CN1976908A - 通过三嗪的 4－位未取代的衍生物与环氧乙烷在路易斯酸存在下反应制备具有p2x7抑制活性的5－[4－(2－羟基－乙基)－3,5－二氧－4,5－二氢－3h－[1,2,4]三嗪－2－基]－苯甲酰胺衍生物的方法 - Google Patents

通过三嗪的 4－位未取代的衍生物与环氧乙烷在路易斯酸存在下反应制备具有p2x7抑制活性的5－[4－(2－羟基－乙基)－3,5－二氧－4,5－二氢－3h－[1,2,4]三嗪－2－基]－苯甲酰胺衍生物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种制备通式(I)的化合物或其药学可接受的盐的方法，其中R7是－CH2－C(R10R11)－OH，其中R10和R11独立地选自：氢、苯基、和任选被1－3个卤素取代的(C1－C6)烷基、羟基、－CN、(C1－C6)烷氧基－、((C1－C6)烷基)n－N－、(C1－C6)烷基－(C＝O)－、(C3－C8)环烷基－(C＝O)－、5或6－元杂环烷基－(C＝O)－、苯基－(C＝O)－、萘基－(C＝O)－、5－或6－元杂芳基－(C＝O)－、(C1－C6)烷基－(C＝O)O－、(C1－C6)烷基－O(C＝O)－、(C3－C8)环烷基、苯基、萘基、5或6－元杂环烷基、和5－或6－元杂芳基；其中R1、R2、和R4具有如说明书所定义的任意值。其中所述方法包括将通式(II)的化合物与通式(VIII)的化合物在至少一种路易斯酸存在下反应。该化合物可以作为药剂用于治疗包括炎性疾病例如类风湿性关节炎的疾病。同时提供含有小于2.5％的残留有机溶剂的晶体2－氯－N－(1－羟基－环庚基甲基)－5－[4－(2R－羟基－3－甲氧基－丙基)－3，5－二氧－4，5－二氢－3H－[1，2，4]三嗪－2－基]－苯甲酰胺的组合物，和制备该组合物的方法。此外提供结晶2－氯－N－(1－羟基－环庚基甲基)－5－[4－(2R－羟基－3－甲氧基－丙基)－3，5－二氧－4，5－二氢－3H－[1，2，4]三嗪－2－基]－苯甲酰胺的方法。

Description

通过三嗪的 4－位未取代的衍生物与环氧乙烷在路易斯酸存在下反应制备具有P2X7抑制活性的5－[4－(2－羟基－乙基)－3,5－二氧－4,5－二氢－3H－[1,2,4]三嗪－2－基]－苯甲酰胺衍生物的方法
               交叉参考的相关申请
本申请要求2004年6月29日提交的U.S.临时专利申请号60/583,813的优先权。
                      背景技术
P2X7嘌呤能受体(以前称作P2Z受体)是一种配体门控离子通道，存在于多种的细胞类型中，主要是已知参与炎性/免疫过程的细胞类型，具体地是，巨噬细胞、肥大细胞和淋巴细胞(T和B)。细胞外核苷酸，特别是三磷酸腺苷对P2X7受体的激活会导致白细胞介素-1β(IL-1β)释放和巨细胞形成(巨噬细胞/小神经胶质细胞)，脱粒(肥大细胞)和增殖(T细胞)，凋亡，和L-选择蛋白脱落(淋巴细胞)。P2X7受体也位于抗原呈递细胞(APC)、角质化细胞、唾液腺泡细胞(腮腺细胞)、肝细胞和肾小球膜细胞上。
P2X7拮抗剂是本领域已知的，例如在国际专利公开WO 01/46200、WO 01/42194、WO 01/44213、WO 99/29660、WO 00/61569、WO 99/29661、WO 99/29686、WO 00/71529、和WO 01/44170，以及WO 2003/042191中所述的那些。
在很多出版物例如国际专利公开WO 97/22600、EP 138,527、WO00/71509、WO 98/28269、WO 99/17777和WO 01/58883中对苯甲酰胺类、杂芳酰胺类和反酰胺类进行了描述，但并没有描述其抑制P2X7受体的用途。
经鉴定，P2X7受体的拮抗剂可以用于治疗人的疾病(参见，例如Alcaraz等人，(2003)Bioorg Med chem Lett.13(22)：4043-4046；Baxter等人(2003)Bioorg Med Chem Lett.13(22)：4047-4050)。人们需要另外的组合物，和制备作为药剂使用的抑制P2X7受体的化合物的方法。
                        发明内容
一方面，本发明提供了制备通式I的化合物或其药学可接受的盐的方法，
Figure A20058002184000081
其中R1是(C1-C6)烷基，任选被(C3-C8)环烷基、苯基、萘基、5或6-元杂环烷基、或5-或6-元杂芳基取代，其中每个所述的(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、苯基、萘基、5-或6-元杂环烷基、或5-或6-元杂芳基任选被1到3个独立地选自羟基、卤素、CN-、(C1-C6)烷基、HO(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-NH(C＝O)-、NH2(C＝O)-、(C1-C6)烷氧基、或(C3-C8)环烷基的基团所取代；
R2是氢、卤素、-CN、或(C1-C6)烷基，其中所述(C1-C6)烷基任选被1到3个独立地选自卤素、羟基、氨基、-CN、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、-CF3、CF3O-、(C1-C6)烷基-NH-、[(C1-C6)烷基]2-N-、(C1-C6)烷基-S-、(C1-C6)烷基-(S＝O)-、(C1-C6)烷基-(SO2)-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、甲酰基、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、和(C3-C6)环烷基的基团所取代；
其中R4独立地选自氢、卤素、羟基、-CN、HO-(C1-C6)烷基、任选被1-3个氟取代的(C1-C6)烷基、任选被1-3个氟取代的(C1-C6)烷氧基、HO2C-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、R5R6N(O2S)-、(C1-C6)烷基-(O2S)-NH-、(C1-C6)烷基-O2S-[(C1-C6)烷基-N]-、R5R6N(C＝O)-、R5R6N(CH2)m-、苯基、萘基、(C3-C8)环烷基、5-或6-元杂芳基、5-或6-元杂环烷基、苯基-O-，萘基-O-，(C3-C8)环烷基-O-、5-或6-元杂芳氧基和5或6-元杂环烷基-O-；和
R7是-CH2-C(R10R11)-OH，其中R10和R11独立地选自：
氢、苯基、和任选被1-3个卤素取代的(C1-C6)烷基、羟基、-CN、(C1-C6)烷氧基-、((C1-C6)烷基)n-N-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、(C3-C8)环烷基-(C＝O)-、5或6-元杂环烷基-(C＝O)-、苯基-(C＝O)-、萘基-(C＝O)-、5-或6-元杂芳基-(C＝O)-、(C1-C6)烷基-(C＝O)O-、(C1-C6)烷基-O(C＝O)-、(C3-C8)环烷基、苯基、萘基、5或6-元杂环烷基、和5-或6-元杂芳基；
R5和R6各自独立地选自氢、(C1-C6)烷基、HO-(C2-C6)烷基和(C3-C8)环烷基，或者R5和R6可以任选与氮原子连接在一起，形成5-或6-元杂环烷基；
n是1或2；和
m是1或2；
其中所述方法包括将通式II的化合物
与通式VIII的化合物
Figure A20058002184000101
在至少一种路易斯酸存在下反应。在一些实施方案中，该路易斯酸是无机路易斯酸。在其他实施方案中，该路易斯酸是三氟化硼二乙醚合物。在另外的实施方案中，该路易斯酸是Al2O3、Ti(O-Pri)4、LiClO4、或Zn(OAc)2。而在另一些实施方案中，该路易斯酸选自(a)Eu(OTf)3、Dy(OTf)3、Ho(OTf)3、Er(OTf)3、Lu(OTf)3、Yb(OTf)3、Nd(OTf)3、Gd(OTf)3、Lu(OTf)3、La(OTf)3、Pr(OTf)3、Tm(OTf)3、Sc(OTf)3、Sm(OTf)3、AgOTf、或Y(OTf)3；(b)AlCl3、AlI3、AlF3、AlBr3、AsCl3、AsI3、AsF3、AsBr3、BCl3、BBr3、BI3、BF3、FeCl3、FeBr3、FeI3、FeF3、FeCl2、FeBr2、FeI2、FeF2、GaCl3、GaI3、GaF3、GaBr3、MgCl2、MgI2、MgF2、MgBr2、NbCl5、SbCl3、SbI3、SbF3、SbBr3、SbCl5、SbI5、SbF5、SbBr5、SnCl2、SnI2、SnF2、SnBr2、SnCl4、SnI4、SnF4、SnBr4、TiBr4、TiCl2、TiCl3、TiCl4、TiF3、TiF4、TiI4、ZnCl2、ZnI2、ZnF2、或ZnBr2；(c)BF3BCl3·SMe2、BI3·SMe2、BF3·SMe2、BBr3·SMe2、BF3·OEt2、Et2AlCl、EtAlCl2、MgCl2·OEt2、MgI2·OEt2、MgF2·OEt2、MgBr2·OEt2、Et2AlCl、EtAlCl2、或Zn(OAc)2；和(d)(CH3CO2)2Co、CoBr2、CoCl2、CoF2、CoI2、Co(NO3)2、三氟甲磺酸钴(II)、甲苯磺酸钴(II)、(CH3CO2)2Cu、CuBr2、CuCl2、CuF2、CuI2、Cu(NO3)2、三氟甲磺酸铜(II)、甲苯磺酸铜(II)、(CH3CO2)2Ni、NiBr2、NiCl2、NiF2、NiI2、Ni(NO3)2、三氟甲磺酸镍(II)、或甲苯磺酸镍(II)。在另外的实施方案中，该路易斯酸是硅胶。在一些实施方案中，该反应在N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮或它们的混合物中进行。在特定的实施方案中，每1摩尔的通式II的化合物与小于6摩尔的通式VIII的化合物存在；每1摩尔的通式II的化合物与小于5摩尔的通式VIII的化合物存在；或者每1摩尔的通式II的化合物与1到2摩尔的通式VIII的化合物存在。在其他实施方案中，通式VIII的化合物是(R)-(-)-缩水甘油基甲醚。在另外的实施方案中，通式II的化合物是2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基甲基)-苯甲酰胺。在特定的实施方案中，通式I的化合物是2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺。在某些实施方案中提供了制备2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的方法，其中所述方法包括将2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基甲基)-苯甲酰胺与(R)-(-)-缩水甘油基甲醚在硅胶存在下反应，其中该反应在N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、或N-甲基吡咯烷酮或它们的混合物中进行。该方法也包括下列的实施方案，其中R1是(C1-C4)烷基，任选被(C3-C8)环烷基取代；其中所述(C1-C4)烷基或(C3-C8)环烷基任选被1到3个独立地选自羟基、卤素、CN-、(C1-C6)烷基、HO(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-NH(C＝O)-、NH2(C＝O)-、(C1-C6)烷氧基、或(C3-C8)环烷基的基团所取代。在一些实施方案中，R2可以是氯、甲基或乙基。在其他实施方案中，R4是氢并且R7是-CH2-C(R10R11)-OH，其中R10和R11可以独立地选自：氢和任选被(C1-C6)烷氧基-或-OH取代的(C1-C6)烷基。在另外的实施方案中，R7可以选自：
Figure A20058002184000111
R7可以选自：
Figure A20058002184000121
