CN1895391A - 一种治疗泌尿系统结石的植物药及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗泌尿系统结石的单味植物药茅莓(Rubus parvifolius L.)根，其制备方法以及20－90％乙醇提取物和茅莓根药材的质量控制方法。本发明分别测定茅莓根药材和20－90％乙醇提取物中的总皂苷、黄酮苷和鞣质的总含量及其代表成分并将其作为质量控制指标，该指标也可用于复方茅莓根乙醇提取物有关茅莓根部分含量的质量控制指标。药效学实验证实，本发明药物具有较好的排石和溶石作用。临床疗效观察试验证实，本发明药物对泌尿系统结石疗效显著，临床应用安全、无毒副作用。

Description

一种治疗泌尿系统结石的植物药及其制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种治疗泌尿系统结石的植物药，尤其涉及一种以茅莓根为药药材制备而成的治疗泌尿系统结石的单味植物药、其制备方法和该药药材和乙醇提取物的质量控制方法。

背景技术

泌尿系统结石是一种危害人类健康的主要疾病之一，迄今为止，在整个非手术治疗中中医药治疗仍占主要地位。泌尿系统结石在国内外的人群中，其发病率较高，一般在3-8％左右，我国南方有的地区最高达可达11-15％。目前还没有非常理想的排石药，许多患者应用机器碎石后，其碎块也不易排净体外，碎石后仍需要服用排石药物协助排石，现临床上急需效果好、毒性低的排石药。

目前国内虽然有多种排石药物，其中主要是颗粒剂，但多为大组方药，即由多味或几十几味中药组成，药物成分复杂，这些药物不仅存在疗效不够确切、久服有较多的毒副作用等缺陷，而且由于药物成分比较复杂，其质量控制标准也难以建立；而至今未见有较好的单味中药或植物药用于治疗泌尿系结石的药物上市的报道。

发明内容

本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种新的疗效确切的治疗泌尿系统结石的单味植物药。

本发明人经过大量的试验最终发现，从茅莓，尤其是从茅莓根中用20-90％乙醇提取的活性成分具有利尿通石之功效，对于泌尿系统的结石等症具有确切的疗效。

茅莓(Rubus parvifolius L.)为蔷薇科植物，别名：天青地白草、三月泡。生于山坡、路旁、荒地和草丛中，全国各地都有分布。性平，味甘、酸。具有散瘀、止痛、解毒、杀虫之功效，主要用于治疗吐血、跌打损伤、产后腹痛、痢疾、痔疮等症，未有用于治疗泌尿系结石的报道。动物试验表明，茅莓根20-90％乙醇提取物对大鼠乙二醇性肾结石有治疗作用，对植入到大鼠膀胱内的人泌尿系统结石具有排石和减解结石作用，还有利尿作用，并能增加兔输尿管活动、扩大管腔、缓解输尿管的痉挛等作用，均利于结石的排出。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种从茅莓中提取活性成分的方法。

本发明所要解决的另一个技术问题是通过以下技术途径来实现的：

将茅莓(Rubus parvifolius L.)根用20-90％乙醇(优选用65％乙醇提取)提取，制备成乙醇提取物浸膏或干燥粉。

优选的，所述乙醇提取物浸膏或干燥粉的制备工艺如下：

(1)将茅莓根净洗后加0.5-2倍体积20-90％酒精浸泡3-8小时；

(2)加3-8倍体积20-90％酒精回馏提取3-6次，每次1-2小时；过滤，收集滤液，回收乙醇，滤液浓缩、干燥，即得浸膏粉或干燥粉；

更优选的，所述乙醇提取物浸膏或干燥粉的制备工艺如下：

(1)将茅莓根净洗后加1倍体积20-90％酒精浸泡5小时；

(2)加5倍体积20-90％乙醇回馏提取4次，每次1.5小时；过滤，收集滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度为1.2以上；喷雾干燥，即得浸膏或干燥粉。

