CN1981046B - 水解卵磷脂产物的酶促生产 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及卵磷脂和相关材料的酶促改性法，和通过这种改性获得的水解产物。一种具体实施方案提供了生产包含水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯的水解产物的方法。例如，这种方法可以包括下列步骤：(a)使原材料，例如包括磷脂组分和甘油三酯组分的卵磷脂，在水或有机溶剂介质中与有效地将磷脂水解的第一酶接触；和(b)随后使步骤(a)的产物与有效地将甘油三酯水解的第二酶接触。
Description
技术领域
本发明涉及来自天然产品的磷脂-甘油三酯混合物，例如卵磷脂的酶促水解法，特别是涉及水解卵磷脂产物的生产，并涉及由这些方法获得的水解卵磷脂产物。
参考文献
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背景技术
卵磷脂和改性卵磷脂作为增溶剂、乳化剂和其它类型的添加剂广泛用在工业中，包括食品和制药工业。卵磷脂获自各种动物或植物来源，例如大豆或蛋黄，并包括磷脂与甘油三酯的混合物，以及较少量的化合物如糖脂类、碳水化合物、脂肪酸和/或甾醇。
据发现，卵磷脂中磷脂的部分水解能改进乳化性能。这种改性最常见是通过用磷脂酶A1和/或A2(它们分别选择性水解磷脂的第一或第二甘油脂肪酸，以产生溶血磷脂)处理卵磷脂来实现。
据发现，在卵磷脂或部分水解的卵磷脂中加入甘油单酯和二酯也能改进最终产品的性能，例如面粉的烘焙特性或人造黄油(尤其是具有较低脂肪含量，例如60wt％脂肪或更低的那些)的防溅性能(参见例如，EP专利No.253429；美国专利No.3,505,074；PCT公开No.WO02/49444)。可使用这些组合物以改进抗陈化性能的食品和饲料产品的进一步例子包括冷冻面团、焙烤产品，乳化肉产品、冰淇淋、调味品和其它乳剂系统。
目前，通过在卵磷脂中加入这些组分，制备了包含更高量甘油单酯和二酯的卵磷脂产品。可以通过卵磷脂和相关组合物的酶促水解以受控方式直接制备这些产品。
发明内容
I.综述
一方面，本发明提供了生产包含水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯的水解产物的方法，该方法包括：
(a)使来自植物油的包含磷脂组分和甘油三酯组分的原材料在水或有机溶剂介质中与第一酶接触；和
(b)随后使步骤(a)的产物与第二酶接触，第二酶与第一酶不同；
其中所述酶之一是能有效地将磷脂水解的磷脂酶或脂酶，另一种酶是能有效地将甘油三酯水解的磷脂酶或脂酶。
在所选实施方案中，第二酶是脂酶，第一酶是磷脂酶，例如磷脂酶A1和/或A2。在一种这样的实施方案中，第一酶是磷脂酶A2。
在另一实施方案中，第一酶是磷脂酶D。该实施方案可以在所述接触步骤(b)之前进一步包括使步骤(a)的产物与磷脂酶A1和/或A2反应。在另一实施方案中，第一酶是磷脂酶C。
在该方法以及本文提供的所有水解方法中，原材料优选来自天然存在来源，例如蛋黄或植物油。优选地，原材料直接来自天然存在来源，即不添加外加磷脂、甘油三酯、甘油单/二酯或脂肪酸组分。
原材料可以是卵磷脂物质，例如具有至少50wt％，优选至少60wt％的丙酮不溶物(A.I.)含量。(除非另行说明，否则本文所述的比例均是重量百分比)。或者，可以使用具有较低A.I.值，例如10wt％-50wt％的原材料。
水解产物优选为水解卵磷脂产物，即含有至少50％，更优选至少56％丙酮不溶物。水解产物优选具有小于45mg KOH/克的酸值。在进一步实施方案中，水解产物包含至少60％丙酮不溶物。
上述方法的步骤(a)和(b)可以在水介质或在有机溶剂(例如烃溶剂)中进行。在后一种情况下，原材料可以是植物油膜脱胶法的渗余物。在这一方面的一种实施方案中，步骤(a)和(b)在能有效地将水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯与释放的脂肪酸分离的膜存在下进行。
在相关方面，本发明进一个提供了生产包含水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯的水解产物的另一方法，该方法包括：使包含磷脂组分和甘油三酯组分的原材料在非质子有机溶剂中与第一和第二酶接触，其中第一酶是能有效地将磷脂水解的磷脂酶或脂酶，第二酶与第一酶不同，是能有效地将甘油三酯水解的脂酶或磷脂酶，优选脂酶。
在一种实施方案中，原材料与第一和第二酶同时接触；在另一实施方案中，这些酶以任意顺序依次使用。也就是说，“第一”酶可以在“第二”酶之前，之后或与其同时使用。
优选地，第一酶(即能有效地将磷脂水解的酶)是磷脂酶A1和/或A2。在一种实施方式中，第一酶是磷脂酶A2。
非质子有机溶剂可以是烃溶剂，例如己烷。在一种实施方式中，卵磷脂原材料是植物油膜脱胶过程的渗余物。
在另一个方面，本发明提供了包含至少两种选自磷脂、水解磷脂、甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯的组分的水解产物的生产方法，该方法包括：使包含磷脂组分和甘油三酯组分的原材料在有机溶剂介质中与脂酶或磷脂酶C接触，其中原材料是植物油膜脱胶过程的渗余物。
在一种实施方案中，酶是脂酶，且水解产物包含磷脂和甘油二酯，在一些情况下还包含甘油单酯。在另一实施方案中，酶是磷脂酶C，水解产物包含磷脂、甘油三酯和甘油二酯。在此情况下，该方法进一步包括使水解产物与磷脂酶A1和/或A2反应。
在进一步方面，本发明提供了生产包含磷脂、甘油单酯和甘油二酯的水解产物的方法，该方法包括：使来自植物油的包含磷脂组分和甘油三酯组分的原材料在水溶剂中在不存在磷脂酶的情况下与脂酶接触。优选地，脂酶在接触条件下能有效地选择性水解甘油三酯。
本文公开的各种方法优选还包括去除或钝化酶和去除溶剂介质的步骤。在这些步骤之后，可以进一步将水解产物配制成食品。
在相关方面，本发明提供了水解卵磷脂产物，其中该产物包含水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯，并通过上述任何方法制成，其中原材料直接来自植物油，且该方法包括去除或钝化酶并去除溶剂介质的步骤。水解卵磷脂产物基本由原材料的组分和由原材料通过酶的反应获得的水解物质组成。优选地，水解卵磷脂产物包含至少50％，更优选至少56％的丙酮不溶物并具有小于45mg KOH/克的酸值。在所选实施方式中，产物包含至少60％丙酮不溶物。