另一方面，本发明提供2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的组合物，包含：晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺；和小于2.5％的残留有机溶剂。在一些实施方案中，该组合物包含小于2.0％(w/w)的残留有机溶剂；0.1到2.0％(w/w)的残留有机溶剂；0.1到0.5％(w/w)的残留有机溶剂；或0.05到0.5％(w/w)的残留有机溶剂。在一些实施方案中，该残留有机溶剂是丙酮。在特定的实施方案中，通过差示扫描量热法测定，该组合物具有的起始熔点在108℃±0.5到112℃±0.5之间。在特定的实施方案中，通过差示扫描量热法测定，该组合物具有的起始熔点在110℃±0.5到112℃±0.5之间。在一些实施方案中，用CuKα辐射测定，该组合物具有的X-射线粉末衍射包括如下的2-θ值±0.2：8.1，16.4，19.7，21.2，22.2，和27.1。在另一些实施方案中，用CuKα辐射测定，该组合物具有的X-射线粉末衍射包括如下的2-θ值±0.2：8.1，11.7，14.9，16.4，18.3，19.7，21.2，21.6，22.2，22.6，和27.1。在其他的实施方案中，用CuKα辐射测定，该组合物具有的X-射线粉末衍射包括如下的2-θ值±0.2：7.8，8.1，10.5，11.7，13.2，13.7，14.3，14.9，15.6，16.4，17.3，17.7，18.3，18.9，19.1，19.7，20.3，20.9，21.2，21.6，22.2，22.6，22.8，23.3，23.9，24.3，24.6，25.1，25.9，26.2，27.1，27.6，28.2，28.7，28.8，29.4，30.0，30.3，30.9，31.1，31.9，33.4，33.8，34.3，35.2，和37.1。在一些实施方案中，该组合物也可用固态13C核磁共振来表征，在最低ppm共振和其他共振之间包括如下的化学位移差别：150.6，137.6，119.5，和54.8。在一些实施方案中，该组合物用固态13C核磁共振来表征，在最低ppm共振和其他共振之间包括如下的化学位移差别：150.6，137.6，130.1，129.2，121.4，120.5，119.5，117.7，113，112.7，111.6，110.3，109.5，107.3，106，54.8，53.9，47.7，45.9，41.2，38，34.2，31.2，24.7，20.8，19.0，18.1，17.4，12.2，10.1，4.0，3.5，和1.2。在一些实施方案中，该组合物用固态13C核磁共振来表征，包括以ppm表示的如下化学位移：169.8，156.8，138.7，和74.0。在一些实施方案中，该组合物用固态13C核磁共振来表征，包括以ppm表示的如下化学位移：169.8，156.8，149.3，148.4，140.6，139.7，138.7，136.9，132.2，131.9，130.8，129.5，128.7，126.5，125.2，74.0，73.1，66.9，65.1，60.4，57.2，53.4，50.4，43.9，40.0，38.2，37.3，36.6，31.4，29.3，23.2，22.7，20.4，和19.2。
在另一方面，本发明提供制备包含小于2.5％残留有机溶剂的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的组合物的方法，包括：在包含2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的丙酮溶液中混入正庚烷，以产生2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体；和分离包含小于2.5％(w/w)残留有机溶剂的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺晶体。在一些实施方案中，分离包括从溶剂中过滤该晶体，并干燥该晶体。在其他的实施方案中，该组合物含有小于2.0％(w/w)的残留有机溶剂。在其他的实施方案中，该组合物含有0.1到2.0％(w/w)的残留有机溶剂。而在另一些实施方案中，该组合物含有0.1到0.5％(w/w)的残留有机溶剂。该残留有机溶剂可以是丙酮。在特定的实施方案中，通过差示扫描量热法测定，该组合物具有的起始熔点在108℃±0.5到112℃±0.5之间。在特定的实施方案中，通过差示扫描量热法测定，该组合物具有的起始熔点在110℃±0.5到112℃±0.5之间。在一些实施方案中，用CuKα辐射测定，该组合物具有的X-射线粉末衍射包括如下的2-θ值±0.2：8.1，16.4，19.7，21.2，22.2，和27.1。在另一些实施方案中，用CuKα辐射测定，该组合物具有的X-射线粉末衍射包括如下的2-θ值±0.2：8.1，11.7，14.9，16.4，18.3，19.7，21.2，21.6，22.2，22.6，和27.1。在其他的实施方案中，用CuKα辐射测定，该组合物具有的X-射线粉末衍射包括如下的2-θ值±0.2：7.8，8.1，10.5，11.7，13.2，13.7，14.3，14.9，15.6，16.4，17.3，17.7，18.3，18.9，19.1，19.7，20.3，20.9，21.2，21.6，22.2，22.6，22.8，23.3，23.9，24.3，24.6，25.1，25.9，26.2，27.1，27.6，28.2，28.7，28.8，29.4，30.0，30.3，30.9，31.1，31.9，33.4，33.8，34.3，35.2，和37.1。在一些实施方案中，该组合物也可用固态13C核磁共振来表征，在最低ppm共振和其他共振之间包括如下的化学位移差别：150.6，137.6，119.5，和54.8。在一些实施方案中，该组合物用固态13C核磁共振来表征，在最低ppm共振和其他共振之间包括如下的化学位移差别：150.6，137.6，130.1，129.2，121.4，120.5，119.5，117.7，113，112.7，111.6，110.3，109.5，107.3，106，54.8，53.9，47.7，45.9，41.2，38，34.2，31.2，24.7，20.8，19.0，18.1，17.4，12.2，10.1，4.0，3.5，和1.2。在一些实施方案中，该组合物用固态13C核磁共振来表征，包括以ppm表示的如下化学位移：169.8，156.8，138.7，和74.0。在一些实施方案中，该组合物用固态13C核磁共振来表征，包括以ppm表示的如下化学位移：169.8，156.8，149.3，148.4，140.6，139.7，138.7，136.9，132.2，131.9，130.8，129.5，128.7，126.5，125.2，74.0，73.1，66.9，65.1，60.4，57.2，53.4，50.4，43.9，40.0，38.2，37.3，36.6，31.4，29.3，23.2，22.7，20.4，和19.2。
在另一方面，本发明涉及制备包含小于2.5％残留有机溶剂的晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的组合物的方法，包括：在包含2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的丙酮溶液中混入正庚烷，产生2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体；和分离包含小于2.5％(w/w)残留有机溶剂的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体。在一些实施方案中，该方法包括从溶剂中过滤晶体，并干燥该晶体。在一些实施方案中，该组合物含有小于2.0％(w/w)的残留有机溶剂；0.1到2.0％(w/w)的残留有机溶剂；或0.1到0.5％(w/w)的残留有机溶剂。
在另一方面，本发明提供治疗患有疾病的患者的方法，所述疾病选自类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎、牛皮癣、炎性疾病、和自身免疫性疾病，该方法包括：施用治疗有效量的包含晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的组合物，其中该化合物包含小于2.5％的残留有机溶剂。在一些实施方案中，该疾病是类风湿性关节炎。该疾病也可以是IL-1介导的疾病。如本文所定义，“IL-1介导的疾病”包括但不限于选自下列的疾病或病症：关节炎(包括牛皮癣性关节炎、莱特尔综合征、类风湿性关节炎、痛风、外伤性关节炎、风疹性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎和急性滑膜炎)、炎性肠病、克罗恩氏病、气肿、急性呼吸窘迫综合征、成人呼吸窘迫综合征、哮喘支气管性慢性阻塞性肺病、慢性肺部炎性疾病、硅肺病、肺结节病、变应性反应、变应性接触性超敏反应、湿疹、接触性皮炎、牛皮癣、晒斑、癌症、组织溃疡、再狭窄、牙周病、大疱性表皮松解、骨质疏松症、骨再吸收疾病、人工关节植入物松弛、动脉粥样硬化、主动脉瘤、充血性心力衰竭、心肌梗塞、中风、脑缺血、头部创伤、神经外伤、脊髓损伤、神经变性疾病、阿尔茨海默病、帕金森病、偏头痛、抑郁、周围神经病、疼痛、大脑淀粉样血管病、益智或认知增强、肌萎缩性侧索硬化、多发性硬化症、眼部血管发生、角膜损伤、黄斑变性、角膜瘢痕形成、巩膜炎、异常创口愈合、烧伤、自身免疫性疾病、亨廷顿氏病、糖尿病、AIDS、恶病质、败血病、败血病性休克、内毒素性休克、结膜炎休克、革兰氏阳性脓毒症、中毒性休克综合征、脑型疟、心脏和肾脏再灌注损伤、血栓形成、肾小球肾炎、移植物抗宿主反应、同种异体移植物排斥、器官移植毒性、溃疡性结肠炎、或肌肉退化。
另一方面，本发明提供药物组合物，包含：治疗有效量的包含小于2.5％残留有机溶剂的晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺，与至少一种药学可接受的载体混合。
另一方面，本发明提供一种制备药物组合物的方法，包括：将包含小于2.5％残留有机溶剂的晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺与至少一种药学可接受的载体混合。
另一方面，本发明提供2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的组合物，包含：晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺；通过差示扫描量热法测定，其具有的起始熔点在108℃±0.5到112℃±0.5之间。在一些实施方案中，通过差示扫描量热法测定，该组合物具有的起始熔点在110℃±0.5到112℃±0.5之间。
另一方面，本发明提供制备一种药物组合物的方法，包括：将通过差示扫描量热法测定，具有的起始熔点在108℃±0.5到112℃±0.5之间的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺与至少一种药学可接受的载体混合。
另一方面，本发明提供一种制备晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的方法，包括：从丙酮、二异丙醚、乙酸正丁酯、正庚烷、甲醇、四氢呋喃、或甲基乙基酮中结晶2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺。
本发明的化合物包括通式I化合物的所有立体异构体(例如顺式和反式异构体)和所有旋光异构体(例如，R和S对应体)，以及这些异构体的外消旋、非对映体和其他混合物。
本发明的化合物和盐可以以若干种互变异构的形式存在，包括烯醇和亚胺的形式，和酮和烯胺的形式和几何异构体和它们的混合物。所有这些互变异构的形式都包括在本发明的范围内。互变异构体在溶液中作为互变异构形式的混合物存在。在固体形式中，通常一种互变异构体占优势。尽管可以描述一种互变异构体，但本发明包括该化合物的所有互变异构体。互变异构的结构的一个例子是下列一组：
Figure A20058002184000181
本领域技术人员将会意识到，该组也可以绘成其互变异构体：
本发明也包括阻转异构体。阻转异构体是指可以分离成自旋受限异构体的通式I的化合物。
本发明的化合物可以包含烯烃样的双键。当存在这样的键时，本发明的化合物以顺式和反式构型和以它们的混合物存在。
                        定义
术语“烷基基团”或“烷基”包括直链和支链的碳链基团。术语“亚烷基”是指未取代的或取代的烷烃的双自由基。例如，“C2-6烷基”是具有2到6个碳原子的烷基。C2-C6直链烷基的例子包括但不限于，乙基、正丙基、正丁基、正戊基、和正己基。支链烷基的例子包括但不限于，异丙基、叔丁基、异丁基等等。亚烷基的例子包括但不限于-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、和-(CH2)1-3。亚烷基基团可以被下列关于烷基中的取代基所取代。
术语烷基包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”，其中后者是指烃主链上的一个或多个碳上的氢被取代基取代的烷基部分。这些取代基独立地选自：卤素，I、Br、Cl、F；-OH、-COOH、三氟甲基、-NH2、-OCF3、和O-C1-C3。
因此，典型的取代的烷基是2，3-二氯戊基、3-羟基-5-羧基己基、2-氨基丙基、五氯丁基、三氟甲基、甲氧乙基、3-羟基戊基、4-氯丁基、1，2-二甲基-丙基、和五氟乙基。