最优选的，所述乙醇提取物浸膏或干燥粉的制备工艺如下：

1)取茅莓根，粉碎成粗颗粒，加1倍体积20-90％酒精浸泡5小时，再加5倍量20-90％乙醇提取回馏(80℃)，每次1.5小时，第一次提取后，补充1.5倍20-90％乙醇再回馏，连续4次，收集所有的提取液；

2)提取液粗滤后，用板框式压滤机精滤(内垫300目滤布)；

3)精滤液浓缩至相对密度为1.2以上；喷雾干燥，即得浸膏干燥粉。

将上述方法制备得到的乙醇提取物浸膏或干燥粉加入制备不同剂型时所需的各种常规辅料或药用载体，例如崩解剂、润滑剂、黏合剂等，以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用的口服制剂，例如可以是颗粒剂、丸剂(含小丸剂)、片剂(含泡腾片)、胶囊剂、散剂或口服液等。

采用上述方法制备得到的20-90％乙醇提取物浸膏干燥粉为茅莓药材重量的6.68％-13.26％；其中，采用65％乙醇提取获得乙醇提取物浸膏干燥粉为茅莓药材重量的10.25％％-13.26％。

本发明还进行了茅莓根20-90％乙醇提取物和茅莓药材质量检测方法和质量控制标准的研究。

对茅莓根药学实验表明，茅莓根20-90％乙醇提取物中的总皂苷、黄酮苷、鞣质含量较高，特别是65％左右乙醇的提取物中，上述三个部位群加在一起，达到50％以上。

本发明分别测定茅莓根药材或20-90％乙醇提取物中的总皂苷、黄酮苷和鞣质的总含量及其代表成分(如皂苷的代表成分为熊果酸或钩子皂苷R₁，黄酮苷的代表成分为槲皮素、鞣质的代表成分为表儿茶素或没食子酸)作为质量控制指标。

试验结果表明：本发明20-90％乙醇提取物浸膏干燥粉中皂苷的总含量为10.15-15.50wt％，其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量为1.15-2.66wt‰或悬钩子皂苷R₁的含量为0.38-2.24wt％；所述的20-90％乙醇提取物浸膏干燥粉中黄酮苷的总含量为25.25-38.50wt％，黄酮苷的代表成分槲皮素的含量为0.25-0.55wt％；所述的20-90％乙醇提取物浸膏干燥粉中鞣质的总含量为8.50-13.50wt％；鞣质的代表成分表儿茶素的含量为1.60-2.95wt％或没食子酸的含量为3.15-6.05wt％。

茅莓药材中皂苷的总含量为0.80-1.5wt％、黄酮苷的总含量为2.35-4.50wt％、鞣质的总含量为0.75-1.45wt％；其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量为0.10-0.25wt‰或悬钩子皂苷R₁的含量为为0.08-0.21wt％，黄酮苷的代表成分槲皮素的含量为0.025-0.042wt％，鞣质的代表成分表儿茶素的含量为0.21-0.32wt％或没食子酸的含量为0.26-0.55wt％。

本发明中的有关茅莓根乙醇提取物含量测定的方法及数据也可用于复方茅莓根制剂中有关茅莓根乙醇提取物部分的测定方法及质量控制指标。

以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证目的，绝不限制本发明的范围。

具体实施方式

实施例1

本发明颗粒剂的制备

取茅莓根10千克、加65％乙醇15000ml加温回馏3-4小时，收集浸液，重复加65％乙醇回馏4次，浸液混合，回收乙醇，浓缩成浸膏，整粒，制成颗粒剂。每袋含生药8克，病人每天服2次，每次2袋。

实施例2

本发明口服液的制备

取茅莓根10千克，加45％乙醇15000ml加温回馏3-4小时，收集浸液，重复加45％乙醇浸泡4次，浸液混合，回收乙醇，浸液混合浓缩，按常规制成口服液，分瓶装，每瓶100ml，含生药15克，病人每天早晚各服100ml。

实施例3

本发明胶囊剂的制备

取茅莓根10千克，用清水冲洗2次，加70％乙醇15000ml加温回馏3-4小时，收集浸液，重复加70％乙醇回馏3次。浸液混合，回收乙醇，浓缩成浸膏，制粒20目，装胶囊，按常规制成胶囊剂。每粒胶囊0.4克，为生药3克，病人每天2次，每次4-6粒。

