CN1903279A - 一种枳壳药材的提取分离方法 - Google Patents
一种枳壳药材的提取分离方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1903279A CN1903279A CN 200510012276 CN200510012276A CN1903279A CN 1903279 A CN1903279 A CN 1903279A CN 200510012276 CN200510012276 CN 200510012276 CN 200510012276 A CN200510012276 A CN 200510012276A CN 1903279 A CN1903279 A CN 1903279A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mobile phase
- component
- eluent
- methanol
- acquisition time
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims description 37
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims description 36
- 235000007716 Citrus aurantium Nutrition 0.000 title abstract description 5
- 244000240100 sour orange Species 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 195
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 192
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 69
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 60
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 22
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 claims description 22
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 21
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 21
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 20
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims description 20
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 18
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- 239000012567 medical material Substances 0.000 claims description 15
- 239000001606 7-[(2S,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chroman-4-one Substances 0.000 claims description 11
- DFPMSGMNTNDNHN-ZPHOTFPESA-N naringin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC=2C=C3O[C@@H](CC(=O)C3=C(O)C=2)C=2C=CC(O)=CC=2)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O DFPMSGMNTNDNHN-ZPHOTFPESA-N 0.000 claims description 11
- 229940052490 naringin Drugs 0.000 claims description 11
- 229930019673 naringin Natural products 0.000 claims description 11
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 10
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 10
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 10
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 9
- HXTFHSYLYXVTHC-AJHDJQPGSA-N narirutin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC=2C=C3O[C@@H](CC(=O)C3=C(O)C=2)C=2C=CC(O)=CC=2)O1 HXTFHSYLYXVTHC-AJHDJQPGSA-N 0.000 claims description 9
- ARGKVCXINMKCAZ-UHFFFAOYSA-N neohesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)OC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 ARGKVCXINMKCAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- ULSUXBXHSYSGDT-UHFFFAOYSA-N tangeretin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=CC(=O)C2=C(OC)C(OC)=C(OC)C(OC)=C2O1 ULSUXBXHSYSGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000001100 (2S)-5,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chroman-4-one Substances 0.000 claims description 5
- QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N Hesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(COC4C(C(O)C(O)C(C)O4)O)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- QUQPHWDTPGMPEX-UTWYECKDSA-N aurantiamarin Natural products COc1ccc(cc1O)[C@H]1CC(=O)c2c(O)cc(O[C@@H]3O[C@H](CO[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]4O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)cc2O1 QUQPHWDTPGMPEX-UTWYECKDSA-N 0.000 claims description 5
- APSNPMVGBGZYAJ-GLOOOPAXSA-N clematine Natural products COc1cc(ccc1O)[C@@H]2CC(=O)c3c(O)cc(O[C@@H]4O[C@H](CO[C@H]5O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]5O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O)cc3O2 APSNPMVGBGZYAJ-GLOOOPAXSA-N 0.000 claims description 5
- QUQPHWDTPGMPEX-QJBIFVCTSA-N hesperidin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]4[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 QUQPHWDTPGMPEX-QJBIFVCTSA-N 0.000 claims description 5
- VUYDGVRIQRPHFX-UHFFFAOYSA-N hesperidin Natural products COc1cc(ccc1O)C2CC(=O)c3c(O)cc(OC4OC(COC5OC(O)C(O)C(O)C5O)C(O)C(O)C4O)cc3O2 VUYDGVRIQRPHFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940025878 hesperidin Drugs 0.000 claims description 5
- ARGKVCXINMKCAZ-UZRWAPQLSA-N neohesperidin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@H]3[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 ARGKVCXINMKCAZ-UZRWAPQLSA-N 0.000 claims description 4
- HXTFHSYLYXVTHC-ZPHOTFPESA-N narirutin Natural products C[C@@H]1O[C@H](OC[C@H]2O[C@@H](Oc3cc(O)c4C(=O)C[C@H](Oc4c3)c5ccc(O)cc5)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]2O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HXTFHSYLYXVTHC-ZPHOTFPESA-N 0.000 claims description 3
- 235000008603 tangeritin Nutrition 0.000 claims description 3
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 19
- 244000183685 Citrus aurantium Species 0.000 abstract description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 87
