CN1978445B - 一种可用作人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶激活剂的化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种可用作人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶激活剂的化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种用作人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶(AMPK)激活剂的小分子有机化合物。该类化合物可用于预防、延缓或治疗由AMPK介导的病症，特别是II型糖尿病、肥胖症和肿瘤。本发明还涉及该化合物的制备方法。另外本发明还涉及了该化合物在激活人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶中以及促进胞内葡萄糖吸收的应用和在制备治疗代谢性疾病的药物中的应用。

Description

一种可用作人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶激活剂的化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种可用作人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶(AMPK)激活剂的小分子有机化合物。该类化合物可用于作预防、延缓展或治疗由AMPK介导的病症，特别是II型糖尿病、肥胖症和肿瘤。本发明还涉及该化合物的制备方法。另外本发明还涉及了该化合物在激活人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶中以及促进胞内葡萄糖吸收的应用和在制备治疗代谢性疾病的药物中的应用。
背景技术
糖尿病已成为危害人类健康的三大疾病之一，根据世界卫生组织的统计，1997年全世界糖尿病患者已达1.24亿，预计到2025年将上升至3亿，其中97％为II型糖尿病患者。糖尿病是由不同病因与发病机理引起体内胰岛素缺乏或胰岛素作用降低，临床上以糖代谢异常为主要表现的一组异质性内分泌代谢疾病的总称。(Ferrannini，E.Insulinresistance versus insulin deficiency in non-insulin-dependent diabetesmellitus：problems and prospects.Endocr.Rev，1998，19：477-490.Stefan。The cost of diabetes and diabetes care.Diabetes Research and ClinicalPractice 54 Sullppl.1，2001：S13-S18。)如果得不到及时有效的治疗，可导致失明、心脑血管疾病、肾功能衰竭等多种并发症，严重危害人类健康。糖尿病在我国及全世界发病率都很高。因此，研究对糖尿病的有效的预防和治疗方法，具有重要意义。
尽管已有大量的实验和研究资料去阐明其病因学，但绝大多数糖尿病患者体内的基础缺陷目前仍不清楚。由于其病因学极其复杂，产生的综合症也多种多样，以至于目前市场上没有一种能从根本上完全治愈糖尿病的药物。所以近年来的研究多集中在从分子生物学的角度寻找新的药物作用靶点，以推动新药的研发。其中腺苷单核苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)就是近年来在该领域研究方面的一个热点，是最新研究发现的治疗II型糖尿病的新靶点。(Winder，W.W.AMP-activated protein kinase：possible target for treatmentof type 2 diabetes.Diabetes Technol Ther，2000，2(3)：441-448。NicolasMusi，Nobuharu Fujii，Michael F.Hirshman，et al.AMP-activated proteinkinase(AMPK)is activated in muscle of subjects with Type 2 diabetesduring exercise.Diabetes，2001，50：921-927。)
AMPK是一个异源三聚体，包含一个α催化亚基，β、γ两个调节亚基。对于哺乳动物细胞的AMPK，每种亚基分别被2-3个基因(α1、α2；β1、β2；γ1、γ2、γ3)编码。在α亚基的N端含有一激酶催化活性区域，C端为活性调节区域，含有一个自我抑制区域和一个调节亚基的结合区域；β亚基起连接α和γ亚基的支架作用。(Hardie，D.G.，and D.Carling.The AMP-activated protein kinase.Fuel gauge of the mammalian cell？Eur.J.Biochem，1997，246：259-273。Kahn，B.B.，Alquier，T.，Carling，D.，andHardie，D.G.AMP-activated protein kinase：Ancient energy gaugeprovides clues to modern understanding of metabolism.Cell Metabolism.2005，1：15-25)在II型糖尿病中，糖代谢和脂代谢过程失调，而AMPK对这些代谢途径有一个重要的调节作用。(Crute，B.E.，Seefeld，K.，Gamle，J.，Kemp，B.E.，and Witters，L.A.Functional domain of the alcatalytic subunit of the AMP-activated protein kinase.