JP2007536282A - 骨障害を予防または治療するための方法 - Google Patents
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Abstract
Description
第一の態様において、本発明によれば、インスリン様成長因子1(IGF−1)にそれほどの効果を有さず、脂質代謝を調節する作用を有する治療上の有効量のペプチドを哺乳類に投与することを特徴とする、哺乳類における骨障害を予防または治療する方法を提供する。
IGF−1にそれほど影響しない脂質代謝を調節する作用を有するペプチドは、とりわけ成長ホルモンのC末端アミノ酸配列に一致する。かかるペプチドは、「C末端成長ホルモンフラグメント」と命名する。本明細書の目的で、用語「C末端成長ホルモンフラグメント」とは、脂質合成活性を減少および/または脂肪分解を刺激することができる哺乳類の成長ホルモンのアミノ酸配列のカルボキシ末端領域由来のペプチドフラグメントを意味すると理解される。
用いられたアミノ酸残基の略語は、標準的なペプチド命名法に従う:
Gly=グリシン;Ile=イソロイシン;
Glu=グルタミン酸;Phe=フェニルアラニン;
Cys=システイン;Arg=アルギニン;Gln=グルタミン;
Leu=ロイシン;Ser=セリン;Val=バリン;
Lys=リジン;Ala=アラニン;
Asp=アスパラギン酸;His=ヒスチジン;
Orn=オルニチン;Tyr=チロシン;
Pen=ペニシラミン(p,p’−ジメチルシステイン)]
も本発明の範囲内であることが理解される。
ラット処置プロトコル
ラット:16匹のオスのウィスターラット
細身のウィスターラットに高脂肪食を29日間与える。ラットは、毎週体重を量る(薬物投与0日を含む)。ラットは、薬物または生理食塩水の投与の間、高脂肪食を続ける。
1個の脂肪パッドを18個の等しい一片に切り裂き(テルブタリン処置につき8個の複製物)、各片をすぐに1.8mLのKRB緩衝液に入れる。重量を記録し、すべての片を最初に切断することによりインキュベーション時間のばらつきを最小限にし、次いでそれらをバイアルに入れる。
各ラットから第二の脂肪パッドを取る。組織を同重量(200mg)の片に切断する。各ラットについて6片の組織を集める。
カタログ番号DY791であるR&Dリサーチシステムズ社によって提供されるDuoSetELISA開発キットは、IGF−1における影響に関するアッセイに使用され得る。各キットは、細胞培養液上清および血清において、IGF−1を測定するためのサンドウィッチELISAの発育のために必要な基礎成分を含む。IGF−1キットDY791の使用説明書は、付属書1で再現される。
物質
使用したペプチド:AOD9604、95%純度
供給元:メタボリック・ファーマシューティカル社
保存:−20℃
溶解性:1mg/mlの生理食塩水中で溶解する;しかしながら、これは、曇った溶液を生じ、遠心分離し、上清を除去し、蛋白質についてアッセイした。溶液は、依然>1mg/mlを含んでおり、したがって、推定された沈殿物は蛋白質ではなかった。
初代骨芽細胞増殖アッセイ
下記で詳しく述べるように、初代ラット胎児骨芽細胞培養系において、AOD9604ペプチドをアッセイした。
AODは、初代骨芽細胞において、タンパク同化作用を有する。
AODは、初代ラット胎児骨芽細胞において、10-10Mおよび10-9Mの濃度でチミジン導入をかなり活性化した(図1a)。有意差は、スチューデントのt検定を用いて評価した。
AODは、初代骨芽細胞培養液中で、かなり細胞分裂性であった。それ故、それは骨タンパク同化のプロファイルを有し、骨領域において治療化合物としての可能性を有しうる。
この研究は、閉経後骨粗鬆症についての高齢ラットモデルにおける骨格上のAOD9604の効果を観察する。AODは、ラットにおいて卵巣摘出の結果として起こる骨変化を防がないと考えられた。
(a)動物の世話および保管