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 35
- 241000628997 Flos Species 0.000 description 17
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 17
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 16
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 8
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 5
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- YRCWQPVGYLYSOX-UHFFFAOYSA-N synephrine Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C=C1 YRCWQPVGYLYSOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000003725 endotheliocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 3
- 206010002660 Anoxia Diseases 0.000 description 2
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 2
- 241000209020 Cornus Species 0.000 description 2
- 241000218176 Corydalis Species 0.000 description 2
- 235000011201 Ginkgo Nutrition 0.000 description 2
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 description 2
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 description 2
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 2
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 2
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 2
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- -1 electuary Substances 0.000 description 2
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000010135 fructus aurantii immaturus Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 2
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 229960003684 oxedrine Drugs 0.000 description 2
- 235000010603 pastilles Nutrition 0.000 description 2
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N (+)-borneol Chemical compound C1C[C@@]2(C)[C@@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 1
- HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenylhydrazine Chemical class NNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000242759 Actiniaria Species 0.000 description 1
- 241001116389 Aloe Species 0.000 description 1
- 241000563984 Ampelopsis Species 0.000 description 1
- 241000746375 Andrographis Species 0.000 description 1
- 241000976983 Anoxia Species 0.000 description 1
- XOJVHLIYNSOZOO-SWOBOCGESA-N Arctiin Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C[C@@H]1[C@@H](CC=2C=C(OC)C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=CC=2)C(=O)OC1 XOJVHLIYNSOZOO-SWOBOCGESA-N 0.000 description 1
- 244000080767 Areca catechu Species 0.000 description 1
- 235000006226 Areca catechu Nutrition 0.000 description 1
- 241000489492 Arisaema Species 0.000 description 1
- 241000255791 Bombyx Species 0.000 description 1
- OBDQFFPGPQKMDW-UHFFFAOYSA-N CNCCC1=CC=C(C=C1)O.CNCCC1=CC=C(C=C1)O Chemical compound CNCCC1=CC=C(C=C1)O.CNCCC1=CC=C(C=C1)O OBDQFFPGPQKMDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000959626 Calvatia Species 0.000 description 1
- 241001164374 Calyx Species 0.000 description 1
- 241001649190 Campsis Species 0.000 description 1
- 241000218236 Cannabis Species 0.000 description 1
- 241000005787 Cistanche Species 0.000 description 1
- 241000903946 Clematidis Species 0.000 description 1
- 241000756943 Codonopsis Species 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 1
- 241000190633 Cordyceps Species 0.000 description 1
- 239000008589 Cortex Fraxini Substances 0.000 description 1
- 240000001008 Dimocarpus longan Species 0.000 description 1
- 244000236655 Diospyros kaki Species 0.000 description 1
- 235000008597 Diospyros kaki Nutrition 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 235000000235 Euphoria longan Nutrition 0.000 description 1
- 244000268590 Euryale ferox Species 0.000 description 1
- 235000006487 Euryale ferox Nutrition 0.000 description 1
- 241000222336 Ganoderma Species 0.000 description 1
- 206010018045 Gastroptosis Diseases 0.000 description 1
- 240000008669 Hedera helix Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000009636 Huang Qi Substances 0.000 description 1
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 1
- QQILFGKZUJYXGS-UHFFFAOYSA-N Indigo dye Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C3=C(C4=CC=CC=C4N3)O)=NC2=C1 QQILFGKZUJYXGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 235000015511 Liquidambar orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 241000283956 Manis Species 0.000 description 1
- 241000217407 Margaritifera Species 0.000 description 1
- 241000180649 Panax notoginseng Species 0.000 description 1
- 235000003143 Panax notoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000009388 Parthenocissus quinquefolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000237636 Pheretima Species 0.000 description 1
- 241001250596 Pleione Species 0.000 description 1
- 241000222640 Polyporus Species 0.000 description 1
- 241001619461 Poria <basidiomycete fungus> Species 0.000 description 1
- 244000018795 Prunus mume Species 0.000 description 1
- 235000011158 Prunus mume Nutrition 0.000 description 1