(1998)J.Biol.Chem.273，35347-35354)研究证实，AMPK激活后能激活并增强肌细胞中脂肪酸氧化和葡萄糖吸收，抑制肝细胞中胆固醇和甘油三酯合成、脂生成，调节β细胞的胰岛素分泌，增强胰岛素靶组织对胰岛素的敏感性以及激活肌细胞内葡萄糖的吸收等。(Winder，W.W.，and Hardie，D.G.AMP-activated protein kinase，a metabolic master switch：possible roles inType 2 diabetes.Am.J.Physiol，1999，277：E1-E10)AMPK在体内肌肉组织中及其它主要组织中增强葡萄糖吸收，增强胰岛素敏感性和在糖代谢、脂代谢中的关键作用，使之成为治疗II型糖尿病及肥胖症的一条有效途径。因此，利用人源AMPK-α1(aa 1-394)无活性片断来筛选AMPK的高活性、高选择性的激活剂，可为AMPK分子机理的研究和治疗II型糖尿病新药的开发提供重要的依据。
目前尚无AMPK激活剂的发明，目前所使用的AICAR也仅为非特异性AMPK激活剂，因此研究并开发出新型AMPK特异性激活剂用于预防II型糖尿病及肥胖等，具有广阔的应用前景和重大的商业意义。
发明内容
考虑到上述问题，本发明设计并合成了一种新型化合物，可用作人源AMPK激活剂，并能有效激活人源AMPK-α1(aa 1-394)的活性从而促进胞内葡萄糖吸收，因此可用于预防、延缓或治疗由AMPK介导的病症，特别是II型糖尿病、肥胖症和肿瘤。本发明化合物结构相对简单，易于制备。
本发明所述的新型化合物具有如下式1所示的结构：
[式1]
其中X为NH、O或S；
Y1为O或者S；
Y2为NR5、O或者S，其中R5为H；苯基、
Figure RE-G051B1115920051219D000042
等；
R1为H、苯基或
Figure RE-G051B1115920051219D000043
苄基、或者取代或未取代的C1-C10的烷基或环烷基等；
其中R9、R10各自独立的为H；F；Cl；三氟甲基；乙炔基、丙炔基；含有羧基、羧酸酯基的C1-C4烷基等。
R2、R3、R4各自独立地为H、F、Cl、吡咯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基、苄基、苯基、或者等；其中R6、R7、R8各自独立地为H、F、Cl、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、胺基、苯甲酰胺基、C2-C6烷酰胺基、和C3-C6的环烷基取代的酰胺基、C1-C4烷基等。
其中，所述的未取代的C1-C10的烷基或环烷基为环丙烷基、环丁烷基、甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊烷基、环戊烷基、正己烷基、环己基等；取代的C1-C10的烷基或环烷基的取代基包括一个或多个选自F、Cl、C1-C10的烷氧基、腈基、羧基、甲酸甲酯基、甲酸乙酯基或羟基的取代基团等。
本发明所述的新型人源AMPK激活剂通过下列三个步骤制备得到：
步骤a：根据下面的化学反应式1将化合物1中的羧基还原为醇基。
[化学反应式1]
Figure RE-G051B1115920051219D000051
在0～5℃下，以四氢呋喃为溶剂，化合物1与四氢锂铝反应将羧基还原为醇羟基，经过加水淬灭、萃取、干燥、浓缩等后处理，得到化合物2；
[化学反应式2]
Figure RE-G051B1115920051219D000052
室温下，以氯仿为溶剂用活性二氧化锰将化合物2的醇羟基氧化为醛基，经过过虑、浓缩等后处理，得到化合物3；
[化学反应式3]
Figure RE-G051B1115920051219D000061
以冰醋酸为溶剂并醋酸钠作用下或者以无水乙醇为溶剂并在哌啶作用下，回流，将化合物3、4偶联，经过萃取、干燥、浓缩、硅胶柱层析等后处理，得到最终的化合物5。
在以上三个步骤中，
其中X为NH、O或S；
Y1为O或者S；
Y2为NR5、O或者S；其中R5为H、苯基、
Figure RE-G051B1115920051219D000062
等；
R1为H、苯基或苄基、或者取代或未取代的C1-C10的烷基或环烷基等；
其中R9、R10各自独立的为H；F；Cl；三氟甲基；乙炔基、丙炔基；含有羧基、羧酸酯基的C1-C4烷基等。
R2、R3、R4各自独立地为H、F、Cl、吡咯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基、苄基、苯基、或者等；其中R6、R7、R8各自独立地为H、F、Cl、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、胺基、苯甲酰胺基、C2-C6烷酰胺基、和C3-C6的环烷基取代的酰胺基、C1-C4烷基等。
其中，所述的未取代的C1-C10的烷基或环烷基为环丙烷基、环丁烷基、甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊烷基、环戊烷基、正己烷基、环己基等；取代的C1-C10的烷基或环烷基的取代基包括一个或多个选自F、Cl、C1-C10的烷氧基、腈基、羧基、甲酸甲酯基、甲酸乙酯基或羟基的取代基团等。
通常用薄层层析法(TLC)来跟踪测定反应的完成程度。反应完毕后一般采用的后处理方法包括冷却、浓缩反应液除尽溶剂、萃取、柱层析分离等。用NMR来检测最终产物。
本发明的新型化合物，可用作人源AMPK激活剂，并能有效激活人源AMPK-α1(aa 1-394)的活性，从而可预防、延缓或治疗由AMPK介导的病症，特别是II型糖尿病、肥胖症和肿瘤。
下面，通过实施例和对比实施例将更具体地描述本发明。然而，下面的实施例仅仅是为了说明而提供，因此本发明不局限于这些实施例。