实施例4

本发明丸剂的制备

取茅莓的根10千克，用清水冲洗2次，加20％乙醇15000ml，加温回馏3小时，收集浸液，重复加20％乙醇浸泡4次。浸液混合，回收乙醇，浓缩成浸膏，20目整粒，按常规制成丸剂。每丸10克，含生药8-10克，病人每天2次，每次2丸。小丸粒剂每丸1克，含生药1.2克，病人每天服2次，每次10-15丸。

实施例5

本发明片剂的制备

取茅莓根10千克，用清水冲洗2次，加50％乙醇15000ml浸泡5小时，收集浸液，重复加50％乙醇浸泡4次。收集浸液，回收乙醇，浓缩成浸膏，整粒20目，制成片剂。每片0.4克为含生药4克，病人每天服2次，每次4-6片。

实施例6

本发明泡腾片的制备

取茅莓根10千克、用清水冲洗2次，加30％乙醇15000ml浸泡5小时，收集浸液，重复加30％乙醇回馏3次。浸液混合，回收乙醇，浓缩成浸膏，加柠檬酸0.1千克，碳酸氢钠0.1千克，混匀，整粒，制成泡腾片剂，每片0.6克为含生药4克，病人每天服2次，每次4-6片。

试验例1茅莓根乙醇提取物质量检测方法和质量控制标准的研究

1、茅莓根乙醇提取物部位群的含量测定

根据本发明人对茅莓根初步药学实验表明，茅莓根20-90％乙醇提取物中的总皂苷、黄酮苷、鞣质含量较高，特别是65％左右乙醇的提取物中，上述三个部位群加在一起，达到50％以上。所以重点研究和测定提取物中皂苷、黄酮苷、鞣质的总含量，以及三个部位群的代表物质的含量测定。

2、茅莓根20-90％乙醇提取物总皂苷及代表物含量测定

2.1总皂苷含量测定(紫外)

在含量检测中由于目前国内尚无茅莓皂苷类成分的对照品，选用结构与茅莓皂苷类成分相近的齐墩果酸作为对照品。黄酮、鞣质、同样选用经典方法检测含量。原理：高氯酸-香草醛主要是使皂苷中羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。其吸收度与含量在一定范围内成正比。

2.1.1对照品溶液的制备：精密称取齐墩果酸对照品12.0mg，用甲醇溶解，并定容于50ml量瓶中，摇匀，即得。

2.1.2标准曲线的绘制：精密吸取对照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml分别置具塞试管中，挥干，加入新制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，于60℃水浴加热15min，冰水浴冷却2～3min，加醋酸乙酯5.0ml摇匀，随行试剂做空白，照紫外-可见分光光度法(药典附录VA)，在560nm波长处测定吸收度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果见表1：

                                                表1

试管编号	0	1	2	3	4	5
							对照品溶液(ml)	0.0	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
5％香草醛冰醋酸溶液(ml)	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
							高氯酸(ml)	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8
醋酸乙酯(ml)	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
							吸收度
浓度(μg/ml)

2.1.3茅莓根乙醇提取物中总皂苷含量检测：精密称取茅莓根乙醇提取物0.1g，加40ml蒸馏水，混匀，冰箱放置24h后，抽滤得，精密吸取10ml放置于分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取3次，每次10ml，合并萃取液，水浴挥干，甲醇定容至10ml量瓶中，备用。取供试品储备液0.2ml置于具塞试管中，挥干，按上述方法检测。

结果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的总皂苷含量在10.15-15.50％之间。

2.2熊果酸的含量测定

2.2.1熊果酸配样

2.2.1.1对照品

取熊果酸对照品10.1mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度。浓度为：0.202mg/ml。