- 244000044425 Quisqualis indica Species 0.000 description 1
- 241000195474 Sargassum Species 0.000 description 1
- 239000004870 Styrax Substances 0.000 description 1
- 244000028419 Styrax benzoin Species 0.000 description 1
- 235000000126 Styrax benzoin Nutrition 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241001643642 Viticis Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 230000007953 anoxia Effects 0.000 description 1
- 239000010231 banlangen Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000009670 cang er zi wan Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N chembl176323 Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@]3(C)CC(N=C4C[C@]5(C)CCC6[C@]7(C)CC[C@@H]([C@]7(CC[C@]6(C)[C@@]5(C)CC4=N4)C)CCCCCCCC)=C4C[C@]3(C)CCC2[C@]2(C)CC[C@H](CCCCCCCC)[C@]21C YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000002662 enteric coated tablet Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000000630 fibrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007941 film coated tablet Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000009969 fructus bruceae Substances 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229940056582 human hair preparation Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N monobenzone Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940105623 neo-synephrine Drugs 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- SONNWYBIRXJNDC-VIFPVBQESA-N phenylephrine Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=CC(O)=C1 SONNWYBIRXJNDC-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 1
- 235000017807 phytochemicals Nutrition 0.000 description 1
- 229930000223 plant secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000009806 pulsatillae Substances 0.000 description 1
- 239000008517 radix Trichosanthis Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000009286 sanguis draxonis Substances 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- UAJTZZNRJCKXJN-UHFFFAOYSA-M sodium;2-dodecoxy-2-oxoethanesulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOC(=O)CS([O-])(=O)=O UAJTZZNRJCKXJN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000007940 sugar coated tablet Substances 0.000 description 1
- 230000035922 thirst Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了枳壳标准化提取分离方法，采用该方法可较大程度地将中药材中化学成分提取出来并进一步分离获得枳壳中不同极性的化学组分；具体的说就是将枳壳药材按极性分成若干化学组分，每个组分中仅包含几个主要化合物，由这些药材组分构成一个药材组分库。对药材组分库能够进行药物筛选，从而发现新药。该标准化提取分离方法不需要对每个药材都建立一套提取分离方法，大大缩短了药材提取分离的周期，同时也减少人力物力的消耗；该方法简便、推广性好，适用大部分药材。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体而言是涉及枳壳提取、分离标准化。
背景技术
目前，在全球范围内，中草药都有一定的市场，随着人们对健康要求认识水平的增高以及人口的老龄化，亚健康状态化，人们更加渴望回归自然，利用纯天然程度高的药物治疗、预防一些化学合成药物所不能解决得问题，因此天然植物药的应用超出它原来民族传统文化的背景。从天然药物中寻求副作用小、且物美价廉的药物成为世界各国医药企业所追逐的目标。欧共体对草药进行了统一立法，加拿大和澳大利亚等国草药地位已经合法化，美国政府也已起草了植物药管理办法，开始接受天然药物的复方混合制剂作为治疗药，这些为中药作为治疗药进入国际医药市场提供了良好的国际环境。另一方面，随着全球经济一体化进程的加快，特别是我国正式加入WTO，中国医药市场融入国际医药大市场的广度和深度将进一步加剧。面临强大跨国医药集团的激烈竞争以及日本、韩国、印度、泰国等亚洲国家传统医药产品和德国、法国等欧洲国家植物药的巨大冲击，我国传统中药产生的众多产品由于尚不能符合国际医药市场的标准和要求而被拒之门外。
中药材提取的标准化和中药制备方法的标准化是中成药走向国际市场或者真正实现大工业生产的关键环节，也是中国医药工作者和国外研究天然植物药的科研人员一直努力研究的方向。目前关于中药的提取方法是中药领域研究的重点，科研人员一直将研究的目光着重于采用何种方法才能从中药材中获得的更多的有效成分，因此目前的中药材提取的局面是：针对不同的中药材其有效成分的提取方法也不同，而针对不同的中药材采用不同的提取方法需要有大量不同的提取设备用于支持中药材的提取，这不适于中药材提取的标准化。
枳壳为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实。中医认为，其味苦、辛、酸，性温，归脾、胃经。具有理气宽中，行滞消胀之功效，适用于治疗胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，痰饮内停，胃下垂，脱肛，子官脱垂。现代研究表明，枳壳中主要含橙皮甙(hesperidin)、柚皮甙(naringin)、新橙皮甙(meohesperidin)，以及苦味成分苦橙甙(aurantiamrin)，苦橙酸(aurantiamaric acid)，苦味树脂，对羟福林(辛弗林，synephrine)及N-甲基酪胺(N-methyltyramine)等。
如何确定一种提取、分离标准化方法，使枳壳中的药物活性成分不仅能够提取完全，还可以通过分离方法进一步分离所获得的药物活性成分。该提取、分离标准化的确立是目前中药实现现代化的关键因素。
发明内容
本发明的目的在于提供一种枳壳提取、分离标准化。具体的说就是将枳壳提取物分成若干组分，每个组分包含几个主要化合物，由这些药材组分构成了一个药材组分库。对药材组分库能够进行药物筛选，从而发现新药。
为了实现枳壳提取的现代化、标准化，本发明人通过大量的试验，对目前枳壳的有效成分的提取方法进行归纳和整理，以寻求一种可标准化的提取方法，即在该提取条件下采用该标准提取方法对枳壳进行提取，可以最大限度的获得中药中的有效成分。
本发明所采用的枳壳提取、分离标准化是本发明人通过试验，对同一味中药材采用不同的提取方法进行比较后，所得到的可适于工业化生产的枳壳提取、分离标准化。
本发明可以通过下列步骤实施：
(1)提取工艺：称取枳壳药材，将其粉碎后过筛，然后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液fr.1。在药渣中加入乙醇，加热提取得提取液fr.2。在药渣中最后加入水，加热提取得提取液fr.3。
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩成浸膏后，用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6。将提取液fr.2浓缩成浸膏后，用甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用低浓度的甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换中等浓度的甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，最后用纯甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9。
(3)制备分离工艺：用制备液相色谱继续分离前面工艺中得到的fr.5和fr.8。色谱柱为半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，在相应的时间段收集馏分，获得经过了进一步分离的各个组分。
优选的本发明可以通过下列步骤实施：
(1)提取工艺：称取枳壳药材，将其粉碎后过筛，然后加入5～12倍量体积比为1∶1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.1。在药渣中加入5～12倍量70％乙醇，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.2。在药渣中最后加入水，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.3。
