的R6培养基)，可以制备产生培养物。每升SO1培养基含51.5g蔗糖、0.25g K2SO4、0.1g水解酪蛋白氨基酸、5g酵母提取物、5.73gTES缓冲液、0.96g丙酸钠和2mL微量元素溶液。高压灭菌后，加入10mL0.5％(5g/L)KH2PO4、8mL2.5M CaCl2·6H2O、7.5mL 20％(200g/L)L-脯氨酸和7mL 1NNaOH。当培养物在pH-控制的生物反应器中生长时，从SO1培养基中可以省去TES。
R6培养基也用于产生培养物。每升R6培养基含103g蔗糖、0.25g K2SO4、10.12g MgCl2·6H2O、0.1g水解酪蛋白氨基酸、5g酵母提取物、5.73g TES缓冲液、0.96g丙酸钠和2mL微量元素溶液。高压灭菌后，加入10mL0.5％KH2PO4、8mL 2.5M CaCl2·2H2O、15mL20％L-脯氨酸和7mL 1N NaOH。当培养物在pH-控制的生物反应器中生长时，从R6培养基中可以省去TES。
使培养物于200-250rpm/28-30℃下生长36-48小时。然后用4-戊炔酸(Fluka，25mg/L)和1mM乙烯基二酮硫代酸酯(3mL的4.67mg/mL二酮在10％DMSO(Sigma)中)补充培养物，再生长4天。为了在R6培养基中加入二酮，当葡萄糖水平降至0.5g/L或者更低时，一般加入后将二酮加入24-48小时，可以分析葡萄糖浓度对时间的关系，以便更精确地加入。通过用XAD树脂固相提取和用乙醇洗脱，自培养物中回收14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B。
对14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B的大规模生产，通过将1mL的冷冻菌丝体接种到含500mL的R2YE、任选的50μg/mL阿泊拉霉素、50μg/mL硫链丝菌肽和1mL/L消泡剂B的2.8L带挡板的烧瓶中，并且于150-200rpm/28-30℃下振摇约2天(Innova板式摇床)，可制备天蓝色链霉菌K39-02/pJRJ2的接种培养物。用10L的R6培养基填充，于121℃高压灭菌30分钟，使之冷却，然后用500mL(2％)的接种培养物接种，可制备10L搅拌釜生物反应器(B.Braun A-10)。
在通过3叶片的拉什顿叶轮(rushton inpellers)以500-750rpm搅拌下，于0.5-2L/min下通气，通过自动加入1N NaOH或1N H2SO4使pH控制在7.00，使温度维持在30℃。监测葡萄糖消耗、所溶解的氧、pH和细胞质量。当葡萄糖浓度降至低于0.1g/L时，用4-戊炔酸(25-50μg/mL)和在50mL DMSO中的2.5g乙烯基二酮硫代酸酯补充培养物。控制葡萄糖的加入，以维持葡萄糖浓度0-2g/L(目标为0.5g/L)。通过HPLC/MS监测14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B的效价，当达到最大效价时，通过离心收获培养物。采用BioLafitte 150L生物反应器，可使该方法规模放大至100L。
通过固相提取可纯化14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B。将发酵培养液冷却冰冻至4-15℃，加入乙醇(0.1L/L培养液)。通过离心澄清培养液并以2-4mL/cm2-min的流速填充到XAD-16树脂(Rohm和Haas)柱(1kg XAD/1g 14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B)上。用2个柱体积的15％(v/v)乙醇水溶液冲洗已填充的树脂，并用丙酮自树脂洗脱14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B，收集1/2柱体积的流分。通过薄层层析(乙酸乙酯∶己烷 1∶1)和HPLC/MS鉴定含14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B的流分。
合并含14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B的丙酮流分，减压除去挥发物。用乙酸乙酯提取生成的含水混合物。用饱和NaHCO3和盐水溶液洗涤乙酸乙酯提取物，经硫酸钠或硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干。通过硅胶层析纯化粗品物质，用己烷和乙酸乙酯梯度洗脱。合并含产物的流分并浓缩为黄色的油，后者自然结晶。自乙醚-己烷中重结晶得到纯的14，15-脱氢-6-脱氧红霉内酯环B。质谱显示[M+H]＝385。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：213.67(C9)，177.51(CI)，134.80(C14)，116.58(C15)，79.40(C3)，76.47(C5)，74.11(C13)，70.84(C11)，43.80(C2)，43.16(C10)，41.48(C12)，39.58(C8)，37.61(C7)，37.42(C4)，35.56(C6)，16.60(6Me)，14.55(2Me)，13.34(8Me)，9.20(12Me)，6.91(4Me)，6.30(10Me)。
B：15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B的制备
天蓝色链霉菌K39-02/pJRJ2的高产量的分离株被用于在摇瓶中产生15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B。通过将1mL的冷冻储备液加入到50mL含50μg/mL硫链丝菌肽(和任选的阿泊拉霉素)的R2YE中，可制备天蓝色链霉菌K39-02/pJRJ2的接种培养物。该培养物于28-30℃以200-250rpm振摇36-48小时。通过把1mL的接种培养物接种到50mL含50μg/mL硫链丝菌肽(和任选的阿泊拉霉素)的SO1或者R6培养基中，可以制备生产培养物。以1mL/L加入消泡剂。使培养物于200-250rpm/28-30℃下生长36-48小时。用4-戊炔酸(Fluka，25-50mg/L)和1mM丙基二酮硫代酸酯(3mL的4.67mg/mL在10％DMSO(Sigma)中的二酮)补充培养物，并再生长4-7天。当达到最大效价时，通过用乙酸乙酯提取，自培养物回收15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B。对大规模制备15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B，通过把1mL的冷冻菌丝体接种到2.8L含500mL的R2YE的带挡板的烧瓶中并于150-200rpm/28-30℃下振摇2天，可制备天蓝色链霉菌K39-02/pJRJ2的接种培养物。用10L的SO1或者R6培养基填充，于121℃高压灭菌30分钟，使之冷却，然后用400-500mL的接种培养物接种，可制备10L搅拌釜生物反应器。
用3叶片的拉什顿叶轮以500-750rpm搅拌，以约1L/min通气，通过自动加入1N NaOH或1N H2SO4使pH控制在7.00，以维持温度在28-30℃。监测葡萄糖消耗、所溶解的氧、pH和细胞质量。当葡萄糖浓度降至低于0.1g/L时，用4-戊炔酸(25μg/mL)和在50mLDMSO中的2.5g丙基二酮硫代酸酯补充培养物。控制葡萄糖的加入，以维持葡萄糖浓度约0.5g/L。通过HPLC/MS监测15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B的效价，当达到最大效价时，通过离心收获培养物。采用BioLafitte 150L生物反应器，可使该方法规模放大至100L。
通过固相提取纯化15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B。将发酵培养液冷却冰冻至4-15℃，加入乙醇(0.1L/L培养液)。通过离心澄清培养液并以2-4mL/cm2-min流速填充到XAD-16树脂(Rohm和Haas)柱(1kg XAD/1g15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B)上。用2个柱体积的15％(v/v)乙醇的水溶液冲洗已填充的树脂，并用丙酮自树脂洗脱15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B，收集1/2柱体积的流分。通过薄层层析(乙酸乙酯：己烷1∶1)和HPLC/MS鉴定含15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B的流分。
合并含15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B的丙酮流分，减压除去挥发物。用乙酸乙酯提取生成的含水混合物。用饱和NaH2CO3和盐水溶液洗涤乙酸乙酯提取物，经硫酸钠或硫酸硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干。通过硅胶层析纯化粗品物质，用己烷和乙酸乙酯梯度洗脱。合并含产物的流分并浓缩为黄色的油，后者自然结晶。自乙醚-己烷重结晶得到纯的15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B。质谱显示[M+H]＝401。
C：14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B的制备
美国专利5712146号，通过引用结合到本文中，描述了重组宿主细胞天蓝色链霉菌CH999/pCK7的制备。该专利报道，当重组菌株在R2YE培养基中生长时，菌株产生6-脱氧红霉内酯环B和14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B(也称作8，8a-脱氧齐墩果烷苷)的混合物。相关的菌株天蓝色链霉菌27-26/pKOS011-26含修饰的pCK7质粒和重组ptpA基因。
天蓝色链霉菌27-26/pKOS011-26的高产量的分离株被用于在摇瓶中产生14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B。通过将1mL的冷冻储备液加入到50mL含50μg/mL硫链丝菌肽(和任选的阿泊拉霉素)的R2YE中，可制备天蓝色链霉菌27-26/pKOS011-26的接种培养物。该培养物于28-30℃以200-250rpm振摇36-48小时。通过把1mL的接种培养物接种到50mL含50μg/mL硫链丝菌肽(和任选的阿泊拉霉素)的SO1培养基中，制备产生培养物。使培养物于200-250rpm/28-30℃下生长36-48小时。用4-戊炔酸(Fluka，25-50mg/L)补充培养物，再生长4天。通过用乙酸乙酯提取，自培养物回收14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B。
对大规模制备14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B，通过把1mL的冷冻菌丝体接种到2.8L含500mL的R2YE的带挡板的烧瓶中并于150-200rpm/28-30℃振摇36-48小时，制备天蓝色链霉菌27-26/pKOS011-26的接种培养物。用10L不含葡萄糖的R2YE培养基填充，于121℃高压灭菌30分钟，使之冷却，然后用400-500mL的接种培养物接种，制备10L搅拌釜生物反应器。加入1mL/L的消泡剂。
用3叶片的拉什顿叶轮以500-750rpm搅拌，以约1L/min通气，通过自动加入1N NaOH或1N H2SO4使pH控制在7.00，使温度维持在28-30℃。监测葡萄糖消耗、所溶解的氧、pH和细胞质量。控制葡萄糖的加入，以维持葡萄糖浓度约0.5g/L。通过HPLC/MS监测14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B的效价，当达到最大效价时，通过离心收获培养物。采用BioLafitte150L生物反应器，可使该方法规模放大至100L。
通过固相提取纯化14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B。将发酵培养液冷却至4-15℃，加入乙醇(0.1L/L培养液)。通过离心澄清培养液并以2-4mL/cm2-min流速填充到XAD-16树脂(Rohm和Haas)柱(1kgXAD/1g 14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B)上。用2个柱体积的15％(v/v)乙醇水溶液冲洗已填充的树脂，并用丙酮自树脂洗脱14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B，收集1/2柱体积的流分。通过薄层层析(乙酸乙酯∶己烷1∶1)和HPLC/MS鉴定含14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B的流分。
合并含14-去甲-6-脱氧红霉内酯环B的丙酮流分，减压除去挥发物。用乙酸乙酯提取得到的含水混合物。用饱和NaH2CO3和盐水溶液洗涤乙酸乙酯提取物，经硫酸钠或硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干。采用SiO2柱，用乙酸乙酯/己烷展开，经快速层析纯化粗品物料。自乙醚-己烷中重结晶得到纯的15-甲基-6-脱氧红霉内酯环B。质谱显示[M+H]＝373。
实施例3
红霉素的制备
采用重组菌株红色糖单孢菌，可将在实施例2制备A-C中产生的6-dEB衍生物化合物转变为红霉素衍生物。对C-6和C-12位均具有羟基的红霉素的生产，所采用的红色糖单孢菌菌株为K40-67。通过用含编码灭活的KS1结构域的突变eryA1序列的pWHM3-衍生的质粒，使能够产生高水平的红霉素A的红色糖单孢菌菌株转化来产生这个菌株。通过同源重组，使得到的转化体不能产生6-脱氧红霉内酯环B。为产生仅有12-位羟基的红霉素衍生物，所采用的红色糖单孢菌菌株为K39-07。通过破裂eryF羟化酶基因，可自菌株K40-67构建这个菌株。如以下描述的，在基本类似的条件下，将两种菌株发酵。
发酵在10L(和150L)的生物反应器中进行。用1mL等分试样的冷冻红色糖单孢菌K40-67菌丝体在500mL的R2YE2培养基中接种培养物接种。在2.8L带挡板的Fernbach烧瓶中，于150-200rpm/28-30℃把培养物振摇约48小时。用10L的R2YE培养基(对150L发酵70L)填充，于121℃高压灭菌45分钟，使之冷却，然后用200mL(对150 L发酵1.4L)的接种培养物接种，可制备10L搅拌釜生物反应器。用2叶片的拉什顿叶轮以500-700rpm搅拌，以约1L/min通气，通过自动加入1N NaOH和1N H2SO4使pH控制在7.20，使温度维持在28-30℃。通过以1mL/L加入消泡剂，可减少泡沫。控制pH以避免潜在的产物被降解成烯醇醚和螺缩酮(spiroketal)。监测蔗糖消耗、葡萄糖放出、所溶解的氧、pH和600nm下的吸光度(细胞质量)。24-36小时后，对培养物给予溶于3mL的100％乙醇(对150L发酵15mL)中的300mg(对150L发酵1.62g)的按照该实施例的制备A-C制备的6-dEB衍生物化合物。继续发酵另外大约68-85小时，通过离心收获发酵培养液。通过电子喷雾MS分析，可测定发酵期间的红霉素A、B、C和D类似物的效价。
通过固相提取可纯化产生的化合物。通过加入NaOH，冷却至4-15℃，加入乙醇(0.1L/L培养液)，使发酵培养液调至pH8.0。通过离心澄清培养液并以2-4mL/cm2-min的流速填充到XAD-16树脂(Rohm和Haas)柱(1kg XAD/1g红霉素衍生物)上。用2柱体积的15％(v/v)乙醇水溶液洗涤已填充的树脂，并用丙酮自树脂洗脱红霉素衍生物，收集1/2柱体积的流分。通过薄层层析和HPLC/MS鉴定含红霉素衍生物的流分。
使含红霉素衍生物的丙酮流分合并，减压除去挥发物。用乙酸乙酯提取生成的含水混合物。用饱和NaH2CO3和盐水溶液洗涤乙酸乙酯提取物，经硫酸钠或硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干。经快速层析(二氯甲烷/甲醇/三乙胺)纯化粗品物质。该物质用作在以下实施例中描述的化学衍化方法的起始原料。通过采用离心式逆流分配(例如，采用如在WO 91/16334中描述的Ito Coil Planet Centrifuge，通过引用结合到本文中)，可以得到纯的产物。