2.2.1.2样品

取茅莓药材10.0g，加70％乙醇溶液150ml，水浴回流3小时，放冷，过滤，转移到250ml容量瓶中，加70％乙醇至刻度。取50ml上述溶液，加2ml浓盐酸，加热回流1小时，放冷，用氨水调PH＝4.0-5.0，转移到蒸发皿中，蒸至溶液无醇味，用乙醚萃取3次，每次30ml，蒸干乙醚，用甲醇溶解，转移到10ml容量瓶中，加甲醇至刻度。即样品的浓度为：0.20g生药/ml。

2.2.1.3色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm×25cm，5μm；流动相：甲醇∶水(85∶15)；流速：1.0ml/min；检测波长：215nm；柱温：室温；柱效：理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。

2.2.2熊果酸的含量测定

2.2.2.1线性范围

熊果酸在0.05～0.6mg/ml范围内成线性。

2.2.2.2计算公式

熊果酸含量(‰)＝A_样×C_对(mg/ml)

2.2.2.3试验结果

结果表明茅莓根20-90％乙醇提取物熊果酸含量为1.15-2.66‰。

2.3悬钩子皂苷R₁的含量测定

2.3.1色谱条件

色谱柱：Prontosil Eurobond C₁₈(250mm4.0mm，5μm)；流动相：乙腈-甲醇-0.4％醋酸铵溶液(209∶95∶96)；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；温柱：室温；进样量：20μl。

2.3.2溶液的制备

对照品溶液的制备  精密称取悬钩子皂苷R₁(结构式见下述)对照品适量，以甲醇溶解制成各对照品浓度为1.0mg/ml的混合对照溶液。

悬钩子皂苷R₁结构式：

注：23为COOH；

供试品溶液的制备  精密称取茅莓总皂苷提取物适量，以甲醇溶解制成4.0mg/ml的溶液，微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.3.3方法学考察

2.3.4标准曲线绘制

精密吸取混合对照品溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml置于2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20μl，按上述色谱条件，测定其峰面积值，并以进样量为X(μg)为横坐标，峰面积值为Y(μV.S)为纵坐标，绘制标准曲线。

2.3.5进样精密度试验

精密吸取上述混合对照品溶液20μl，结果标明茅莓根20-90％乙醇提取物悬钩子皂苷R₁为0.68-2.24％。

3、茅莓根20-90％乙醇提取物中总黄酮及代表物含量的测定

3.1总黄酮含量测定原理：黄酮类化合物分子结构中凡在C3C5位有羟基或者能构成邻苯二羟基时，都能够与铝盐形成有颜色的配位化合物，其吸收度与含量在一定范围内成正比。

3.1.1对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品50.0mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

3.1.2标准曲线的绘制：精密吸取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1.0ml，混匀，放置6min，10％硝酸铝溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10.0ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以随行试剂做空白，照紫外-可见分光光度法(药典附录VA)，在500nm波长处测定吸收度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果见表2：

                                        表2

试管编号	0	1	2	3	4	5
							对照品溶液(ml)	0.0	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0
水(ml)	6.0	5.0	4.0	3.0	2.0	1.0
							5％亚硝酸钠溶液(ml)	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
10％硝酸铝溶液(ml)	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
							氢氧化钠试液	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0
吸收度
							浓度(μg/ml)

3.1.3样品含量测定：精密称取茅莓根乙醇提取物1.0g，加乙醚脱脂至无色，将样品凉干，加甲醇90ml加热回流至提取液无色，转移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10ml置100ml量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得。精密吸取供试品溶液3.0ml分别置25ml量瓶中，各加水3.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1.0ml，混匀，放置6min，按上述方法检测总黄酮含量。

结果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的总黄酮含量在25.25-38.50％之间。

3.2槲皮素的含量测定

照高效液相色谱法(药典附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性实验：以十八烷机硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含340μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品粉末约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小时，弃去溶剂，药渣挥干，加甲醇提取4小时，提取液蒸干，残加甲醇-25％盐酸溶液(4∶1)混合液25ml，加热回流30分钟，放冷，转移至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

结果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的槲皮素含量在0.25-0.55％之间。

4、茅莓根20-90％乙醇提取物鞣质及代表物的含量测定

4.1鞣质的含量测定

原理：用紫外检测方法，利用鞣质在碱性溶液中将磷钼酸还原，产生深蓝色，其吸收度与含量在一定范围内成正比。

4.1.1对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品约12mg，用水溶解，并定容于250ml棕色量瓶中，摇匀，即得。