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩成浸膏后，用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50∶1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换体积比为10∶1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6。将提取液fr.2浓缩成浸膏后，用2～10％甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用2～10％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换40～80％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，最后用100％甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9。
(3)制备分离工艺：用制备液相色谱继续分离前面工艺中得到的fr.5和fr.8。色谱柱为半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，流速为3ml/min，柱温为室温，在相应的时间段收集馏分，获得经过进一步分离的各个组分。
最佳的本发明可以通过下列步骤实施：
(1)提取工艺：称取枳壳药材，将其粉碎后过筛，然后加入8倍量体积比为1∶1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.1。在药渣中加入8倍量70％乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.2。在药渣中最后加入水，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.3。
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩成浸膏，用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50∶1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换体积比为10∶1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6。将提取液fr.2浓缩成浸膏，用5％甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用5％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换60％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，最后用100％甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9。
(3)制备分离工艺：本发明中为了从步骤(2)中获得枳壳提取物中fr.5和fr.8更加具体的有效成分，用制备液相色谱继续分离fr.5和fr.8。
fr.5的分离条件：色谱柱为汉邦半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相为水(A)和乙腈(B)，流速为3ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：
0min时，流动相A为95％的水，流动相B为5％的乙腈溶液；
30min时，流动相A为35％的水，流动相B为65％的乙腈溶液；
35min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
40min时，流动相A为5％的水，流动相B为95％的乙腈溶液；
50min时，流动相A为5％的水，流动相B为95％的乙腈溶液；
fr.5分离结果：由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.51，收集时间10.4-16.2min；
组分fr.52，收集时间16.2-19.6min；
组分fr.53，收集时间19.6-23.9min；
组分fr.54，收集时间23.9-31.0min；
组分fr.55，收集时间31.0-36.8min；
组分fr.56，收集时间36.8-44.7min；
组分fr.57，收集时间44.7-50.0min；
fr.8分离条件：色谱柱为Agilent制备柱(Zorbax SB-C18；21.2mm×250mm)；采用梯度洗脱，流动相为水(A)和乙腈(B)，流速为10ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：
0min时，流动相A为85％的水，流动相B为15％的乙腈溶液；
5min时，流动相A为78％的水，流动相B为22％的乙腈溶液；
20min时，流动相A为78％的水，流动相B为22％的乙腈溶液；
28min时，流动相A为72％的水，流动相B为28％的乙腈溶液；
40min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
45min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
fr.8分离结果：由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.81，收集时间2.0-8.2min；
组分fr.82，收集时间8.2-12.6min；
组分fr.83，收集时间12.6-18.6min；
组分fr.84，收集时间18.6-20.2min；
组分fr.85，收集时间20.2-25.5min；
组分fr.86，收集时间22.5-35.4min；
组分fr.87，收集时间35.4-43.5min。
为了获得具体的枳壳有效成分，最佳的本发明提取分离方法为：
(1)提取工艺：称取枳壳药材250g，将其粉碎后过筛，然后加入8倍量体积比为1∶1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.1。在药渣中加入8倍量70％乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.2。在药渣中最后加入水，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.3。
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩得41.8g浸膏，取fr.1浸膏15.2g用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50∶1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换体积比为10∶1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，浓缩得2.4g样品，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6。将提取液fr.2浓缩得60.2g浸膏，取10.0g浸膏用5％甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用5％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换60％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，浓缩得5.4g样品，最后用100％甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9。
(3)制备分离工艺：本发明中为了从步骤(2)中获得枳壳提取物中fr.5和fr.8更加具体的有效成分，用制备液相色谱继续分离fr.5和fr.8。
fr.5的分离条件：色谱柱为汉邦半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相为水(A)和乙腈(B)，流速为3ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：
0min时，流动相A为95％的水，流动相B为5％的乙腈溶液；
30min时，流动相A为35％的水，流动相B为65％的乙腈溶液；
35min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
40min时，流动相A为5％的水，流动相B为95％的乙腈溶液；
50min时，流动相A为5％的水，流动相B为95％的乙腈溶液；
fr.5分离结果：取组分fr.5共1.6g，用乙醇溶解进样，由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.51，收集时间2.0-5.6min，111.2mg；
组分fr.52，收集时间5.6-14.0min，40.4mg；
组分fr.53，收集时间14.0-18.2min，77.4mg；
组分fr.54，收集时间18.2-27.1min，189.9mg；
组分fr.55，收集时间27.1-30.3min，104.5mg；
组分fr.56，收集时间30.3-35.2min，39.7mg；
组分fr.57，收集时间35.2-38.4min，115.8mg。
fr.8分离条件：色谱柱为Agilent制备柱(Zorbax SB-C18；21.2mm×250mm)；采用梯度洗脱，流动相为水(A)和乙腈(B)，流速为10ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：
0min时，流动相A为85％的水，流动相B为15％的乙腈溶液；
5min时，流动相A为78％的水，流动相B为22％的乙腈溶液；
20min时，流动相A为78％的水，流动相B为22％的乙腈溶液；
28min时，流动相A为72％的水，流动相B为28％的乙腈溶液；
40min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
45min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
fr.8分离结果：取组分fr.8共1.8g，用20％的甲醇溶解进样，由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.81，收集时间2.0-12.1min，153.6mg；
组分fr.82，收集时间12.1-17.5min，137.1mg；
组分fr.83，收集时间17.5-23.6min，98.8mg；
组分fr.84，收集时间23.6-27.5min，35.8mg；
组分fr.85，收集时间27.5-36.0min，362.9mg；
组分fr.86，收集时间36.0-45min，287.3mg；
组分fr.87，收集时间36.0-45min，37.9mg。
本发明中，枳壳各组分中所含化合物见表1，其分析鉴定方法参见实施例三。
表1.枳壳各组分中所含化合物
| 枳壳组分 | 已鉴定的化合物 |
| fr.53fr.54fr.55fr.84fr.85fr.86 | 柚皮苷元；Nobelitin；Tangeritin；异柚皮苷，柚皮苷；柚皮苷，橙皮苷；柚皮苷，新橙皮苷； |
