CN1950103B - 生长激素c端片段在制造药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及预防或治疗哺乳动物骨疾病的方法,该方法包括给予哺乳动物治疗有效量的肽,所述的肽能调节脂质代谢,但对胰岛素样生长因子-1(IGF-1)却没有可评估的效应。
Description
本发明涉及骨疾病的预防或治疗方法以及这些方法中所用的化合物。更具体涉及以骨代谢改变为特征的骨疾病的预防或治疗方法,其中包括骨质疏松如绝经后骨质疏松、骨量减少、佩吉特病、癌症患者的溶骨性转移、肝病的骨营养不良(osteodistrophy)以及由肾衰竭或血液透析、骨折、骨手术、衰老、怀孕和营养不良导致的骨代谢改变。
发明背景
本说明书所引用的所有参考文献,包括所有专利或专利申请,都已纳入本文作为参考,以便于全面地理解本发明。但是,引用这些参考文献不能被认为是承认这些参考文献成为了本领域常识的一部分,无论是在澳大利亚还是在其他任何国家。参考文献的讨论部分陈述了文献作者的意见,本发明的申请者有权质疑被引用文献的准确性和适当性。
骨是不断更新的活组织。骨包含细胞和特异性的胶原纤维,外包晶体矿物质。矿物质、细胞和纤维一起形成有机基质或“类骨质”。
骨不断地经历骨形成和骨吸收,前者由成骨细胞完成,后者由破骨细胞完成。如果血钙水平降低,则骨吸收增加以满足身体其他部位的钙需求。
骨代谢改变的特征是骨形成和骨吸收之间的平衡被打破。其发生可能与几类疾病有关。这类疾病的例子有骨质疏松、骨量减少、佩吉特病、癌症患者的溶骨性转移、肝病的骨营养不良以及由肾衰竭或血液透析、骨折、骨手术、衰老、怀孕和营养不良导致的骨代谢改变。
骨丢失随衰老过程而加速。老年人群中的主要骨疾病是骨质疏松。这种疾病的特征是广泛的骨丢失,导致骨的脆性增加,骨折的风险增大。这种疾病导致了相当多的人出现疼痛、丧失劳动能力、损形和丧失独立性,耗费巨大,是医疗卫生事业的沉重负担。在全球范围内,每年有超过150万的人因骨质疏松而骨折。
现在已知有两种类型的骨质疏松。第一类通常发生在50到75岁之间,女性(绝经后骨质疏松)的发病率是男性的6倍。第二类被称为老年性骨质疏松,对75岁以上的男性和女性都有影响,与正常骨丢失加速无关。两类骨质疏松的危险因素是高咖啡因摄入、喝酒、体重过低和钙摄入少。
绝经后骨质疏松最主要的已知原因是雌激素缺乏。绝经以后,卵巢停止分泌这种激素,这与骨矿物质含量下降直接相关。大家所熟知的绝经后症状,包括骨质疏松,的治疗方法是激素替代疗法(HRT),这种雌激素替代疗法可有效地预防骨质疏松。但是,HRT有严重的副作用,如,乳腺组织生长刺激,因此需要寻找其他的绝经后骨质疏松治疗方法
其他类型骨疾病的主要原因还有待确定,治疗这类疾病的方法也是我们需要的。
本发明的一个优选实施方式的目的在于提供预防或治疗骨疾病的方法,以及这类方法中所用的组合物。
发明概述
本发明的第一个方面提供了预防或治疗哺乳动物骨疾病的方法,该方法包括给予哺乳动物治疗有效量的肽,所述的肽能调节脂质代谢,对胰岛素样生长因子-1(IGF-1)却没有可评估的效应。
在Monash University的澳大利亚专利No.693478中,我们描述了使用肽控制肥胖症的方法,所述的肽来源于人生长激素的羧基端序列或其他哺乳动物生长激素的相应区域。生长激素的这个区域能够调节脂质代谢。更特别的是,研究发现人生长激素氨基酸残基177-191(在下文中称之为hGH 177-191)相应的合成肽能够抑制肥胖症模型系统C57B1/6J(Ob/Ob)小鼠的体重增加和脂肪组织增多。在在后申请,Metabolic Pharmaceuticals Ltd的PCT/AU98/00724中,公开了也有这种活性的hGH177-191肽的类似物。AU693478和PCT/AU98/00724的完整公开内容已纳入本文作为参考。
我们的申请PCT/AU00/01362(WO01/33977)公开了这类肽令人惊奇的口服活性。
利用绝经后骨质疏松的老化大鼠模型研究了AOD9604(Tyr-hGH 177-191)对骨骼的效应。由于在我们较早的申请中所描述的人生长激素的C端片段相应的肽没有正常全长生长激素的正常生长效应,对IGF-1(介导人生长激素的生长效应)也没有效应,因此我们估计这个肽对骨代谢也没有效应。但令人惊奇的是,我们在两个试验中发现AOD9604对骨生长有效应,并且其预防骨丢失的效应比雌激素还要高。
因此,本发明的发明者认识到人生长激素C端片段相应的肽(AOD9604)对骨代谢有效应。因而发明者提出,在以前的试验中显示有调节脂质代谢能力的人生长激素 的所有C端片段可能都和AOD9604具有一样的骨代谢影响效应。相应的,发明者认为在以前的试验中显示有调节脂质代谢能力但不影响IGF-1的所有肽都可用于治疗或预防骨代谢。
本发明的第二方面提供了有调节脂质代谢的能力但对IGF-1没有可评估的效应的肽在制造用于治疗或预防骨疾病的药物中的应用。
在第三方面,本发明提供了用于预防或治疗骨疾病的药物制剂,所述制剂包含有调节脂质代谢能力但对IGF-1没有可评估的效应的肽以及药用载体。
第三方面所述的制剂还包含一种或多种治疗或预防骨疾病的药物。
可用第一方面所述方法或第二方面所述药物治疗的骨疾病包括以骨代谢改变为特征的那些疾病。
骨疾病可以包括骨质疏松如绝经后骨质疏松、骨量减少、佩吉特病、癌症患者的溶骨性转移、肝病的骨营养不良以及由肾衰竭或血液透析、骨折、骨手术、衰老、怀孕和营养不良导致的骨代谢改变。
本发明特别适用于治疗或预防绝经后骨质疏松。
附图说明
图1:成骨细胞增殖试验所得到的AOD9604浓度对原代成骨细胞培养物中胸苷掺入量的柱状图。
图2:实施例2的试验设计概述和时间线。
图3:按照实施例2的描述进行治疗12周后所有治疗组的骨矿物质密度(BMD),a)腰椎(L4+L5),b)股骨。
图4:实验性卵巢切除模型a)腰椎(L4+L5)和b)股骨的骨矿物质密度。(**显著性设定在p<0.05,***趋势设定在p<0.1)。
图5:比较OVX对照组和药物治疗组a)腰椎(L4+L5)(OVX到LAOD 0.075,0.05)和b)股骨(0.1,0.01)的BMD(*显著性设定在p<0.01,**显著性设定在p<0.05,*** 趋势设定在p<0.1)。
图6:比较各治疗组所得到的右股骨三点弯曲试验结果。A)极限应力,B)破坏应变(*表示显著性在p<0.01。**表示显著性在p<0.05)。
图7:比较各治疗组所得到的右股骨三点弯曲试验结果。A)标准化的破坏能量,B)弹性模量(*表示显著性在p<0.01。**表示显著性在p<0.05)。
图8:比较各治疗组L5的脊椎压缩试验结果。A)标准化的破坏能量,B)弹性模 量(**表示显著性在p<0.05)。
图9:股骨颈的机械特性。A)极限载荷(N),B)破坏形变(mm)。*代表显著性在p<0.01,**代表显著性在p<0.05,***代表趋势在p<0.1。
图10:股骨颈的机械特性。A)破坏能量(mJ),B)刚性(MPa)。*代表显著性在p<0.01,**代表显著性在p<0.05,***代表趋势在p<0.1。
发明详述
有调节脂质代谢能力但对IGF-1没有可评估的效应的肽与生长激素的C端氨基酸序列尤其相似。这种肽被称为“生长激素C端片段”。在本说明书中,术语“生长激素C端片段”应被理解为哺乳动物生长激素氨基酸序列的羧基端区域来源的肽片段,该片段能够降低脂肪生成(lipogenic)活性;和/或刺激脂解作用。