本研究には、ハーラン(Harlan)(ハーランファーム、インディアナ州)から得られた全部で96匹の高齢メスSprague-Dawleyラット(Rattus Norvegicus)、およそ9ヶ月齢が含まれる。該ラットを無秩序に8群に分けた。12週の研究期間、それらはトロント大学で比較医学部門の動物施設にて飼育された。該ラットは、飼育のためのコーンミールを敷いて、プラスチック製の管を持つ透明なプラスチック製の檻に2匹一組で保管した。水道水および研究の食物は、適宜すべてのラットが得ることができた。部屋は、20.5℃の定温および60%の湿度に関して毎日モニターした。
GHおよびAOD処置群におけるラットは、12週間、1週あたり5日注射した。すべての処置は、皮下注射によって与えられた。GH処置群は、組み換えヒトGH(rhGH)(BresaGen、アデレード、オーストラリア)で処置した。それは製造元の説明書に従い再構成し、毎日アリコートに分けて、−70℃で4週間まで冷凍した。AOD処置群をAOD9406(フォーマテック社、アンドーバー、マサチューセッツ州、米国)で処置し、4℃で凍結乾燥して保存した。該ペプチドを製薬企業プロトコルに従って調製した。これは毎日完了し、調製の4時間以内に使用した。該薬物濃度は、実験を通じて一定の投与量を確実にするために、ラットの重量を用いて4、8および10週後に再計算した。
96匹の高齢Sprague-Dawleyラットを、8群のうちの1つに無作為に割り当てた。最初の2群は、偽手術した。群1は、偽コントロールとして保持し、群2は、2.5mg/kg/日の組み換えヒトGH(rhGH)(BresaGen)で処置した。残りの6群は、ハーラン(Harlan)から調達し、卵巣摘出した(OVX)。この手術は、処置の開始前、およそ8日実施した。群3は、OVXモデルに対するコントロールとして残した。群4は、2.5mg/kg/日のrhGHの処置を与えた。群5は、低用量のAODペプチド(LAOD)、0.75mg/kg/日で処置し、群6は、高用量のAODペプチド(HAOD)、2.0mg/kg/日で処置した。最後の2つのOVX群は、首の後ろに皮下移植している17B−エストロゲンペレット(0.01mg/日、17B−エストラジオール、アメリカのイノベイティブ・リサーチ、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国)の持続放出を受けた。群7は、エストロゲンコントロールとして残し、群8には、AODペプチド((HAOD)2.0mg/kg/日、フォーマテック社)の高用量の処置を与えた。群のまとめおよび処置は以下に与える。
二重エネルギーX線吸光光度分析法(DEXA)は、骨塩量(BMC)測定し、骨塩密度(BMD)を計算するために用いられる。DEXAは、特に小動物の測定のために、設計されているPIXImus密度計(Lunar GE社、マディソン、ウィスコンシン州、アメリカ合衆国)を用いて実施する。測定は、サンプルを高低両方のエネルギーX線の円錐形の光線に曝すことによって得られる。低エネルギー光線は、骨だけでなく柔組織を通過し、高エネルギー光線は、すべての物質を通過する。骨密度は、高低エネルギー光線から骨によって吸収されるエネルギーに基づいて計算される。該機械を、PIXImusの走査領域の後ろから1センチメートルに置かれたアルミニウム/ルーサイト・ファントムを用いて、各使用の前に校正する。
すべてのデータは、平均、+/−平均の標準誤差(SEM)として表示される。統計分析は、統計ソフト、SPSS(バージョン10.0)を用いて実施した。
DEXAは、骨塩密度(BMD)を計算するために用いられる。腰椎のBMDは、骨梁質量における変化を決定するために主に用いられ、一方、摘出した大腿は、皮質骨質量における変化を決定するために主に用いられる。