附图说明
图1为不添加本发明的化合物和分别添加本发明的化合物5f、5r、5s、5t、5u的情况下，对AMPK活性的测定。
图2为不同浓度下本发明实施例中制备的化合物5r的催化活性。
在图2中，(-)表明未加此化合物处理细胞，(+)表明加此化合物处理细胞；(pAMPK)表示AMPK催化亚基α上苏氨酸(Thr)172的磷酸化水平；(AMPK)表示胞内AMPK催化亚基α的表达水平；(pACC)表示胞内AMPK底物ACC的磷酸化水平；(ACC)表示胞内ACC的表达水平；(-Actin)表示用胞内肌动蛋白来显示胞内总蛋白量。
具体实施方式
下述实施例中，NMR用Varian生产的Mercury-Vx 300M仪器测定，NMR定标：δH/C 7.26/77.0ppm(CDCl3)；试剂主要由上海化学试剂公司提供，产品纯化主要用柱色谱法，硅胶(200-300目)，柱色谱法所用的硅胶型号为粗空(ZLX-II)，由青岛海洋化工厂分厂生产。
实施例1：化合物5a的制备
[化学反应式4]
Figure RE-G051B1115920051219D000081
按照上面的化学反应式：
第一步：在25ml圆底烧瓶中加入28mg的AlLiH4，使其分散在10ml新蒸的THF中，室温下滴加101mg化合物3a(0.37mmol)的3ml新蒸THF溶液，滴毕室温(24-26℃)搅拌反应30分钟，用TLC来跟踪测定反应的完成程度。反应完毕后，小心加入0.5ml水，继续搅拌10分钟，加水稀释，乙酸乙酯萃取，有机相经无水Na2SO4干燥后浓缩除尽溶剂，得到2b。
第二步：在50ml圆底烧瓶中加入68mg化合物2a，20ml氯仿，搅拌下加入活性MnO2 122mg，室温(24-26℃)搅拌反应5小时，用TLC来跟踪测定反应的完成程度。反应完毕后，过虑除去不溶物，浓缩除尽溶剂、得到3a 38mg。
第三步：在5ml圆底烧瓶中加入38mg化合物3a(0.16mmol)，60mg化合物4a(0.16mmol)，27mg哌啶，3ml无水乙醇，氮气保护回流(80℃至120℃)3小时，用TLC来跟踪测定反应的完成程度。反应完毕后，冷却，浓缩反应液除尽溶剂、柱层析分离得产物5a 30mg。
化合物5a：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ6.78(dd，2H)，7.11(m，4H)，7.43(m，3H)，7.69(t，1H)。
实施例2：化合物5b的制备：
[化学反应式5]
Figure RE-G051B1115920051219D000101
按照上面化学反应式：
第一步：除以原料1b代替实施例1中第一步骤中的原料1a外，以实施例1的第一步骤相同的方法制备化合物2b。
第二步：除以原料2b代替实施例1中第二步骤中的原料2a外，以实施例1的第二步骤相同的方法制备化合物3b。
第三步：在5ml圆底烧瓶中加入34mg化合物3b(0.28mmol)，60mg化合物4b(0.28mmol)，100mg AcONa，2ml冰醋酸，氮气保护回流(100℃至120℃)2小时，TLC跟踪反应。反应完毕后，冷却，过滤，洗涤后真空干燥得得产物42mg的化合物5b。
化合物5b：1H NMR(CDCl3，300MH)δ1.27～1.43(m，4H)，1.69(d，4H)，1.87(d，2H)，2.10(s，3H)，2.27(s，3H)，5.10(br，1H)，5.99(s，1H)，6.76(s，1H)。
实施例3：化合物5c的制备：
除以与化合物5c相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5c。
化合物5c的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000111
化合物5c：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ2.32(s，6H)，3.66(s，3H)，3.75(s，3H)，3.93(s，2H)，6.78(d，1H)，6.93(d，1H)，7.01(s，1H)，7.09(s，1H)，7.63(s，1H)，7.73(s，1H)，7.83(d，1H)。
实施例4：化合物5d的制备：
除以与化合物5d相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5d。
化合物5d的结构式：
化合物5d：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ3.11(s，1H)，6.83(d，1H)，7.02(d，1H)，7.16(s，1H)，7.37(m，6H)，7.51(s，1H)，7.80(s，1H)。
实施例5：化合物5e的制备：
除以与化合物5e相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5e。
化合物5e的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000121
化合物5e：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ6.78(d，1H)，7.05(d，1H)，7.21(m，2H)，7.40(m，1H)，7.60(m，2H)，7.79(d，1H)，7.99(d，1H)。
实施例6：化合物5f的制备：
除以与化合物5f相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5f。
化合物5f的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000122