在进一步相关方面，本发明提供了包含本发明的水解卵磷脂产物的食品，和通过将本发明的水解卵磷脂产物与另外的可食用的成分结合来配制食品的方法。
在本发明的下列详述中将更充分地描述本发明的上述和其它目的和特征。
II.卵磷脂或相关组合物的酶促改性法
本发明提供了生产包含磷脂和/或水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯(后两种组分共同称为甘油单/二酯)的水解产物的方法。通常，产物还包括未水解的磷脂和甘油三酯。水解磷脂通常为溶血磷脂，也可包括磷脂酸和/或溶血磷脂酸。
按照本发明，直接通过如下所述原材料的酶促处理，在不单独添加任何上述组分的情况下，来生产水解产物。原材料优选来自植物油；例如获自传统植物油处理的材料。
在优选实施方式中，该方法产生水解卵磷脂产物，其包含至少50％、优选至少56％、更优选至少60％的丙酮不溶物(主要由磷脂和/或水解磷脂组成)并具有低于45mg KOH/克的酸值。
原材料
本文公开的方法使用含有磷脂组分(优选至少10％，更优选至少25％，最优选至少40wt％)和甘油三酯组分的原材料。当原材料包含与“卵磷脂”立法标准相符的丙酮不溶物(主要由磷脂组成)含量时，原材料可以被称作卵磷脂原材料。这种丙酮不溶物含量通常为至少50wt％；例如56wt％，或60wt％或更高。
原材料优选来自天然存在的来源，例如蛋黄或植物油，其中“植物油”包括任何从植物种子、果实或坚果中榨取的油。常见例子包括向日葵油、油菜籽油、菜籽油、棉籽油、及特别是大豆油。原材料优选来自天然存在的来源，即不添加外加磷脂、甘油三酯、甘油单/二酯或脂肪酸组分。
方便地，可以经由天然存在材料，通常是植物油，例如大豆油的常规加工来生产原材料。在优选实施方式中，原材料是通过植物油的水或膜脱胶获得的材料。
例如，在典型的粗制大豆油加工程序中，将大豆去皮并用己烷提取以产生包括己烷和粗制大豆油的提取物(溶剂混合油)。除磷脂、糖、固醇、固醇葡糖苷、脂肪酸和其它较少量组分外，粗制大豆油还包含甘油酯油作为主要组分。
在称作“脱胶”的过程中将磷脂与溶剂混合油中大部分甘油酯油分离。在常规水脱胶法中，这通常是通过去除己烷溶剂、用热水或蒸汽使磷脂水化并离心分离来进行的。去除部分或所有水以产生粗制卵磷脂材料，其通常含有大约60-65％的丙酮不溶物，其余部分主要是甘油三酯和较少量的其它组分，例如糖、固醇葡糖苷和/或脂肪酸。这种材料可用作本发明所述方法中的原材料。
最近，开发出大豆油的膜脱胶法，其通常产生比水脱胶法更纯净的产品。参看，例如，Jirjis等人，美国专利Nos.6,207,209和6,833,149。在本发明的优选实施方案中，通过这种方法提供原材料。在膜脱胶法中，将在烃溶剂(通常是己烷)中的植物油溶剂混合油加到膜上，产生与溶剂混合油的磷脂含量相比不含磷脂的渗透物流和富含磷脂的渗余物流。
含或不含己烷溶剂的渗余物都可用作本发明方法中的原材料。可以通过改变分离条件，例如渗余物-渗透物比率、分离时间和/或分离阶段的数量来改变这种渗余物中的磷脂含量。(参见例如Jirjis等人，如上引用)。渗余物中的磷脂含量(除溶剂在外)可以是，例如，大约10％至大约85％，通常大约50％-85％。
反应条件：一般
可以在水介质中进行反应，其中脂质物质通常以胶束或泡囊之类的聚集体形式存在。本文所用的“水介质”是指水，或包含水和较少量的另一种水混溶性溶剂的溶剂介质。优选地，水介质包含最多10％，更优选最多5％的另一种水混溶性溶剂。更优选地，水介质包含少于1％或不含另一种溶剂。
反应还可以在有机溶剂介质中进行。本文所用的术语“有机溶剂介质”是指有机溶剂，优选非质子溶剂(即，不是醇或胺)，更优选为非极性溶剂，但是可以理解的是，反应介质应当包括足量的水以发生水解。优选地，水的含量为能有效地促进水解和使酯交换最小化的量。可以使用例如水饱和溶剂向反应介质中添加水，或者其可以通过原材料中的夹带或残余水提供。
在所选实施方案中，本文所述的水解法在能有效抑制水解磷脂与释放的脂肪酸发生酯交换的条件下进行。这种条件可以包括存在足以抑制酯化的水，或存在使释放的脂肪酸螯合的盐。例如，可以在反应混合物中加入盐或弱碱以使释放的脂肪酸螯合。这种盐可以是，例如，过量氯化钙。氯化钙通常作为离子活化剂用在使用磷脂酶的反应中。
或者或此外，可以在具有能从反应混合物中有效去除脂肪酸的组成和孔径大小的膜的存在下进行反应。这一特征可用于提高水解产物的丙酮不溶物(A.I.)含量。
在本文所述的方法中可以改变的其它反应条件包括，例如，酶状态(例如，是否固定化)、温度、pH、其它添加剂的存在和浓度、和底物浓度。示例性条件如下所述。
C.双酶水解法
在本发明的一个实施方案中，原材料在使用两种不同酶的双酶法中水解。具体而言，使用第一酶，通常是磷脂酶(或如下所述的磷脂反应性脂酶)将原材料中的磷脂水解成溶血磷脂和/或磷脂酸，并使用第二酶，通常是脂酶(或有时是具有脂酶活性的磷脂酶)将甘油三酯水解成甘油单/二酯。优选地，第一酶是用于磷脂水解的磷脂酶，例如磷脂酶A2，第二酶是用于甘油三酯水解的脂酶。(注意，在这种情况下“第一”和“第二”的使用不一定代表了反应的时间顺序)。
相对于不同水解组分的相对存在量，两种不同酶的使用可以在所得产物组成的范围上提供比单酶法具有更大的灵活性。如下进一步描述，这两种酶可以同时或以任意顺序依次使用。
更通常，两种不同酶各自是磷脂酶或脂酶，其中一种酶用于将原材料中的磷脂水解成例如溶血磷脂，另一种用于将原材料中的甘油三酯水解成甘油单/二酯。通常，一种酶是选择性水解磷脂的磷脂酶，另一种是选择性水解甘油三酯的脂酶。(本文所用的“选择性”是指在相同条件下，酶使特定底物(例如磷脂)水解的程度大于使不同底物(例如甘油三酯)水解的程度)。水解“程度”是指底物被水解的摩尔百分比。选择性酶使一种底物水解的程度与使另一种底物水解的程度相比，可以相差2(factor)或更多倍，相差大约5或更多倍，或相差大约25或大约50或更多倍。
如下所述，一些脂酶已知能使磷脂水解，有时水解程度高于它们使甘油三酯水解的程度。相反，尽管较不常见，但一些磷脂酶已知能使甘油三酯水解，有时水解程度高于它们使磷脂水解的程度。通常，这些酶的活性和选择性取决于反应条件。