本文所用的术语“肽”是指长度为2到50个氨基酸残基的任何氨基酸链,优选的是长度为2到20个氨基酸残基,更优选的是长度约为15个氨基酸残基。因此,本文所用的术语“肽”也包括多肽,二者可交互使用。只有一个前提条件就是本发明所使用的所有肽都不包含全长序列的人生长激素或其来源于其他物种的类似物。全长的生长激素能够调节脂质代谢,并且也能调节IGF-1。因此,全长生长激素不包括在本发明所使用的肽的范围之内。
本发明所使用的肽优选能够刺激激素敏感性脂肪酶的活性,该酶是脂解作用的关键酶,并且能够抑制乙酰辅酶A羧化酶的活性,该酶是脂肪生成的关键酶。
本发明所使用的肽优选至少包含哺乳动物生长激素的二硫键环。
术语“生长激素片段”还包括哺乳动物生长激素天然羧基端序列的功能性类似物,其中所述的类似肽能够调节脂质代谢但对IGF-1没有可评估的效应。这种类似物可来源于天然来源、通过重组DNA技术制备、或者利用常规的肽合成方法合成。这些肽合成方法应当被理解为包括组合方法。优选的这种类似物包含二硫键,二硫键可使肽具有环状构型。特别是AU693478和PCT/AU98/00724所描述的肽都应当被理解为包含在本发明的范围之内,例如:
参考编号 结构
9502 Leu Arg Ile Val Gln Pen Arg Ser Val Glu Gly Ser Pen Gly Phe SEQ ID NO:1
9405 CH3CO-Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID
NO:2
9410 H-Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID
NO:3
9404 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Vdl Glu Gly Ser Cys Gly Phe-CONH2 SEQ ID
NO:4
9407 Leu Arg Ile Val Gln Cys Lys Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:5
9408 Leu Arg Ile Val Gln Cys Lvs Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:6
(酰胺键)
9604 Tyr Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:7
9605 Lys Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:8
9618 Lys Lys Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID
NO:9
9607 Ala Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:10
9606 Leu Lys Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:11
9608 Leu Arg Ala Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:12
9403 Leu Arg Lys Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:13
9609 Leu Arg Ile Ala Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:14
9610 Leu Arg Ile Val Ala Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:15
9612 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ala Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:16
9613 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Ala Glu Gly Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:17
9615 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Ala Ser Cys Gly Phe SEQ ID NO:18
9616 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ala Cys Gly Phe SEQ ID NO:19
9602 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Vdl Glu Gly Ser Cys Ala Phe SEQ ID NO:20
9501 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu D-Ala Ser Cys D-Ala Phe SEQ ID
NO:21
9601 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Ala SEQ ID NO:22
其中的氨基酸残基缩写与标准的肽命名法一致:
Gly=甘氨酸;Ile=异亮氨酸;
Glu=谷氨酸;Phe=苯丙氨酸;
Cys=半胱氨酸;Arg=精氨酸;Gln=谷氨酰胺;
Leu=亮氨酸;Ser=丝氨酸;Val=缬氨酸;
Lys=赖氨酸;Ala=丙氨酸;
AsD=天冬氨酸;His=组氨酸;
Om=鸟氨酸;Tyr=酪氨酸;
Pen=青霉胺(p,p′-二甲基-半胱氨酸)。
除了甘氨酸以外,如果没有说明是D-绝对构型,所有的氨基酸都是L-绝对构型。
上述所有肽在Cys(182)和Cys(189)之间或Pen(182)和Pen(189)之间都有合适的环形二硫键。
优选的肽包含人生长激素的氨基酸182-189(hGH 182-189),更优选的包含人生长激素的氨基酸177-191(hGH 177-191)。更优选的是人生长激素类似物AOD9604(Tyr-hGH 177-191)。但是,应当清醒地认识到本发明也适用于其他哺乳动物物种来源的生长激素的氨基酸序列相应的肽,其中包括而不限于家畜如牛、羊、猪和马的生长激素,宠物如猫和狗的生长激素,以及动物园动物包括猫科动物、犬科动物和非人灵长类动物的生长激素。生长激素这个区的序列在不同物种之间高度保守,如PCT/AU98/00724及其所引用的参考文献所描述的。
肽还可以连接到融合伴侣上使其更容易生物合成和/或转运。还可以掺入到药物组合物中,或者存在于基因修饰食品中,如WO 01/33997所描述。
肽可以和药用载体混合形成药物组合物来给药。
肽可以通过任何合适的途径给药,本领域的技术人员根据所要治疗的疾病可以很容易地确定最合适的给药途径和给药剂量。肽可以包含常规的非毒性药用载体、佐剂和载体的剂量单位制剂形式通过口服、舌下含服、口腔含服、鼻内、吸入、透皮、局部或胃肠外途径给药。本文所用的术语胃肠外途径包括皮下、静脉、肌内、鞘内、颅内注射或输注技术。
给药剂量可由巡诊医生或兽医根据所治疗疾病的性质和状况、患者的年龄及健康状况、给药途径及以前采取的治疗措施来判断。给药间隔时间可以是每周一次、每天一次或连续给药。
优选的治疗对象是患有以骨代谢改变为特征的骨疾病的哺乳动物,如骨质疏松如绝经后骨质疏松、骨量减少、佩吉特病、癌症患者的溶骨性转移、肝病的骨营养不良以及由肾衰竭或血液透析、骨折、骨手术、衰老、怀孕和营养不良导致的骨代谢改变。哺乳动物也可以是生长激素缺乏的哺乳动物。
