CN1984648A - 植物提取物的组合物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种具有植物雌激素活性和抗癌活性的组合物。本发明组合物含有汉黄芩素、异甘草素、拟雌内酯，它们的药学上可接受的盐或酯，它们选择性可替代的类似物，或一种或多种前述化合物的组合物。本发明组合物还可以含有抗癌剂和/或免疫刺激剂。本发明还公开了一种治疗或预防癌症或雌激素紊乱的方法，其中包括给予有效量的组合物。特别是，本发明组合物可以有效治疗激素类癌症。

Description

植物提取物的组合物及其使用方法

技术领域

本发明涉及植物提取物的组合物和治疗人体的方法，尤其是治疗癌症及雌激素相关性紊乱症的方法。

背景技术

植物提取物植物雌激素，例如存在于大豆产品中的异黄酮，被认为有治疗和预防疾病的潜力。尤其是，植物雌激素被认为在治疗雌激素相关性紊乱症，如骨质疏松症，更年期(绝经期)症状以及激素相关的癌症方面是有效的。

有报道称内源性和外源性激素在激素相关性癌症的发展中起作用，如乳癌，结肠癌，肺癌，子宫内膜癌，卵巢癌，前列腺癌，膀胱癌，睾丸癌，甲状腺癌和骨癌(如见Henderson et al，″Hormonalcarcinogenesis″，CARCINOGENESIS(2000)，21(3)：427-433)。

流行病学研究显示食用植物雌激素含量高的食物，比如那些在大豆产品中发现的植物雌激素，与激素相关性癌症发生率降低是有关联的(H.WISEMAN，″THE THERAPEUTIC POTENTIAL OFphytoestrogens″，Expert.Opin.Investig.Drugs(2000)，9(8)：1829-40)。

前列腺癌，一种激素相关性癌症，是北美和欧洲男性主要的健康问题(S.H.Landis et AL.，″CANCER Statistics，1998″，CA Cancer R Clin.(1998)48：6-29)。前列腺的缓慢扩大伴随特定抗原的增加(PSA)经常导致前列腺癌。每年美国增加160,000个新病例并且有39,000人死于此病(Landis)。乳癌，另一种激素相关性癌症，也是一个主要的健康问题。据美国癌症会报道，2001年乳癌新增病例已达到192,200例，并且已有40,200人死亡(National Alliance of Breast Cancer OrganizationsNews，15(1)：2，January，2001)。早期监测和早期干预通常是治疗这类的关键方法。尽管化学疗法经常成为晚期乳癌患者的选择，但它对晚期前列腺癌的患者并没有作用。传统的治疗方法包括外科手术，放射疗法，激素治疗以及化学疗法。仍然需要一种可供选择的治疗药剂，它能扩大或替代现有的疗法的作用。

虽然现有的治疗药剂很适合其既定的目的，仍然需要其它的草药疗法来治疗包括激素相关性癌症在内的雌激素相关性的紊乱症，以作为非激素相关性癌症治疗的补充。

发明简述

下文详细阐述包括对治疗癌症有效的组合物在内的其它实施方式。

附图说明

图1示含有Panax pseudo-ginseng Wall(三七)、Isatis IndigoticaFort(菘蓝)、GANODERMA lucidium Karst(灵芝)、Dendrathemamorifolium Tzvel(菊花)、Glycyrrhiza glabra L(光果甘草)、Sculletaria bailcalensis Georgi(黄芩)、Rabdosia rubescens(冬凌草)、及Serenoa repens(锯齿棕榈)提取物的多组分植物提取物组合物的高效液相色谱法的色谱图，箭头显示汉黄芩素在洗脱液中的位置(以“I-16-2”表示)。

图2示从如图1所示的多组分植物提取物组合物中分离的汉黄芩素的13C核磁共振谱图；(a)CH3、CH2、CH1基团的分图；(b)13C NMR谱总图。

图3示从如图1所示的多组分植物提取物组合物中分离的汉黄芩素(纯度超过95％)的质谱图。

图4示自Glycyrrhiza uralensis(甘草)中提取的异甘草素的HPLC色谱图。

图5示如图4所示的谱图中的异甘草素峰相关的吸收光谱图

图6示从Glycyrrhiza uralensis(甘草)中分离的异甘草素的13C核磁共振谱图；(a)CH3、CH2、CH1基团的分图；(b)13C NMR谱总图。

图7示从Glycyrrhiza uralensis(甘草)中分离的异甘草素(纯度高于95％)的质谱图。

图8示不同浓度的汉黄芩素引起LNCaP与DU-145前列腺癌细胞存活率的变化。

图9示不同浓度的异甘草素引起LNCaP与DU-145前列腺癌细胞，以及MCF-7乳腺癌细胞存活率的变化。

图10示DNA直方图，显示在使用20微克/毫升的汉黄芩素处理或在未经处理的条件下生长的LNCaP细胞的细胞周期的变化。

图11示汉黄芩素及异甘草素对LNCap细胞周期的作用。

图12示汉黄芩素及异甘草素对DU-145细胞周期的作用。

图13示汉黄芩素及异甘草素激活ERα-Luc报告基因的效应。

图14示汉黄芩素及异甘草素激活ERβ-Luc报告基因的效应。

图15示不同浓度的异甘草素对COX-2的抑制作用。

图16示PTX10卵巢癌细胞系(具有紫杉醇抗性)在汉黄芩素浓度增加时的存活率。

图17示PTX10卵巢癌细胞系在异甘草素浓度增加时的存活率。

优选实施方式详述

在此公开的是被用于人罹患雌激素紊乱症及癌症的需要所述治疗的患者的组合物和治疗方法。此文中，需要癌症治疗的人可能是被诊断出癌症的人或者是想要预防或延缓癌症发生的人，例如有癌症家史的人。所述癌症可任选一种激素相关性癌症，如前列腺癌，乳癌，子宫内膜癌，结肠癌，肺癌，膀胱癌，睾丸癌，卵巢癌，甲状腺癌或骨癌。这里，需要治疗雌激素紊乱症的人可能是被诊断为患有雌激素紊乱症的人，如骨质疏松症或更年期症状，或者是想要预防或延缓雌激素紊乱症发生的人。该方法包括给予一个药学有效量的含有植物雌激素的组合物；这种植物雌激素的示例是汉黄芩素、异甘草素、拟雌内酯、它们的药学上可接受的盐或酯、它们的可选择性替代的类似物、或由一种或多种前述化合物组成的混合物。在这里，植物雌激素是一种源于植物的化合物或其代谢产物，它们能够模拟体内的内源性雌激素的作用或者调节它的结合，代谢或生成。

如前所述，草药疗法已用于癌症的治疗。例如，黄芩是汉黄芩素的来源(Y.Y.Zhang et AL.，″COMPARATIVE study of Scutellaria planipesand Scutellaria baicalensis″，Biomed.CHRONZATOGRA.(1998)，12：31-3)；甘草以及光果甘草是异甘草素的来源(H.HAYASHI H.ETAL.，″SEASONAL VARIATION OF GLYCYRRHIZAIN andisoliquiritgenin glycosides in the root of glycyrrhiza glabra L″，Biol.PHARM.BULL.(1998)21：987-9)。

拟雌内酯是在紫花苜蓿和红色三叶草中发现的一种植物雌激素，它们被认为具有植物雌激素样活性(如见“U.S.Patent ApplicationPublication No.20010044431 Al to Rodriguez”)。

