CN1899289A - 赛米司酮类化合物用于治疗艾滋病的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)的赛米司酮类化合物或其盐或溶剂化物用于制备治疗艾滋病的药物的用途。赛米司酮类化合物是一种新型的糖皮质激素受体拮抗剂。药理学试验显示，赛米司酮具有抗糖皮质激素活性，赛米司酮类化合物与糖皮质激素受体具有很强的亲和力，试验表明赛米司酮是一种受体水平的糖皮质激素拮抗剂，能够阻断糖皮质激素受体的功能。本发明人应用赛米司酮进行了体外抑制艾滋病毒生长的实验，说明赛米司酮对艾滋病的病原体HIV－1具有明显的生长抑制作用。

Description

赛米司酮类化合物用于治疗艾滋病的用途
发明领域
本发明涉及药物化学领域，具体而言，本发明涉及赛米司酮类化合物用于制备治疗艾滋病药物的用途。
背景技术
艾滋病(Acquired Immuno-deficiency Syndrome，AIDS，获得性免疫缺损综合症)是当今世界威胁人类健康与生命的重大传染性疾病之一。导致艾滋病的病原体，即人类免疫缺损病毒(Human ImmunodeficiencyVirus，HIV)，分为HIV-1和HIV-2两种亚型。HIV-1的致病力强，是引起全球艾滋病流行的主要病原；HIV-2的传播力和致病性都低于HIV-1，其潜伏期和病程较长，症状较轻，有的感染者甚至不发展成为艾滋病。HIV-1感染者占艾滋病患者的绝大多数，HIV-2感染仅局限在西非地区。因此，目前关于艾滋病毒的研究主要是针对HIV-1进行的。
在HIV感染人体的初期会有病毒血症的出现，并有轻度发热及淋巴结肿大等现象。随后，病毒血症大幅降低至难以检测的水平，抗核心蛋白及抗包膜蛋白抗体陆续出现，病程进入无症状带毒期，即潜伏感染期，时间可长达数年甚至十多年，而这种长期潜伏的机制目前尚不清楚。在某些因素作用下，病毒可大量复制，机体再次出现病毒血症并表现出艾滋病症状，体内大量的辅助性T淋巴细胞被病毒破坏，造成机体细胞和体液免疫功能降低，无法抵御外界病原微生物的侵袭，进而发展成为免疫缺陷综合症。
HIV增殖过程大致可分九个步骤：吸附、穿入、脱壳、早期蛋白合成、病毒基因组核酸复制、晚期蛋白合成、核壳体装配、病毒体成熟、释放等。从理论上说，上述过程中的每一个步骤都能作为筛选抗HIV药物的靶点。通过多年的努力，人们在涉及HIV增殖的每一个环节都发现了相应的抑制剂，不同类型的化合物相继进入临床前或临床研究阶段，或经药事管理部门批准上市用于治疗艾滋病。目前已经开发成功的抗艾滋病药物主要包括：(1)逆转录酶抑制剂(如，齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、奈韦拉平、地拉夫定和依法韦伦等)和(2)蛋白水解酶抑制剂(如，沙奎那韦、利托那韦、印地那韦、奈非那韦和安普那韦等)两大类。由于HIV具有高度的抗原变异特性，极易产生耐药性，单独使用上述一种药物往往因耐药性的快速产生而导致治疗失败。同时使用逆转录酶抑制剂和蛋白水解酶抑制剂(鸡尾酒疗法)虽然可以推迟耐药性的出现，延长艾滋病患者的生命，但不能根本解决耐药性问题和完全治愈艾滋病。鸡尾酒疗法可以产生严重的毒副作用(如骨髓抑制和健忘等)和导致抗药病毒株的出现。因此，临床上急需一种具有不同化学结构和作用机理的抗HIV新药。寻找新的抗HIV药物作用靶点为实现这一目标的关键所在。
HIV的基因组主要由Gag、Pol、Env基因所组成。此外，还有6个辅助性基因(Tat、Vpr、Vpu、Nef、Rev和Vif)。其中，Vpr编码一个含96个氨基酸、分子量大约为14kDa的蛋白。
大量的研究表明，HIV感染宿主细胞后，Vpr与细胞内多种蛋白相互作用，对病毒复制、宿主细胞周期及分化产生一系列的影响，如Vpr蛋白在HIV引起的细胞凋亡中发挥着重要作用。由于HIV病毒致病机理的某些方面是因Vpr诱导细胞调控失常所致(魏强等，《中国生物工程杂志》2003，Vol.23，6)。因此，Vpr蛋白具有成为抗艾滋药物作用新靶点的潜力。