通过这个方法产生的化合物为：(i)14-去甲红霉素A、(ii)14，15-脱氢-红霉素A、(iii)15-甲基-红霉素A、(iv)14-去甲-6-脱氧-红霉素A、(v)14，15-脱氢-6-脱氧红霉素A和(vi)15-甲基-6-脱氧-红霉素A。当用于制备3-脱克拉定糖-3-氧代-衍生物时，红霉素A衍生物不与红霉素C衍生物分离，作为替代，A和C化合物的混合物用作化学衍化方法的起始原料。
实施例4
制备A：14-去甲红霉素A9-肟
将14-去甲红霉素A(0.621g，80％纯度)、羟胺(0.5ml的50％水溶液)和乙酸(0.2ml)在异丙醇(2ml)中的溶液在50℃下保持22小时。将其用氯仿/乙醇(3/2)提取，用碳酸氢钠、盐水洗涤，经MgSO4干燥。过滤并真空蒸发，得到为白色固体的粗产物(0.65g)，将其直接用于下一步转化。
制备B：14-去甲红霉素A 9-[0-(1-异丙氧基环己基)]肟
向以上粗品14-去甲红霉素A9-肟(0.65g)和1，1-二异丙氧基-环己酮(0.95ml)在二氯甲烷(2ml)中的溶液中加入在二氯甲烷(2ml)中的对-甲苯磺酸吡啶(PPTS)(0.333g)。搅拌过夜后，提取(氯仿/乙醇3∶2)混合物，洗涤(NaHCO3-H2O，盐水)，干燥(MgSO4)。过滤并真空蒸发后，用甲苯和异丙醇反复处理粗产物，得到0.74g的产物，将其直接用于下一步反应。
制备C：2’，4”-双(O-三甲基甲硅烷基)-14-去甲红霉素A 9-[O-(1-异丙氧基-环己基)]肟
在0℃下，向14-去甲红霉素A 9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(0.74g)在二氯甲烷(6ml)中的溶液中加入三甲基甲硅烷基咪唑(0.33ml)和三甲基甲硅烷基氯(0.18ml)在二氯甲烷(2ml)中的溶液。搅拌5分钟后，加入乙酸乙酯，洗涤(NaHCO3-H2O，盐水)，干燥(MgSO4)。经硅胶快速层析(10∶1己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到为白色固体的纯的产物(0.50g)。质谱显示[M+H+]＝1020。
制备D：2’，4”-双-(O-三甲基甲硅烷基)-6-O-甲基-14-去甲红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟
将2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲红霉素A 9-[O-(1-异丙氧基-环己基)]肟(0.3g，0.29mmol)在1∶1的二甲亚砜/四氢呋喃(DMSO/THF)(1.4ml)中的溶液用0.3ml的甲基溴在乙醚中的2M溶液处理并冷却至10℃。于6小时内，使用注射器泵加入叔丁醇钾在THF(0.6ml)和DMSO(0.6ml)中的1M溶液的混合物。然后，用乙酸乙酯稀释反应物，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，经MgSO4干燥。过滤并真空蒸发，得到为白色固体的产物(0.29g)。质谱显示[M+H+]＝1034。
制备E：6-O-甲基-14-去甲红霉素A9-肟
在环境温度下，将6-O-甲基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(0.29g)、乙酸(3.6ml)、乙腈(6ml)和水(3ml)的混合物搅拌4.5小时。采用甲苯将混合物处理至干，得到为白色固体的粗产物(0.24g)，其无须进一步纯化而直接用于下一步骤。
制备F：6-O-甲基-14-去甲红霉素A
将6-O-甲基-14-去甲红霉素A9-肟(0.24g)、亚硫酸氢钠(0.45g，85％纯度)、水(3ml)、乙醇(3ml)和甲酸(0.07ml)的混合物在85℃下保持8小时。用1N NaOH把反应物调至pH8并用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机提取物，经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到为白色固体的粗产物(0.2g)。质谱显示[M+H+]＝735。
实施例5
制备A：14，15-脱氢红霉素A 9-肟
将14，15-脱氢红霉素A(1.984g，47％纯度，1.2mmol)在6mL的2-丙醇中的悬浮液用1.97mL的50％羟胺水溶液处理并搅拌直到溶解。加入乙酸(0.62mL)并在50℃下把混合物搅拌25小时。冷却至环境温度后，加入饱和NaHCO3并真空浓缩混合物以除去异丙醇。用每份250mL的CHCl3提取生成的含水混合物三次。合并有机提取物，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到0.92g的严物。
制备B：14，15-脱氢红霉素A 9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟
将来自(A)的肟(0.92g)溶于6.2mL的CH2Cl2中并在环境温度下用1，1-二异丙氧基环己烷(1.23g)和对-甲苯磺酸吡啶(0.464gm)处理15小时。用160mL的CH2Cl2稀释混合物，然后连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤并蒸发，得到棕色糖浆状物质。经硅胶层析(梯度从甲苯至1∶1甲苯/丙酮+1％Et3N)，得到0.998g的产物。
制备C：2’，4”-双(O-三甲基甲硅烷基)-14，15-脱氢红霉素A 9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟
在惰性气氛下，将14，15-脱氢红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(998mg，9.96)在11.25mL CH2Cl2中的溶液在冰上冷却并用氯代三甲基硅烷(0.24mL)和1-三甲基甲硅烷基咪唑(0.44mL)的溶液处理。30分钟后，用250mL乙酸乙酯稀释反应物并连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤并蒸发，得到1.002g的产物。
制备D：2’，4”-双(O-三甲基甲硅烷基)-6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟
将2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-14，15-脱氢红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(1.00g，20.7mmol)在9.69mL的1∶1四氢呋喃/二甲亚砜中的溶液冷却至10℃并在惰性气氛下用0.97mL的甲基溴在乙醚中的2.0M溶液处理。缓慢加入二甲亚砜(1.94mL)和1.0M叔丁醇钾在四氢呋喃(1.94mL)中的混合物。通过薄层层析(硅胶，10∶1甲苯/丙酮)监测反应，在加入1.6摩尔当量的碱后，判断反应完成。用200mL乙酸乙酯和70mL的饱和NaHCO3稀释反应物。将混合物转移至分液漏斗中，用850mL乙酸乙酯和280mL的饱和NaHCO3稀释，然后，用水和盐水连续洗涤。经MgSO4干燥有机相，通过硅藻土过滤，蒸发，得到21.2g的粗品6-O-甲基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-14，15-脱氢红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟。其无须进一步纯化即可进行下一步。
制备E：6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A9-肟
将6-O-甲基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-14，15-脱氢红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(1.0g)在9.8mL的2∶1乙腈/水中的溶液用5.3mL乙酸处理并在环境温度下搅拌8小时。真空浓缩混合物，然后在加入甲苯后反复浓缩，得到0.797g的粗品6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A9-肟。
制备F：6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A
将6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A9-肟(0.797g)和亚硫酸氢钠(85％，1.02g)在7.5mL的1∶1乙醇/水中的溶液置于惰性气氛下。滴加甲酸(0.186mL)，把混合物在80℃下搅拌3小时。冷却至环境温度后，用6N NaOH把反应物调至pH10，用每份150mL的乙酸乙酯提取3次。合并有机提取物并连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到0.68g适合于进一步转化的6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A。
实施例6
制备A：15-甲基红霉素A9-肟
将15-甲基红霉素A(20.0g，85％纯度，22.6mmol)在40mL的2-丙醇中的悬浮液用20.5mL的50％羟胺水溶液处理并搅拌直到溶解。加入乙酸(6.41mL)并在50℃下把混合物搅拌15小时。冷却至环境温度后，加入饱和NaHCO3并真空浓缩混合物以除去异丙醇。用每份250mL的CHCl3把生成的含水混合物提取三次。合并有机提取物，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到20.5g的粗产物。经LC/MS分析显示为E和Z肟的94∶6混合物，[M+H]+＝764。
制备B：15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟
把来自以上的粗品肟(20.5g)溶于55mL的CH2Cl2中并在环境温度下用1，1-二异丙氧基环己烷(27.3mL)和对-甲苯磺酸吡啶(9.8gm)处理15小时。用160mL的CH2Cl2稀释混合物，然后连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到棕色糖浆状物质。经硅胶层析(梯度从2∶1至3∶2己烷/丙酮+1％Et3N)，得到18.0g的产物。
制备C：2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟
在惰性气氛下，将15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(9.00g，9.96mmol)在25mL CH2Cl2中的溶液在冰上冷却并用氯代三甲基硅烷(1.89mL)和1-三甲基甲硅烷基咪唑(3.65mL)在8mL CH2Cl2中的溶液处理。30分钟后，用250mL乙酸乙酯稀释反应物并连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发。经硅胶层析(梯度从己烷至10∶1己烷/丙酮+1％Et3N)纯化粗产物，得到7.8g的产物。
制备D：2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-6-O-甲基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟
将2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(21.7g，20.7mmol)在41.4mL四氢呋喃中的溶液冷却至10℃并在惰性气氛下用41.4mL的二甲亚砜和20.7mL的甲基溴在乙醚中的2.0M溶液处理。在大约20mL每小时的速度下加入二甲亚砜(41.4mL)和1.0M叔丁醇钾在四氢呋喃(41.4mL)中的混合物。通过薄层层析(硅胶，10∶1甲苯/丙酮)监测反应，在加入1.6摩尔当量的碱后，判断反应完成。用200mL乙酸乙酯和70mL饱和NaHCO3稀释反应物。将混合物转移至分液漏斗中，用850mL乙酸乙酯和280mL饱和NaHCO3稀释，然后，用水和盐水连续洗涤。经MgSO4干燥有机相，通过硅藻土过滤，蒸发，得到21.2g的粗品6-O-甲基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟。其无须进一步纯化即可进行下一步。
制备E：6-O-甲基-15-甲基红霉素A9-肟
将6-O-甲基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(21.2g)在110mL乙腈中的溶液用55mL水和67mL乙酸处理并在环境温度下搅拌8小时。真空浓缩混合物，然后在加入甲苯后反复浓缩，得到19.7g的6-O-甲基-15-甲基红霉素A9-肟。
制备F：6-O-甲基-15-甲基红霉素A
将6-O-甲基-15-甲基红霉素A9-肟(19.7g)和亚硫酸氢钠(85％，23.1g)在280mL的1∶1乙醇/水中的溶液置于惰性气氛下。滴加甲酸(3.75mL)，在80℃下搅拌混合物4.5小时。冷却至环境温度后，用饱和NaHCO3处理反应物并用每份400mL的乙酸乙酯提取3次。合并有机提取物并连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到15.1g适合于进一步转化的6-O-甲基-15-甲基红霉素A。
实施例7
制备A：6-O-甲基-3-脱克拉定糖基(descladinosyl)-14-去甲红霉素A
在环境温度下，将6-O-甲基-14-去甲红霉素A(77mg)、0.073ml的12N HCl和水(2ml)的混合物搅拌3小时。用8N KOH把混合物调至pH8，用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机提取物，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物经硅胶层析(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到为白色固体的纯的产物(42mg)。质谱显示[M+H+]＝576。
制备B：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-14-去甲红霉素A
在环境温度下，将6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-14-去甲红霉素A(73mg)、碳酸钾(20mg)、乙酸酐(14μl)和丙酮(1ml)的混合物搅拌18小时。加入乙酸乙酯，用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物经硅胶层析(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到为白色固体的纯的产物(71mg)。质谱显示[M+H+]＝618。
制备C：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-14-去甲红霉素A
将2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-14-去甲红霉素A(99mg)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)盐酸盐(206mg)在二氯甲烷(2ml)中的溶液用DMSO(0.21ml)处理并冷却至5℃。借助注射器泵于4小时内加入三氟乙酸吡啶(208mg)在二氯甲烷(2ml)中的溶液。然后加入乙酸乙酯，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物经硅胶层析(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到为白色固体的纯的产物(94mg)。质谱显示[M+H+]＝616。
制备D：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺酰基-14-去甲红霉素A
在5℃下，向2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-14-去甲红霉素A(93mg)在干燥吡啶(1ml)中的溶液中加入甲磺酰氯(0.057ml)。在5℃下3小时后，把反应物温热至环境温度并保持另外15小时。用乙酸乙酯稀释混合物，用饱和NaHCO3(2x)、水(3x)、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物经硅胶层析(2∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到为白色固体的纯的产物(72mg)。质谱显示[M+H+]＝695。