因此，两种酶的选择可以包括脂酶和磷脂酶的不同组合，只要在反应条件下，一种酶具有显著和/或选择性脂酶活性，另一种酶具有显著和/或选择性磷脂酶活性。(本文所用的“显著”活性是指在给定一组反应条件下，酶使至少1摩尔％，优选至少5摩尔％，更优选至少10摩尔％或至少25摩尔％的特定底物水解)。
如下进一步描述，当在水溶剂中进行时，双酶反应有利地在第一阶段中使用磷脂酶(或磷脂选择性酶)，并在后一阶段中使用脂酶(或甘油三酯选择性酶)。在有机溶剂中的反应可以以任意顺序依次或同时使用这两种酶。后一反应优选在来自膜脱胶过程的渗余物上进行。
C1.在水介质中的双酶反应
在一种实施方式中，如上所述在水介质中进行双酶法。这种反应的原材料包含如上所述的磷脂组分和甘油三酯组分，优选直接来自植物油。这种原材料可以是例如，如上所述获自大豆油的水脱胶的粗材料。然而，来自膜脱胶过程的原材料也可以在水介质中水解。
当在水介质中进行水解时，已经发现，甘油三酯的初始水解可以造成介质粘度极大提高。因此，当双酶法在水介质中进行时，优选使原材料首先与能有效地将磷脂选择性水解的酶(例如磷脂酶或磷脂选择性脂酶)接触。在足够的反应时间后，并任选在回收中间产物之后，使该材料随后与能有效地将甘油三酯选择性水解的酶(例如脂酶或具有脂酶活性的磷脂酶)接触。
通常，这种方法中的第一酶是磷脂酶，例如磷脂酶A2，第二酶是脂酶，优选甘油三酯选择性脂酶。下面在章节V和VI中提供了这些方法的实施例。
如下进一步论述，可以将酶固定，这有利于将它们从反应混合物中去除。或者，在反应完成时通过热处理将未固定的酶钝化。
C2.在有机溶剂中的双酶反应
双酶法也可以在包含足以进行水解的水，优选足以促进水解并抑制酯交换的水的有机溶剂介质中，优选非质子溶剂中进行。优选在有机溶剂中提供原材料。在一种实施方案中，该方法是在植物油(通常是大豆油)的膜脱胶法中获得的渗余物上进行。如美国专利Nos 6,207,209和6,833,149中所述的典型渗余物包含预加工油中存在的大部分磷脂，因为这些化合物在烃溶剂中形成不会渗透过膜孔的大聚集体。然而，如上所述，通过改变膜分离过程中使用的条件；例如通过改变渗余物-渗透物比率，可以获得具有不同磷脂含量的渗余物。渗余物通常还包含显著量的甘油三酯。
有机溶剂可以是在反应条件下为惰性的任何溶剂，包括例如低分子量酯或酮、卤代烃、或优选为烃。优选的烃溶剂包括链烷、环烷烃和简单的芳烃，例如，苯及其含有最多具有四个碳原子的烷基取代基的同系物。烃的例子包括苯、甲苯、二甲苯、C3-C6环烷烃、C5-C8烷烃、和它们的混合物，例如石油醚、以及C5-C8链烯烃。
当双酶法在有机溶剂中进行时，两种酶可以如上所述依次添加，并任选分离中间产物。或者，当使用有机溶剂介质时，可以同时使用两种酶。下面在章节V和VI中提供了这两种反应类型的例子。
可以在能够有效地将水解产物组分(例如磷脂、水解磷脂、甘油三酯、甘油单酯和/或甘油二酯)与释放的脂肪酸分离的膜存在下进行本方法，特别是在有机溶剂中进行时。可以根据本领域已知的方法选择适宜的膜组成、孔径大小和操作压力，从而使游离脂肪酸选择性通过该膜。该特征可以有效地提高水解产物的丙酮不溶物(A.I.)含量。
如下进一步论述，可以将酶固定化，这有利于将它们从反应混合物中去除。在反应完成之后，通常通过加热，将未固定的酶钝化。
D.单酶法
在本发明的另一实施方案中，如上所述，来自植物油膜脱胶法的渗余物被用作单酶水解法中的原材料，其中所述酶是磷脂酶，或优选为脂酶。如上所述，并如下在章节III中进一步所述，许多脂酶具有显著的磷脂酶活性并能有效地使甘油三酯(水解成甘油单/二酯)和磷脂(水解成溶血磷脂)水解。酶制品中这些活性的比率通常随着反应条件，特别是溶剂和pH值而变化。优选地，如本文所述，磷脂是甘油三酯选择性的。
当该酶是脂酶时，具有50％或更大A.I.的水解产物(可以是水解卵磷脂产物)通常包含甘油单/二酯、甘油三酯和磷脂，并还可以包含水解磷脂，例如溶血磷脂。下面在章节V和VI中给出这些反应的例子。
在另一单酶实施方案中，来自植物油的包含磷脂和甘油三酯的原材料与脂酶在水介质中反应。原材料可以来自如上所述的植物油(尤其是大豆油)的加工过程。如上所述，该材料优选直接来自这种来源，即其不包含外加磷脂、甘油三酯、甘油单/二酯，或脂肪酸组分。脂酶优选为如本文所述的甘油三酯选择性脂酶。
还考虑酶是磷脂酶C时的单酶反应。同样，原材料可以来自植物油，尤其是大豆油的加工过程，并且优选直接来自这种来源。该反应被认为产生含磷脂、甘油三酯和甘油二酯并且不含明显量的甘油单酯或溶血磷脂的产物。如果需要，这种产物可以进一步与磷脂酶A反应以生产进一步包含溶血磷脂的产物。
III.适用于在本发明的方法中使用的酶
A.磷脂酶
如上所述，本发明的方法可以使用磷脂酶将原材料中的磷脂(在一些情况下为甘油三酯)水解。磷脂酶容易购得。如下所示，常见的磷脂酶根据磷脂中被该酶水解的键可分为A1、A2、C和D。(酶的磷脂酶B族共享(share)了磷脂酶、溶血磷脂酶和溶血磷脂酶-转酰酶活性(Shen等人，2004)，而且由于较低的选择性而通常较不优选)。
本发明的双酶法通常使用磷脂酶A1(EC 3.1.1.32)和/或A2(EC3.1.1.4)，其通过去除一个酰基侧链产生溶血磷脂。在另一实施方式中，磷脂酶D(EC 3.1.4.4)可以单独或与磷脂酶A1或A2结合使用以提供磷脂酸和/或溶血磷脂酸。
在进一步实施方式中，磷脂酶C可以与磷脂/甘油三酯原材料反应以生产包含磷脂、甘油三酯和甘油二酯且不含明显量的甘油单酯或溶血磷脂的产物。如果需要，这种产物可以进一步与磷脂酶A反应以生产进一步包含溶血磷脂的产物。
在所选实施方案中，磷脂酶D单独或与磷脂酶A1或A2结合使用以生产含有磷脂酸或溶血磷脂酸组分的水解卵磷脂产物。其还可以与选自乙醇胺、丝氨酸或肌醇的醇结合使用以分别提高水解卵磷脂产物中的PE、PS或PI含量。
单独用磷脂酶A1或A2使卵磷脂水解是本领域中公知的。参看，例如，GB专利No.1215868(1970)，其描述了传统方法，其中卵磷脂与磷脂酶A2在存在钙离子的水乳状液中反应以提供溶血卵磷脂。提纯包括用丙酮萃取，这去除了脂肪酸和甘油酯之类的丙酮可溶物。Hirai等人(美国专利No.5,955,327)描述了水合卵磷脂与磷脂酶A1或A2在水介质中反应，然后用丙酮分相以分离溶血卵磷脂产物。Yesair(美国专利No.5,716,814)描述了下述方法——其中使磷脂酰胆碱和甘油单酯的混合物与磷脂酶A2反应以生产溶血磷脂-甘油单酯-脂肪酸组合物。