哺乳动物可以是人,也可以是家畜或宠物。虽然本发明特别适于治疗人,但是也可用于兽疾治疗,其中包括宠物如狗和猫的治疗,家畜如马、牛和羊的治疗,或者动物园动物如非人灵长类动物、猫科动物、犬科动物、牛科动物和有蹄动物的治疗。
优选的哺乳动物是人。人可以是儿童,也可以是成人。
用于制备药物组合物的方法和药用载体是本领域所熟知的,如教科书所描述,如Remington’s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学),第20版,Williams andWilliams,Pennsylvania,USA(2000)。
本文所用的术语“药用载体”是指用于将生长激素片段和/或药物活性剂转移到患者体内的药用溶剂、悬浮剂或载体。选择何种载体或稀释剂要根据给药途径而定,另外,本领域的技术人员可以很容易地确定每个特定病例最适合的制剂。
本文所描述的肽类似物包括在本发明的范围之内,如果它们有功能活性的话。本文所用的术语“有功能活性的”和“功能活性”用于指类似物时表示类似物能够(或者有能力)调节脂质代谢但对IGF-1没有可评估的效应。
本发明所使用的肽或类似肽预防或治疗骨疾病的能力表现在实施例所描述的成骨细胞形成活性。
本文所用的类似肽包括所提供的肽氨基酸序列的氨基酸序列变体。序列变体包括上述生长激素片段的氨基酸序列内氨基酸残基的缺失、插入或替代。缺失、插入和替代的任意组合也可以形成生长激素片段的氨基酸序列变体,只要该变体具有本文所描述的我们所期望的功能特性;即,能够调节脂质代谢但对IGF-1没有可评估的效应。
更具体地说,确定变体是否具有功能活性的一个试验是检测变体刺激胸腺嘧啶掺入到原代大鼠胚胎成骨细胞内是否能达到有统计学意义的水平(参见实施例1的进一步描述)。
如果这种替代不会导致功能活性的变化,那么就可以引入更多的实质改变,如表1所列的典型替代或者参照氨基酸分类在下文进一步描述的,然后分析所得到的生长激素片段变体的功能活性。
本领域的技术人员利用常用的方法就可以确定一个肽是否能够调节脂质代谢但对IGF-1没有可评估的效应。
本文所用的术语“没有可评估的效应”是指对IGF-1的效应在统计学上不显著,以及即使在试验中记录了肽的效应,但是这种效应被认为可以忽略不计。
本领域的技术人员确定肽是否能够调节脂质代谢的一种方式是实施例A所描述的脂解试验。简言之,大鼠在治疗后处死,取治疗大鼠和对照大鼠的脂肪组织,置于小瓶内,加入间羟叔丁肾上腺素。小瓶在37℃孵育1小时,通以碳合气(carbon),然后利用标准的甘油试验进行测定,例如,利用测定试剂盒,如Sigma GPO-337。
实施例B所描述的脂肪生成试验是本领域的技术人员确定肽是否能够调节脂质 代谢的另一种方法。
为了确定肽对IGF-1是否有可评估的效应,本领域的技术人员可以用血液样品(例如小鼠的血液样品)进行IGF-1试验。R & D Systems,Inc.有一种适于做此试验的试剂盒,产品编号为DY791。这是一种夹心ELISA方法,以仓鼠抗小鼠IGF-A抗体作为捕获抗体,以羊抗鼠IGF-A抗体作为检测抗体。有关该试验的完整细节见实施例C。
表1
原始残基 典型替代 优选替代
丙氨酸(A) 缬氨酸;亮氨酸;异亮氨酸 缬氨酸
精氨酸(R) 赖氨酸;谷氨酰胺;天冬酰胺 赖氨酸
天冬酰胺(N) 谷氨酰胺;组氨酸;赖氨酸;精氨酸 谷氨酰胺
天冬氨酸(D) 谷氨酸 谷氨酸
半胱氨酸(C) 丝氨酸 丝氨酸
谷氨酰胺(Q) 天冬酰胺 天冬酰胺
谷氨酸(E) 天冬氨酸 天冬氨酸
甘氨酸(G) 脯氨酸 脯氨酸
组氨酸(H) 天冬酰胺;谷氨酰胺;赖氨酸;精氨酸 精氨酸
异亮氨酸(I) 亮氨酸;缬氨酸;蛋氨酸;丙氨酸;苯丙氨酸; 亮氨酸
正亮氨酸
亮氨酸(L) 正亮氨酸;异亮氨酸;缬氨酸;蛋氨酸;丙氨酸;异亮氨酸
苯丙氨酸
赖氨酸(K) 精氨酸;谷氨酰胺;天冬酰胺 精氨酸
蛋氨酸(M) 亮氨酸;苯丙氨酸;异亮氨酸 亮氨酸
苯丙氨酸(F) 亮氨酸;缬氨酸;异亮氨酸;丙氨酸 亮氨酸
脯氨酸(P) 甘氨酸 甘氨酸
丝氨酸(S) 苏氨酸 苏氨酸
苏氨酸(T) 丝氨酸 丝氨酸
色氨酸(W) 酪氨酸 酪氨酸
酪氨酸(Y) 色氨酸;苯丙氨酸;苏氨酸;丝氨酸 苯丙氨酸
缬氨酸(V) 异亮氨酸;亮氨酸;蛋氨酸;丙氨酸;正亮氨酸 亮氨酸
本文所用的术语“治疗有效量”和“治疗量”是同义词,是指本发明的肽的量能够有效地产生所期望的治疗反应。
显然,特定的治疗有效量随某些因素的变化而变化,如所治疗的特定疾病、所治疗的哺乳动物的种类、哺乳动物的物理状况和临床治疗史、治疗持续时间、合并治疗措施(如果有的话)、以及所使用的特定制剂及肽的结构。
一般来说,“处理”、“治疗”等术语用于本文中是指影响患者、组织或细胞来获得所期望的药理和/或生理效应。效应可以是预防性的,其形式为完全或部分防止骨丢失,和/或是治疗性的,其形式为增加骨形成和/或骨沉积。
“治疗”用于本文中可涵盖治疗或预防哺乳动物,特别是人,的疾病的任何方法,其中包括预防易患但经诊断还未患上某疾病的患者患上该疾病;抑制疾病,即阻止疾病的发展;或者减轻或改善疾病的影响,即使疾病的影响减退。
本发明的第三方面包括用于改善骨疾病的各种药物组合物。本发明的一个实施方式所述的药物组合物是利用载体、赋形剂和添加剂或辅助剂将生长激素C端片段、其类似物、变体或盐相应的肽与一种或多种抗骨疾病的活性剂混合在一起形成适于给予患者的形式而制备的。
抗骨疾病的其他活性剂包括钙、骨矿物质如镁和硼、γ亚麻酸、维生素如维生素D和维生素K、雌激素或用于雌激素替代疗法的一种或多种雌激素模拟化合物、磷酸氢盐和异黄酮。
添加钙可增加骨的钙沉积。钙可来源于任何适宜的含钙有机或无机化合物。无机钙盐的例子包括,例如,氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、氧化钙、氢氧化钙或碳酸钙。有机钙化合物的例子有奶粉或酪朊酸钙、柠檬酸钙、苹果酸钙、柠檬酸苹果酸钙或乳酸钙。钙的量优选每日剂量200-1500mg。
添加骨矿物质可增加骨的强度。优选的制剂为每日剂量含100-500mg镁和2-6mg硼。
γ亚麻酸用于调节钙代谢,优选的量为每日剂量25-100mg。
添加的维生素可作为辅助因子优化骨代谢。优选的维生素K每日剂量为25pg到5mg。维生素D可提高钙从肠道内的摄取。优选的制剂所含的每日剂量为200IU到800IU。
雌激素或模拟雌激素替代疗法中所用化合物的一种或多种雌激素也可以包含在制剂中。雌激素模拟化合物的例子有植物性雌激素如染料木黄酮、木脂体或香豆满(coumerans),或药物制剂如17p-雌二醇、酯化的雌激素、硫酸雌酮、结合马雌激 素和乙炔雌二醇。对于植物性雌激素来说,这些化合物的量为每日剂量5-100mg。对于药物制剂来说,活性组分的含量由厂家的说明书定义。
一种或多种磷酸氢盐可用于抑制噬骨性骨吸收。这些化合物的例子有阿仑膦酸盐和利塞膦酸盐。这些化合物的优选量为每日剂量5-50mg。
异黄酮可从大豆或黑升麻中获得(分离),也可以人工合成。异黄酮的添加量为每日剂量10-75mg。
本发明的第三方面所述的制剂还可以包含其他的能量来源如脂肪和碳水化合物、蛋白质、维生素、矿物质、纤维、淀粉、防腐剂、著色剂、甜味剂等。
药用活性剂的任何化学相容性组合都包含在本发明的范围之内,只要这种组合不会降低本发明的生长激素片段的活性。
药物组合物优选以剂量单位的形式制备和给药。固体剂量单位包括片剂、胶囊和栓剂。用于治疗患者时,根据化合物的活性、给药方式、疾病的性质和严重程度、患者的年龄和体重不同可选择不同的每日剂量。然而,在某些情况下,较高或较低的每日剂量是合适的。每日剂量的药物可以通过单个剂量单位的形式或几个较小剂量单位的形式一次给予,也可以通过亚剂量单位的形式以一定的时间间隔多次给予。