制备E：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-14-去甲红霉素A
在环境温度下，将2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺酰基-14-去甲红霉素A(73mg)在丙酮(1ml)中的溶液用二氮杂双环十一碳烯(32μl)处理18小时。用乙酸乙酯稀释混合物，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物经硅胶层析(2∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到为白色固体的纯的产物(50mg)。质谱显示[M+H+]＝598。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ207.02，204.50，169.63，168.72，142，52，139.40，101.87，80.61，80.02，77.14，72.66，71.48，69.09，63.56，51.35，50.56，47.12，40.61，39.73，37.36，30.36，21.32，21.06，20.96，20.67，18.45，14.34，13.89，13.55，13.45。
实施例8
制备A：2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A
将6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A(668mg)、苯甲酸酐(385mg)和三乙胺(0.25mL)在3.6mL的CH2Cl2中的溶液搅拌2天。加入饱和NaHCO3后，用CH2Cl2把混合物提取3次。合并有机提取物并蒸发至干，经硅胶层析(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)纯化产物，得到477mg的产物；LC-MS显示[M+H]+＝850.6。
制备B：2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-4”，11-双(O-甲磺酰基)-14，15-脱氢红霉素A
将2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-14，15-脱氢红霉素A(549mg)和甲磺酰氯(0.50mL)在2.39mL吡啶中的溶液搅拌24小时，然后用CH2Cl2和饱和NaHCO3稀释。用CH2Cl2提取混合物3次。合并有机提取物并蒸发至干，经硅胶层析(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)纯化产物，得到530mg的产物；LC-MS显示[M+H]+＝1006.5。
制备C：2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-4”-O-甲磺酰基-10，11-脱水-14，15-脱氢红霉素A
将2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-4”，11-双(O-甲磺酰基)-14，15-脱氢红霉素A(59mg)和二氮杂双环十一碳烯(0.018mL)在0.195mL丙酮中的混合物搅拌24小时，然后真空干燥。经硅胶层析(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)纯化产物，得到50mg的产物；LC-MS显示[M+H]+＝910.5。
制备D：2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-10，11-脱水-14，15-脱氢红霉素A
将2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-4”-O-甲磺酰基-10，11-脱水-14，15-脱氢红霉素A(337mg)、1.5mL乙腈和6.9mL的3N HCl的混合物搅拌22小时。真空除去乙腈，通过加入NaOH把含水残余物的pH调至12，使用4份CH2Cl2提取产物。干燥合并的提取物并蒸发。经硅胶层析(梯度从96∶4 CH2Cl2/MeOH至95∶4∶1 CH2Cl2/MeOH/Et3N)纯化产物，得到197mg，[M+H]+＝674.4。
制备E：2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-14，15-脱氢红霉素A
将2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-10，11-脱水-14，15-脱氢红霉素A(226mg)和Dess-Martin periodinane(427mg)在14.6mL的CH2Cl2(14.6mL)中的悬浮液搅拌1小时。用CH2Cl2和饱和NaHCO3稀释混合物。使用3份CH2Cl2提取产物，合并提取物，干燥，蒸发。硅胶层析(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)得到产物，168mg。[M+H]+＝672.4。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ206.78，203(br)，168.19，165.08，141.36，139.58，132.74，131.51，130.46，129.79，128.25，120.18，102.09，80.79，80.40，78.70，72.52，71.91，69.19，63.76，51.10，50.54，47.08，40.73，39.87，37.77，31.23，22.13，20.98，18.52，14.28，14.15，13.55。
实施例9
制备A：6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A
在环境温度下，将6-O-甲基-15-甲基红霉素A(15.1g)和280mL的0.5N HCl的混合物搅拌3小时。通过加入6N NaOH把pH调至9，经真空过滤收集生成的沉淀，用水洗涤，干燥。用每份400mL的乙酸乙酯把滤液提取3次。合并有机提取物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到进一步的产物。把合并的粗产物在硅胶上层析，得到9.35g纯的6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A。ES-LC/MS显示[M+H]+＝605。
制备B：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A
将乙酸酐(2.92mL)在35mL乙酸乙酯中的溶液滴加入到6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A(9.35g)在40mL乙酸乙酯中的溶液中。加入完成后，把混合物搅拌30分钟，然后浓缩。经硅胶层析(2∶1己烷/丙酮)得到8.35g的2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A。ES-LC/MS显示[M+H]+＝647。
制备C：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基红霉素A
将2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A(8.3g)和1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(16.51g)在64mL二氯甲烷和15.47mL二甲亚砜中的溶液置于惰性气氛下并在冰中冷却。以在4小时内完成加入的速度下加入三氟乙酸吡啶(16.63g)在64mL二氯甲烷中的溶液，并经薄层层析监测反应。在加入73％的溶液后观察到反应完成，然后经加入600mL乙酸乙酯和200mL饱和NaHCO3猝灭反应。收集有机层，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到8.4g的粗产物。经硅胶层析(3∶1己烷/丙酮)得到6.75g的2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基红霉素A。ES-LC/MS显示[M+H]+＝645。
制备D：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺酰基-15-甲基红霉素A
在0℃下，把甲磺酰氯(5.68mL)滴加入到2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基红霉素A(6.73g)在35mL吡啶中的溶液中。使混合物达到环境温度。经加入700mL乙酸乙酯和200mL饱和NaHCO3猝灭。收集有机层，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到8.2g的粗产物。经硅胶层析(5∶2己烷/丙酮)得到5.04g的2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺酰基-15-甲基红霉素A。ES-LC/MS显示[M+H]+＝723。
制备E：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-15-甲基红霉素A
将1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(5.22mL)滴加入到2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺酰基-15-甲基红霉素A(5.03g)在23mL丙酮中的溶液中。4.5小时后浓缩溶液，残余物经硅胶层析(5∶2己烷/丙酮)，得到3.72g的2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-15-甲基红霉素A。ES-LC/MS显示[M+H]+＝627。
实施例10
2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-2-氟-15-甲基-红霉素A的合成
在惰性气氛下，将2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-15-甲基-红霉素A(198mg，0.316mmol)在2.1mL四氢呋喃中的溶液冷却至-78℃并用0.931mL在四氢呋喃中的1.0M叔丁醇钾处理。把混合物搅拌5分钟并于2小时内分3份加入N-氟代苯磺酰亚胺(230mg)在0.5mL在四氢呋喃中的溶液。加入后，使反应物温热至环境温度并保持另外5小时。加入K2CO3水溶液，用每份50mL的CH2Cl2提取混合物。合并有机提取物，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。硅胶层析(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)得到95mg为白色固体的产物。ES-LC/MS：[M+H]+＝645。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ206.95，203.02(br)，169.77，166.08(d，JCF＝23 Hz)，141.71，138.43，101.63，98.02(d，JCF＝203 Hz)，80.09(br)，79.71，78.27，73.26，71.52，69.08，63.33，49.18，40.61，40.32，41.79，40.61，40.32，31.56，31.47，30.50，24.37(d，JCF＝23Hz)，23.19，22.63，20.95，20.68，19.80，19.47，14.10，14.00，13.55。
实施例11
制备A：化合物4转化为化合物7，其中X＝H，R13＝丙基和Ra＝烯丙基。
步骤1：在惰性气氛下，将2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(7.8g，7.44mmol)在30mL四氢呋喃中的溶液在冰中冷却并用30mL二甲亚砜和2.58mL新蒸镏的烯丙基溴处理。以每小时1.33摩尔当量的碱的速度加入二甲亚砜(29.8mL)和1.0M叔丁醇钾在四氢呋喃(29.8mL)中的混合物。经薄层层析(硅胶，10∶1甲苯/丙酮)监测反应并在加入3.6摩尔当量的碱后判断反应完成。用700mL乙酸乙酯稀释反应物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到8.08g的粗品6-O-烯丙基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A 9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟。它无须进一步纯化即可进行下一步。
步骤2：将6-O-烯丙基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(8.08g)在42mL乙腈中的溶液用21mL水和24mL乙酸处理并在环境温度下搅拌18小时。加入2-丙醇后浓缩混合物，然后在加入甲苯后重复操作，得到7.7g的粗产物。硅胶层析(梯度从2∶1至1∶1己烷/丙酮+1％Et3N)得到3.75g的6-O-烯丙基-15-甲基红霉素A9-肟。
步骤3：将6-O-烯丙基-15-甲基红霉素A9-肟(3.75g)和亚硫酸氢钠(85％，5.37g)在66mL的1∶1乙醇/水中的溶液置于惰性气氛下。滴加甲酸(0.845mL)并在80℃下搅拌混合物3.5小时。冷却至环境温度后，用6N NaOH把反应物调至pH10，用每份150mL的乙酸乙酯提取3次。合并有机提取物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到3.42g的适合于进一步转化的6-O-烯丙基-15-甲基红霉素A。
制备B：化合物4转化为化合物7，其中X＝H，R13＝甲基和Ra＝烯丙基。
步骤1：在惰性气氛下，将2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(202mg)在四氢呋喃(0.4mL)、DMSO(0.4mL)和乙醚(0.04mL)中的溶液冷却至10℃并用0.035mL新蒸镏的烯丙基溴处理。以0.22mL/小时的速度加入二甲亚砜(0.4mL)和1.0M叔丁醇钾在四氢呋喃(0.4mL)中的混合物。经薄层层析(硅胶，5∶1甲苯/丙酮)监测反应。用乙酸乙酯稀释反应物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到222mg的粗品6-O-烯丙基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟。它无须进一步纯化即可进行下一步。
步骤2：将6-O-烯丙基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(222mg)在4mL乙腈中的溶液用2mL水和2.4mL乙酸处理并在环境温度下搅拌18小时。加入2-丙醇后浓缩混合物，然后在加入甲苯后重复操作，得到220mg的粗品6-O-烯丙基-14-去甲红霉素A9-肟。
步骤3：将6-O-烯丙基-14-去甲红霉素A9-肟(220mg)和亚硫酸氢钠(85％，322mg)在4mL的1∶1乙醇/水中的溶液置于惰性气氛下。滴加甲酸(0.050mL)，在80℃下把混合物搅拌15小时。冷却至环境温度后，用6N NaOH把反应物调至pH10，用每份150mL的乙酸乙酯提取3次。合并有机提取物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到156mg的适合于进一步转化的6-O-烯丙基-14-去甲红霉素A。
其它的实施方案：类似地可制备其它实施方案的化合物7，其中Ra为烯丙基并具有其它C-13取代基(例如，R13为3-丁烯基、丁基、苄基、乙烯基、2-叠氮基乙基、2-氟乙基或3-羟基丁基)。
实施例12
化合物7转化为化合物10(流程2)
步骤1：在环境温度下，将在实施例11中制备的化合物(77mg，粗品)、0.073ml的12N HCl和水(2ml)的混合物搅拌3小时。用8N KOH把混合物调至pH8并用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机提取物，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物经硅胶层析(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到为白色固体的纯的产物(42mg)。