在一些情况下，如上所述，磷脂酶可以表现出显著的和/或选择性脂酶活性。例如，如上所引的Mustranta等人，1995报道了磷脂酶A1制品(A.niger)在水介质中具有2:1脂酶/磷脂酶活性比率。这种磷脂酶可在本发明的方法中用于使甘油三酯水解。然而，更通常地，如下所述的脂酶用于使甘油三酯水解。
B.脂酶
获自动物、植物或微生物来源的许多不同的脂酶(也称为三酰甘油水解酶；EC 3.1.1.3)是已知的和/或可购得的，通常为固定化形式。这些酶的活性和选择性可以相差很大，即特定酶制品表现出的脂酶活性、磷脂酶活性和/或酯酶活性的程度可以相差很大。
关于商业脂酶制品的活性和选择性的信息通常由生产商提供。酶活性和选择性通常随着反应条件(例如，反应是在有机还是水介质中进行，酶是否固定化，等等)以及特定制品的纯度而改变。可以影响酶的反应性和选择性的其它参数包括pH值、底物浓度和溶剂极性(参见，例如Hass等人，1995，1994；如上引用)
如果需要，使用本领域已知的方法，可以凭经验对给定反应条件组合评测特定酶制品对不同底物(例如磷脂和甘油三酯)的活性。例如，A.Mustranta等人(如上引用)通过滴定经30分钟反应制成的释放的脂肪酸，在水乳状液中对各种脂酶和磷脂酶的每一个测定大豆磷脂酰胆碱的水解程度(即磷脂酶活性)。用橄榄油进行了类似的反应以测定脂酶活性。在该报道中，A.niger脂酶和P.cyclopium脂酶均表现出磷脂酶活性，虽然脂酶活性更高，特别是对A.niger脂酶而言。该报道还发现磷脂酶A2制品的磷脂酶选择性比磷脂酶A1制品高得多。
M.Haas等人(1995，如上引用)通过三种脂酶和一种磷脂酶(各自可以固定化形式购得)的每一个测定磷脂和甘油三酯的水解程度。在水中用酶单独处理这些组分；在水饱和己烷中处理组分混合物。通过释放的脂肪酸的滴定并通过产物脂质混合物的HPLC分析测定水解程度。在该报道中，发现溶剂介质对反应性和选择性具有很大影响。例如，来自R.miehei和C.rugosa的脂酶在这两种溶剂介质中对甘油三酯的反应性均比对磷脂的反应性高得多，而来自C.antarctica的第三种脂酶在水中表现出与R.miehei类似的选择性，但是在己烷中没有反应。磷脂酶(Amano磷脂酶B)在己烷中仅使磷脂水解，并且在水中没有反应。
在另一分析中，F.Hara等人(如上引用)通过各种脂酶在反向(reverse)胶束系统中超过24小时和超过48小时以测定磷脂酰胆碱的水解程度。对于受试的脂酶，通过色谱分析测得的其水解程度从0至100％不等。例如，在所述反应条件下，来自M.javanicus(Lipase M10，Amano Pharmaceuticals)、M.miehei(Lipozyme IM2G， Novo Nordisk)和猪胰(Pancreatin F，Amano)的脂酶使磷脂酰胆碱100％水解；来自Rhizopus sp.(Lipase F，Amano)和R.delemar(Newlase F，Amano)的脂酶使大约35-45％水解；来自A.niger(Lipase A6，Amano)和C.cylindrica(Lipase AY30，Amano)的脂酶几乎或完全不导致水解。
如上文引用的文章和本领域中其它文章所示，脂酶通常表现出显著的磷脂酶活性。本文中可称作“磷脂反应性”脂酶的酶可在本文所述的双酶法中用作第一酶。“磷脂反应性”脂酶可以定义为这样一种酶——在合适的反应条件(例如下述示例性反应中所列的那些)下，其有效地使反应中存在的至少1摩尔％，优选至少5％，更优选至少10％或至少25摩尔％的磷脂水解。这些反应条件可以包括在水介质中反应，使用占60％AI(丙酮不溶物)0.001至0.2％的酶，在大约40-60℃4至24小时；或在有机溶剂中反应，使用相同量的酶，在大约20-60℃1至24小时。
更通常地，双酶反应中的第一酶是磷脂酶，且脂酶用作本文所述的双酶法中的第二酶，或作为以原材料中甘油三酯组分的选择性水解为目标的方法中的单酶。出于这些目的，优选脂酶可以定义为下述酶——其在给定反应条件下对脂酶活性是选择性的；也就是说，在反应条件下，脂酶对酰基甘油的水解程度比脂酶对酰基磷脂的水解程度大，优选大2倍或更多。(如上所述，反应条件包括，例如，溶剂、酶状态(例如是否固定化)、温度、pH值、离子添加剂的存在和浓度、和底物浓度)。“水解程度”是指底物被水解的摩尔百分比；即转化成甘油单/二酯的甘油三酯的百分比，或转化成溶血磷脂的磷脂的百分比。更优选地，该程度为大约大5倍，最优选大约大25或大约50倍。这些酶在本文中也被称作“甘油三酯选择性”脂酶，或有效地将甘油三酯选择性水解的脂酶。
C.酶的固定化
本文所述的方法中使用的酶可以被固定化，用于此的各种材料和方法是本领域中已知的；下面描述示例性程序。通常，酶固定化可延长酶的有效寿命，简化产物提纯，并通常提高了酶的催化活性。在其上固定酶用的材料包括二氧化硅、多孔玻璃、、硅藻土、离子交换树脂、和各种其它聚合基材(包括聚酰胺、聚丙烯、聚乙二醇、聚糖，例如纤维素、琼脂糖和烷基改性琼脂糖，和甲壳质或壳聚糖)。聚合基材可以以例如膜、中空纤维或珠粒形式提供。在一种实施方案中，在反应中用于分离脂肪酸的膜也可用于酶的固定化。固定化通常通过简单吸附实现，但是可以包括共价连接，例如连接到氨基或醛改性二氧化硅上。
在文献中可获得酶固定化的详尽描述，包括对脂酶和磷脂酶固定化的具体描述。参考文献的例子包括K.Mosbached，1988；F.X.Malcata等人，1990，1992；V.M.Balcao等人，1995；A.E.Ivanov等人，1997；G.F.Bickerstaffed，1997；Bastida等人，1998；R.Fernandez-Lafuente等人，1998；W.Cho等人，1999；U.T.Bornscheuer等人，2002；M.V.Ramachandra等人，2002；和D.Adlercreutz等人，2002；以上均在上文“参考文献”中引用。酶通常以固定化形式出售。
IV.水解产物
本发明还提供了通过本文所述的酶促水解反应获得的水解产物，包含磷脂和/或水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯，并通常包含磷脂和甘油三酯。水解磷脂可以包括溶血磷脂、磷脂酸和/或溶血磷脂酸。水解磷脂通常是溶血磷脂，例如通过磷脂酶A1或A2的反应生成的。