化合物5f：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.78，1.94，2.02，2.49，6.85，7.19，7.28，7.45，7.72，8.03，8.39，9.45。
实施例7：化合物5g的制备：
除以与化合物5g相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5g。
化合物5g的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000131
化合物5g：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ6.74(d)，7.05-7.11(m)，7.16(d)，7.31(d)，7.36(s)，7.58(d)。
实施例8：化合物5h的制备：
除以与化合物5h相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5h。
化合物5h的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000132
化合物5h：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ6.85(d)，7.02(d)，7.20(d)，7.33(d)，7.54(s)，7.75(d)。
实施例9：化合物5i的制备：
除以与化合物5i相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5i。
化合物5i的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000141
化合物5i：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ7.06，7.18，7.43，7.56，7.74，8.01。
实施例10：化合物5j的制备：
除以与化合物5j相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5j。
化合物5j的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000142
化合物5j：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ6.77，6.94，7.06，7.27，7.37，7.68。
实施例11：化合物5k的制备：
除以与化合物5k相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5k。
化合物5k的结构式：
化合物5k：1H NMR(CD3OD-d4，300MHz)δ6.70，6.82，7.06，7.23，7.43，7.52，7.60。
实施例12：化合物5l的制备：
除以与化合物5l相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5l。
化合物5l的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000152
化合物5l：1H NMR(CD3OD-d4，300MHz)δ7.13，7.19，7.32，7.36，7.46，7.60，7.12，7.81，8.05。
实施例13：化合物5m的制备：
除以与化合物5m相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5m。
化合物5m的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000161
化合物5m：1H NMR(CD3OD-d4，300MHz)δ2.18，2.26，2.30，6.67，6.72，7.03，7.05，7.34，7.47。
实施例14：化合物5n的制备：
除以与化合物5n相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5n。
化合物5n的结构式：
化合物5n：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ2.26，2.31，2.36，7.01，7.04，7.10，7.29，7.43，7.56，7.69，7.85。
实施例15：化合物5o的制备：
除以与化合物5o相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5o。
化合物5o的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000171
化合物5o：1H NMR(CD3OD-d4，300MHz)δ2.14，2.28，2.36，6.87，6.97，7.10，7.18，7.50，7.60，7.95。
实施例16：化合物5p的制备：
除以与化合物5p相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5p。
化合物5p的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000172
化合物5p：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ7.19，7.39，7.44，7.54，7.65，7.81，7.96，8.17。
实施例17：化合物5q的制备：
除以与化合物5q相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5q。
化合物5q的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000181