药物组合物可以治疗有效剂量的形式局部给药或系统给药。当然,用于此目的的有效量要根据疾病的严重程度和患者的体重及一般状况而定。一般来说,体外使用剂型可为确定药物组合物的原位给药量提供指导,动物模型也可用于确定处理细胞毒性副作用的有效剂量。
例如,生长激素片段用于治疗时的有效量要依据治疗的目的、给药途径和患者的病情而定。相应的,临床医学家需要确定给药剂量及调整给药途径以获得最佳的治疗效果。根据给药模式的不同,每日剂量可以从约1μg/kg到100mg/kg或更高。
生长激素片段的剂量水平一般为约0.5-20mg/公斤体重的次序,优选的剂量范围是约0.5-10mg/公斤体重/天(约0.5-3g/人/天)。与载体材料混合制成单次剂量的活性组分量因所治疗的宿主和特定给药模式的不同而不同。例如,人用口服制剂可以包含约5mg到1g的活性化合物加上适当量的载体材料,后者可占组合物总量的约5-95%。一个剂量单位的制剂一般包含约5-500mg的活性组分。
但是,应当理解的是,对于任何一个特定患者来说,其特定的剂量水平要根据多种因素来确定,其中包括所使用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般状况、性别、饮食情况、给药时间、给药途径、排泄速度、合并用药及正在治疗的特定疾病的严重程度。
在本说明书中,应当清楚地了解名词“包括”是指“包括但不需局限于”,名词“包含”也有同样的意思。
本领域的技术人员很容易理解,虽然为了澄清和便于理解本发明,在某些细节上对本发明作了描述,但是,只要不偏离本说明书所描述的概念的范围,可以对本文所描述的实施方式和方法作出各种修改和改变。
现在仅仅是以参考下列非限定性实施例的方式对本发明进行描述。
实施例
大鼠处理方案
大鼠:16只雄性Wistar大鼠。
给瘦的Wistar大鼠喂29天的高脂饲料。每周称一次大鼠体重(包括开始给药时的第0天)。在给药或给盐水期间继续以高脂饲料喂养大鼠。
以有效的给药途径用药物(溶于盐水中)处理8只雄性Wistar大鼠(瘦的,成年的)。用盐水(等体积的)处理另外8只雄性Wistar大鼠(瘦的,成年的)29天。
在第0天称体重,然后每周称一次。动物必须在每天的相同时间(8:30-9:30am)给药。
28天时,采集所有大鼠的血样并以适当方式保存。
给药后的29天,在处死前不给动物禁食并让动物自由进食和饮水。
在最后一次给药后让动物休息2小时(自由进食和饮水)。在此期间,配制缓冲液、药物储存液(来自于Sigma的盐酸间羟叔丁肾上腺素)并准备解剖设备和工作区。
在每个小瓶(每只大鼠的每个稀释度准备6个小瓶)中加入1.8ml KRB(见附件3)缓冲液(含2%BSA和1mM葡萄糖),盖上盖子放置,直到组织剥离。间羟叔丁肾上腺素储存液是10×浓缩的,在将组织放入小瓶后、开始孵育前加入到小瓶内,每瓶200μl。间羟叔丁肾上腺素的终浓度为0μmol/L、0.1μmol/L和0.5μmol/L。盖上盖子并将间羟叔丁肾上腺素置于冰箱内直到孵育开始(光敏感的!!)。
最后一次给药后2小时通过立即断头处死大鼠。立刻取下附睾脂肪组织,用盐水彻底冲洗(室温)。
实施例A-测定肽调节脂质代谢能力的脂解试验
将一块脂肪垫剪成均匀的18块(每个间羟叔丁肾上腺处理鼠有8份),立即放置到1.8ml KRB缓冲液中。记录重量,通过先剪切所有的块然后将其放入小瓶内使各 瓶的孵育时间差异减到最小。
在每个盛有组织的小瓶内加入200μl间羟叔丁肾上腺素溶液,立即放入保温箱内。
在37℃、通碳合气(carbogen,氧和5%二氧化碳的混合气)的情况下孵育60分钟。
孵育完以后,取出100μl孵育液加入到eppendorf管内。取其中的10μl用标准甘油分析试剂盒(Sigma GPO-337)分析。将剩余的90μl混合物于-80℃保存。
实施例B-测定肽调节脂质代谢能力的脂肪生成试验
取每只大鼠的第二块脂肪垫。将组织剪切成相同重量的块(200mg)。每只大鼠取6块组织。
将每块组织放置到10ml三角瓶中,瓶中盛有2ml KRB缓冲液/2%BSA,其中含有[12C]-葡萄糖和[14C]-葡萄糖(最终的特异性活性为0.05μCi/μmol)以及人胰岛素(100μU/ml)。在37℃水浴中孵育60分钟,以100rpm的速度持续摇动,同时通以95%O2/5%CO2。
取出组织,用0.9%NaCl洗涤三次,吸干水分,放置到含5ml氯仿:甲醇(2∶1v/v)的玻璃螺旋帽试管(或falcon)中,放入4℃冰箱过夜。
取出组织(留下溶液),放入含2ml氯仿:甲醇溶液(2∶1v/v)的10ml离心管中,振荡,冷却30分钟。该步骤得到的提取溶液与步骤4得到的提取溶液混合。用玻璃棒碾压组织提取其中剩余的脂质。
然后使组织与2ml甲醇:0.1%MgCl2溶液(1∶1v/v)在4℃混合15分钟。
混合步骤5和6的提取物,在10℃以6000×g离心10分钟。
吸出上层丢掉。将5ml下层溶液转移到带刻度的小瓶内,在温暖空气流中蒸发过夜。
将已干燥的材料重悬于1ml氯仿,其中加入了10ml闪烁液。
测定放射活性60秒,所得数据表示为dpm/mg组织。
实施例C-检测对IGF-1的效应
R & D Research Systems,Inc.的DuoSet ELISA发育试剂盒(产品编号为DY791)用于分析对IGF-1的效应。每个试剂盒内都包含检测细胞培养上清和血清中IGF-1的夹心ELISA所需要的基本组分。IGF-1试剂盒DY791的使用说明书复制在附件1中。
实施例1
材料
所用的肽:AOD 9604,纯度95%
生产厂家:Metabolic Pharmaceutical Ltd
储存条件:-20℃
可溶性: 建议以1mg/ml的浓度溶于盐水中;但是,这可能会形成混浊的溶液-离心取上清用于蛋白质分析。如果溶液所含的药物还低于1mg/ml,则认为沉淀不是蛋白质。
方法
原代成骨细胞增殖试验
按照如下步骤用原代大鼠胚胎成骨细胞培养系统分析AOD 9604肽。
原代大鼠成骨细胞来源于胶原酶连续消化的21-天大鼠胚胎颅盖骨。收集消化物3-4并在T-75培养瓶内用含10%胎牛血清(FBS)的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)培养。细胞生长到汇合以后用胰酶消化,接种到24孔培养板内,用含5%FBS的极限必需培养基(MEM)培养24小时。然后细胞用不含血清的MEM/0.1%BSA培养24小时。换掉培养基,加入生长介质后再孵育24小时。在孵育结束前4小时加入3H-胸苷。洗涤细胞,孔内加入10%TCA,培养板在4℃过夜。然后测定培养板内的胸苷掺入量。
结果
AOD对原代成骨细胞合成代谢的影响
浓度为10-10M和10-9M AOD能够明显地刺激胸苷掺入到原代大鼠胚胎成骨细胞内(图1a)。用斯氏t检验评估显著性。
结论
AOD对原代成骨细胞培养物有明显的促有丝分裂作用。因此,AOD对骨的合成代谢有影响,可能成为骨领域的潜在治疗性化合物。
实施例2
本试验观察AOD9604对绝经后骨质疏松老化大鼠模型骨骼的效应。预计AOD不能阻止大鼠因卵巢切除而发生的骨变化。
材料和方法
(a)动物的饲养和安置
本试验总共包括96只老化的雌性Sprague-Dawley大鼠(Rattus Norvegicus),约9周龄,购自Harlan(Harlan Farms,Indiana)。大鼠随机分成8组。在12周的试验期间,大鼠被安置在多伦多大学比较医学中心(Division of Comparative Medicine at theUniversity of Toronto)的动物实验室内。大鼠成对安置在干净塑料笼子内,以玉米片为床,以塑料管为房子。所有大鼠都可以随意地从水龙头饮水,随意进食实验室食物。每日监测其居室,保持20.5℃的恒定温度和60%的湿度。