在各种实施方式中，水解产物含有至少0.5wt％、至少1wt％、至少2.5wt％、至少5wt％、至少7.5wt％、至少10wt％、至少15wt％、至少20wt％、至少25wt％、至少30wt％、至少35wt％、至少40wt％或至少45wt％的甘油单/二酯。转化成甘油单/二酯的甘油三酯的摩尔百分比优选为至少25％，更优选至少50％，最多75％或更多。
本文所述的方法的产物如果组成符合卵磷脂的标记标准(这可能随国家而改变)，则被称作“水解卵磷脂”或“水解卵磷脂产物”。例如，按照欧洲的E322标记标准，“卵磷脂”是指“由动物或植物食品通过物理方法获得的磷脂组分的混合物”；它们还可以包括“使用无害和适宜的酶制得的水解物质”。按照该标记标准，“卵磷脂”包含至少60％丙酮不溶物并具有小于35mg KOH/克的酸值，“水解卵磷脂”包含至少56％丙酮不溶物并具有小于45mg KOH/克的酸值。
本发明的水解卵磷脂产物可以来自包含通过物理法获自动物或植物食品的磷脂混合物的卵磷脂原材料。例如，卵磷脂原材料可以获自，粗制大豆油的水脱胶或膜脱胶。
本发明的水解产物基本由直接来自植物油的原材料的组分，和由原材料使用无害和适宜的酶(如本文所述，具体是脂酶，在多数情况下是磷脂酶)获得的水解物质组成。原材料优选是通过植物油(例如大豆油)的脱胶获得的卵磷脂材料。“基本由...组成”是指水解产物可以包含，例如，水，但是其不包含除如上所述的原材料组分和由其生成的水解物质以外的脂质组分。其不含残留酶活性。
V.示例性反应程序
下列反应仅是示例性的，不是为了限制本发明。这些程序通常提及“卵磷脂”原材料；然而，如上所述，可以使用包含各种磷脂和甘油三酯量的原材料。例如，来自膜脱胶法的渗余物可以根据如上所述的分离条件包括大约10％至大约85％的磷脂。
A.在水介质中反应；依次添加两种酶
将具有55％-75％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂与占60％AI的0.1至10％，优选大约5-8％的水和占60％AI的0.001至0.2％的磷脂酶A2合并。尽管所用酶的量取决于特定酶的活性，所用LecitaseTM的典型量为大约0.017％。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，加入CaCl2以激活酶。可以使用过量CaCl2有效地使释放的脂肪酸螯合。反应在大约40-60℃进行4至24小时。干燥后得到包含溶血卵磷脂的产物，其量由反应时间和温度和酶浓度决定。
在该产物中加入占60％AI的0.001至0.2％，优选0.1至0.2％的脂酶。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，并加入CaCl2。反应在大约40-60℃进行4至24小时。干燥后得到包含溶血卵磷脂并还包含甘油单/二酯的卵磷脂产物，其量由反应时间和温度和酶浓度决定。
优选地，脂酶浓度和其它参数能有效地生产含有至少0.5wt％、至少1wt％、至少2.5wt％、至少5wt％、至少7.5wt％、至少10wt％、至少15wt％、至少20wt％、至少25wt％、至少30wt％、至少35wt％、至少40wt％或至少45wt％甘油单/二酯的水解产物。
B.在有机溶剂中水解；依次添加两种酶
将作为膜脱胶法的渗余物(如美国专利6,207,209中所述)获得的具有55％-80％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂与可以固定化的占60％AI的0.001至0.2％的磷脂酶A2合并。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，加入CaCl2以激活酶。可以使用过量CaCl2有效地使释放的脂肪酸螯合。反应在大约20-60℃进行1至24小时。回收固定化酶，干燥后得到包含溶血卵磷脂的产物，其量由反应时间和温度和酶浓度决定。
在该产物中加入可以固定化的优选占60％AI的0.001至0.2％的脂酶。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，并加入CaCl2。反应在大约20-60℃进行1至24小时。回收固定化酶，干燥后得到包含溶血卵磷脂并还包含甘油单/二酯的卵磷脂产物，其量由反应时间和温度和酶浓度测定。
在优选实施方案中，在具有能有效地从反应混合物中选择性去除脂肪酸的组成和孔径大小的膜存在下进行反应。
优选地，脂酶浓度和其它参数有效地生产含有至少0.5wt％、至少1wt％、至少2.5wt％、至少5wt％、至少7.5wt％、至少10wt％、至少15wt％、至少20wt％、至少25wt％、至少30wt％、至少35wt％、至少40wt％或至少45wt％甘油单/二酯的水解卵磷脂产物。转化成甘油单/二酯的甘油三酯的摩尔百分比优选为至少25％，更优选至少50％，多达75％或更高。
C.在有机溶剂中的水解；同时添加两种酶
将作为膜脱胶法的渗余物(如美国专利6,207,209中所述)获得的具有55％-80％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂与各自可以固定化的各自占60％AI的0.001至0.2％的磷脂酶A2和甘油三酯选择性脂酶合并。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，并加入CaCl2。反应在大约20-60℃进行1至24小时。在优选实施方式中，在具有能有效地从反应混合物中选择性去除脂肪酸的组成和孔径大小的膜存在下进行反应。
回收固定化酶，干燥后得到包含溶血卵磷脂和甘油单/二酯的卵磷脂产物，各自的量由反应时间和温度和各自的酶浓度决定。优选地，脂酶浓度和其它参数有效地生产含有至少0.5wt％、至少1wt％、至少2.5wt％、至少5wt％、至少7.5wt％、至少10wt％、至少15wt％、至少20wt％、至少25wt％、至少30wt％、至少35wt％、至少40wt％或至少45wt％甘油单/二酯的水解卵磷脂产物。转化成甘油单/二酯的甘油三酯的摩尔百分比优选为至少25％，更优选至少50％，多达75％或更高。
D.在水介质中反应；依次添加两种酶(磷脂酶D和脂酶)