4.1.2标准曲线的绘制：精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分别置25ml棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1.0ml，再分别加水至13ml，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30min，摇匀，随行试剂做空白，照紫外-可见分光光度法(附录VA)，在760nm波长处测定吸收度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

结果见表3：

                                       表3

试管编号	0	1	2	3	4	5
							对照品溶液(ml)	0.0	0.5	1.0	2.0	3.0	4.0
磷钼钨酸试液(ml)	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
							水(ml)	12	11.5	11.0	10.0	9.0	8.0
吸收度
							浓度(μg/ml)

4.1.3供试品溶液的制备：精密称取茅莓根乙醇提取物0.15g，置250ml棕色量瓶中，加水150ml，放置过夜，超声处理10min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置(使固型物沉淀)，滤过，弃去初滤液50ml，精密量取续滤液20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

4.1.4样品含量测定

总酚测定  精密量取供试品溶液2.0ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1.0ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量，计算，即得。

不被吸附的多酚测定  精密量取供试品溶液25ml，加入已经盛有干酪素0.6g的100ml具塞锥型瓶中，密塞，在30℃水浴中保温1h，时时振摇，取出，放凉，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1.0ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量，计算，即得。

按下列式计算鞣质的含量：鞣质含量＝总酚量-不被吸附的多酚量。

结果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的鞣质含量为8.50-13.50％。

4.2表儿茶素的含量测定

4.2.1色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为110∶8∶2的0.04mol/L枸橼酸溶液-N，N-二甲基甲酰胺-四氢呋喃为流动相；检测波长为280nm；流速：1.0ml/min；灵敏度：0.02AUFS；柱温35℃；理论板数按表儿茶素峰计算不低于4500；

4.2.2对照品溶液的制备

将甲醇与水按1∶1的体积比配成混合溶液，精密称取表儿茶素对照品，以上述混合溶液为溶剂，将表儿茶素配制成1ml溶液含表儿茶素约10.5μg；

4.2.3供试品溶液的制备

取本品粉末约0.025g，精密称定，置50ml量瓶中，加等体积的甲醇与水配成的混合溶液40ml，超声处理25分钟，并补加甲醇与水的混合溶液至50ml，摇匀，用0.45μm微孔滤)滤过，即得：

4.2.4测定结果

分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪测定，测得表儿茶素的含量为1.60-2.95％。

4.3没食子酸的含量测定

4.3.1色谱条件与系统适用性实验

以十八烷机硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸溶液(15∶85)为流动相；检测波长为273nm。理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000。

4.3.2对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品适量，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

4.3.3供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，精密加入4mol/l盐酸溶液50ml，水浴中加热水解3.5小时，放冷，滤过。精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。

4.3.4测定结果

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定结果茅莓20-90％乙醇提取物中没食子酸含量为3.15％-6.05％。

上面主要介绍茅莓根乙醇提取物中几种主要部位群(总皂苷、黄酮苷、鞣质)和代表物质的测定方法和含量，测定茅莓根药材上述成分的测定方法与乙醇提取物的方法基本相同和相似。采用与测定茅莓根乙醇提取物几种主要部位群(总皂苷、黄酮苷、鞣质)和代表物质的相同的测定方法，根据实验结果，茅莓根药材皂苷的总含量为0.80-1.5％，黄酮苷的总含量为2.35-4.50％和鞣质的总含量为0.75-1.45％；皂苷的代表成分熊果酸的含量为0.10-0.25‰，黄酮苷的代表成分槲皮素的含量为0.025-0.042％，鞣质的代表成分表儿茶素的含量为0.21-0.32％或没食子酸的含量为0.26％-0.55％。