化合物5q：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ6.67，6.71，6.97，7.08，7.24，7.46，7.49，7.77，8.00。
实施例18：化合物5r的制备：
除以与化合物5r相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5r。
化合物5r的结构式：
化合物5r：1H NMR(CD3OD-d4，300MHz)δ2.14，2.28，2.36，6.87，6.97，7.10，7.18，7.35，7.47，7.52。
实施例19：化合物5s的制备：
除以与化合物5s相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5s。
化合物5s的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000191
化合物5s：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ2.18，3.91，6.68，7.16，7.19，7.37，7.68，7.84，7.92，8.01。
实施例20：化合物5t的制备：
除以与化合物5t相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5t。
化合物5t的结构式：
化合物5t：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.06，2.19，2.36，6.99，7.12，7.28，7.44，7.58，8.04，8.39。
实施例21：化合物5u的制备：
除以与化合物5u相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5u。
化合物5u的结构式：
Figure RE-G051B1115920051219D000201
化合物5u：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ2.36，6.71，6.83，7.22，7.44，7.58，7.98。
实施例22：化合物5v的制备：
除以与化合物5v相对应的羧酸或羧酸酯以及羰基化合物为原料外，以实施例2相同的方法制备化合物5v。
化合物5v的结构式：
化合物5v：1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ7.09，7.20，7.40，7.58，7.98，8.00，8.31。
测试实施例1：AMPK活性激活测试试验
AMPK催化亚基α1无活性片断α1(1-394氨基酸)的制备：
将编码人源AMPK催化亚基α1无活性片断α1(1-394氨基酸)的基因序列构建于pGEMEX-1载体中。将经鉴定完全正确的pGEMEX-AMPK-α1(1-394)重组质粒转化表达型大肠杆菌BL21-Codon-Plus(DE3)-RIL菌株，挑单克隆菌落于1L含50μg/mL氨苄青霉素和25μg/mL氯霉素的LB丰富培养基，每分钟180转于37℃培养过夜，直至菌液OD600值为0.4-0.6，加入0.1mM IPTG于22℃诱导表达过夜。4℃采用6000×g离心3分钟收获表达细菌(约2.0g/L表达菌)，用20mL Buffer A(50mM Tris·HCl，pH 7.5，1mM DTT)重新悬浮细菌并洗菌三次，然后用裂解液Buffer A，1％Triton X-100重悬细菌。在4℃下用超声波处理菌液三分钟，充分裂解细胞。将上述含有目的蛋白的裂解液于4℃12000×g离心15分钟，两次离心后弃沉淀，取上清蛋白液过Q柱。使用HiTrap-5ml QHP阴离子交换柱和FPLCsystem进行。过Q柱的溶液有Buffer A(50mM Tris·HCl，pH 7.5，1mMDTT)和Buffer B(50mM Tris·HCl，pH 7.5，1mM DTT，1M NaCl)。用Buffer A平衡HiTrap-5ml QHP层析柱后，注入上清蛋白样品，先用Buffer A平衡，再用Buffer A和100％Buffer B组成的线性NaCl梯度洗脱。用SDS-PAGE验证收集组分的蛋白组成和纯度；并根据结果和蛋白浓度，分别合并较纯的组分。洗脱得到的目的蛋白AMPK-α1(1-394)经12％SDS-PAGE分离鉴定：纯化得到的目的蛋白纯度约为95％左右。经鉴定，其大小，酶学性质均与文献报道的氨基酸序列相对应的重组鼠源AMPK-α1(aa 1-392)一致(Hamilton等，AMP-activated proteinkinase kinase：detection with recombinant AMPK al subunit，(2002)Biochem.Biophys.Res.Commun.293，892-898；Crute等，Functionaldomains of the al catalytic subunit of the AMP-activated protein kinase，(1998)J.Biol.Chem.273，35347-35354)。
AMPK-α1(1-394)激活测试原理：
应用上述大肠杆菌表达系统，纯化得到了人源AMPK的催化亚基α1的无活性片断α1(1-394)，其中该片断含有自身的自我抑制序列，用于筛选实验。基于放射性同位素技术，激活的AMPK能够磷酸化底物SAMS(MW：1779)，将溶液中[γ-33P]-ATP上的γ-33P转移共价结合到底物SAMS上，使其Ser残基磷酸化，产生具有同位素标记的底物33P-SAMS，最后加入闪烁液通过液体闪烁计数仪计数来定量该酶活性。通过观察不同化合物对其活性的激活情况，以初步评价化合物的活性。