以上枳壳及其提取溶液在工业化提取时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或减小，但其重量配比比例不变。
本发明所建立的提取、分离标准化可以适用于目前中药中的任何一种中药材，例如可用于阿魏、艾叶、安息香、柏子仁、鳖甲、槟榔、薄荷、蓖麻子、蓄、补骨脂、板蓝根、荜茇、巴豆、巴戟天、北豆根、北沙参、白及、白头翁、白芍、白芷、白附子、白茅根、白果、白前、白扁豆、白蔹、白鲜皮、白薇、半边莲、半枝莲、半夏、百合、冰片、柴胡、蝉蜕、楮实子、常山、椿皮、穿山甲、穿心莲、赤小豆、赤石脂、赤芍、苍术、苍耳子、沉香、垂盆草、侧柏叶、草乌、草乌叶、草豆蔻、草果、川贝母、川牛膝、川乌、川芎、川楝子、车前子、淡豆豉、党参、淡竹叶、杜仲、独活、胆南星、大蓟、大腹皮、牡丹皮、煅石膏、冬瓜皮、冬虫夏草、地龙、地肤子、地骨皮、熟地黄、地锦草、地榆、当归、灯心草、丁香、刀豆、大青叶、大枣、大黄、鹅不食草、莪术、儿茶、榧子、浮萍、萆解、覆盆子、佛手、附子、茯苓、防己、防风、番泻叶、蜂蜜、蛤蚧、桂枝、葛根、藁本、高良姜、骨碎补、谷芽、谷精草、狗脊、枸杞子、枸骨叶、钩藤、甘松、甘草、甘遂、瓜蒌、瓜蒌子、瓜蒌皮、关木通、干姜、炮姜、干漆、鹤虱、黄芪、黄精、海藻、槐花、海风藤、荷叶、黄芩、黄连、黄柏、花椒、何首乌、虎杖、胡黄连、厚朴、化橘红、火麻仁、合欢皮、合欢花、红大戟、红花、黑芝麻、菊花、僵蚕、桔梗、橘核、姜黄、鸡血藤、鸡冠花、金果榄、金沸草、金荞麦、金钱草、金银花、降香、荆芥、韭菜子、决明子、款冬花、诃子、苦杏仁、苦参、苦楝皮、莱菔子、雷丸、凌霄花、鹿衔草、漏芦、路路通、莲子、络石藤、芦荟、芦根、两头尖、两面针、连翘、灵芝、罗布麻叶、罗汉果、荔枝核、龙胆、龙眼肉、老鹳草、墨旱莲、麻黄、蔓荆子、满山红、满山红油、密蒙花、梅花、麻黄、麦冬、麦芽、玫瑰花、明党参、马鞭草、马兜铃、马钱子、马钱子粉、马勃、马齿苋、木瓜、木香、木贼、南沙参、女贞子、牛蒡子、牛膝、藕节、蒲黄、蒲公英、枇杷叶、佩兰、片姜黄、瞿麦、秦皮、拳参、芡实、羌活、青木香、青风藤、青皮、青葙子、青蒿、青黛、茜草、牵牛子、前胡、千年健、千金子、秦艽、蕤仁、肉豆蔻、肉苁蓉、肉桂、人参、人参叶、石菖蒲、锁阳、桑叶、商陆、桑椹、蛇床子、桑白皮、桑枝、桑枝、桑寄生、娑罗子、酸枣仁、射干、苏合香、沙苑子、使君子、柿蒂、砂仁、山豆根、山茱萸、山药、山慈菇、山楂、小蓟、升麻、水牛角、水牛角浓缩粉、石韦、石决明、石斛、石榴皮、生姜、丝瓜络、三七、三棱、葶苈子、菟丝子、桃仁、通草、檀香、天花粉、天竺黄、天南星、天麻、天葵子、太子参、土荆皮、土茯苓、吴茱萸、威灵仙、王不留行、五加皮、五味子、五倍子、瓦楞子、乌药、乌梅、夏天无、续断、旋覆花、豨莶草、薤白、夏枯草、辛夷、香加皮、香附、香橼、香薷、小茴香、仙茅、仙鹤草、玄参、玄明粉、西洋参、血余炭、血竭、徐长卿、淫羊藿、益母草、银杏叶、薏苡仁、银柴胡、远志、芫花、郁李仁、郁金、鱼腥草、茵陈、鸦胆子、月季花、玉竹、延胡索、浙贝母、猪牙皂、紫苏子、紫菀、紫花地丁、紫草、猪苓、皂角刺、知母、泽兰、泽泻、珍珠母、枳实、栀子。
按照本发明方法所获得的枳壳有效成分可以制成药剂学上任何一种形式，包括针剂和口服制剂。其中针剂包括注射液、滴注液、粉针剂；口服制剂包括颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩片、微丸等。
对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进，例如所选用的溶液可以是其他低级醇或者是其他有机溶剂，但只要使用本发明所述的提取方法，均在本发明保护范围之内。
附图说明
下面给出枳壳指纹图谱，枳壳水溶性各组分紫外光谱图、枳壳水溶性各组分质谱图、枳壳脂溶性各组分紫外光谱图、枳壳脂溶性各组分质谱图，旨在进一步说明本发明，但对本发明并不构成限制。
图1枳壳指纹图谱
图2枳壳水溶性各组分紫外图谱
图3枳壳水溶性各组分质谱图
图4枳壳脂溶性各组分紫外图谱
图5枳壳脂溶性各组分质谱图
具体实施方式
实施例一
(1)提取工艺：称取250g枳壳药材，将其粉碎后过筛，然后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液fr.1。在药渣中加入乙醇，加热提取得提取液fr.2。在药渣中最后加入水，加热提取得提取液fr.3。
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩得40.1g浸膏，取fr.1浸膏15g用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，浓缩得2.2g样品，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6。将提取液fr.2浓缩得56.3g浸膏，取10.0g浸膏用甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用低浓度的甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换中等浓度的甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，浓缩得4.8g样品，最后用纯甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9。
(3)制备分离工艺：用制备液相色谱继续分离前面工艺中得到的fr.5和fr.8。色谱柱为半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，在相应的时间段收集馏分，获得经过了进一步分离的各个组分。
fr.5分离结果：取组分fr.5共1.5g，用乙醇溶解进样，由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.51，收集时间2.0-5.6min，108.2mg；
组分fr.52，收集时间5.6-14.0min，37.4mg；
组分fr.53，收集时间14.0-18.2min，72.8mg；
组分fr.54，收集时间18.2-27.1min，182.5mg；
组分fr.55，收集时间27.1-30.3min，98.2mg；
组分fr.56，收集时间30.3-35.2min，36.1mg；
组分fr.57，收集时间35.2-38.4min，111.3mg。
fr.8分离结果：取组分fr.8共2.0g，用20％的甲醇溶解进样，由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.81，收集时间2.0-12.1min，148.8mg；
组分fr.82，收集时间12.1-17.5min，132.6mg；
组分fr.83，收集时间17.5-23.6min，91.4mg；
组分fr.84，收集时间23.6-27.5min，32.2mg；
组分fr.85，收集时间27.5-36.0min，352.7mg；
组分fr.86，收集时间36.0-45min，277.7mg；
组分fr.87，收集时间36.0-45min，34.5mg。
实施例二
(1)提取工艺：称取500g枳壳药材，将其粉碎后过筛，然后加入5～12倍量体积比为1∶1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.1。在药渣中加入5～12倍量70％乙醇，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.2。在药渣中最后加入水，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.3。
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩得78.9g浸膏，取fr.1浸膏30g用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50∶1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换体积比为10∶1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，浓缩得4.6g样品，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6。将提取液fr.2浓缩得114.8g浸膏，取20.0g浸膏用2～10％甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用2～10％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换40～80％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，浓缩得9.9g样品，最后用100％甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9。
(3)制备分离工艺：用制备液相色谱继续分离前面工艺中得到的fr.5和fr.8。色谱柱为半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，流速为3ml/min，柱温为室温，在相应的时间段收集馏分，获得经过进一步分离的各个组分。
fr.5分离结果：取组分fr.5共3g，用乙醇溶解进样，由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.51，收集时间2.0-5.6min，206.3mg；
组分fr.52，收集时间5.6-14.0min，73.9mg；
组分fr.53，收集时间14.0-18.2min，142.8mg；
组分fr.54，收集时间18.2-27.1min，366.4mg；
组分fr.55，收集时间27.1-30.3min，199.5mg；
组分fr.56，收集时间30.3-35.2min，74.1mg；
组分fr.57，收集时间35.2-38.4min，216.7mg。
fr.8分离结果：取组分fr.8共3.5g，用20％的甲醇溶解进样，由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.81，收集时间2.0-12.1min，298.8mg；
组分fr.82，收集时间12.1-17.5min，262.4.1mg；
组分fr.83，收集时间17.5-23.6min，190.1mg；
组分fr.84，收集时间23.6-27.5min，62.3mg；
组分fr.85，收集时间27.5-36.0min，716.9mg；
组分fr.86，收集时间36.0-45min，566.4mg；
组分fr.87，收集时间36.0-45min，72.2mg。
实施例三
一、枳壳药材的提取分离
(1)提取工艺：称取枳壳药材250g，将其粉碎后过筛，然后加入8倍量体积比为1∶1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.1。在药渣中加入8倍量70％乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.2。在药渣中最后加入水，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.3。