据报道汉黄芩素是一种强效抗炎剂，因为它对环加氧酶(COX-2)有直接的抑制作用并且也能抑制可诱导型COX-2和氮氧合酶的基因表达。(如见“Y.S.Chi et al.，″Effect of wogonin，a plant flavone fromScutellaria radix，on the expression of cyclooxygenase-2 and the inductionof inducible nitric oxide synthase and the induction of inducible nitric oxidesynthase in inhibitors and lipopolysaccharide-treated RAW 264.7 cells″，BIOCHEM.PHARMACOL.(2001)，61(11)：1417-27”)。

然而，目前的发明者注意到没有报告显示汉黄芩素有雌激素的活性。

据报道异甘草素具有雌激素样活性(如见“S.Tamir″Estrogen-likeactivity of glabrene and other constituents isolated from licorice root″，J：STEROID BIOCHEM.MOL.BIOL.(2001)，78(3)：291-8”)。然而，目前发明者注意到还没有报道称异甘草素是COX-2活性的抑制剂并且对治疗癌症有效。

近来研究揭示了COX-2抑制剂作为癌症治疗药剂的重要性(如见“A.KIRSCHENBAUM ET AL.，″THE ROLE OF cyclocxygenase-2 inprostate CANCER″UROLOGY(2001)，58(2suppl.1)：127-131”以及“E.T.HAWK ET AL.，″COX-2 IN CANCER-A PLAYERTHAT&APOS；S DEFINING THE RULES″J.NATL.Cancer INST.(2002)，94(8)：545-546”)。

抑制剂阻止癌症的血管增生并且减少了癌症转移(如见“E.Fosslien″Review：Molecular pathology of cyclooxygenas-2 in cancer-induced angiogenesis″，Ann.Clin.Lab Sci.(2001)，31(4)：325-348”)。

目前的工作证实汉黄芩素和异甘草素在活化雌激素α受体和β受体以及引发癌细胞生化反应中均发挥了有力的作用。异甘草素抑制COX-2的作用也得到证实。

两种化合物对癌细胞增殖的抑制作用也得到证实。汉黄芩素和异甘草素对于癌细胞的细胞毒作用依赖或不依赖于雌激素受体。

植物雌激素包括汉黄芩素。在这里，汉黄芩素一词指5，7-二羟基-8-甲氧基-黄酮(CAS Reg.No.632-85-9)，以及制药学适合的盐或酯，其可选择性替代的类似物，黄芩属植物的提取物，或包含一种或多种上述物质的组合物。

汉黄芩素的酯更宜是汉黄芩素的糖苷。对于组成汉黄芩素糖苷的是单糖还是多糖并没有特殊的限制。例如，适合的单糖包括葡萄糖，葡萄糖醛酸，甘露糖，果糖，半乳糖，木糖，芸香糖，鼠李糖等等，以及包含一个或多个上述单糖的复合物。又如，适合的多糖包括由一个或多个上述单糖组成的二聚糖，三聚糖，低聚糖及所述各种聚糖的聚合体。

例如，汉黄芩素类似物包括金雀异黄甙(genistein)、鹰嘴豆素(biochanin)、樱黄素(prunetin)、野黄芩黄素(scutellarein)、黄豆苷(daidzin)、毛地黄黄酮(luteolin)、4’，5，7-三羟黄酮(apigenin)、刺槐黄素(acacetin)，3，6，4-三羟基黄酮，7，3-二羟基-4，1-二甲氧基-异黄酮，3R-2′，3′-二羟基-7，4-二甲氧基-异黄酮等等，或者是一个或多个上述汉黄芩素类似物组成的复合物。

汉黄芩素也可以是黄芩属植物，如黄芩提取物的形式，其药学上可接受的盐或酯，其可选择性替代的类似物，或包含一种或多种上述化合物的复合物。

汉黄芩素包括可选择性替代的汉黄芩素类似物，其结构式是：

其中，R1是C1-C6烷基，优选甲基；R2是氢、C1-C6烷基、或C2-C6酰基，优选氢；R3-R10分别是氢、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、或C2-C6酰基，优选氢或羟基，更优选氢，条件是R3-R10至少四个为氢。在一个优选实施方案中，R1为甲基，R2为氢，R3-R10分别为氢、甲基、乙烷基、甲氧基、乙氧基、乙酰基或丙酰基，附带条件是R3-R10至少四个为氢。

合成或分离汉黄芩素，其药学上可接受的盐或酯，其选择性可替代的类似物的方法，参见文献“International Patent Application No.WO01051482 Al to Wallace et al”、“P.Rivaille et al.，C.R.ACAD.SCI.，PARIS，SER.C(1969)，268(2)：2213-16”、“ROMATOGR，A(1999)，830(2)：387-395”、“Y.-C.CHEN ET AL.，BIOCHEM.Pharmacol.(2001)，61(11)：1417-1427”。

当存在汉黄芩素时，它相的含量大于或等于组合物总重量0.5％，更优选大于或等于1％，更优选大于或等于2％，最优选大于或等于5％，更优选大于或等于10，最优选大于或等于20。含有50％甚至100％的汉黄芩素组合物也在考虑的范围内。

植物雌激素可包含异甘草素。此中异甘草素指CAS Reg.No.961-29-5的2′，4，4-三羟查耳酮、药学上町接受的异甘草素的盐或酯、可选择性替代的异甘草素的类似物、甘草或光果甘草的提取物、或者是一个或多个上述化合物组成的组合物。

异甘草素的酯优选异甘草素的糖苷。对于组成异甘草素糖苷的是单糖还是多糖并没有特殊的限制。例如，适合的单糖包括葡萄糖，葡萄糖醛酸，甘露糖，果糖，半乳糖，木糖，芸香糖，鼠李糖等等，以及包含一个或多个上述单糖的化合物。又如，适当的多糖包括由一个或多个以上单糖组成的二聚糖，三聚糖，低聚糖及聚合体。

异甘草素类似物的示例包括根皮素，4，2，4′-三羟查耳酮等，或者是一个或多个上述异甘草素类似物组成的复合物。

甘草或光果甘草的提取物是异甘草素，制药学上可接受的异甘草素的盐或酯，它的可选择性替代的异甘草素类似物，或包含一种或多种上述化合物组成的复合物的一种来源。

异甘草素选择性町替代的类似物的结构式是：

其中，R11-R14分别是氢、或C1-C6烷基(优选氢)；R15-R20是分别是氢、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、或C2-C6酰基(优选氢)，附带条件是R15-R20至少三个为氢。在一个首选实施方式中，R11-R14为氢，R15-R20分别为氢，甲基，乙烷基，甲氧基，乙氧基，乙酰基或丙酰基，附带条件是R15-R20至少四个为氢。

合成或分离异甘草素，其制药学合适的盐或酯，其选择性可替代的类似物的方法，参见文献“S.K.Srivastava et al.，INDIAN J.CHEM.，SECT.B(1981)，20B(4)：347-8；and F.A.Macias et al.，PHYTOCHEMISTRY(1998)，50(1)：35-46”。

当存在异甘草素时，它相对于组合物总重量的重量百分比应大于或等于0.5，更优选大于或等于1，更优选大于或等于2，更优选大于或等于5，更优选大于或等于10，最优选大于或等于20。含有50甚至100个重量百分比的异甘草素的组合物也在考虑的范围内。

植物雌激素可包括拟雌内酯。此中，拟雌内酯指CAS Reg.No.479-13-0的3，9-二羟基-6氢-苯并呋喃[3，2-c][1]苯并吡喃-6-酮(3，9-dihydroxy-6h-benzofuro[3，2-c][1]benzopyran-6-one)，药学上可接受的拟雌内酯的盐或酯，可选择性替代的拟雌内酯类似物，蒲公英(TARAXACUYN MONGOLICUFN)、紫花苜蓿(Medicagosativa)、甘蓝(Brassica oleracea)、鳢肠(Eclipta prostrata)的提取物，或者是一种或多种上述物质组成的组合物。