步骤2：为保护2’OH，在环境温度下，将以上化合物(73mg)、碳酸钾(20mg)、乙酸酐(14μl)和丙酮(1ml)的混合物搅拌18小时。加入乙酸乙酯，用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物经硅胶层析(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到为白色固体的纯的产物(71mg)。
步骤3：将步骤2生成的化合物(99mg)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)盐酸盐(206mg)在二氯甲烷(2ml)中的溶液用DMSO(0.21ml)处理并冷却至5℃。借助注射器泵于4小时内加入三氟乙酸吡啶(208mg)在二氯甲烷(2ml)中的溶液。然后加入乙酸乙酯，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤。经MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物经硅胶层析(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)，得到纯的产物(94mg，Ra为烯丙基，R2为乙酸酯和R13为CH3)。
步骤4：为将2’OH脱除保护，在室温下，将步骤3生成的化合物(94mg)在5mL甲醇中的溶液搅拌24小时。真空除去溶剂，得到所需产物(Ra为烯丙基，R2为H和R13为CH3)。
其它的实施方案：类似地可制备其它实施方案的化合物10，其中Ra为烯丙基并具有其它C-13取代基(例如，R13为3-丁烯基、丁基、苄基、乙烯基、2-叠氮基乙基、2-氟乙基或3-羟基丁基)。
实施例13
-ORa的转化
A.烯丙基→丙基
将来自实施例12的步骤3或4的化合物(0.2mmol)在乙醇中的溶液用氮气吹洗并加入10％披钯碳(20mg)。然后用氢气吹洗混合物，并在正氢气压下，把反应混合物搅拌过夜。过滤反应混合物并真空浓缩，得到玻璃样物质。经硅胶层析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到为白色固体的丙基化合物。
B.烯丙基→CH2CHO
向得自实施例12的步骤3或4的化合物(4.0mmol)在二氯甲烷(100mL)中的-78℃溶液通入臭氧45分钟。然后用氮气把反应混合物冲洗10分钟。在-78℃下加入二甲硫(1.46mL，20mmol)并在0℃下把反应混合物搅拌30分钟。真空浓缩反应混合物，得到白色泡沫，通过把化合物在THF中的溶液(40mL，4.0mmol)和三苯基膦(2.62g，10.0mmol)在55℃下加热2.5小时，其无须进一步纯化即可使用。真空浓缩反应混合物，得到白色泡沫。经硅胶层析(1∶1丙酮-己烷，然后75∶25∶0.5丙酮-己烷-三乙胺)得到为白色固体的所需化合物。
C.烯丙基→CH2CH＝NOH
向在B中制备的化合物(0.08mmol)，其中Ra为-CH2CHO，在甲醇(5mL)中的溶液中加入三乙胺(31μL，0.225mmol)和盐酸羟胺(7.7mg，0.112mmol)并在环境温度下把反应混合物搅拌6小时。用乙酸乙酯处理反应混合物，用5％碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到透明的玻璃样物质。经硅胶层析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到为白色固体的化合物。
D.-CH2CH＝NOH→-CH2CN
于氮气下，向在C中制备的化合物(0.267mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入二异丙基碳二亚胺(83μL，0.534mmol)和CuCl(2.7mg，0.027mmol)并在环境温度下把反应混合物搅拌过夜。用乙酸乙酯处理反应混合物，用5％碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到透明的玻璃样物质。经硅胶层析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到为白色固体的所需化合物。
E.-CH2CHO→-CH2CH2NH2
向在B中制备的化合物(0.276mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入乙酸铵(212mg，2.76mmol)并把混合物冷却至0℃。加入氰基硼氢化钠(34mg，0.553mmol)，在0℃下把反应混合物搅拌30小时。用乙酸乙酯处理反应混合物，用5％碳酸钠水溶液、2％三(羟甲基)氨基甲烷水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。经硅胶层析(90∶10∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到为白色固体的所需化合物。
F.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2-苯基
向在B中制备的化合物(0.200mmol)在甲醇(10mL)中的0℃下的溶液中加入乙酸(114μL，2.00mmol)和苄基胺(218μL，2.00mmol)并把混合物搅拌10分钟。加入氰基硼氢化钠(24.8mg，0.400mmol)并把反应混合物搅拌16小时。然后加入另外的氰基硼氢化钠(24.8mg，0.400mmol)并继续搅拌5小时。用乙酸乙酯处理反应混合物，用5％碳酸钠水溶液、2％三(羟甲基)氨基甲烷水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。经硅胶层析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)，随后经第二个层析(50∶50∶0.5丙酮-己烷-三乙胺)得到为白色泡沫的所需化合物。
G.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2CH2-苯基
向在B中制备的化合物(0.200mmol)在甲醇(10mL)中的0℃的溶液中加入乙酸(114μL，2.00mmol)和苯乙基胺(218μL，2.00mmol)并把混合物搅拌10分钟。加入氰基硼氢化钠(24.8mg，0.400mmol)并把反应混合物搅拌16小时。用乙酸乙酯处理反应混合物并用5％碳酸钠水溶液、2％三(羟甲基)氨基甲烷水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。经硅胶层析(90∶10∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到所需化合物。
H.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH(CO2CH3)CH2-苯基
向在B中制备的化合物(0.200mmol)在甲醇(10mL)中的0℃的溶液中加入L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(129mg，0.600mmol)并把混合物搅拌10分钟。加入氰基硼氢化钠(24.8mg，0.400mmol)并把反应混合物搅拌22小时。用乙酸乙酯处理反应混合物并用5％碳酸钠水溶液、2％三(羟甲基)氨基甲烷水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。经硅胶层析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到所需化合物。
I.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2-(4-吡啶基)
除了用4-氨基甲基吡啶替代苯乙基胺，按照在G中的方法制备所需化合物。
J.-CH2CH2NH2→-CH2CH2NHCH2-(4-喹啉基)
向在E中制备的化合物(0.15mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中加入4-喹啉甲醛(23mg，0.15mmol)、乙酸(8.6μL，0.15mmol)和氰基硼氢化钠(9.4mg，0.15mmol)并把反应混合物搅拌15小时。用乙酸乙酯处理反应混合物并用5％碳酸钠水溶液、2％三(羟甲基)氨基甲烷水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。经硅胶层析(95∶10∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到所需化合物。
K.烯丙基→-CH2CH＝CH-苯基
向在实施例12中制备的2’保护的化合物(1.00mmol)、乙酸钯(II)(22mg，0.100mmol)和三苯基膦(52mg，0.200mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中于氮气下加入碘代苯(220μL，2.00mmol)和三乙胺(280μL，2.00mmol)并把混合物冷却至-78℃，脱气，密闭。然后，把反应混合物温热至60℃反应0.5小时并在80℃下搅拌12小时，用乙酸乙酯处理，用5％碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用2％三(羟甲基)氨基甲烷水溶液洗涤一次和用盐水洗涤一次，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。经硅胶层析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到所需化合物。
通过在甲醇中加热完成脱保护。
化合物10的其它实施方案包括那些化合物，其中R2为H；R13为丙基、丁基、苄基、乙烯基、3-丁烯基、2-氟代乙基、2-叠氮基乙基或3-羟基丁基。其它的实施方案包括那些化合物，其中Ra为表1中列出的成员
表1
-CH2CH2CH2-苯基； -CH2CH＝CH-(4-甲氧基苯基)；
-CH2CH＝CH-氯代苯基)； -CH2CH＝CH-(3-喹啉基)；
-CH2CH2CH2OH； -CH2C(O)OH；
-CH2CH2NHCH3； -CH2CH2NHCH2OH；
-CH2CH2N(CH3)2； -CH2CH2(1-吗啉基)；
-CH2C(O)NH2； -CH2NHC(O)NH2；
-CH2NHC(O)CH3； -CH2F；
-CH2CH2OCH3； -CH2CH3；
-CH2CH＝CH(CH3)2； -CH2CH2CH(CH3)CH3；
-CH2CH2OCH2CH2OCH3； -CH2SCH3；
-环丙基； -CH2OCH3；
-CH2CH2F； -CH2-环丙基；
-CH2CH2CHO； -C(O)CH2CH2CH3；
-CH2-(4-硝基苯基) -CH2-(4-氯代苯基)；
-CH2-(4-甲氧基苯基) -CH2-(4-氰基苯基)；
-CH2CH＝CHC(O)OCH3； -CH2CH＝CHC(O)OCH2CH3；
-CH2CH＝CHCH3； -CH2CH＝CHCH2CH3；
-CH2CH＝CHCH2CH2CH3； -CH2CH＝CHSO2-苯基；
-CH2C≡CSi(CH3)3 -CH2C≡CCH2CH2CH2CH2CH2CH3；
-CH2C≡CCH3； -CH2-(2-吡啶基)；
-CH2-(3-吡啶基)； -CH2-(4-吡啶基)；
-CH2-(4-喹啉基)； -CH2NO2；
-CH2C(O)OCH3； -CH2C(O)-苯基；
-CH2C(O)CH2CH3； -CH2Cl；
-CH2S(O)2-苯基； -CH2CH＝CHBr；
-CH2CH＝CH-(4-喹啉基)； -CH2CH2CH2-(4-喹啉基)；
-CH2CH＝CH-(5-喹啉基)； -CH2CH2CH2-(5-喹啉基)；
-CH2CH＝CH-(4-苯并唑基)；或 -CH2CH＝CH-(7-苯并咪唑基)
实施例14
2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-脱克拉定糖基-11-脱氧-3-氧代-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯的制备
A：6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基-红霉素A
在环境温度下，将6-O-烯丙基-15-甲基红霉素A(6.58g)和125mL的0.5N HCl的混合物搅拌20小时。通过加入6N NaOH把pH调至10，用每份225mL的乙酸乙酯把混合物提取3次。合并有机提取物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，蒸发。粗产物经硅胶层析(3∶2甲苯/丙酮+1％Et3N)，得到3.04g纯的6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A。ES-LC/MS显示[M+H]+＝617。
B：2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基-红霉素A
将6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A(2.43g，3.86mmol，1.00当量)和苯甲酸酐(1.78g，7.72mmol，2.00当量)置于圆底烧瓶中并用N2吹洗。加入乙酸乙酯(17.5 mL)。把溶液搅拌3.5小时，然后用400mL的EtOAc稀释，用150mL饱和NaHCO3水溶液洗涤两次，用150mL水和盐水各洗涤一次。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。经硅胶快速层析(3∶1 己烷∶丙酮+1％Et3N)纯化，得到1.94g(68.1％)为白色固体的所需产物。ES-LC/MS显示[M+H]+＝721。13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δ219.4，174.3，165.4，135.3，132.6，130.8，129.7，128.2，117.2，99.7，80.7，79.0，77.9，77.7，75.1，74.3，72.3，69.0，64.7，63.3，45.6，43.9，40.7，37.9，37.7，35.7，32.1，30.8，21.1，20.2，19.3，18.1，16.3，15.1，14.0，12.4，7.7。
C：2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基-红霉素A
在N2下，将N-氯代琥珀酰亚胺(0.510g，3.82mmol，1.50当量)溶于13mL无水CH2Cl2中并冷却至-10℃。加入二甲硫(0.328mL，4.46mmol，1.75当量)并把反应物搅拌15分钟。滴加2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A(1.87g，2.55mmol，1.00当量)在13mL无水CH2Cl2中的溶液。30分钟后，加入新蒸镏的Et3N(0.355mL，2.55mmol，1.00当量)；于30分钟内把反应物温热至0℃。用400mL EtOAc稀释反应混合物，连续用每次100mL的饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机层，过滤，浓缩，经快速层析(9∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)纯化，得到0.931g(49.9％)为白色固体的所需产物。ES-LC/MS显示[M+H]+＝719。13C NMR(100.6MHz，CDCl3)δ219.1，206.1，169.5，165.3，135.3，132.7，129.0，129.7，128.3，117.4，100.7，78.5，76.6，75.3，74.2，72.1，69.2，69.0，64.5，63.7，50.6，45.3，44.8，40.7，38.3，37.8，31.7，31.0，21.1，20.2，19.5，18.1，16.5，14.5，14.0，12.6，12.2。
D：2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺酰基-15-甲基-红霉素A