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩得41.8g浸膏，取fr.1浸膏15.2g用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50∶1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换体积比为10∶1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，浓缩得2.4g样品，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6。将提取液fr.2浓缩得60.2g浸膏，取10.0g浸膏用5％甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用5％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换60％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，浓缩得5.4g样品，最后用100％甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9。
(3)制备分离工艺：本发明中为了从步骤(2)中获得牡丹皮提取物中fr.5和fr.8更加具体的有效成分，用制备液相色谱继续分离fr.5和fr.8。
fr.5的分离条件：色谱柱为汉邦半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相为水(A)和乙腈(B)，流速为3ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：
0min时，流动相A为95％的水，流动相B为5％的乙腈溶液；
30min时，流动相A为35％的水，流动相B为65％的乙腈溶液；
35min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
40min时，流动相A为5％的水，流动相B为95％的乙腈溶液；
50min时，流动相A为5％的水，流动相B为95％的乙腈溶液；
fr.5分离结果：取组分fr.5共1.6g，用乙醇溶解进样，由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.51，收集时间2.0-5.6min，111.2mg；
组分fr.52，收集时间5.6-14.0min，40.4mg；
组分fr.53，收集时间14.0-18.2min，77.4mg；
组分fr.54，收集时间18.2-27.1min，189.9mg；
组分fr.55，收集时间27.1-30.3min，104.5mg；
组分fr.56，收集时间30.3-35.2min，39.7mg；
组分fr.57，收集时间35.2-38.4min，115.8mg。
fr.8分离条件：色谱柱为Agilent制备柱(Zorbax SB-C18；21.2mm×250mm)；采用梯度洗脱，流动相为水(A)和乙腈(B)，流速为10ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：
0min时，流动相A为85％的水，流动相B为15％的乙腈溶液；
5min时，流动相A为78％的水，流动相B为22％的乙腈溶液；
20min时，流动相A为78％的水，流动相B为22％的乙腈溶液；
28min时，流动相A为72％的水，流动相B为28％的乙腈溶液；
40min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
45min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
fr.8分离结果：取组分fr.8共1.8g，用20％的甲醇溶解进样，由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.81，收集时间2.0-12.1min，153.6mg；
组分fr.82，收集时间12.1-17.5min，137.1mg；
组分fr.83，收集时间17.5-23.6min，98.8mg；
组分fr.84，收集时间23.6-27.5min，35.8mg；
组分fr.85，收集时间27.5-36.0min，362.9mg；
组分fr.86，收集时间36.0-45min，287.3mg；
组分fr.87，收集时间36.0-45min，37.9mg。
二、分析
2.1试剂与仪器
Agilent 1100高效液相色谱-质谱联用仪(美国安捷伦公司)，配在线真空脱气机、四元低压泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器、1946D电喷雾四级杆质谱检测器、Chemstation色谱工作站；R-200型旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司)；飞鸽牌TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；METTLER-AE240型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。
乙腈为色谱纯试剂(MERCK)，水为娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团)，乙酸为分析纯(杭州试剂厂)。
2.2分析方法
样品来源：枳壳组分fr.51 1.07mg、fr.52 1.18mg、fr.53 1.11mg、fr.54 1.13mg、fr.551.16mg、fr.56 1.14mg、fr.57 1.13mg。
样品制备：样品用1ml乙醇溶解，超声，离心(10000r/min)，备用。
色谱条件：色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相A相为0.2％冰醋酸水溶液，流动相B相为含0.2％冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脱程序如下：0分钟时，流动相A为90％的0.2％冰醋酸水溶液、流动相B为10％的0.2％冰醋酸乙腈溶液；10分钟时，流动相A为30％的0.2％冰醋酸水溶液、流动相B为70％的0.2％冰醋酸乙腈溶液；30分钟时，流动相A为5％的0.2％冰醋酸水溶液、流动相B为95％的0.2％冰醋酸乙腈溶液；流速0.5mL·min-1；柱温30℃；DAD检测在190-400nm范围内扫描；进样量5μL。
质谱条件：正负离子扫描模式，扫描范围100-2000；干燥气(N2气)流速10L/min，雾化温度350℃，毛细管电压3500V，裂解电压100V。
ELSD条件：氮气1.4l/min，漂移管温度：100℃。
样品来源：枳壳组分fr.81 1.17mg、fr.82 1.16mg、fr.83 1.19mg、fr.84 1.16mg、fr.851.09mg、fr.86 1.16mg、fr.87 1.08mg。
样品制备：样品用1ml 50％甲醇水溶解，超声，离心(10000r/min)，备用。
色谱条件：色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相A相为0.2％冰醋酸水溶液，流动相B相为含0.2％冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脱程序如下：0分钟时，流动相A为95％的0.2％冰醋酸水溶液、流动相B为5％的0.2％冰醋酸乙腈溶液；10分钟时，流动相A为70％的0.2％冰醋酸水溶液、流动相B为30％的0.2％冰醋酸乙腈溶液；30分钟时，流动相A为50％的0.2％冰醋酸水溶液、流动相B为50％的0.2％冰醋酸乙腈溶液；流速0.5mL·min-1；柱温30℃；DAD检测在190-400nm范围内扫描；进样量5μL。
质谱条件：正负离子扫描模式，扫描范围100-2000；干燥气(N2气)流速10L/min，雾化温度350℃，毛细管电压3500V，裂解电压100V。
ELSD条件：氮气1.8l/min，漂移管温度：105℃。
2.3分析结果
分析结果：图2是枳壳水溶性各组分紫外图谱，图3是枳壳水溶性各组分质谱图，图4是枳壳脂溶性各组分紫外图谱，图5是枳壳脂溶性各组分质谱图。
枳壳组分中化合物的鉴定结果见表2。
表2.枳壳组分化合物鉴定结果
| 组分 | 色谱保留时间Rt(min) | [M-H]- | 化合物 | 紫外最大吸收λmax(nm) |
| Fr.51 | 10.76 | 337 | ||
| 10.96 | 565 | |||
| Fr.52 | 11.61 | 327 | 204，258，274，326 | |
| 11.93 | 702 | 206，260，326 | ||
| Fr.53 | 12.39 | 271 | 柚皮苷元[1] | 212，248，270，330 |
| 13.04 | 391 | |||
| Fr.54 | 14.97 | 403 | Nobelitin[1] | 210，248，270，330 |
| Fr.55 | 16.11 | 373 | Tangeritin[1] | 216，270，322 |
| Fr.56 | 13.84 | 421 | ||
| 14.40 | 391 | |||
| Fr.57 | 13.84 | 421 | ||
| 16.46 | 389 | |||
| 18.37 | 309 | |||
| 20.20 | 311 | |||
| Fr.81 | 4.09 | 356 | ||
| Fr.82 | 12.13 | 593 | 214，272，334 | |
| 13.78 | 741 | 212，284，326 | ||
| 16.15 | 649 | |||
| Fr.83 | 15.98 | 427 | ||
| 16.49 | 595 | |||
| 17.37 | 595 | |||
| 22.04 | 711 | |||
| Fr.84 | 19.22 | 579 | 异柚皮苷[1] | 214，284，328 |
| 20.16 | 579 | 柚皮苷 | 228，284，328 | |
| Fr.85 | 20.15 | 579 | 柚皮苷[1，2] | 228，284，328 |
| 20.73 | 609 | 橙皮苷[1，2] | 202，284，328 | |
| Fr.86 | 20.11 | 579 | 柚皮苷 | 228，284，328 |
| 21.59 | 609 | 新橙皮苷[1，2] | 228，284，328 | |
| Fr.87 | 27.22 | 593 | 196，224，284，328 |
注：[参考文献]
1、X.G.He，L.Z.Lian，L.Z.Lin，et al.High-performance liquid chromatography-electrospraymass spectrometry in phytochemical analysis of sour orange(Citrus aurantium L.)J.ofChromatogr.A，791(1997)，127-134.