在对Vpr蛋白的研究中，科学家注意到其和糖皮质激素(如地塞米松和氢化可的松等)均可以阻断细胞的增殖，且二者作用程度相似，由此推测Vpr对细胞增殖的抑制效应至少部分类似于糖皮质激素的作用途径(Ayyavoo V.等，《Nature Medicine》1997，Vol.3，1117)。
在调节细胞对不同病原体的免疫反应过程中，多种细胞因子介导了许多重要的信号转导功能，因而对细胞的免疫反应发挥关键作用。糖皮质激素通过干扰TCGF(白介素2)和其他细胞因子的合成或功能来实现其抗炎和免疫抑制的效应。研究显示，Vpr也同样具有干扰细胞因子的作用，因此推测Vpr的抗细胞增殖功能可能部分取决于它对细胞因子(包括白介素2和12)所产生的抑制效应。由于细胞因子的早期反应对抑制受感染细胞中HIV的复制至关重要，Vpr对细胞因子的负面影响可以破坏宿主的免疫反应，尤其是破坏那些尚未被HIV-1感染的细胞之免疫反应(Ayyavoo V.等，《Nature Medicine》1997，Vol.3，1117)。
实验结果表明，糖皮质激素经NF-κB反应元件的介导，通过抑制细胞因子促进剂来抑制细胞因子的产生。糖皮质激素诱导IκB的基因转录，翻译生成的IκB因产生无活性的NF-κB-IκB复合物而抑制了NF-κB的活性。此外，无论是细胞本身表达的或是作为外源蛋白引入的Vpr均可通过诱导IκB的转录而部分抑制NF-κB介导的基因活化。由于NF-κB是活化细胞因子基因的关键因素，对其功能的阻断可以有效地避免或减少细胞因子的产生，这就部分解释了Vpr的作用机理。
Vpr蛋白作为糖皮质激素的相似物，可以调节细胞的增殖和凋亡，进而有助于HIV在细胞内的复制。糖皮质激素受体拮抗剂可以逆转Vpr的作用，抑制HIV在细胞内的复制，保护细胞避免进入Vpr介导的细胞凋亡进程(Ayyavoo V.等，《Nature Medicine》1997，Vol.3，1117)。本发明人尝试用糖皮质激素受体拮抗剂--赛米司酮开展体外抑制HIV-1病毒生长的实验，发现赛米司酮对HIV-1具有明显的生长抑制作用。
本发明人获准的中国专利(ZL 99116829.1，公开号：CN 1287123A)公开了本发明的赛米司酮(Cymipristone)类化合物及其制备方法，以及该类化合物用于制备治疗与孕激素依赖性有关的疾病、抗生育、流产或避孕和抗肿瘤等药物方面的用途。该专利被本申请引用为参考文献。
发明内容
本发明涉及的赛米司酮类化合物是如下式的甾体化合物：
其中，R1是环戊基、环己基或环庚基；R2是氢或C1-C6烷基；R3选自：-C≡C-R5、或-CH＝CH-R6，其中R5是氢、C1-C6烷基或羟甲基，R6是氢、C1-C6烷基或羟甲基；R4是氢或羟亚甲基(＝CHOH)。
本发明人研究发现，赛米司酮类化合物是一种新型的糖皮质激素受体拮抗剂。药理学试验显示，赛米司酮具有抗糖皮质激素活性；赛米司酮类化合物与糖皮质激素受体具有很强的亲和力。上述试验证明赛米司酮是一种受体水平的糖皮质激素拮抗剂，能够阻断糖皮质激素受体的功能。
本发明人应用赛米司酮进行了体外抑制艾滋病毒生长的实验，在MT-4细胞培养液中，赛米司酮对HIV-1 IIIB P24抗原半数抑制剂量(IC50)为1.30μg/ml(2.62μM)，说明赛米司酮对艾滋病的病原体HIV-1具有明显的生长抑制作用。由此完成了本发明。
本发明提供了赛米司酮类化合物或其盐或溶剂化物用于制备治疗艾滋病药物的用途。
本发明人研究发现，赛米司酮类化合物可以用于治疗艾滋病。本发明涉及的赛米司酮类化合物或其盐或溶剂化物是一种已知的甾体化合物，具有下述通式(I)：
Figure A20051002805700061