拟雌内酯的酯优选拟雌内酯的糖苷。对于组成拟雌内酯糖苷的是单糖还是多糖并没有特殊的限制。例如，适合的单糖包括葡萄糖，葡萄糖醛酸，甘露糖，果糖，半乳糖，木糖，芸香糖，鼠李糖等等，以及包含一个或多个上述单糖的化合物。又如，适合的多糖包括由一个或多个以上单糖组成的二聚糖，三聚糖，低聚糖及聚合体。

拟雌内酯类似物的示例包括4-乙烷基-7-羟基-3-(p-甲氧基苯基)-2H-L-苯并吡喃-2-酮(蟛蜞菊内酯)等等。

拟雌内酯包含蒲公英，紫花苜蓿(Medicago sativa)，甘蓝(Brassica oleracea)，鳢肠的提取物，或者是一种或多种上述化合物组成的组合物。

拟雌内酯的选择性替代类似物的结构式是：

其中，R21和R22分别是氢或C1-C6烷基，优选氢；R23-R28分别是氢、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、或C2-C6酰基，优选氢，条件是R23-R28至少三个为氢。在一个优选实施方式中，R21和R22为氢，R23-R28分别是氢、甲基、乙烷基、甲氧基、乙氧基、乙酰基或丙酰基，附带条件是R23-R28至少四个为氢。

合成或分离拟雌内酯，其制药学合适的盐或酯，其可选择性替代的类似物的方法，参见文献“P.M.Dewick et AL.，J.CLAEM.SOC.D(1969)，9：466-7”、“T.Kappe et al.，Z.Naturforsch.，Teil B(1974)，29(3-4)：292-3”、“R.Laschober et al.，SYLZTHESIS(1990)，5：387-8”、“F.A.Macias et al.，PHYTOCHEMISTRY(1998)，50(1)：35-46”、“K.Hiroya et al.，PERA：IN 1(2000)，24：4339-4346”、“G.A.Krauset AL.，Journal of Organic CHEMISTRY(2000)，65(18)：5644-5646”及“M.OKADA et al.，Planta Med.(2000)，66(6)：572-575”。

当存在拟雌内酯时，它的含量为(相对于组合物总重量)0.5％(重量)，更优选大于或等于1％(重量)，更优选大于或等于2％(重量)，更优选大于或等于5％(重量)，更优选大于或等于10％(重量)，最优选大于或等于20％(重量)。含有50％(重量)甚至100％(重量)的拟雌内酯的组合物也在考虑的范围内。

在组合物和制剂中可以囊括附加活性成分。例如，给予汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯以及由一种或多种上述植物雌激素组成的混合物时，与其它的抗癌剂合并使用，将能够激发抗癌活性。

在一个实施方式中，组合物可能包括：来源于汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯以及上述的一种或多种植物雌激素组成的复合物所占的重量百分比大于或等于0.5；以及至少一种抗癌剂。在这些组合物中，选择自汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯及其复合物的植物雌激素应占组合物中活性的含量为(以总重量为准)约0.5％(重量)至约50％(重量)。在此范围内，含量应大于或等于约1％(重量)，2％(重量)，5％(重量)或10％(重量)。同样在此范围内，含量应达到约40％(重量)，30％(重量)或20％(重量)。上述重量百分比都是以组合物中活性成分总重量为基础的，或者说，它们以组合物中植物雌激素总重量为基础。

所使用的抗癌剂并没有特别限制。适合的抗癌剂的示例包括冬凌草素，靛红，紫杉醇，顺铂，喜树碱，长春新碱，农吉利甲素，美登素，高三尖杉酯碱，秋水仙碱，马蔺子甲素，马蔺子乙素，马蔺子丙素，山油柑碱，苦参碱，氧化苦参碱，姜黄素，杷日辛，蚤休甙等等，以及由一种或多种上述抗癌剂组成的复合物。优选的抗癌剂包括冬凌草素。

适合的抗癌剂还包括，如来自冬凌草(Rabdosia RUBESCENS)，三七(PANAX PSEUDO-GINSENG WALL)，灵芝(GANODERMALUCID UM Karst)，黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)，大豆(Glycine max)，姜黄(Curcuma longa)等植物中的提取物，以及由一种或多种上述植物组成的复合物。冬凌草提取物包含冬凌草素；葎草提取物包含蛇麻酮；三七提取物包含人参皂甙；黄芩提取物包含黄芩甙；大豆提取物包含大豆类黄酮，大豆异黄酮，或兼而有之；姜黄提取物包含姜黄素。

抗癌剂可以由以下成分组成，约1～10份重量的冬凌草提取物，约10～40份重量的三七提取物，约100～500份重量的灵芝提取物，约10～100份重量的黄芩提取物，约10～100份重量的大豆提取物，以及约10～100份重量的姜黄提取物。

适合的抗癌剂的示例还包括葎草提取物；从三七，灵芝，黄芩，大豆，姜黄中任一种植物的提取物，以及由一种或多种上述植物的提取物组成的组合物。

抗癌剂还可以由以下成分所组成，约1～10份重量的葎草提取物，约10～40份重量的三七提取物，约100～500份重量的灵芝提取物，约10～100份重量的黄芩提取物，约10～100份重量的大豆提取物，以及约10～100份重量的姜黄提取物。

抗癌剂应占组合物中活性成分总重量的1至90个重量百分比。在此范围内，抗癌剂的量应大于或等于约2，5或10个重量百分比。并且在此范围内，抗癌剂的重量百分比可达到约80，70，50或25。

除抗癌剂外，组合物还可以包含免疫刺激剂。对于所使用的免疫刺激剂并没有特殊的限制。适合的免疫刺激剂包括，如人参皂甙，阿魏酸，甘露聚糖，菊糖，含刺五加甙A，含刺五加甙B，含刺五加甙C，含刺五加甙D，含刺五加甙E，绞股蓝皂甙(gypenoside)，β-茯苓糖，菊粉，糖蛋白，干扰素，γ-球蛋白，来源于灵芝的多聚糖，其类似物，以及由上述一种或几种免疫刺激剂组成的复合物。适合的免疫刺激剂还包括，如灵芝，云芝(CORIOLUS VERSICOLOR)，茯苓(PORIA COCOS)等植物的提取物，以及由上述的一种或几种提取物组成的复合物。优选的免疫刺激剂包括β-茯苓糖。

当含有免疫刺激剂时，起含量应占组合物中活性成分总重量的重量百分比约为1至90。在此范围内，免疫刺激剂重量百分比应不少于2，5，10，20或50。并且在此范围内，免疫刺激剂重量百分比应达到80，70或60。

一个优选的实施方式中，其组合物包括：选自含量应大于总总量5％的汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯中一种或多种的植物雌激素；选自冬凌草素，秋水仙碱，长春新碱，喜树碱，美登素，紫杉醇中的一种或多种抗癌剂；以及选自人参皂甙，甘露聚糖，菊糖，含刺五加甙A，含刺五加甙B，含刺五加甙C，含刺五加甙D，含刺五加甙E，绞股蓝皂甙(gypenoside)，β-茯苓糖，干扰素的一种或多种免疫刺激剂。这个实施方式中，组合物更宜包括：选自汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯的一种或多种化合物应占重量百分比约1至40；选自冬凌草素，喜树碱，长春新碱，靛玉红，秋水仙碱，人参皂甙的一种或多种化合物应占重量百分比约0.05至5；选自β-茯苓糖，甘露聚糖，菊糖，绞股蓝皂甙(gypenoside)的一种或多种化合物占重量百分比约10至98；在此所有的重量百分比都以组合物总重量为基础。