“卤素”包括氟、氯、溴、和碘。
术语“C3-C8环烷基”是指具有3到8个碳的环烷基。因此，术语“C3-C8环烷基”包含具有3到8个碳的单环烷基和包含7或8个碳的二环烷基。“C3-C8环烷基”的例子包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、和二环[2.2.1]庚基；环烷基可以任选包含1或2个双键(即环烯基)，包括但不限于环戊烯基、环己烯基和环庚烯基。“C3-C8环烷基”可以被1或2个独立地选自C1-C3烷基(例如甲基)和-O-C1-C3烷基(例如，甲氧基)的基团取代。取代的环烷基的例子包括但不限于，甲基-环丙基、二甲基-环己基、2-甲基-环己基、3-甲基-环己基、3，5-二甲基-环己基、和4-甲基-环己基。
“5-元杂环烷基”是稳定的5-元单环烷基，其具有2到4个碳原子和1到3个杂原子，选自：10；1S；1N；2N；3N；1S和1N；1S和2N；10和1N；以及10和2N。稳定的5-元杂环烷基的说明性的例子包括四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、咪唑烷基、_唑烷基、咪唑啉基、异_唑烷基、吡咯烷基、2-吡咯啉基、和3-吡咯啉基。
“6-元杂环烷基”是稳定的6-元单环烷基，其具有3到5个碳原子和1到3个杂原子，选自：10；20；1S；2S；1N；2N；3N；1S，10和1N；1S和1N；1S和2N；1S和10；1S和20；10和1N；以及10和2N。稳定的6-元杂环烷基的说明性的例子包括四氢吡喃基、二氢吡喃基、二氧杂环己基、1，3-二氧杂环戊基、1，4-二硫杂环己基、六氢嘧啶、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、吡唑烷基、吡唑啉基、1，2，3，6-四氢吡啶基、四氢硫代吡喃基、1，1-二氧-六氢-1λ6-硫代吡喃基、1，1-二氧-1λ6-硫代吗啉基、硫代吗啉基、噻_烷基、和三硫杂环己基。
上述的杂环烷基可以是C-连接或N-连接的。例如，哌啶基可以是哌啶-1-基(N-连接)或哌啶-4-基(C-连接)。
术语“5或6元杂环烷基”包括在环中包含一个碳-碳或一个碳-氮双键的5元环(例如2-吡咯啉基、3-吡咯啉基等)和在环中包含一个碳-碳或一个碳-氮双键的6元环(例如，二氢-2H-吡喃基、1，2，3，4四氢吡啶、3，4-二氢-2H-[1，4]_嗪等)。当可能时，“5或6元杂环烷基”可以被例如在上述C3-C8环烷基中列举的基团取代。
术语“苯基”是指未取代或取代的苯基。苯基可以被1到3个独立地选自C1-C3烷基、-O-C1-C3烷基、-OCF3、卤素、和C5-C6环烷基的取代基所取代。
典型的取代的苯基包括但不限于，3-氯苯基、2，6-二溴苯基、2，4，6-三溴苯基、2，6-二氯苯基、4-三氟甲基苯基、3-甲基-苯基、4-甲基-苯基、3，5-二甲基-苯基、3，4，5-三甲氧基-苯基、3，5-二甲氧基-苯基、3，4-二甲氧基-苯基、3-甲氧基-苯基、4-甲氧基-苯基、3，5-二氟-苯基、4-氯-苯基、3-三氟甲基-苯基、3，5-二氯-苯基、2-甲氧基-5-甲基-苯基、2-氟-5-甲基-苯基、4-氯-2-三氟甲基-苯基等等。
“5-元杂芳基”是稳定的5-元单环芳环基，其具有1到4个碳原子和1到4个杂原子，选自：10；1S；1N；2N；3N；4N；1S和1N；1S和2N；10和1N；以及10和2N。稳定的5-元杂芳基的说明性的例子包括但不限于，呋喃基、2-呋喃基、3-呋喃基、咪唑基、异_唑基、异噻唑基、_二唑基、_唑基、吡啶基、2-，3-，或4-吡啶基、嘧啶基、2-，4-，或5-嘧啶基、吡唑基、吡咯基、2-或3-吡咯基、吡嗪基、哒嗪基、3-或4-哒嗪基、2-吡嗪基、噻吩基、2-噻吩基、3-噻吩基、四唑基、噻唑基、噻二唑基、三嗪基和三唑基。
“6-元杂芳基”是稳定的6-元单环芳环基，其具有3到5个碳原子和1到3个杂原子，选自：1N；2N；以及3N。稳定的6-元杂芳基的说明性的例子包括，吡啶-2-基、吡啶-4-基、嘧啶-2-基、哒嗪-4-基、和吡嗪-2-基。
5-或6-元杂芳基可以任选被1到3个独立地选自C1-C3烷基、-O-C1-C3烷基、-OCF3、和卤素的取代基所取代。
“萘基”是指取代或未取代的萘基。萘基可以被1到4个独立地选自C1-C3烷基、-O-C1-C3烷基、-OCF3、卤素、和C5-C6环烷基的取代基所取代。
                      附图说明
附图1
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺(实施例4，样品D)的差示扫描量热法热学图谱。
附图2
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺(实施例4，样品D)的固态13C-NMR谱。
附图3
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺(实施例4，样品D)的粉末X-射线衍射(PXRD)谱。
                      发明详述
I.介绍
本发明涉及通式I的化合物和其药学可接受的盐的制备，所述化合物可以作为药剂用于治疗疾病，包括炎性疾病例如类风湿性关节炎。还提供了包含小于2.5％残留有机溶剂的晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的组合物，和制备所述组合物的方法。此外提供了结晶2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的方法。
II.制备化合物的方法
制备通式I的化合物，包括使用本领域已知的合成方法，如下所列的方案中所概述的合成方法，以及在美国专利申请序列号10/748,340中所述的方法，在此通过参考将该专利整体引入本文。
方案1
Figure A20058002184000221
方案2
方案3
Figure A20058002184000241
方案4
方案1涉及通式I的化合物的制备。通式I的化合物(例如，2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺)可以由通式II的化合物(例如，2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基甲基)-苯甲酰胺)制备，包括将其与适当的通式VIII的取代环氧乙烷(例如，(R)-(-)-缩水甘油基甲醚)在催化有效量的路易斯酸和极性溶剂存在下反应，所述极性溶剂包括但不限于N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、或N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、和四氢呋喃。上述反应可以在温度范围0℃到100℃下进行2到72小时，其中优选的条件是60℃下在二甲基甲酰胺中反应24小时。在一些实施方案中，该反应可以在惰性反应条件下用惰性溶剂(例如，无水溶剂)在惰性气体气氛(例如，氮气)中来完成。路易斯酸的例子包括具有通式MXt的化合物，其中M选自Al、As、B、Fe、Fe、Ga、Mg、Nb、Sb、Sn、Ti、和Zn。X是卤素，选自Cl、I、F、和Br。本领域技术人员将会认识到，根据M的价态，t是2到5的整数。通式MXt的化合物的例子包括但不限于：AlCl3、AlI3、AlF3、AlBr3、AsCl3、AsI3、AsF3、AsBr3、BCl3、BBr3、BI3、BF3、FeCl3、FeBr3、FeI3、FeF3、FeCl2、FeBr2、FeI2、FeF2、GaCl3、GaI3、GaF3、GaBr3、MgCl2、MgI2、MgF2、MgBr2、NbCl5、SbCl3、SbI3、SbF3、SbBr3、SbCl5、SbI5、SbF5、SbBr5、SnCl2、SnI2、SnF2、SnBr2、SnCl4、SnI4、SnF4、SnBr4、TiBr4、TiCl2、TiCl3、TiCl4、TiF3、TiF4、TiI4、ZnCl2、ZnI2、ZnF2、和ZnBr2。此外，也可以使用路易斯酸例如，Al2O3、BF3BCl3·SMe2、BI3·SMe2、BF3·SMe2、BBr3·SMe2、BF3·OEt2、Et2AlCl、EtAlCl2、MgCl2·OEt2、MgI2·OEt2、MgF2·OEt2、MgBr2·OEt2、Et2AlCl、EtAlCl2、LiClO4(高氯酸锂)、Ti(O-Pri)4(四异丙氧化钛)、和Zn(OAc)2。在另一个实施方案中，钴(II)、铜(II)、和镍(II)盐，例如(CH3CO2)2Co、CoBr2、CoCl2、CoF2、CoI2、Co(NO3)2、三氟甲磺酸钴(II)、甲苯磺酸钴(II)、(CH3CO2)2Cu、CuBr2、CuCl2、CuF2、CuI2、Cu(NO3)2、三氟甲磺酸铜(II)、甲苯磺酸铜(II)、(CH3CO2)2Ni、NiBr2、NiCl2、NiF2、NiI2、Ni(NO3)2、三氟甲磺酸镍(II)、和甲苯磺酸镍(II)可以用于VIII和II的反应。单烷基卤化硼、二烷基卤化硼、单芳基卤化硼、和二芳基卤化硼也可以作为路易斯酸使用。三氟甲磺酸的稀土金属盐例如Eu(OTf)3、Dy(OTf)3、Ho(OTf)3、Er(OTf)3、Lu(OTf)3、Yb(OTf)3、Nd(OTf)3、Gd(OTf)3、Lu(OTf)3、La(OTf)3、Pr(OTf)3、Tm(OTf)3、Sc(OTf)3、Sm(OTf)3、AgOTf、Y(OTf)3、和其聚合物树脂(例如三氟甲磺酸钪的聚苯乙烯树脂；PS-Sc(OTf)2)可以在例如1份水和4到9份四氢呋喃的溶液中使用。此外，在该反应中可以使用硅胶例如在柱色谱法中使用的硅胶(CAS112926-00-8)，优选粒度为80-500目。在一些实施方案中，该路易斯酸是硅胶，而且反应在溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、或N-甲基吡咯烷酮、或它们的混合物中进行。上述的路易斯酸也包括杂多酸或它们的盐，沸石-型分子筛、路易斯共轭酸-型超酸、或路易斯酸(例如AlCl3、BF3、或XF5(X＝P、As、Sb、或Bi))-处理过的氧化物或分子筛、和载有多孔无机载体(例如活化的C、SiO2、Al2O3、MgO、TiO2、天然或合成的硅铝酸盐-型沸石)。
方案2涉及通式II的化合物的制备。通式II的化合物可以由通式IX的化合物(例如，2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-苯甲酸)来制备，包括将其与通式XIV的化合物H2N-R1(例如1-氨基甲基-环庚醇HCl)在偶合剂和碱存在下反应，其中所述偶合剂和碱在非质子溶剂中，所述偶合剂是例如1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺(EDCI)、二环己基碳二亚胺(DCC)，1，1’-羰基二咪唑(CDI)，所述碱例如是二甲基氨基吡啶(DMAP)或三乙胺，所述非质子溶剂是例如二氯甲烷、二甲基甲酰胺、或二甲基亚砜，优选1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺和二甲基氨基吡啶在二甲基甲酰胺中。上述反应可以在22℃到60℃的温度下进行1小时到20小时，优选22℃下进行18小时。
通式V的化合物也可以由通式X的化合物(例如，2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-苯甲酰氯)来制备，包括将其与通式XIV的化合物在碱存在下反应，所述碱在非质子溶剂中，其中所述碱包括但不限于，二甲基氨基吡啶(DMAP)、三乙胺、氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液，其中所述非质子溶剂是例如，二氯甲烷、乙酸乙酯、二氯乙烷、二甲基甲酰胺、或二甲基亚砜，优选氢氧化钠水溶液和二氯乙烷。上述反应可以在22℃到60℃的温度下进行1小时到24小时，优选在环境温度下进行3小时。
化合物X可以由化合物IX来制备，包括在22℃到60℃的温度下，将其与能产生酰基氯的试剂例如亚硫酰氯或乙二酰氯在极性非质子溶剂例如乙酸乙酯、二氯甲烷、或二氯乙烷中反应1到24小时，优选在环境温度下乙二酰氯在二氯甲烷中反应16小时。
方案3涉及通式IX的化合物的制备，通过方案2所述的方法可以将其转化成通式V的化合物。通式IX的化合物可以由通式XI的化合物用脱羧条件来制备，优选巯基乙酸在包含碱例如氢氧化钠的水中在22℃到160℃的温度下反应1小时到24小时，优选在100℃下反应18小时。
方案4涉及通式XIII和XI的化合物的制备。通过方案3所述的方法可以将通式XI的化合物转化成通式IX的化合物。
通式XI的化合物可以由通式XIII的化合物来制备，其中R8是(C1-C2)烷基，包括将其与酸例如50％的硫酸在60℃到120℃的温度下反应，一般反应30分钟到6小时，优选在120℃下反应2小时。