其中，R1是环戊基、环己基或环庚基；R2是氢或C1-C6烷基；R3选自：-C≡C-R5、或-CH＝CH-R6，其中R5是氢、C1-C6烷基或羟甲基，R6是氢、C1-C6烷基或羟甲基；R4是氢或羟亚甲基(＝CHOH)。
本发明的化合物可以根据中国专利CN 1287123A提供的方法制备得到。
本发明的化合物可以以盐形式存在，或者以溶剂化物存在，并且由于其中有多个不对称碳原子，该化合物可以有多个异构体，这些盐和异构体都属于本发明化合物用途要求保护的使用范围。
本发明的式(I)化合物优选其中R2是氢或甲基，R3是-C≡C-CH3或-C≡C-CH2OH，R4是氢的化合物。
本发明更优选的化合物包括：11β-[4-(N-甲基-N-环己基氨基)苯基]-17α-(1-丙炔基)-17β-羟基-4，9-雌甾二烯-3-酮，即赛米司酮化合物。
本发明人的研究发现，赛米司酮类化合物是一种糖皮质激素受体拮抗剂，对HIV-1具有明显的生长抑制作用，可以用于治疗艾滋病。
HIV对现有的治疗药物(包括逆转录酶抑制剂和蛋白水解酶抑制剂)已经产生严重的抗药性，而赛米司酮类化合物抑制HIV生长的机理与上述药物完全不同，因此既可以治疗因非抗药性HIV感染引起的疾病，也能够治疗对现有抗HIV药物(包括逆转录酶抑制剂和蛋白水解酶抑制剂)已经产生抗性的艾滋病患者。
HIV是一种复杂的逆转录病毒，同时使用具有不同作用机制的药物是治疗艾滋病的一种有效手段。在本发明中，一种更优选的实施方法是联合使用赛米司酮类化合物与其他可有效治疗HIV感染的一种或多种药物，这些药物优选但不局限于逆转录酶抑制剂和/或蛋白水解酶抑制剂，其中所述的逆转录酶抑制剂选自齐多夫定(zidovudine，AZT)、去羟肌苷(didanosine，DDI)、扎西他滨(zalcitabine，DDC)、司他夫定(stavudine，D4T)、拉米夫定(lamivudine，3TC)、阿巴卡韦(abacavir，ABC)、奈韦拉平(nevirapine)、地拉夫定(delavirdine)、及依法韦伦(efavirenz，EFV)等中的一种或多种；所述蛋白水解酶抑制剂选自沙奎那韦(saquinavir)、利托那韦(ritonavir)、印地那韦(indinavir)、奈非那韦(nelfinavir)和安普那韦(amprenavir)等中的一种或多种。
本发明的治疗用途可以通过药物组合物形式实施。因此，本发明的另一方面提供了一种用于治疗艾滋病的药物组合物，这种药物组合物可以使用制药学领域中常用的技术制备得到。这种组合物可以以片剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂等固体制剂的形式，也可以以注射剂、混悬剂、乳剂、溶液剂等液体制剂的形式，还可以以各种经皮给药制剂的形式，包括相应的具有缓释、控释、靶向、脉冲等特殊作用的制剂形式存在。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明，应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制，根据本发明的实质对本发明进行的改进都属于本发明的保护范围。除非另有说明，本发明中的百分数是重量百分数。
实施例1：赛米司酮的制备方法
赛米司酮的合成路线：
Figure A20051002805700071
环氧物                                  加成物                             赛米司酮
(1)4-(N-甲基-N-环己基氨基)苯基溴化镁的制备
在四颈瓶中，投入1.4克镁片(Mg)和10毫升无水四氢呋喃(THF)，不用加碘或加少许碘，于50℃左右，滴加10.86克4-溴-N-甲基-N-环己基苯胺(溶于24毫升无水四氢呋喃)，滴毕，继续保温搅拌1小时，得4-(N-甲基-N-环己基氨基)苯基溴化镁的四氢呋喃溶液(待下步加成反应用)。