(b)药物制备和给药
GH和AOD治疗组大鼠每周注射5天,共12周。所有治疗都是通过皮下注射。GH治疗组注射人GH(rhGH)(BresaGen,Adelaide,Australia)。按照厂家的说明书重新溶解配制好,每日剂量分装一管,冷冻到-70℃,可储存4周。AOD治疗组用AOD9406(Formatech Inc.,Andover MA,U.S.A)处理,AOD冷冻干燥后保存在4℃。按照药厂的说明书配制。每天配制,在配制完后的4小时内使用。在4、8和10周后根据所称的大鼠体重重新计算药物浓度以确保整个试验过程中的给药剂量恒定。
试验设计
96天龄的Sprague-Dawley大鼠随机分到8个组内。前两组做假处理。组1作为假处理(Sham)对照,组2用2.5mg/kg/天的重组人GH(rhGH)(BresaGen)处理。其余6组购自Harlan,是做过卵巢切除术(OVX)的。这种手术在治疗前约8天进行。组3作为OVX模型的对照。组4用2.5mg/kg/天的rhGH处理。组5用0.75mg/kg/天的低剂量AOD肽(LAOD)处理,组6用2.0mg/kg/天的高剂量AOD肽(GAOD)处理。最后两组给予缓释的17B-雌激素片(0.01mg/天,17B-雌二醇,Innovative Research ofAmerica,Sarasota FL,U.S.A),该药物被皮下植入到颈背部。组7作为雌激素对照,组8给予2.0mg/kg/天的高剂量AOD肽(HAOD,Formatech Inc)。分组情况及各组的处理总结如下。
组 大鼠数量 模型 处理 给药剂量(mg/kg)
1 12 假处理 ---- ----
2 12 假处理 RhGH 2.5
3 12 OVX ---
4 12 OVX RhGH 2.5
5 12 OVX 低剂量AOD 0.75
6 12 OVX 高剂量AOD 2.0
7 12 OVX 雌激素(E) 0.01mg/天
8 12 OVX E+ 0.01mg/天
HAOD 2.0
在开始处理前,称重大鼠并采集1mL血液样品。在4、8和12周后再采集血液样品。血液样品在血清分离管中以100×g离心10分钟。吸出血清,分成4份进行下一步的分析。血清保存在-20℃。在处死前的13和3天,所有大鼠都腹腔注射30mg/mL的土霉素(Tetraject LP,Bimeda-MTC Pharmaceuticals,Cambridge,ON,Canada)。所有的稀释都使用无菌盐水。
在12周的治疗期结束时,麻醉大鼠并称重。在麻醉状态下通过放血处死大鼠。取出股骨、胫骨和脊柱,放到预先标记的管内。将骨立刻放置到干冰上,然后置于-70℃保存。图2显示的是试验设计概要和时间线。
双能X射线吸收测定法(DEXA)
双能X射线吸收测定法(DEXA)用于测定骨矿物质含量(BMC)和计算骨矿物质密度(BMD)。DEXA用PIXImus Densitometer(Lunar GE Corp.,Madison,WI,U.S.A)进行,该仪器是为测定小动物而专门设计的。通过将样品暴露在高、低能量X射线的圆锥形射线下进行测定。低能量射线可透过软组织但不能透过骨,而高能量射线可透过所有材料。根据骨从高、低能量射线中所吸收的能量计算骨密度。在每次使用前都用放置在PIXImus扫描区后1cm的铝/有机玻璃假人校正机器。
扫描切下并清洗干净的股骨及腰椎4和5。样品分别以半冷冻状态放置到用聚苯乙烯制成的特殊板上,使骨上的软组织厚度相同。在每次测量时样品都以同一个方向放置。腰椎L4和L5的BMD合在一起作总体测量。
利用厂家提供的软件根据BMC和面积计算BMD[BMD(g/cm2)=BMC(g)/面积(cm2)]。通过在样品上围一个框来手工测量面积,术语称之为目的区(ROI)。
统计学分析
所有数据都表示为平均值+/-平均值的标准差(SEM)。利用统计学软件SPSS(10.0版本)进行统计学分析。
包括两组的比较用独立t检验进行分析。对于多重比较来说,先进行方差齐性的Levene检验以判断方差是否相等。如果数据的方差相等,则利用配对比较ProtectedFisher’s最小显著差(LSD)事后检验(pairwise comparison Protected Fisher’s LeastSignificant Difference(LSD)post hoc test)通过单向方差分析进行多重比较。显著性设定在p<0.05,趋势设定在p<0.1。
双能X射线吸收测定法(DEXA)
DEXA用于计算骨矿物质密度(BMD)。脊椎的BMD主要用于确定骨小梁骨量的变化,而切下的股骨主要用于确定骨皮质骨量的变化。
卵巢切除术的效应
测定卵巢切除术对骨矿物质密度的影响以确定雌激素缺乏模型是否可作为绝经后骨质疏松的模型。T检验的分析结果表明OVX组与对照假处理组相比其脊椎的BMD明显下降(p=0.02),如图4a所示。这种效应也发生在图4b所示的股骨上,其中OVX组与假处理组相比BMD明显下降(p=0.046)。这些结果证实了OVX模型可用于本试验。
AOD治疗的效应
AOD导致BMD的变化在脊椎和股骨之间是不同的。在脊椎中,方差分析结果表明,与OVX对照组相比,AOD的高(p=0.05)、低剂量组(p=0.076)都能使BMD显著增加,如图5a所示。BMD回到假处理对照组的水平。
低剂量的AOD处理后股骨BMD有增加的趋势(p=0.107),但是高剂量的AOD却没有这种效应,如图5b所示。高剂量的AOD不会导致BMD的增加,其BMD与OVX对照组相似。高剂量AOD组的BMD明显低于低剂量组的BMD(p=0.013)。
总之,用AOD治疗后脊椎和股骨的BMD都有增加,但是脊椎的BMD增加更明显。
实施例3
机械检测方法
我们完成了3个试验以确定骨皮质和骨小梁的机械特性。三点弯曲试验和扭转试验用于检验骨皮质的机械特性和材料特性。脊椎压缩试验用于分析骨小梁的机械特性和材料特性。
统计学分析
所有数据都表示为平均值+/-平均值的标准差(SEM)。利用统计学软件SPSS(11.0版本)进行统计学分析。包括两组的比较用独立的斯氏t检验分析。利用配对比较Protected Fisher’s最小显著差异(LSD)事后检验通过单向方差分析进行多重比较。显著性设定在p<0.05,趋势设定在p<0.1。
三点弯曲试验
右股骨用于三点弯曲试验。在试验前2天将待测骨从-70℃冰箱转移到-20℃冰 箱。在试验前一夜,将样品从-20℃冰箱中取出,分别用盐水浸过的纱布包裹。然后将这些样品放到约4℃过夜以确保样品完全解冻。在试验开始前,测量骨以确定如何在夹具上放置骨。首先,用数字测径器测量骨的长度。从股骨的远端开始,在占骨全长25%的地方放置一个标记。在距第一点15.6mm处放置第二个标记,设定标距长度,在标距长度的中间放置最后一个标记。
试验在机械检测仪(Instron 4465,Instron Canada Inc.,Toronto,ON,Canada)上进行,使用的是1000牛顿的测力计。三点弯曲夹具安装好以后校正和平衡测力计。用于检测的不锈钢夹具由带两个支架和一个锯条的基座组成,连接到Instron的十字头上。所有的样品都以同一个方向放置,其前面朝上,以其最稳定的位置放置到支架上。标距长度标记与夹具的两个支架对齐,锯条与标距长度的中点对齐。在骨上预先加载约1.0N的力。试验以1mm/min的速度运行直到骨折。通过LabView数据采集软件(National Instruments Corp.;Austin,TX)从Instron采集载荷对时间的数据。采集股骨断裂点截面的数字图象(ImageJ 1.28u,National Institute of Health)用于确定骨的尺寸并计算惯性距。测定中-侧向(M/L)和前/后向(A/P)上的直径以及厚度。