通式XIII的化合物，其中R8是(C1-C2)烷基，可以由来自通式XII化合物的重氮中间体来制备。该重氮中间体的制备，包括将通式XII的化合物与酸例如盐酸和/或冰醋酸反应，然后在0℃到25℃的温度下用在溶剂例如水中的亚硝酸钠处理，该反应一般进行30分钟到约2小时，优选在10℃反应30分钟。制备通式XII的化合物，包括将上述重氮中间体与通式XVII的化合物：
R8O(C＝O)N(C＝O)CH2(C＝O)N(C＝O)OR8在碱性条件下反应。该反应典型地用乙酸钠作为碱在0℃到120℃，优选10℃的温度下进行，然后加热到120℃，该反应一般进行1小时到24小时，优选4小时(Carrool等人；J.Med.Chem.，1983，26，96-100)。
本领域的普通技术人员将会意识到，在一些情况中，在制备期间可能需要保护基。在制得目标分子后，可以用本领域普通技术人员公知的方法除去保护基，所述方法例如在Greene和Wuts，“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”(3rd Ed，John Wiley & Sons 1999)中所述。
用上述方案和说明可以制得的化合物的例子包括表1中的那些：
                          表1
Figure A20058002184000311
Figure A20058002184000321
Figure A20058002184000331
III.晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的制备
通过从一种或多种有机溶剂中结晶药物活性化合物可以得到其不同的晶体形式。得到的分离的晶体形式可以包含一种或多种有机溶剂-“残留有机溶剂”。在一些情况中，在晶体形式中残留有机溶剂的量需要降低到调节媒介(regulatory agency)可接受的水平(参见例如Dwivedi(November 2002)Pharmaceutical Tech.第42-46页；和Guidance for Industry，Q3C Impurities：Residual organicsolvents，U.S.Food and Drug Administration，Rockville，Maryland，December 1997)，并且与制备最终的单元剂型有关的性质(例如，稳定性、操作等等)是相容的。
美国专利申请序列号10/748,340的实施例61公开了一种2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体制品，其中通过差示扫描量热法(DSC)测定，其具有单一的起始熔点105.8℃(吸热)，以加热速率为5℃/分钟从30℃到300℃来进行。在本发明的一些实施方案中，本发明的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体制品，通过差示扫描量热法测定，其具有的起始熔点在108℃±0.5到112℃±0.5之间。
在一些实施方案中，制备2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体形式，包括在包含一种或多种有机溶剂的溶液中产生2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体。本领域技术人员可以改变各种因素，包括溶液中2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的浓度、溶剂组成、加入2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶种、每一步的时间和温度、溶液中2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的起始物质的纯度、所使用的溶剂的纯度等等，来获得所需的晶体物质。
在一些实施方案中，起始物质是2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺，其先前已被结晶，然后又溶解到溶剂中。此外，也可以使用各种技术，例如加热然后冷却2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的溶液，以获得晶体物质。在一些实施方案中，将溶液冷却到20到27℃，10到22℃，0到12℃，或-10到2℃等等。在一些实施方案中，将溶液加热到40-60℃之间的温度。可以将2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺加入到一种或多种有机溶剂的溶液中，加热，然后进行下列的一个或多个步骤，包括：浓缩该溶液，冷却该溶液至较低温度(例如，20到27℃，10到22℃，0到12℃，-10到2℃等等)，以及加入晶种。
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的结晶可以在环境温度、较高温度或较低温度下和不同长度的时间里进行以达到所需的结果，这取决于各种情况，例如技术的性质和一种或多种有机溶剂的性质。诱导结晶可以包括下列步骤，包括改变温度(例如降低温度)、加入溶剂、和向结晶溶液中加入少量的(或作为种子)2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺。
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺可以从包含单一有机溶剂的溶液中结晶。通过加热(例如，至50和70℃的温度下)，可以将2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺溶解于溶剂(例如丙酮、乙腈、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、氯仿、乙酸乙酯、和甲醇)中，然后冷却至较低温度，直至在溶液中出现晶体物质。
此外，2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺可以从包含两种或多种相对易混合的溶剂的溶剂系统中获得。此外，2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺可以从一种或多种有机溶剂的第一溶液中结晶，其中在该溶液中溶剂相互之间相对易混合并且其中该化合物是适当可溶解的，然后将其与一种或多种第二溶剂混合，该第二溶剂与第一溶液是相对易混合的，在第二溶剂中2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的溶解度比在第一溶液中小的多。可适当溶解2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的溶剂的例子包括丙酮、乙腈、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、氯仿、乙醇、乙酸乙酯、甲基乙基酮、甲醇、和四氢呋喃。在一些实施方案中，2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在第二溶剂中的溶解度小于约1-约20mg/ml。在另外的实施方案中，2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在第二溶剂中的溶解度是约5到约20mg/ml。在另外的实施方案中，2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在溶剂中是适当可溶解的，其溶解度为约50到大于190mg/ml。在一些实施方案中2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在溶剂中是适当可溶解的，其溶解度为约20到大于190mg/ml。在另外的实施方案中，2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在溶剂中是适当可溶解的，其溶解度为约50到约180mg/ml。适当的第二溶剂的例子包括环己烷、正庚烷、苯甲醇、己烷、异丙醇、二异丙醚、甲基异丁酮、甲苯、和水。第二溶剂可以以缓慢、中等、或快速的添加速率与第一溶液混合。
通过加热到某一温度(例如55℃)，可以把2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺溶解在溶剂(例如丙酮)中。然后冷却该包含2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的丙酮溶液至环境温度，通过加入2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶种来诱导结晶，然后再加入正庚烷。
从溶液中分离晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺可以使用一种或多种技术，或它们的组合，例如过滤、给样品通入空气或惰性气体(例如氮气或氩气)的气流、离心分离、蒸发、和干燥(例如在环境条件下、或在环境或更高温度(例如40-50℃)的真空干燥器中)。在一些实施方案中，如此制备的晶体物质包含小于2.5％的残留有机溶剂。在一些实施方案中，通过差示扫描量热法测定，这样制备的晶体物质具有的起始熔点在108℃±0.5到112℃±0.5之间。
晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的特征描述
可以使用一种或多种技术对晶体物质进行特征描述，包括偏振光显微镜检测、差示扫描量热法、热重量分析、和/或X-射线粉末衍射(“XPRD”)法。例如，差示扫描量热法可以用于确定样品相对于温度的热转移，包括样品的起始熔点。
为了在XPRD仪器(例如Shimadzu或Bruker仪器)上进行X-射线粉末衍射测定，典型地将样品置于具有一个空腔的固定器上。用载玻片或类似物压住样品粉末以确保具有随机的表面和适当的样品高度。然后将样品固定器置于仪器中。X-射线束放射源位于样品之上，开始时相对于固定器的平面有一个较小的角度，并在入射束和固定器的平面之间沿着连续增加角度的弧形移动。与所述X-射线粉末分析有关的测定差异来源于多种因素，包括：(a)样品制备中的误差(例如，样品高度)，(b)仪器误差(例如，平样品误差)，(c)校准误差，(d)操作者误差(包括在确定峰位置时存在的误差)，和(e)择优取向。校准误差和样品高度误差可以导致所有峰向相同的方向和以相同的量漂移。在平滑固定器上样品高度的较小差异会导致XRPD峰位置的较大位移。系统性研究表明，如果在典型的Bragg-Brentano构型中使用Shimadzu XRD-6000，1mm的样品高度差异会导致峰值漂移1°2θ(Chen，等人，J.Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2001；26：63)。这些漂移可以从X-射线衍射图中鉴别出来，可以通过补偿该漂移(给所有峰位值提供系统性校正因子)或再校准仪器来进行校正。
粉末x-射线衍射图形也可以在Inel(毛细管)衍射仪(例如，InelXRG-3000衍射仪，配备有120度的2θ范围的曲线位置灵敏(CPS)检测器)上分析出来。用CuKα辐射以0.03°2θ的分辨率从约4°2θ开始校正实时数据。管电压和安培数的设置值可以分别是例如40kV和30mA。典型地，将样品装入薄壁玻璃毛细管中，准备用于分析。一般每个毛细管都装到测角器头上，该测角器头是动力化的以便在数据采集期间允许进行毛细管的旋转。用硅参照标准品来完成每天的仪器校准。从这些图中来计算强度，这属于本领域的技术范围，包括用减去基线来补偿背景散射(例如由毛细管的散射)。
如上所述，可能地，通过系统性校准因子校准的各种XPRD仪器的测定可以校准各种机器的测定以将峰位置带入一致的区域。一般地，一个校准因子将把峰位置带入相互一致的区域，其范围是0到0.2°2θ。
此外，晶体物质可以用13C-固态NMR技术来分析，以在13C-固态光谱中确定百万分率的一个或多个峰。例如，晶体物质可以充入到4mmZrO自旋器中，在环境压力下，在放置到wide-bore Bruker-BiospinAvance DSX 500MHz NMR波谱仪中的Bruker 4mm BL CPMAS探针上，用1H-13C交叉极化幻角自旋技术(CPMAS)在293K收集一维的13C谱。然后样品以15.0kHz自旋，交叉极化接触时间为2.3ms，而解耦功率设置为85kHz。典型地碳谱用金刚烷的外样品作为参照，设置其高磁场共振为特定的ppm值，例如29.5ppm。
可以使用各种技术确定残留有机溶剂的百分比(w/w)，例如气相色谱法(“GC”)顶空气体分析(参见例如，B’Hymer(2003)Pharm.Res.20：337-344)。在GC顶空气体分析中，典型地收集样品上方的样品气体，在与检测系统(例如火焰电离检测器(FID)或质谱仪(MS))相连的气相色谱系统中进行分析。此外，可以使用各种方法例如顶空固相微萃取(SPME)确定残留有机溶剂的水平。