骨塩密度における卵巣摘出の効果は、閉経後骨粗鬆症のためのエストロゲン欠損モデルを確かめるために試験した。t検定分析は、図4aで示されるコントロールの偽(Sham)群(p=0.02)のBMDと比較してOVX群における腰椎のBMDにおいて、有意な減少があったことを明らかにした。この効果はまた、図4bに示される大腿においても起こり、そこではまた偽群(p=0.046)と比較してOVX群のBMDにおいて、有意な減少があった。このことにより、OVXモデルが本研究において機能的であることを確かめる。
AODに応答するBMD変化は、腰椎および大腿では異なる。腰椎において、ANOVA分析は、AODの高用量(p=0.05)および低用量(p=0.076)の両方ともが、図5aで示されるようにOVXコントロールと比較して有意にBMDを増加したことを示した。該BMDは、偽コントロールレベルのそれに戻った。
機械的な試験方法
3個の試験は、皮質および骨梁の両方の力学的性質を決定するために行った。三点曲げおよびねじれ試験は、皮質骨の機械的および物質的性質を試験するために行った。椎骨の圧縮は、骨梁の機械的および物質的性質を研究するために行った。
すべてのデータは、平均、+/−平均の標準誤差(SEM)として表示される。統計分析は、統計ソフト、SPSS(バージョン11.0)を用いて実施した。2群を含む比較は、独立スチューデントt検定によって分析された。多重比較は、2つ1組のフィッシャーのプロテクテッド最小有意差(LSD)のポストホック(posthoc)検定での対比較を用いるワンウェイANOVA分析によって分析された。有意差は、p<0.05で決定し、傾向は、p<0.1で決定した。
右大腿を三点曲げ試験のために用いた。試験される骨は、試験前2日間、−70℃〜−20℃の冷凍庫に移した。試験前夜、サンプルを−20EC冷凍庫から出し、生理食塩水溶液を染みこませたガーゼで別々に包んだ。次いで、サンプルが完全に溶解するのを確実にするために、これらのサンプルを終夜でおよそ4℃に置いた。試験前、ジグでサンプルの置き場所を決定するために骨を測定した。最初に、骨長をデジタル測径器で測定した。大腿の遠位末端から全長の25%の骨上に印を付けた。第一の点から第二の印は、決まったゲージの長さである15.6mmの点に付けて、最後に印をゲージの長さの中点に付けた。
5番目の腰椎(L5)を圧縮試験のために用いた。該椎骨は、試験用の椎体のみ残し、すべて切り取った。試験される骨は、−70℃の冷凍庫から出し、試験前少なくとも1日、−20℃の冷凍庫に置いた。サンプルは、骨が完全に溶解するのを確実にするために試験前の少なくとも2時間、−20℃の冷凍庫から出した。該椎骨は、解凍する間、生理食塩水溶液を染みこませたガーゼで別々に包んだ。
右の近位大腿は、大腿骨頸部骨折試験のために用いられた。試験前、近位大腿のX線を取得し、大腿骨頭がフィルムに対して平らであることを確認した。試験される骨は、−20℃の冷凍庫から出し、生理食塩水溶液で染みこませたガーゼで別々に包んだ。次いで、該サンプルが完全に溶解するのを確実にするために、これらのサンプルを室温、およそ21℃で2時間置いた。いずれの大腿骨頸部の周辺結合組織も試験前に除去した。
規格化されていない力学的性質は、三点曲げ、ねじれおよび椎骨圧縮試験で得られた負荷変位曲線から取得した。このデータは、幾何学的パラメーターを用いて規格化された。規格化されたパラメーターは、有意差のために比較された。問題が骨を試験している間に起こったら、これらの試験を分析から除外した。HAOD群由来の1サンプルは、右大腿に異常なカルスを有し、試験されなかった。統計検定で発見された範囲外のデータは、以下の分析から除外された。
三点曲げ試験は、大腿で実施し、皮質骨の力学的性質を表す。最終応力、破断ひずみ、破断までのエネルギーおよび弾性率のためのグラフで示す群のデータは、図6および7で見ることができる。
低用量(LAOD)および高用量(HAOD)がOVXコントロール群(p=0.062、p=0.076)と比較してより高い最終応力を有することを示す傾向に思われたが、LAODおよびHAOD群の両方共にAOD処置は、最終応力において、有意な差を示さなかった。HAOD群およびOVXは、同様のひずみおよび弾性率を有したが、LAOD群は、より高い弾性率(p=0.014)およびより低い破断ひずみ(p=0.005)を有した。図6および図7を参照されたい。