将时间数据转换成形变数据,利用电子表格软件(Excel 2000,Microsoft)作载荷-形变曲线。从该曲线中确定非标准化机械特性;其中包括极限载荷、形变破坏点、破坏能量(曲线下面积)和刚性(线性区斜率)。
利用直径和惯性距将载荷-形变曲线转换成应力-应变曲线。从应力/应变曲线中计算标准化的机械特性,其中包括极限应力、破坏应变、破坏弹性模量所需的标准化能量。
脊椎压缩
第五脊椎(L5)用于压缩试验。修剪脊椎只留下椎体用于试验。在试验前至少1天将待测骨从-70℃冰箱转移到-20℃冰箱。在试验前2小时,将样品从-20℃冰箱中取出以确保骨完全除霜。在除霜期间用盐水浸过的纱布包裹脊椎。
采集数字图象,利用图象分析软件(ImageJ 1.28u,NIH)确定椎体的高度和截面面积。压缩试验在机械检测仪(Instron 4465,Instron Canada)上进行,使用的是1000牛顿的测力计。将椎体放置到夹具的浅凹处,尾端或平端朝下。样品用3个螺丝固定,然后用PMMA包裹。脊椎覆盖以盐水浸过的纱布,同时使PMMA凝固至少10分钟。少量的PMMA用于抹平脊椎的载荷面。预先在样品上加载1.0N的力,保持约3分钟使PMMA凝固。在样品上预载荷时,用卡规测定两个压盘之间的距离。然后用夹具的高度减去压盘之间的距离就得到了标距长度。在骨上以1.0mm/min的速度加载 载荷直到骨被破坏。脊椎压缩失败定义为力明显减小,或者定义为例如力减小10%。
通过LabView数据采集软件从Instron采集载荷对时间的数据。利用图象分析软件(ImageJ,NIH)采集数字图象以确定高度和截面面积。
将时间数据转换成形变数据作载荷-形变曲线。从该曲线中确定非标准化机械特性,其中包括极限载荷、形变破坏点、破坏能量(曲线下面积)和刚性(线性区斜率)。从数字图象采集的截面面积和标距长度用于将载荷-形变曲线转换成应力-应变曲线。从应力/应变曲线中计算标准化的机械特性,其中包括极限应力、破坏应变、标准化的破坏能量(曲线下面积)和弹性模量(斜率)。
股骨颈骨折
右股骨近端用于股骨颈骨折试验。在试验开始前,利用X射线透视近端股骨以确保股骨头平对着屏幕。将待测骨从-20℃冰箱中取出,分别包裹上用盐水浸过的纱布。然后将样品置于约21℃的室温中放置2小时以确保样品完全解冻。在试验开始前将股骨颈周围的结缔组织完全去除。
试验在Instron 4464上完成。用4个平头螺丝将样品固定到夹具上。根据目测放置样品使其长轴与夹具浅凹垂直并且有约11mm的标距长度(从骨的末端到夹具浅凹的顶部)。在夹具浅凹内填满PMMA并使其凝固10分钟。在PMMA凝固时用盐水浸过的纱布覆盖样品。在试验开始前,用数字卡规测量准确的标距长度和股骨颈在中-侧向和前-后向的直径。安置好样品并且测量完以后,将样品放到Instron仪上,股骨颈与底盘上的钻孔边对齐。预先加载约1.0N的力。试验以2.5mm/min的速度运行直到股骨颈被破坏。
将时间数据转换成形变数据作载荷-形变曲线。从该曲线中确定非标准化机械特性,其中包括极限载荷、形变破坏点、破坏能量(曲线下面积)和刚性(线性区斜率)。这些机械特性不进行任何标准化直接比较,因为股骨颈的几何形状复杂且加载到样品上的是不同载荷的组合(压缩力、切割力和弯曲力)。
机械试验结果
非标准化的机械特性采集于三点弯曲试验、扭转试验和脊椎压缩试验所得到的载荷移位(load displacement)曲线。利用几何参数将这些数据标准化。比较标准化参数的显著性差异。如果在测定骨时发生了问题,则在分析时将这些试验排除。HAOD组的一个样品在右股骨上有一个异常硬结,因此没有测定。经统计学检验后认为是远离中心的数据也被排除在下面的分析之外。
三点弯曲试验
三点弯曲试验用的是股骨,代表了骨皮质的机械特性。图6和图7用图的方式描述了各组的极限应力、破坏应变、破坏能量和弹性模量数据。
AOD治疗的效应
低剂量AOD(LAOD)和高剂量AOD(HAOD)治疗的结果表明在极限应力上无显著差异,虽然有趋势表明,与OVX对照组相比,LAOD和HAOD组具有更高的极限应力(p=0.062,p=0.076)。HAOD组和OVX组有相似的应变和弹性模量,但是LAOD组具有更高的弹性模量(p=0.014)和更低的破坏应变(p=0.005)。见图6和图7。
总结
试验证明OVX模型是有功能的,因为与假处理相比其骨皮质强度和刚性都降低。高、低剂量的AOD药物治疗出现了不同的效应。与OVX相比,两个剂量都可以使强度增加,但是低剂量更有效,并且可使刚性增加。
脊椎压缩
脊椎压缩试验用的是第5脊椎椎体,代表了骨小梁的机械特性。有几个脊椎在修剪时因太靠近椎体而损坏了皮质外壳,因此被排除在分析之外。
AOD治疗的效应
LAOD组所具有的弹性模量比OVX对照组高(p=0.05)。见图8。
总结
低剂量的AOD治疗结果表明,与OVX相比,其刚性有增加的趋势,其表现为弹性模量升高。雌激素治疗并不能防止由OVX引起的强度和刚性下降,尽管应力和弹性模量值较高。总之,与骨皮质相比,AOD对骨小梁的影响很小。这说明AOD对骨骼的效应与完整的GH相似。已知GH可在骨膜表面增加骨皮质的合成。
股骨颈骨折
AOD的效应
AOD可影响股骨颈的形变和刚性。OVX大鼠股骨颈的形变明显高于高、低剂量AOD组大鼠股骨颈的形变(0.017,0.009)。两个AOD组的刚性都高于OVX(p=0.092,p=0.023),但是只有HAOD组有显著性差异。OVX组的破坏能量明显升高,这是因为它们有更高的韧性(p=0.013,p=0.008)。AOD治疗组的刚性增加,说明OVX大鼠所发生的骨质量下降被遏制。见图9和图10。
总结
卵巢切除术可导致股骨颈的强度和刚性下降。这主要是由于股骨颈的骨小梁丢失 造成的。这也再次证明了OVX模型是有功能的。与OVX相比,用高、低剂量的AOD治疗使刚性有增加的趋势,但是其强度没有差异。这可能是由材料变化如矿物质或胶原的变化引起的。
讨论
我们猜测AOD不能预防因卵巢切除术而引起的骨骼变化,从而对骨代谢没有影响。本研究的结果证明了我们的猜测是不正确的,AOD确实对骨骼有效应。这一点可以从整个试验中看出,因卵巢切除术而引起的许多骨骼变化被阻止。我们认为AOD9604肽可能只包含一个能刺激脂解作用但不能刺激骨代谢的区域。我们相信,由于完整的GH在体内有几种不同的靶细胞,因此,AOD与骨细胞相互作用似乎是合理的。
AOD对骨小梁和骨皮质都有影响,但是主要影响骨皮质。我们认为,AOD对骨骼的效应与完整GH分子是一样的。AOD还可以防止骨皮质BMD的下降,机械试验结果表明低剂量的AOD可防止骨皮质软化。而AOD对骨小梁的影响不大。
附件1
小鼠IGF-I
产品编号:DY791
这种DuoSet ELISA Development试剂盒包含进行夹心ELISA以检测细胞培养物上清和血清中重组鼠胰岛素样生长因子(IGF-I)所需的基本组分1。每个试剂盒所包含的材料足够约15个96孔板完成ELISA检测,如果能够满足下列条件2:
●按照通用ELISA操作方法所总结的进行试验。
●使用推荐的微孔板、缓冲液、稀释液、底物和溶液。
在使用本产品前必须完整阅读本试剂盒的包装说明书。
所提供的材料
在使用前将所有试剂置于室温下。
捕获抗体(Part 841413,1瓶)-用1.0mL PBS重新溶解后仓鼠抗小鼠IGF-I抗体的浓度为720μg/mL。重新溶解后,在2-8℃下储存可达60天,或者分装后储存在-20℃到-70℃的人工除霜冰箱内可保存6个月3。用PBS稀释到工作浓度4.0μg/mL,无载体蛋白。