IV.化合物的体外评价
可以根据一种或多种下列测定来确定本发明的化合物对上述各种疾病的活性。在下列体外测定中，所有经测定的本发明的化合物的IC50小于10μM。
优选地在下列体外测定中，本发明化合物的IC50小于100nM，更优选小于50nM，最优选小于10nM。此外，本发明的化合物优选的IC50范围是0.01nM-100nM，更优选0.05nM-50nM，以及最优选0.10nM-10nM。
药理学分析
已知某些化合物例如苯甲酰基苯甲酰基三磷酸腺苷(bbATP)是P2X7受体的激动剂，其在质膜中影响孔的形成(Drug DevelopmentResearch(1996)， 37(3)，p.126)。因此，当在溴化乙啶(一种荧光的DNA探针)存在下用bbATP激活该受体时，观测到细胞内与DNA-结合的溴化乙啶的荧光增加。或者，可以用propidium染料YOPRO-1替代溴化乙啶，以探测该染料的吸收。荧光的增加可以作为P2X7受体激活的标准，因此可以定量化合物对P2X7受体的作用。
在该方法中，可以测验本发明的化合物对P2X7受体的拮抗活性。用250μl受试溶液装满91-孔平底微滴定板，该受试溶液包含200μl含有10-4M溴化乙啶的THP-1细胞的悬浮液(2.5×106个细胞/ml，更优选根据文献所述用LPS和TNF预刺激以促进受体表达)，25μl含有10-5M bbATP的高钾低钠缓冲液(10mM Hepes，150mM KCl，5mM D-葡萄糖和1.0％FBS，pH 7.5)，和25μl含有3×10-5M受试化合物(更优选5×10-4M，更优选1×10-4M，更优选1×10-3M)的高钾缓冲溶液。用塑料板覆盖该平板，在37℃培养1小时。然后将该平板在Perkin-Elmer荧光平板读数器中读数，520nm激发，595nm发射，缝宽：Ex 15nm，Em 20nm。为了比较荧光，可以在测验中分别用bbATP(P2X7受体激动剂)和5-磷酸吡哆醛(P2X7受体拮抗剂)作为对照。从获得的读数中，可以计算每个受试化合物的pIC50值，该值是降低50％的bbATP激动活性必需的受试化合物的浓度的正对数。
在类似的方法中，也可以用细胞因子IL-1β作为示值读数测定本发明的化合物对P2X7受体的拮抗活性。用来自Organon Technica(Westchester，PA)的淋巴细胞分离培养基将在肝素存在下收集的正常受试者的血液分级。收集包含条状单核细胞的所得到梯度的区域，用10ml维持培养基(RPMI 1640，5％FBS，25mM Hepes，pH 7.2，1％青霉素/链霉素)稀释，离心分离收集细胞。将所得到的细胞沉淀悬浮在10ml维持培养基中，进行细胞计数。在平均的实验中，96-孔板的每个孔都接种了2×105个单核细胞，总体积为0.1ml。使单核细胞粘附2小时，然后排除上清液，将附着细胞冲洗两次，然后在37℃和5％CO2环境中在维持培养基中培养。
可以用10ng/ml LPS(大肠杆菌血清型055：B5；Sigma Chemicals，St.Louis，MO)激活培养的单核细胞。培养2小时后，除去激活介质，用0.1ml Chase培养基(RPMI 1640，1％FBS，20mM Hepes，5mMNaHCO3，pH 6.9)将细胞冲洗两次，然后加入包含受试试剂的0.1mlChase培养基，将该平板培养30分钟；可以在一式三份的任一个孔中计算每个受试试剂的浓度。然后诱导ATP(从100mM母液，pH 7)来达到2mM的最终浓度，在37℃下将平板再培养3小时。收集介质，离心分离使之变澄清，用ELISA(R&D系统；Minneapolis，MN)来确定它们的IL-1β含量。
V.药学可接受的盐
本发明的化合物(例如，通式I的化合物)能够进一步形成药学可接受的盐，包括但不限于酸加成和/或碱加成盐。通式(I)的化合物的药学可接受的盐包括其酸加成和碱加成盐(包括二盐)。适当的盐的例子可以在例如Stahl和Wermuth，Handbook ofPharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use，Wiley-VCH，Weinheim，Germany(2002)；和Berge等人，“PharmaceuticalSalts，”J.of Pharmaceutical Science，1977；66：1-19中找到。
通式I的化合物的药学可接受的酸加成盐包括来自无机酸的无毒性的盐，例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷等等，以及来自有机酸的盐，例如脂肪族单-和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、链烷二酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸等等。这些盐包括通式I的化合物的醋酸盐、天冬氨酸、苯甲酸盐、苯磺酸盐(besylate)、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐、辛酸盐、右旋樟脑磺酸(樟脑磺酸盐)、氯苯甲酸、柠檬酸盐、乙二磺酸盐(1，2-乙烷二磺酸盐)、二氢磷酸盐、二硝基苯甲酸盐、乙磺酸盐(乙烷磺酸盐)、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、羟苄基苯甲酸盐、盐酸化物/氯化物、氢溴化物/溴化物、氢碘化物/碘化物、异丁酸盐、磷酸一氢盐、羟乙基磺酸盐、D-乳酸盐、L-乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐(methanesulfonate)、偏磷酸盐、甲基苯甲酸盐、甲基硫酸盐、2-萘基磺酸盐(2-萘磺酸盐)、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、苯乙酸盐、磷酸盐、酞酸盐、丙酸盐、焦磷酸盐、焦硫酸盐、蔗糖盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、辛二酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐、D-酒石酸盐、L-酒石酸盐、甲苯磺酸盐(toluene sulfonate)、和昔萘酸盐等等。同时关注的是氨基酸的盐例如精氨酸盐、葡糖酸盐、半乳糖醛酸盐等等。
碱性化合物的酸加成盐的制备，包括按照常规方法将游离的碱形式与足够量的所需酸接触以制成盐。可以再生该游离的碱形式，包括按照常规方法将盐的形式与碱接触，分离游离碱。在某些物理性质例如在极性溶剂中的溶解性方面，游离的碱形式多少不同于它们各自的盐形式，但是对于本发明的目的，该盐和它们各自的游离碱是相同的。
药学可接受的碱加成盐是用金属或胺，例如碱金属和碱土金属的氢氧化物或其有机胺类形成的。用作阳离子的金属的离子是铝、钙、镁、钾、钠等等。适当的胺的例子是精氨酸、胆碱、氯普鲁卡因、N，N′-二苄乙烯二胺、二乙胺、二乙醇胺、二乙醇胺、荼碱乙二胺(乙烷-1，2-二胺)、甘氨酸、赖氨酸、葡甲胺、N-甲基葡萄糖胺、乙醇胺、普鲁卡因(苄型青霉素)、和氨基丁三醇。
制备酸性化合物的碱加成盐，包括按照常规的方法将游离的酸形式与足够量的所需碱接触以制成盐。再生游离的酸形式，包括按照常规的方法将盐形式与酸接触，分离游离酸。在某些物理性质例如在极性溶剂中的溶解性方面，游离的碱形式多少不同于它们各自的盐形式，但是对于本发明的目的，该盐和它们各自的游离酸是相同的。
VI.药物组合物和给药方法
本发明也提供药物组合物，包含治疗有效量的含小于2.5％残留有机溶剂的晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺与至少一种药学可接受的载体混合，药物组合物包括：治疗有效量的含残留有机溶剂的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺与至少一种药学可接受的载体混合，其中通过差示扫描量热法测定，所述2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺具有的起始熔点在108℃±0.5到112℃±0.5之间。制备2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的药物组合物，包括将至少一种药学可接受的载体与晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺混合。
术语“药物组合物”涉及适合在医学或兽医学中施用的组合物。术语“治疗有效量”是指当单独或与其他的药物试剂施用来治疗特定患者或患者群时，化合物或其药学可接受的盐的量足以抑制、停止，或改善所要治疗的疾病。例如在人或其它哺乳动物中，当用于治疗特定疾病或患者时，治疗有效量可以在实验室或临床环境中根据实验来确定，或者是根据美国食品和药品管理局指导的所需量，或者与外国机构的指导值相等。
应当理解，适当的剂型、剂量、和给药途径的确定在药学和医学领域普通技术人员的水平之内，并如下所述。
本发明的化合物可以配制成糖浆、酏剂、混悬液、粉末、颗粒、片剂、胶囊、锭剂、含片、水溶液、乳膏、软膏、洗剂、凝胶、乳剂等形式的药物组合物，优选地，通过定量或定性测定，本发明的化合物将会导致与IL-介导的病症有关的症状或疾病表现减少。
当从本发明的化合物制备药物组合物时，药学可接受的载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁胶囊、栓剂、和可分散颗粒。液体载体可以是一种或多种可以作为稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂、或包囊材料的物质。
在粉末中，载体是精细粉碎的固体，其与精细粉碎的活性组分混在一起中。在片剂中，活性组分与适当比例的具有必要粘合性质的载体混合，压制成所需的形状和大小。
粉末和片剂包含1％到95％(w/w)的活性化合物。在一些实施方案中，该活性化合物的范围是5％到70％(w/w)。适当的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等等。术语“制备”是用载体来包裹活性化合物的制剂，其中该制剂是用包囊材料作为载体来提供一种含活性组分和/不含其他载体的胶囊，因此将载体和活性化合物结合在一起。类似地，扁胶囊和锭剂也包括在内。片剂、粉末、胶囊、丸剂、扁胶囊和锭剂可以用作适合口服的固体剂型。
当制备栓剂时，首先溶化低熔点蜡，例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物，然后通过搅拌将活性组分均匀地分散于其中。然后把熔化的均匀混合物倒入常规的容量模中，冷却，然后固化。
液体形式的制剂包括溶液、混悬液、和乳剂，例如，水或水/丙二醇溶液。当胃肠外注射时，液体制剂可以在聚乙二醇的水溶液中配制成溶液。
适合口服的水溶液的制备，包括将活性组分溶解于水中，如果需要加入适当的着色剂、香味剂、稳定剂和增稠剂。适合口服的水混悬液的制备，包括将精细粉碎的活性组分和粘性物质分散到水中，所述粘性物质是例如天然或合成的胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、和其他公知的助悬剂。
也包括在使用前即时转变成口服液体制剂的固体形式的制剂。这些液体形式包括溶液、混悬液、和乳剂。除了活性组分外，这些制剂包括着色剂、香味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然的增甜剂、分散剂、增稠剂、稳定剂等等。
药物制剂优选是单位剂型。在该剂型中，制剂细分成包含适当量活性组分的单位剂量。该单位剂型可以是包装的制剂，该包装包含离散的制剂，例如在玻璃瓶或安瓿中包装的片剂、胶囊和粉末。同样，单位剂量可以是其胶囊、片剂、扁胶囊、或锭剂，或者它可以是在这些包装形式中适当数量的任何上述剂型。
根据特定的应用和活性组分的效能，在单位剂量制剂中活性组分的量可以是各种各样的，或者可以从0.1mg到1000mg，优选1.0mg到100mg，或者是单位剂量1％到95％(w/w)。如果需要，该组合物也可以包含其他相容的治疗剂。
药学可接受的载体在一定程度上可以通过要施用的特定组合物、以及通过施用化合物的特定方法来确定。因此，就存在种类广泛的本发明的药物组合物的适当制剂(参见，例如Remington：The Scienceand Practice of Pharmacy，20th ed.，Gennaro等人Eds.，Lippincott Williams and Wilkins，2000)。
本发明的化合物，单独或与其他适当的组分组合，可以制成气雾剂制剂(即，它们可以“喷雾”)来经吸入施用。气雾剂制剂可以置入加压可接受的抛射剂中，例如二氯二氟甲烷、丙烷氮气等等。