(2)3，3-乙撑二氧-5α，17β-二羟基-11β-[4-(N-甲基-N-环己基氨基)苯基]-17α-(1-丙炔基)-9(10)-雌甾烯(加成物)的制备
在四颈瓶中，投入5克3，3-乙撑二氧-5，10-环氧-17α-(1-丙炔基)-17β-羟基-9(11)-雌甾烯(环氧物)，29.1毫升无水四氢呋喃(THF)和0.1克氯化亚铜(Cu2Cl2)后，滴加4-(N-甲基-N环己基氨基)苯基溴化镁的四氢呋喃溶液，控制温度5℃以下，滴毕，继续保温反应5小时，反应毕，反应液倾入饱和氯化铵水溶液中，分去水层，有机层用饱和氯化铵溶液洗涤，其水层用乙酸乙酯提取数次，合并有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱分离，展开剂为环己烷∶丙酮＝(5∶1)，得3，3-乙撑二氧-5α，17β-二羟基-11β-[4-(N-甲基-N-环己基氨基)苯基]-17α-(1-丙炔基)-9(10)-雌甾烯(加成物)固体6克。
IR：(KBr)cm-1：3515(C5-OH，C17-OH)，1612，1515(苯骨架)，819(芳氢)。
1H NMR：(CDCl3)δppm：0.47(3H，S，C13-CH3)，1.88(3H，S，C≡C-CH3)，2.72(3H，S，N-CH3)，6.65-7.03(4H，ArH)。
(3)11β-[4-(N-甲基-N-环己基氨基)苯基]-17α-(1-丙炔基)-17β-羟基-4，9-雌甾二烯-3-酮(赛米司酮)的制备
将2.5克对甲苯磺酸(PTS)和5克3，3-乙撑二氧-5α，17β-二羟基-11β-[4-(N-甲基-N-环己基氨基)苯基]-17α-(1-丙炔基)-9(10)-雌甾烯(加成物)溶于50毫升90％乙醇(V/V)中，于5℃-40℃搅拌反应3小时，反应液倾入稀氢氧化钠水溶液中，析出固体，抽滤，水洗至中性，滤饼溶于50毫升乙酸乙酯，再用饱和氯化钠水溶液洗，分去水层，蒸去部分溶剂，析出固体，抽滤，干燥，得淡黄色固体11β-[4-(N-甲基-N-环己基氨基)]-17α-(1-丙炔基)-17β-羟基-4，9-雌甾二烯-3-酮(赛米司酮)3克。
IR(KBr)cm-1：3447(C17-OH)，1655(不饱和酮)，1607，1513(苯骨架)，865，819(芳氢)。
1H NMR：(CDCl3)δppm：0.56(3H，S，C13-CH3)，1.89(3H，S，-C≡C-CH3)，2.74(3H，S，N-CH3)，4.34(1H，S，C11-H)，5.75(1H，S，C4-H)，6.68-6.99(4H，ArH)。
实施例2：人源性糖皮质激素受体结合活力测定
试验目的：检测赛米司酮对人源性糖皮质激素受体的结合力并与具有相似化学结构的米非司酮(Mifepristone)进行比较。
(1)试验方法
反应缓冲液由25mM NaPO4、20mM NaMoO4、10mM KF和10％Glycerol组成(pH＝7.3)，4℃储藏备用。储备液由CHAPS和DTT配制，-20℃储藏备用。按一定的浓度梯度配制阳性药(Dexamethasone)以及待测化合物溶液，在96孔板中每孔加入2.5μl。取出需用量的反应缓冲液加入储备液中，使其终浓度达到CHAPS 0.25mM，DTT 2mM。加入蛋白酶抑制剂(Aprotinin和Leupeptin)，使其终浓度达到1μg/μl，置于冰浴中。将人源性核受体GR(1∶8)、PR(1∶100)、ER(1∶2000)、AR(1∶200)和MR(1∶40)分别加入反应体系后，将适量的[3H]-dexamethasone、[3H]-progesterone、[3H]-estradiol和[3H]-DHT(购自Amersham)充分混匀，迅速加到96孔板中(每孔100μl)，于4℃孵育过夜。次日，在每孔中加入25μl羟基磷灰石混悬液，震荡混匀，孵育10分钟后以2500rpm转速于离心3分钟。沉淀物用100μl反应缓冲液冲洗、离心2次，每孔加入150μl闪烁液(购自PerkinElmer)，震荡混匀，在MicroBeta计数仪读数。