检测抗体(Part 841414,1瓶)-用1.0mL试剂稀释液(见所需溶液部分)重新溶解后生物素化的羊抗小鼠IGF-I抗体的浓度为36μg/mL。重新溶解后,在2-8℃下储存可达60天,或者分装后储存在-20℃到-70℃的人工除霜冰箱内可保存6个月3。用试剂稀释液稀释到工作浓度200ng/mL4。
标准品(Part 841415,1瓶)-用0.5mL试剂稀释液(见所需溶液部分)重新溶解后重组小鼠IGF-I的浓度为100ng/mL。在稀释前放置标准品至少15分钟,同时温和搅拌。重新溶解的标准品在2-8℃下储存可达60天,或者分装后储存在-70℃可保存6个月3。用试剂稀释液进行2倍稀释,作7点标准曲线,推荐的标准品最高浓度为2000pg/mL。
链亲和素-HRP(Part 890803,1瓶)-1.0mL连接到辣根过氧化物酶上的链亲和素。第一次使用以后,在2-8℃下储存可达60天3。不要冷冻。利用试剂稀释液(见所需溶液部分)按照小瓶标签的说明将其稀释到工作浓度。)
所需溶液
PBS-137mM NaCI,2.7mM KCl,8.1mM Na2HPO4,1.5mM KH2PO4,pH7.2-7.4,0.2μm滤膜过滤。
封闭缓冲液-5%Tween20,浴于PBS中,含0.05%NaN3。
试剂稀释液1-5%Tween20,溶于PBS中,pH7.2-7.4,0.2μm滤膜过滤。
底物溶液-显色剂A(H2O2)和显色剂B(四甲基联苯胺)(R&D System产品编号#DY999)的1∶1混合物。
终止液-2 NH2SO4(R&D System产品编号#DY994)。
通用ELISA操作规程
微孔板的准备
1.用无载体蛋白的PBS将捕获抗体稀释到工作浓度。马上将稀释的捕获抗体加入到96孔微孔板5内以包被微孔板,每孔加100μl。封上微孔板,在室温下孵育过夜。
2.吸去孔内的溶液,用洗涤缓冲液洗涤,共洗涤3次。用喷水瓶、多道加样器或自动洗涤仪在每个孔中都加满洗涤缓冲液(400μl)进行洗涤。在每一步中将液体完全去掉是试验成功所必须的。在最后一次洗涤结束后,抽吸掉所有剩余的洗涤液,或者通过将微孔板倒扣在一叠干净的纸上去掉所有剩余的洗涤液。
3.在每孔中加入300μl封闭缓冲液来封闭微孔板。在室温下至少孵育1小时。
4.按照步骤2的方法重复抽吸/洗涤微孔板。现在微孔板已准备好,可以加样了。
试验过程
1.每孔中加入100μl试剂稀释液溶解的样品或标准品,或者合适的稀释液。用胶带覆盖微孔板,在室温下孵育2小时。
2.按照微孔板准备中步骤2的方法重复抽吸/洗涤微孔板。
3.每孔中加入100μl试剂稀释液溶解的检测抗体。用胶带覆盖微孔板,在室温下孵育2小时。
4.按照微孔板准备中步骤2的方法重复抽吸/洗涤微孔板。
5.每孔中加入100μl链亲和素-HRP的工作稀释液。覆盖微孔板,在室温下孵育20分钟。微孔板避免直接光照。
6.按照步骤2的方法重复抽吸/洗涤微孔板。
7.每孔中加入100μl底物溶液。在室温下孵育20分钟。微孔板避免直接光照。
8.每孔中加入50μl终止液。温和扣打微孔板使溶液充分混合。
9.立刻利用微孔板读数仪在450nm处测定每孔的光密度。如果可以校正波长,则设定到540nm或570nm。如果不能校正波长,则450nm处的读数减去540nm或570nm处的读数。减去这个读数的目的在于校正微孔板的光学缺陷。在450nm处直接测定而不校正可能会导致数值偏高,准确性下降。
技术提示和限制
●本DuoSet试剂盒在超过标签上标注的有效期时不应该再使用。
●用于重新溶解试剂和稀释标准品的稀释液能够反映待测样品的环境是很重要的。本规程所推荐的稀释液适用于大多数细胞培养物的上清样品。在使用前应当确认稀释液是否适用于特定的样品类型。
●本试验所使用的酶和底物的种类以及捕获/检测抗体的浓度可以改变以获得具有不同敏感性和动力学范围的免疫分析。要在免疫分析中成功地使用这些试剂需要对免疫分析方法有基本的理解。
●完全而均匀地洗涤技术是获得正确试验结果所必须的。洗涤缓冲液应当分配均匀,并且应当通过抽吸或倾倒从孔中彻底去除。将微孔板倒扣在一叠干净的纸上可去掉所有剩余的洗涤缓冲液。
●在每一步都要更换新的试剂容器和加样头。
●推荐所分析的所有样品和标准品都设双复孔。
●避免试剂和缓冲液被微生物污染。微生物污染可影响试验的敏感性。含大量蛋白质的缓冲液应当在无菌条件下配制,并储存在2-8℃,或者每天配制新鲜的缓冲液。
警告
本试剂盒推荐使用的终止液是酸溶液。在使用这个溶液时要穿戴眼睛、手、面部和衣服的保护装置。
结果的计算
计算每个标准品、对照和样品的双复孔读数的平均值,减去0标准品光密度的平 均值。
利用能作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合的计算机软件绘制标准曲线。另外,也可以手工绘制标准曲线,在y轴上点每个标准品的平均吸光度值,在x轴上点浓度,通过图上的点画一条最拟合的曲线。以IGF-I浓度的对数对O.D.的对数作图则数据可能是线性的,通过回归分析确定最拟合的曲线。这种方法可产生一条充分但精确度低的数据拟合曲线。如果样品经过稀释,那么从曲线上读出的浓度必须要乘以稀释倍数。
典型数据
本标准曲线只是为了证明的目的。
每一组分析的样品都会产生一个标准曲线。
下图代表使用这种鼠IGF-I DuoSet试剂盒所得到的典型数据。利用能进行4-PL曲线拟合的计算机绘制标准曲线。
特异性
分析了含50ng/mL重组鼠IGF-II的样品,结果显示无交叉反应或干扰。含25ng/mL重组人IGF-I的样品测定结果为63pg/mL(0.2%的交叉反应)。
校正
DuoSet试剂盒可用R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组鼠IGF-I校正。
1用于分析血清样品时,每个实验室应当设定和确证自己的血清稀释度。血清稀释液不能用于稀释检测抗体或链亲和素-HRP。
2由于技术方法、塑料器具及水源的不同每个结果可能会有变化。
3假设在试剂盒的有效期内。
4重新溶解后所有组分最少放置15分钟,同时温和搅拌。工作稀释液应临时配制和使用。
5推荐使用Costar EIA Plate(产品编号#2592)。
R&D System Inc. R&D System Europe,Ltd.
15
614 Mckinley Place NE 19 Barton Lane
Minneapolis.MN 55413 Abingdon Science Park
USA Abingdon,OX 14 3NB
1-800-343-7475 United Kingdom
Tel:(612)379-2956 Tel:+44(0)1235 529449
Fax:(612)656-4400 Fax:+44(0)1235 533420
Claims (14)
1.由序列Tyr Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe(SEQ ID NO:7)构成的肽或其片段在制造用于治疗或预防哺乳动物骨疾病的药物中的应用,其中所述片段能降低脂肪生成活性;和/或能刺激脂解作用。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述片段至少包含哺乳动物生长激素的二硫键环。
3.如权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述片段包含人生长激素的氨基酸182-189(hGH 182-189)。
4.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述片段包含人生长激素的氨基酸177-191(hGH 177-191)。