2、贾强，白杨，马燕，等.枳壳和枳实化学成分的HPLC-ESI-MS分析.中草药，36(2005)，169-172。
三、枳壳组分药效筛选实验
3.1药理模型：乳鼠心肌细胞缺血缺氧模型
原代心肌细胞培养 出生1～3天SD乳鼠处死后，取心脏，经PBS液清洗后剪成1mm3左右的碎块。用0.125％胰蛋白酶(Sigma，USA)+0.05％胶原酶II(Gibco，USA)于37℃消化3～4次。差速贴壁法分离成纤维细胞1.5小时后，细胞悬液转移至48孔板中(每孔约4×105细胞)。经DMEM(Gibco，USA)加10％胎牛血清(Falcon，USA)培养3～6天的细胞供药效筛选。筛选前1天替换为无血清培养液。培养3～6天的心肌细胞，PBS洗涤后加入含药培养液。置于95％N2和5％CO2培养箱中缺氧6小时。然后在CO2培养箱中复氧3小时。取细胞上清液测定LDH含量。
给药方案 提取得到的枳壳提取物用无糖Hanks液配成10-4g/mL供试液，脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO终浓度控制在0.2％以下)。各组分在培养液中的终浓度控制在10-5g/mL。
乳酸脱氢酶含量测定 细胞培养液中乳酸脱氢酶含量能够表示细胞损伤程度。漏入上清液中的乳酸脱氢酶含量越高，表明细胞损伤也显著。乳酸脱氢酶测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。测定方法为：取30μl细胞上清液，加入50μl基质缓冲液及10μl乳酸脱氢酶辅酶，37℃振荡15分钟，再加入50μl 2，4-二硝基苯肼，37℃振荡15分钟。平行空白。取反应液50μl加入200μl 0.4mol/L氢氧化钠溶液，静置3～4分钟后，用酶标仪于450nm测定光度值。
药效结果 所有数据用均值±方差表示。采用单边方差分析和T检验进行统计学分析。与模型组相比，P＜0.05认为显著有效。药效筛选结果见表3。根据心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)筛选结果，枳壳组分fr.51，fr.52，fr.53，fr.54，fr.82，fr.83对降低LDH释放有非常显著效果。
表3.心肌细胞筛选结果
| 组分 | Mean | Std | P1 | P2 |
| fr.51fr.52fr.53fr.54fr.82fr.83模型组1模型组2 | 0.377250.4590.461750.456250.497750.49950.520250.55075 | 0.0242680.0480490.024690.0290560.0241020.0227520.0250120.027427 | 0.000090.032210.0079120.0078190.1213720.1328240.075707 | 0.000040.0080350.0014650.0016120.0136120.0140970.075707 |
3.2脐静脉内皮细胞缺氧复氧模型
原代脐静脉内皮细胞培养 取健康新生儿脐带，用30～50ml Hanks液洗净静脉血管内的残留血迹。视脐带长度加入相应量的0.1％胶原酶I，转入培养箱消化15～20分钟。随后将脐带内消化液小心收集到烧杯中，并用Hanks液将烧杯润洗两次，一并收集到烧杯中分装于离心管，900rpm离心10分钟。吸去上清液，用M199培养液(含10％胎牛血清，100U/ml双抗，0.15mg/ml Heparin，10μM VC)充分溶解沉淀。将所得细胞悬液分装于5cm2培养瓶，置于培养箱内培养。第二天换成采用含30μg/ml ECGS的M199培养液，之后每三天换一次培养液直至细胞铺满底面。所用细胞均为原代内皮细胞。造模前将培养瓶内细胞接种至96孔板并培养一天，所用细胞量为3.5～4万/孔。造模时，吸弃旧的M199培养液，加入含药无酚红M199培养液，每孔总量为100μl。置于95％N2和5％CO2培养箱中缺氧12小时，然后在CO2培养箱中复氧2小时。取细胞上清液测定LDH含量和NO含量。
给药方案 提取得到的枳壳提取物用无糖Hanks液配成10-4g/mL供试液，脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO终浓度控制在0.2％以下)。各组分在无酚红M199培养液中的终浓度控制在10-5g/mL。
NO含量测定 采用Greiss试剂法测定，取90μl细胞上清液，加入等量Greiss试剂，室温下静置10分钟，用酶标仪于550nm测定吸光度值。
药效结果 所有数据用均值±方差表示。采用单边方差分析和T检验进行统计学分析。与模型组相比，P＜0.05认为显著有效。药效筛选结果见表4。枳壳7个组分具有抑制内皮细胞缺氧-复氧后NO过度表达的效果，fr.51、fr.52、fr.54、fr.85非常显著有效，fr.55、fr.82、fr.84显著有效。
表4.内皮细胞筛选结果
| 枳壳 | Mean | Std | P |
| fr.51fr.52fr.54fr.55fr.82fr.84fr.85模型组 | 0.0560.0590.0590.0610.0620.0610.0610.069 | 0.0040.0020.0020.0050.0010.0020.0010.004 | 0.0050.0040.0030.0480.0140.0120.006 |
以上试验结果说明，采用本发明中药材标准化提取方法获得的中药材有效成分可以用作制备药物。
Claims (5)
1.枳壳提取、分离标准化方法，包括以下步骤：
(1)提取工艺：称取枳壳药材，将其粉碎后过筛，然后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液fr.1；在药渣中加入乙醇，加热提取得提取液fr.2；在药渣中最后加入水，加热提取得提取液fr.3；
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩成浸膏后，用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6；将提取液fr.2浓缩成浸膏后，用甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用低浓度的甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换中等浓度的甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，最后用纯甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9；
(3)制备分离工艺：用制备液相色谱分离fr.5和fr.8；色谱柱为半制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，在相应的时间段收集馏分，获得经过了进一步分离的各个组分。
2.如权利要求1所述的枳壳提取、分离标准化方法，包括如下步骤：
(1)提取工艺：称取枳壳药材，将其粉碎后过筛，然后加入5～12倍量体积比为1∶1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.1；在药渣中加入5～12倍量70％乙醇，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.2；在药渣中最后加入水，加热回流0.5～3小时，提取1～3次，合并滤液得提取液fr.3；
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩成浸膏后，用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50∶1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换体积比为10∶1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6；将提取液fr.2浓缩成浸膏后，用2～10％甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用2～10％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换40～80％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，最后用100％甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9；
(3)制备分离工艺：用制备液相色谱离fr.5和fr.8；色谱柱为半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，流速为3ml/min，柱温为室温，在相应的时间段收集馏分，获得经过进一步分离的各个组分。
3.如权利要求2所述的枳壳提取、分离标准化方法，包括如下步骤：
(1)提取工艺：称取枳壳药材，将其粉碎后过筛，然后加入8倍量体积比为1∶1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.1；在药渣中加入8倍量70％乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.2；在药渣中最后加入水，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.3；
(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩成浸膏，用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50∶1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换体积比为10∶1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6；将提取液fr.2浓缩成浸膏，用5％甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用5％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换60％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，最后用100％甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9；
(3)制备分离工艺：用制备液相色谱离fr.5和fr.8；
fr.5的分离条件：色谱柱为汉邦半制备柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相为水(A)和乙腈(B)，流速为3ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：
0min时，流动相A为95％的水，流动相B为5％的乙腈溶液：
30min时，流动相A为35％的水，流动相B为65％的乙腈溶液；
35min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
40min时，流动相A为5％的水，流动相B为95％的乙腈溶液；
50min时，流动相A为5％的水，流动相B为95％的乙腈溶液；
fr.5分离结果：由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.51，收集时间10.4-16.2mm；
组分fr.52，收集时间16.2-19.6mm；
组分fr.53，收集时间19.6-23.9mm；
组分fr.54，收集时间23.9-31.0min；
组分fr.55，收集时间31.0-36.8min；
组分fr.56，收集时间36.8-44.7min；