适合胃肠外例如静脉、肌内、真皮内和皮下途径施用的制剂，包括水性和非水性的等渗无菌注射溶液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；和水性和非水性的无菌混悬液，其可以包含助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、和防腐剂。在实施本发明时，该组合物可以通过静脉输注、口服、局部、腹膜内、膀胱内或鞘内施用。化合物的制剂可以存在于单位剂量或多剂量的密封容器例如安瓿或玻璃瓶中。注射溶液或悬浮液也可以由上述种类的无菌粉末、颗粒和片剂来制备。
在本发明的上下文中，给患者施用的剂量应当足以随时间的变化在患者中产生有益的治疗反应。术语“患者”涉及哺乳类的一个成员。哺乳动物的例子包括但不限于，人、灵长类、猩猩、啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、马、家畜、狗、猫、羊、和牛。
可以通过所使用的特定化合物的效力、患者的情况、以及体重或患者要治疗的体表面积来确定剂量。剂量的大小也可以通过在特定患者中施用特定化合物时伴发的任何不利副作用的存在、性质和程度来确定。当确定施用于要治疗的病症的治疗或预防的化合物的有效量时，医生可以评价各种因素例如化合物的循环血浆水平、化合物的毒性、和/或疾病的进展等等。一般地，对于典型的患者，化合物的剂量当量是约1μg/kg到100mg/kg。许多不同的给药方法对于本领域技术人员都是已知的。
当施用时，本发明的化合物可以以由如下因素确定的速率来施用，这些因素可以包括但不限于，化合物的药代动力学曲线、禁忌的药物、在不同浓度时化合物的副作用，以适合患者的重量和整体健康。可以通过单或分份剂量来完成施用。
典型的片剂、胃肠外、和贴剂制剂的例子可以包括如下：
                   片剂制剂实施例1
                     片剂制剂
成分                                           量
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基       50mg
-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢
-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺，包含0.17％的残留有机溶剂
乳糖                                           80mg
玉蜀黍淀粉(用于混合)                           10mg
玉蜀黍淀粉(用于粘合)                            8mg
硬脂酸镁(1％)                                   2mg
                                              150mg
本发明的化合物(例如通式I的化合物，或其药学可接受的盐)可以与乳糖和玉蜀黍淀粉(用于混合)混合成均匀的粉末。将玉蜀黍淀粉(用于粘合)悬浮于6mL水中，加热搅拌形成糊剂。将该糊剂加入到混合好的粉末中，粒化该混合物。将该湿颗粒通过8号硬筛，在50℃干燥。用1％硬脂酸镁润滑该混合物，压制成片剂。以每天1到4片的频率将该片剂施用于患者，用于治疗IL-1介导的疾病(例如，类风湿性关节炎)。
             胃肠外给药用溶液制剂实施例1
在700mL丙二醇和200mL注射用水的溶液中，加入20.0g包含0.17％残留有机溶剂的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺。搅拌该混合物，用盐酸调节pH至5.5。用注射用水调节体积至1000mL。将该溶液灭菌，装入到5.0mL安瓿中，每支安瓿中包含2.0mL(40mg本发明的化合物)，在氮气下密封。通过注射将该溶液施用于患有IL-1介导的疾病(例如，类风湿性关节炎)和需要治疗的患者。
                  贴剂制剂实施例1
将10mg包含小于0.17％残留有机溶剂的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺与1mL丙二醇和含有树脂交联剂的2mg基于丙烯酸的聚合物粘合剂混合。将该混合物施用于不可渗透的背里(30cm2)并应用于患者的上背部，用于IL-1介导的疾病(例如，类风湿性关节炎)的持续释放治疗。
VII.治疗IL-1介导的疾病的方法
本发明的化合物、组合物和药物组合物可以施用于患有IL-1介导的疾病的患者。
用本发明的化合物可以预防性地、急性治疗地或长期地治疗IL-1介导的疾病，这取决于疾病的性质。典型地在这些方法的每一种中，宿主或患者是人，尽管其他哺乳动物也能从本发明的化合物的施用中受益。
当治疗性应用时，本发明的化合物可以制备成种类广泛的口服和胃肠外剂型，并施用。术语“施用”涉及使化合物和患者接触的方法。因此，本发明的化合物可以通过注射来施用，即，静脉内、肌内、皮内、皮下、十二指肠内、胃肠外、或腹膜内注射。同时，所述化合物业可以通过吸入施用，例如鼻内吸入。此外本发明的化合物可以经皮、局部、通过植入、经皮、局部、和通过植入施用。在一些实施方案中，本发明的化合物通过口服递送。该化合物也可以经直肠、颊、阴道内、眼、andially，或通过吹入来递送。
在本发明的药学方法中利用的化合物可以以初始剂量每天约0.001mg/kg到约100mg/kg施用。在一些实施方案中，每日剂量范围是约0.1mg/kg到约10mg/kg。但是，该剂量可以根据患者的需要、要治疗情况的严重度和所施用的化合物而不同。确定特定情况下的适当剂量在从业者的技术能力内。一般地，一般以小于化合物最佳剂量的小剂量开始治疗。然后，以较小的幅度增加剂量，直至在各种情况下达到最佳效果。为了方便，可以分割总的每日剂量，如果需要，在一天中分次来施用。术语“治疗”包括快速、长期或预防性地减轻或缓解与所治疗病症相关或由其导致的至少一种症状或特征。例如，治疗可以包括减轻病症的数种症状，抑制病症的病理学发展，或完全根除病症。本发明的化合物可以联合给药于患者。术语“联合给药”是指通过相同的药物组合物或分离的药物组合物的组合，给患者施用两种或更多种不同的的药物活性剂或治疗方式(例如，辐射治疗)。因此，联合给药包括在同一时间施用包含两种或更多种药物活性剂的单个药物组合物，或者在相同或不同时间给同一患者施用两种或更多种不同的组合物。例如，患者在早上8点施用了包含本发明化合物的第一剂量，然后在同一天的1到12小时后，例如晚上6点施用了第二治疗剂，那么就是用本发明的化合物和第二治疗剂联合给药于该患者。或者，例如患者在早上8点施用包含本发明的化合物和第二治疗剂的单一剂量，这也是用本发明的化合物和第二治疗剂联合给药。
因此，本发明的化合物可以与其他化合物联合给药，其中这些化合物可以用于治疗癌症(例如，细胞毒素类药物例如TAXOL_、泰索帝、GLEEVEC_(甲磺酸伊马替尼)、阿霉素、柔红霉素、顺铂、依托泊苷、长春花生物碱、长春碱、长春新碱、甲氨蝶呤、或阿霉素、柔红霉素、依托泊苷、和生物碱例如长春新碱、法尼基转移酶、内皮他丁和血管他丁、VEGF抑制剂、和抗代谢物例如甲氨蝶呤。本发明的化合物也可以用于与紫杉烷衍生物、铂配位络合物、核苷类似物、蒽环类抗生素、拓扑异构酶抑制剂或芳香酶抑制剂组合)。辐射治疗也可以与本发明的化合物联合给药来治疗癌症。
本发明的化合物可以与其他化合物联合给药，其中这些化合物可以用于治疗血栓疾病、心脏疾病、中风等等(例如，阿司匹林、链激酶、组织纤维蛋白溶酶原激活剂、抗凝血剂、抗血小板药(例如，PLAVIX_；氯吡格雷硫酸氢盐)、他汀类药物(例如，LIPITOR_(阿伐他汀钙)、ZOCOR_(辛伐他汀)、CRESTOR_(罗苏伐他汀)等)、β-阻滞剂(例如，阿替洛尔)、NORVASC_(阿罗地平磺酸盐)、和ACE抑制剂(例如，Accupril_(盐酸喹那普利)、赖诺普利等)。
本发明的化合物也可以与化合物例如ACE抑制剂、降脂剂例如他汀类药物、LIPITOR_(阿伐他汀钙)、钙通道阻滞剂例如NORVASC_(阿罗地平磺酸盐)联合给药用于治疗高血压。本发明的化合物也可以用于与纤维化剂、β-阻滞剂、NEPI抑制剂、血管紧张素-2受体拮抗剂和血小板聚集抑制剂组合。
当治疗炎性疾病，包括类风湿性关节炎时，本发明可以与下列试剂联合给药：例如TNF-α抑制剂例如抗-TNFα单克隆抗体(例如REMICADE_，CDP-870和HUMIRATM(阿达木单抗)和TNF受体-免疫球蛋白融合分子(例如ENBREL_)、RITUXAN_(利妥昔单抗)、IL-1抑制剂、受体拮抗剂或可溶的IL-1Rα(例如KINERETTM或ICE抑制剂)、IL-6单克隆抗体、IL-6受体单克隆抗体(例如，MRA(Chugai))、M-CSF单克隆抗体、非甾体抗炎药(NSAIDS)、吡罗昔康、双氯芬酸、萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬、布洛芬、芬那酯类、甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗、吡唑酮、保泰松、阿司匹林、COX-2抑制剂(例如，CELEBREX_(塞来考昔)、VIOXX_(罗非考昔)、BEXTRA_(伐地考昔)和艾托考昔)、金属蛋白酶抑制剂(优选MMP-13选择性抑制剂)、NEUROTIN_、普加巴林、低剂量甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶、来服米特、羟基氯喹、d-青霉胺、金诺芬或胃肠外或口服的含金物。
本发明的化合物可以与已存在的治疗剂联合给药来治疗骨关节炎。在该组合中使用的适当试剂包括标准非甾体抗炎药(下作NSAID’s)例如吡罗昔康、双氯芬酸；丙酸例如萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬；芬那酯类例如甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗；吡唑酮例如保泰松；水杨酸类例如阿司匹林；COX-2抑制剂例如(塞来考昔)、罗非考昔、伐地考昔和艾托考昔；镇痛药和关节内治疗剂例如皮质类固醇；和玻璃酸例如海尔根和欣维可(synvisc)。
本发明的化合物也可以与抗病毒剂例如奈非那韦、AZT、阿昔洛韦和泛昔洛韦，和防腐化合物例如Valant联合给药。
此外，本发明的化合物可以与下列试剂联合给药：CNS剂例如抗抑郁药(例如舍曲林)、抗帕金森病药(例如司来吉兰、左旋多巴、Requip、Mirapex、MAOB抑制剂例如selegine和雷沙吉兰、comP抑制剂例如托卡朋、A-2抑制剂、多巴胺再摄取抑制剂、NMDA拮抗剂、尼古丁激动剂、多巴胺激动剂和神经一氧化氮合酶抑制剂)、NEURONTIN_、普加巴林、和康阿尔茨海默病药例如ARICEPT_、他克林、丙戊茶碱或美曲磷酯。
此外本发明的化合物可以与下列试剂联合给药：骨质疏松剂例如EVISTA_(盐酸雷洛昔芬)、屈洛昔芬、拉索昔芬或FOSAMAX_和免疫抑制剂例如FK-506和雷帕霉素。
                      具体实施方式
应当理解，本文所述的实施例和实施方案仅仅是用于解释说明的目的，这将启发本领域的技术人员根据其进行各种变更或变化，而这些变更或变化都在本申请的精神和范围内，并在所附的权利要求的范围内。为了所有的目的，在本文中引用的全部出版物、专利、和专利申请都通过参考以它们的整体引入本文。
中间体1.2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基甲基)-苯甲酰胺
向200L玻璃衬里的反应器中加入7.50kg 2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-苯甲酸和72L二氯甲烷，然后在20-22℃下搅拌。向该混悬液中加入3.75L草酰氯，历时5分钟，然后加入75ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。然后在过滤器上分离所得到的酰基氯(2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-苯甲酰氯)，用异丙醚洗涤，用氮气吹干。当酰基氯在过滤器上干燥时，将4.03kg 1-氨基甲基-环庚醇HCl，2.31kg氢氧化钠和52.5L水加入到200L反应器中，搅拌直至形成均匀的溶液。然后把酰基氯加入到该溶液中，在20-22℃搅拌4小时，在该时间HPLC分析表明反应完成。然后用6N HCl将反应混合物调节至pH 3，然后在过滤器上分离粗中间体1(2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基甲基)-苯甲酰胺)。用水洗涤反应器和过滤器，吹干粗中间体1。然后重结晶该中间体1，包括将在过滤器上的该物质溶解在75L甲醇中，加热到70℃，加入37.5L水，冷却至20℃。搅拌12小时后，在过滤器上分离中间体1，用水∶甲醇(2∶1)溶液洗涤，在真空干燥器中干燥48小时。分离得到8.0kg中间体1(73％收率)。用d6-DMSO作为溶剂，在Varian 400MHz光谱仪上进行1H NMR光谱分析。1H NMR δ12.37(s，1H)，8.32-8.34(t，1H)，7.65(s，1H)，7.53-7.59(m，3H)4.24(s，1H)，3.32(s，1H)，2.49-3.20(d，1H)，2.48(m，2H)，1.33-1.63(m，10H).MS：393.1(M+1)。