将2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基红霉素A(904mg，1.24mmol，1.00当量)溶于新蒸镏的吡啶(4mL)中并冷却至0℃。滴加甲磺酰氯(0.478mL，6.17mmol，5.00当量)。使反应物回到环境温度并搅拌过夜。用350mL的EtOAc稀释混合物，用100mL的饱和NaHCO3水溶液猝灭。分离这些层，连续用每次100mL的水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。经硅胶快速层析(4∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)纯化，得到741mg(74.1％)为白色固体的所需化合物。13C NMR(100.6 MHz，CDCl3)δ203.0，168.9，165.0，137.6，133.1，130.3，129.8，128.5，114.4，108.8，102.2，91.1，84.4，81.6，78.8，72.2，69.2，64.3，63.9，52.1，46.6，45.8，40.7，38.8，38.2，35.9，31.8，30.9，29.7，24.8，21.0，19.6，18.2，15.5，15.4，13.8，13.5。
E：2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-15-甲基-红霉素A
将2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-甲磺酰基-15-甲基-红霉素A(705mg，0.870mmol，1.00当量)溶于丙酮(3mL)中，滴加1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.651mL，4.35mmol，5.00当量)。在环境温度下把反应物搅拌6小时，然后浓缩。经硅胶快速层析(4∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)，得到486mg(78.0％)为白色固体的所需化合物。13C NMR(100.6 MHz，CDCl3)δ210.1，208.4，170.2，165.2，141.0，140.2，136.3，132.7，130.4，129.8，128.2，115.5，100.6，81.0，78.7，77.2，73.8，72.0，69.1，64.6，63.3，51.0，47.4，40.8，39.4，36.2，31.9，31.3，23.6，21.2，21.1，21.0，19.4，14.1，13.9，13.7，13.1。
F：2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-脱克拉定糖基-11-脱氧-3-氧代-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯
在N2下，将2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-10，11-脱水-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基-红霉素A(227mg，0.317mmol，1.00当量)溶于1.3mL的新蒸镏的THF中并冷却至-15℃。加入氢化钠(25mg的60％在矿物油中的悬浮液，0.634mmol，2.00当量)，把反应物搅拌15分钟。滴加1，1-羰基二咪唑(140mg，0.866mmol，3.00当量)在1.3mL的新蒸镏的THF中的溶液。搅拌30分钟后，于1.5小时内使反应物温热至环境温度。用100mL的EtOAc稀释混合物，连续用每次30mL的饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩，得到275mg的粗产物(100％)，将其溶于2mL的ACN和0.2mL的无水THF中。加入饱和氢氧化铵水溶液(2mL)。把反应物密闭并搅拌2天。减压除去挥发物，将残余物再次溶于100mL EtOAc中。连续用每次30mL的饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤溶液。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。粗产物经快速层析(4∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)，得到184mg(76.5％)所需产物。
实施例15
制备式I化合物，其中R6为YZ，其中Y为-CH2-CH＝CH-，和Z为各种杂芳基。
制备A：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-喹啉基)
将2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-脱克拉定糖基-11-脱氧-3-氧代-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯(40mg，0.0528mmol，1.0当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)-氯仿加合物(14mg，0.014mmol，0.5当量)、三-邻甲苯基膦(17mg，0.055mmol，1.0当量)和3-溴代喹啉(72μl，0.53mmol，10当量)置于用N2吹洗的圆底烧瓶中。加入脱气的乙腈(1mL)和新蒸镏的Et3N(0.015ml，0.11mmol，2.0当量)。把反应物回流63小时。使混合物回到环境温度，用40mL的EtOAc稀释。连续用每次10mL的饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤溶液。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。粗产物经快速层析(梯度从5∶1至2∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)，得到34mg所需产物。
把以上产物(34mg)溶于1mL的甲醇中，密闭，在80℃下回流16小时。减压除去挥发物。快速层析(1∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)，得到为淡黄色固体的所需产物(25mg，61％经两步)。ES-LC/MS：[M+H]+＝780.5。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ217.44，205.37，169.48，157.69，149.71，147.61，132.51，129.96，129.56，129.15，129.05，128.49，128.05，126.70，102.90，83.42，78.71，76.42，75.91，70.22，69.53，65.83，64.31，58.12，50.81，46.29，46.12，45.05，48.18(2C)，39.05，37.31，31.64，28.19，21.15，20.18，19.43，18.05，14.38，14.11，13.76，13.63(2C)。
制备B：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-(6-氟代喹啉基)
使用3-溴-6-氟喹啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。ES-LC/MS：[M+H]+＝798.5。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ217.49，205.36，169.54，160.6(JCF＝248Hz)，157.68，149.05，144.69，131.84，131.64(JCF＝9 Hz)，130.28，129.63，129.31，128.7(JCF＝10Hz)，119.20(JCF＝27Hz)，110.87(JCF＝22Hz)，102.94，83.42，78.77，76.44，75.91，70.22，69.55，65.84，64.24，58.09，50.83，46.36，46.06，45.05，40.18(2C)，39.04，37.32，31.63，28.19，21.16，20.19，19.46，18.04，14.37，14.18，13.76，13.26(2C)。
制备C：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-(6-氯代喹啉基)
使用3-溴-6-氯喹啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。ES-LC/MS：[M+H]+＝814.5。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ217.48，205.35，169.55，157.67，149.90，145.92，132.42，131.49，130.80，130.44，129.92，129.49，129.46，128.71，126.57，102.94，83.41，78.78，76.45，75.91，70.22，69.54，65.83，64.23，58.07，50.83，46.39，45.99，45.04，40.17(2C)，39.03，37.32，31.62，31.53，28.18，21.16，20.17，19.49，18.04，14.36，14.21，13.76，13.61(2C)。
制备D：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(4-异喹啉基)
使用4-溴代异喹啉替代3-溴代异喹啉，按照制备A的方法制备。ES-LC/MS：[M+H]+＝781。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ217.19，205.43，169.75，157.39，152.07，140.74，133.61，130.65，130.44，128.07，127.72，127.05，126.89，122.77，102.85，83.28，78.74，75.72，70.22，69.51，65.88，64.45，58.10，50.91，46.07，45.09，48.18(2C)，38.99，37.34，31.48，29.66，28.28，21.18，20.39，19.33，14.53，14.01，13.86，13.66，13.62。
制备E：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-吡啶基)
使用3-溴代吡啶替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。LC/MS：[M+H]+＝731。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ217.39，205.27，169.50，157.61，148.81，148.68，132.63，132.16，129.65，128.18，123.46，102.91，83.36，78.63，76.35，75.79，70.20，69.52，65.83，64.17，58.06，50.78，46.28，45.03，40.16(2C)，38.96，37.29，31.64，31.52，28.19，22.58，21.14，20.21，19.42，18.04，1.35，14.12，14.05，13.79，13.61(2C)。
制备F：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-(6-甲基喹啉基)
使用3-溴-6-甲基喹啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。ES-LC/MS：[M+H]+＝795。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ217.37，205.35，169.47，157.65，148.82，146.23，136.45，131.87，131.37，130.09，129.51，128.78，128.22，128.06，126.86，102.87，83.40，78.68，75.91，70.20，69.47，65.83，64.33，58.11，50.81，46.28，45.04，40.15(2C)，39.05，37.31，31.64，28.24，21.52，2114，20.18，19.45，18.05，14.38，14.11，13.77，13.63(2C)。
制备G：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-(6-氨基喹啉基)
使用3-溴-6-氨基喹啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。ES-LC/MS：[M+H]+＝796。
制备H：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-(5-异唑-3-基)噻吩基)
使用5-(异唑-3-基)-2-溴代噻吩替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备I：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(6-喹啉基)
使用6-溴代喹啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备J：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-喹喔啉-6-基)
使用6-溴代喹喔啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备K：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(5-(N-(2-吡啶基)-2-糠酰胺基)
使用N-(2-吡啶基)5-溴-2-糠酰胺替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备L：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(1，8-二氮杂萘)
使用3-Br-1，8-二氮杂萘替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备M：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(1，5-二氮杂萘)
使用3-Br-1，5-二氮杂萘替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备N：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(1，6-二氮杂萘)
使用3-Br-1，6-二氮杂萘替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备O：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(6-嘌呤基)
使用6-Br-嘌呤替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备P：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(2-(四唑-5-基)苯基)
使用5-(2-溴代苯基)四唑)替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备Q：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-(异唑-5-基)-4-甲氧基苯基)
使用5-(5-溴-2-甲氧基苯基)异唑替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备R：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(尿嘧啶-5-基)
使用5-溴代尿嘧啶替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备S：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-CH＝CH-(尿嘧啶-5-基)
使用5-(2-溴代乙烯基)尿嘧啶)替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备T：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(3-(6-甲氧基喹啉基)