将具有55％-75％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂与占60％AI的0.1至10％的水和占60％AI的0.0001至0.5％的磷脂酶D合并。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，加入CaCl2以激活酶。反应在大约40-60℃进行4至24小时。干燥后得到包含磷脂酸的产物，其量由反应时间和温度和酶浓度决定。
在该产物中加入优选占60％AI的0.001至0.2％的脂酶。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，并加入CaCl2。反应在大约40-60℃进行4至24小时。干燥后得到包含磷脂酸并还包含甘油单/二酯的卵磷脂产物，其量由反应时间和温度和酶浓度决定。
优选地，脂酶浓度和其它参数能有效地生产含有至少0.5wt％、至少1wt％、至少2.5wt％、至少5wt％、至少7.5wt％、至少10wt％、至少15wt％、至少20wt％、至少25wt％、至少30wt％、至少35wt％、至少40wt％或至少45wt％甘油单/二酯的水解产物。转化成甘油单/二酯的甘油三酯的摩尔百分比优选为至少25％，更优选至少50％，多达75％或更高。
E.在水介质中反应；依次添加磷脂酶D、磷脂酶A2和脂酶)
进行如上文D中所述的方法的第一阶段以提供包含磷脂酸的产物，其量由反应时间和温度和酶浓度决定。
在该产物中加入占60％AI的0.001至0.2％的磷脂酶A2。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，并加入CaCl2。反应在大约40-60℃进行4至24小时。干燥后得到包含溶血磷脂、溶血磷脂酸并任选包含磷脂酸的卵磷脂产物，其量由反应时间和温度和酶浓度决定。
在该产物中加入占60％AI的0.001至0.2％，优选0.1至0.2％的脂酶。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，并加入CaCl2。反应在大约40-60℃进行4至24小时。干燥后得到包含溶血磷脂、溶血磷脂酸、任选包含磷脂酸并还包含甘油单/二酯的卵磷脂产物，其量由反应时间和温度和酶浓度决定。
优选地，脂酶浓度和其它参数能有效地生产含有至少0.5wt％、至少1wt％、至少2.5wt％、至少5wt％、至少7.5wt％、至少10wt％、至少15wt％、至少20wt％、至少25wt％、至少30wt％、至少35wt％、至少40wt％或至少45wt％甘油单/二酯的水解产物。转化成甘油单/二酯的甘油三酯的摩尔百分比优选为至少25％，更优选至少50％，多达75％或更高。
在使用磷脂酶D的反应的变化形式中，在反应混合物中与磷脂酶D一起包含选自乙醇胺、L-丝氨酸、肌醇或胆碱盐的醇，以改变最终产物中磷脂的分布(即PE/PS/PI/PC比率)。
F.在有机溶剂中水解；单酶
将作为膜脱胶法的渗余物(如美国专利6,207,209中所述)获得的具有20％-80％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂与可以固定化的占60％AI的大约0.1至0.2％量的甘油三酯选择性脂酶合并。如果需要，调节pH值至对酶有利的值，并加入CaCl2。可以使用过量CaCl2有效地使释放的脂肪酸螯合。反应在大约20-60℃进行1至24小时。在优选实施方式中，在具有能有效地从反应混合物中选择性去除脂肪酸的组成和孔径大小的膜存在下进行反应。
回收固定化酶，干燥后得到包含甘油单/二酯的卵磷脂产物，其量由反应时间和温度和各自的酶浓度决定。优选地，脂酶浓度和其它参数有效地生产含有至少0.5wt％、至少1wt％、至少2.5wt％、至少5wt％、至少7.5wt％、至少10wt％、至少15wt％、至少20wt％、至少25wt％、至少30wt％、至少35wt％、至少40wt％或至少45wt％甘油单/二酯的水解卵磷脂产物。转化成甘油单/二酯的甘油三酯的摩尔百分比优选为至少25％，更优选至少50％，多达75％或更高。
VI.实施例
下列实施例用于举例说明而非限制本发明。
酶的固定化
可以如D.Adlercreutz等人，2002中所述那样进行酶的固定化。在下列实施例中使用两种如下所述制备的共轭物。
共轭物I：如下将
Ultra固定在MP1000(Membrana，AccurelSystems，Obernberg，Germany)上。使用25ml乙醇(95％)润湿MP1000(3g)，并加入在350ml 20mM磷酸盐缓冲液(pH 7)中的2.5mlUltra(一种磷脂酶A)。在0℃搅拌1小时后，过滤分离固定化酶，并减压干燥。
共轭物II：以类似方法，使用100ml乙醇(95％)润湿MP1000(15g)，并加入在350ml 20mM磷酸盐缓冲液(pH 7)中的7.5mlUltra。在0℃搅拌1小时后，过滤分离固定化酶，并减压干燥。
实施例I：用磷脂酶A使卵磷脂水解
如在专利No.6,207,209中所述的来自膜脱胶法的具有55％-80％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂渗余物如下再造：将通过干燥这种渗余物获得的106.4克卵磷脂(AI：65.13，AV：17.89mg KOH/克)和14.08克水溶解在564.5g己烷中。
将该溶液(60ml)与200mg固定化Ultra(共轭物I，如上制备)合并。反应在室温下进行20小时，并过滤回收固定化酶。干燥得到具有35.1mg KOH/g酸值和下列组成(通过酸值，P-NMR和GC)的产物：17.8％脂肪酸、0.1％甘油单酯、0.6％甘油二酯、26.2％甘油三酯、42.0％磷脂和2.5％溶血磷脂。
实施例II：依次的双酶反应
如专利6,207,209中所述来自膜脱胶法的具有55％-80％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂渗余物如下再造：将通过干燥这种渗余物获得的106.4克卵磷脂(AI：65.13，AV：17.89mg KOH/g)和14.08g水溶解在564.5g己烷中。
将该溶液(60ml)与200mg固定化Ultra(共轭物I，如上制成)合并。反应在室温下进行20小时，并过滤回收固定化酶。