(2)试验结果
如表1所示，赛米司酮对糖皮质激素受体(GR)的结合活力远远大于孕激素受体(PR)、雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)和盐糖皮质激素受体(MR)；并且赛米司酮对人源性糖皮质激素受体的结合活力大于米非司酮。
                表1、赛米司酮对不同核受体的结合活力
                        (mean±SD，n＝4)
  受体   赛米司酮(IC50，nM) 米非司酮(IC50，nM)
  GR   0.45±0.069 0.63±0.056
  PRa   5.2±0.26
  ERα   516.3±62.8
  ERβ   278.7±0.63
  AR   69.64±15.37
  MR   ＞2000
实施例3：赛米司酮对大鼠肝细胞浆糖皮质激素受体结合活力检测试验目的：检测赛米司酮对动物糖皮质激素受体的结合力并与具有相似化学结构的米非司酮(Mifepristone)进行比较。
(1)试验方法
雌性清洁型SD大鼠，体重200～250克，定量喂养，自由取水。饲养温度控制在摄氏24度左右，光照为白天11小时—夜晚13小时周期。所有实验动物实验前均观察1周。
在鼠背侧位肋弓下双侧切口，摘除大鼠双侧肾上腺，术后饲以生理盐水维持水电解质平衡。
手术后第三天急性处死动物，迅速取出肝脏置于冰冷缓冲液中，尽量洗净血液。取一定量组织按1∶4比例加入缓冲液，并剪碎组织，低温间歇匀浆组织，175000g离心1小时，取上清液备用。
测定上清液中蛋白浓度，调配蛋白浓度至2mg/ml。将溶于乙醇的标记、非标记地塞米松、赛米司酮和米非司酮于37℃挥干，然后进行竞争性抑制实验。
竞争性分析：取0.2ml胞浆加固定浓度[3H]-地塞米松作为示踪物，加不同浓度受试物(赛米司酮、米非司酮和地塞米松)，4℃孵育24小时，用DCC分离游离和结合[3H]-地塞米松，液闪测定上清和沉淀放射性。
(2)数据处理
相对结合亲和力(RBA)：以地塞米松的RBA等于100％为标准，计算公式：
(3)试验结果
竞争抑制实验：各化合物在16×10-10～5×10-7mol/L浓度范围可抑制[3H]-地塞米松(7.87nml/L)与大鼠肝胞浆糖皮质激素受体结合，其抑制率见表2。
表2.、赛米司酮对[3H]-地塞米松受体结合的抑制率并与米非司酮比较
                    (mean±SD，％，n＝4)
  受试化合物浓度(mol/L)   地塞米松   赛米司酮   米非司酮
  5×10-7   89.23±8.56   95.36±5.34   93.84±3.78
  1×10-7   60.37±5.67   88.94±9.01   88.95±5.69
  2×10-8   39.42±4.83   75.60±3.56   70.24±4.13
  4×10-9   24.83±5.92   54.54±4.24   46.84±7.25
  8×10-10   14.72±7.34   31.25±3.87   24.43±3.97
  16×10-10   10.37±6.11   17.25±6.76   16.74±8.07
按上述计算方法，计算各化合物的受体药理特性指标见表3。
表3、赛米司酮与大鼠肝细胞浆糖皮质激素受体的相对结合活力(RBA)
                        (mean±SD，n＝4)
  化合物   IC50(nmol/L)   RBA(％)