OVXモデルは、偽群と比較して、皮質骨の強度および剛性における減少によって機能的であることが示された。低用量および高用量のAODの薬物処置において、異なった効果が見られた。両方の用量は、OVXと比較して強度が増加したが、低用量の方がより有効であり、剛性も増加した。
椎骨圧縮試験は、5番目の腰椎体で実施し、骨梁の力学的性質を表す。椎体にあまりに近接しすぎて切り取られた処理を行ったいくつかの椎骨は、少し皮質殻を損なっていたので分析から除外した。
LAOD群は、OVXコントロール(p=0.05)より高い弾性率を有した。図8を参照されたい。
低用量のAOD処置は、弾性率の増加によって表されるOVXと比較して、増加した剛性傾向を示した。エストロゲン処置は、応力および弾性率の値がより高かったが、OVXによって引き起こされる強度および剛性の減少を防がなかった。全体として、皮質骨と比較して骨梁におけるAODの効果はより小さい。これは、AODが原型のGHである骨格において同様の効果を有することを示す。GHは、骨膜表面で皮質骨形成を上昇することが知られる。
AODの効果
AODは、大腿骨頸部変形および剛性に影響を与えた。OVXラットは、低用量AODおよび高用量AOD群(0.017、0.009)の両方より有意に大きい変形を有した。AOD群の両方共にOVX(p=0.092,p=0.023)より大きな剛性を有したが、HAOD群と僅かな有意差しかなかった。OVX群は、より高い柔軟性(p=0.013,p=0.008)のために破断まで有意により大きなエネルギーを有した。OVXラットに起こる骨質の減少が予防され得ることを示したAODで処置した群において、剛性の増加があった。図9および図10を参照されたい。
卵巣摘出は、大腿骨頸部の強度および剛性の低下を引き起こした。これは、大腿骨頸部における、主に骨梁の損失のためである。これはまた、OVXモデルが機能的であることを再確認する。低用量および高用量のAOD処置は、OVXと比較して増加した剛性傾向を示したが、強度に差はなかった。これは、無機物またはコラーゲンにおける変化のような物質変化のためである。
AODが卵巣摘出から生じる骨格変化を防がなかったので、骨代謝に影響しなかったという仮説を我々は立てた。本研究の結果は、我々の仮説が誤りであること、およびAODが骨格に影響することを示唆する。この事は、卵巣摘出で生じる多くの骨格変化を防ぐことによる本研究を通じて見られた。AOD9604ペプチドは、脂肪分解を刺激するドメインのみを含むが、骨代謝を刺激しないと考えられた。原型のGHは、体内で異なったいくつかの標的細胞を有するので、AODが骨細胞と相互作用するらしいと我々は信じる。
マウスのIGF−I
カタログ番号:DY791
このDuoSet ELISA発育キットは、細胞培養上清および血清における天然および組み換えマウスのインスリン様成長因子(IGF−I)を測定するために、サンドウィッチELISAの発育に必要である主要成分を含む1。各キットは、およそ15個の96ウェルプレート上でELISAを実施するために十分な物質を含むが、但し、下記の条件の条件を満たす2:
・該アッセイは、一般的なELISAプロトコルにまとめられるように実施される。
・推奨されるマイクロプレート、緩衝剤、希釈剤、基質および溶液が使用される。
この能書は、本製品を使用する前にその全体を読まなければならない。
すべての試薬は使用前に室温にする。
捕獲抗体(パート841413、1バイアル)
1.0mLのPBSで再構成する際、720μg/mLのハムスター抗マウスIGF−I。再構成後、2〜8℃で60日間まで保存するか、または等分し、6ヶ月間まで手動解凍冷凍庫で−20℃〜−70℃にて保存する3。担体蛋白質を含まずにPBS4中4.0μg/mLの作業濃度まで希釈する。