使用3-溴-6-甲氧基喹啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备U：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(5-喹啉基)
使用5-溴代喹啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
制备V：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CH＝CH-(7-喹啉基)
使用7-溴代喹啉替代3-溴代喹啉，按照制备A的方法制备。
在制备A-S中制备的化合物的2-氟代衍生物
在各自的制备中，通过用2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-脱克拉定糖基-11-脱氧-3-氧代-2-氟-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯起始，替代2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-脱克拉定糖基-11-脱氧-3-氧代-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯，可制备在制备A-S中描述的化合物的相应的2-氟代衍生物。对2-氟代衍生物的示例性NMR数据的实例为在制备A中制备的化合物的2-氟代对应物，其中Ra为-CH2-CH＝CH-(3-喹啉基)。LC/MS：[M+H]+＝798.6。19F-NMR(CDCl3，376MHz)：δ-163.93。13C-NMR(CDCl3，100MHz)：δ217.97，204.28(JCF＝27Hz)，165.62(JCF＝23Hz)，157.18，149.71，147.70，132.65，130.25，129.53，129.22，129.12，129.06，128.15，128.08，126.78，104.10，98.02(JCF＝206Hz)，83.40，79.59，79.37，77.57，70.41，69.74，65.85，64.36，58.11，44.23，40.83(JCF＝1.5Hz)，40.25(2C)，39.04，37.45，31.37，28.16，25.30(JCF＝22Hz)，21.19，20.86，19.54，17.67，15.46(JCF＝1.7Hz)，13.82，13.80，13.29。
在制备A-S中制备的化合物的丙基衍生物(其中Y为丙基)
如下可制备其中丙烯基被还原为丙基的相应的化合物。将在制备A-S中制备的任何化合物(包括它们的C-2氟化对应物)溶于2∶1甲醇/乙酸乙酯(100mL)中。用氮气吹洗混合物，加入10％披钯碳(150mg)。用氢气替代氮气氛，在1大气压的H2压力下剧烈搅拌悬浮液。通过薄层层析监测反应，当反应完全时过滤并浓缩至干。经硅胶层析纯化产物。
实施例16
2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-11-氨基-3-脱克拉定糖基-11-脱氧-3-氧代-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯的制备
A.6-O-炔丙基-15-甲基红霉素A
在惰性气氛下，将2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(100mg)在0.1mL四氢呋喃、0.1mL乙醚和0.1mL的DMSO中的溶液冷却至10℃并用0.028mL的3-溴-1-(三甲基甲硅烷基)-1-丙炔处理。以每小时2.0摩尔当量的碱的速度加入二甲亚砜(0.19mL)和1.0M叔丁醇钾在四氢呋喃(0.38mL)中的混合物。在0.5和1小时后加入另外当量(0.014mL)的TMS-炔丙基溴。经薄层层析(硅胶，10∶1甲苯/丙酮)监测反应，并在加入2.3摩尔当量的碱后判断反应完成。用100mL乙酸乙酯和30mL饱和NaHCO3稀释反应物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发。粗产物经硅胶层析(40∶1己烷/丙酮+1％Et3N)，得到部分纯化的6-O-(3-三甲基甲硅烷基)炔丙基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟。
将来自以上的不纯的6-O-(3-三甲基甲硅烷基)炔丙基-2’，4”-双-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基红霉素A9-[O-(1-异丙氧基环己基)]肟(0.88g)在4.4mL乙腈中的溶液用2.2mL水和2.5mL乙酸处理并在环境温度下搅拌24小时。在加入2-丙醇后浓缩混合物，然后在加入甲苯后重复操作。把该物料与碳酸钾和甲醇(6mL)搅拌2.5小时。用乙酸乙酯(200mL)稀释混合物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到产物。
将生成的产物和亚硫酸氢钠(0.59g)在7mL的1∶1乙醇/水中的溶液置于惰性气氛下。滴加甲酸(0.096mL)并在80℃下把混合物搅拌5小时。冷却至环境温度后，用6N NaOH把反应物调至pH10，用每份150mL的乙酸乙酯提取3次。合并有机提取物，连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，蒸发，得到适合于进一步转化的6-O-炔丙基-15-甲基红霉素A。通过硅胶层析可制备纯的物质。
B.6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基-红霉素A
在环境温度下，将6-O-炔丙基-15-甲基红霉素A(0.40g)和6mL的0.6N HCl的混合物搅拌17小时。通过加入6N NaOH把pH调至9，加入150mL乙酸乙酯。连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤有机提取物，然后经MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到另外的产物。将粗产物在硅胶上层析，得到纯的6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A。
C. 2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基-红霉素A
将6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A(0.16g)和苯甲酸酐(0.12g)在1.3mL乙酸乙酯中的溶液搅拌17小时，然后连续用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥溶液，过滤，蒸发。将粗产物在硅胶上层析，得到2 ’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A。
D.2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基-红霉素A
在N2下，将N-氯代琥珀酰亚胺(0.510g，3.82mmol，1.50当量)溶于13mL无水CH2Cl2中并冷却至-10℃。加入二甲硫(0.328mL，4.46mmol，1.75当量)，把反应物搅拌15分钟。滴加2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-15-甲基红霉素A(1.87g，2.55mmol，1.00当量)在13mL无水CH2C12中的溶液。30分钟后，加入新蒸镏的Et3N(0.355mL，2.55mmol，1.00当量)，于30分钟内把反应物调至0℃。用400mL的EtOAc稀释反应混合物，连续用每次100mL饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机层，过滤，浓缩，经层析纯化。
E.2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺酰基-15-甲基-红霉素A
将2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基红霉素A(904mg)溶于新蒸镏的吡啶(4mL)中并冷却至0℃。滴加甲磺酰氯(0.478mL，6.17mmol，5.00当量)。使反应物回复到环境温度并搅拌过夜。用350mL的EtOAc稀释混合物，用100mL的饱和NaHCO3水溶液猝灭。分离这些层，用每次100mL的水和盐水连续洗涤有机相。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。经硅胶快速层析得到产物。
F.2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-15-甲基-红霉素A
将2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-甲磺酰基-15-甲基-红霉素A(705mg)溶于丙酮(3mL)中，滴加1，8-二氮杂双环[5.4.0]-十一碳-7-烯(0.651mL，4.35mmol，5.00当量)。在环境温度下把反应物搅拌6小时，然后浓缩。经硅胶快速层析得到产物。
G.2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-11-氨基-3-脱克拉定糖基-11-脱氧-3-氧代-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯
在N2下，将2 ’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-10，11-脱水-3-脱克拉定糖基-3-氧代-15-甲基红霉素A(227mg)溶于1.3mL的新蒸镏的THF中并冷却至-15℃。加入氢化钠(25mg的60％在矿物油中的悬浮液，0.634mmol，2.00当量)，把反应物搅拌15分钟。滴加1，1-羰基二咪唑(140mg)在1.3mL的新蒸镏的THF中的溶液。搅拌30分钟后，于1.5小时内使反应物温热至环境温度。用100mL的EtOAc稀释混合物，连续用每次30mL的饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩，然后将残余物溶于2mL的ACN和0.2mL的无水THF中。加入饱和氢氧化铵水溶液(2mL)。把反应物密闭并搅拌2天。减压除去挥发物，将残余物再次溶于100mLEtOAc中。连续用每次30mL的饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤溶液。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。快速层析得到环状氨基甲酸酯产物。
实施例17
式(I)化合物：X＝H，R6＝O-3-(喹啉-3-基)丙-2-炔基的合成
制备A：式(I)：X＝H，Ra为-CH2-CC-(3-喹啉基)
步骤1：将2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-11-氨基-3-脱克拉定糖基-11-脱氧-3-氧代-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯(40mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)-氯仿加合物(14mg)、三-邻甲苯基膦(17mg)、碘化铜和3-溴代喹啉(72μl，0.53mmol，10当量)置于用N2吹洗的圆底烧瓶中。加入脱气的乙腈(1mL)和新蒸镏的Et3N(0.015ml，0.11mmol，2.0当量)。把反应物回流63小时。使混合物回升至环境温度，用40mL的EtOAc稀释。连续用每次10mL的饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤溶液。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。快速层析得到所需产物。
步骤2：把以上产物溶于1mL甲醇中，密闭，在80℃下回流16小时。减压除去挥发物。快速层析得到所需产物。
式I化合物的制备，其中R6为YZ，其中Y为丙炔基.
除了用合适的卤代杂环替代3-溴代喹啉，以如制备A描述的类似方法制备这些化合物的2-氢和2-氟衍生物。如由实施例15描述的，通过还原丙炔基也可从这些化合物(包括C-2氟代对应物)制备其中Y为丙基的相应化合物。如由该实例和实施例15描述的类似方式可制备在R13具有其它基团的实施方案。
实施例18
5-O-(2’-乙酰基德糖胺基(desosaminyl))-10，11-脱水-3，6-二脱氧-3-氧代-14-去甲红霉内酯环A的合成
制备A：5-O-德糖胺基-10，11-脱水-6-脱氧-14-去甲红霉内酯环A
将来自发酵液的6-脱氧-14-去甲红霉素A、B、C和D的混合物(0.5g)溶于二氯甲烷(6mL)中并用氯代三甲基硅烷(0.144mL)和1-三甲基甲硅烷基咪唑(0.20mL)处理。10分钟后，用1N NaOH处理反应物并用二氯甲烷提取三次。合并有机提取物，用饱和NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到泡沫状物质。把该物质溶于四氢呋喃(5mL)中，用1，1’-羰基二咪唑(0.45g)和氢化钠(50mg在油中的60％悬浮液，用己烷洗涤)处理。在70℃下将混合物加热1小时，然后冷却并用1NNaOH处理，用乙酸乙酯提取三次。合并有机提取物，用饱和NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发至干。把生成的产物混合物溶于乙醇(0.5mL)中，用在水中的2％HCl(1mL)处理以裂解3-O-葡糖基。经层析回收产物。质谱显示[M+H]+＝559。
制备B：5-O-(2’-乙酰基德糖胺基)-10，11-脱水-6-脱氧-14-去甲红霉内酯环A
在环境温度下，将5-O-德糖胺基-10，11-脱水-6-脱氧-14-去甲红霉内酯环A(0.5g)在丙酮(10mL)中的溶液用乙酸酐(0.10mL)和碳酸钾(0.15g)处理24小时，过滤，浓缩至干，得到产物。质谱显示[M+H]+＝601。
制备C：5-O-(2’-乙酰基德糖胺基)-10，11-脱水-3，6-二脱氧-3-氧代-14-去甲红霉内酯环A
将5-O-(2’-乙酰基德糖胺基)-10，11-脱水-6-脱氧-14-去甲-红霉内酯环A(0.5g)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.0g)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用二甲亚砜(1.0mL)处理并冷却至5℃。滴加三氟乙酸吡啶(1.0g)在二氯甲烷(10mL)中的溶液，把混合物在5℃下搅拌2小时。用乙酸乙酯稀释混合物，用水和饱和NaCl洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，蒸发至干。经层析纯化产物。质谱显示[M+H]+＝599。
实施例19
 5-O-(2’-乙酰基德糖胺基)-10，11-脱水-3，6-二脱氧-3-氧代-14，15-脱氢红霉内酯环A的合成
制备A：5-O-德糖胺基-10，11-脱水-6-脱氧-14，15-脱氢红霉内酯环A
将来自发酵液的6-脱氧-14，15-脱氢红霉素A、B、C和D的混合物(0.5g)溶于二氯甲烷(6mL)中并用氯代三甲基硅烷(0.144mL)和1-三甲基甲硅烷基咪唑(0.20mL)处理。10分钟后，用1N NaOH处理反应物并用二氯甲烷提取三次。合并有机提取物，用饱和NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到泡沫状物质。把该物质溶于四氢呋喃(5mL)中并用1，1’-羰基二咪唑(0.45g)和氢化钠(50mg在油中的60％悬浮液，用己烷洗涤)处理。在70℃下将混合物加热1小时，然后冷却并用1N NaOH处理，用乙酸乙酯提取三次。合并有机提取物，用饱和NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发至干。把生成的产物混合物溶于乙醇(0.5mL)中，用在水中的2％HCl(1mL)处理以裂解3-O-葡糖基。经层析回收产物。
制备B：5-O-(2’-乙酰基德糖胺基)-10，11-脱水-6-脱氧-14，15-脱氢红霉内酯环A
在环境温度下，将5-O-德糖胺基-10，11-脱水-6-脱氧-14，15-脱氢红霉内酯环A(0.5g)在丙酮(10mL)中的溶液用乙酸酐(0.10mL)和碳酸钾(0.15g)处理24小时，过滤，浓缩至干，得到产物。