5.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物还包含治疗骨疾病的其他活性剂。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述其他活性剂选自以下一种或多种:钙、骨矿物质、γ亚麻酸、维生素D、维生素K、雌激素、雌激素模拟化合物、磷酸氢盐和异黄酮。
7.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述药物还包含能源。
8.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物是通过口服、舌下含服、口腔含服、鼻内、吸入、透皮、局部或胃肠外途径,通过皮下、静脉、肌内、鞘内、颅内注射或输注技术给药的药物。
9.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物是以基因改造食品的形式口服给予的药物。
10.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述骨疾病以骨代谢改变为特征。
11.如权利要求10所述的应用,其特征在于,所述骨疾病选自骨质疏松、骨量减少、佩吉特病、癌症患者的溶骨性转移、肝病的骨营养不良以及由肾衰竭或血液透析、骨折、骨手术、衰老、怀孕和营养不良导致的骨代谢改变。
12.如权利要求11所述的应用,其特征在于,所述骨质疏松是绝经后骨质疏松。
13.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述哺乳动物也是生长激素缺乏的。
14.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述哺乳动物是人。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103987402A (zh) * | 2011-12-09 | 2014-08-13 | 麦特保利药业有限公司 | 生长激素片段的用途 |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110092448A1 (en) * | 2005-08-02 | 2011-04-21 | Metabolic Pharmaceuticals Limited | Peptide Conjugate for Oral Delivery of Hydrophilic Peptide Analgesics |
WO2007068039A1 (en) * | 2005-12-12 | 2007-06-21 | Metabolic Pharmaceuticals Limited | Treatment of weight gain in estrogen deficient mammals |
IT202100002228A1 (it) * | 2021-02-02 | 2022-08-02 | Univ Degli Studi Milano | Composizione per ridurre gli squilibri metabolici conseguenti all'insufficienza ovarica |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1127000A (zh) * | 1993-07-13 | 1996-07-17 | 森德克斯(美国)股份有限公司 | 甲状旁腺激素类似物和甲状旁腺激素相关肽:合成和治疗骨质疏松症的用途 |
CN1275132A (zh) * | 1997-09-08 | 2000-11-29 | 新陈代谢药物有限公司 | 肥胖症的治疗 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU767433B2 (en) * | 1999-07-13 | 2003-11-13 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Amido spiropiperidines promote the release of growth hormone |
AUPQ387599A0 (en) | 1999-11-05 | 1999-12-02 | Metabolic Pharmaceuticals Limited | Product and method for control of obesity |
AU2001285145A1 (en) * | 2000-08-21 | 2002-03-04 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Human abc transporter family member and uses thereof |
US20040208866A1 (en) * | 2002-10-07 | 2004-10-21 | Jaspers Stephen R. | Methods of regulating body weight |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1127000A (zh) * | 1993-07-13 | 1996-07-17 | 森德克斯(美国)股份有限公司 | 甲状旁腺激素类似物和甲状旁腺激素相关肽:合成和治疗骨质疏松症的用途 |
CN1275132A (zh) * | 1997-09-08 | 2000-11-29 | 新陈代谢药物有限公司 | 肥胖症的治疗 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Paoletti AM et al..Efficacy and safety of oral and transdermalhormonalreplacement treatment containing levonorgestrel.Maturitas42 2.2002,42(2),137-147. |
Paoletti AM et al..Efficacy and safety of oral and transdermalhormonalreplacement treatment containing levonorgestrel.Maturitas42 2.2002,42(2),137-147. * |
赵安.甲状旁腺激素相关肽与骨质疏松.国外医学药学分册28 2.2001,28(2),84-87. |
赵安.甲状旁腺激素相关肽与骨质疏松.国外医学药学分册28 2.2001,28(2),84-87. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103987402A (zh) * | 2011-12-09 | 2014-08-13 | 麦特保利药业有限公司 | 生长激素片段的用途 |
CN103987402B (zh) * | 2011-12-09 | 2019-06-18 | 麦特保利药业有限公司 | 生长激素片段的用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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