1.0mLの試薬希釈液(必要な溶液の部を参照)で再構成する際、36μg/mLのビオチン化したヤギ抗マウスIGF−I。再構成後、2〜8℃で60日間まで保存するか、または等分し、6ヶ月間まで手動解凍冷凍庫で−20℃〜−70℃にて保存する3。試薬希釈液中、200ng/mLの作業濃度まで希釈する4。
0.5mLの試薬希釈液(必要な溶液の部を参照)で再構成する際、100ng/mLの組み換えマウスIGF−I。標準品は、希釈液を調製する前に、穏やかに攪拌しながら最小15分間静置させる。再構成した標準品を60日間まで2〜8℃で保存するか、または等分し、−70℃で6ヶ月間まで保存する3。試薬希釈液中、2倍連続希釈液を用いる7点の標準曲線、および高い標準品の2000pg/mLは、再構成される。
セイヨウワサビ・パーオキシダーゼに共役する1.0mLのストレプトアビジン。最初の使用後、6ヶ月間まで2〜8℃で保存する3。凍結させない。試薬希釈液(必要な溶液の部を参照)を用いて、バイアルのラベルで特定された作業濃度まで希釈する4。
PBS
137mM NaCl,2.7mM KCl,8.1mM Na2HPO4,1.5mM KH2PO4,pH7.2−7.4,0.2μmで濾過した。
洗浄緩衝液
0.05%Tween(登録商標)20のPBS溶液、pH7.2−7.4(R&Dシステムズ カタログ番号WA126)。
遮断緩衝液
0.05%NaN3を含む、5%Tween20のPBS溶液
試薬希釈液1
5%Tween20のPBS溶液、pH7.2−7.4、0.2μmで濾過した。
基質溶液
呈色試験液A(H2O2)および呈色試験液B(テトラメチルベンジジン)の1:1混合液(R&Dシステムズ カタログ番号DY999)
停止溶液
2N H2SO4(R&Dシステムズ カタログ番号DY994)。
プレート調製
1.担体蛋白質を含まないPBS中で作業濃度まで捕獲抗体を希釈する。すぐに、96ウェル・マイクロプレート5を、希釈した捕獲抗体のウェルあたり100μLでコーティングする。該プレートを密封し、室温で終夜インキュベートする。
2.各ウェルを吸引し、洗浄緩衝液で洗浄し、該方法を2回繰り返し、合計3回洗浄する。噴射瓶、マニフォールド分配器またはオートウォッシャーを用いて、各ウェルを洗浄緩衝液(400μL)で満たすことによって洗浄する。各工程で液体の完全な除去は、好結果のために必須である。最後の洗浄後、プレートを吸引または反転することによって、残った洗浄緩衝液のいずれも除去し、きれいな紙タオルでそれを拭き取る。
3.300μLの遮断緩衝液を各ウェルに加えることによってプレートを遮断する。最低1時間室温でインキュベートする。
4.工程2のとおり、吸引/洗浄を繰り返す。プレートは、サンプル添加の準備が整う。
1.100μLのサンプルまたは標準品の試薬希釈液、または適当な希釈液をウェル毎に加える。粘着性ストリップで覆い、室温で2時間インキュベートする。
2.プレート調製の工程2のとおり吸引/洗浄を繰り返す。
3.試薬希釈液中で希釈した100μLの検出抗体を各ウェルに加える。新しい粘着性ストリップで覆い、室温で2時間インキュベートする。
4.プレート調製の工程2のとおり、吸引/洗浄を繰り返す。
5.100μLのストレプトアビジン−HRPの作業希釈液を各ウェルに加える。該プレートを覆い、室温で20分間インキュベートする。該プレートを直接光に置くことを避ける。
6.工程2のとおり、吸引/洗浄を繰り返す。
7.100μLの基質溶液を各ウェルに加える。室温で20分間インキュベートする。該プレートを直接光に置くことを避ける。
8.50μLの停止溶液を各ウェルに加える。該プレートを穏やかに軽くたたいて、完全な混合を確実にする。
9.マイクロプレートリーダーセットを用いて、450nmに対する各ウェルの光学密度をすぐに決定する。波長補正ができるなら、540nmまたは570nmにセットする。波長補正ができないなら、450nmでの読み取り値から540nmまたは570nmでの読み取り値を差し引く。この差し引きは、プレートにおける光学的な不完全さを修正する。補正せず直接450nmで行った読み取り値は、正確な値より高くなったり、低くなったりする。