说明：有关茅莓根乙醇提取物含量测定的方法及数据也可用于复方茅莓根制剂中有关茅莓根乙醇提取物部分的测定方法及质量控制指标。

试验例2本发明药物对大鼠乙二醇性肾结石的治疗作用

试验用含2％乙二醇加1％氯化铵的特殊饲料喂养大鼠4周，每组10只动物，然后用茅莓根乙醇提取物(本发明实施例所制备)治疗，口服250mg/kg，一日一次，连续4周。结果显示大鼠乙二醇性肾结石经茅莓根乙醇提取物治疗后，肾结石明显降低。水煎和不同浓度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物组对肾结石的治疗，分别为40％，50％，70％和60％，比蒸馏水对照组(20％)明显提高，表明茅莓根乙醇提取物对乙二醇性形成的肾结石有较好的效果，其中茅莓根65％乙醇提取物组治疗效果最佳(70％)。阳性对照药双香排石颗粒尿石剂的效果为40％。

试验例3本发明药物对大鼠膀胱内植入人的尿路结石的治疗作用

本实验是将人尿路排出的草酸钙结石植入到大鼠膀胱内，每组10只。然后每天给茅莓根乙醇提取物治疗，口服250mg/kg，一日一次，连续4周。四周后处死动物，取膀胱内结石称重，与植入前比较，目地是观察药物对结石的溶作用。结果表明蒸馏水对照组10只动物，有效率为10％，水煎和不同浓度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物组对肾结石的治疗，有效率分别为30％，50％，80％和60％，比蒸馏水对照组(10％)明显较高。表明茅莓根乙醇提取物对大鼠膀胱内植入人的尿路结石的治疗作用有较好的效果，其中65％乙醇茅莓根提取物组治疗效果最佳(80％)。阳性对照药双香排石颗粒尿石剂的效果为50％。

试验例4本发明药物对大鼠具有明显的利尿作用

一般排石药均具有利尿作用，便于结石排出。茅莓根在每组10只正常大鼠利尿试验中也可观察到，水煎和不同浓度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物组在给药后(口服250mg/kg，)，8小时内排尿量明显高正常对熙组(比正常动物高1.3-2.5倍)，其中茅莓根65％乙醇提取物组利尿作用最为明显。阳性对照药双香排石颗粒尿石剂对正常大鼠也有利尿作用(比正常动物高1.4倍)。

试验例5本发明药物对麻醉家兔输尿管电位活动及尿量的影响

观察麻醉家兔输尿管电位活动试验，每组10只动物。水煎和不同浓度乙醇(20％，65％，90％)的茅莓根提取物组(250mg/kg)治疗后1小时，输尿管动作电位频率开始增加，药后2h达高峰，与生理盐水对照组比较，均有一定的效果。特别是茅莓根65％乙醇的提取物组，药前动作电位频率为15，药后1-2小时为20-22，差异性非常显著(P＜0.01)，其电位幅度也较高。另外，实验注意到茅莓根乙醇提取物组还有扩大管腔，缓解输尿管的痉挛等作用。阳性药双香排石颗粒尿石剂，口服250mg/kg，也有明显增加麻醉家兔输尿管电位活动频率的作用，但比茅莓根65％乙醇提取物组低。

试验例6本发明药物治疗泌尿系统结石的临床疗效观察试验

用茅莓根20-90％乙醇提取物制成泡颗粒剂、胶囊剂和片剂治疗46例肾结石病人，其中颗粒剂16例、胶囊15例剂和片剂15例，现把初步结果小结如下。

1.一般资料

1.1病例选择

46例中，有发作性肾绞痛史者41例，有血尿史者10例。无症状、体检中发现肾结石者5例。46例均经双肾B超确诊。

1.2性别及年龄

男26例，女20例。20-30岁，13例，30-40岁，8例，40-50岁，7例，50-60岁，11例，60岁以上7例。

1.3肾结石情况

(1)单侧肾结石29例，左肾16例、右肾各13例，(2)双侧肾结石17例。(3)46例中，肾结石总数78块，其中左肾36块，右肾42块。(4)结石直径：0.2-1.6cm。