另一个优选的实施方式，其组合物包括选自汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯的一种或多种植物雌激素；冬凌草素；以及β-茯苓糖。在这个实施方式中，组合物更宜包括：汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯的一种或多种化合物的重量百分比约为1至30；冬凌草素的重量百分比约为0.1至5；β-茯苓糖的重量百分比约为20至90；在此所有的重量百分比都以组合物总重量为基础。

由于组合物被定义为由多个化合物组成，需要说明的是，其中每个成分在化学上是特异的，尤其在一个单一的化学物质名称同时符合多于一个的组分的定义的情况下。

依上文所述，汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯，其制药学上可接受的盐或酯，或者其选择性可替代的类似物可以从自然资源中分离得到或依照已知方法合成。组合物所用化合物的纯度依据其分离或合成方法的不同而有别，但约5％至大于99％的纯度适用于该组合物中。

植物雌激素应为药学町接受的组合物形式。制备制药学适合的组合物配方的方法已基本被公知。所述制药配方可包括一种或多种非生物活性的化合物，也就是赋形剂，如稳定剂(可延长储存时间)，乳化剂，结合剂，增稠剂，盐，防腐剂等等，依据给药途径制定。

口服给药时，汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯，它们在制药学上合适的盐或酯，它们选择性可替代的类似物等，或包含一种或多种上述化合物组成的复合物可以与无活性的稀释液、易吸收的食用载体、或直接与食物混合一同给予。配方可与赋形剂混合，再制成以下形式使用：可吸收的片剂，含片，锭剂，胶囊，酏剂，混悬糖浆，干胶片，等等。片剂，锭剂，胶囊等还应含有如下物质：粘合剂，如黄芪胶，阿拉伯树胶，玉米淀粉，或凝胶；赋形剂，如磷酸二钙；崩解剂，如玉米淀粉，马铃薯淀粉，褐藻酸等等；润滑剂，如硬脂酸镁；以及甜味剂，如蔗糖，乳糖或糖精；芳香剂如薄荷油，冬青油，或者调味剂。如果给药单元是胶囊，除上述物质外，应还含有流体介物。

多种其它物质还可用作糖衣或者用于修饰给药单元的物理形状。糖浆或酏剂含有作为甜味剂的蔗糖，作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯(Methylparaben)、对羟基苯甲酸丙酯，诸如樱桃红或橘子味素的色剂和调味剂。这些物质在使用剂量下须绝对无毒。此外，活性成分应与可持续释放的制剂和配方混合。肠胃外给药的配方应包含灭菌水溶液或混悬液，以及供临时配制灭菌注射液或混悬液用的灭菌粉末。溶液或混悬液还可含有缓冲液，稀释液以及其它适合的添加剂，也许还要有能增加组合物中活性成分细胞摄取的物质。例如，脂质体。灭菌注射溶液与适当用量的活性化合物在含有一种或多种上述成分的适当溶媒中混合，然后灭菌。混悬液通常是通过将不同的灭菌活性成分与含有基本分散介质和上述必需的其它成分的灭菌溶媒混合而制备。如果是用于制备灭菌注射用溶液的灭菌粉末，制备优选方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这样可以从灭菌-过滤溶液中收集活性成分的粉末和其它附加的所需成分的粉末。局部给药的制剂配方特别适用于局部治疗。局部治疗的制剂包括软膏，喷雾剂，凝胶，混悬液，洗剂，乳膏等。局部给药的配方包括已知的载体物质如异丙醇，甘油，石蜡，硬脂醇，聚氧乙烯等。制药学适合的载体包括一种公知的吸收促进剂。这种吸收促进剂包括二甲基乙酰胺(U.S.Pat.No.3,472，931 toSTOUGHTON)，三氯乙醇或三氟乙醇(U.S.Pat.No.3,891，757 toHIGUCHI)，适当的酒精和其混合物(British Patent Nos.1,001，949 toMeyer and 1,464，975 to Astra Lakemedel)。除了与活性成分不相容的常规溶媒或物质，其它溶媒或物质均可以考虑用于组合物以及制剂中。

组合物可以是任意一种可吸收形式，比如粉末，胶囊或片剂。或者，组合物也可以是栓剂。

所描述的制药学组合物应当含有约0.5％至100％重量的活性成分。在此范围内，组合物和制剂中活性成分的含量至少约为1，2，5，10或20个重量百分比。并且在此范围内，组合物所包含的活性成分含量应达到90，80，70，60或50个重量百分比。只有药学有效的组合物和制剂中活性化合物的含量如此，才能得到适当的剂量。

另一实施方式是治疗癌症患者的方法，一种雌激素相关性癌症，或其它雌激素紊乱症。方法包括用含有来自汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯的植物雌激素组成的组合物，或由一种或多种上述植物雌激素组成的组合物治疗患者。在这里，“TREATING(治疗)”和“TREATMENT(治疗)”是指减少症状的严重程度和/或频率，消除症状和/或主要病因，预防症状和/或其主要病因的发生，以及改善或治疗(remediation)损伤。因此，目前对于雌激素依赖性紊乱症或癌症的“治疗”方法，在此，既包括对症状进行预防，又包括对临床上出现症状的患者进行治疗。

一种物质的“有效量”或“制药学有效量”或“有效的抗雌激素量”，在此是指无毒性但有足够的量发挥预防或治疗作用。正如下文即将指出的，所需的精确量根据个体的不同而不同，依据个体的年龄和基本状况，治疗条件的严格程度，以及所用的特定的植物雌激素和给药方式，等等。因此，不可能详细阐述精确的“有效量”。然而，在个例中，常规试验的一般技术即可确定其适合的“有效”量。

制药学可接受的载体是指没有生物活性或不产生不良影响的物质，也就是能够与所选植物雌激素制成制剂，给药后不会引起任何不良的生物效应或者不会与制剂所含其它成分相互作用产生对机体有害的影响。

癌症是新生细胞在体内生长，其间它对身体造成特定的不良影响。癌症的特点是来自正常组织的细胞变态或癌变，增生扩展形成肿瘤，通过这些肿瘤细胞入侵到邻近组织，所产生的恶性细胞经血液或淋巴系统逐渐蔓延至区域淋巴结并且通过转移过程到达远端部位。所谓癌症状态，即在正常细胞无法生长的条件下出现的细胞增殖。癌症表现具有多样的形式，依据它的侵入性和侵袭性加以区别。

给予植物雌激素如汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯，或其组合物可提供有效的抗癌活性。汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯的抗癌活性被认为与它们具有COX-2抑制剂的活性有关。COX-2是使花生四烯酸转变成前列腺素和其它二十碳化合物关键的诱导酶。COX-2的表达能被多种因子所诱导，包括，比如生长因子，白介素-1，和肿瘤促进因子。此酶在大量的肿瘤细胞和人体肿瘤中表达，其中包括前列腺癌。COX-2抑制剂被认为可用于抗癌治疗。

除了通常的抗癌活性以外，植物雌激素汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯也是有效的抗激素相关性癌症药剂。

激素相关性癌症包括膀胱癌，骨癌，乳癌，结肠癌，子宫内膜癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌，睾丸癌，以及甲状腺癌。