在该滤液中加入20mgLipozyme。反应在室温下进行4小时，并过滤回收固定化酶。干燥得到具有62.5mg KOH/g酸值和下列组成(通过酸值，P-NMR和GC)的产物：31.5％脂肪酸、2.3％甘油单酯、5.7％甘油二酯、9.4％甘油三酯、30.8％磷脂和8.4％溶血磷脂。
实施例III：同时的双酶反应
如专利6,207,209中所述来自膜脱胶法的具有55％-80％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂渗余物如下再造：将通过干燥这种渗余物获得的106.4克卵磷脂(AI：65.13，AV：17.89mg KOH/g)和14.08g水溶解在564.5g己烷中。
将该溶液(60ml)与200mg固定化
Ultra(共轭物II，如上制成)和10mg Lipozyme合并。反应在室温下进行8小时，并过滤回收固定化酶。干燥得到具有54.3mgKOH/g酸值和下列组成(通过酸值，P-NMR和GC)的产物：27.3％脂肪酸、3.8％甘油单酯、5.4％甘油二酯、3.1％甘油三酯、44.6％磷脂和1.9％溶血磷脂。
实施例IV：同时的双酶反应
使用100mg共轭物II，而不是200mg，重复实施例III的程序。干燥得到具有下列组成(通过酸值，P-NMR和GC)的产物：26％脂肪酸、3.6％甘油单酯、5.2％甘油二酯、3.1％甘油三酯、46％磷脂和1.1％溶血磷脂。
实施例V：同时的双酶反应
使用400mg共轭物II，而不是200mg，重复实施例III的程序。干燥提供具有下列组成(通过酸值，P-NMR和GC)的产物：30.8％脂肪酸、3.9％甘油单酯、4.3％甘油二酯、2.4％甘油三酯、43.6％磷脂和2.6％溶血磷脂。
实施例VI：用脂酶使卵磷脂水解
如专利6,207,209中所述来自膜脱胶法的具有55％-80％丙酮不溶物(AI)含量的流体卵磷脂渗余物如下再造：将通过干燥这种渗余物获得的106.4g卵磷脂(AI：65.13，AV：17.89mg KOH/克)和14.08g水溶解在564.5g己烷中。
将该溶液(60ml)与10mg Lipozyme合并。反应在室温下进行20小时，并过滤回收固定化酶。干燥得到具有52.1mg KOH/g酸值和下列组成(通过酸值，P-NMR和GC)的产物：26.2％脂肪酸、4.0％甘油单酯、5.3％甘油二酯、3.8％甘油三酯、47.4％磷脂和0.8％溶血磷脂。
下表I和II概括了上述反应的结果。(PL＝磷脂；LPL＝溶血磷脂；TG＝甘油三酯；DG＝甘油二酯；MG＝甘油单酯；FA＝脂肪酸)。表I显示了水解产物中组分的分布(按重量百分比计)。表II显示了水解产物中的甘油三酯、甘油二酯和甘油单酯(以硬脂酰甘油酯的分子量为基础)相对于这三种组分总量的近似摩尔比。可以看出，在除I外的所有实施例中，转化成甘油单/二酯的甘油三酯的摩尔比为大约60％或更高，最高至大约85％。
表I
表II
VII.用途
按照本发明制成的水解产物，包括水解卵磷脂产物，可用在已经使用卵磷脂、水解卵磷脂、用甘油单/二酯加强营养的卵磷脂或相关产物的任何用途中。本发明的水解产物可以按照卵磷脂或水解卵磷脂配制领域已知的方法配制成这样的产品。
水解产物可用作例如乳化剂、表面活性剂、稳定剂、脱模剂、润湿剂、分散剂、润滑剂、粘度控制剂、结晶剂、软化剂、润肤剂、防尘剂或高营养成分。
可以使用水解产物的各种用途包括食品、饲料、技术、化妆品、和制药/营养品用途。示例性食品用途包括巧克力、巧克力衍生物、面包、糖果、糖衣、奶制品、奶酪产品、食用面糊产品、人造黄油、起酥油、脂肪混合物、乳状液、喷淋油、调味品、速溶可可、牛奶、非奶蛋白粉、脱模剂、汤、沙司、蛋黄酱、调味品、肉、肉汁、肉罐头、人造肉(meat analogues)、面包改良剂、饮料、能量饮料、小吃、餐后甜点(例如冰淇淋和冰棒)、膳食改良剂、，面包改良剂、口香糖、色料、香料混合物、乳化剂混合物、婴儿食品和抗氧化剂。
在具体实施方式中，本发明的包含甘油单/二酯的水解卵磷脂产物可用于改进烹调产品(例如人造黄油或起酥油)的防溅性能。本文所提供的这种产品优选通过脂酶(单独或与磷脂酶结合)将卵磷脂原材料水解形成。
示例性饲料用途包括用于鱼、虾、小牛(作为代乳品)、猪、母猪、小猪、貂、家禽和宠物的饲料中具有高营养值的乳化剂和来源。示例性技术用途包括作为分散剂用在例如油漆、油墨、涂料、磁带和磁盘中，作为软化剂用在例如皮革和织物中，作为乳化剂用在例如庄稼保护和农用化肥中，或用在润滑剂、油、粘合剂、吸附剂、絮凝剂、防腐剂、陶瓷、玻璃、洗涤剂、金属加工、纸产品、石油产品、影印、照相、聚合物、橡胶和织物中。示例性化妆品用途包括作为分散剂用在唇膏和指甲油中和作为乳化剂/稳定剂用在香波、乳霜和乳液中。示例性制药/营养品用途包括用作磷脂的天然来源，例如磷脂酰胆碱和维生素E。
因此，本发明进一步包括在如上所述的产品，特别是在食品中配制通过本文所述的任何本发明的方法制成的水解产物，特别是水解卵磷脂产物的方法。本发明还涉及包含通过本文所述的任何本发明的方法制成的水解产物，特别是水解卵磷脂产物的产品，尤其是食品。
Claims (49)
1.一种生产包含水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯的水解卵磷脂产物的方法，该方法包括：
(a)使包含磷脂组分和甘油三酯组分的卵磷脂材料在包含非质子有机溶剂和促进水解的足量水的有机溶剂介质中与第一酶接触产生反应混合物，其中第一酶包含水解磷脂的磷脂酶或脂酶；
(b)随后使步骤(a)的产物在含有促进水解的足量水的有机溶剂介质中与第二酶接触，所述第二酶含有水解甘油三酯的脂酶并与第一酶不同；
(c)获得水解的卵磷脂产物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述非质子有机溶剂包含烃溶剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述非质子有机溶剂是己烷。
4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)和(b)在将水解的磷脂、甘油单酯和甘油二酯从释放出的脂肪酸中分离出来的膜存在条件下进行。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述卵磷脂材料包含至少40％的磷脂组分。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述卵磷脂材料包含至少60％的丙酮不溶物。