このDuoSetは、ラベル上の期限日を超えて使用するべきではない。
再構成用および標準品の希釈用に選択される希釈液は、測定されるサンプルの環境を反映することが重要である。このプロトコルで提案される希釈液は、ほとんど細胞培養液上清のサンプルに適するべきである。使用前に、特定のサンプルのタイプ用の希釈液を確かめる。
使用する酵素および基質のタイプおよび捕獲/検出抗体の濃度は、異なった感受性および動的範囲を持つ免疫アッセイを作るために変更可能である。免疫アッセイ開発の基礎的な理解は、免疫アッセイにおける、これらの試薬の好結果の使用に要求される。
完全な一貫性のある洗浄技術は、適切なアッセイ性能のために必須である。洗浄緩衝液は、効果的に分配し、吸引またはデカントによってウェルから完全に除去するべきである。プレートを反転することによって残った洗浄緩衝液のいずれも除去し、それをきれいな紙タオルで拭き取る。
各工程用に未使用の貯蔵試薬およびピペットチップを使用する。
すべての標準品およびサンプルは、二回アッセイすることを薦める。
試薬および緩衝液の微生物混入を避ける。これは、アッセイの感受性を妨害し得る。大量の蛋白質を含む緩衝液は、滅菌条件で調製し、2〜8℃で保存するか、または毎日新たに調製する。
このキットで使用するために提案される停止溶液は、酸溶液である。この物質を使用する場合、目、手、顔、および衣類の保護具を着用する。
各標準品、コントロール、およびサンプルについて2回の読み取り値を平均し、平均ゼロ標準光学密度を差し引く。
4個のパラメーター・ロジスティック(4−PL)適合曲線を得ることができるコンピューターソフトを用いて、データを還元することによって標準曲線を作成する。別法として、x軸の濃度に対するy軸上の各標準品に対する平均吸収をプロットすることによって標準曲線を作って、グラフ上の点を通る最適合曲線を描く。データは、O.D.のlogに対するIGF−I濃度のlogをプロットすることによって直線化され得て、最適曲線は、回帰分析によって決定されうる。この手順は、適切ではあるが精度が劣るデータの適合を与える。サンプルが希釈されているなら、標準曲線から読み取った濃度は、希釈因子によって多様である。
この標準曲線は、実験目的のためのみである。
標準曲線は、アッセイされたサンプルの各セットのために作られるべきである。
以下のグラフは、このマウスIGF−IのDuoSetを用いた場合に得られる典型的なデータを表す。該標準曲線は、コンピューターから得られた4−PL適合曲線を用いて計算された。
50ng/mLの組み換えマウスのIGF−IIを含むサンプルをアッセイし、交差反応性または干渉を全く示さなかった。
25ng/mLの組み換えヒトIGF−Iを含むサンプルは、63pg/mLとして読み取る(0.2%交差反応性)。
このDuoSetは、R&Dシステムズで生産され、高度に精製した大腸菌で発現した組み換えマウスのIGF−Iに対して校正される。
2個別の結果は、技術、プラスチック器および水源の違いのために変更しうる。
3但しこれは、キットの期限日以内である。
4最初の再構成後、すべての成分を最低15分間穏やかに攪拌しながら置いておく。作業希釈液は、調製し、すぐに使用するべきである。
5コスターEIAプレート(カタログ番号2592)が推奨される。
R&Dシステムズ社、614 マッキンリー・プレイス NE、ミネアポリス、ミネソタ州 55413 アメリカ合衆国
1-800-343-7475
Tel: (612) 379-2956
Fax: (612) 656-4400
R&Dシステムズ社・ヨーロッパ 19 バートンレーンアビントン・サイエンスパークアビントン, OX14 3NB 英国
Tel: +44 (0)1235 529449
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Claims (24)