在癌症治疗中，植物雌激素组合物可以通过如下方式给予，口服给药，肠胃外给药，透皮给药，直肠给药，鼻腔给药，口腔给药，阴道给药或通过一个植入的储蓄池，其配方中含有常规的非毒性的制药学中适合的载体，辅药和溶媒。“肠胃外”一词在此包括了皮下注射，静脉注射，和肌肉注射。所用活性化合物的量，当然依赖于受治患者，个体体重，给药方式以及开处方医生的判断。然而，植物雌激素的用量通常是约0.01mg/kg/day至约1000mg/kg/day，更优选约0.01mg/kg/day至300 mg/kg/day，更好的是约1mg/kg/day至300mg/kg/day。当植物雌激素与抗癌剂联合使用时，植物雌激素的用量应是约0.01mg/kg/day至约1000mg/kg/day，更优选约0.01mg/kg/day至300mg/kg/day，更好的是约1mg/kg/day至300mg/kg/day，并且抗癌剂的用量应是约0.1μg/kg/day至约100mg/kg/day，更优选约0.3μg/kg/day至50mg/kg/day，更好的是约0.01mg/kg/day至50mg/kg/day。当植物雌激素组合物中包含免疫刺激剂时，免疫刺激剂的用量应是约1mg/kg/day至约5000mg/kg/day，更好的是约5mg/kg/day至约1000mg/kg/day。植物雌激素汉黄芩素，异甘草素，拟雌内酯或其组合物也可用于治疗其它雌激素相关性紊乱症，包括骨质流失，骨折，骨质疏松症，糖皮质激素引起的骨质疏松症，变形性骨炎(柏哲德氏症)，反常增加的骨更新，牙周病，牙齿脱落，风湿性关节炎，骨关节炎，假体周围骨质溶解，成骨不全症，转移性骨病，恶性血钙过多，软骨退化，子宫内膜异位，子宫纤维瘤，潮热，心血管病，认知功能损伤，大脑退化性疾病，再狭窄，男子女性型乳房，血管平滑肌细胞增生，肥胖，失禁。在此，雌激素相关性紊乱症还包括绝经期(更年期)症状，这是一个妇女从生育期向非生育期的转变，最初以月经停止为特征。绝经期症状包括潮热，即血管收缩不稳定引起的出汗，心理和情绪上的症状如疲劳，失眠，易怒以及神经过敏，缺乏睡眠，头晕眼花，心脏的症状；心脏疾病发作增多，恶心，便秘，腹泻，关节痛，肌痛，以及上述症状的合并。

尤其值得注意的是治疗和预防骨质疏松症。

骨质疏松症，或称骨密度损失，会增加骨折和脊柱断裂。骨质流失大约开始于35岁。绝经期这种流失加速，通常出现在45到50岁。绝经期后骨质量平均每年流失约1-2％。最初位于椎骨，表现为向前弯曲，导致弯腰和背痛，另外还表现在臀部和腰部。

骨质疏松症经几十年的发展并且与顶端骨质量有关，同时与骨质流失程度有关。

治疗雌激素相关性紊乱症时，植物雌激素组合物可以通过如下方式给予，口服给药，肠胃外给药，透皮给药，直肠给药，鼻腔给药，口腔给药，阴道给药或通过一个植入的储蓄池，其配方中含有常规的非毒性的制药学中适合的载体，辅药和溶媒。“肠胃外”一词在此包括了皮下注射，静脉注射，和肌肉注射。所用活性化合物的量，当然依赖于受治患者，个体体重，给药方式以及开处方医生的判断。

然而，植物雌激素的用量通常是约0.1mg/kg/day至约1000mg/kg/day，更好的是约0.1mg/kg/day至300mg/kg/day。

此发明通过以下非限制性例子进一步加以解释说明。

主要实施例

汉黄芩素从7克含有Panax pseudo-ginseng Wall(三七)、IsatisIndigotica Fort(菘蓝)、GANODERMA lucidium Karst(灵芝)、Dendrathema morifolium Tzvel(菊花)、Glycyrrhiza glabra L(光果甘草)、Sculletaria bailcalensis Georgi(黄芩)、Rabdosia rubescens(冬凌草)、及Serenoa repens(锯齿棕榈)提取物的多组分植物提取物组合物中提取得到的。粉末被溶解于150毫升的丙酮中使用索氏提取器提取一个小时。液相的提取物使用2∶1的环己胺∶丙酮溶剂系统进行硅胶柱层析术。从第11-13号的分段部分中得到约25毫克的黄色粉末(每部分8毫升)。粉末用纯乙醇进行重结晶得到黄色的晶体。

图1是高效液相色谱法的色谱图，显示汉黄芩素在洗脱液中的位置。色谱图通过岛津SPD-M1OA色谱仪使用C18反相色谱柱及水与乙腈的0.1％三氟乙酸溶液的两种溶剂系统而获得。

黄色晶体的化学结构与分子重量通过13C核磁共振谱图(D-4甲醇溶剂，以VARIANUNITY Inova 400system分析)的总图(图2(B))及分图(图2(A))确定。该样品还通过Hewlet PACKARD VG 7070仪器进行电子离子化分析，其质谱图见图3，显示其分子量是284，与汉黄芩素的分子量相符合。

异甘草素提取自以纯乙醇提取的光果甘草浓缩粉末(购自Shanghai Zhao Wei Technology Development Co.)的黄酮类部分纯化而得到。大约1克的黄酮类浓缩物(溶解于5毫升的水汇总)通过葡聚糖LH-20柱(2.5×30毫米)后，以甲醇-水混合溶剂梯度洗脱。异甘草素的粗提物从第27号的分段洗脱部分(每个部分10毫升)中获得。粗产物进一步以硅胶色谱法通过二氯甲烷∶甲醇(5∶1)的混合溶剂进行洗脱。

异甘草素的化学结构及分子量通过吸收光谱法(图5)确定，联合以在岛津SPD-M1OA色谱仪上进行的HPLC分离(图4)，及13CNMR谱图(图6(a)，部分；图6(b)，全部)与质谱(图7)。吸收光谱图与购自Sigma Chemical Co，(St.Louis，Missouri)的异甘草素参比化合物的谱图一致。

通过检测汉黄芩素及异甘草素的抑制肿瘤细胞生长、调控肿瘤细胞周期、及活化雌激素受体的能力来评价它们的抗肿瘤活性。

肿瘤细胞系LNCAP，DU-145，及MCF-7细胞从American TypeCulture Collection(美洲种培养物中心)处购买。一种对紫杉醇有抗性的卵巢肿瘤细胞系PTX10从Brander Cancer Research Laboratory，NewYork Medical College(纽约医科大学布兰德研究室)获得。细胞被维持在附加以10％热去活的FBS、5mM谷酰胺、50单位/毫升的青霉素G、50克/毫升的链霉素的RPMI1640培养基中。细胞通常以1×105细胞/毫升的细胞密度被接种于T-75瓶中，过夜使贴壁，然后用植物提取物处理。在不同时间下，细胞通过胰酶消化而收集。

实施例1

本实施例显示汉黄芩素与异甘草素在抑制激素敏感性前列腺癌细胞系LNCAP细胞的生长中的活性。

MTT检测法(MTT是3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物)被用于计算存活细胞数目。检测试剂购自Boehringer Mannheim(Roche Diagnosis Corp，Indianapolis，Indiana）.(勃林格曼海姆(位于印第安纳州的印第安纳波力丝市的罗氏诊断公司))。在本检测实验中，四唑染料MTT被代谢活性的细胞分开成甲鐕，并在550-618nm处显示出强的吸收。细胞存活实验的方案由试剂的生产商提供，并由我们的实验室进行下列的进一步改进。