实施例1.2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺。
向200L玻璃衬里的反应器中加入DMF 9.6L和硅胶4.12kg，搅拌半小时，得到的混合物呈浆体状。然后加入中间体1(2.75kg，7摩尔)，在搅拌半小时后混合物变成了溶液。然后滴加R-(-)-缩水甘油基甲醚(954g，10.5摩尔)，同时将反应器的温度加热到80℃16小时。在HPLC分析表明反应完成后，将反应器冷却至25℃，加入乙酸乙酯82.5L来沉淀硅胶。然后滤去硅胶，用14L饱和碳酸氢钠溶液连续萃取乙酸乙酯层3次，然后用14L水萃取一次。在大气压下在76-78℃浓缩乙酸乙酯层至大约14L，然后用2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺作为晶种来开始结晶。在过滤器上分离2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺，在周末期间在真空干燥器中干燥，得到2.5kg产物，74％收率。1H & 13CNMR光谱，481.4(M+1)的质谱，以及HPLC-UV都与2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的结构符合。
实施例2.在试管中混合中间体1(1g，2.5mmol)、DMF(3ml，3vol)、(R)-(-)-缩水甘油基甲醚(230mg，，2.6mmol，1.05当量)、和三氟化硼二乙醚合物(3.6mg，0.025mmol，0.1mol％)，在氮气下加热到80℃ 16小时。在ZORBAX_SB-CN柱(0.2％磷酸在水∶乙腈(1∶1)中)上进行的HPLC-UV分析大致表明，中间体1和产物2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的比例大约是9∶1。
实施例3.向200L玻璃衬里的反应器中加入4.3kg在实施例1中合成的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺，然后加入乙酸乙酯(130L)。然后将反应器加热到78℃，使2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺进入溶液中。然后冷却反应器至25℃并用水(21.5L)萃取。然后将乙酸乙酯层转移到55加仑的圆筒中。乙酸乙酯层通过在管线中的滤器转移回200L反应器中，在大气压下浓缩至约20L。
取其一部分，然后置于圆底烧瓶中，通过用金属杆摩擦来开始结晶。过滤混合物，真空干燥得到晶种物质。将晶种物质加回到反应器中，搅拌数小时后，在0℃观测到粘稠的浆体。然后真空下向反应器中一次性加入正己烷(8.6L)，在-10℃下搅拌过夜。在过滤器上分离该物质，然后在周末期间在真空烘箱中干燥。GC-顶空分析表明，该物质包含2.6％的残留乙酸乙酯。用差示扫描量热法(见下文)确定该物质的初始熔点是106.5℃。
在这些实施例中确定了GC-顶部空间，包括使用Agilent GC 6850Model G2630A，Hewlett Packard顶空自动采样器7694和DB642，DB-624，30m×0.32mm I.D.熔凝硅石，1.8μm薄膜柱。所使用方法具有的烘箱温度程序是：40°(5分钟)，然后以2℃/分钟加热到46℃，然后以25℃/分钟加热到225℃，并在225℃保持2分钟。注射器在180℃。柱气流是流速约8.5psi或1.6ml/分钟的氮气。分流是约47ml/分钟。分流比是约30∶l。使用在250℃下的FID检测器。
实施例4.向50L玻璃衬里的反应器中加入2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺(3.9kg)(来自实施例3)和丙酮(11.7L)。然后将反应器加热到55℃，使2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺进入溶液。然后在4小时的时间里将反应器冷却到20℃，通过向反应器中加入2g晶种2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺来诱导结晶。在20℃搅拌过夜后，观测到粘稠的浆体。过滤样品，然后真空干燥。GC-顶空分析表明有0.21％残留的丙酮(实施例4，样品A)。
然后通过在管线中的滤器向压力槽中加入正庚烷(24L)，在4小时的时间里加入到50L反应器。在20℃让混合物结晶过夜。过滤样品然后真空干燥。GC-顶空分析表明有0.18％残留的丙酮(实施例4，样品B)。在过滤器上分离该物质，然后用氮气吹干过夜，然后在周末期间在真空烘箱中(40-50℃)干燥。GC-顶空分析表明有0.17％残留的丙酮(实施例4，样品C)。
然后将该物质在真空烘箱中(40-50℃)再干燥约5.5小时，得到实施例4，样品D。
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的差示扫描量热法
在Mettler-Toledo 822e差示扫描量热计上对实施例4，样品A；实施例4，样品B；实施例4，样品C；和实施例4，样品D进行差示扫描量热法(DSC)。该方法使用1-5mg样品铝40μl盘，开始温度是30℃，最终温度是300℃。加热速率是5℃/分钟。采样间隔是1秒。氮气流速是60ml/分钟。实施例4，样品D的DSC热学图谱如附图1所示。检测到开始熔化的温度在约110.5℃。实施例4，样品A；实施例4，样品B；和实施例4，样品C的开始熔化温度在表2中报告。
            表2
  样品   DSC mp
  实施例4，样品A   111.3℃
  实施例4，样品B   111.4℃
  实施例4，样品C   111.3℃
  实施例4，样品D   110.5℃
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺，实施例4，样品D的固态13C-NMR
将约70mg实施例4，样品D紧密地装入4mm ZrO自旋器中用于样品分析。在环境压力下，在放置到wide-bore Bruker-BiospinAvance DSX 500MHz NMR波谱仪中的Bruker 4mm BL CPMAS探针上，用1H-13C交叉极化幻角自旋技术(CPMAS)在293K收集一维的13C谱。样品以15.0kHz自旋，这与4mm自旋器的最大指定自旋速度一致。快速的自旋速度使得自旋旁带的强度最小化。为了优化信号灵敏度，将交叉极化接触时间调整到2.3ms，将解耦功率设置为85kHz。用具有10秒再循环延迟的5,940次扫描得到碳谱。用金刚烷外标样品作为参照，设置其高磁场共振为29.5ppm。
所得到的实施例4，样品D物质的13C CPMAS谱如附图2所示。碳峰表在表3中给出。请注意，表3中碳峰的数量与2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺分子(结构1)中的碳原子数并不相符。在该分子中的一些碳显示了2个13C峰，这与在单晶体结构中观察到的每个不对称单元的不同构型相吻合。
                        结构1
Figure A20058002184000561
表3
  峰  13C位移(ppm)   强度(任意单位)   峰  13C位移(ppm)   强度(任意单位)
  1   169.8   6.22   18   66.9   2.42
  2   156.8   9.11   19   65.1   3.55
  3   149.3   2.83   20   60.4   5.82
  4   148.4   2.77   21   57.2   5.19
  5   140.6   4.38   22   53.4   3.14
  6   139.7   4.56   23   50.4   0.13
  7   138.7   9.47   24   43.9   1.85
  8   136.9   3.13   25   40.0   1.76
  9   132.2   4.5   26   38.2   6.84
  10   131.9   4.49   27   37.3   5.47
  11   130.8   5.5   28   36.6   2.7
  12   129.5   3.7   29   31.4   3.11
  13   128.7   3.55   30   29.3   5.2
  14   126.5   2.71   31   23.2   4.48
  15   125.2   2.6   32   22.7   3.96
  16   74.0   12   33   20.4   3.04
  17   73.1   3.68   34   19.2   1.06
2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺(实施例4，样品D)的粉末X-射线衍射(PXRD)分析
用Bruker D5000衍射仪来收集X-射线衍射图，所述衍射仪配有CuKα((小焦点X-射线管)辐射源(发电机：40kV，30mA)，固定缝(辐射缝：1mm；散射缝：1mm；接受缝：0.6mm)，和Kevex PSI或Sol-X固态检测器。用0.04度的间隔和1.0秒的间隔时间在从3.0度到40.0度的2θ收集数据。扫描方式为连续性。2-θ值记录在表4中。
                    表4
                峰表(2-θ±0.2)
         (根据粒度和形态，峰强度可以变化)
  2-θ角°   强度％   2-θ角°   强度％
  7.8   11   23.3   13.1
  8.1   100   23.9   9.8
  10.5   10.3   24.3   14.5
  11.7   21.3   24.6   7.6
  13.2   5.2   25.1   9.9
  13.7   8.1   25.9   9.2
  14.3   5.7   26.2   12.7
  14.9   21.6   27.1   30.9
  15.6   5.2   27.6   9.6
  16.4   86.9   28.2   5.2
  17.3   17.5   28.7   4.9
  17.7   17.3   28.8   4.9
  18.3   19   29.4   6.4
  18.9   9.2   30.0   10.2
  19.1   9.9   30.3   14
  19.7   85.9   30.9   7.9
  20.3   9.5   31.1   7.7
  20.9   8.8   31.9   6.2
  21.2   33.3   33.4   5.9
  21.6   24   33.8   6.4
  22.2   33.8   34.3   7.5
  22.6   17.6   35.2   8.9
  22.8   6.7   37.1   6.2
实施例4，样品A；实施例4，样品B；和实施例4，样品C的X-射线衍射图与实施例4，样品D的衍射图一致。
实施例5-13
实施例5-13的起始物质来自实施例3。实施例5-13的X-射线衍射图与实施例4，样品D的衍射图一致。
实施例5
在125℃将5g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺加入到50ml乙酸正丁酯中，然后浓缩到25ml，过滤所得到的固体物质并在真空干燥器中干燥。
实施例6
在70℃将5g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺加入到25ml甲基乙基酮(MEK)。加入25ml正己烷，滤出所得到得固体物质并在真空干燥器中干燥。
实施例7
将19g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺通过手筛，并在真空干燥器中干燥。
实施例8