制备C：5-O-(2’-乙酰基德糖胺基)-10，11-脱水-3，6-二脱氧-3-氧代-14，15-脱氢红霉内酯环A
将5-O-(2’-乙酰基德糖胺基)-10，11-脱水-6-脱氧-14，15-脱氢红霉内酯环A(0.5g)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.0g)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用二甲亚砜(1.0mL)处理并冷却至5℃。滴加三氟乙酸吡啶(1.0g)在二氯甲烷(10mL)中的溶液，把混合物在5℃下搅拌2小时。用乙酸乙酯稀释混合物，用水和饱和NaCl洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，蒸发至干。经层析纯化产物。
实施例20
5-O-(2’-乙酰基德糖胺基)-10，11-脱水-3，6-二脱氧-3-氧代-15-甲基红霉内酯环A的合成
该实施例为一个用于从缺乏C-6羟基的红霉素化合物制备3-氧代-10，11-脱水前体的实施方案，该红霉素化合物用于制备3-酮基11，12-氨基甲酸酯衍生物。流程6阐明制备6-脱氧-13-丙基-红霉素C的方法。
流程6
步骤1
向化合物6-A(220mg，0.307mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(50mg)和乙酸酐(100μL，0.9mmol)，将反应物在室温下搅拌16小时。过滤溶液，加入氢氧化钠(1N，25mL)和盐水(25mL)，用乙酸乙酯把水层提取6次。经硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去溶剂。粗产物6-B可用于下一步骤。
步骤2：
将化合物6-B(来自反应1的粗产物)溶于吡啶(5mL)中并加入甲磺酰氯(70μL，0.9mmol)。在-20℃下把反应物搅拌2天，倾入到氢氧化钠(1N，25 mL)和盐水(25mL)中，用乙酸乙酯提取水层6次。经硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去溶剂。经经硅胶层析(甲苯/丙酮＝3∶1，1％氢氧化铵)纯化残余物，得到化合物6-C(190mg，两步68％)。
步骤3：
将化合物6-C(190mg，0.21mmol)溶于丙酮(7mL)中并加入DBU(63μL，0.42mmol)，在室温下把反应物搅拌过夜。将混合物倾入到氢氧化钠(1N，25 mL)和盐水(25mL)中，用乙酸乙酯提取水层6次。经硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去溶剂。粗产物6-D用于下一步骤。
步骤4：
向化合物6-D(来自前面步骤的粗产物)中加入盐酸(30mL，3N)和乙醇(2mL)并把混合物剧烈搅拌6小时。加入氢氧化钠(5mL，10N)，用乙酸乙酯提取水层6次。经硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去溶剂。粗产物6-E用于下一步骤。
步骤5：
向在二氯甲烷(5mL)中的化合物6-E(来自前面步骤的粗产物)中加入乙酸酐(50μL，0.45mmol)和碳酸钾(100mg)并把混合物剧烈搅拌9小时。过滤反应物，加入氢氧化钠(20mL，1N)和盐水(25mL)，用乙酸乙酯提取水层6次。经硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去溶剂。经经硅胶层析(甲苯/丙酮＝3∶1，1％氢氧化铵)纯化残余物，得到化合物6-F(110mg，89％三步)。
步骤6：
将化合物6-F(110mg，0.184mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中并加入Dess-Martin试剂(220mg，0.53mmol)。在室温下，把反应物搅拌45分钟。用氢氧化钠(20mL，1N)和盐水(25mL)猝灭反应物，用乙酸乙酯提取水层6次。经硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去溶剂。经经硅胶层析(甲苯/丙酮，梯度＝6∶1-3∶1，1％氢氧化铵)纯化残余物，得到化合物6-G(94mg，86％)。如先前描述的，化合物6-G可用于制备相应的11，12氨基甲酸酯衍生物。
实施例21
1-(4-氨基-2-丁烯基)-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶的合成
制备A：(E)-N-(4-溴-2-丁烯基)苯邻二甲酰亚胺
在室温下，将1，4-二溴-2-丁烯(23g，107.9mmol)和碳酸钾(16.39g，118.7mmol)在DMF(50mL)中的溶液用苯邻二甲酰亚胺钾(10g，53.9mmol)处理。10分钟后，使反应混合物搅拌24小时，过滤，真空浓缩。用乙酸乙酯(200mL)稀释生成的油，用饱和磷酸二氢钠水溶液(2×100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到带红色的油。经快速层析(0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到5.73g的标题化合物；质谱(CI)m/z＝303(M+H)。
制备B：1-[(E)-4-苯二酰亚氨基-2-丁烯基]-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶和3-[(E)-4-苯二酰亚氨基-2-丁烯基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶
在室温下，将NaH(1.02g，25.4mmol)在DMF(50mL)中的浆状物用4-氮杂苯并咪唑(2.90g，24.4mmol)处理。10分钟后，于30分钟内，用(E)-N-(4-溴-2-丁烯基)苯邻二甲酰亚胺(5.7g，20.3mmol)在DMF(5mL)中的溶液处理反应混合物。搅拌反应混合物1小时，然后通过小心加入水(5mL)猝灭，真空浓缩反应混合物。用CH2Cl2(50mL)稀释生成的残余物，用盐水(2×25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到灰白色固体。经快速层析(含有3％NH4OH的乙酸乙酯)纯化，得到2.08g的3-[(E)-4-苯二酰亚氨基-2-丁烯基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶。将层析溶剂变为含有5％NH4OH的5％甲醇/乙酸乙酯，得到1.66g的1-[(E)-4-苯二酰亚氨基-2-丁烯基]-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶；质谱(CI)m/z＝319(M+H)。
制备C：1-(4-氨基-2-丁烯基)-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶
在室温下，将1-[(E)-4-苯二酰亚氨基-2-丁烯基]-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶(2.19g，6.87mmol)在乙醇(100mL)中的溶液用肼单水合物(3.33mL，68.7mmol)处理。10分钟后，把反应混合物温热至60℃2小时，使之冷却至25℃，在冰浴中再次冷却至0℃。过滤生成的浆状物，真空浓缩滤液。经快速层析(6％NH4OH/乙醇)纯化，得到0.92g的标题化合物；质谱(CI)m/z＝211(M+H)。
实施例22
式I化合物，其中R6＝OCH3，R13＝正丙基，X＝H，R＝1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基丁基(在表2中的化合物K)
步骤1：化合物12(流程3)，其中Ra＝CH3，R13＝正丙基，X＝H，R2＝乙酰基
在-10℃、氮气下，将化合物11(625mg，1.00mmol)，其中Ra＝CH3，R13＝正丙基，X＝H，R2＝乙酰基，在N，N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液用氢化钠(60wt％在矿物油中，80mg，2.00mmol)处理。30分钟后，用1，1’-羰基二咪唑(490mg，3.02mmol)处理生成的反应混合物，使反应混合物在-10℃下搅拌2小时。用水(30mL)猝灭反应混合物并用乙醚(3×30mL)提取。用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，真空浓缩，得到为灰白色泡沫的化合物12。
步骤2：式I化合物，其中R6＝OCH3，R13＝正丙基，X＝H，R＝1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基丁基
将化合物12(1.00mmol)，其中Ra＝CH3，R13＝正丙基，X＝H，R2＝乙酰基，和1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基丁基胺(570mg，3.00mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液加热至60℃24小时。使反应混合物冷却至室温，用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(3×30mL)提取。用水(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，得到油状残余物。(通过硅胶柱上的快速层析(0-5％甲醇在含有1-2％浓氢氧化铵的二氯甲烷中)可实现对其中R2为十六烷基的相应化合物的纯化)。把残余物溶于甲醇(20mL)中，使生成的混合物在室温下搅拌18小时。真空浓缩反应混合物，经硅胶快速层析(95∶5∶0.5二氯甲烷/甲醇/浓氢氧化铵)获得纯化，得到标题化合物(487mg，61％)。
实施例23
式I化合物，其中R6＝OCH3，R13＝正丙基，X＝F，R＝1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基丁基(在表2中的化合物O)
除了在步骤1中使用化合物11的C-2氟代对应物，其中Ra＝CH3，R13＝正丙基，X＝F，R2＝乙酰基，替代未氟代的变体，其中Ra＝CH3，R13＝正丙基，X＝H，R2＝乙酰基外，如在实施例21中所述制备标题化合物。产率＝25％。以相同的方式，通过用合适的起始物料开始，可制备具有不同的R13取代基(例如甲基、乙烯基、丁基、3-丁烯基、2-氟代乙基和2-叠氮基乙基)和/或不同的R6取代基(例如氢)的相应化合物。
通过类似的方法和如在实施例22中描述的方法，取代合适的胺，可制备具有其它R基团的实施方案(包括在R13和/或R6具有其它的取代基的那些化合物以及它们的C-2氟代对应物)。合适的R基团的示例性的实例包括(但不限于)喹啉-4-基丁基、4-苯基咪唑-1-基丁基、4-(吡啶-3-基)咪唑-1-基丁基、吡啶-4-基丁基、3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基丁基、1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基丁基、1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基丁基、嘌呤-7-基丁基、嘌呤-9-基丁基、1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基丁-2-烯基和4-(嘧啶-5-基)咪唑-1-基丁基。表2提供用于选择化合物的NMR和质谱数据。
表2.用于选择本发明化合物(I)的1H-NMR和质谱数据
Figure A0182077200901
Figure A0182077200911
Figure A0182077200921
实施例24
2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-2-氟-15-甲基红霉素A
在-78℃下，向2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-11-脱氧-11-氨基-15-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯(100mg，0.132mmol，1.0当量)的THF溶液(0.5ml)中加入叔丁醇钾的THF溶液(0.3ml，1M，2.3当量)。然后，把反应混合物保持在-60℃至-40℃下反应20分钟，随后在-78℃下引入在THF(0.2ml)中的N-氟代苯磺酰亚胺(46mg，0.146mmol，1.1当量)。把反应混合物保持在-70℃至-40℃下1小时，之后，于1.5小时内使之从-70℃温热至0℃。然后，用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。粗产物的快速层析(4∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)，得到76mg(74％)的所需产物。13C-NMR(100.6 MHz，CDCl3)δ217.5，203(d，J＝27.6Hz)，165.5(d，J＝23.8Hz)，165.2，157，5，135.4，132.9，130.4，129.8，128.3，118.0，101.7，98(d，J＝207Hz)，83.5，79.1，78.6，72.1，69.4，64.6，63.5，57.5，44.2，40.7，40.4，38.5，37.3，31.4，31.3，24.9(d，J＝24.3 Hz)，21.0，20.7，19.4，17.7，15.0，13.9，13.7，13.3。
实施例25
 2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-2-氟-15-甲基红霉素A的合成
在惰性气氛下，将2’-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-10，11-脱水-15-甲基-红霉素A的四氢呋喃溶液冷却至-78℃并用在四氢呋喃中的1.0M叔丁醇钾处理。把混合物搅拌5分钟，于2小时内，以3份加入N-氟代苯琥珀酰亚胺在四氢呋喃中的溶液。加入后，使反应物温热至环境温度并保持另外5小时。加入K2CO3水溶液，用CH2Cl2提取混合物。合并有机提取物，经MgSO4干燥，过滤，蒸发。硅胶层析得到产物。
实施例26
15-(2-(3-喹啉基)乙基)-3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯
制备A：15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-肟
将15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A(25.7g，28.9mmol，1.00当量)悬浮于42mL的2-丙醇中。加入羟胺(50wt％在H2O中，22.2mL，375mmol，13.0当量)。搅拌混合物直到均匀。加入冰HOAc。在50℃下把溶液搅拌11小时。加入饱和NaHCO3。浓缩混合物并用CHCl3(4×400mL)提取；用NaHCO3和水洗涤。用400mL CHCl3回提合并的水层。用盐水洗涤合并的有机相，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到粗品物料。其无须进一步纯化即可进行下一步。
制备B：15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-(异丙氧基环己基)肟
将来自以上的粗品15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-肟溶于72mL无水CH2Cl2中，滴加1，1-二异丙氧基环己烷(29.2 mL，140mmol，4.86当量)。滴加对甲苯磺酸吡啶(10.5g，41.9mmol，1.45当量)在CH2Cl2(36mL)中的溶液。15小时后，加入二氯甲烷(200mL)。用NaHCO3(2×100mL)和水(100mL)洗涤溶液。用100mL CH2Cl2回提合并的水相。用盐水洗涤合并的有机层，经MgSO4干燥，过滤，浓缩。把物料在硅胶上层析，得到所需产物。
制备C：2’，4”-双(O-三甲基甲硅烷基)-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-(异丙氧基环己基)肟