前列腺癌细胞或乳腺癌细胞分别以3×103细胞(MCF-7)或6×103细胞(LNCAP或DU145)的细胞密度被接种于96孔微滴度板中，培养液的容积是100微升。在24小时培养后，精取20微升的含有不同浓度的化合物的溶液加入到贴壁细胞中。每一个浓度重复3孔，以获得平均值。为了消除溶剂的效应，用于制备最高浓度的药物溶液的溶剂以20微升/孔的体积被加入到对照细胞中(最高0.5％的二甲基亚砜的量)。过夜使贴壁，然后用植物提取物处理。培养板被置入到37摄氏度的CO2孵箱中孵育72小时。在第三天结束前(经过72小时)，培养基被小心去除，注意不要干扰细胞，替换以100微升的新鲜细胞培养液。在每孔中加入10微升的MTT试剂，然后将培养板重新放入37摄氏度的CO₂孵箱中培养24小时。

在每孔中加入100微升的十二烷基磺酸钠(SDS)助溶剂(购自Boehringer MANNHEIM勃林格曼海姆公司)。培养板在CO2培养箱中过夜，然后以ELISA Reader(EL800，Bio-Tek Instruments，Inc.)(ELISA读取仪(EL800，生物技术仪器公司))在570纳米处测定。存活细胞百分比按照下列公式计算：

其中，

V是存活细胞百分比，

A_对照是对照细胞的吸光度；

A_给药是受试细胞的吸光度。

图8和图9分别显示了汉黄芩素及异甘草素的抑制LNCaP(雄激素依赖的)与DU-145前列腺癌细胞(雄激素依赖的)活性。很明显，对细胞生长的抑制作用是与剂量相关的。化合物的引起半数肿瘤细胞的生长抑制的浓度(被定义为ED50)通过线性插入法确定。从这些测定实验中获得两种化合物的ED50的数值被显示于表1的第1栏和第2栏。

表1MTT法测定化合物对不同类型细胞的ED50值

	LNCaP(微克/毫升)	DU145(微克/毫升)	MCF7(微克/毫升)
				汉黄芩素	10.00	18.6	NA
异甘草素	3.51	7.60	3.25

实施例2

本实施例显示了异甘草素抑制乳腺癌细胞系MCF-7生长的活性。

用与实施例所述相同的实验方案评价异甘草素对MCF-7细胞的功效。MCF-7细胞是表达雌激素受体的乳腺癌细胞。因此它对于研究抗肿瘤药物对雌激素受体阳性的乳腺癌的效果是一个好的模型。

图9显示了异甘草素对MCF-7细胞的MTT实验曲线。数据显示异甘草素抑制MCF-7细胞的生长，且观察到剂量依赖性的曲线。其ED50值在表1的第3栏显示。

实施例3

本实施例显示汉黄芩素及异甘草素对LNCaP细胞周期的调控作用。LNCAP细胞具有依赖于激素的细胞周期。

细胞周期测定样品的制备：于12.5cm2大小的培养瓶中培养的细胞(2-4×10⁶个细胞)在收集前被暴露于两种浓度的汉黄芩素及异甘草素中24-48小时。细胞用PBS缓冲液洗涤，在冰冷的70％乙醇中固定。精取固定细胞，重新溶解于PBS溶液，然后用1.0毫克/毫升的DAPI(4，6-联脒-2-苯基吲哚，购自Eastman Kodak，Rochester，NY(纽约州罗切斯特市的伊斯特曼柯达公司)染色，并溶解于如Halicka等以前所述(H.D.Halicka，B.Ardelt，G.Juan，A.MITTELMAN，S.Chen，F.Traganos and Z.DARZYNKIEWICZ，″APOPTOSIS and Cell Cycle EffectsInduced by Extracts of the Chinese Herbal Preparation of PC SPES″，INTERNATIONAL J.OF ONCOLOGY(1997)，11：437-448)的pH 6.8的含有100mM NaCl，2mM MgCl2，及0.1％Triton X-100(Sigma)的10mM的哌嗪-N，N-双-2-乙烷磺酸缓冲液中。

应用UV激光照明术在一种ELITE ESP流式细胞仪(UV laserillumination(Coulter Inc.，F1.))上测定细胞内DNA的含量。使用一种多周期的程序解析DNA频数直方图，以估算处于细胞周期不同阶段的细胞的频数。

图10显示在使用3微克/毫升的汉黄芩素处理24小时或在未经处理的条件下生长的LNCaP细胞的DNA直方图。显然，如尖峰所示，存在G1期的变化。数据分析揭示G1期增加与汉黄芩素的浓度成比例。

对异甘草素也进行了类似的实验。图11总结了汉黄芩素及异甘草素对LNCap细胞周期的G1、S、G2M期的作用。数据显示汉黄芩素诱导抑制Gl期，而异甘草素诱导抑制G2M期。G1或G2M期的延迟将导致LNCap细胞增殖的抑制。

实施例4

本实施例显示了汉黄芩素及异甘草素对DU-145细胞周期的调节。

实施例3中所述的方案被用于研究汉黄芩素对激素依赖性前列腺癌细胞系DU-145细胞的效应。结果如图12所示，汉黄芩素延长了DU-145细胞的G2M期。G2M期的延长将导致DU-145细胞增殖的抑制。

实施例5

通过测定汉黄芩素及异甘草素激活雌激素受体(α、β亚型)的能力显示它们的雌激素样活性。

按照Yoon等所述的方案(″Differential activation of wild-type andvariant forms of estrogen receptor A by synthetic and natural estrogeniccompounds using a promoter containing three estrogen-responsiveELEMENTS″，J.STEROID BIOCHEM.&AMP；MOLECULARBIOLOGY(2000)，28：pages 25-32)，HEK 293细胞(ATCC CRL-1573)分别转染hERa及hER表达载体，以及一个ERE-LUC报告基因(加一个用于正常化的TK-LUC报告子)。

细胞分别在0，0.07，0.02，0.08，0.3，0.7，1.4(或4)及9微克/毫升浓度的汉黄芩素或异甘草素中暴露20小时后，细胞裂解液被用于分析报告基因的表达(参考：Tzukennan et al.″Human estrogen receptorTRANSACTIVATIONAL capacity is determined by both cellular andpromoter content and mediated by two functionally distinct intermolecularregions″，MOL.ENDOCRINOL.(1994)，8：21-30)。

图13示汉黄芩素及异甘草素激活ERα-Luc报告基因的量效关系图。

图13示汉黄芩素及异甘草素激活ERβ-Luc报告基因的量效关系图。很明显，汉黄芩素及异甘草素对ERβ-Luc报告基因的激活能力比对ERα-Luc报告基因的激活能力至少高10倍。

实施例6

本实施例显示异甘草素对COX-2活性的抑制。

COX是一种双功能酶，它显示出环氧化酶及过氧化酶的双重活性。其环氧化酶的活性是使花生四烯酸氧化成前列腺素G2(PGG2)，其过氧化酶的活性是使PGG2随后被还原为相应的醇PGH2。一些用于测定COX抑制剂活性的方法包括：使用氧谱图测定氧气的摄取，测定放射活性的花生四烯酸的转化，或测定PGH2形成的前列腺素(使用免疫分析技术)。