  地塞米松   14.50±1.89   100.00
  赛米司酮   2.60±0.53   557.69±65.23
  米非司酮   4.21±1.02   344.41±57.41
注：以地塞米松的结合活力为100计算。
地塞米松、赛米司酮和米非司酮的RBA比值为1∶5.6∶3.4，IC50分别为14.50、2.60、4.21nmol/L，赛米司酮与米非司酮的IC50比值为1.00∶1.62，表明赛米司酮与糖皮质激素受体有很强的结合力，并且此结合力强于米非司酮。实施例2、3的试验结果说明：赛米司酮是一种比米非司酮作用更强的糖皮质激素受体拮抗剂，具有更强的治疗艾滋病之潜力。
实施例4：赛米司酮对人源性糖皮质激素受体的拮抗作用
试验目的：检测赛米司酮对糖皮质激素受体的拮抗作用。
(1)试验方法
取CV-1细胞(6×105个)接种于直径为60mm的细胞培养皿中，使用含10％FBS的无酚红低糖DMEM培养基，于37℃、5％CO2条件下孵育过夜。按1∶5比例吸取携带GR基因的质粒和荧光素酶报告基因质粒2μg，使用FuGene6转染试剂(购自Roche)共转染CV-1细胞，按上述条件孵育8小时。将转染后的细胞以8000个/100μl/孔接种于96孔微量培养板内，培养至细胞贴壁。用培养基将阳性化合物(Dexamethasone；终浓度为10nM)与待测化合物按一定浓度稀释，以10μl/孔加入上述培养板中，孵育24小时。弃去培养液，用PBS两次清洗细胞，吸尽残留的PBS。使用CCLR Assay Kit(购自Progema)裂解细胞15分钟。取裂解液20μl加到白边白底的96孔细胞培养板中，加入100μl/孔CCLR底物(购自Progema)，立即于WALLAC 1420Multilabel Counter上检测由活化荧光素酶引起的化学发光计数值。
(2)试验结果
如表4所示，赛米司酮在基因共转染的活细胞中对由地塞米松引起的人源性糖皮质激素受体功能具有显著的拮抗活性。
表4、赛米司酮对地塞米松在细胞水平的拮抗作用
              (mean±SD，n＝4)
  受体 赛米司酮(IC50，nM)
  GR 0.26±0.02
实施例5：赛米司酮抗糖皮质激素活性试验
试验目的：检测赛米司酮的抗糖皮质激素活性。
(1)试验方法
雌性清洁型SD大鼠，体重200～250克，定量喂养，自由取水。饲养温度控制在摄氏24度左右，光照为白天11小时—夜晚13小时周期。所有实验动物实验前均观察1周。
用乙醚麻醉大鼠，鼠背侧肋弓下双侧切口，完整摘除双侧肾上腺，术后饲以生理盐水。第7天急性处死动物，取胸腺于HBSS缓冲液中，洗涤二次，并除去结缔组织，然后剪碎，用匀浆器轻轻研磨，三层纱布过滤，过滤液低速离心5分钟(500转/分)，沉淀细胞再用HBSS洗涤二次，用RPMI1640培养液重悬细胞，作细胞计数和细胞存活率测定，调整细胞浓度至107/ml。
抗糖皮质激素活性测定：将受试化合物加入培养液中，使其反应浓度为6×10-8～2×10-6mol/L，37℃培养箱预置3小时，然后加入胸腺细胞，使细胞浓度达到107/ml，37℃预培养3小时，加1μCi标记物混匀后再培养1小时，加冰冷5％三氯醋酸100μl终止反应。将试管放置于冰上，然后用冰冷的2ml 5％三氯醋酸，以500rpm×5分钟离心洗涤2次，沉淀细胞加1N NaOH 0.5ml，溶解细胞，将溶解液吸出，同时用棉签将残留物搽干，置同一闪烁瓶内，液闪测定放射活性。本试验选择地塞米松浓度6×10-8mol/L检测抗糖皮质激素活性，受试化合物浓度为6×10-8～2×10-6mol/L。
(2)数据处理
计算[3H]-TdR掺入率：
其中，T为没有化合物存在时的[3H]-TdR的计数，Td为有化合物存在时的计数，NSB为非特异性吸附。
根据公式计算出赛米司酮抗糖皮质激素活性，包括[3H]-TdR掺入率和残余抑制率。其中地塞米松浓度为6×10-8mol/L时，残余抑制率以100％计算。