7.根据权利要求1的方法，其中所述卵磷脂材料包含植物油膜脱胶法的渗余物。
8.根据权利要求1的方法，其中所述水解的卵磷脂产物包含至少56％丙酮不溶物并具有小于45mg KOH/g的酸度值。
9.根据权利要求1的方法，其中所述水解的卵磷脂产物包含至少60％丙酮不溶物。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一酶是磷脂酶A1、磷脂酶A2或其组合物。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一酶是磷脂酶A2。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一酶是磷脂酶C。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一酶是磷脂酶D。
14.根据权利要求5所述的方法，该方法进一步包括在所述接触步骤(b)之前，使步骤(a)的产物与磷脂酶A1、磷脂酶A2或其组合物进行反应。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述的第二酶选择性水解甘油三酯。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述的第二酶是脂酶。
17.根据权利要求1所述的方法，其中所述的第二酶是lipozyme。
18.一种生产包含水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯的水解卵磷脂产物的方法，该方法包括：
使包含磷脂组分和甘油三酯组分的卵磷脂材料在含有非质子有机溶剂和促进水解的足量水的反应混合物中与第一和第二酶接触；其中，所述第一酶包含水解磷脂的磷脂酶或脂酶，所述第二酶包含水解甘油三酯的脂酶并与所述第一酶不同；从所述反应混合物中获得水解的卵磷脂产物。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述接触是在将水解磷脂、甘油单酯和甘油二酯从释放的脂肪酸中分离出来的膜存在条件下进行。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述非质子有机溶剂包含烃溶剂。
21.根据权利要求18所述的方法，其中所述非质子有机溶剂是己烷。
22.根据权利要求18所述的方法，其中所述卵磷脂材料包含至少40％的磷脂组分。
23.根据权利要求18所述的方法，其中所述卵磷脂材料包含至少60％的丙酮不溶物。
24.根据权利要求18所述的方法，其中所述卵磷脂材料包含植物油膜脱胶法的渗余物。
25.根据权利要求18所述的方法，其中所述水解的卵磷脂产物包含至少56％丙酮不溶物并具有小于45mg KOH/g的酸度值。
26.根据权利要求18所述的方法，其中所述水解的卵磷脂产物包含至少60％丙酮不溶物。
27.根据权利要求18所述的方法，其中所述第一酶是磷脂酶A1、磷脂酶A2或其组合物。
28.根据权利要求18所述的方法，其中所述第一酶是磷脂酶A2。
29.根据权利要求18所述的方法，其中所述第一酶是磷脂酶C。
30.根据权利要求18所述的方法，其中所述第一酶是磷脂酶D。
31.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二酶选择性水解甘油三酯。
32.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二酶是脂酶。
33.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二酶是lipozyme。
34.根据权利要求18所述的方法，其中所述卵磷脂材料与所述第一酶和第二酶同时接触。
35.一种经酶促水解生产包含磷脂、甘油单酯和甘油二酯的产物的方法，该方法包括：
使包含磷脂组分的卵磷脂材料在缺乏磷脂酶的条件下在包含非质子有机溶剂和促进水解的足量水的有机溶剂介质中与脂酶接触，产生反应混合物，其中所述脂酶选择性水解甘油三酯；从反应混合物中获得水解的卵磷脂产物，其中所述卵磷脂材料是植物油膜脱胶法的渗余物。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述的卵磷脂材料包含至少40％的磷脂组分。
37.根据权利要求35所述的方法，其中所述的卵磷脂材料包含至少60％丙酮不溶物。
38.根据权利要求35所述的方法，其中所述水解卵磷脂产物包含至少56％的丙酮不溶物并具有小于45mg KOH/g的酸度值。
39.根据权利要求35所述的方法，其中所述水解卵磷脂产物包含至少60％丙酮不溶物。
40.根据权利要求35所述的方法，其中所述脂酶是lipozyme。
41.一种经酶促水解生产包含磷脂、甘油单酯和甘油二酯的产物的方法，所述方法包括：
使包含磷脂组分和甘油三酯组分的卵磷脂材料在缺乏磷脂酶的条件下，在包含非质子有机溶剂和促进水解的足量水的有机溶剂介质中与脂酶接触产生反应混合物，其中所述脂酶选择性水解甘油三酯；
从反应混合物中获得水解的卵磷脂产物，其中所述接触是在有效地将磷脂、甘油二酯和甘油三酯从释放出的脂肪酸中分离出来的膜存在条件下进行。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述卵磷脂材料包含至少40％的磷脂组分。
43.根据权利要求41所述的方法，其中所述卵磷脂材料包含至少60％的丙酮不溶物。
44.根据权利要求41所述的方法，其中所述水解卵磷脂产物包含至少56％丙酮不溶物并具有小于45mg KOH/g酸度值。
45.根据权利要求41所述的方法，其中所述水解卵磷脂产物包含至少60％丙酮不溶物。
46.根据权利要求41所述的方法，其中所述脂酶是lipozyme。
47.根据权利要求7所述的方法，其中渗余物中的所述磷脂组分为50％至85％。
48.根据权利要求24所述的方法，其中渗余物中的所述磷脂组分为50％至85％。
49.根据权利要求35所述的方法，其中渗余物中的所述磷脂组分为50％至85％。
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