这些实验使用了市售的Cayman Chemical(Ann Arbor，MI 48108)(美国安纳波市的卡依曼化学公司)的目录号为760101的牛COX-2抑制物筛选分析试剂盒。这种免疫分析法使用能结合所有主要前列腺素的抗体定量检测以花生四烯酸为底物的COX反应所产生的PGF2α的量。下列反应的最终容量通常是1.15毫升。简单地说，COX-1和COX-2(例如，20微升的1～100单位/毫升的COX溶液，其中的一个单位被定义为：在37℃下于pH8.0的含有100μM花生四烯酸盐，5mMEDTA，2mM苯酚及1μM血色素的0.1M的Tris-HCl缓冲液中，每分钟消耗一个纳摩尔的氧气所需要的酶量)先在离心管中以缓冲液(例如，0.1M TRIS，PH8.0，5MM EDTA，2MM苯酚)及血红素(例如，10微升的10MM血红素)固定。血红素是COX发挥最强活性的辅助因子。包含一种抑制物的COX样品可以在加入底物之前与抑制物(例如，1-100微摩尔)预混合。花生四烯酸底物(例如，10微升的10MM溶液)可以被加入到COX/血红素/抑制物混合物中片刻，其温度应足以使反应进行并产生可检测的产物(例如37℃下2分钟)。加酸(例如50微升的1MHCl)可以使反应停止。

另外可加入氯化二锡(例如，100微升的饱和溶液)使产生的PGH2变成更稳定的PGF2α以便定量前列腺素。反应所产生的前列腺素通常以酶免疫分析法定量。

前列腺素的酶免疫检测分析法中，町以方便地在96孔板上使用抗体检测前列腺素。前列腺素标准物及COX100％活性样本(不含抑制物)被作为对照进行检测。也可以使用一些作为背景的样本进行校正。COX与候选的抑制物组成的反应体系、或对照物被用以同其量足以检测COX反应(如50微升稀释于6毫升合适EIA缓冲液的抗血清)产生的前列腺素的前列腺素筛选血清共孵育。反应体系的孵育时间和温度应足以允许抗血清同前列腺素发生相互作用(如室温下18小时)。在进一步处理培养板时，反应体系先被洗去，然后以200微升的Ellman试剂孵育60分钟左右。培养板可在读板器上405-420纳米处读出数据。前列腺素标准物被用以计算前列腺素浓度的标准曲线。抑制百分率的计算方法是：用100％活性样本的前列腺素的量减去每个含抑制物样本的前列腺素的量，然后除以100％活性样本的前列腺素的量。以抑制百分率对抑制物计算量作图，从图中可得出IC50值(达到50％抑制率时的浓度)。

测定一种COX抑制物的活性的方法已经在文献中叙述，例如W.XIE，J.G.CHIPMAN，D.L.ROBERTSON，ET AL.，″EXPRESSION OF AMITOGEN-responsive gene encoding prostaglandin synthase is regulatedby MRNA splicing″，Proc.NATL.Acad.Sci.USA(1991)，88：2692-2696；K.M.Maxey，K.R.Maddipati，and J.BIRKMEIER，″INTERFERENCE inenzyme immunoassays″，J.CLIN.IFNMUNOASSAY(1992)，15：116-120；P.PRADELLES，J.GRASSI，AND J.A.MACLOUF，″ENZYMEIMMUNOASSAYS OF eicosanoids using acetylcholinesterase as label：Analternative to RADIOIMMUNOASSAY″，ANAL.CHEM.(1985)，57：1170-1173；MACLOUF，J.，GRASSI，J.，AND PRADELLES，P.Developmentof enzyme-immunoassay techniques for the measurement of eicosanoids，Prostaglandin AFZD LIPID METABOLISM IFZ RADIATION IRAJUR(197)，pages 355-364。

图15显示根据上述步骤检测的异甘草素对COX-2的剂量依赖性抑制活性。该数据算出的IC50值是10.5μM。

实施例7：显示汉黄芩素与异甘草素对卵巢癌细胞系的细胞毒活性：

PTX10是一种抗紫杉醇的卵巢癌细胞系，细胞被维持在附加以10％胎牛血清、100单位/毫升的青霉素G、100克/毫升的链霉素、2mML谷酰胺(均购自Gibco/BRL Life Technologies，INC.，Grand Island，NY)的RPMI 1640培养基中，置于37.5℃的充以CO2的培养箱中培养。

实验开始时，培养物的密度是5×105个细胞/毫升。细胞以指数倍数非同步增长。

进行MTT实验，研究异甘草素及汉黄芩素对PTX10细胞生长的效应。MTT实验的方案与实施例1所述相同。图16与图17示PTX细胞系分别在汉黄芩素与异甘草素存在的情况下的生长抑制曲线。两个图中明显可以看出浓度依赖性的抑制效果。通过抑制曲线计算出的汉黄芩素与异甘草素的ED50值分别是1.56微克/毫升、3.32微克/毫升。

表2 ED50

	PTX10(紫杉醇抗性的卵巢癌细胞)
		汉黄芩素(I-16-2)	＜1.56微克/毫升
异甘草素	3.32微克/毫升

因此，汉黄芩素与异甘草素可能对具有紫杉醇等抗性的癌症有用。

实施例8

与本文公开的内容相关的一种组合物被装入胶囊中，给予两例诊断为前列腺癌的志愿者服用，每天6次。为了检测癌症的演进情况，使用标准方法检测了一种由前列腺产生的物质——前列腺特异性抗原(PSA)的血液水平。结果见表3。

表3

患者年龄	使用组合物1治疗前的治疗方法	治疗起始前的PSA(ng/ml)	治疗1个月的PSA(ng/ml)	治疗2个月的PSA(ng/ml)	1个月治疗后的PSA下降率	2个月治疗后的PSA下降率
							73	睾丸切除术加氟他胺	80	40	6	50％	92.5％
79	前列腺切除术；无给药	120	64	18	46.7％	85％

如表1所示，在使用组合物1治疗1及2个月后PSA的水平急剧下降。

包含汉黄芩素、异甘草素、拟雌内酯及其联合物的组合物具有植物雌激素样及抗肿瘤活性。当被用于肿瘤治疗时，该组合物可以含有其他的抗癌化合物和/或免疫刺激物。所述抗癌活性通过汉黄芩素及异甘草素抑制肿瘤细胞系的活性而显示。异甘草素被检定为COX-2的抑制物，提示它具有一般的抗癌活性。汉黄芩素被检定为具有植物雌激素的活性，提示它除了因抑制COX-2活性而具有一般的抗肿瘤活性之外，它可能对激素相关的癌症特别有用。此外，汉黄芩素可以被用于激素相关疾病的治疗，如骨质疏松症的治疗。

虽然所述的本发明涉及一个优先的实施方式，但是需要说明的是，本领域的技术人员可以在本发明范围之内作出各种不同改变或同等替代其中的要素。再之，可以在不背离基本范围的基础上进行多种变更，使特定的条件或材料适用于本发明的说明。因此，需要说明的是，本发明不应该仅仅局限于作为为了实施发明所设想的最佳实施方式所公开的特定的实施方式，它还应包括后附的权利要求范围能囊括的所有实施方式。

Claims (35)

1.种治疗人所患癌症的方法，包括给于一种含有占组合物总重量0.5％以上的汉黄芩素、异甘草素、拟雌内酯、它药学上可接受的盐和酯、它的可选择性替代类似物、或一种或多种前述化合物组成的组合物。

2.权利要求1的方法，其中所述癌症可以是前列腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌、结肠癌、肺癌、膀胱癌、睾丸癌、卵巢癌、甲状腺癌或骨癌。

3.权利要求1的方法，其中该组合物含有一种选自由汉黄芩素、汉黄芩素的一种药学上可接受的盐或酯，汉黄芩素的一种可选择性替代类似物所组成的组的化合物，或一种或多种上述化合物的组合而成的组合物。

4.权利要求3的方法，其中该组合物含有汉黄芩素的糖苷类化合物，选自由金雀异黄甙、鹰嘴豆素、樱黄素、野黄芩黄素、黄豆苷、毛地黄黄酮、4’，5，7-三羟黄酮、刺槐黄素、3，6，4-三羟基黄酮、7，3-二羟基-4，1-二甲氧基-异黄酮、3R-2’，3’-二羟基-7，4-二甲氧基-异黄酮所组成组的汉黄芩素的可选择性替代类似物，或一种或多种前述化合物组合而成的组合物。