比较测活体系中存在和不存在化合物样品时，AMPK-α1(aa 1-394)的活性，判断样品是否具有激活活性；如果有，测定不同样品浓度下AMPK-α1(aa 1-394)活性，计算样品的EC50，即半最大激活效应浓度(half maximum concentration 50％)。
AMPK-α1(1-394)激活测试方法：
HsAMPK-α1(aa 1-394)经上游激酶CaMKKβ预磷酸化4小时后，按1∶4的体积比加入到含底物的测活反应液(20mM Tris-HCl，pH 7.5，1mM DTT，5mM MgCl2，50μM[γ-33P]-ATP(0.4μCi/assay)，50μMSAMS)中，总测活体系为50μl，于30℃孵育10min。反应经1％H3PO4终止后，通过Harvester将蛋白反应液吸附于P30滤纸上，经0.1％H3PO4洗三次，烘干，加入闪烁液后封膜，置96孔微板闪烁计数仪计数。
将35.5μL反应混合物(含20mM Tris-HCl，pH 7.5，1mM DTT，5mM MgCl2，50μM[γ-33P]-ATP(0.4μCi/assay)，50μM SAMS)分别加入到各含有2μL实施例6、18～21中的化合物5f、5r～5u的待检测的样品板中，最后由12.5μL已充分磷酸化的HsAMPK-α1(aa 1-394)(100nM)的加入而启动反应，测活温度为30℃。在10min后终止反应，吸样，洗膜，烘干，封膜后计数。样品的激活率通过下列公式求得：样品的激活率％＝[(化合物CPM值-空白对照)-(阴性对照-空白对照)]/(阴性对照-空白对照)×100。
上述测活体系所得反应速度是该酶活性的反应速度；把溶有上述化合物的DMSO(2μl)代替上述体系中的DMSO(2μl)，测得反应速度为化合物作用下的反应速度。
在30μM的初筛浓度下，发明人发现上述实施例中的22种化合物显示从3％-30％不等的激活率，选择其中最具有代表性的5个化合物5f、5r、5s、5t、5u，测定不同样品浓度下人源AMPK-α1(aa 1-394)活性，计算样品的EC50，即半最大激活效应浓度(half maximumconcentration 50％)。由此可以证明此类化合物能够激活人源AMPK-α1(aa 1-394)的活性。
图1为不添加本发明的化合物和分别添加本发明的化合物5f、5r、5s、5t、5u的情况下，对AMPK活性的测定。
图2为不同浓度下本发明实施例中制备的化合物5r的催化活性。
在图2中，(-)表明未加此化合物处理细胞，(+)表明加此化合物处理细胞；(pAMPK)表示AMPK催化亚基α上苏氨酸(Thr)172的磷酸化水平；(AMPK)表示胞内AMPK催化亚基α的表达水平；(pACC)表示胞内AMPK底物ACC的磷酸化水平；(ACC)表示胞内ACC的表达水平；(-Actin)表示用胞内肌动蛋白来显示胞内总蛋白量。
实施例18中制备的化合物5r在L6细胞水平上具有明显的增强胞内AMPK磷酸化及其下游靶蛋白ACC的磷酸化水平的作用并呈现浓度依赖性，这表明该类化合物能在细胞水平上激活AMPK。
样品测试结果：
  样品   EC50(μM)
  实施例6(化合物5f)   3.0
  实施例18(化合物5r)   7.2
  实施例19(化合物5s)   5.6
  实施例20(化合物5t)   13.6
  实施例21(化合物5u)   3.2
  化合物   DMSO   5r   5s   5t   5f   5u
  活性   (pmol/min/uM)   2.94±0.21   22.23±4.07   7.77±1.55   21.26±7.54   28.67±2.63   25.13±0.30

Claims (4)

1.一种用作人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶激活剂的小分子有机化合物，其选自以下化合物中的一种：
Figure FSB00000114087600021
2.根据权利要求1所述的用作人源腺苷单核苷酸激活蛋白激酶激活剂的小分子有机化合物，其选自以下化合物中的一种：
Figure FSB00000114087600022
3.根据权利要求1的化合物或化合物
Figure FSB00000114087600031
在制备治疗代谢性疾病的药物中的应用。
4.根据权利要求3的应用，其中所述的代谢性疾病为II型糖尿病和肥胖症。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2025674A1 (de) 2007-08-15 2009-02-18 sanofi-aventis Substituierte Tetrahydronaphthaline, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
JP2013514385A (ja) * 2009-12-18 2013-04-25 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． エストロゲン関連受容体αモジュレーターとしての置換アミノチアゾロンインダゾール
WO2011107494A1 (de) 2010-03-03 2011-09-09 Sanofi Neue aromatische glykosidderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung
CN103402516B (zh) * 2010-06-17 2018-01-30 富津世生物技术有限公司 用作抗病毒药物的化合物、组合物及使用方法
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US8530413B2 (en) 2010-06-21 2013-09-10 Sanofi Heterocyclically substituted methoxyphenyl derivatives with an oxo group, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