- 脂質代謝を調節する作用を有するが、IGF−1にそれほど影響がない治療上の有効量のペプチドを哺乳類に投与することを特徴とする哺乳類において骨障害を予防または治療する方法。
- 該ペプチドがヒト成長ホルモン配列の177−191番目のアミノ酸残基またはその機能的なアナログまたはバリアントである、請求項1に記載の方法。
- 該ペプチドが脂質合成活性を減少することができ;および/または脂肪分解を刺激することができる請求項1または請求項2に記載の方法。
- 該ペプチドが少なくとも哺乳類の成長ホルモンのジスルフィド結合したループを含む、請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
- 該ペプチドがヒト成長ホルモンの182−189番目のアミノ酸(hGH182−189)を含む、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 該ペプチドがヒト成長ホルモンの177−191番目のアミノ酸(hGH177−191)を含む、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 該ペプチドがTyr−hGHの177−191番目であって、該配列が、Tyr Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Pheを有する、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 該ペプチドが融合パートナーと共役する、請求項1〜7のいずれかに記載の方法。
- 該ペプチドが医薬組成物として投与される、請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
- 該医薬組成物が医薬的に許容される担体を含む、請求項9に記載の方法。
- 該医薬組成物がさらに骨障害に対して活性なさらなる薬剤を含む、請求項9または請求項10に記載の方法。
- 該さらなる活性な薬剤が、1またはそれ以上のカルシウム、骨塩、γ−リノレン酸、ビタミンD、ビタミンK、エストロゲン、エストロゲン様化合物、ビホスフェートおよびイソフラボンから選択される、請求項11に記載の方法。
- 該組成物がエネルギー源をさらに含む、請求項11または請求項12に記載の方法。
- 該ペプチドが経口、舌下、口腔、鼻腔内、吸入によって、経皮、局所、または非経口的に投与され、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、頭蓋内、注射または注入技術によって投与される、請求項1〜13のいずれかに記載の方法。
- 該ペプチドが遺伝子組み換え食物の形態において経口投与される、請求項1〜13のいずれか一つに記載の方法。
- 該骨障害が骨代謝変化によって特徴付けられる、請求項1〜15に記載のいずれかの方法。
- 該骨障害が閉経後骨粗鬆症、骨減少症、パジェット病、癌患者における溶骨性転移、肝臓疾患における骨形成異常、および腎不全または血液透析、骨折、骨の手術、老化、妊娠、および栄養失調によって引き起こされる骨代謝変化を含む、骨粗鬆症から選択される請求項16に記載の方法。
- 該哺乳類がまた、成長ホルモン欠乏でもある、請求項1〜17のいずれかに記載の方法。
- 該哺乳類がヒトである、請求項1〜18のいずれかに記載の方法。
- 哺乳類における、骨障害の治療または予防における使用のための医薬品製造におけるC末端成長ホルモンフラグメントの使用。
- 該医薬品がまた、骨障害に対して活性なさらなる薬剤もさらに含む、請求項20に記載の使用。
- 該さらなる活性化剤が1またはそれ以上のカルシウム、骨塩、γ−リノレン酸、ビタミンD、ビタミンK、エストロゲン、エストロゲン様化合物、ビホスフェートおよびイソフラボンから選択される、請求項21に記載の方法。
- 該組成物がエネルギー源をさらに含む、請求項11または請求項12に記載の方法。
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