5.权利要求3的方法，其中该组合物含有黄芩属植物的提取物。

6.权利要求3的方法，其中治疗包括给于0.001-300mg/kg/day剂量的汉黄芩素。

7.权利要求3的方法，其中该组合物还含有异甘草素、拟雌内酯，或其组合物。

8.权利要求1的方法，其中该组合物含有一种选自由异甘草素、异甘草素的一种药学上可接受的盐或酯，异甘草素的一种可选择替代的类似物所组成的组的化合物，或者一种或多种前述化合物所组成的组合物。

9.权利要求8的方法，其中该组合物含有根皮素、4，2，4’-三羟查耳酮、或上述化合物的组合物。

10.权利要求8的方法，其中该组合物含有甘草、光果甘草，或其二者的组合物。

11.权利要求8的方法，其中该组合物还含有汉黄芩素、拟雌内酯、或其二者的组合物。

12.权利要求8的方法，其所述治疗包括给于0.001-300mg/kg/day剂量的异甘草素。

13.权利要求1的方法，其中该组合物含有这样一种组分，该组分选自由拟雌内酯、拟雌内酯的一种药学上可接受的盐或酯，拟雌内酯的一种可选择性替代类似物所组成的组的化合物，或一种或多种上述化合物组合而成的组合物所组成的组。

14.权利要求13的方法，其中该组合物含有这样一种组分，该组分选自由蒲公英、紫花苜蓿、甘蓝或鳢肠的植物提取物，或一种或多种前述植物的提取物的组合物所组成的组。

15.权利要求13的方法，其中该组合物还含有汉黄芩素、异甘草素、或其二者组合物。

16.权利要求13的方法，其所述治疗包括给于0.001-300mg/kg/day剂量的拟雌内酯。

17.权利要求1的方法，其中该组合物还含有抗癌剂。

18.权利要求17的方法，其中所述抗癌剂选自由冬凌草素、靛玉红、紫杉醇、顺铂、喜树碱、长春新碱、农吉利甲素、美登素、高三尖杉酯碱、秋水仙素、马蔺子甲素、马蔺子乙素、马蔺子丙素、山油柑碱、苦参碱、氧化苦参碱、姜黄素、杷日辛、蚤休甙和一种或多种前述抗癌剂所组合而成的组合物所组成的组。

19.权利要求17的方法，其中该组合物还含有免疫刺激剂。

20.权利要求19的方法，其中所述免疫刺激剂选自由人参皂甙、阿魏酸、甘露聚糖、菊糖、含刺五加甙A、含刺五加甙B、含刺五加甙C、含刺五加甙D、含刺五加甙E、绞股蓝甙、β-伏苓聚糖、菊粉、糖蛋白、干扰素、γ-球蛋白、灵芝提取物、云芝提取物、茯苓提取物，以及一种或多种前述免疫刺激剂组合而成的组合物所组成的组。

21.一种组合物，含有：一种占组合物总重量0.5％以上的化合物，该化合物选自由汉黄芩素、异甘草素、拟雌内酯，它在药学上可接受的盐或酯，它可选择性替代的类似物所组成的组，以及一种或多种前述化合物的组合物；至少一种抗癌剂。

22.权利要求21的组合物，其中所述抗癌剂选自冬凌草素、靛玉红、紫杉醇、顺铂、喜树碱、长春新碱、农吉利甲素、美登素、高三尖杉酯碱、秋水仙素、马蔺子甲素、马蔺子乙素、马蔺子丙素、山油柑碱、苦参碱、氧化苦参碱、姜黄素、杷日辛、蚤休甙，和一种或多种前述抗癌剂所组合而成的组合物所组成的组。

23.权利要求21的组合物，其中抗癌剂包括：一种冬凌草的提取物；一种选自由三七、灵芝、黄芩、大豆、姜黄所组成的组的植物的提取物，或一种或多种上述植物的提取物的组合物。

24.权利要求23的组合物，其中抗癌剂含有：1-10重量份的冬凌草提取物；10-40重量份的三七提取物；100-500重量份灵芝提取物；10-100重量份黄芩提取物；10-100重量份的大豆提取物；10-100份重量单位的姜黄提取物。

25.权利要求21的组合物，其中抗癌剂包括：律草提取物；一种选自由三七、灵芝、黄芩、大豆、姜黄所组成的组的植物的提取物，或一种或多种前述植物的提取物的组合物。

26.权利要求25的组合物，其中抗癌剂含有：1-10重量份的律草提取物；10-40重量份的三七提取物；100-500重量份灵芝提取物；10-100重量份黄芩提取物；10-100重量份的大豆提取物；10-100份重量单位的姜黄提取物。

27.权利要求21的组合物，其中还含有免疫刺激剂。

28.权利要求27的组合物，其中所述免疫刺激剂选自由人参皂甙、阿魏酸、甘露聚糖、菊糖、含刺五加甙A、含刺五加甙B、含刺五加甙C、含刺五加甙D、含刺五加甙E、绞股蓝甙(gynoside)、β-伏苓聚糖、菊粉、糖蛋白、干扰素、γ-球蛋白、灵芝提取物、云芝提取物、茯苓提取物，以及一种或多种前述免疫刺激剂的组合物所组成的组。

29.一种组合物，含有：一种化合物选自由汉黄芩素、异甘草素、拟雌内酯或者其组合所组成的组；冬凌草素；β-伏苓聚糖。

30.一种组合物，含有：1-30％(重量)的汉黄芩素、异甘草素、拟雌内酯、或一种或多种前述化合物的组合物；0.1-5％(重量)的冬凌草素；20-90％(重量)的β-伏苓聚糖；其中所有重量百分比是基于组合物的总重量。

31.一种治疗人雌激素紊乱的方法，包括给于一种含有占组合物总重量0.5％以上的汉黄芩素、异甘草素、拟雌内酯、它的药学上可接受的盐及酯、它的可选择性替代类似物、或者一种或多种前述化合物的组合物。

32.权利要求31的方法，其中所述雌激素紊乱症包括骨质流失、骨折、骨质疏松、糖皮质激素诱发的骨质疏松、变形性骨炎、非正常增长的骨更新、牙周病、牙齿脱落、风湿性关节炎、骨关节炎、假体周围骨质溶解、成骨缺陷、转移性骨病、恶性肿瘤的高钙血症、软骨变性、子宫内膜异位症、子宫纤维瘤、潮热、心血管疾病、认识机能损伤、脑退化症、心瓣再狭窄症、男乳女化症、血管平滑肌细胞增生症、肥胖症、失禁、更年期综合症、或一种或多种前述病症的合并。

33.权利要求31的方法，其中该组合物含有汉黄芩素的糖苷类化合物；一种汉黄芩素的可选择性替代类似物，选自由金雀异黄甙、鹰嘴豆素、樱黄素、野黄芩黄素、黄豆苷、毛地黄黄酮、4’，5，7-三羟黄酮、刺槐黄素、3，6，4-三羟基黄酮、7，3-二羟基-4，1-二甲氧基-异黄酮、3R-2’，3’-二羟基-7，4-二甲氧基-异黄酮、或一种或多种上述化合物组合而成的组合物所组成的组。

34.权利要求31的方法，其中治疗包括给予0.01-600mg/kg/day剂量的汉黄芩素。

35.权利要求31的方法，其中该组合物还含有异甘草素、拟雌内酯，或其二者的组合。

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