将15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-(异丙氧基环己基)肟(22.2g，21.3mmol，1.0当量)溶于54mL无水CH2Cl2中并在冰/水浴中冷却。滴加氯代三甲基硅烷(4.05mL，31.9mmol，1.5当量)、N-(三甲基甲硅烷基)-咪唑(7.81mL，53.2mmol，2.5当量)和CH2Cl2(18mL)的混合物。加入完成后，把反应物搅拌15分钟并用600mL EtOAc猝灭。用饱和NaHCO3(2×200mL)、水(200mL)和盐水(200mL)洗涤混合物。经MgSO4干燥有机层，过滤，浓缩，得到粗产物，其无须进一步纯化即可进行下一步。
制备D：2’，4”-双(O-三甲基甲硅烷基)-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-(异丙氧基环己基)肟
将粗品2’，4”-双(O-三甲基甲硅烷基)-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-(异丙氧基环己基)肟溶于无水四氢呋喃(41mL)中并冷却至10℃。加入无水二甲亚砜(41.4mL)和甲基溴(2.0M在乙醚中，20.7mL，41.4mmol，2.0当量)。用无水二甲亚砜(41.4mL)稀释叔丁醇钾在THF中的1.0M溶液(41.4mL，41.4mmol，2.0当量)。在0.5当量/小时的速度下把它加入到反应混合物中。通过TLC(5∶1 甲苯∶丙酮)监测反应。通过加入乙酸乙酯(200mL)和饱和NaHCO3(70mL)猝灭反应物。把混合物转移至分液漏斗中，用850mL乙酸乙酯稀释。用饱和NaHCO3、水和盐水(各300mL)洗涤有机相。通过硅藻土过滤生成的乳状液体。然后经MgSO4干燥分离的有机相，过滤，浓缩，得到粗产物，其无须进一步纯化即可进行下一步。
制备E：6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-肟
将来自以上的粗品2’，4”-双(三甲基甲硅烷基)-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-(异丙氧基环己基)肟溶于乙腈(110mL)中。缓慢加入用水(55mL)稀释的冰乙酸(67mL)。把溶液搅拌8小时。加入甲苯和2-丙醇，浓缩溶液。然后将产物溶于甲苯中并浓缩两次，得到粗产物，其无须进一步纯化即可进行下一步。
制备F：6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A
将来自以上的粗品6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A-9-肟和亚硫酸氢钠(23.1g，113mmol，5.63当量)置于配备有冷凝器的圆底烧瓶中并用N2吹洗。加入乙醇(140mL)和水(140mL)。滴加甲酸(3.75mL，95.4mmol，4.77当量)。在80℃下将混合物搅拌4.5小时。在溶液回复到室温后，加入饱和NaHCO3。用6N NaOH把pH调至9-10。然后，用3×400mL乙酸乙酯提取混合物。先后用饱和NaHCO3、水(各250mL)洗涤合并的有机相。用乙酸乙酯(400mL)回提合并的水相。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到粗产物，其无须进一步纯化即可进行下一步。通过硅胶层析可得到纯的产物。
制备G：6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)-3-脱克拉定糖基红霉素A
将粗品6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A在280mL的0.5M HCl中搅拌3小时。用6N NaOH把pH调至9-10。经真空过滤收集沉淀并用水洗涤。用3×400mL乙酸乙酯提取母液。用饱和NaHCO3和水洗涤合并的有机相。用乙酸乙酯回提合并的水相。用盐水洗涤合并的有机相，经MgSO4干燥，过滤，浓缩。合并的产物经硅胶层析，得到为白色固体的所需产物。
制备H：2’-O-乙酰基-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)-3-脱克拉定糖基红霉素A
将6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)-3-脱克拉定糖基红霉素A(11.5g，15.5mmol，1.0当量)溶于40mL乙酸乙酯中。滴加乙酸酐(2.92mL，31.0mmol，2.0当量)在乙酸乙酯(35mL)中的溶液。把反应物搅拌30分钟，然后浓缩。将物料在硅胶上层析，得到为白色固体的所需产物。
制备I：2’-O-乙酰基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A
将2’-O-乙酰基-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)-3-脱克拉定糖基红霉素A(10g，12.8mmol，1.0当量)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(16.51g，86.1mmol，6.7当量)在圆底烧瓶中合并并用N2吹洗。把固体溶于无水CH2Cl2(64mL)中并在冰水浴中冷却。加入无水DMSO(15.5mL，218mmol，17当量)。于3小时内加入三氟乙酸吡啶(12.14g，62.9mmol，4.9当量)在CH2Cl2(47mL)中的溶液。用600mL乙酸乙酯稀释溶液，用饱和NaHCO3、水和盐水(各200mL)洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。经硅胶层析得到所需产物。
制备J：2’-O-乙酰基-3-氧代-3-脱克拉定糖基-11-甲磺酰基-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A
将2’-O-乙酰基-3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A溶于新蒸镏的吡啶(35mL)中并在冰水浴中冷却。滴加甲磺酰氯。使反应物回复到环境温度并搅拌过夜。加入乙酸乙酯(700mL)，用饱和NaHCO3、水和盐水(各200mL)洗涤溶液。经MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。经硅胶层析得到所需化合物。
制备K：2’-O-乙酰基-10，11-脱水-3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A
将2’-O-乙酰基-3-氧代-3-脱克拉定糖基-11-甲磺酰基-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A(6g，6.98mmol，1.0当量)溶于丙酮(23mL)中。滴加1，8-二氮杂双环(5.4.0)十一碳-7-烯(5.22mL，34.9mmol，5.0当量)。在环境温度下，把反应物搅拌4小时，然后浓缩。经硅胶层析得到所需化合物。
制备L：3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A11，12-环状氨基甲酸酯
将2’-O-乙酰基-10，11-脱水-3-脱克拉定糖基-3-氧代-6-O-甲基-15-(2-(3-喹啉基)乙基)红霉素A在干燥四氢呋喃中的溶液加入到NaH(3当量)在THF中的冷却至-10℃的搅拌着的悬浮液中。向其中加入羰基二咪唑(10当量)在THF/DMF(5∶3)中的溶液并把混合物搅拌2小时。使反应物温热至环境温度，用浓氨水溶液稀释并搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释混合物，用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，经MgSO4干燥，蒸发。经硅胶层析得到产物。
实施例27
体外敏感性试验
通过用于需氧生长细菌敏感性试验的NCCLS液体培养基微量稀释法(国立临床实验室标准委员会，1997。Methods for dilutionantimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically，第4版，批准的标准。NCCLS文件M7-A4。国立临床实验室标准委员会，Villanova，PA)，可测定最小抑制浓度(“MICs”)。于试验当天制备储备液并将合适的等分试样加入到阳离子调节的Mueller-Hinton液体培养基(CAMHB)中或者嗜血杆菌(Haemophilus)试验培养基中。制备2倍系列稀释液并加入到微滴定板上的孔中。最终试验浓度介于16-0.015μg/ml之间。得自在过夜培养板生长接种的细菌的液体培养物对除肺炎链球菌(Streptococcus Pneumoniae)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)以外的所有实验细菌于35℃温育，然后调节至Kirby Bauer标准，并在CAMHB中稀释以达到最终接种浓度约5×105CFU/ml。通过直接使得自过夜培养板的菌落悬浮，调节浊度并如上稀释，制备对肺炎链球菌(S.Pneumoniae)和流感嗜血杆菌(H.influenzae)的接种液。用2.5％溶胞马血补充肺炎链球菌培养基。所有的板在环境空气中于35℃对肺炎链球菌和流感嗜血杆菌温育20-24小时，并对所有其它的细菌温育16-20小时。通过读取完全抑制试验细菌生长的受试化合物的最低浓度，可测定MIC终点。表3显示表2化合物(实施例23)的MIC终点。
表3表2化合物的体外易敏性(MIC以μg/ml表示)
                               微生物
化合物 大肠杆菌OC2605 金黄葡萄球菌ATCC29213 粪链球菌ATCC29212 肺炎链球菌ATCC49619 流感嗜血杆菌OC4883
红霉素 ＞16 0.5 1 0.06 1
A ＞16 0.25 0.12 0.03 8
B ＞16 0.5 0.25 0.03 16
C ＞16 2 0.5 0.12 ＞16
D ＞16 1 0.12 0.03 8
E ＞16 0.5 0.12 0.03 8
F ＞16 0.5 0.12 0.06 8
H ＞16 1 0.25 0.06 8
J ＞16 0.5 0.25 0.06 8
K 4 0.25 0.06 ＜0.015 2
L 4 0.25 0.12 0.03 4
M 8 0.25 0.06 0.03 1
N 16 0.5 0.12 0.06 4
O 2 0.12 0.03 ＜0.015 ＜0.25
P ＞16 ＞16 16 2 ＞16
Q ＞16 8 1 0.25 ＞16
表4显示所选择的式III化合物的示例性的MIC终点。
其中X和Ra如上指明。
表4.所选择的式III化合物的体外易敏性(MIC以μg/ml表示)
                        微生物
化合物 大肠杆菌OC2605 金黄葡萄球菌ATCC29213 粪链球菌ATCC29212 肺炎链球菌ATCC49619 流感嗜血杆菌OC4883
  红霉素 ＞16 0.5 1 0.06 1
  X＝H和Ra＝3-(喹啉-3-基)烯丙基 8 0.12 0.06 ＜0.015 1
  X＝H和Ra＝3-(6-氟代喹啉-3-基)烯丙基 16 0.12 0.06 ＜0.015 4
  X＝H和Ra＝3-(6-氯代喹啉-3-基)烯丙基 16 0.25 0.12 0.03 8
  X＝H和Ra＝3-(6-甲基喹啉-3-基)烯丙基 8 0.25 0.12 0.03 8
  X＝H和Ra＝3-(异喹啉-4-基)烯丙基 ＞16 0.25 0.12 0.03 8
  X＝F和Ra＝3-(喹啉-3-基)烯丙基 8 0.12 0.06 ＜0.015 4
  X＝H和Ra＝3-(吡啶-3-基)烯丙基 ＞16 0.25 0.06 ＜0.015 8
  X＝H和Ra＝3-(喹啉-6-基)烯丙基 8 0.12 0.06 ＜0.015 4
  X＝H和Ra＝3-[5-(N-2-吡啶基氨基)呋喃甲酰基]烯丙基 ＞16 0.25 0.06 0.03 16
  X＝H和Ra＝3-(喹喔啉-6-基)烯丙基 8 0.06 0.03 ＜0.015 4
  X＝H和Ra＝3-(喹啉-6-基)烯丙基 8 0.12 0.06 ＜0.015 4

Claims (22)

1.一种下式的化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药形式
其中：
X为氢或者卤化物；
R2为氢、酰基或羟基保护基团；
R6为氢、羟基或-ORa，其中Ra为选自以下的取代或者未取代的部分：C1-C10烷基、C2-C10链烯基、C2-C10炔基、芳基、杂环、芳基(C1-C10)烷基、芳基(C2-C10)链烯基、芳基(C2-C10)炔基、杂环(C1-C10)烷基、杂环(C2-C10)链烯基和杂环(C2-C10)炔基；
R13为氢或取代或者未取代的部分，其中所述部分选自甲基、C3-C10烷基、C2-C10链烯基、C2-C10炔基、芳基、杂环基、芳基(C1-C10)烷基、芳基(C2-C10)链烯基、芳基(C2-C10)炔基、杂环(C1-C10)烷基、杂环(C2-C10)链烯基和杂环(C2-C10)炔基；
和
R为氢或取代或者未取代的部分，其中所述部分选自C1-C10烷基、C2-C10链烯基、C2-C10炔基、芳基、杂环基、芳基(C1-C10)烷基、芳基(C2-C10)链烯基、芳基(C2-C10)炔基、杂环(C1-C10)烷基、杂环(C2-C10)链烯基和杂环(C2-C10)炔基。
2.权利要求1的化合物，其中
X为氢或者氟化物；
R为氢；
R2为氢、-COCH3或者-CO苯基；
R13为甲基、丙基或者乙烯基；和
R6选自3-(喹啉-3-基)丙-2-烯基、3-(喹啉-3-基)丙-2-炔基、3-(喹啉-6-基)丙-2-烯基、3-(喹啉-6-基)丙-2-炔基、3-(喹啉-7-基)丙-2-烯基、3-苯基丙-2-烯基、3-(萘-1-基)丙-2-烯基、3-(萘-1-基)丙-2-炔基、3-(萘-2-基)丙-2-炔基、5-苯基戊-4-烯-2-炔基、3-(呋喃-2-基)丙-2-炔基、3-(噻吩-2-基)丙-2-烯基、3-(咔唑-3-基)丙-2-烯基和3-(喹喔啉-6-基)丙-2-烯基。
3.一种下式的化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药形式
Figure A018207720003C1
其中：
R2为氢、-COCH3或者-CO苯基；
R13为甲基、丙基、乙烯基、丁基、3-丁烯基、3-羟基丁基、2-氟乙基或者2-叠氮基乙基；
R6为-ORa，其中Ra为氢、C1-C5烷基或者-YZ，
其中Y为C1-C10烷基、C2-C10链烯基或者C2-C10炔基和Z为取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂环基或者未取代的杂环基，和
R为氢或者Ra。
4.权利要求3的化合物，其中
X为氢或者氟化物；
R为氢；
R2为氢、-COCH3或者-CO苯基；
R13为甲基、丙基或者乙烯基；和
R6如在权利要求3中所述。
5.权利要求4的化合物，其中Ra为-YZ。
6.权利要求5的化合物，其中Y为C3-C6烷基、C3-C6链烯基或者C3-C6炔基。
7.权利要求5的化合物，其中Z为取代的或者未取代的杂芳基。
8.权利要求5的化合物，其中Z选自
Figure A018207720004C2
和
9.权利要求5的化合物，其中Z选自
和
10.一种下式的化合物及其药学上可接受的盐、酯或前药形式
Figure A018207720005C1
其中
X为H或者F；
R13为甲基、丙基或乙烯基；和
Ra为取代的或者未取代的杂环基(C1-C10)烷基、杂环基(C2-C10)链烯基或者杂环基(C2-C10)炔基。
11.权利要求10的化合物，其中Ra为取代的或者未取代的杂芳基(C1-C10)烷基、杂芳基(C2-C10)链烯基或者杂芳基(C2-C10)炔基。
12.权利要求10的化合物，其中Ra选自
和
Figure A018207720006C2
13.权利要求12中化合物，其中R13为甲基。
14.权利要求12中化合物，其中R13为乙烯基。
15.权利要求12中化合物，其中R13为丙基。
16.一种下式的化合物
其中
X为氢或者氟化物；和
Ra选自
和
Figure A018207720007C3
17.如在权利要求16中的化合物，其中X为氢和Ra为
18.如在权利要求16中的化合物，其中X为氟化物和Ra为
19.如在权利要求16中的化合物，其中X为氢和Ra为
20.如在权利要求16中的化合物，其中X为氟化物和Ra为
Figure A018207720007C7
21.如在权利要求16中的化合物，其中X为氢和Ra为
22.如在权利要求16中的化合物，其中X为氢和Ra为
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