抑制率＝100％-掺入率
(3)试验结果
单用6×10-8mol/L浓度地塞米松时，[3H]-TdR掺入率为43.2±3.7％，当合并使用受试化合物时，其作用受到不同程度的拮抗(表5)。用残余抑制率显示了赛米司酮在抗糖皮质激素作用方面的性能(表6)。
表5、赛米司酮对地塞米松的拮抗作用
     (Mean±SD，％，n＝4)
  浓度(mol/L)   赛米司酮
  6×10-8   80.0±4.3
  2×10-7   67.2±2.9
  6×10-7   76.0±3.8
  2×10-6   63.6±5.1
表6、赛米司酮对地塞米松残余抑制率的影响
        (Mean±SD，％，n＝4)
  浓度(mol/L)   赛米司酮
  6×10-8   35.2±2.4
  2×10-7   57.7±3.5
  6×10-7   42.2±1.9
  2×10-6   64.1±5.6
试验结果显示，赛米司酮具有抗糖皮质激素活性。
实施例6：赛米司酮对HIV-1的生长抑制作用
试验目的：检测赛米司酮的抗HIV-1作用
一.试验方法
1、赛米司酮在MT-4细胞培养中的细胞毒性和抑制HIV-1 P24抗原生成的作用
(1)MT-4细胞以1×105个/ml接种于96孔细胞培养板上，用HIV-1/IIIB约100TCID50病毒株感染，同时加入赛米司酮药液，浓度在100μg/ml以下3倍稀释至8个浓度；设病毒TCID50测定和细胞对照组。每浓度重复双孔。在37℃、5％CO2和饱和湿度培养箱内培养。
(2)细胞病变法测定赛米司酮对细胞的毒性(TC50和TC0)
将上述培养板每天置显微镜下观察细胞病变，以常规方法记录细胞病变程度，按Reed&Muench法计算药物半数有毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0)。
(3)实验加药细胞培养板吸取上清液测定HIV-1 P24抗原
上法加药细胞培养第4天(96小时)后，吸出上清液冰冻待测HIV-1P24抗原。
(4)MTT染色法测定赛米司酮对细胞的毒性(TC50和TC0)
吸取上清液的细胞培养板每孔加入MTT染色，继续培养4小时后加入脱色液，在酶联仪上测定波长为570nm的OD值，如上法计算TC50和TC0。
(5)HIV-1 P24抗原测定和赛米司酮对HIV-1 P24抗原的抑制作用
取第4天细胞上清液，双孔合并，进行1∶100稀释。按HIV-1 P24抗原试剂盒说明书用ELISA方法测定HIV-1 P24抗原滴度(OD值)。待试药物组的OD值与病毒对照组的OD值进行比较，计算抑制％和半数有效浓度(IC50)，并计算药物的选择指数(SI)。同时测定HIV-1/IIIB病毒株在MT-4细胞的半数感染浓度，计算实验病毒感染量(TCID50)。
2、半数毒性浓度(TC50)、半数有效浓度(IC50)及选择指数(SI)计算方法
(1)Reed&Muench法计算药物在细胞培养中的TC50和IC50及SI的方法
Figure A20051002805700141
Figure A20051002805700142
(2)SI＝TC50/IC50
二.结果
1、赛米司酮在MT-4细胞培养液中的细胞毒性(表7)
(1)细胞病变(CPE)法的细胞毒性TC50：
赛米司酮为7.704μg/ml(15.50μM)。
(2)MTT染色法的细胞毒性TC50：
赛米司酮为30.26μg/ml(60.89μM)
表7、赛米司酮在MT-4细胞培养中的细胞毒性
  测定方法   赛米司酮(TC50)
  CPE   7.704μg/ml(15.50μM)
  MTT   30.26μg/ml(60.89μM)
2、赛米司酮在MT-4细胞培养中对HIV-1 IIIB P24抗原的抑制作用(表8)