2.治疗方法

茅莓根颗粒剂20克(含20-25克生药)，一天2次，口服。连续2-4周为一个疗程。

3.治疗结果

3.1疗效标准：按要求服药2-4周，复查肾B超。

(1)治愈：结石完全消失。(2)显效：结石缩小50％以上(含50％)。(3)有效：结石有缩小30％以上。(4)无效：结石大小、数量无变化。

3.2临床结果

46例临床疗效如下：痊愈29例，占63.30％；显效9例，占19.56％；有效6例，占13.04％；无效2例，占4.35％；总有效率为95.65％，治愈率为63.30％。

在服药期间未发现无该药有明显副作用，是较为理想的治疗泌尿系结石药物，仅有少数病人在服药时有胃肠不适感，但不影响治疗。

典型病例1

武XX，男性，22岁，因双腰部疼痛而就诊，经双肾B超确诊为双侧肾结石，有0.2-0.8cm结石5块。服用茅莓根泡颗粒剂治疗一周，症状和体征消失，B超检查阴性，确定为临床痊愈。

典型病例2

安XX，女，45岁，因双腰部疼痛而就诊，经双肾B超确诊为双侧肾结石，有0.6-1.2cm结石3块。服用茅莓根口服液，治疗二周，症状和体征消失，B超检查阴性，确定为临床痊愈。

Claims (9)

1.茅莓(Rubus parvifolius L.)根在制备治疗泌尿系统结石药物中的应用。

2.根据权利要求1的应用，其特征在于：将茅莓(Rubus parvifolius L.)根用20-90％乙醇提取，制备成乙醇提取物浸膏干燥粉；将提取物浸膏干燥粉用药学常规方法制备成口服制剂。

3.根据权利要求2的应用，其特征在于：将茅莓(Rubus parvifolius L.)根用65％乙醇提取，制备成提取物浸膏干燥粉。

4.根据权利要求2的应用，其特征在于：所述乙醇提取物浸膏干燥粉的制备工艺如下：

(1)将茅莓根净洗后加0.5-2倍体积20-90％乙醇浸泡3-8小时；

(2)加3-8倍体积20-90％酒精回馏提取3-6次，每次1-2小时；过滤，收集滤液；回收乙醇，滤液浓缩、干燥，即得浸膏或干燥粉。

5.根据权利要求4的应用，其特征在于：所述乙醇提取物浸膏干燥粉的制备工艺如下：

(1)将茅莓根净洗后加1倍体积20-90％乙醇浸泡5小时；

(2)加5倍体积20-90％酒精回馏提取4次，每次1.5小时；过滤，收集滤液；滤液浓缩至相对密度为1.2以上；喷雾干燥，即得浸膏或干燥粉。

6.根据权利要求2的应用，其特征在于：所述乙醇提取物浸膏干燥粉为茅莓药材重量的6.68％-13.26％。

7.根据权利要求2的应用，其特征在于：所述的口服制剂是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液；其中所述的片剂含泡腾片；所述的丸剂含小丸粒剂。

8.根据权利要求2的应用，其特征在于：所述的乙醇提取物浸膏干燥粉中皂苷的总含量为10.15-15.50wt％，其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量为1.15-2.66wt‰、悬钩子皂苷R₁的含量为0.38-2.24wt％；所述的乙醇提取物浸膏干燥粉中黄酮苷的总含量为25.25-38.50wt％，黄酮苷的代表成分槲皮素的含量为0.25-0.55wt％；所述的乙醇提取物浸膏干燥粉中鞣质的总含量为8.50-13.50wt％；鞣质的代表成分表儿茶素的含量为1.60-2.95wt％、没食子酸的含量为3.15-6.05wt％。

9.根据权利要求1的应用，其特征在于：所述的茅莓药材中皂苷的总含量为0.80-1.5wt％、黄酮苷的总含量为2.35-4.50wt％、鞣质的总含量为0.75-1.45wt％；其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量为0.10-0.25wt‰、悬钩子皂苷R₁的含量为0.08-0.21wt％，黄酮苷的代表成分槲皮素的含量为0.025-0.042wt％，鞣质的代表成分表儿茶素的含量为0.21-0.32wt％、没食子酸的含量为0.26-0.55wt％。