在50℃将15.5g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺加入到75ml甲醇中。然后冷却该溶液至环境温度，加入75ml水形成油，24小时后转变成固体。滤出该固体并在真空干燥器中干燥。
实施例9
将1g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在10ml正庚烷中加热到60℃4小时。然后冷却混合物至环境温度，过滤该固体并在真空干燥器中干燥。
实施例10
将1g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在10ml二异丙醚中加热到60℃ 4小时。然后冷却混合物至环境温度，过滤该固体并在真空干燥器中干燥。
实施例11
将10g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在100ml二异丙醚中加热到60℃ 4小时。然后冷却混合物至环境温度，过滤该固体并在真空干燥器中干燥。
实施例12
将10g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺在1000ml正庚烷中加热到60℃ 4小时。然后冷却混合物至环境温度，过滤该固体并在真空干燥器中干燥。
实施例13
在50℃将10g 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺加入到30ml丙酮中。然后冷却该溶液至环境温度，加入60ml正庚烷。滤出该固体并在真空干燥器中干燥。
实施例15
将50mg 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺溶解于1mL丙酮、四氢呋喃或甲基乙基酮中。短暂加热该溶液以确保溶解。在25℃向该溶液中加入2.5mL二异丙醚以得到晶状固体，其具有与实施例4样品D相一致的X-射线衍射图。
实施例16
将50mg 2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺溶解于1mL丙酮、四氢呋喃或甲基乙基酮中。短暂加热该溶液以确保溶解。在25℃将该溶液加入到2.5mL二异丙醚中以得到晶状固体，其具有与实施例4样品D相一致的X-射线衍射图。
实施例17.2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺
Figure A20058002184000601
将2.25kg(1.00当量)2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基-甲基)-苯甲酰胺，0.780kg(1.5当量)R-缩水甘油基甲醚和3.38kg硅胶(JT Baker Lot No.X46590)在6.75L N，N-二甲基甲酰胺中混合，并加热到80℃。冷却该反应混合物，加入76.5L(68.1kg)乙酸乙酯以沉淀出硅胶，然后将其滤除。然后用饱和碳酸氢钠(4.50kg/2.9L)洗涤乙酸乙酯相，以除去残留的2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基-甲基)-苯甲酰胺，然后浓缩乙酸乙酯层至较小体积。从乙酸乙酯相中结晶出2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺并过滤分离。
分离所得到的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的样品，并干燥。如实施例4所述，用GC顶空分析来测定残留的溶剂，得到经鉴定的下列的残留溶剂浓度。
  甲醇   乙醇   丙酮   乙酸乙酯   正庚烷   2-甲氧基甲基-环氧乙烷
  -   -   0.2％   ＜0.01％   0.01％   ＜0.01％-ND
ND为未探测到。

Claims (15)

1.一种制备通式I的化合物或其药学可接受的盐的方法，
其中R1是(C1-C6)烷基，任选被(C3-C8)环烷基、苯基、萘基、5或6-元杂环烷基、或5-或6-元杂芳基取代，其中每个所述的(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、苯基、萘基、5或6-元杂环烷基、或5-或6-元杂芳基任选被1到3个独立地选自羟基、卤素、CN-、(C1-C6)烷基、HO(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-NH(C＝O)-、NH2(C＝O)-、(C1-C6)烷氧基、或(C3-C8)环烷基的基团所取代；
R2是氢、卤素、-CN、或(C1-C6)烷基，其中所述(C1-C6)烷基任选被1到3个独立地选自卤素、羟基、氨基、-CN、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、-CF3、CF3O-、(C1-C6)烷基-NH-、[(C1-C6)烷基]2-N-、(C1-C6)烷基-S-、(C1-C6)烷基-(S＝O)-、(C1-C6)烷基-(SO2)-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、甲酰基、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、和(C3-C6)环烷基的基团所取代；
其中R4独立地选自
氢、卤素、羟基、-CN、HO-(C1-C6)烷基、任选被1-3个氟取代的(C1-C6)烷基、任选被1-3个氟取代的(C1-C6)烷氧基、HO2C-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、R5R6N(O2S)-、(C1-C6)烷基-(O2S)-NH-、(C1-C6)烷基-O2S-[(C1-C6)烷基-N]-、R5R6N(C＝O)-、R5R6N(CH2)m-、苯基、萘基、(C3-C8)环烷基、5-或6-元杂芳基，5或6-元杂环烷基、苯基-O-，萘基-O-，(C3-C8)环烷基-O-、5-或6-元杂芳氧基和5或6-元杂环烷基-O-；和
R7是-CH2-C(R10R11)-OH，其中R10和R11独立地选自：
氢、苯基、和任选被1-3个卤素取代的(C1-C6)烷基、羟基、-CN、(C1-C6)烷氧基-、((C1-C6)烷基)n-N-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、(C3-C8)环烷基-(C＝O)-、5或6-元杂环烷基-(C＝O)-、苯基-(C＝O)-、萘基-(C＝O)-、5-或6-元杂芳基-(C＝O)-、(C1-C6)烷基-(C＝O)O-、(C1-C6)烷基-O(C＝O)-、(C3-C8)环烷基、苯基、萘基、5或6-元杂环烷基、和5-或6-元杂芳基；
R5和R6各自独立地选自氢、(C1-C6)烷基、HO-(C2-C6)烷基和(C3-C8)环烷基，或者R5和R6可以任选与氮原子连接在一起，形成5或6-元杂环烷基；
n是1或2；和
m是1或2；
其中所述方法包括将通式II的化合物
与通式VIII的化合物
Figure A2005800218400003C2
在至少一种路易斯酸存在下反应。
2.权利要求1的方法，其中所述路易斯酸选自
(a)三氟化硼二乙醚合物；
(b)Al2O3、Ti(O-Pri)4、LiClO4、或Zn(OAc)2；
(c)Eu(OTf)3、Dy(OTf)3、Ho(OTf)3、Er(OTf)3、Lu(OTf)3、Yb(OTf)3、Nd(OTf)3、Gd(OTf)3、Lu(OTf)3、La(OTf)3、Pr(OTf)3、Tm(OTf)3、Sc(OTf)3、Sm(OTf)3、AgOTf、或Y(OTf)3；
(d)AlCl3、AlI3、AlF3、AlBr3、AsCl3、AsI3、AsF3、AsBr3、BCl3、BBr3、BI3、BF3、FeCl3、FeBr3、FeI3、FeF3、FeCl2、FeBr2、FeI2、FeF2、GaCl3、GaI3、GaF3、GaBr3、MgCl2、MgI2、MgF2、MgBr2、NbCl5、SbCl3、SbI3、SbF3、SbBr3、SbCl5、SbI5、SbF5、SbBr5、SnCl2、SnI2、SnF2、SnBr2、SnCl4、SnI4、SnF4、SnBr4、TiBr4、TiCl2、TiCl3、TiCl4、TiF3、TiF4、TiI4、ZnCl2、ZnI2、ZnF2、或ZnBr2；
(e)BF3BCl3·SMe2、BI3·SMe2、BF3·SMe2、BBr3·SMe2、BF3·OEt2、Et2AlCl、EtAlCl2、MgCl2·OEt2、MgI2·OEt2、MgF2·OEt2、MgBr2·OEt2、Et2AlCl、EtAlCl2、或Zn(OAc)2；和
(f)(CH3CO2)2Co、CoBr2、CoCl2、CoF2、CoI2、Co(NO3)2、三氟甲磺酸钴(II)、甲苯磺酸钴(II)、(CH3CO2)2Cu、CuBr2、CuCl2、CuF2、CuI2、Cu(NO3)2、三氟甲磺酸铜(II)、甲苯磺酸铜(II)、(CH3CO2)2Ni、NiBr2、NiCl2、NiF2、NiI2、Ni(NO3)2、三氟甲磺酸镍(II)、或甲苯磺酸镍(II)。
3.权利要求1的方法，其中所述路易斯酸是硅胶。
4.权利要求3的方法，其中所述通式VIII的化合物是(R)-(-)-缩水甘油基甲醚。
5.权利要求3的方法，其中所述通式II的化合物是2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基甲基)-苯甲酰胺。
6.权利要求3的方法，其中所述通式I的化合物是2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺。
7.权利要求1的方法，其中R1是(C1-C4)烷基，任选被(C3-C8)环烷基取代；其中所述(C1-C4)烷基或(C3-C8)环烷基任选被1到3个独立地选自羟基、卤素、CN-、(C1-C6)烷基、HO(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-NH(C＝O)-、NH2(C＝O)-、(C1-C6)烷氧基、或(C3-C8)环烷基的基团所取代。
8.权利要求7的方法，其中R2是氯、甲基或乙基。
9.权利要求8的方法，其中R4是氢并且R7是-CH2-C(R10R11)-OH，其中R10和R11独立地选自：氢和任选被(C1-C6)烷氧基-或-OH取代的(C1-C6)烷基。
10.权利要求9的方法，其中R4是氢并且R7选自：
Figure A2005800218400005C1
11.一种制备2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的方法，其中所述方法包括将2-氯-5-(3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基)-N-(1-羟基-环庚基甲基)-苯甲酰胺与(R)-(-)-缩水甘油基甲醚在至少一种路易斯酸存在下反应。
12.一种2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的组合物，包含：
晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺；和
小于2.5％的残留有机溶剂。
13.一种制备含有小于2.5％的残留有机溶剂的晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的组合物的方法，包括：
(a)将正庚烷与包含2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的丙酮溶液混合，以产生2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体；和
(b)分离含有小于2.5％(w/w)的残留有机溶剂的2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺的晶体。
14.一种治疗患有疾病的患者的方法，其中所述疾病选自类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎、牛皮癣、炎性疾病、和自身免疫性疾病，该方法包括：
施用治疗有效量的含有小于2.5％的残留有机溶剂的晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺。
15.一种药物组合物，包含：
治疗有效量的含有小于2.5％的残留有机溶剂的晶体2-氯-N-(1-羟基-环庚基甲基)-5-[4-(2R-羟基-3-甲氧基-丙基)-3，5-二氧-4，5-二氢-3H-[1，2，4]三嗪-2-基]-苯甲酰胺，其与至少一种药学可接受的载体。
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