在MT-4细胞培养中，赛米司酮对HIV-1 IIIB P24抗原的生成抑制活力(IC50)为1.30μg/ml(2.62μM)。
表8、赛米司酮在MT-4细胞培养中对HIV-1 P24抗原的抑制作用
  赛米司酮浓度(μg/ml)   抑制率(％)
  3.70   93
  1.23   29
  0.41   13
  0.14   17
  0.05   14
                                        IC501.30μg/ml(2.62μM)
3、选择指数(SI；表9)
以CPE细胞毒性计算SI：赛米司酮为5.93；以MTT细胞毒性计算
SI：赛米司酮为23.28。
表9、赛米司酮在MT-4细胞培养液中抑制HIV-1的选择指数(SI)
  细胞毒性测定方法   选择指数(SI)
  CPE   5.93
  MTT   23.28
三.结论
1、赛米司酮对培养的人T-淋巴细胞MT-4无明显的毒性。
2、赛米司酮在传代MT-4细胞培养中对HIV-1病毒IIIB实验株的感染有明显的抑制作用。
3、赛米司酮在MT-4细胞培养中对HIV-1 P24抗原的生成具有显著的抑制效应。

Claims (6)

1、式(I)化合物或其盐或溶剂化物用于制备治疗艾滋病的药物的用途：
Figure A2005100280570002C1
其中，R1是环戊基、环己基或环庚基；R2是氢或C1-C6烷基；R3选自：-C≡C-R5、或-CH＝CH-R6，其中R5是氢、C1-C6烷基或羟甲基，R6是氢、C1-C6烷基或羟甲基；R4是氢或羟亚甲基。
2、根据权利要求1的用途，其中：式(I)化合物中R2是氢或甲基，R3是-C≡C-CH3或-C≡C-CH2OH，R4是氢。
3、根据权利要求2的用途，其中式(I)化合物是：11β-[4-(N-甲基-N-环己基氨基)苯基]-17α-(1-丙炔基)-17β-羟基-4，9-雌甾二烯-3-酮。
4、根据权利要求1-3之一的用途，其中式(I)化合物或其盐或溶剂化物与逆转录酶抑制剂和/或蛋白水解酶抑制剂联合使用。
5、根据权利要求4的用途，其中所述逆转录酶抑制剂选自齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、奈韦拉平、地拉夫定或依法韦伦中的一种或多种。
6、根据权利要求4的用途，其中所述蛋白水解酶抑制剂选自沙奎那韦、利托那韦、印地那韦、奈非那韦或安普那韦中的一种或多种。
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Cited By (1)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5780220A (en) * 1994-05-19 1998-07-14 Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and compositions for inhibiting HIV replication
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CA2529852A1 (en) * 2003-06-20 2004-12-29 Viral Genomix, Inc. Compositions for and methods for treating hiv

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102106805B (zh) * 2009-12-29 2013-06-12 上海中西制药有限公司 赛米司酮固体制剂及其制备方法
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