TW201215387A (en) 2010-07-05 2012-04-16 Sanofi Aventis Spirocyclically substituted 1,3-propane dioxide derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as a medicament
TW201221505A (en) 2010-07-05 2012-06-01 Sanofi Sa Aryloxyalkylene-substituted hydroxyphenylhexynoic acids, process for preparation thereof and use thereof as a medicament
TW201215388A (en) 2010-07-05 2012-04-16 Sanofi Sa (2-aryloxyacetylamino)phenylpropionic acid derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
US8828995B2 (en) 2011-03-08 2014-09-09 Sanofi Branched oxathiazine derivatives, method for the production thereof, use thereof as medicine and drug containing said derivatives and use thereof
US8871758B2 (en) 2011-03-08 2014-10-28 Sanofi Tetrasubstituted oxathiazine derivatives, method for producing them, their use as medicine and drug containing said derivatives and the use thereof
EP2683699B1 (de) 2011-03-08 2015-06-24 Sanofi Di- und trisubstituierte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung als medikament sowie sie enthaltendes arzneimittel und deren verwendung
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WO2013037390A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
EP2567959B1 (en) 2011-09-12 2014-04-16 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
EP2760862B1 (en) 2011-09-27 2015-10-21 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-alkyl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
US8889730B2 (en) 2012-04-10 2014-11-18 Pfizer Inc. Indole and indazole compounds that activate AMPK
CA2905242C (en) 2013-03-15 2016-11-29 Pfizer Inc. Indole compounds that activate ampk
CN104059060B (zh) * 2014-05-30 2017-08-01 西安交通大学 一种5‑(1h‑吲哚‑3‑亚甲基)‑1,3‑噻唑烷‑4‑酮类衍生物及其合成方法和应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000095770A (ja) * 1998-07-22 2000-04-04 Toa Eiyo Ltd Ｎ置換チアゾリジン誘導体及びそれを含有する医薬
WO2000018746A1 (en) * 1998-09-30 2000-04-06 Roche Diagnostics Gmbh Thiazolidine derivatives for the treatment and prevention of metabolic bone disorders
AU2003225669A1 (en) * 2002-09-26 2004-04-19 Pintex Pharmaceuticals, Inc. Pin1-modulating compounds and methods of use thereof
WO2004093803A2 (en) * 2003-04-16 2004-11-04 Pintex Pharmaceuticals, Inc. Photochemotherapeutic compounds for use in treatment of pin1-associated states

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ACS.RN：331002-70-1.《STN Registry》.2001,1-3. *

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