组分fr.57，收集时间44.7-50.0min；
fr.8分离条件：色谱柱为Agilent制备柱(Zorbax SB-C18；21.2mm×250mm)；采用梯度洗脱，流动相为水(A)和乙腈(B)，流速为10ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：
0min时，流动相A为85％的水，流动相B为15％的乙腈溶液；
5min时，流动相A为78％的水，流动相B为22％的乙腈溶液；
20min时，流动相A为78％的水，流动相B为22％的乙腈溶液；
28min时，流动相A为72％的水，流动相B为28％的乙腈溶液；
40min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
45min时，流动相A为15％的水，流动相B为85％的乙腈溶液；
fr.8分离结果：由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：
组分fr.81，收集时间2.0-8.2min；
组分fr.82，收集时间8.2-12.6min；
组分fr.83，收集时间12.6-18.6min；
组分fr.84，收集时间18.6-20.2min；
组分fr.85，收集时间20.2-25.5min；
组分fr.86，收集时间22.5-35.4min；
组分fr.87，收集时间35.4-43.5min。
4.如权利要求3所述的枳壳提取、分离标准化方法，其特征在于：
组分fr.53中主要化合物为柚皮苷元；
组分fr.54中主要化合物为Nobelitin；
组分fr.55中主要化合物为Tangeritin。
5.如权利要求3所述的枳壳提取、分离标准化方法，其特征在于：
组分fr.84中主要化合物为异柚皮苷，柚皮苷；
组分fr.85中主要化合物为柚皮苷，橙皮苷；
组分fr.86中主要化合物为柚皮苷，新橙皮苷。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2005100122762A CN1903279B (zh) | 2005-07-29 | 2005-07-29 | 一种枳壳药材的提取分离方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2005100122762A CN1903279B (zh) | 2005-07-29 | 2005-07-29 | 一种枳壳药材的提取分离方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1903279A true CN1903279A (zh) | 2007-01-31 |
| CN1903279B CN1903279B (zh) | 2012-02-22 |
Family
ID=37672741
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2005100122762A Expired - Fee Related CN1903279B (zh) | 2005-07-29 | 2005-07-29 | 一种枳壳药材的提取分离方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1903279B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101856380A (zh) * | 2010-06-29 | 2010-10-13 | 浙江大学 | 一种墨旱莲有效组分的制备方法和应用 |
| CN105294819A (zh) * | 2015-10-20 | 2016-02-03 | 淄博夸克医药技术有限公司 | 一种用于治疗乳腺癌的新的柠檬苦素类化合物 |
| CN108079284A (zh) * | 2017-12-21 | 2018-05-29 | 山东迅达康生物科技有限公司 | 一种提高母猪生产性能的药物、其制备方法及应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1318538A (zh) * | 2001-04-11 | 2001-10-24 | 侯团章 | 从中药枳实中提取辛弗林的方法 |
| CN1272339C (zh) * | 2004-06-28 | 2006-08-30 | 浙江大学 | 一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法 |
-
2005
- 2005-07-29 CN CN2005100122762A patent/CN1903279B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101856380A (zh) * | 2010-06-29 | 2010-10-13 | 浙江大学 | 一种墨旱莲有效组分的制备方法和应用 |
| CN105294819A (zh) * | 2015-10-20 | 2016-02-03 | 淄博夸克医药技术有限公司 | 一种用于治疗乳腺癌的新的柠檬苦素类化合物 |
| CN108079284A (zh) * | 2017-12-21 | 2018-05-29 | 山东迅达康生物科技有限公司 | 一种提高母猪生产性能的药物、其制备方法及应用 |
| CN108079284B (zh) * | 2017-12-21 | 2021-03-16 | 山东迅达康生物科技有限公司 | 一种提高母猪生产性能的药物、其制备方法及应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1903279B (zh) | 2012-02-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1903250A (zh) | 一种丹参药材的提取分离方法 | |
| CN101073592A (zh) | 一种黄芪药材的提取分离方法 | |
| CN101073587A (zh) | 一种柴胡药材的提取分离方法 | |
| CN1903239A (zh) | 一种川芎药材的提取分离方法 | |
| CN101073606A (zh) | 一种白芍药材的提取分离方法 | |
| CN1903241A (zh) | 一种三七药材的提取分离方法 | |
| US20090291154A1 (en) | pharmaceutical composition for the treatment and/or prevention of hyperlipidemia, processes for producing the same and the use thereof | |
| CN1925864A (zh) | 治疗丙型肝炎的基于植物的药物 | |
| CN1806846A (zh) | 一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN101073623A (zh) | 一种蒲黄药材的提取分离方法 | |
| CN100335115C (zh) | 用于皮炎治疗的软膏 | |
| CN1839996A (zh) | 一种治疗慢性肝病的中药复方制剂及其制备方法 | |
| CN100340283C (zh) | 用于皮炎治疗的化妆水 | |
| CN1765390A (zh) | 一种治疗肺心病的中药 | |
| CN1299742C (zh) | 一种治疗糖尿病的药物及其制备方法 | |
| CN1039286C (zh) | 一种具有抗衰老作用的强力抗老中成药的生产方法 | |
| CN101084952B (zh) | 一种刺五加皂苷提取物的制备方法 | |
| CN1565583A (zh) | 治疗糖尿病及其并发症的中药组合物 | |
| CN1903279A (zh) | 一种枳壳药材的提取分离方法 | |
| CN1903259A (zh) | 一种丹皮药材的提取分离方法 | |
| CN1872199A (zh) | 一种中药组合物及其制备方法 | |
| CN1899536A (zh) | 一种治疗糖尿病肾病的药物及其制备方法 | |
| CN101036722A (zh) | 一种缓解疲劳、改善男性更年期综合征的保健食品及制备 | |
| CN1284570C (zh) | 一种治疗高血脂症的中药制剂及其制备方法 | |
| CN1313130C (zh) | 一种治疗胃痛的药物组合物、制备方法及其用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20070511 Address after: Hedong District of Beichen Puji road in Tianjin No. 2 city of the modern Chinese Medicine Applicant after: Tianjin Tianshili Pharmaceutical Co., Ltd. Address before: Beichen Xinyi Road white Tianjin Liaohe Road No. 1 Applicant before: Tianshili Modern Traditional Chinese Medicine Research & Devleopment Co., Ltd., |
|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: TASLY PHARMACEUTICAL GROUP CO., LTD. Free format text: FORMER NAME: TIANJIN TIANSHILI PHARMACEUTICAL CO., LTD. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 300402 Tianjin City Hedong District of Beichen Puji Road No. 2 city of the modern Chinese Medicine Patentee after: Tasly Pharmaceutical Group Co., Ltd. Address before: 300402 Tianjin City Hedong District of Beichen Puji Road No. 2 city of the modern Chinese Medicine Patentee before: Tianjin Tianshili Pharmaceutical Co., Ltd. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 300402 Tianjin City Hedong District of Beichen Puji Road No. 2 city of the modern Chinese Medicine Patentee after: Tasly Pharmaceutical Group Limited by Share Ltd Address before: 300402 Tianjin City Hedong District of Beichen Puji Road No. 2 city of the modern Chinese Medicine Patentee before: Tasly Pharmaceutical Group Co., Ltd. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120222 Termination date: 20190729 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |