CN1886149A - Vegf－c或vegf－d物质及刺激神经干细胞的方法 - Google Patents

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让·L·托马斯
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Abstract

本发明涉及VEGF－C或VEGF－D物质及促进神经干细胞、神经元细胞和神经元前体细胞、少突胶质细胞和少突胶质细胞前体细胞生长和分化的方法和通过施用于所述细胞以抑制神经病的物质和方法。

Description

VEGF-C或VEGF-D物质及刺激神经干细胞的方法
本发明要求均于2003年9月23日提交的美国专利申请10/669,176和美国临时专利申请60/505,607的优先权。所有的优先权申请均完整地并入作为参考。
技术领域
本发明提供与细胞和分子生物学及医学有关的、尤其是脉管形成(vascularization)和血管发生(angiogenesis)领域及脉管系统与神经系统相互作用领域中的物质和方法。
背景技术
神经毡蛋白(neuropilin)受体蛋白与其在脑衰蛋白(collapsin)/脑信号蛋白(semaphorin)分子家族中的配体的相互作用促进神经元生长锥的发育和轴突导向——在神经元组织发育过程中调节正在延伸的轴突的路径的过程。神经元生长锥的不适当回缩将导致不期望的组织过度神经支配(innervation)。
脑衰蛋白/脑信号蛋白属于在氨基端含有大约500个氨基酸的特征性脑信号蛋白域的分子家族。目前已知脑信号蛋白家族的20多个成员，既有分泌形式的也有膜结合形式的，这些成员基于一级蛋白质结构可以分成6个不同的亚组。分泌形式的和膜结合形式的脑信号蛋白均以二硫键连接的同二聚体形式与其受体结合，并且膜结合脑信号蛋白的胞质尾区可以诱导这些配体在细胞膜中簇集。
III型脑信号蛋白是含有后跟有C2型免疫球蛋白样结构域的脑信号蛋白域的分泌蛋白，已经发现其整体涉及神经元生长锥的排斥和萎陷(repulsion and collapse)-一种防止背根神经节、交感神经元和颅神经元及脊神经元的不适当神经支配的过程。
近来鉴定了III型脑信号蛋白的两个受体，神经毡蛋白-1(NRP-1)(Kolodkin等，Cell.90：753-762，1997和He等，Cell.90：739-51，1997)和神经毡蛋白-2(NRP-2)(Chen等，Neuron，19：547，1997)。神经毡蛋白-1，最初从非洲爪蟾属神经系统分离的一种I型膜蛋白，通过脑信号蛋白III受体表达克隆被鉴定为是Sema III和其它脑信号蛋白家族成员的一种高亲和性受体。使用与神经毡蛋白-1同源的序列通过PCR的进一步分析鉴定了相关受体神经毡蛋白-2，该受体表现出与NRP-1在整个蛋白质长度上大约44％的同源性。
NRP-1和NRP-2两者的细胞外部分都表现出有趣的细胞结合域混合，具有命名为a1/a2、b1/b2和c的5种不同蛋白质域。a1/a2(CUB)域类似于在补体成分C1r和Cs中发现的蛋白质序列，而b1/b2域类似于在凝血因子V和VIII中发现的域。c域的中心部分类似于meprin/A5/mu-磷酸酶(MAM)同源域，对于神经毡蛋白的二聚体化是重要的。神经毡蛋白的胞内区域包含跨膜域和一个大约43个氨基酸的短的高度保守胞质尾区，该尾区具有目前未知的催化活性。a1/a2和b1/b2域两者是促进脑信号蛋白与神经毡蛋白结合所必需的。
由于神经毡蛋白的短胞质尾区不具有信号传导能力，故神经毡蛋白可能与其它受体偶联以传递由脑信号蛋白结合所导致的细胞内信号。对此设想的研究得出神经毡蛋白与另一脑信号蛋白受体(丛蛋白(plexin))家族相互作用的结论，该家族具有包含能够经历磷酸化和启动下游信号转导级联的sex-丛蛋白域的胞质尾区(Tamagnone等，Trends in Cell Biol.，10：377-83，2000)。丛蛋白最初作为膜结合脑信号蛋白的孤儿受体分离，并且丛蛋白单独不能结合分泌型脑信号蛋白，例如III型亚家族中的那些分泌型脑信号蛋白。目前，大量证据证明III型脑信号蛋白的结合由受体复合体介导，该复合体包括同或异二聚体神经毡蛋白和转导细胞内信号所必需的丛蛋白分子。丛蛋白与神经毡蛋白的相互作用赋予了脑信号蛋白结合的特异性，并且还可以增加这些配体的结合亲和性。在Fujisawa等(Current Opinion inNeurobiology，8：587，1998)和Tamagnone等(Trends in Cell Biol.，10：377，2000)中综述了脑信号蛋白通过其受体的信号转导。
神经毡蛋白-1(Tagaki等，Neuron 7：295-307，1991；Fujisawa等，CellTissue Res.290：465-70，1997)，一种基因定位在染色体10p12上的140kD蛋白质(Rossingnol等，Genomics 57：459-60，1999)，于各种各样的发育期组织，包括神经组织、心血管系统的毛细管和脉管、和骨骼组织中表达，并且持续存在于许多成年组织，最显著地胎盘和心脏中。除了结合Sema3A外，NRP-1也结合其它几种脑信号蛋白家族成员，包括Sema3B、Sema3C(SemaE)和Sema3F(SemaIV)(低亲和力)(He等，Cell 90：739-51，1997；Kolodkin等，Cell 90：753-62，1997)。NRP-1基因座的纯合突变体小鼠不仅表现出在轴突导向上的缺陷，还显示出脑中脉管化的改变以及心脏大脉管形成缺陷(Kawasaki等，Development 126：4895，1990)。有趣的是，NRP-1在胚胎中的过表达导致过度的毛细管和脉管形成以及出血，这提示NRP-1在脉管的发育中起作用(Kitsukawa等，Development，121：4309，1995)。
最近的证据显示，神经毡蛋白-1可以作为血管内皮生长因子同种型(VEGF/VEGF-A)的受体(Soker等，Cell 92：735，1998)，血管内皮生长因子是胚胎发育中脉管化和脉管发生的关键介质(见Robinson等，J.Cell Science，114：853-65中的综述)并在肿瘤的脉管发生中有显著作用。VEGF与受体酪氨酸激酶(RTK)VEGFR-1和VEGFR-2的结合有利于脉管发育。非肝素依赖性VEGF121同种型和结合肝素的VEGF165在体外以相同的亲和力与VEGFR-2结合，但是不引起等同生物化学反应，这说明有额外的因子介导VEGFR-2的活化(Whitaker等，J.Bio Chem.276：25520-31，2001)。对VEGF几种剪接变体的结合的分析揭示：NRP-1不结合VEGF121同种型，但以肝素依赖性方式在NRP-1的b域中选择性地结合VEGF165变体(Giger等，Neuron 21：1079-92，1998)。NRP-1对VEGF165同种型显示出的结合亲和性与NRP-1对其Sema3A配体的结合亲和性相当。NRP-1对VEFG165的这种差别亲和性可能解释该剪接变体超过非肝素结合型VEGF121的信号转导能力，并且可能说明神经毡蛋白-1在VEGF结合中作为共受体与VEGFR-2相互作用(Whitaker等，2001)，这类似于其在丛蛋白/脑信号蛋白复合体中的角色。VEGF165通过VEGF外显子7与NRP-1结合，该外显子赋予该分子肝素结合亲和性并且其不存在于VEGF121同种型中。NRP-1也与其它VEGF家族成员，VEGF-B(Migdal等，J.Biol.Chem.273：22272-78，1998)、胎盘生长因子(PIGF-2)(Makinen等，J.Biol.Chem.274：21217-222，1999)和VEGF-C(国际专利公布WO00/23565)结合。
神经毡蛋白-2(Chen等，Neuron 19：547-59，1997)，一种基因定位在染色体2q34上的120kD蛋白质(Rossingnol等，Genomics 57：459-60，1999)，在发育的胚胎中表现出与神经毡蛋白-1相似的组织分布，但是其似乎不在毛细血管的内皮细胞中表达(Chen等，Neuron 19：547-59，1997)，而在毛细淋巴管中表达。NRP-2也是脑信号蛋白受体，以高亲和性和Sema3F结合，以和Sema3C/NRP-1结合相当的亲和性与Sema3C结合，NRP-2似乎也以非常低的亲和性和Sema3A发生相互作用(Kolodkin等，Cell 90：753-62，1997)。NRP-2缺陷小鼠在交感神经元和海马神经元的Sema3F依赖性形成上存在缺陷，并在外周和中枢神经系统的轴突投射(axonal projection)上存在缺陷，这暗示NRP-2参与轴突导向(Chen等，Neuron 25：43-56，2000；Giger等，Neuron25：29-41，2000)并提示NRP-1和NRP-2在发育中具有不同作用。NRP-2敲除小鼠在发育过程中显示出没有或具有严重减少的小淋巴管和毛细管，但动脉、静脉和较大的淋巴管正常，这提示NRP-2是小淋巴管和毛细管发育所必需的(Yuan等，Development 129：4794-806，2002)。此外，在向平滑肌细胞分布神经的位点，例如肠系膜、肌和粘膜下神经丛中也已经注意到NRP-2的表达(Cohen等，Biochem.Biophy.Res.Comm.284：395-403，2001)。
实验室证据确立，与NRP-1类似，神经毡蛋白-2优先地结合VEGF165，并表现出另外与VEGF145同种型——VEGF的另一肝素结合型剪接变体——的结合(Gluzman-Poltorak等，J.Biol Chem.275：18040-45，2000)。神经毡蛋白-2与缺少外显子7的VEGF145剪接变体的相互作用由VEGF145的外显子6介导，该外显子与外显子7一样能够介导肝素结合活性。VEGF145不能结合NRP-1，这进一步支持了神经毡蛋白-1和神经毡蛋白-2在脉管发育中功能不同的理论。VEGF145最初从雌性生殖道癌分离(Pavelock等，Endocrinology.142：613-22，2001)，其中神经毡蛋白-2在该位置的表达与NRP-1和VEGFR-2相比表现出响应激素改变受到不同的调节。两种神经毡蛋白、VEGF和VEGFR在特定细胞类型中的共表达可能指示潜在受体/配体复合体的形成，需要更细致地研究。
VEGF/VEGFR相互作用在胚胎脉管化和脉管发生中扮演着不可缺少的角色，并且其在伤口愈合、雌性生殖系统的修复、以及肿瘤生长过程中参与成年组织的新脉管化。阐明参与调节新脉管化和脉管发生的其它因子以及它们在这些过程中的作用将有助于开发治疗方法以防止实体瘤脉管化和诱导肿瘤消退、在损伤、手术或组织移植后诱导脉管化以促进更快更有效的伤口愈合、或通过诱导形成向缺血组织提供营养的脉管和动脉来治疗局部缺血。事实上，对脉管发生过程的调节可能有助于治疗或治愈许多困扰发达国家人民的极重大疾病，例如，脑梗死/出血、急性心肌梗死和缺血及癌症。
对神经元生长的调节也有助于治疗许多先天的、变性的、及创伤相关的神经学病症。新发现的神经毡蛋白和VEGF的相互作用为分子水平干预神经元和脉管疾病和病症提供了一个靶标。然而，开发靶向治疗的任务因神经毡蛋白存在多种结合配偶体(partner)而复杂化。需要对与神经毡蛋白结合的分子进行详细描述，以便：允许鉴定对神经毡蛋白活性的调节作用和优化这些分子的特异性从而优化有害脉管发生领域，如癌症或实体瘤生长领域的治疗方法，以及加强促脉管发生性质从而促进和加速所需血管的生长(例如在伤口愈合中)；和优化涉及神经元生长和组构的治疗方法。
发明概述
本发明通过鉴定神经毡蛋白和VEGF-C分子之间及神经毡蛋白和VEGFR-3分子间的新分子相互作用，满足了调节脉管发生系统和神经系统的生长和功能的相关领域中的一个或多个需要。这些新描述的相互作用将促进用于调节脉管发生过程(包括淋巴管发生过程)及涉及神经细胞生长、分化和再生的过程的新物质和方法的鉴定。此外，这些新描述的相互作用也将有利于更好的治疗靶向，因为其使得可以设计出高度选择性地调节单一受体-配体相互作用的分子或调节多种相互作用的分子。
例如，VEGF-C-神经毡蛋白相互作用的发现为鉴定调节(上调/激活/刺激或下调/抑制)VEGF-C-神经毡蛋白相互作用的新治疗性分子提供了新的筛选试验方法。这些分子可以作为治疗剂(和/或引导化合物)用于受到VEGF-C/神经毡蛋白的相互作用影响的疾病和病症，包括淋巴管或血管生长在其中发挥作用的那些疾病和病症，或神经系统疾病和病症。
一个实施方案中，本发明提供鉴定调节神经毡蛋白受体与VEGF-C多肽的结合的调节剂的方法，包括步骤：
a)使包含神经毡蛋白多肽的神经毡蛋白组合物与包含VEGF-C多肽的VEGF-C组合物在有和无推测的调节剂分子存在下接触；
b)检测神经毡蛋白多肽和VEGF-C多肽在有和无推测的调节剂分子存在下的结合；和
c)基于神经毡蛋白多肽和VEGF-C多肽在推测的调节剂分子存在时的结合相对于两者在无推测的调节剂分子存在时的结合的减少或增加，鉴定调节剂化合物。
在一个变体实施方案中，该方法还包括步骤(d)：通过在载体，优选地可药用载体中配制根据步骤(c)鉴定的调节剂，制备调节剂组合物。由此配制的调节剂可以用于动物研究，也可以作为治疗剂给药以进行组织成像或治疗与神经毡蛋白-VEGF-C相互作用有关的疾病，其中化合物的给药可能干扰这些分子的有害活性或促进有益活性。因此，在另一变化方案中，该方法还包括步骤(e)：给包含表达神经毡蛋白受体的细胞的动物施用该调节剂组合物，和测定该调节剂组合物在动物中的生理作用。所述动物可以是人，或用于人类医学研究的任何动物模型，或重要的动物例如牲畜或宠物。在优选的变化方案中，动物(包括人类)患有以异常神经毡蛋白-2/VEGF-C生物学为特征的疾病或病症，并且调节剂改善该动物的状况(例如，通过减少疾病症状、减缓疾病进程、治愈疾病或否则改善临床结局)。
前述方法的步骤(a)涉及在有和无化合物存在时使神经毡蛋白组合物与VEGF-C组合物接触。“神经毡蛋白组合物”指包括整个神经毡蛋白受体多肽或包括至少神经毡蛋白多肽中对于此特定试验而言所必需的部分——在此情况下神经毡蛋白多肽中参与VEGF-C结合的部分——的任何组合物。神经毡蛋白组合物的例子包括：(i)包含含有整个神经毡蛋白蛋白或含有与VEGF-C多肽结合的神经毡蛋白受体胞外域片段的纯化多肽的组合物；(ii)包含表面含有神经毡蛋白受体多肽的磷脂膜的组合物；(iii)经重组修饰而在表面表达增加量的神经毡蛋白受体多肽的活细胞(例如，通过将神经毡蛋白基因，优选地与附着的启动子一起，插入细胞；或通过扩增内源神经毡蛋白基因；或通过插入外源启动子或其它调节序列以上调内源神经毡蛋白基因)；和(iv)天然地在表面表达神经毡蛋白受体多肽的任何分离的细胞或组织。对于某些试验形式，可能期望目的神经毡蛋白分子(例如包含含有神经毡蛋白受体胞外域片段的多肽的组合物)与固相支持物，例如珠或试验板孔结合。“神经毡蛋白组合物”旨在也包括这样的结构。同样，融合蛋白也在考虑之列，其中神经毡蛋白多肽与另一蛋白(例如抗体Fc片段)融合以提高溶解性或提供标志物表位或实现任何其它目的。对于其它试验形式，可能优选可溶性神经毡蛋白多肽。在一个优选变化方案中，神经毡蛋白组合物包含含有与免疫球蛋白Fc片段融合的神经毡蛋白受体胞外域片段的多肽。尽管目前已知的是两个家族成员，神经毡蛋白-1和神经毡蛋白-2，但使用以后发现的其它神经毡蛋白受体家族成员来实施本发明亦在考虑之列。所选的神经毡蛋白受体优选来源于脊椎动物，更优选哺乳动物，再更优选灵长类动物，再更优选人类。尽管明显地在所选神经毡蛋白受体的功能性部分与天然受体具有相同氨基酸序列时本试验将可能产生最佳结果，但是清楚的是，当在神经毡蛋白序列中引入不消除其VEGF-C结合性质的变异时本发明仍能够实施。尤其考虑使用具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸同一性的变异序列。
VEGF-C分子天然以分泌因子形式存在，其在释放至周围环境中前经历几次酶切反应。因此，“VEGF-C组合物”指包括前VEGF-C原(prepro-VEGF-C)多肽、前VEGF-C原的中间和最终断裂产物、ΔNΔC VEGF-C、或包括至少VEGF-C中对于此特定试验而言所必需的部分——在此情况下参与结合神经毡蛋白受体的部分——的任何组合物。VEGF-C组合物的例子包括：(i)包含纯化的完整前VEGF-C原多肽或包含与选用于本试验的神经毡蛋白受体结合的前VEGF-C原多肽片段的组合物；和(ii)来自分泌VEGF-C蛋白的细胞的条件培养基。对于某些试验形式，可能期望目的VEGF-C分子(例如，包含VEGF-C片段的多肽)与固相支持物如珠或试验板孔结合。“VEGF-C组合物”旨在也包括此类结构。同样地，融合蛋白也在考虑之列。本文提供的数据确立VEGF-C同种型与神经毡蛋白-1及神经毡蛋白-2结合。所选的VEGF-C多肽优选来源于脊椎动物，更优选哺乳动物，再更优选灵长类动物，再更优选人类。在一个实施方案中，VEGF-C组合物包含人前VEGF-C原的片段，该片段含有SEQ ID NO：24的103-227位氨基酸。在另一实施方案中，VEGF-C组合物包含SEQ ID NO：24的人前VEGF-C原序列的32-227位氨基酸。尽管明显地在所选VEGF-C的功能性部分与天然VEGF-C的相应部分具有相同氨基酸序列时本试验将可能产生最佳结果，但是清楚的是当在VEGF-C序列中引入不消除其神经毡蛋白受体结合性质的变异时本发明仍能够实施。尤其考虑使用具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸同一性的变异序列。
步骤(a)中使用的推测的调节剂化合物可以是期望测试其调节神经毡蛋白-VEGF-C相互作用的能力的任何有机或无机化学分子或生物分子或物质组合物。由于最优选的调节剂是可以作为治疗物给药的那些调节剂，故显然具有有限的毒性的分子是优选的。然而，毒性可以在后续试验中筛选，并且可以通过药剂师的设计从化合物中除去。尤其考虑筛选化学药品文库例如惯常由制药公司保持的那些文库，或组合文库，肽文库等。
上述方法的步骤(b)包括检测神经毡蛋白和VEGF-C在有和无化合物存在时的结合。可以使用用于检测分子间结合的任何技术。优选对结合提供定量测量的技术。例如，神经毡蛋白/VEGF-C之一或两者可以包含标记物，例如放射性同位素、荧光团、荧光蛋白(例如，天然或合成的绿色荧光蛋白)、染料、酶或底物等。这些标记物有利于使用标准实验室设备和技术实施定量检测。免疫测定是用于检测两种分子间的结合的一种常用高效技术。
当神经毡蛋白组合物包含在表面上天然表达或重组表达神经毡蛋白的细胞时，常常可以间接地，例如，通过检测或测量VEGF-C结合诱导的细胞内生理变化，检测VEGF-C的结合。这些可能的变化包括该神经毡蛋白相关VEGF-受体的磷酸化；细胞趋化性；细胞生长；DNA合成；细胞形态改变；离子流等。
上述方法的步骤(c)涉及基于神经毡蛋白受体多肽和VEGF-C多肽在推测的调节剂化合物存在时的结合相对于两者在无推测的调节剂化合物存在时的结合的增加或减少，鉴定调节剂化合物。一般地，更有吸引力的调节剂是以低浓度激活或抑制神经毡蛋白-VEGF-C结合由此允许以较低有效剂量在药物组合物中使用的那些调节剂。
另一实施方案中，本发明提供筛选VEGF-C生物学活性的调节剂的选择性的方法。术语“选择性”——当在本文中用于描述调节剂时——指调节剂调节一种蛋白质-蛋白质相互作用(例如，VEGF-C与神经毡蛋白-2的结合)并同时最小地影响该结合对中的一个或多个蛋白的另一蛋白质-蛋白质相互作用(例如，VEGF-C与VEGFR-2或VEGFR-3或神经毡蛋白-1的结合)的能力。具有较高选择性的调节剂显著地改变第一蛋白质-蛋白质相互作用并最小地影响另一蛋白质-蛋白质相互作用，而非选择性调节剂将改变两种或两种以上的蛋白质-蛋白质相互作用。可以理解，选择性对于设计有效药物具有巨大意义。例如，在一些情况下，由于希望调节脉管生长但不调节神经的生长，可能期望鉴定改变VEGF-C/神经毡蛋白相互作用但不改变脑信号蛋白/神经毡蛋白相互作用的调节剂。或者，可能期望使用调节神经元生长的选择性调节剂。在一些情况下可能期望无选择性地抑制所有VEGF-C相关活性，例如，在抗肿瘤治疗中。本文中鉴定的分子相互作用使得可以使用新的筛选试验以帮助鉴定调节剂的选择性。
例如，VEGF-C分子也是VEGFR-2和VEGFR-3酪氨酸激酶受体的已知配体。VEGF-C/VEGFR-3相互作用似乎完整参与淋巴管系统的发育和维持，并且其可能还参与癌通过淋巴系统的转移。在一个实例中，特异地调节VEGF-C/神经毡蛋白相互作用可能是有益的，而在另一实例中选择性地调节VEGF-C/VEGFR相互作用可能是有用的。本发明提供鉴定调节剂对神经毡蛋白-VEGF-C结合或VEGF-C-VEGFR结合的选择性的复筛选试验(counterscreen assay)。
因此，在一个变化方案中，本发明提供包括如下步骤的方法：
a)在有和无化合物存在下使VEGF-C组合物与神经毡蛋白组合物接触，检测在有和无化合物存在下VEGF-C和神经毡蛋白(于组合物中)的结合，其中有化合物存在下的结合与无化合物存在下的结合之间的差别将该化合物确定为VEGF-C和神经毡蛋白结合的调节剂；
b)在有和无该化合物存在下使VEGF-C组合物与包含VEGF-C结合配偶体的组合物接触，检测在有和无该化合物存在下VEGF-C和结合配偶体的结合，其中有化合物存在下的结合与无化合物存在下的结合之间的差别将该化合物确定为VEGF-C和该结合配偶体结合的调节剂；其中所述结合配偶体选自：
(i)包含VEGFR-3胞外域的多肽；和
(ii)包含VEGFR-2胞外域的多肽；和
c)基于步骤(a)和(b)中检测到的结合，鉴定该调节剂化合物的选择性。
上述实施方案的步骤(a)涉及如前描述的神经毡蛋白组合物与VEGF-C组合物的接触。上述方法的步骤(b)涉及在有和无相同化合物存在下使步骤(a)中描述的VEGF-C组合物与包含VEGF-C结合配偶体的组合物接触。所述VEGF-C结合配偶体选自：(i)包含VEGFR-3胞外域的多肽；(ii)包含VEGFR-2胞外域的多肽。因此，上述实施方案包括测量，相对于VEGF-C和其受体VEGFR-2和VEGFR-3的结合，VEGF-C/神经毡蛋白结合的调节剂的选择性。所选的VEGF-C结合配偶体优选来源于脊椎动物，更优选哺乳动物，再更优选灵长类动物，再更优选人类。尽管明显地在所选VEGF-C结合配偶体的功能性部分与天然VEGF-C结合配偶体具有相同氨基酸序列时本试验将可能产生最佳结果，但是清楚地当在VEGF-C结合配偶体序列中引入不消除其VEGF-C结合性质的变异时本发明仍能够实施。尤其考虑使用具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸同一性的变异序列。用于检测分子间结合的任何技术均可以使用。例如，结合配偶体或VEGF-C之一或两者可以包含标记物，例如放射性同位素、荧光团、荧光蛋白(例如，天然或人工绿色荧光蛋白)、染料、酶或底物等。这些标记物有利于使用标准实验室设备和技术进行检测。
在一个变化方案中，结合配偶体组合物包含在其表面天然或重组地表达该结合配偶体的细胞。在此情况下，常常可以间接地，例如，通过检测或测量VEGF-C结合诱导的细胞生理学变化，检测VEGF-C的结合。这些可能的变化包括相关VEGFR的磷酸化；细胞趋化性；细胞生长；细胞形态改变；离子流等。
上述方法的步骤(c)涉及基于步骤(a)和(b)中的增加的或减少的结合，鉴定调节剂化合物的选择性。构成选择性调节剂的化合物将在步骤(a)或步骤(b)中造成显著不同的结合，但不会在步骤(a)和(b)两者中均造成显著不同的结合。非特异性调节剂在步骤(a)和(b)两者中均造成显著不同的结合。
在再一实施方案中，本发明提供筛选神经毡蛋白生物学活性的调节剂的选择性的方法，包括步骤：
a)在有和无化合物存在下使神经毡蛋白组合物与VEGF-C组合物接触，检测在有和无化合物存在下神经毡蛋白和VEGF-C的结合，其中有化合物存在下的结合与无化合物存在下的结合之间的差别将该化合物确定为神经毡蛋白和VEGF-C结合的调节剂；
b)在有和无该化合物存在下使神经毡蛋白组合物与包含神经毡蛋白结合配偶体的组合物接触，检测在有和无该化合物存在下神经毡蛋白和结合配偶体的结合，其中有化合物存在下的结合与无化合物存在下的结合之间的差别将该化合物确定为神经毡蛋白和该结合配偶体结合的调节剂；其中所述结合配偶体选自：
(i)包含脑信号蛋白3多肽的氨基酸序列的多肽；
(ii)包含VEGF-A氨基酸序列、VEGF-B氨基酸序列、VEGF-D氨基酸序列、PIGF-2氨基酸序列、VEGFR-1氨基酸序列、VEGFR-2氨基酸序列、VEGFR-3氨基酸序列的多肽；和
(iii)包含丛蛋白多肽的氨基酸序列的多肽；
c)基于步骤(a)和(b)中检测到的结合，鉴定该调节剂化合物的选择性。
上述实施方案的步骤(a)涉及如前描述的神经毡蛋白组合物与VEGF-C组合物的接触。上述方法的步骤(b)涉及在有和无化合物存在下步骤(a)中描述的神经毡蛋白组合物与包含神经毡蛋白结合配偶体的组合物进行接触。神经毡蛋白结合配偶体包括除VEGF-C之外与神经毡蛋白结合的任何蛋白质。该结合配偶体的实例包括如下多肽：包含脑信号蛋白3家族多肽成员的氨基酸序列的多肽；包含VEGF-A氨基酸序列的多肽、包含VEGF-B氨基酸序列的多肽、包含VEGF-D氨基酸序列的多肽、包含PIGF-2氨基酸序列的多肽、包含VEGFR-1氨基酸序列的多肽、包含VEGFR-2氨基酸序列的多肽、包含VEGFR-3氨基酸序列的多肽；和包含丛蛋白家族成员的氨基酸序列的多肽。所选的结合配偶体优选来源于脊椎动物，更优选哺乳动物，再更优选灵长类动物，再更优选人类。尽管明显地在所选神经毡蛋白结合配偶体的功能性部分与天然序列具有相同氨基酸序列时本试验将可能产生最佳结果，但是清楚地当在天然序列中引入不消除其神经毡蛋白结合性质的变异时本发明仍能够实施。尤其考虑使用具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸同一性的变异序列。
上述方法包括检测神经毡蛋白组合物和该结合配偶体在有和无所述化合物存在下的结合。用于检测分子间结合的任何技术均可以使用。例如，结合配偶体或神经毡蛋白之一或两者可以包含标记物，例如放射性同位素、荧光团、荧光蛋白(例如，天然或人工绿色荧光蛋白)、染料、酶或底物等。这些标记物有利于使用标准实验室设备和技术进行的检测。
上述方法的步骤(c)涉及基于步骤(a)和(b)中的增加的或减少的结合来鉴定调节剂化合物的选择性，和获得如前所述的选择性调节剂化合物的特征。
在另一实施方案中，本发明提供筛选神经毡蛋白生长因子受体和VEGFR-3多肽结合的调节剂的方法，包括步骤：
a)在有和无推测的调节剂化合物存在下使神经毡蛋白组合物和VEGFR-3组合物接触；
b)检测神经毡蛋白和VEGFR-3在有和无该推测的调节剂化合物存在下的结合；和
c)基于神经毡蛋白组合物和VEGFR-3组合物在有该推测的调节剂化合物存在下的结合相对于在无该推测的调节剂化合物存在下的结合的减少和增加，鉴定调节剂化合物。
前述方法的步骤(a)涉及在有和无推测的调节剂化合物存在下使所述神经毡蛋白组合物与VEGFR-3组合物接触。其中所考虑的神经毡蛋白组合物在之前已经进行过描述。“VEGFR-3组合物”包括选自如下的成员：(i)包含含有完整VEGFR-3蛋白质或含有与神经毡蛋白结合的VEGFR-3片段的纯化多肽的组合物；(ii)包含在其表面含有VEGFR-3多肽的磷脂膜的组合物；(iii)经重组修饰而在其表面表达增加量的VEGFR-3的活细胞；和(iv)天然在其表面表达VEGFR-3的任何分离的细胞或组织。对于某些试验形式，可能期望将目的VEGFR-3分子(例如，包含VEGFR-3胞外域片段的多肽)与固相支持物例如珠或试验板孔结合。“VEGFR-3组合物”旨在也包括此类结构。同样地，融合蛋白也在考虑之列。对于其它试验形式，可能优选可溶性VEGFR-3肽。在一个优选变化方案中，VEGFR-3受体组合物包含与免疫球蛋白Fc片段融合的VEGFR-3受体片段。
上述方法的步骤(b)涉及检测神经毡蛋白组合物和VEGFR-3组合物在有和无所述化合物存在下的结合。用于检测分子间结合的任何技术均可以使用。例如，神经毡蛋白/VEGFR-3之一或两者可以包含标记物，例如放射性同位素、荧光团、荧光蛋白(例如，天然或人工绿色荧光蛋白)、染料、酶或底物等。这些标记物有利于使用标准实验室设备和技术进行检测。
一般地，更有吸引力的调节剂是以较低浓度激活或抑制神经毡蛋白-VEGFR-3的结合由此允许其以较低有效剂量在药物组合物中使用的调节剂。
在另一实施方案中，本发明提供筛选VEGFR-3生物学活性的调节剂的选择性的方法，包括步骤：
a)在有和无化合物存在下使VEGFR-3组合物与神经毡蛋白组合物接触，检测在有和无化合物存在下VEGFR-3和神经毡蛋白的结合，其中有化合物存在下的结合与无化合物存在下的结合之间的差别将该化合物确定为VEGFR-3和神经毡蛋白结合的调节剂；
b)在有和无该化合物存在下使VEGFR-3组合物与包含VEGFR-3结合配偶体的组合物接触，检测在有和无该化合物存在下VEGFR-3和结合配偶体的结合，其中有化合物存在下的结合与无化合物存在下的结合之间的差别将该化合物确定为VEGFR-3和该结合配偶体结合的调节剂；其中所述结合配偶体选自：
(i)包含VEGF-C多肽的多肽；和
(ii)包含VEGF-D多肽的多肽；和
c)基于步骤(a)和(b)中检测到的结合，鉴定该调节剂化合物的选择性。
选择性调节剂在步骤(a)或步骤(b)中造成显著的差别结合，但不在步骤(a)和步骤(b)两者中均造成显著的差别结合。
明显地，前述选择性筛选仅仅是本发明特异选择性筛选的一部分，因为神经毡蛋白、VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3均具有多种结合配偶体，由此产生大量的选择性筛选排列组合。本发明尤其考虑涉及观察如下相互作用之一：(i)神经毡蛋白-1/VEGF-C；(iii)神经毡蛋白-2/VEGF-C；(v)神经毡蛋白-1/VEGFR-3；和(vi)神经毡蛋白-2/VEGFR-3；以及至少一种其它相互作用(例如，这些分子之一的已知相互作用，和来自前所述列的第二相互作用)的任何选择性筛选方法。
同样地，所有这些调节剂筛选和选择性筛选都可以任选地包括如下步骤之一或两者：(1)通过将所选调节剂配制在可药用载体中制备调节剂组合物；和(2)将由此配制的调节剂施用于动物或人并确定调节剂的效果。优选地，所述动物或人患有涉及前述分子相互作用之一的疾病或病症，并且对所述动物或人进行监测以确定调节剂对期望获得改善或治愈的该疾病或病症的效果。
神经毡蛋白-2和神经毡蛋白-1与VEGF-C结合的发现，为研究许多目前已知疾病状态中涉及的生物学过程提供了新的有用物质和方法。例如，本发明提供调节哺乳动物生物体中细胞生长、迁移或增殖的方法，包括步骤：
(a)鉴定具有表达神经毡蛋白受体的细胞的哺乳动物生物体；和
(b)向所述哺乳动物生物体施用组合物，所述组合物包含神经毡蛋白多肽或其与VEGF-C多肽结合的片段；
其中以有效地调节该哺乳动物生物体中表达神经毡蛋白的细胞的生长、迁移或增殖的量施用该组合物。优选施用可溶形式的神经毡蛋白。
优选地，该哺乳动物生物体是人。此外，所述细胞优选包括脉管内皮细胞、尤其是淋巴来源的细胞，例如人微脉管内皮细胞(HMVEC)和人皮下脂肪垫微脉管细胞(HUCEC)。在一个高度优选的实施方案中，生物体患有以内皮细胞异常生长、迁移或增殖为特征的疾病。药剂的施用可以例如，通过纠正该异常生长、迁移或增殖、或降低其严重性或减少其有害症状或影响，而对该异常生长、迁移或增殖造成有益的改变。
例如，在一个变化方案中，动物患有癌症，尤其是以包含表达神经毡蛋白的内皮细胞的脉管系统为特征的癌性肿瘤。选择可以降低这些细胞的生长、迁移或增殖、并由此可以通过防止新脉管系统生长而阻滞肿瘤生长的组合物。在此情况下，可能希望施用抑制其它内皮生长因子/受体相互作用的药剂，例如VEGF家族配体的抑制剂；内抑素(endostatin)；抑制性angiopoietin等。抑制剂的实例包括对这些生长因子或其配体具有特异性的抗体物质。本发明还考虑治疗表现出表达VEGFR-3的脉管内皮细胞或表达VEGFR-3的淋巴内皮细胞的淋巴管瘤、淋巴管肉瘤和转移瘤。一个实施方案中，通过施用抑制VEGFR-3和其配体相互作用的组合物，减少或彻底破坏淋巴管发生并阻滞癌细胞扩散。在另一实施方案中，通过施用刺激VEGFR-3和其配体相互作用的组合物，增强淋巴管发生并加速伤口愈合。
本发明还考虑包括如下步骤的用于调节哺乳动物生物体中细胞的生长、迁移或增殖的方法：
(a)鉴定具有表达神经毡蛋白受体的细胞的哺乳动物生物体；和
(b)向所述哺乳动物生物体施用组合物，所述组合物含有对该神经毡蛋白受体和VEGF-C多肽具有特异性的双特异性抗体，其中以有效地调节哺乳动物生物体中表达该神经毡蛋白受体的细胞的生长、迁移或增殖的量施用该组合物。在一个备选实施方案中，该双特异性抗体对神经毡蛋白受体和VEGFR-3多肽具有特异性。
一个实施方案中，本发明提供特异地结合神经毡蛋白受体和VEGF-C多肽的双特异性抗体。或者，本发明提供特异地结合神经毡蛋白受体和VEGFR-3多肽的双特异性抗体。
另一实施方案中，本发明还可以用于抑制中枢神经系统中的神经变性。在周围及更尤其地中枢神经系统中围绕神经元损伤的疤痕的出现与脑信号蛋白配体的组成型表达相关。而且，在阿尔茨海默氏病患者的脑中已经检测到Sema3F(神经毡蛋白-2受体的主要配体)的上调。本发明提供通过使用特异地干扰神经系统中的脑信号蛋白活性的VEGF-C组合物、改变这些脑信号蛋白-神经毡蛋白相互作用的手段。
例如，本发明提供调节哺乳动物生物体中的异常生长或神经元结疤(neuronal scarring)的方法，包括步骤：
(a)鉴定具有表达神经毡蛋白受体的神经元细胞的哺乳动物生物体；和
(b)给所述哺乳动物生物体施用组合物，所述组合物包含VEGF-C多肽或其与神经毡蛋白受体结合的片段；
其中以有效地在该哺乳动物生物体表达神经毡蛋白的细胞中减少神经元结疤的量施用该组合物。
其它可以治疗的病症包括炎症(例如，类风湿性关节炎、慢性伤口和动脉粥样硬化)。
类似地，本发明提供包含可以与神经毡蛋白受体结合的VEGF-C片段的多肽在制备用于治疗以表达神经毡蛋白受体的细胞的异常生长、迁移或增殖为特征的疾病的药物中的应用。
同样地，本发明还提供包含可以与VEGF-C结合的神经毡蛋白片段的多肽在制备用于治疗以表达神经毡蛋白受体的细胞的异常生长、迁移或增殖为特征的疾病的药物中的应用。优选缺少跨膜域的神经毡蛋白的可溶性形式。本发明还提供包含可以与VEGFR-3多肽结合的神经毡蛋白受体片段的多肽在制备用于治疗以表达VEGFR-3多肽的细胞的异常生长、迁移或增殖为特征的疾病的药物中的应用。
关于本发明的涉及向哺乳动物施用蛋白质药剂的方面，本发明的一个相关方面包括基因治疗，借此编码目的蛋白质的基因以能够实现该目的蛋白质在该动物中的表达的方式施用。例如，可以将目的基因与适宜启动子连接以启动蛋白质在目的靶细胞中的表达，而且该目的基因可以在任何能够将该基因递送至细胞的基因治疗载体中递送，所述载体包括腺病毒载体、腺相关病毒载体、脂质体、裸DNA转移等。
本文中描述的VEGF-C作为神经营养和神经保护性生长因子起作用的证据，支持了用于治疗存在神经元丧失或功能缺陷的问题的疾病的新治疗策略。此外，本发明还提供通过使用“VEGF-C抑制剂”抑制成神经细胞瘤或其它神经来源的肿瘤的方法。任选地，VEGF-C抑制剂与VEGFR-3抑制剂或一种或多种PDGF或PDGFR抑制剂或神经生长因子抑制剂联合施用。
一个实施方案中，本发明提供在哺乳动物个体中促进神经元细胞或神经元前体细胞的募集、增殖、分化、迁移或存活的方法，包括向所述个体施用包含血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物的组合物。术语“募集”指动员一种细胞类型(例如使之迁移)的能力，例如向神经病理学位点调动神经元细胞和神经元前体细胞的能力。术语“增殖”指有丝分裂繁殖。术语“分化”指多能和其它非终末分化的神经元前体细胞发育成其它细胞类型的过程。分化可能涉及许多介于多能和完全分化的细胞类型之间的阶段。术语“存活”指神经元或前体细胞维持代谢和其它细胞功能的能力。
本发明中所用术语“VEGF-C产物”包括任何全长(前原-)VEGF-C多肽；维持了VEGF-C多肽的至少一种生物学活性(例如与VEGF-C受体结合)的其片段；编码并可以用于表达VEGF-C多肽的VEGF-C多核苷酸及其片段；包含该多核苷酸的载体(尤其是，表达载体和基因治疗载体)；和表达VEGF-C多肽的重组细胞。
VEGF-C多肽天然以前肽原(prepro-peptide)形式存在，在分泌至周围环境中之前其经历信号肽和C末端前肽(pro-peptide)的蛋白酶解加工。进一步蛋白酶解加工断裂N末端前肽，释放完全加工形式的VEGF-C。“VEGF-C产物”包括前VEGF-C原多肽、前VEGF-C原的中间和最终断裂产物、VEGF-CΔNΔC、VEGF-CΔC156、VEGF-CC156S、VEGF-CΔNΔCC156S、嵌合的肝素结合型VEGF-C、或前VEGF-C原中与选自VEGFR-2、VEGFR-3、神经毡蛋白-1、神经毡蛋白-2的VEGF-C受体结合的片段。优选地，VEGF-C多肽包含SEQ ID NO：24中所示的氨基酸序列，或包含与VEGFR-2或VEGFR-3结合并在表达这些受体之一或两者的细胞中刺激VEGFR-2或VEGFR-3磷酸化的该氨基酸序列的片段。实验证据说明，某些VEGF-C多肽不结合神经毡蛋白和VEGFR。例如，VEGF-C ΔNΔC不结合神经毡蛋白受体但结合VEGFR-3。然而，预期缺少神经毡蛋白结合性质的VEGF-C多肽，当通过VEGF受体发挥作用时，将具有与通过VEGF-C/VEGFR相互作用介导的那些神经营养作用相似的神经营养性质。
VEGF-CΔC156类多肽和多核苷酸详细地描述在美国专利6,130,071和PCT公布WO98/33917中，两份文献均并入此处作为参考。
肝素结合型VEGF-C多肽的实例描述在2004年6月14日提交的美国临时专利申请60/478,390和美国专利申请系列10/868,577以及共提交的PCT申请＿＿(Attorney Docket No.28967/39359A(PCT)(全部并入此处作为参考)中。嵌合肝素结合型VEGF-C多肽的实例包括与VEGF的肝素结合域(例如，外显子6-8(CA89)或外显子7-8(CA65)编码的序列，两者均含有神经毡蛋白结合区——VEGF外显子7)融合的VEGF-C中的VEGF同源域(VHD)。在表达研究中，CA65分泌并释放至上清液中，而CA89除非培养基中含有肝素否则不释放至上清液中，这说明其显然以类似于已经就VEGF189描述过的方式和细胞表面硫酸肝素结合。
在一个实施方案中，VEGF-C产物包含含有SEQ ID NO：24的氨基酸103-227的人前VEGF-C原片段。在另一实施方案中，VEGF-C产物包含SEQID NO：24的人前VEGF-C原序列的氨基酸32-227。在再一实施方案中，考虑具有包含SEQ ID NO：24的连续部分的氨基酸序列的多肽，其中所述连续部分具有选自SEQ ID NO：2的32-111位的氨基酸作为其氨基末端并具有选自SEQ ID NO：24的228-419位的氨基酸作为其羧基末端。正如本文其它地方更详细解释的，VEGF-C生物学活性在氨基端和羧基端前肽的加工后增加。因此，考虑选自SEQ ID NO：24的102-131位或SEQ ID NO：24的103-111位的氨基端。同样，考虑选自SEQ ID NO：2的215-227位的羧基端。
尽管明显地当所选VEGF-C的功能性部分与天然VEGF-C的相应部分具有相同氨基酸序列时本方法将可能得到最佳结果，但清楚的是当VEGF-C序列中引入了不消除其受体结合性质的变异时本发明仍能够实施。术语“VEGF-C产物”也旨在包括由SEQ ID NO：23和24中所示序列特征的人VEGF-C的等位基因变体编码的多肽。尤其考虑使用具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸同一性的变体序列。“VEGF-C产物”也包括编码或表达上述这些变体的多核苷酸、载体和细胞。
在另一变化方案中，VEGF-C产物包含编码VEGF-C多肽产物并可以在细胞中表达的多核苷酸。例如，VEGF-C产物包含选自如下的多核苷酸：(a)含有编码SEQ ID NO：24的人VEGF-C氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸；(b)含有与SEQ ID NO：23的核苷酸序列至少90％相同并编码结合VEGFR-3的多肽的核苷酸序列的多核苷酸；(c)包含编码含有与SEQ ID NO：24至少90％相同的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述多肽与VEGFR-3结合；(d)与SEQ ID NO：23的互补序列在如下严紧条件下杂交并编码与VEGFR-3结合的多肽的多核苷酸：室温两次2XSSC/0.1％SDS，55℃15分钟1XSSC/0.1％SDS，55℃15分钟0.1XSSC/0.1％SDS；和(e)(a)-(d)的编码与VEGFR-3结合的多肽的片段。等价严紧性条件可以按照Ausubel等(编)Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons(1994)，pp.6.0.3-6.4.10中所述通过改变温度和缓冲液或盐浓度而得到。
优选的VEGF-C多核苷酸编码上述VEGF-C多肽，包括全长前VEGF-C原、VEGF-C的中间和最终断裂产物、以及它们的片段和变体。一个实施方案中，VEGF-C产物包含编码SEQ ID NO：24中所示VEGF-C多肽的多核苷酸或与VEGFR-2、VEGFR-3、NRP-1或NRP-2结合的该多核苷酸的片段。多核苷酸优选包含启动子和/或增强子以促进编码的VEGF-C蛋白质在受体生物的靶细胞中的表达，以及包含终止密码子、多腺苷酸化信号序列和其它序列以利于表达。
启动子可以是病毒启动子或细胞特异性启动子。一个实施方案中，VEGF-C产物包含含有VEGF-C编码多核苷酸的表达载体。另一实施方案中，该方法提供VEGF-C产物，其中所述VEGF-C产物包含含有该多核苷酸的病毒载体，例如复制缺陷型腺病毒和腺相关病毒载体及其杂合体。此外，还考虑包含VEGF-C产物的组合物进一步包含可药用载体。
正如以下将更详细描述的，生长因子VEGF-D与VEGF-C具有氨基酸序列相似性，并且已知VEGF-D也经历从前VEGF-D原蛋白酶解成较小分泌形式的生长因子的相似加工过程，此外还已知VEGF-D与VEGF-C具有两个共同的VEGF受体，即VEGFR-3和VEGFR-2。由于这些和其它相似性，预期通过VEGF受体发挥作用的VEGF-D多肽将具有与通过VEGF-C/VEGFR相互作用介导的那些神经营养作用相似的神经营养特性。
因此，本发明的另一方面涉及实施上述刺激神经干细胞的方法(和后续段落中描述的其它方法)，其中代替(或外加)VEGF-C产物施用VEGF-D产物。
类似于VEGF-C产物，术语“VEGF-D产物”包括前VEGF-D原多肽和它的结合并刺激VEGF-D受体的片段、以及VEGF-D多核苷酸和含有其的表达物，例如复制缺陷型腺病毒、腺相关病毒和慢病毒及它们的杂合体。人类VEGF-D基因和蛋白质的详细描述见Achen等，Proc.Nat’l Acad.Sci.U.S.A.，95(2)：548-553(1998)；1998年2月26日公布的国际专利公布WO98/07832；和Genbank Accession No.AJ000185，所有均并入此处作为参考。此处SEQ ID NO：25和26给出了人前VEGF-D原的cDNA和推导的氨基酸序列。
哺乳动物个体可以是人，或用于人类医学研究的任何动物模型，或重要的动物例如牲畜或宠物。在优选变化方案中，所述个体患有以需要刺激神经元、神经元前体或神经干细胞募集、增殖、或分化为特征的疾病或病症，而VEGF-C产物或VEGF-D产物的施用改善动物的状况(例如，通过减轻疾病症状、减缓疾病进程、治愈疾病或否则改善临床结局)。
一个变化方案中，该方法还包括在给药前鉴定需要神经细胞或神经前体细胞募集、增殖、分化、迁移或存活的个体的步骤。该鉴定步骤包括医学诊断以确定患有可受益于神经干细胞的募集、增殖或分化的疾病或病症的个体。这可以通过运动技能评估、MRI脑成像和本领域通常用于监测神经变性病和神经病理的其它检验方法来实现。诊断可以任选地包括活组织检查和/或基于细胞的体外神经元损伤测量。例如，在阿尔茨海默氏病的疑似患者中，体外试验可以测量与阿尔茨海默氏病通常相关的分子淀粉样β蛋白的水平，从而确定脑中淀粉样蛋白斑的形成程度；此外，在阿尔茨海默氏病或帕金森病患者中，可以测量乙酰胆碱或乙酰胆碱受体水平(Banerjee等，Neurobiol Dis.7：666-72，2000)。
一方面，所述鉴定包括鉴定需要治疗以促进神经元细胞或神经元前体细胞的募集、增殖、分化、迁移或存活的哺乳动物个体。另一方面，所述鉴定包括鉴定需要治疗以促进少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞的募集、增殖、分化、迁移或存活的哺乳动物个体。
在一个优选实施方案中，待用VEGF-C多肽或VEGF-D多肽治疗的个体是人类。
本发明另一实施方案提供刺激神经干细胞增殖或分化的方法，包括从哺乳动物个体获得含有神经干细胞(NSC)的生物学样品，和使干细胞和包含血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物的组合物接触。一方面，所述接触包括在含有VEGF-C产物或VEGF-D产物的培养基中培养干细胞。在此方法中，VEGF-C或VEGF-D的有益效果在人或其它动物个体的身体外被赋予来自该人或动物个体的细胞。对于避免副作用或准备医学方法中使用的细胞样品，此疗法可能是期望的。
还特别考虑与PDGF生长因子家族的任何蛋白质或基因成员的联合疗法。
生物学样品可以是任何从中可以发现干细胞的组织或体液样品。血液和骨髓是该生物学样品的可行来源，脐带血也是。神经干细胞也可以从成年哺乳动物的脑，包括海马、嗅叶或成年脑室区分离。
一方面，可以对生物学样品实施纯化和/或分离步骤以在接触步骤之前纯化或分离干细胞。在一个相关方面，该方法还包括步骤：在接触步骤后纯化和分离神经干细胞或神经细胞。同样地，本发明考虑与VEGF-C或VEGF-D一起培养的纯化的或分离的神经干细胞，以选择已经响应VEGF-C或VEGF-D的处理而发生增殖或分化的那些细胞。可以诱导神经干细胞分化为任何神经细胞，包括神经胶质细胞、少突胶质细胞、神经元或星形胶质细胞。基于经多代传代繁殖的能力、nestin和Ki-67的表达、原始神经元形态以及分化成神经元和神经胶质细胞的能力，将细胞表征为多能神经祖先细胞。
在一个实施方案中，考虑人类个体。在另一实施方案中，当所述个体是人时，细胞供体是近亲，或具有基本上相同的人类白细胞抗原(HLA)谱。在一个变化方案中，将细胞离体接种在组织、器官或人工基质中，并将所述组织、器官或人工基质附着到(attached)、植入或移植入哺乳动物个体。
NSC的其它来源包括脊髓、胎儿组织、视网膜和胚胎。可以在本发明中用于分离神经干细胞和分化的细胞的神经元特异性标志包括染色神经元的神经丝蛋白(NFP)和鉴定胶质细胞谱系的细胞的胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein)(GFAP)。其它阳性神经干细胞标志选自：CD9、CD15、CD95、CD3、MHC1和β2微球蛋白(见美国专利公布20030040023)。
来自神经视网膜的干细胞表达早先针对脑来源的干细胞已显示的标志，GD2神经节苷脂、CD15、和tetraspanin CD9和CD81。GD2和CD15近来被证实是真(true)神经干细胞的标志，而tetraspanin CD9和CD81对真干细胞表现出较低的特异性。
一个变化方案中，该方法还包括步骤：在接触步骤后将神经干细胞施用给哺乳动物个体。在另一实施方案中，该方法包括步骤：在接触步骤后将神经干细胞移植入不同的哺乳动物个体。在该方法的一个变体中，将细胞离体接种在组织、器官或人工基质中，并将所述组织、器官或人工基质附着到、植入或移植入哺乳动物个体。哺乳动物可以考虑是人。
可以以对所治疗的疾病或病症适宜的方式，例如，系统地或在神经病理学部位局部地(参见详述部分)，将神经干细胞施用给或移植入哺乳动物个体。
本发明另一实施方案是体外诱导神经干细胞增殖的方法，包括使神经干细胞与包含VEGF-C产物或VEGF-D产物的组合物接触，其中所述神经干细胞选自：神经干细胞系C17.2、纯化的神经干细胞、HSN-1细胞、胎猪细胞、神经嵴细胞、骨髓来源的神经干细胞、hNT细胞和人神经元祖先细胞系。
在一个变化方案中，接触步骤包括在含有VEGF-C产物的培养基中培养干细胞。例如，使用1-100μg蛋白/ml的生长培养基。在另一变化方案中，所述接触包括用VEGF-C转基因转化或转染干细胞。
任选地，该方法还包括步骤：在接触步骤后将干细胞施用给哺乳动物个体。在该方法的一个变体中，将所述细胞离体接种在组织、器官或人工基质中，并将所述组织、器官或人工基质附着到、植入或移植入哺乳动物个体。所述哺乳动物个体可以考虑是人类。
还可以考虑实施本发明方法，其中VEGF-C产物或VEGF-D产物与神经生长因子联合给药。神经生长因子的实例包括，但不限于，干扰素γ、神经生长因子、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、neurogenin、脑衍生神经营养因子(BDNF)、甲状腺激素、骨形态发生蛋白(BMP)、白血病抑制因子(LIF)、sonic hedgehog、和神经胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素、干扰素、干细胞因子(SCF)、活化素、抑制素、趋化因子、视黄酸和睫状神经营养因子(CNTF)。一方面，本发明考虑在可药用稀释剂或载体中包含VEGF-C和/或VEGF-D产物及神经生长因子的组合物。
本发明方法优选在所述个体患有以异常神经元细胞生长、神经元结疤和损伤或神经变性为特征的疾病或病症时实施。如果神经细胞和/或其轴突突起的存活或功能受到危害，则疾病或医学病症被认为是神经损伤。这样的神经损伤可以由于包括如下在内的状况所引起：造成靠近损伤部位的轴突突起和/或神经细胞体变性的物理性损伤；局部缺血，如中风；暴露于神经毒素，例如癌和AIDS化疗剂，分别如顺铂和双脱氧胞苷(ddC)；慢性代谢疾病，例如糖尿病或肾功能障碍；和造成特定神经元群体变性的神经变性病如帕金森病、阿尔茨海默氏病、和肌萎缩性侧索硬化(ALS)。涉及神经损伤的病症包括帕金森病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、中风、糖尿病性多发性神经病、毒性神经病、神经胶质疤痕、和神经系统的物理性损伤，例如由于脑和脊髓的物理性损伤或手臂和手或身体其它部分的压伤或割伤造成的那些神经系统物理性损伤，包括暂时性或永久性的流向部分的神经系统的血流中止，如在中风中。
在一个实施方案中，所治疗的疾病或病症是神经变性病，其中该神经变性病选自：阿尔茨海默氏病、帕金森病、亨廷顿氏病、运动神经元病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、痴呆和大脑麻痹。另一实施方案中，疾病或病症选自神经创伤或神经损伤。也可以实施本发明方法，以治疗或改善神经创伤或损伤，例如与中风相关的损伤、脊髓损伤、手术后损伤、脑缺血和其它创伤的后果。
本发明可以用于治疗因各种病症所引起的中枢神经系统损伤的一种或多种不利后果。血栓、栓子和全身性血压过低是中风最常见的一些原因。其它损伤可以由如下引起：高血压、高血压性脑血管疾病、动脉瘤破裂、血管瘤、恶血质(blood dyscrasia)、心力衰竭、心脏停搏、心原性休克、肾衰竭、脓毒性休克、头部创伤、脊髓创伤、癫痫、肿瘤出血、和血液体积或压力的其它丧失。这些损伤导致生理功能的破坏、神经元的后续死亡、和受影响的区域的坏死(梗死)。术语“中风(stroke)”意指所引起的与前述任何损伤有关的突然剧烈神经学缺陷。
术语“局部缺血”或“局部缺血事件”在本文中用于指导致组织的血液供应不足的任何情况。因此，中枢神经系统局部缺血事件由脑的任何部位的血液供应不足和中断所致，其中所述脑部位例如，但不限于大脑、小脑或脑干的部位。作为中枢神经系统的一部分的脊髓同样地易受到由于减少的血流而致的局部缺血的影响。局部缺血事件可以由于血管的狭窄或阻塞所致，同样地也可以在血栓或栓子的情况下发生。或者，如上所述，局部缺血可以由于任何形式的受损心脏功能，包括心脏停搏所致。当所述缺陷足够严重和持久时，可能导致生物功能受到破坏，之后神经元死亡和受影响的区域坏死(梗死)。因该损伤所致的神经学异常的程度和类型取决于梗死或局部缺血病灶的位置和大小。当局部缺血与中风相关时，其范围可以是全身性的或病灶性的。
预期本发明还可以用于治疗机械力(例如头部撞击)对中枢神经系统造成的创造性损伤。创伤可以涉及选自擦伤、割伤、撞伤、刺伤、压伤等的组织损害，例如可能因哺乳动物头、颈或脊柱的任何部分或其附属部分与外物的创伤性接触所致的组织损害。创伤性损伤的其它形式可以因体液的不适当积累(例如，正常脑脊液或玻璃体液的产生、更新或体积调节的阻断或功能紊乱，或硬膜下或颅内血肿或水肿)对哺乳动物CNS组织造成的压迫或挤压而引起。类似地，创伤性压迫或挤压可以因存在异常组织块，例如，转移性肿瘤或原发性肿瘤而发生。
此外可以考虑通过共施用VEGF-C产物或VEGF-D产物和神经治疗剂，实施本发明方法。“神经治疗剂”指用于治疗神经变性病或治疗神经创伤和神经损伤的药剂。示例性神经治疗剂包括tacrine(Cognex)、多奈哌齐(donepezil)(Aricept)、酒石酸卡巴拉汀(Rivastigmine)(Exelon)、galantamine(Reminyl)，以及胆碱脂酶抑制剂和抗炎药，其可以用于治疗阿尔茨海默氏病和其它神经变性病。
其它神经治疗剂包括抗胆碱能药物、多巴胺激动剂、儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)、金刚胺(amantadine)(Symmetrel)、Sinemet_、司来吉兰(selegiline)、卡比多巴(Carbidopa)、罗匹尼罗(Ropinirole)(Requip)、辅酶Q10、普拉克索(Pramipexole)(Mirapex)和左旋多巴(levodopa)(L-dopa)，它们可以用于治疗帕金森病以及其它神经变性病。详述部分列出了更多的治疗剂。
VEGF-C对少突胶质细胞和少突胶质细胞前体的作用的证据支持了本发明的其它变化方案。例如，在另一实施方案中，本发明提供在哺乳动物个体中促进少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞募集、增殖、分化、迁移或存活的方法，包括向所述个体施用包含血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物的组合物。用于实施本发明的VEGF-C和VEGF-D产物包括以上定义的产物，包括基于多肽的和基于多核苷酸的产物。本发明被考虑在驯化的动物(例如狗、猫、家畜)和实验室模型(例如，小鼠、大鼠、非人灵长类动物)上实施。优选使用VEGF-C或VEGF-D产物的人类形式在人类上的实施。高度优选VEGF-C产物。
在一个变化方案中，该方法还包括步骤：在施用步骤前鉴定或选择需要募集、增殖或分化少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞的哺乳动物个体。例如，少突胶质细胞涉及髓鞘形成，可以通过个体患有以脱髓鞘为特征的疾病或病症而鉴定/选择该个体。
在一个相关实施方案中，本发明包括使用VEGF-C或VEGF-D产物刺激少突胶质细胞前体细胞增殖或分化的方法。例如，一个此类方法包括从哺乳动物个体，优选人，获得包含少突胶质细胞前体细胞的生物学样品，和使该少突胶质细胞前体细胞与包含血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物的组合物接触。
所述接触涉及可以将VEGF-C或D产物有效地递送给靶细胞的任何过程。在一个变化方案中，所述接触包括在含有VEGF-C产物或VEGF-D产物的培养基中培养少突胶质细胞前体细胞。在另一变化方案中，用VEGF-C或D产物转化或转染所述细胞。
在优选实施方案中，可能期望在用VEGF-C或D产物进行处理之前和/或处理之后纯化靶细胞群，由此获得被富集的或更优选地被高度纯化的目的细胞群。因此，在一个变化方案中，该方法还包括步骤：在接触步骤之前从样品中纯化和分离少突胶质细胞前体细胞。在另一变化方案中，该方法还包括步骤：在接触步骤后纯化和分离少突胶质细胞前体细胞，以分离已对VEGF-C或D产物处理产生应答的细胞群。在一个高度优选的变化方案中，两个纯化步骤均加以使用。在再一变化方案中，本发明包括根据这些方法培养的、纯化的和分离的少突胶质细胞前体细胞。
根据前述方法培养的细胞可以用于细胞置换疗法以治疗以异常或不足的少突胶质细胞功能为特征的疾病。因此，在另一变化方案中，这些方法任选地还包括步骤：在所述接触步骤后将少突胶质细胞前体细胞施用给所述哺乳动物个体。
这些细胞可以用于异种移植以及同种移植。因此，在再一变化方案中，该方法还包括步骤：在接触步骤后将所述少突胶质细胞前体细胞移植入不同哺乳动物个体中。
可以使用任何已知方法递送细胞。例如，在一个变化方案中，将细胞离体接种在组织、器官或人工基质中，并将所述组织、器官或人工基质附着到、植入、或移植入哺乳动物个体。在另一变化方案中，考虑直接地注射入中枢或周围神经系统。
在一个相关实施方案中，少突胶质细胞从其它来源获得。例如，本发明包括在体外诱导少突胶质细胞前体细胞增殖的方法，包括使少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞接触包含VEGF-C产物或VEGF-D产物的组合物，其中所述少突胶质细胞前体细胞选自：CG-4细胞、SVG p12胎儿神经胶质细胞系、DBTRG-05MG神经胶质细胞系、纯化的少突胶质细胞前体细胞、分离的NG2蛋白聚糖(NG2+细胞)、骨髓来源的神经干细胞和人神经元祖先细胞系。任选地，该方法还包括步骤：如本文所述的，在接触步骤后将少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞施用给哺乳动物个体。
正如在本文其它地方更详细描述的，VEGF-C或VEGF-D产物可以任选地在一起共施用和/或与神经生长因子和/或神经治疗剂共施用。
前述方法特别考虑施用于患有以少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞的异常生长或功能为特征的疾病或病症的个体。尤其考虑将本发明方法施用于患有以神经系统脱髓鞘为特征的病症的个体。用于治疗的疾病和病症的例子包括多发性硬化、苯丙酮酸尿症、脑室周围白质软化(periventricularleukomalacia，PVL)、HIV-1脑炎(HIVE)、格林-巴利综合征(Guillian-Barresyndrome，GBS)、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP)、急性运动性轴索型神经病(AMAN)、急性运动感觉性轴索型神经病(AMSAN)、Fisher综合症、急性全自主神经病变(pandysautonomia)和Krabbe氏病。
在另一变化方案中，待治疗的哺乳动物个体患有慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病(CIDP)。CIPD的例子包括MADSAM(多病灶获得性脱髓鞘感觉运动性神经病，也称作Lewis-Sumner综合症)和DADS(远端获得性脱髓鞘对称性神经病)。
罹患神经创伤或神经损伤的个体也预期可以从这些方法获益。例如，可以考虑治疗遭受中风相关损伤、脊髓损伤、手术后损伤和脑局部缺血的个体。
本发明还考虑，抑制VEGF-C活性可以用于治疗以神经元细胞的过度增殖为特征的病状。在神经干细胞发育中抑制VEGF-C可以减少造成成神经细胞瘤(例如，交感神经节)和其它神经来源肿瘤的神经元细胞的增殖，由此减缓癌症进程。最常见的脑肿瘤是神经胶质瘤，其起始于神经胶质组织。从称作星形胶质细胞的星状小细胞产生的星形细胞瘤最常在成年大脑中出现。III级星形细胞瘤有时称作间变型星形细胞瘤(anaplastic astrocytoma)。IV级星形细胞瘤通常称作多形性成胶质细胞瘤。脑干神经胶质瘤出现在脑的最低干状部分。脑干控制着许多重大功能。大多数脑干神经胶质瘤是高级别的星形细胞瘤。室管膜瘤通常发生在脑室衬里中。它们也可以出现在脊髓中。少突胶质细胞瘤出现在产生髓鞘脂(保护神经的脂肪覆盖物)的细胞中。这些肿瘤通常出现在大脑中。它们生长缓慢并且通常不扩散入周围脑组织。成神经管细胞瘤产生自正常不存在于出生后的身体中的原始神经细胞。由于此原因，成神经管细胞瘤有时称作原始神经外胚层肿瘤(PNET)。大多数成神经管细胞瘤出现在小脑中；然而，它们也可以出现在其它区域。脑脊膜瘤产生自脑膜。它们通常是良性的。由于这些肿瘤生长非常缓慢，脑可能能够调整以适应其存在；脑脊膜瘤在引起症状前常常生长得很大。它们最常见于30至50岁的女性。施万细胞瘤是起始于产生保护听神经的髓鞘脂的施万细胞的良性肿瘤。听神经瘤是一类施万细胞瘤。颅咽管瘤发生在靠近下丘脑的脑垂体区域。它们通常是良性的；然而，由于它们可以压迫或损伤下丘脑并影响生命机能，故有时它们被认为是恶性的。生殖细胞肿瘤产生自原始(发育中的)性细胞或生殖细胞。在脑中最常见的生殖细胞肿瘤类型是生殖细胞瘤。松果体区域肿瘤出现在松果体中或周围。该肿瘤可以是缓慢生长的松果体细胞瘤或快速生长的(成松果体细胞瘤)。松果体区域是非常难于到达的，这些肿瘤常常不能被移除。脑肿瘤的治疗方法取决于多种因素。其中包括肿瘤的类型、位置和大小以及患者的年龄和一般健康状况。正常地，脑肿瘤通过手术、放疗和化疗治疗。一方面，本发明提供抑制成神经细胞瘤和神经肿瘤的生长和进程的方法，包括向患有成神经细胞瘤或神经元肿瘤的个体施用包含VEGF-C或VEGF-D抑制剂的组合物。
另一方面，本发明提供抑制成神经细胞瘤和神经肿瘤的生长和进程的方法，包括向患有成神经细胞瘤或神经肿瘤的个体施用包含VEGF-C或VEGF-D抑制剂的组合物以及PDGF拮抗剂或PDGFR拮抗剂。一个实施方案中，PDGFR拮抗剂是甲磺酸伊马替尼(Imatinib Mesylate)(STI571/gleevec)。近来的证据(Leppanen等，Circulation 109：1140-6，2004)显示，在高胆固醇血症兔子中STI571/gleevec提高局部脉管内VEGF-C基因转移在降低新血管内膜生长方面的效率。据推测，gleevec通过降低间质压力(已经证实这对于癌症治疗是重要的并且一般地可以增加任何药物的摄取)增加VEGF-C的基因转移。
VEGF-C抑制剂可以是，例如，通过阻断VEGF-C与其任何一种受体，VEGFR-2、VEGFR-3、NRP-1或NRP-2，的结合，或通过降低VEGF-C的表达，特异地降低VEGF-C的促有丝分裂活性的任何分子。所施用的VEGF-C抑制剂可以是包含与VEGF-C蛋白质结合的可溶性VEGFR-2多肽片段、与VEGF-C蛋白质结合的可溶性VEGFR-3多肽片段、与VEGF-C蛋白质结合的可溶性NRP-1多肽片段、与VEGF-C蛋白质结合的可溶性NRP-2多肽片段的多肽，VEGF-C反义多核苷酸或短干扰RNA(siRNA)、抗VEGF-C抗体、包含抗VEGF-C抗体的抗原结合片段的多肽和VEGF-C的任何小分子抑制剂。本发明也考虑类似于上述VEGF-C抑制剂的VEGF-D抑制剂。
一方面，VEGF-C抑制剂包含含有哺乳动物VEGFR-2胞外域片段、VEGFR-3胞外域片段、NRP-1胞外域片段或NRP-2胞外域片段的可溶性VEGFR-2、VEGFR-3、NRP-1或NRP-2多肽片段，其中所述片段与VEGF-C蛋白质结合。优选地，所述VEGFR-2、VEGFR-3、NRP-1或NRP-2片段是人的。在一个变化方案中，VEGFR-3胞外域片段含有VEGFR-3的免疫球蛋白结构域1至3。在另一实施方案中，本发明所考虑的胞外域片段包含SEQID NO：32中给出的人VEGFR-3的第33至324位氨基酸。在备选实施方案中，可溶性VEGFR-2、VEGFR-3、NRP-1或NRP-2片段与免疫球蛋白Fc域连接。
一个实施方案中，VEGF-C抑制剂包含如下多肽，该多肽含有与包含维持了VEGF-C结合活性的人VEGFR-2(SEQ ID NO：30)胞外片段的氨基酸至少90％、95％、96％、97％、98％或99％一致的氨基酸序列、与包含维持了VEGF-C结合活性的人VEGFR-3(SEQ ID NO：32)胞外片段的氨基酸至少90％、95％、96％、97％、98％或99％一致的氨基酸序列、与包含维持了VEGF-C结合活性的人NRP-1(SEQ ID NO：2)胞外片段的氨基酸至少90％、95％、96％、97％、98％或99％一致的氨基酸序列、或者与包含维持了VEGF-C结合活性的人NRP-2(SEQ ID NO：4)胞外片段的氨基酸至少90％、95％、96％、97％、98％或99％一致的氨基酸序列。
在另一实施方案中，VEGF-C抑制剂组合物包含由如下多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在中等或高度严紧条件下与编码SEQ ID NO：32的33-324位氨基酸的多核苷酸的互补序列杂交。中等严紧杂交条件的例子是在0.5M NaHPO4、7％十二烷基硫酸钠(SDS)、1mM EDTA中于65℃杂交，并在0.2XSSC/0.1％SDS中于42℃洗涤。高度严紧杂交条件的例子是：0.5MNaHPO4、7％十二烷基硫酸钠(SDS)、1mM EDTA中于65℃杂交，并在0.1XSSC/0.1％SDS中于68℃洗涤。本领域技术人员理解，可以按照Ausubel等(编)，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons(1994)，pp.6.03-6.4.10中所述，通过变化温度和缓冲液或盐浓度获得具有等同严紧性的条件。
在本发明方法中使用的VEGF-C反义核酸分子包含与靶序列中任何整数数目(大约10至500，优选10至50的整数)的核苷酸互补的序列。在示例性实施方案中，VIEGF-C反义分子包含长度至少大约10、25、50、100、250或500个核苷酸的互补序列或者与整个VEGF-C编码链互补的互补序列。更特别考虑长10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸的反义分子。
考虑用于本发明的siRNA同时提供VEGF-C mRNA的有义和反义编码链。siRNA典型地长30个核苷酸或少于30个核苷酸，更优选地21至23个核苷酸，具有特征性的2至3个核苷酸的3’突出端，这些突出端由核糖核酸酶III切割较长的dsRNA而产生。
本发明还提供在可药用稀释剂或载体中包含VEGF-C产物或VEGF-D产物和神经生长因子的组合物。本发明还考虑在可药用稀释剂或载体中包含VEGF-C产物或VEGF-D产物和神经治疗剂的组合物。
在另一实施方案中，本发明考虑，与PDGF-A或PDGF-C组合物或产物的施用相联合来使用上述任何VEGF-C或VEGF-D组合物或产物的方法。所述联合包括在不同于VEGF-C或VEGF-D组合物的组合物中、并且与VEGF-C或VEGF-D产物施用并行地或在VEGF-C或VEGF-D产物施用之前或之后(见本文的详述部分)施用。在一个相关实施方案中，所述与PDGF-A或PDGF-C联合包括施用VEGF-C或VEGF-D组合物，其中该组合物还包含PDGF-A或PDGF-C或PDGF-B或PDGF-D。
“PDGF产物”的定义借鉴VEGF-C或VEGF-D产物的定义，包括例如全长的、成熟的、和片段的蛋白质，蛋白质变体，编码多核苷酸和载体，宿主细胞等。
另一方面，本发明提供筛选VEGF-C对神经干细胞或神经前体细胞生长、迁移、分化或存活的刺激作用的调节剂的方法，包括：使包含VEGF-C多肽的组合物和神经细胞或神经前体细胞在有和无被测药剂存在时接触；测量细胞在有和无该药剂存在时的生长、迁移、分化或存活；和基于存在被测药剂时相对于不存在被测药剂时的差异测量结果，将该药剂鉴定为调节VEGF-C对神经细胞或神经前体的作用的调节剂。
在一个相关实施方案中，本发明提供筛选VEGF-D刺激作用的调节剂的方法，该方法基本上同前段描述的涉及VEGF-C的方法。
在进一步的实施方案中，神经前体细胞包括神经元前体细胞。在另一实施方案中，神经前体细胞包括少突胶质细胞前体细胞。
可以考虑，神经干细胞或神经前体细胞包括本文所述的神经干细胞或从个体分离的神经干细胞。在一个实施方案中，所述细胞包括表达VEGFR-3的神经细胞系或神经前体细胞。在另一实施方案中，神经细胞系或神经前体细胞表达神经毡蛋白2。在再一实施方案中，神经细胞系或神经前体细胞表达VEGFR-3和神经毡蛋白-2。
为了本发明的目的，VEGF-C或VEGF-D的调节剂是刺激神经干细胞或神经前体细胞生长、迁移、分化或存活的刺激作用的激动剂，其中通过细胞表面神经细胞标志染色的增加，或所检测到的细胞中增殖性标志的增加来检测激动剂。为了本发明的目的，VEGF-C或VEGF-D的调节剂是刺激神经干细胞或神经前体细胞生长、迁移、分化或存活的刺激作用的拮抗剂，其中通过细胞表面神经细胞标志染色的减少，或所检测到的细胞中增殖性标志的减少来检测拮抗剂。迁移可以使用标准趋化性或化动性试验测量。
神经细胞标志在本文中于详述部分中描述，包括但不限于诸如NG2+、Olig2、O4(用于少突胶质细胞)、GFAP、Glast、(用于神经胶质细胞)Tuj-1和p75 NGF-受体(用于原代神经元)、泛细胞角蛋白(pan-cytokeratin)(上皮结构)和酪氨酸羟化酶(TH)、神经丝抗体(分化的神经元)的分子。考虑用于检测激动剂或拮抗剂的增殖性标志包括但不限于丝裂霉素试验、氚化胸苷或Brdu掺入或Ki-67染色。
对于与治疗方法相关进行描述的本发明每一方面，本发明的另一相关方面包括所述治疗剂或产物在制备用于达到所述生物学效果或用于治疗或改善所述疾病或病症或其症状的药物中的用途。
因此，另一方面，本发明考虑血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物在制备用于促进神经细胞或神经前体细胞的募集、增殖、分化、迁移或存活的药物中的用途。一个实施方案中，所述药物促进神经细胞或神经元前体细胞的募集、增殖、分化、迁移或存活。在一个相关实施方案中，所述药物促进少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞的募集、增殖或分化。
本发明还考虑使用VEGF-C或VEGF-D产物制备治疗本文所述神经病的药物。所考虑的神经病是神经变性、神经细胞的异常生长、神经创伤、和与脱髓鞘相关的疾病或病症。
本领域技术人员将从本申请的整体上明了本发明的其它特点和变化方案，所有这些特点均旨在构成本发明的方面。
同样地，本文中描述的本发明特点可以重组为其它实施方案，这些实施方案也旨在构成本发明的方面，而不论该特征的结合是否在上面作为本发明的一个方面或实施方案作了特别提及。此外，只有在本文中描述为本发明关键因素的限制条件才应按照所述的方式来看待；缺乏未在本文中被描述为关键性的限制条件的本发明变化方案旨在构成本发明的方面。
本发明的实施方案按照谈及VEGF-C基因或蛋白质或其抑制剂或片段或变体的用途的方式进行描述。对于所有这些实施方案，还特别考虑使用VEGF-D基因或蛋白质或抑制剂或片段或变体的实施方案的实施以及联合疗法，即使该实施方案未就VEGF-D或联合治疗进行过特别的描述(重复)。
除了前述，本发明的其它方面还包括所有在范围上以任何方式小于以上具体提及的变化方案的本发明实施方案。尽管本申请人发明了后附权利要求的整个范围，但是所附权利要求不旨在在其范围内包括他人的现有技术工作。因此，一旦专利局或其它实体或个体使申请人注意到权利要求范围内的法定现有技术，申请人保留在适用的专利法律下实施修改的权利，以重新定义权利要求的主题以便从权利要求的范围中具体排斥该法定现有技术或法定现有技术的显而易见变体。通过这些修改的权利要求定义的本发明的变化方案也旨在成为本发明的部分。
附图简述：
图1描述神经毡蛋白-2IgG融合蛋白a17和a22表达载体的构建。
发明详述
本发明部分地基于蛋白质之间的新相互作用的发现，其中所述蛋白质先前已经在文献中被表征过，但是其相互作用先前并不明了，而且先前也不明了它的生物学效应。大量的分子可以利用对Genbank数据库或所附序列表的注释清楚地加以陈述，但是可以理解也可以容易地从数据库检索到和/或从天然来源中分离出物种同源物(“直向同源物”)的序列。因此，下面的表和描述应当被认为是示例性的而非限制性的。
A.本发明的目的分子
   分子     Genbank登录号# * SEQ ID NO：
   神经毡蛋白-1     NM003873  1和2
   可溶性神经毡蛋白-1，s11     AF280547
   神经毡蛋白-2[a(17)]     NM003872  3和4
   a(0)     AF022859
   a(17)     AF022860
   b(0)     AF280544
   b(5)     AF280545
   可溶性神经毡蛋白-2，s9     AF280546
   鼠神经毡蛋白-1     D50086  5和6
   鼠神经毡蛋白-2
   a(0)     AF022854
   a(5)     AF022861
   a(17)     AF022855  7和8
   a(22)     AF022856
   b(0)     AF022857
   b(5)     AF022858
脑信号蛋白3A NM006080 9和10
脑信号蛋白3B NM004636 11和12
   脑信号蛋白3C     NM006379  13和14
   脑信号蛋白3E     NM012431  15和16
    分子     Genbank登录号# *   SEO ID NO：
    脑信号蛋白3F     NM004186   17和18
    VEGF-A     Q16889   19和22
    VEGF165     M32977
    VEGF-B     U48801   21和22
    VEGF-C     X94216   23和24
    VEGF-D     AJ000185   25和26
    VEGF-E     S67522
    P1GF     NM002632   27和28
    VEGFR-1     X51602
    VEGFR-2     L04947   29和30
    VEGFR-3     X68203   31和32
    丛蛋白-A1     X87832
    丛蛋白-A2     NM025179
    PDGF-A，-B，-C     NM002607；NM002608；NM016205
    PDGFR-A，-B     NM006206；NM002609
    Prox-1     NM002763   37和38
*所有序列除非另行注明否则是人来源的
神经毡蛋白家族
神经毡蛋白-1和神经毡蛋白-2基因的全长分别为120和112kb以上，其均由17个外显子组成，其中5个外显子在两个基因中大小相同，说明这两个基因的遗传重复(Rossignol等，Genomics 70：211-22，2000)。至今已经分离到神经毡蛋白的几个剪接变体，其功能意义目前尚在研究中。
称作NRP2a和NRP2b的NRP-2的同种型首先从小鼠基因组中分离(Chen等，Neuron 19：547-59，1997)。在小鼠中，NRP2a同种型在NRP-2的氨基酸809后含有0、5、17和22(5+17)个氨基酸插入，分别称作NRP2a(0)(Genbank登录号AF022854)(SEQ ID NO：7和8)、NRP2a(5)(Genbank登录号AF022861)、NRP2a(17)(Genbank登录号AF022855)和NRP2a(22)(Genbank登录号AF022856)。仅阐明了与小鼠变体NRP2a(17)(Genbank登录号AF022860)(SEQ ID NO：3和4)和NRP2a(22)同源的两个人NRP2a同种型。人a(22)同种型在NRP2a(17)的氨基酸808后含有5个氨基酸的插入，序列为GENFK。对脑、心、肺、肾、肝和胎盘的组织分析显示，a(17)同种型在所有这些位点中丰度更高。
人NRP2b同种型看来表达在NRP2a和NRP-1中不存在的额外外显子，该外显子命名为外显子16b。已经鉴定了两个与小鼠NRP2b(0)(Genbank登录号AF022857)和NRP2b(5)(Genbank登录号AF022858)同源的人NRP2b同种型，其在NRP2b(0)的氨基酸808位后含有0个或5个(GENFK)氨基酸插入(Rossignol等，Genomics 70：211-22，2000)。组织分布分析显示，人NRP2b(0)(Genbank登录AF280544)与NRP2b(5)(Genbank登录号AF280545)相比在成年脑、心、肺、肾、肝和胎盘中有更高表达。NRP2a和NRP2b同种型在其C末端，即NRP2氨基酸808(氨基酸808位于c结构域和跨膜结构域之间的接头区域中)之后，显示不同。这种差别剪接可能导致了在这两种同种型的组织表达上见到的差异，其中在胎盘、肝和肺中NRP2a的表达丰度更高而NRP2b仅有可检测的水平，但在NRP2a低表达的骨骼肌中发现NRP2b。两种同种型均在心脏和小肠中表达。
除了神经毡蛋白的遗传同种型外，还克隆了这些蛋白质的截短可溶性形式(Gagnon等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：2573-78，2000；Rossignol等，Genomics 70：2 11-22，2000)。NRP-1蛋白质的天然截短形式s11NRP1(Genbank登录号AF280547)和s12NRP1已经获得克隆，它们分别编码704和644个氨基酸的神经毡蛋白-1，并且含有a和b域但无c域。s12NRP1变体通过内含子12中的信使RNA前体(pre-mRNA)加工而产生。s11NRP1截短发生在氨基酸621后，缺少外显子12编码的20个氨基酸，但含有在内含子11中发现的编码序列，该编码序列使该蛋白质在C端具有83个新氨基酸。该内含子来源序列不含有已知蛋白质的任何同源物。
此外还鉴定了天然可溶性形式的NRP-2，其编码含有a域、b1域和部分b2域(缺少该区域的最后48个氨基酸)的555个氨基酸的蛋白质。该截短发生在氨基酸547后内含子9中，由此该蛋白质已被命名为s9NRP2(Genbank登录号AF2805446)，并由于该内含子的断裂得到8个新的氨基酸(VGCSVWRPL)添加至C端。Gagnon等(Proc.Natl.Acad.Sci USA 97：2573-78，2000)报道，可溶性神经毡蛋白-1同种型s12NRP1与全长蛋白质相同能够结合VEGF165，但是作为VEGF165结合的拮抗剂起作用，从而抑制VEGF165活性并在大鼠前列腺癌模型中显示出抗肿瘤性质。
PDGF/VEGF家族
PDGF/VEGF生长因子家族包括至少如下成员：PDGF-A(见例如，Genbank Acc.No.X06374)、PDGF-B(见例如，Genbank Acc.No.M12783)、VEGF(见例如，Genbank Acc.No.Q16889，在本文中为了清楚起见称作VEGF-A或通过具体同种型提及)、PIGF(见例如，Genbank Acc.No.X54936，胎盘生长因子)、VEGF-B(见例如，Genbank Acc.No.U48801；也称作VEGF相关因子(VRF))、VEGF-C(见例如，Genbank Acc.No.X94216；也称作VEGF相关蛋白(VRP或VEGF-2))、VEGF-D(也称作c-fos诱导的生长因子(FIGF)；见例如，Genbank Acc.No.AJ000185)、VEGF-E(也称作NZ7 VEGF或OVNZ7；见例如，Genbank Acc.No.S67522)、NZ2 VEGF(也称作OV NZ2；见例如，Genbank Acc.No.S67520)、D1701 VEGF样蛋白(见例如，Genbank Acc.No.AF106020；Meyer等，EMBO J18：363-374)和NZ10 VEGF样蛋白(描述在国际专利申请PCT/US99/25869中)[Stacker和Achen，Growth Factors 17：1-11(1999)；Neufeld等，FASEB J13：9-22(1999)；Ferrara，J.Mol Med 77：527-543(1999)]。PDGF/VEGF家族蛋白质主要是分泌型糖蛋白，形成二硫键连接的或非共价结合的同或异二聚体，二聚体的亚基以反平行方式排列[Stacker和Achen，Growth Factors 17：1-11(1999)；Muller等，Structure 5：1325-1338(1997)]。
PDGF-A和PDGF-B可以同二聚体化或异二聚体化，产生三种不同同种型：PDGF-AA、PDGF-AB或PDGF-BB。PDGF-A仅能够结合PDGFα-受体(PDGFR-α，包括PDGF-α/α同二聚体)。PDGF-B可以结合PDGFR-α和第二PDGF受体(PDGFR-β)。更具体地，PDGF-B可以结合PDGFR-α/α和PDGFR-β/β同二聚体以及PDGFR-α/β异二聚体。
PDGF-AA和PDGF-BB是间充质来源细胞的主要有丝分裂原和化学引诱物，但是对内皮谱系的细胞不具有或几乎不具有作用，但是PDGFR-α和β均在内皮细胞(E)上表达。PDGF-BB和PDGF-AB已经被证明参与新形成的脉管的稳定化/成熟(Isner等，Nature 415：234-9，2002；Vale等，J IntervCardiol 14：511-28，2001)；Heldin等，Physiol Rev 79：1283-1316，1999；Betsholtz等，Bioessays 23：494-507，2001)。然而其它数据显示，PDGF-BB和PDGF-AA通过PDGFR-α信号传导在体内抑制bFGF诱导的脉管发生。PDGF-AA是间充质细胞迁移的最有力刺激剂之一，但是其不刺激或极轻微地刺激E迁移。在某些条件下，PDGF-AA甚至抑制EC迁移(Thommen等，J Cell Biochem.64：403-13，1997；De Marchis等，Blood 99：2045-53，2002；Cao等，FASEB J.16：1575-83，2002)。而且，PDGFR-α已经被证实拮抗PDGFR-β诱导的SM迁移(Yu等，Biochem.Biophys.Res.Commun.282：697-700，2001)，针对PDGF-AA的中和抗体增强平滑肌细胞(SMC)迁移(Palumbo，R.等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.22：405-11，2002)。因此，PDGF-A和PDGF-B的脉管生成/动脉生成活性，尤其在通过PDGFR-α进行信号转导时，一直是有争议的迷。
已经报道，PDGF-AA和BB在心血管和神经干细胞/祖先细胞的增殖和分化中起重要作用。PDGF-BB诱导Flk1+胚胎干细胞分化成脉管壁细胞(vascular mural cell)(Carmeliet，P.，Nature 408：43-45，2000；Yamashita等，Nature 408：92-6，2000)，并且有力地增强神经球(neurosphere)来源的神经元的存活(Caldwell等，Nat Biotechnol.19：475-479，2001)；而PDGF-AA通过αvβ3整联蛋白刺激少突胶质细胞前体增殖(Baron等，Embo.J.21：1957-66，2002)。
PDGF-C结合PDGFR-α/α同二聚体，PDGF-D结合PDGFR-β/β同二聚体，据报道两者均结合PDGFR-α/β异二聚体。PDGF-C多肽和多核苷酸由Eriksson等在国际专利申请WO00/18212、美国专利申请公布号2002/0164687A1和美国专利申请号10/303,997[以美国专利公布号2003/0211994公布]中表征。PDGF-D多核苷酸和多肽由Eriksson等在国际专利公布号WO00/27879和美国专利申请公布号2002/0164710A1中表征。
PDGF-C多肽表现出与其它VEGF/PDGF家族成员不同的独特蛋白质结构。PDGF-C在N端区域中具有CUB域，该域在其它家族成员中不存在，此外，PDGF-C在VEGF同源域(VHD)中于保守的半胱氨酸3和4之间具有3个氨基酸插入(NCA)。PDGF-C的VHD最接近VEGF-C和VEGF-D的VHD。PDGF-C mRNA表达在心脏、肝、肾、胰腺和卵巢中最高，在大多数其它组织，包括胎盘、骨骼肌和前列腺中水平较低。含有VHD的PDGF-C的截短形式结合PDGF-α受体。
VEGF亚家族由共享VEGF同源域(VHD)的PDGF/VEGF成员组成，该域由序列：C-X(22-24)-P-[PSR]-C-V-X(3)-R-C-[GSTA]-G-C-C-X(6)-C-X-(32-41)-C表征。
VEGF-A最初基于其对内皮细胞的促有丝分裂活性以及其诱导微脉管的通透性的能力从几种来源纯化，因此，其也被称作血管通透性因子(VPF)。随后证实VEGF-A诱导多种生理过程，包括动员细胞内钙、诱导纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂-1合成、体外促进单核细胞迁移、在人内皮细胞中诱导抗细胞凋亡蛋白表达、在内皮细胞中诱导穿孔(fenestration)、促进内皮细胞中细胞粘着分子的表达和诱导一氧化氮介导的血管舒张和低血压[Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)；Neufeld等，FASEB J 13：9-22(1999)；Zachaey，Intl J.Biochem Cell Bio 30：1169-1174(1998)]。
VEGF-A是分泌型二硫键连接的同二聚体糖蛋白，由23kD亚基组成。已经描述了长121、145、165、189或206个氨基酸的5种人VEGF-A同种型(VEGF121-206)，这些同种型由不同mRNA剪接变体编码，所有均能够在内皮细胞中刺激有丝分裂发生。然而，各同种型在生物学活性、受体特异性以及对与细胞表面和胞外基质结合的硫酸肝素蛋白聚糖的亲和力上存在差异，其中所述蛋白聚糖表现为VEGF-A的低亲和性受体。VEGF121不结合肝素和硫酸肝素；VEGF145和VEGF165(Genbank登录号M32977)两者均能够结合肝素；VEGF189和VEGF206表现出对肝素和硫酸肝素的最强亲和力。VEGF121、VEGF145和VEGF165以可溶性形式分泌，但是VEGF165大部分被局限在细胞表面和胞外基质蛋白聚糖上，而VEGF189和VEGF206保持与胞外基质的结合。VEGF189和VEGF206两者均能够通过用肝素或肝素酶处理而释放，说明这两种同种型通过蛋白聚糖与胞外基质结合。与细胞结合的VEGF189也可以通过蛋白酶，例如纤溶酶的作用而断裂，导致释放出活性可溶性VEGF110。表达VEGF的大多数组织被观察到同时表达几种VEGF同种型，尽管VEGF121和VEGF165是主要形式，而VEGF206很少被检测到[Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)]。VEGF145不同，其主要在生殖器官来源细胞中表达[Neufeld等，FASEB J13：9-22(1999)]。
VEGF-A的表达模式提示其参与正常脉管系统的发育和维持并参与和肿瘤生长及其它病理性病症例如类风湿性关节炎有关的脉管发生。VEGF-A在与正在发育中的脉管系统相关的胚胎组织中表达，并由许多肿瘤细胞系分泌。对VEGF-A由于定向基因破坏而被敲除的小鼠的分析显示，VEGF-A对于存活是关键的，并且心血管系统的发育对于VEGF-A浓度梯度高度敏感。缺乏单拷贝VEGF-A的小鼠在妊娠第11至12天死亡。这些胚胎表现出受损的生长和严重的发育异常，包括发育中的心血管系统的缺陷。VEGF-A也是出生后生长、器官发育、生长板形态发生(growth platemorphogenesis)的调节和软骨内骨形成所必需的。对VEGF-A的需要随着年龄的增长而降低，尤其在出生后第四周之后。在成熟动物中，主要在诸如伤口愈合和黄体发育等过程的活跃脉管发生上需要VEGF-A。[Neufeld等，FASEB J 13：9-22(1999)；Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)]。VEGF-A的表达主要受到低氧和多种激素和细胞因子(包括表皮生长因子(EGF)、TGF-β和各种白介素)的影响。调节主要发生在转录水平以及转录后水平，例如通过增加的mRNA稳定性进行调节[Ferrara，同上引文]。
PIGF，VEGF亚家族的第二成员，一般地与VEGF-A相比是很差的脉管发生和内皮细胞增殖刺激剂，PIGF的体内作用尚未得到充分理解。已经描述了通过可变mRNA剪接产生的3种PIGF同种型[Hauser等，GrowthFactors 9：259-268(1993)；Maglione等，Oncogene 8：925-931(1993)]。PIGF形成二硫键连接的同二聚体和与VEGF-A的异二聚体。PIGF-VEGF-A异二聚体比PIGF同二聚体更为有效地诱导内皮细胞增殖和脉管发生。PIGF主要在胎盘中表达，并且还与VEGF-A在早期胚胎发生期在体壁卵黄囊滋养层巨大细胞中共表达[Stacker和Achen，Growth Factors 17：1-11(1999)]。
VEGF-B在国际专利公布号WO96/26736和美国专利5,840,693和5,607,918(并入此处作为参考)中有详细描述，其与VEGF-A有大约44％氨基酸同一性。尽管VEGF-B的体内生物学功能仍未完全得以理解，但是已经证实其具有生脉管性质，并且还可能参与细胞粘着和迁移并参与调节胞外基质的降解。VEGF-B表达为167和186个氨基酸残基的两种同种型，这两种同种型由可变剪接产生。VEGF-B167通过肝素结合域与细胞表面或胞外基质结合，而VEGF-B186是分泌型的。VEGF-B167和VEGF-B186均可以形成二硫键连接的同二聚体或与VEGF-A的异二聚体。VEGF165-VEGF-B167异二聚体与细胞表面的结合似乎由VEGF-B成分决定，这提示异二聚体化可能对隔离(sequester)VEGF-A是重要的。VEGF-B主要在胚胎和成年心脏和骨骼肌组织中表达[Joukov等，J Cell Physiol 173：211-215(1997)；Stacker和Achen，Growth Factors 17：1-11(1999)]。缺少VEGF-B的小鼠可以存活但是具有较小心脏及功能异常的冠状脉管系统，而且表现出自心脏局部缺血的恢复受损[Bellomo等，Circ Res 2000；E29-E35]。
VEGF亚家族的第四成员，VEGF-C，包含与VEGF-A在氨基酸水平上大约30％相同的VHD。VEGF-C最初表达为更大的前体蛋白，前VEGF-C原(prepro-VEGF-C)，该前体蛋白在VHD两侧具有延伸的氨基-和羧基-端肽序列，并且C端肽在Balbiani环3蛋白典型的基序中含有串联重复半胱氨酸残基。前VEGF-C原经历大规模的蛋白酶解成熟，涉及信号肽、C端前肽和N端前肽(pro-peptide)的相继切割以产生完全加工的成熟形式(ΔNΔCVEGF-C)。分泌的VEGF-C蛋白质包含非共价结合的同二聚体，在此同二聚体中每个单体都含有VHD。经过部分蛋白酶解加工产生的VEGF-C中间形式显示对VEGFR-3受体的增加亲和力，而且成熟蛋白还能够与VEGFR-2受体结合。[Joukov等，EMB0 J.，16(13)：3898-3911(1997)]。也已经证实，突变VEGF-C(VEGF-CΔC156)——其156位的单半胱氨酸缺失或被另一氨基酸替代——丧失结合VEGFR-2的能力但仍能够结合和激活VEGFR-3[美国专利6,130,071和国际专利公布号WO98/33917]。在SEQ ID NO：24的氨基酸156位的示例性替代包括在156位以丝氨酸残基替代半胱氨酸(VEGF-CC156S)。在小鼠胚胎中，VEGF-C mRNA主要在尿囊、颈静脉区(jugular area)和后肾中表达。[Joukov等J Cell Physiol 173：211-215(1997)]。VEGF-C参与调节淋巴管发生；当VEGF-C在转基因小鼠皮肤中过表达时，观察到增生的淋巴管网络，提示VEGF-C诱导淋巴生长[Jeltsch等，Science，276：1423-1425(1997)]。在成体中VEGF-C的持续表达也说明了其在分化的淋巴内皮的维持中的作用[Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)]。VEGF-C也表现出生脉管性质：其可以刺激牛毛细管内皮(BCE)细胞在胶原中的迁移和促进人内皮细胞的生长[见例如美国专利6,245,530；美国专利6,221,839；和国际专利公布WO98/33917，并入此处作为参考]。
前VEGF-C原多肽经过多个阶段的加工而产生成熟的最具活性的VEGF-C多肽，该VEGF-C多肽大约21-23kD(通过还原条件下的SDS-PAGE评估)。这些加工包括切割信号肽(SEQ ID NO：24，残基1-31)；切割羧基端肽(大约相应于SEQ ID NO：24的氨基酸228-419)以产生大约29kD的部分加工形成；和切割(明显地在细胞外)氨基端肽(大约相应于SEQ ID NO：24的氨基酸32-102)以产生大约21-23kD的完全加工的成熟形式。实验证据证明，VEGF-C的部分加工形式(例如，29kD形式)能够结合Flt4(VEGFR-3)受体，而与VEGFR-2的高亲和性结合仅出现在完全加工形式的VEGF-C上。VEGF-C多肽看来天然以非二硫键连接的二聚体形式缔合。
此外，已经证实，对于VEGF-C功能的维持，SEQ ID NO：24的氨基酸103-227并非所有都是关键的。由SEQ ID NO：24的氨基酸112-215(缺少残基103-111和216-227)组成的多肽保持结合和刺激VEGF-C受体的能力，并且预期跨度从大约残基131至大约残基211的多肽将保持VEGF-C生物学活性。156位的半胱氨酸残基已经被证实对VEGFR-2结合能力是重要的。然而，VEGF-C C156多肽(即，由于缺失或替代而缺少该半胱氨酸的类似物)仍是VEGFR-3的有力激活物。SEQ ID NO：24的165位半胱氨酸是结合任一受体所必需的，而在83或137位置缺少半胱氨酸的类似物可以与天然VEGF-C竞争地结合和刺激两种受体。此外，可以考虑将如下嵌合的肝素结合型VEGF-C多肽用于本发明，在该嵌合多肽中与受体结合的VEGF-C序列与来自另一来源的肝素结合序列(天然的和合成的)融合。VEGF-C和VEGF-D的肝素结合形式在美国临时专利申请号60/478,390和美国专利申请系列号10/868,577(并入此处作为参考)中有更详细的描述。例如，可以构建编码包含信号序列和VEGF-C的VEGF同源域(VEGF homology domain)(VHD)(SEQ ID NO：24)、以及VEGF外显子6-8(CA89)或外显子7-8(CA65)(SEQ ID NO：20)-其编码肝素结合域-的嵌合蛋白的质粒。嵌合多肽CA65分泌并释放至上清液中，而CA89除非在培养基中包括肝素否则不释放至上清液中，这说明CA89显然与细胞表面硫酸肝素结合，类似于针对VEGF189已经描述过的情况。
VEGF-D在结构和功能上与VEGF-C最密切相关[见美国专利6,235,713和国际专利公布号WO98/07832，并入此处作为参考]。与VEGF-C相同，VEGF-D最初表达为将经历N端和C端蛋白酶解加工的前肽原，并且其形成非共价连接的二聚体。VEGF-D刺激内皮细胞的体外促有丝分裂反应。在胚胎发生期间，VEGF-D具有复杂的时空表达模式，并且其表达在成体的心脏、肺和骨骼肌中持续。国际专利公布号WO98/07832(并入此处作为参考)中描述命名为VEGF-DΔNAC的VEGF-D生物活性片段的分离。VEGF-DΔNΔC由VEGF-D(SEQ ID NO：26)的93-201氨基酸残基组成，任选地与亲和标签肽FLAG_或其它序列连接。
前VEGF-D原多肽具有21个氨基酸的推测信号肽，并且显然地以类似于前VEGF-C原加工的方式接受蛋白酶解加工。缺少SEQ ID NO：26的1-92和202-354残基的“重组成熟”VEGF-D保留激活受体VEGFR-2和VEGFR-3的能力，并且看来缔合为非共价连接的二聚体。因此，优选的VEGF-D多核苷酸包括那些含有编码SEQ ID NO：26的氨基酸93-201的核苷酸序列的多核苷酸。以上提供的用于向VEGF-C多肽中导入保存功能的修饰的指导也适用于向VEGF-D多肽导入保存功能的修饰。VEGF-D的肝素结合形式也在考虑之列。见美国临时专利申请号60/478,390，并入此处作为参考。
在感染人、绵羊和山羊的痘病毒中还鉴定到VEGF亚家族的4个其它成员。口疮病毒编码的VEGF-E和NZ2 VEGF是有力的有丝分裂原和通透性增强因子。两者均表现出与哺乳动物VEGF-A大约25％的氨基酸同一性，并且表达为二硫键连接的同二聚体。这些病毒的感染的特征在于脓疱性皮炎，其中可能涉及到由这些病毒的VEGF蛋白诱导的内皮细胞增生和脉管透性。[Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)；Stacker和Achen，GrowthFactors17：1-11(1999)]。此外，从另外的两个口疮病毒株，D1701[GenbankAcc.No.AF106020；描述于Meyer等，EMBO J 18：363-374(1999)]和NZ10[描述于国际专利申请PCT/US99/25869，并入此处作为参考]，也鉴定到VEGF样蛋白。这些VEGF样病毒蛋白已经被证实可以结合宿主内皮上存在的VEGFR-2，而且该结合对于感染的发展和病毒对脉管发生的诱导是重要的[Meyer等，同上引文；国际专利申请PCT/US99/25869]。
PDGF/VEGF受体
已经鉴定了7种与PDGF/VEGF家族成员相互作用的细胞表面受体。这些受体包括PDGFR-α(见例如，Genbank Acc.No.NM006206)、PDGFR-β(见例如，Genbank Acc.No.NM002609)、VEGFR-1/Flt-1(fms样酪氨酸激酶-1；Genbank Acc.No.X51602；De Vries等，Science255：989-991(1992))；VEGFR-2/KDR/Flk-1(含有激酶插入域的受体/胎肝激酶-1；Genbank Acc.No.X59397(Flk-1)和L04947(KDR)；Ternan等，Biochem Biophy Res Comm187：1579-1586(1992)；Matthews等，Proc Natl Acad Sci USA 88：9026-9030(1991))；VEGFR-3/Flt4(fms样酪氨酸激酶4；美国专利号5,776,755和Genbank Acc.No.X68203和S66407；Pajusola等，Oncogene9：3545-3555(1994))、神经毡蛋白-1(Genbank Acc.No.NM003873)和神经毡蛋白-2(Genbank Acc.No.NM003872)。两种PDGF受体介导上述PDGF的信号传导。VEGF121、VEGF165、VEGF-B、PIGF-1和PIGF-2结合VEGF-R1；VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和NZ2 VEGF结合VEGF-R2；VEGF-C和VEGF-D结合VEGFR-3；VEGF165、VEGF-B、PIGF-2和NZ2VEGF结合神经毡蛋白-1；VEGF165和VEGF145结合神经毡蛋白-2。[Neufeld等，FASEB J 13：9-22(1999)；Stacker和Achen，Growth Factors 17：1-11(1999)；Ortega等，Fron Biosci 4：141-152(1999)；Zachary，Intl J Biochem Cell Bio 30：1169-1174(1998)；Petrova等，Exp. Cell Res 253：117-130(1999)；Gluzman-Poltorak等，J.Biol.Chem.275：18040-45(2000)]。
PDGF受体是蛋白质酪氨酸激酶受体(PTK)，其在胞外域中含有5个免疫球蛋白样环。VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3包含PTK的PDGF亚家族的一个亚组，其区别特征在于胞外域中存在7个Ig域以及胞质域中存在断裂的激酶域。神经毡蛋白-1和神经毡蛋白-2均是非PTK的VEGF受体，具有目前已知不具备下游信号转导能力的短胞质尾。
几种VEGF受体表达为1种以上的同种型。缺少第7个Ig样环、跨膜域和胞质区的VEGFR-1的可溶性形式在人脐静脉内皮细胞中表达。该VEGFR-1同种型以高亲和性结合VEGF-A，并且能够防止VEGF-A诱导的促有丝分裂反应[Ferrara等，J.Mol Med 77：527-543(1999)；Zachary，Intl JBiochem Cell Bio 30：1169-1174(1998)]。VEGFR-2的C端截短形式也已有报道[Zachary，同上引文]。在人类中，有两种VEGFR-3蛋白质同种型，其差异在于C末端的长度。研究提示较长的同种型负责VEGFR-3的大多数生物学性质。
VEGFR-1的表达主要发生在脉管内皮细胞中，但是单核细胞和肾血管系膜细胞[Neufeld等，FASEB J 13：9-22(1999)]、滋养层细胞(Charnock-Jones，Biol Reprod 51：524-30，1994)、造血干细胞(Luttun等，Ann N Y Acad Sci979：80-93，2002)、产精细胞和莱迪希细胞(Leydig cell)(Korpelainen等，J Cell Biol143：1705-12，1998)及平滑肌细胞(Ishida等，J.Cell Physiol.188：359-68，2001)上可能存在一些表达。此外，在成年器官中也检测到高水平VEGFR-1mRNA，说明VEGFR-1在成熟脉管的静止内皮中具有与细胞生长无关的功能。VEGFR-1-/-小鼠在第8.5至9.5天死于子宫中。尽管内皮细胞在这些动物中发育，但是功能性血管的形成严重地受损，提示VEGFR-1可能参与与细胞迁移有关的细胞-细胞或细胞-基质相互作用。近来，已经证实表达仅丧失了酪氨酸激酶域的突变VEGFR-1的小鼠表现出正常的脉管发生并存活，说明VEGFR-1的信号转导能力不是必需的。[Neufeld等，同上引文；Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)]。
VEGFR-2的表达类似于VEGFR-1的表达，VEGFR-2在脉管内皮中广泛地表达，但是其也存在于造血干细胞、巨核细胞和视网膜祖先细胞中[Neufeld等，同上引文]。尽管VEGFR-1和VEGFR-2的表达模式极大重叠，但是证据提示，在大多数细胞类型中，VEGFR-2是主要受体，大多数VEGF通过VEGFR-2实现其生物学活性。对VEGFR-2缺陷的小鼠胚胎的检查进一步指出，该受体是内皮细胞分化和造血细胞发育所必需的[Joukov等，JCell Physiol.173：211-215(1997)]。
VEGFR-3在胚胎发生早期在内皮细胞中广泛地表达。在发育后期，VEGFR-3的表达局限于发育中的淋巴管[Kaipainen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92：3566-3570(1995)]。成年个体中，淋巴内皮和一些毛细血管后微静脉表达VEGFR-3，并且在转移性淋巴结和淋巴管瘤中于淋巴窦内存在增加的表达。VEGFR-3也在通过过表达研究证实可能介导VEGF-C的髓细胞生成活性[WO98/33917]的CD34+造血细胞亚群中表达。定向破坏小鼠胚胎中的VEGFR-3基因，导致原始脉管网的重塑失败以及第9.5胚胎日后的死亡[Dumont等，Science，282：946-949(1998)]。这些研究提示VEGFR-3在胚胎脉管系统发育中以及在淋巴管发生过程中的必要作用。
VEGF受体的结构分析指出，VEGFR-1和VEGFR-2上的VEGF-A结合位点位于第二和第三Ig样环中。类似地，VEGFR-2和VEGFR-3上的VEGF-C和VEGF-D结合位点也包含在第二Ig环中[Taipale等，Curr Top MicrobiolImmunol 237：85-96(1999)]。第二Ig样环也赋予配体特异性，这通过结构域交换实验证实[Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)]。受体-配体研究说明，VEGF家族蛋白形成的二聚体能够结合两个VEGF受体分子，由此使VEGF受体二聚体化。VEGFR-1上的、以及可能地VEGFR-2上的第四Ig样环作为受体二聚体化结构域起作用，当受体与配体二聚体结合后该域将两个受体分子连接在一起[Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)]。尽管与VEGFR-1和VEGFR-2结合的VEGF-A的区域有很大程度的重叠，但是研究揭示VEGF-A中与VEGFR-1或VEGFR-2相互作用的是两个分开的结构域，并且揭示了这些结构域中对于配体-受体相互作用具有关键性的特殊氨基酸残基。已经发现在VEGF受体特异性结构域中可以特异地阻止与一种特定VEGF受体结合的突变[Neufeld等，FASEB J13：9-22(1999)]。
VEGFR-1和VEGFR-2结构类似，具有共同配体(VEGF121和VEGF165)，并且在发育过程中表现出相似的表达模式。然而，通过VEGFR-1和VEGFR-2由相同配体介导的信号表现出稍有不同。已经证实，响应VEGF-A，VEGFR-2将经历自磷酸化，但是在相同条件下几乎不能检测到VEGFR-1的磷酸化。VEGFR-2介导的信号造成重组过表达该受体的猪主动脉内皮细胞在形态学、肌动蛋白再组织和变皱膜运动(membrane ruffling)方面出现惊人改变。在这些细胞中，VEGFR-2也介导配体诱导的趋化性和促有丝分裂性；而VEGFR-1转染的细胞缺乏对VEGFR-A的促有丝分裂应答。在VEGF-A中导致破坏与VEGFR-2的结合的突变不能诱导内皮细胞增生，而与VEGFR-1的结合存在缺陷的VEGF-A突变体仍能够促进内皮增生。类似地，VEGF对仅表达VEGFR-2的细胞的刺激导致促有丝分裂应答，而对仅表达VEGFR-1的细胞施加相当的刺激作用尽管能够导致细胞迁移(例如，在单核细胞中)，但是不能诱导细胞增殖。此外，与VEGFR-1和VEGFR-2发生共沉淀的磷蛋白是不同的，提示不同的信号转导分子与受体特异的胞内序列相互作用。
新兴的假说是，VEGFR-1在脉管发生中的主要功能可能是通过与VEGF-A结合由此阻断VEGF-A与VEGFR-2间的相互作用而负面地调节VEGF-A的活性，而VEGFR-2被认为是内皮细胞中VEGF-A信号的主要转导蛋白。该假说得到如下支持：VEGFR-1缺陷型小鼠于胚胎时死亡，而表达能够结合VEGF-A但是缺乏酪氨酸激酶域的VEGFR-1受体的小鼠存活并且不表现异常胚胎发育或脉管生成。此外，对仅结合VEGFR-2的VEGF-A突变体的分析说明，它们保留在内皮细胞中诱导促有丝分裂应答的能力。然而，VEGF介导的单核细胞迁移依赖于VEGFR-1，说明通过该受体的信号转导对于至少一种生物学功能是重要的。此外，VEGF-A阻止树突细胞成熟的能力也与VEGFR-1信号转导相关，提示VEGFR-1可能在内皮细胞以外的细胞类型中发挥作用。[Ferrara，J Mol Med 77：527-543(1999)；Zachary，Intl J Biochem Cell Bio 30：1169-1174(1998)]。
对于用于实施本发明的VEGF-C多肽、神经毡蛋白或其它多肽，可以理解通常天然序列是最优选的。“天然序列”是指由天然存在的多核苷酸编码的序列，包括但不限于前肽原、前肽和部分地和完全地蛋白酶解加工的多肽。如上述，这些多肽中有许多存在由于例如可变RNA加工而产生的剪接变体，这些剪接变体包含在天然序列内。为了本文中描述的目的，前述蛋白的保留目的结合性质的片段也应当被视作天然序列。而且，可以对大多数蛋白质序列进行修饰，尤其是保守氨基酸替代，而不破坏蛋白质的目的活性，因此如此修饰的蛋白质也适用于实施本发明。“保守氨基酸替代”是指一个氨基酸被具有相似化学特征的侧链的氨基酸代替。用于实施保守替代的相似氨基酸包括具有酸性侧链(谷氨酸、天冬氨酸)；碱性侧链(精氨酸、赖氨酸、组氨酸)；极性酰胺侧链(谷氨酰胺、天冬酰胺)；疏水脂族侧链(亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸和甘氨酸)；芳族侧链(苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸)；小侧链(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸)；和脂族羟基侧链(丝氨酸、苏氨酸)的那些氨基酸。
而且，在不破坏期望活性的情况下缺失和添加氨基酸也常常是可能的。对于本发明，当尤其关心结合活性并且特别地关心分子激活或抑制受体酪氨酸激酶的能力时，可利用结合试验和酪氨酸磷酸化试验确定特定配体或配体变体是否(a)结合和(b)刺激或抑制RTK活性。
候选VEGF-C类似物多肽可以首先基于它们结合VEGF-C受体和(对于某些受体)刺激VEGF-C受体(VEGFR-2，VEGFR-3)自磷酸化或通过它们的受体(VEGFR-2，VEGFR-3，NRP-1和NRP-2)刺激细胞活化的能力，进行快速的筛选。刺激这些受体的多肽在体外基于它们对培养的毛细管或动脉内皮细胞(例如，见WO98/33917所述)的促有丝分裂活性和/或趋化性，快速地进行重筛选。然后，如本文中所述的，基于在本发明方法中的效力，体内筛选具有促有丝分裂活性和/或趋化性的多肽。以此方式，可以快速地筛选天然VEGF-C蛋白的变体(类似物)，确定这些变体是否具有必备的生物学活性以构成用于本发明中的“VEGF-C多肽”。
定义多肽变体种类的两种方式包括与天然多肽的氨基酸同一性百分数(例如，优选80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98和99％同一性)或编码多核苷酸在规定条件下相互杂交的能力。一套示例性条件如下：42℃于50％甲酰胺、5XSSC、20mM NaPO4，pH6.8中杂交；和在1XSSC中55℃洗涤30分钟。计算等价杂交条件和/或选择其它条件以达到期望的严紧水平的公式是熟知的。本领域理解，具有等价严紧性的条件可以按照Ausubel等(编)，Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons(1994)，pp.6.03-6.4.10所述，通过变化温度和缓冲液或盐浓度实现。杂交条件的改变可以通过经验确定，或者可以基于探针长度及探针中鸟嘌呤/胞嘧啶(GC)碱基对的百分数精确地计算。可以如Sambrook等(编)，Moleular Cloning：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press：Cold Spring Harbor，New York(1989)，pp.9.47-9.51所述，计算杂交条件。
B.神经干细胞
本发明涉及神经干细胞在血管内皮生长因子C的作用下的活化和增殖以及在神经病治疗中使用VEGF-C刺激神经生长和再生的方法。
干细胞，又称作祖先细胞，包含胚胎干细胞和成年干细胞。成年干细胞包括但不限于神经干细胞、造血干细胞、内皮干细胞和上皮干细胞。见Tepper等，Plastic and Reconstructive Surgery，11：846-854(2003)。内皮祖先细胞在血液中循环并迁移至以受损内皮为特征的区域。Kaushal等，Nat.Med.，7：1035-1040(2001)。来自不同造血来源的人CD34(+)CD133(+)干细胞小亚群共表达VEGFR-3(Salven等，Blood，101(1)：168-72(2003))。这些细胞也能够体外分化成淋巴和/或血管内皮细胞。
术语“干细胞募集”是指造成干细胞的动员(例如，从骨髓进入循环)的能力。术语“增殖”指有丝分裂繁殖。术语“分化”指多能干细胞发育成其它细胞类型所经过的过程。分化可能涉及处于多能性和完全分化的细胞类型之间的多个阶段。
本发明还提供刺激神经细胞群生长的方法学。这些神经细胞群，包括神经元和神经胶质来源的细胞，可以治疗性地用于处理表现出神经病的个体。例如，利用本发明治疗神经变性病例如阿尔茨海默氏病或帕金森病，或由于损害诸如在中风、局部缺血或手术期间造成的神经病，或创伤性损伤例如脊髓损伤。
神经干细胞(NSC)是未成熟的未定型细胞，其存在于发育中的，甚至成年的CNS中，并且被假定为可以在CNS中产生一系列的特化细胞。通过神经干细胞自更新及分化成大多数(即使不是全部)为神经元和神经胶质谱系的细胞的能力以及其在发育中的和/或变性的CNS区域形成群体的能力，可以操作性地对它们进行定义[Ciage等，Ann Rev Neurosci 18：159-92，1995；Whittemore等，Mol.Neurobiology 12：13-39，1996；McKay Science 276：66-71，1997；Gage F H，Christen Y(编)，神经科学的研究和前景：分离、表征和利用CNS干细胞(Research & Perspectives in Neurosciences：Isolation，Characterization，& Utilization of CNS Stem Cell)，Spring-Verlag，Heidelberg，Berlin，1997；Snyder，The Neuroscientist4，408-25，1998]。
成年哺乳动物中发现的神经干细胞主要从海马、嗅球和成年脑室区以及脊髓分离(Temple，S.Nature 414：112-117，2001)。研究证明，从成年大鼠海马(尤其是齿状回的颗粒下层)分离的祖先细胞，当用表皮生长因子或碱性成纤维生长因子刺激时在体外增殖，并且当移植入脑后体内迁移并分化成成熟神经元(Gage等，Proc.Natl.Acad.Sci.92：11879-83，1995)。
可以用于本发明的迁移的干细胞的例子包括但不限于C17.2神经元干细胞系(Riess等，Neurosurgery.51：1043-52，2002)、纯化的神经干细胞、HSN-1细胞(人大脑皮层)、胎猪细胞和神经嵴细胞、骨髓来源的神经干细胞、hNT细胞(人神经元细胞系)、和人神经元祖先细胞系(Clonetics，Walkersville，Md.，Catalog Number CC-2599)。用于本发明的HSN-1细胞按照例如Ronnett等[Science 248，603-605，1990]中所述制备。用于本发明的hNT细胞按照例如Konobu等[Cell Transplant 7，549-558，1998]中所述制备。神经嵴细胞的制备见Stemple和Anderson的描述(美国专利号5,654,183)，该文献并入此处作为参考。简要地，自哺乳动物胚胎从含有最尾部的10个体节的区域分离神经嵴细胞，将其从早期胚胎(在大鼠中等同于妊娠第10.5天)中切出。将这些组织切片在经平衡的盐溶液中，典型地在4℃，转移至冷冻的凹玻片上，并用胶原酶在适当缓冲溶液，例如Howard氏Ringer氏溶液中处理。在神经管脱离体节和脊索后，将它们接种在包被有纤连蛋白(FN)的培养皿上，允许神经嵴细胞从神经管中迁移出来。24小时后，在用磨尖的钨针除去这些管后，通过用胰蛋白酶溶液(典型地0.05％)处理，从包被FN的板子上除下嵴细胞。然后离心收集脱附的细胞的上清液，并以适当密度，一般地225个细胞/100mm培养皿，接种在适当的化学明确的培养基中，所述培养基例如具有4mM L-谷氨酰胺并调整以含有1.5g/L碳酸氢钠、4.5g/L葡萄糖，90％；胎牛血清(10％)的Dulbecco氏改良Eagle氏培养基。此生长培养基在过滤前应当调节至pH7.35。见美国专利号5,196,315。
按需要改变具体生长因子和特定添加剂的浓度，以便使特定的神经干细胞培养物获得最佳生长。此培养基也可以在无血清的情况下使用，并且含有允许神经嵴干细胞生长和自更新的成分。培养皿用适当基质，典型地FN和多聚-D-赖氨酸(PDL)的组合，包被。
上述神经嵴细胞基于其细胞表面表达低亲和性神经生长因子受体(LNGFR)和巢蛋白(nestin)以及缺少神经元或神经胶质谱系的标志(包括神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP))而分离。可以使用这些分子的抗体纯化神经嵴细胞(neural crest cell)群。
根据本发明培养的、分离的神经嵴细胞和从其分化产生的细胞都可以用于本发明中。
本文中“神经干细胞”是神经祖先细胞，即，原始神经元(proto-neuronal)/原始神经胶质(proto-glial)。术语神经干细胞与神经祖先细胞(neuralprogenitor cell)、神经前体细胞(neural precursor cell)和神经球(neurospere)可互换使用。发育过程中，胚胎干细胞-十分原始的全能细胞-在发育成神经细胞时被认为经过神经干细胞阶段。神经干细胞可以被诱导从而分化成任何神经细胞，包括神经胶质、少突胶质细胞、神经元或星形胶质细胞。基于细胞历经许多次传代而繁殖的能力、以及巢蛋白和Ki-67的表达、原始神经元形态和分化成神经元和神经胶质的能力，将细胞表征为多能神经祖先细胞。NSC的来源可以是含有NSC的任何组织，包括但不限于：脑、脊髓、胎儿组织、视网膜和胚胎(见美国专利公布号2003/0040023)。哺乳动物神经嵴干细胞和多能神经干细胞及它们的后代可以从来自人和非人灵长类动物、马、犬、猫、牛、猪等的组织分离。
如本文中所用，神经干细胞或神经前体细胞可以产生不同的神经细胞谱系前体，例如神经元前体细胞和少突胶质细胞前体细胞。
本领域已知许多可以使成年干细胞、胚胎干细胞、视网膜干细胞或神经干细胞分化成特殊类型的神经细胞、视网膜细胞或特殊类型的祖先细胞的分化剂或神经营养因子。这些神经营养因子包括调节存活、生长、形态可塑性或用于神经元分化功能的蛋白质合成的内源可溶性蛋白质。因此，可以预见，本文中分离的干细胞如果期望的话可以利用本领域技术人员已知的任何方式进行分化。分化剂的一些例子包括但不限于干扰素γ、胎牛血清、神经生长因子、表皮生长因子(EGF)的移除、碱性成纤维生长因子(bFGF)的移除(或两者)、神经元素(neurogenin)、脑衍生的神经营养因子(BDNF)、甲状腺激素、骨形态发生蛋白(BMP)、LIF、sonic hedgehog、和神经胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素、干扰素、干细胞因子(SCF)、活化素、抑制素、趋化因子、视黄酸和CNTF。可以使这些细胞永久地或暂时地分化。例如，可以使细胞暂时分化以表达特殊标志，例如以便使用该标志进行鉴定。然后，可以除去分化剂，而该标志可以不再表达。
本发明考虑如果需要也可以使用抗分化剂以抑制祖先细胞分化和维持全能性。这些抗分化剂包括但不限于：TGF-β、TGFα、EGF、FGF和delta(notch配体)。
上述神经干细胞可以用于通过向患有需要神经细胞再生的疾病或病症的哺乳动物个体施用和转移这些细胞以治疗神经病。可以向这些个体施用VEGF-C产物或VEGF-D产物以造成神经干细胞的体内再生，并且可以以下述任一种方法实现VEGF-C产物或VEGF-D产物的施用。在一个备选方法中，向培养的细胞施用VEGF-C产物或VEGF-D产物，以刺激干细胞本身增殖，或诱导分化出期望的神经细胞群体，然后将其移植入需要治疗的个体中。
少突胶质细胞前体细胞(OPC)是从神经干细胞产生的一类细胞。以前已经证明OPC的增殖、迁移和存活需要血小板衍生生长因子A(PDGF-A)及其受体PDGFR-α(Noble等，Nature，333：560-2，1988；Pringle等，Development115：535-51，1992；Spassky等，Development，128：4993-5004，2001；Klinghoffer等，Dev Cell 2：10-13，2002)。然而，几项观察结果提示，体内少突胶质细胞的发育除了需要PDGF-A外还需要其它生长因子，而且PDGFR-αOPC不代表整个的OPC群体。首先，OPC在无PDGF-A或PDGFR-α信号转导时聚积在后脑中(Fruttiger等，同上引文；Klinghoffer等，同上引文)。其次，脑中存在以表达plp/dm-20(Timsit等，J Neurosci.15：1012-24，1995)为特征、不表达PDGFR-α(Spassky等，J Neurosci.18：8331-43.1998)且存活及增殖不依赖于PDGFR-α信号转导(Spassky等，Development.128：4993-5004，2001)的OPC亚群。在PDGFR-α表达细胞出现之前在胚胎脑的几个区域中检测到这些表达plp/dm-20的、独立于PDGF的OPC(Spassky等，J Neurosci.22：5992-6004，2002，和同上引文，2002)。
PDGF生长因子家族与VEGF家族密切相关。几项近来的研究证实，VEGF-A干扰端脑室下区中神经组织的活动和发育，尤其是神经发生(Louissaint等，Neuron.34：945-60，2002；Jin等，Proc Natl Acad Sci.USA 99：11946-50，2002)，并且干扰运动和感觉神经元的发育(Oosthuyse等，Nat Genet28：131-8，2001，Mukouyama等，Cell，109：693-705，2002)。先前的研究证实，VEGF-C结合神经毡蛋白-1和神经毡蛋白-2(Raper，Curr Opin Neurobiol.10：88-94，2000；Fujisawa等，Dev Dyn.2004)。OPC表达最初描述为3型脑信号蛋白的受体的神经毡蛋白(Spassky等，同上引文)。
本发明还考虑直接向需要治疗神经病的个体施用病毒载体，或者将病毒载体转移至体外培养的神经干细胞中然后再移植入个体，其中所述病毒载体携带VEGF-C或VEGF-D转基因并且设计用于感染哺乳动物细胞和造成这些细胞分泌VEGF-C或VEGF-D多肽。可以设计病毒载体以便分泌VEGF-C或VEGF-D和刺激神经干细胞增殖及改善神经病的症状。
C.神经病适应症和VEGF-C/VEGF-D疗法
周围神经系统(PNS)包含感觉神经元和运动神经元，它们将中枢神经系统(CNS)和内脏器官例如心脏、肺和腺体连接起来。周围神经系统分为感觉神经系统和自主神经系统，自主神经系统进一步分为交感神经系统和副交感神经系统。交感神经系统受神经递质乙酰胆碱和去甲肾上腺素调节，这些神经递质辅助调节诸如心跳、血压、瞳孔放大、吞咽机制、肝脏活动和血液向肌肉、心脏和脑的移动等基础功能。交感神经系统中神经元或其它支持性神经系统细胞的神经变性会造成巨大的系统麻烦。本文中对VEGF-C刺激交感神经细胞前体体外增殖和生长的公开，指出VEGF-C可以作为一种新兴疗法克服这些有害神经病的影响。
近来在神经学领域的发现指出，神经干细胞可以从哺乳动物成年海马中分离。海马关键性地参与学习和记忆，而且极易受到伤害(例如脑创伤和局部缺血)的攻击。(Nakatomi等，Cell 110：429-41，2002)。在神经变性病中该区域常常受到影响。
神经变性病的特征在于特定脑区的进行性变性(即，神经细胞功能异常和死亡)，导致削弱的运动功能，并且可能导致受到压制的认知技能和痴呆。神经变性病的例子包括但不限于阿尔茨海默氏病、帕金森病、ALS和运动神经元疾病。
阿尔茨海默氏病被诊断为进行性的遗忘，导致痴呆。AD脑显示出由于神经元丧失所致的弥散性大脑萎缩和扩大的脑室。一般地，AD病理主要涉及海马区的神经元。
帕金森病的特征是振颤和缩减的运动神经元功能、强直及运动不能。这些神经学征候由黑质的主要传出投射纤维(即，黑质纹状体束)功能失常所致。多巴胺能系统中神经元的胞体是参与PD进程的主要细胞。主要的似帕金森病症状的例子包括帕金森病(PD)、进行性核上瘫(PSP)和纹状体黑质变性(striatonigral degeneration，SND)，SND与橄榄脑桥小脑变性(OPCD)和Shy Drager症(SDS)一起被包括在称作多系统萎缩(MSA)的综合症中。
肌萎缩侧索硬化(ALS)，常称作“Lou Gehrig氏病”，是一种进行性神经变性病，其攻击脑和脊髓中的运动神经元。ALS中运动神经元的进行性变性最终导致这些神经元死亡，从而降低脑引发和控制肌肉运动的能力。
亨廷顿病(HD)，尽管是一种遗传疾病，但是在纹状体的中型刺状GABA能神经元中导致神经元变性(Hickey等，Prog Neuropsychopharmacol BiolPsychiatry.27：255-65，2003)。该变性造成运动失控、智力丧失和情绪失调。
大脑麻痹(cerebral palsy)(CP)是另一种可以通过本发明方法治疗的病症。CP综合症是一组相关的运动失调，通常源于5岁前发生的发育异常或产前或产后中枢神经系统(CNS)失调损伤。CP的特征是受损的随意运动。
患有上述任一疾病的患者可以使用VEGF-C产物或VEGF-D产物系统性地或优选地在神经病理学位点进行治疗，以刺激神经干细胞体内增殖。或者，可以向患者施用神经干细胞，所述神经干细胞从已经用VEGF-C或VEGF-D产物(包括表达VEGF-C或VEGF-D的病毒载体)体外处理过的生物学样品、商业来源或永生化神经干细胞分离。然后这些神经干细胞被施用给患有神经变性病或神经创伤的患者，由此它们将迁移至神经变性位点并增殖。所述施用可以如下所述系统性地或局部地进行。
患有上述任一疾病的患者可以在出现疾病症状的最早征候(例如，受损的运动功能或受损的认知功能)时治疗，以便阻止神经变性的发展。本发明也考虑将VEGF-C/D或VEGF-C/D培养的神经元前体细胞施用给疾病晚期的个体以减缓神经系统损坏的进程。
本发明也考虑到，VEGF-C产物或VEGF-D产物与常用于治疗神经病的神经治疗剂的联合施用将导致两种治疗的协同作用，由此使接受联合治疗的患者比仅接受一种治疗的个体有明显的改善。
神经变性病可以用几类神经治疗剂治疗。这些治疗剂包括但不限于如下药物：促胰液素(secretin)、盐酸金刚胺(amantadine)、利培酮(risperidone)、氟伏沙明(Fluvoxamine)、可乐定(clonidine)、胺磺必利(amisulpride)、溴隐亭(bromocriptine)、氯米帕明(clomipramine)和去甲丙咪嗪(desipramine)。
常用于治疗阿尔茨海默氏病的神经治疗剂包括tacrine(Cognex)、多奈哌齐(donepezil)(Aricept)、酒石酸卡巴拉汀(Rivastigmine)(Exelon)或galantamine(Reminyl)，它们可以帮助防止一些症状在一段有限时间内变得更糟。此外，一些药物可以帮助控制AD的行为症状，例如失眠、激动不安、漫游、焦虑和抑郁。AD的其它治疗剂是抗炎药物，例如非类固醇抗炎药(NSAID)，例如COX-2抑制剂(Celebrex)和甲氧萘丙酸钠(naproxen sodium)。还使用的其它抗炎剂有水杨酸盐类、类固醇类、受体位点阻断剂或补体激活的抑制剂。
普拉克索(Pramipexole)(Mirapex)和左旋多巴(levodopa)是治疗早期帕金森病(PD)的运动症状的有效药物。体外研究和动物研究提示，普拉克索可以保护而左旋多巴可以保护或破坏多巴胺神经元。神经成像提供了在PD患者中客观地生物标志多巴胺神经元变性的可能。辅酶Q10，一种在帕金森患者中低水平表达的神经递质，也用于治疗PD。左旋多巴可以和其它药物例如卡比多巴(Carbidopa)联合以辅助缓解L-多巴的副作用。以单独的药剂形式或以药物联合形式用于治疗帕金森病的其它药物有Sinemet，司来吉兰(Selegiline)(市场上为Eldepryl)，它们可以使早期帕金森症状得到一些缓解。金刚胺(Symmetrel)是一种也可以提供抗帕金森效果的抗病毒药，当与Sinemet联用时其频繁地用于扩大左旋多巴的“治疗窗口”。
苯那君(Benadryl)、安坦(Artane)和Cogentine是可以治疗振颤的抗胆碱能处方药的商品名。抗胆碱能药阻断神经肌肉接头中乙酰胆碱的作用，由此重现平衡其与多巴胺的关系和减少强直和振颤。尽管有效，但是这些药物可能有副作用，例如嘴干、视力模糊、尿潴留和便秘(这限制了这些药物在老年人中的使用)。
罗匹尼罗(Requip)、普拉克索(Mirapex)、溴隐亭(Parlodel)和硫丙麦角林(Pergolide，Permax)是多巴胺激动剂。这些药物直接在多巴胺受体位点进入脑部，并且常常与Sinemet联合处方使用以延长每一剂左旋多巴的作用持续时间。它们还可以减少左旋多巴诱导的非随意运动-称作“异动症”(dyskinesia)。医师可以慢慢地将多巴胺激动剂调整至治疗水平，然后逐渐地减少左旋多巴剂量以使异动症最小化。阿扑吗啡(Apomorphine)是常常以连续皮下输注形式或以皮下注射形式给药的多巴胺激动剂。
Tolcaponc(Tasmar)和恩他卡朋(Entacapone)是COMT(儿茶酚-O-甲基转移酶)抑制剂。当阻断COMT活性时，多巴胺将更长期的留在脑中。这些药物的作用机制与多巴胺激动剂的作用机制完全不同。
Rilutek_、Myotrophin_、辅酶Q、托吡酯(Topiramate)、Xaliproden和氧甲氢龙(Oxandrolone)是用于治疗ALS的示例性药剂。
本发明考虑，在使用上述任何神经治疗剂之前、之后或同时应用VEGF-C进行治疗将增强神经治疗剂的效果，由此减少个体所需的药剂量和减少由多剂量或大剂量神经治疗剂造成的有害副作用。
除了神经变性病外，还考虑使用VEGF-C或VEGF-D治疗自主神经系统疾病。示例性疾病包括：特征在于多系统萎缩和严重低血压的Shy Drager症(Shy Drager syndrome)(Lamarre-Cliché等，Can J Clin Pharmacol.6：213-5，1999)；特征在于强直性瞳孔和反射消失的Adie氏综合症(Adie’s syndrome)(Mak等，J Clin Neurosci.7：452，2000)；影响眼睛的神经支配的Horner氏综合症(Horner’s syndrome)(Patel等，Optometry 74：245-56，2003)；影响心血管调节的家族性植物神经功能不全(Bernardi等，Am.J.Respir.Crit.Care Med.167：141-9，2003)；和特征在于疼痛和感觉改变的局部疼痛综合症(regionalpain syndrome)(Turner-Stokes，L.Disabil.Rehabil.24：939-47，2002)。
多发性硬化(MS)是一种年轻成人中频繁出现的使人丧失能力的疾病。该病的特征在于炎症反应(可能是自身免疫类型的)和常常与少突胶质细胞(中枢神经系统中的髓鞘脂形成细胞)的丧失相关的脱髓鞘。目前可用的治疗方法致力于解决MS的炎症因素，但是对髓鞘的重新形成几乎没有(即使有的话)功效。因此极为重要的是鉴定存活或缺乏时将干扰MS斑(plaque)中少突神经胶质分化和髓鞘形成的因素。本发明考虑使用VEGF-C或VEGF-D产物治疗MS和其它脱髓鞘疾病。VEGF-C或VEGF-D产物可以单独地或与其它用于脱髓鞘疾病的疗法(包括本文其它地方描述的与MS治疗有关的疗法)联合使用。
还考虑，VEGF-C或VEGF-D产物与其它抗炎剂联合施用。这些药剂包括非类固醇抗炎药(NSAID)、镇痛药、糖皮质激素或其它免疫抑制治疗剂。
NSAID的例子包括布洛芬(ibuprofen)、奈普生(naproxen)、奈普生钠、Cox-2抑制剂如伟克适(Vioxx)和西乐葆(Celebrex)，和水杨酸盐。镇痛药的例子包括乙酰氨基苯(acetaminophen)、羟二氢可待因酮(oxycodone)、曲马朵(tramadol)或盐酸丙氧吩(proporxyphene hygrochloride)。糖皮质激素的例子包括可的松、地塞米松(dexamethosone)、氢化可的松、甲基脱氢皮质醇、脱氢皮质醇或强的松。其它免疫抑制治疗物的例子包括环磷酰胺、环孢素、氨甲蝶呤或青霉胺。本发明的一个方面考虑包含一种或多种本发明VEGF-C或VEGF-D产物和一种或多种前述常规治疗剂的制剂。
如上所述，本发明还考虑VEGF-C和VEGF-D产物用于治疗神经系统的物理性损伤。创伤可以由脑和脊髓的物理性伤害或压伤或割伤，例如擦伤、切口、撞伤、刺伤、挤伤，或由外物与手臂、手或身体其它部分的创伤性接触所致的其它损伤所引起，也包括血液暂时或永久停止流向部分的神经系统。
D.基因治疗
本申请的许多内容，包括一些实施例，从蛋白质-蛋白质相互作用和蛋白质施用的角度记述。也特别考虑遗传操作实现蛋白质表达或活性的调节。例如，当考虑施用蛋白质时，可以考虑施用基因治疗载体以引起目的蛋白质在体内产生。当考虑抑制蛋白质(例如，通过使用抗体或小分子抑制剂)时，可以考虑通过遗传技术，例如敲除技术或反义疗法抑制蛋白质的体内表达。
任何适宜的载体均可以用于将目的转基因导入动物体。在文献中已经描述过的载体的例子包括复制缺陷型逆转录病毒载体，包括但不限于慢病毒载体[Kim等，J.Virol.72(1)；811-816(1998)；Kingsman & Johnson，ScripMagazine，1998年10月，pp.43-46]；腺病毒(见例如美国专利号5,824,544；美国专利号5,707,618；美国专利号5,792,453；美国专利号5,693,509；美国专利号5,670,488；美国专利号5,585,362；Quantin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：2581-2584(1992)；Stratford-Perricadet等，J.Clin.Invest.90：626-630(1992)；和Rosenfeld等，Cell 68：143-155(1992))、逆转录病毒(见例如美国专利号5,888,502；美国专利号5,830,725；美国专利号5,770,414；美国专利号5,686,278；美国专利号4,861,719)、腺相关病毒(见例如美国专利号5,474,935；美国专利号5,139,941；美国专利号5,622,856；美国专利号5,658,776；美国专利号5,773,289；美国专利号5,789,390；美国专利号5,834,441；美国专利号5,863,541；美国专利号5,851,521；美国专利号5,252,479；Gnatenko等，J.Investig.Med.，45：87-98(1997))、腺病毒-腺相关病毒杂种(见例如，美国专利号5,856,152)或痘苗病毒或疱疹病毒(见例如美国专利号5,879,934；美国专利号5,849,571；美国专利号5,830,727；美国专利号5,661,033；美国专利号5,328,688)；脂转染试剂介导的基因转移(BRL)；脂质体载体[见例如，美国专利号5,631,237(包含仙台病毒的脂质体)]；和它们的组合。所有前述文献均完整地并入此处作为参考。复制缺陷型腺病毒载体、腺相关病毒载体和慢病毒是优选实施方案。
在使用病毒载体的实施方案中，优选的多核苷酸包括适宜启动子和多腺苷酸化序列以在目的靶组织中启动表达。对于本发明的许多应用，用于哺乳动物细胞表达的适宜启动子/增强子包括例如巨细胞病毒启动子/增强子[Lehner等，J.Clin Microbiol.29：2494-2502(1991)；Boshart等，Cell，41：521-530(1985)]；Rous肉瘤病毒启动子[Davis等，Hum.Gene Ther.，4：151(1993)]；猿猴病毒40启动子、逆转录病毒的长末端重复(LTR)、角蛋白14启动子和α肌球蛋白重链启动子。此外，还可以使用神经特异性启动子使生长因子的表达定向于受感染的神经元，包括例如，将β3-微管蛋白、多巴胺脱羧酶或GABA合成酶启动子用于VEGF-C(或D)在神经元中的表达。
其它实施方案考虑非病毒递送。这些包括磷酸钙沉淀(Graham和VanDer Eb，Virology，52：456-467(1973)；Chen和Okayama，Mol Cell Biol.，7：2745-2752，(1987)；Rippe等，Mol.Cell Biol.10：689-695(1990))、DEAE-葡聚糖(Gopal，Mol.Cell Biol.5：1188-1190，(1985))、电穿孔(Tur-Kaspa等，Mol.Cell Biol.，6：716-718(1986)；Potter等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，81：7161-7165，(1984))、直接显微注射(Harland和Weintraub，J.Cell Biol.101：1094-1099(1985))、载有DNA的脂质体(Nicolao和Sene，Biochim.Biophys.Acta，721：185-190(1982)；Fraley等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，76：3348-3352(1979)；Felgner，Sci.Am.，276(6)：102-6(1997)；Felgner，Hum.GeneTher.，7(15)：1791-3，(1996))、细胞超声(Fechheimer等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84：8463-8467(1987))、使用高速微粒的基因轰击(Yang等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87：9568-9572(1990))、和受体介导的转染(Wu和Wu，J.Biol.Chem.，262：4429-4432(1987)；Wu和Wu，Biochemistry，27：887-892(1988)；Wu和Wu，Adv.Drug Delivery Rev.，12：159-167(1993))。
在本发明一个具体实施方案中，可以将表达构建体(或实际上上述肽)截留在脂质体中。脂质体是具有磷脂双层膜和内部水性介质特征的小泡结构。多层脂质体具有被水性介质分隔开的多个脂质层。当将磷脂悬浮在过量水性溶液中时多层脂质体将自动形成。脂质成分在形成闭合结构之间经历自重排并在脂质双层之间截留水和溶解的溶质(Ghosh和Bachhawat，“InLiver Disease，Targeted Diagnosis and Therapy Using Specific Receptors andLigands，”Wu，G.，Wu，C.，编，New York：Marcel Dekker，pp.87-104(1991))。将DNA加入阳离子脂质体造成从脂质体到光学双折射液晶凝聚小球的拓扑学转变(Radler等，Science，275(5301)：810-4，(1997))。这些DNA-脂质复合物是可以用于基因治疗和递送的潜在非病毒载体。
本发明还考虑各种涉及“脂转染”技术的商业方法。在本发明某些实施方案中，可以将脂质体与血凝病毒(HVJ)复合。已经证实这有利于与细胞膜的融合并促进脂质体包封的DNA进入细胞(Kaneda等，Science，243：375-378(1989))。其它实施方案中，脂质体可以与核非组蛋白的染色体蛋白质(HMG-1)复合或与之联用(Kato等，J.Biol.Chem.，266：3361-3364(1991))。在再其它实施方案中，脂质体可以与HVJ和HMG-1两者复合或联用。鉴于这些表达构建体已经成功地用于体外和体内转移和表达核酸，故可以将它们应用于本发明中。
可以用于将编码治疗剂的核酸递送至细胞的其它载体递送系统包括受体介导的递送运载体。这些运载体利用了几乎所有真核细胞中受体介导的内吞对大分子的选择性摄取作用。由于各种受体的细胞类型特异性分布，故该递送可以是高度特异性的(Wu和Wu(1993)，同上引文)。
受体介导的定向基因运载体一般由两个组分组成：细胞受体特异性配体和DNA结合剂。几种配体已经用于受体介导的基因转移。被最多表征的配体是脱唾液酸血清类粘蛋白(ASOR)(Wu和Wu(1987)，同上引文)和转铁蛋白(Wagner等，Proc.Natl. Acad.Sci.USA 87(9)：3410-3414(1990))。近来，一种与ASOR识别相同受体的合成的新糖蛋白用作基因递送运载体(Ferkol等，FASEB J.7：1081-1091，(1993)；Perales等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：4086-4090(1994))，而且表皮生长因子(EGF)也已经用于将基因递送给鳞状癌细胞(Myers，EPO 0273085)。
在其它实施方案中，递送运载体可以包含配体和脂质体。例如，Nicolau等，Methods Enzymol.149：157-176(1987)使用掺入脂质体的乳糖基-神经酰胺、末端半乳糖脱唾液酸神经节苷脂，并观察到肝细胞对胰岛素基因的摄取增加。因此，可行的是，还可以将编码治疗基因的核酸通过任何数量的受体-配体系统在有或无脂质体存在下特异地递送至特定细胞类型。
在本发明另一实施方案中，表达构建体可以简单地由裸露的重组DNA或质粒组成。可以通过上述任何以物理或化学方法使细胞膜通透的方法，转移此构建体。这尤其适用于体外转移，然而，也可以将其用于体内。Dubensky等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，81：7529-7533(1984)成功地将多瘤病毒DNA以CaPO4沉淀物形式注射入成年和新生小鼠肝和脾内，这些小鼠表现出活跃的病毒复制和急性感染。Benvenisty和Neshif，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83：9551-9555(1986)还证实，直接腹膜内注射CaPO4沉淀的质粒导致所转染的基因表达。
用于将裸DNA表达构建体转移入细胞的本发明另一实施方案可以涉及微粒轰击。该方法依赖于使包被有DNA的微粒加速至高速度从而允许它们穿透细胞膜并在不杀死细胞的情况下进入细胞的能力(Klein等，Nature，327：70-73(1987))。已经开发了几种用于加速小微粒的装置。一种装置依赖于高电压放电产生电流，由该电流提供原动力(Yang等Proc.Natl.Acad.Sci.USA87：9568-9572(1990))。所用微粒由生物学惰性物质如钨或金珠组成。
本领域技术人员将明了如何在体内和离体情况下应用基因递送。对于病毒载体，一般制备病毒载原液。根据病毒的类型和可得到的滴度，向患者递送1×104、1×105、1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011或1×1012个感染粒子。通过比较相对的摄取效率，可以外推出用于脂质体或其它非病毒制剂的相似数字。以下讨论可药用组合物形式的制剂。
对于各种细胞类型可以考虑各种途径。对于实践上任何细胞、组织或器官类型，均可以考虑系统递送。在其它实施方案中，可以采取各种直接的、局部的和区域的方法。例如，可以用表达载体或蛋白质直接注射细胞、组织或器官。
在一个不同实施方案中，考虑离体基因治疗。在离体实施方案中，移出患者的细胞，将细胞在身体外维持至少一段时间。在此期间，递送治疗剂，之后将细胞重新导入患者体内。
反义多核苷酸是识别并杂交编码目的蛋白质的多核苷酸的多核苷酸，因此其可以抑制该蛋白质的转录或翻译。全长的和片段的反义多核苷酸均可以使用。设计和优化反义核苷酸的方法描述在Lima等(J Biol Chem，272：626-38，1997)和Kurreck等(Nucleic Acids Res.，30：1911-8，2002)。此外，可以获得商业软件用于优化反义序列的选择以及比较所选序列和已知基因组序列以帮助确保对选定基因的唯一性/特异性。可以进一步通过杂交分析确认此唯一性。将反义核酸引入细胞(例如，通过病毒载体或胶体分散系统例如脂质体)。本发明考虑，VEGF-C反义核酸分子包含来自靶序列的从大约10至500(优选地从大约10至50)的任何整数数目核苷酸的互补序列。VEGF-C反义分子可以包含长度至少大约10、25、50、100、250或500个核苷酸或与完整VEGF-C编码链互补的互补序列。反义核酸在细胞中与靶核苷酸序列结合并阻止靶序列转录或翻译。特别考虑将硫代磷酸酯和甲基膦酸酯反义寡核苷酸用于本发明的治疗应用中。反义寡核苷酸可以在其5’末端进一步用多聚-L-赖氨酸、转铁蛋白多聚赖氨酸或胆固醇部分进行修饰。
一个实施方案中，可以使用本发明RNA，通过双链(dsRNA)(Fire等Nature391：806-811，1998)或短干扰RNA(siRNA)序列(Yu等Proc Natl AcadSic USA 99：6047-52，2002)，诱导RNA干扰(RNAi)。“RNAi”是dsRNA诱导互补mRNA发生同源同源依赖性降解的过程。在一个实施方案中，本发明核酸分子通过互补碱基配对与本发明的“有义”核糖核酸杂交形成双链RNA。可以提供相应于至少大约20、25、50、100、250或500个核苷酸或完整VEGF-C编码链或仅其一部分的dsRNA反义和有义核酸分子。在一个备选实施方案中，siRNA长30个核苷酸或更短，更优选21至23个核苷酸，具有特征性的2个至3个核苷酸的3’突出端，该突出端由核糖核酸酶III切割更长的dsRNA而产生。见例如Tuschl T.(Nat Biotechnol.20：446-48，2002)。
小RNA分子的细胞内转录可以通过将siRNA模板克隆至RNA聚合酶III(Pol III)转录单位中来实现，其中所述转录单位正常编码核内小RNA(snRNA)U6或人RNAse P RNA H1。可以使用两种方法表达siRNA：一个实施方案中，组成siRNA双链体的有义和反义链通过各自的启动子转录(Lee等，Nat Biotechnol.20，500-505，2002)；在另一可选实施方案中，将siRNA表达为茎杆发夹RNA结构，该结构在细胞内加工后产生siRNA(Brummelkamp等，Science 296：550-553，2002)(在此并入作为参考)。
dsRNA/siRNA的最常见施用方式是先体外退火有义和反义RNA链之后递送至生物体。在一个可选实施方案中，可以通过在相同溶液中施用本发明的有义和反义核酸但在施用前不进行退火的方式实现RNAi，并且甚至可以通过在非常短的时限内在分开的运载体中施用有义和反义核酸来实现RNAi。此外，还提供编码VEGF-C的片段、同源物、衍生物和类似物的核酸分子或与VEGF-C核酸序列互补的反义核酸。
也可以通过设计调节目的基因在天然细胞和动物中的表达的新转录因子，实现遗传控制。例如，已经证明可以容易地改变Cys2-His2锌指蛋白(其通过锌指结构域结合DNA)的结构导致对不同靶序列的识别。这些人工锌指蛋白以高亲和力和低解离常数识别特定的靶位点，并且能够作为基因开关调节基因表达。使用已知方法，例如基于结构的模建和噬菌体展示文库的筛选的联合[Segal等，Proc Natl Acad Sci USA 96：2758-2763(1999)；Liu等，Proc Natl Acad Sci USA 94：5525-30(1997)；Greisman和Pabo Science 275：657-61(1997)；Choo等J Mol Biol 273：525-32(1997)]，本发明的具体靶序列的知识将利于工程化制造对该靶序列具有特异性的锌指蛋白。每一个锌指域通常识别3个或3个以上的碱基对。由于18个碱基对的识别序列的长度一般足以使该序列在任何已知基因组中都具有独特性，因此由6个串联重复的锌指组成的锌指蛋白预期将能保证对特定序列的特异性[Segal等，同上引文]。基于靶序列设计的人工锌指重复可以和激活或阻抑结构域融合以促进或抑制基因表达[Liu等，同上引文]。或者，锌指结构域可以和TATA盒结合因子(TBP)通过位于该锌指蛋白与该TBP之间的变化长度的接头区域融合，以产生转录激活物或阻遏物[Kim等，Proc Natl Acad Sci USA 94：3616-3620(1997)]。这些蛋白质和编码它们的多核苷酸具有在天然细胞、动物和人中体内调节表达的用途。可以通过转染表达新转录因子的构建体(基因治疗)，或通过引入该蛋白质，将此新的转录因子递送给靶细胞。也可以设计工程锌指蛋白质以便结合RNA序列从而作为反义或催化RNA方法的替代方案用于治疗[McColl等，Proc Natl Acad Sci USA 96：9521-6(1999)；Wu等，Proc Natl Acad Sci USA 92：344-348(1995)]。
E.抗体
由于能够容易地产生具有相对特异性的抗体，而且由于在采用抗体进行人类治疗的技术上的持续不断改进，可以使用抗体调节神经毡蛋白-VEGF-C相互作用以及VEGF-C的促有丝分裂活性。因此，本发明考虑使用对本发明目的多肽(尤其是神经毡蛋白、VEGF受体、和VEGF-C及VEGF-D蛋白)具有特异性的抗体(例如单克隆和多克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、双功能/双特异性抗体、人源化抗体、人抗体、和互补决定区(CDR)移植抗体，包括含有特异地识别本发明多肽的CDR序列的化合物)。优选抗体是根据WO93/11236(公布于1993年6月20日，并入此处作为参考)中描述的方法制备和鉴定的人抗体。本发明也提供抗体片段，包括Fab，Fab’，F(ab’)2和Fv。术语“对......具有特异性”，当用于描述本发明抗体时，指本发明抗体的可变区专门地识别和结合目的多肽(即，由于结合亲和力上的可测量差异，能够将目的多肽与相同家族的其它已知多肽区分开的能力，尽管家族成员之间可能存在局部的序列同一性、同源性和相似性)。可以理解，特异性抗体也可以通过抗体可变区外的且尤其是该分子恒定区内的序列相互作用而和其它蛋白质(例如，金黄色葡萄球菌(S.aureus)蛋白A或ELISA技术中的其它抗体)发生相互作用。测定本发明抗体的结合特异性的筛选试验是本领域熟知并常规实践的。对于此类试验的全面讨论，见Harlow等(编)，抗体：实验室手册(Antibodies A Laboratory Manual)；Cold Spring HarborLaboratory；Cold Spring Harbor，NY(1988)，第6章。本发明抗体可以使用任何本领域已知并常规实践的方法制备。
双特异性抗体是对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体，优选人或人源化抗体。在本案中，所述结合特异性之一可以针对NRP-2，另一针对NRP-2结合配偶体，并且优选针对细胞表面蛋白或受体或受体亚基，例如VEGFR-3。
一个实施方案中，使用与NRP-2和VEGFR-3两者结合的双特异性抗体调节由VEGF-C和VEGFR-3的相互作用导致的细胞生长、迁移或增殖。例如，可以将双特异性抗体施用给患有淋巴转移为特征的肿瘤或表达VEGF-C和VEGFR-3及NRP-2的其它肿瘤类型的个体。结合NRP-2和VEGFR-3的双特异性抗体阻断VEGF-C和VEGFR-3的结合，由此干扰VEGF-C介导的淋巴管发生和减缓肿瘤转移进程。另一实施方案中，使用结合NRP-2和VEGF-C的双特异性抗体实施相同操作，其中所述抗体的施用导致对可溶性VEGF-C的隔离以及阻止其结合VEGFR-3，从而有效地充当了VEGF-C介导的通过VEGFR-3的信号转导的抑制剂。
双特异性抗体可以使用文献中已经描述过的标准方法制备、分离和测试。见例如，Pluckthun & Pack，Immunotechnology 3：83-105(1997)；Carter等，J Hematotherapy，4：463-470，(1995)；Renner & Pfreundschuh，ImmunologicalReviews，1995，No.145，pp.179-209；Pfreundschun美国专利申请号5,643,759；Segal等，J.Hematotherapy，4：377-382(1995)；Segal等，Immunobiology，185：390-402(1992)；和Bolhuis等，Cancer Immunol.Immunother.，34：1-8(1991)，所有这些均完整地并入此处作为参考。
术语“双特异性抗体”指具有两个不同抗原结合位点(可变区)的单个双价抗体。如下述，双特异性结合剂一般由抗体、含有至少一个来源于抗体可变区的互补决定区的抗体片段或抗体类似物制成。这些双特异性抗体可以是常规双特异性抗体，其可以通过各种方式(Holliger，P.和Winter G.Current Opinion Biotechnol.4，446-449(1993))制备，例如利用化学方法、使用杂种杂交瘤、通过将此类双特异性抗体的编码序列连接入载体中并产生重组肽的方式或通过噬菌体展示来制备。双特异性抗体也可以是任何双特异性抗体片段。
在一个方法中，通过如下方式构建双特异性抗体片段：利用蛋白酶解作用将完整抗体转化为(单特异性)F(ab’)2分子，将这些片段分成Fab’分子，将Fab’分子与不同特异性重组为双特异性F(ab’)2分子(见例如，美国专利5,798,229)。
双特异性抗体可以通过如下方式产生：将两个不同的单克隆抗体(各包含两个相同的通过一个或多个二硫键连接的L(轻链)-H(重链)半分子)酶学转化成两个F(ab’)2分子，在还原条件下将每个F(ab’)2分子分成Fab’硫醇，将每个抗体的这些Fab’分子之一用巯基活化剂衍生化，使带有NRP-2特异性的活化的Fab’分子与带有NRP-2结合配偶体特异性的未活化的Fab’分子组合或反过来组合以获得期望的双特异性抗体F(ab’)2片段。
可以使用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶作为将抗体转化成其F(ab’)2分子的适宜酶。在一些情况下，胰蛋白酶或菠萝蛋白酶是适宜的。二硫键转化为游离SH基团(Fab’分子)可以通过还原性化合物，例如二硫苏糖醇(DTT)、巯基乙醇和巯基乙胺实现。根据本发明防止硫醇半分子重组的巯基活化剂是5’，5’-二硫代二(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、2，2’-二吡啶二硫化物、4，4’-二吡啶二硫化物或连四硫酸盐/亚硫酸钠(也见Raso等，Cancer Res.42：457(1982)，以及并入别处的参考文献)。
用巯基活化剂处理一般仅针对两个Fab’片段之一进行。原则上，将两个Fab’分子的哪一个转化成活化的Fab’片段(例如Fab’-TNB)没有差别。但是，一般地，用巯基活化剂修饰较不稳定的Fab’片段。在本情况中，带有抗肿瘤特异性的片段稍较不稳定，因此优选用于此程序中。在0℃至30℃的温度下活化的Fab’衍生物与第二Fab’分子的游离铰链-SH基团自发缀合产生双价F(ab’)2抗体。纯化的F(ab’)2抗体的产率是20-40％(从完整抗体开始)。
制备双特异性抗体的另一方法是将两个杂交瘤融合为一个杂种杂交瘤。本文中术语“杂种杂交瘤”用于描述两个B细胞杂交瘤的生产性融合。使用目前的标准技术，将两个产生抗体的杂交瘤融合产生子代细胞，然后选择维持着两套纯系型(clonotype)免疫球蛋白基因的表达的那些细胞。
为了鉴定双特异性抗体，可以使用诸如ELISA等标准方法，其中用特异地和亲本杂交瘤抗体之一相互作用但缺乏与两种抗体的交叉反应性的试剂包被微量滴定板的孔。此外，还可以将本发明与FACS、免疫荧光染色、独特型特异抗体、抗原结合竞争试验和抗体表征领域的其它常见方法联用，以鉴定优选的杂种杂交瘤。
本发明的双特异性抗体也可以通过将编码NRP-2结合特异性的基因与编码识别NRP-2结合配偶体(例如VEGF-C或VEGFR-3)的抗体链的至少结合区域的基因缀合而制备。将该构建体转染至宿主细胞(例如骨髓瘤)中，该宿主细胞组成性地表达相应的重链或轻链，由此使得能够重构具有对NRP-2以及对NRP-2结合配偶体的结合特异性的双特异性单链抗体、双链抗体(或其单链或双链片段例如Fab)。此基因构建体的构建和克隆可以采用标准操作完成。
双特异性抗体也可以通过噬菌体展示筛选方法，使用WO92/01047中公开的所谓分级双重组合方法(hierarchical dual combinatiorial approach)制备，在该方法中使用含有H或L链克隆的单菌落感染整个编码另一链(L或H)的克隆文库，根据噬菌体展示技术例如其中描述的那些，选择所得的双链特异性结合成员。该技术也公开在Marks等(Bio/Technology，1992，10：779-783)中。
本发明双特异性抗体片段可以施用于人类患者用于治疗。因此，一个实施方案中，以包含至少一种上述双特异性抗体片段以及一种或多种可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物制剂形式提供双特异性抗体。另一实施方案中，该化合物还包含与双特异性抗体缀合的抗肿瘤剂或细胞毒性剂。
也可以工程改造重组抗体片段，例如scFv，以组装成对不同靶抗原具有高结合亲和力和特异性的稳定多亚基寡聚体。此双链抗体(diabody)(二聚体)、三链抗体(triabody)(三聚体)或四链抗体(tetrabody)(四聚体)是本领域熟知的，并已经在文献中描述，见例如Kortt等，Biomol.Eng.2001年10月15；18(3)：95-108和Todorovska等，J Immunol Methods，2001年2月1日；248(1-2)：47-66。
除了制备单克隆抗体外，还可以使用开发用于制备“嵌合抗体”的技术，将小鼠抗体基因与人抗体基因拼接获得具有适当抗原特异性和生物学活性的分子(Morrison等，Proc Natl Acad Sci81：6851-6855，1984；Neuberger等，Nature312：604-608，1984；Takeda等，Nature314：452-454，1985)。
非人抗体可以通过本领域任何已知方法人源化。优选的“人源化的抗体”具有人恒定区，而该抗体的可变区或至少CDR来源于非人物种。将非人抗体人源化的方法是本领域熟知的(见例如美国专利号5,585,089和5,693,762)。一般地，人源化抗体在其来自非人来源的构架区中引入一个或多个氨基酸残基。可以使用例如Jones等[Nature 321：522-525(1986)]、Riechmann等[Nature，332：323-327(1988)]和Verhoeyen等[Science 239：1534-1536，(1988)]中所述的方法，通过将啮齿动物互补决定区(CDR)的至少一部分替代为人抗体的相应区域，实现人源化。制备工程抗体的许多技术描述在例如Owens和Young，J Immunol.Meth.168：149-165(1994)中。然后可以将向抗体构架区中引入进一步的改变以调节亲和性或免疫原性。
E.药物组合物的配制
VEGF-C产物优选在含有一种或多种可药用载体的组合物中施用。本发明所用药物载体包括可药用盐、尤其当化合物中存在碱性或酸性基团时。例如，当存在酸性取代基如-COOH时，铵盐、钠盐、钾盐、钙盐等被考虑为用于向生物学宿主给药的优选实施方案。当存在碱性基团(例如氨基或碱性杂芳基基团如吡啶基)时，酸式盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、乙酸盐、马来酸盐、双羟萘酸盐(pamoate)、磷酸盐、甲磺酸盐、对苯甲磺酸盐等，被认为是用于向生物学宿主给药的优选形式。
类似地，当存在酸性基团时，化合物的可药用酯(例如，甲基、叔丁基、新戊酰氧甲基、琥珀酰基等)被认为是化合物的优选形式，本领域已知这些酯可以改变可溶性和/或水解特征以用作持续释放制剂或前药制剂。
此外，一些化合物可以与水或普通有机溶剂形成溶质。这些溶质也在考虑之列。
可以直接使用药用VEGF-C产物组合物实践本发明的材料和方法，但在优选实施方案中，用可药用稀释剂、助剂、赋形剂或载体配制这些化合物。术语“药用的或可药用的”是指在例如通过口服、局部、透皮、胃肠外、吸入喷雾方式、经阴道、经直肠或通过颅内注射方式，施用给动物或人后不产生不良反应、过敏反义或其它不适当反应的分子实体和组合物。(本文所用术语胃肠外包括皮下注射、静脉内、肌内、脑池内注射或输注技术。通过静脉内、皮内、肌内、乳腺内、腹膜内、鞘内、眼球后、肺内注射的施用和在特定位点的手术植入也在考虑之列。)一般地，这还需要制备基本上无致热原以及其它可能有害于人或动物的杂质的组合物。术语“可药用载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。本领域熟知这些介质和试剂对于药物活性物质的应用。
上述含有VEGF-C产物的药物组合物可以是适宜口服使用的形式，例如片剂、锭剂、糖淀、水性或油性悬浮剂、分散性散剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆剂或酏剂。可以根据已知方法制备旨在用于口服使用的组合物，而且该组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂以便提供制药上精制适口的制剂。片剂可以含有与适宜片剂制备的无毒可药用赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙和磷酸钠；粘合剂，例如淀粉，明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未加包衣的或者可以通过已知技术加包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，由此提供较长期的持续作用。例如，可以使用时间延迟物质，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。也可以利用美国专利4,256,108；4,166,452和4,265,874描述的技术加包衣，以形成控释的渗透治疗剂。
口服使用的制剂还可以为硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂，例如硬脂酸钙、磷酸钙或高岭土混合；或者可以为软明胶胶囊形式，其中活性成分与水或油性介质，例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
水性悬浮剂可以含有与适宜制备水性悬浮剂的赋形剂混合的活性化合物。这些赋形剂有悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂可以是天然磷脂，例如卵磷脂，或者环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如，十七乙烯氧基鲸蜡醇，或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯失水山梨糖醇单油酸酯。水性悬浮剂还可以含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙基或正丙基酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂，以及一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。
油性悬浮剂可以通过将活性成分悬浮在植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰油中或悬浮在矿物油例如液体石蜡中配制。油性悬浮剂可以含有增稠剂例如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。甜味剂例如上述那些甜味剂和调味剂可以加入以提供适口的口服制剂。这些组合物可以通过添加抗氧化剂例如抗坏血酸来保存。
适于通过加入水制备水性悬浮剂的分散性散剂和颗粒剂提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的混合物。适宜的分散剂或润湿剂和悬浮剂的例子如以上已经提及的那些。也可以存在其它的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。
本发明药物组合物还可以为水包油乳剂形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或者矿物油，例如液体石蜡，或这些的混合物。适宜的乳化剂可以是天然胶，例如阿拉伯胶或黄蓍胶，天然磷脂，例如大豆卵磷脂，衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如失水山梨糖醇单油酸酯，和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯。乳化剂还可以含有甜味剂和调味剂。
糖浆剂和酏剂可以用甜味剂，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制。这些制剂还可以含有缓和剂、防腐剂和调味剂及着色剂。药物组合物可以是无菌可注射水性或油质悬浮液的形式。该悬浮剂可以根据已知现有技术使用上述已经提及的那些适宜的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌可注射制剂还可以是在无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的这些可接受的赋形药和溶剂中有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油也常规地用作溶剂或悬浮介质。对此目的，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的单或二甘油酯。此外，脂肪酸例如油酸也可以用于制备注射剂。
组合物还可以是用于直肠施用PTPase调节化合物的栓剂形式。这些组合物可以通过将所述药物与适宜的无刺激性赋形剂混合，其中所述赋形剂在平常温度下为固体但在直肠温度下为液体，由此将在直肠中熔化以释放药物。此类物质是例如可可脂和聚乙二醇。
适于注射使用的药物形式包括无菌水性溶液剂或分散剂和用于现用现制无菌注射溶液或分散剂的无菌粉末。在所有情况下，该形式都必须是无菌的，并且必须在一定程度上是液体以致存在可以易于注射的性质。该形式在制备和贮存条件下必须稳定，并且必须具有抗微生物例如细菌和真菌的污染作用的防腐性质。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、和液体聚乙二醇等)、它们的适宜混合物、和植物油的溶剂或分散介质。可以例如通过使用包衣，例如卵磷脂，在分散剂的情扩下通过维持所需的颗粒大小、以及通过使用表面活性剂，保持适当的流动性。可以通过各种抗细菌和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯类、氯代丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞等，防止微生物的作用。在许多情况下，优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。可以通过在组合物中使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，延长注射剂组合物的吸收。
G.施用和剂量
本发明一些方法包括向人或动物施用多肽的步骤。可以使用适当的可药用赋形药，例如可药用稀释剂、助剂、赋形剂或载体，以任何适宜的方式施用多肽。待根据本发明施用的组合物优选包含(除了多肽或载体之外)可药用载体溶液，例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖或常规用于递送治疗剂或成像剂的其它载体。
根据本发明进行的“施用”可以使用任何医学上接受的用于直接或间接地将治疗剂导入哺乳动物个体中的手段完成，所述手段包括但不限于注射(例如，静脉内、肌内、皮下、颅内或导管)；口服；鼻内或局部施用等等。对于向患有神经疾病的个体给药，可以考虑将细胞注射至特定哺乳动物的含有已知受影响的各种周围神经的区域中，或者注射至表现出累及脊髓或脑神经系统的哺乳动物的脊髓或脑中(Craig等，J Neurosci.1996，16：2649-58；Frisen等，CMLS Cell Mol.Life Sci.54：935-45，1998)。一个实施方案中，在需要治疗的损伤或染病组织部位，通过向该损伤部位直接注射或通过可以在内部递送制剂的持续递送或持续释放机制，施用组合物。例如，可以在植入损伤附近的本发明制剂中包括能够持续递送组合物(例如可溶性多肽、抗体或小分子)的生物可降解微球或囊或其它生物可降解聚合物结构。
可以将治疗组合物递送给患者的多个位点。此多重施用可以同时实施或者可以历经几个小时实施。在某些情况下，提供持续的治疗组合物流可能是有利的。其它治疗可以以周期为基础，例如每天、每周或每月施用。
用于给药的多肽可以和摄取或吸收增强剂配制在一起以增强效力。这些增强剂包括例如，水杨酸盐、甘氨胆酸盐/亚油酸盐、glycholate、抑酶肽、杆菌肽、SDS癸酸盐等。见例如Fix(J.Pham.Sci.85：1282-1285，1996)和Oliyai和Stella(Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32：521-544，1993)。
本发明考虑多种药剂的施用，例如VEGF-C或-D产物与第二药剂例如本文中描述的神经生长因子和/或神经治疗剂联合。本发明考虑，可以将这些药剂同时在相同制剂中给予。还考虑在分开的制剂中并行地施用这些药剂，其中所述并行指药物相互之间在30分钟内给予。
另一方面，在VEGF-C或VEGF-D产物施用前施用第二药剂。施用前指在用VEGF-C/D产物治疗前一周至不超过VEGF-C/D产物施用前30分钟的范围内施用第二药剂。还考虑在VEGF-C/D产物施用后施用第二药剂。随后施用用于描述在VEGF-C/D产物给药后30分钟至VEGF-C/D产物给药后不超过一周给药。
在给定剂量中肽的量将根据治疗待施用的个体的体积以及所治疗的疾病的特征而变化。在示例性治疗中，可能必须施用大约50mg/天、75mg/天、100mg/天、150mg/天、200mg/天、250mg/天、500mg/天或1000mg/天。这些浓度可以以单剂量形式或多个剂量形式给予。首先在动物模型然后在临床试验中的标准剂量-反应研究将揭示对于特定疾病状况和患者群体的最佳剂量。
也可以理解，如果传统治疗剂与本发明治疗剂联合施用，应改变给药方案。例如，可以考虑将传统神经治疗剂或神经生长因子的施用与本发明方法相联合的神经病治疗方法。
H.药盒
再一方面，本发明包括包含本发明一种或多种化合物或组合物的药物，在该药盒中本发明的组合物或组合物以利于它们用于实践本发明方法的方式包装。在一个最简单的实施方案中，药盒包括包装在容器例如密封瓶或器皿中的用于实施本发明方法的本文所述化合物或组合物(例如，用于施用给个体或用于在筛选试验中使用的多核苷酸或多肽)，以及附着于容器上或包括在包装内的用于描述所述化合物或组合物在实施本发明方法中的应用的标签。优选地，以单位剂量形式包装化合物或组合物。药盒还可以包括适用于根据优选给药路径施用组合物或适用于实施筛选试验的装置。
本发明的其它方面和细节将从如下旨在举例说明性而非限制性的实施例中得以彰显。
实施例1
VEGF-C同种型与神经毡蛋白-2和神经毡蛋白-1结合
以下实验证明VEGF-C同种型与神经毡蛋白家族成员，神经毡蛋白-2和神经毡蛋白-1，相互作用。
A.材料
为了研究神经毡蛋白-2与VEGF-C的结合，制备或从商业来源购买了如下构建体：
a)NRP-2/IgG表达载体的克隆。将hNRP-2的胞外域与人IgG1 Fc尾按如下方式按符合阅读框的方式克隆在pIgplus载体中。从几个IMAGEConsortium cDNA克隆(Incyte Genomics)组装全长NRP-2cDNA(SEQ ID NO：3)(图1)。所用的IMAGE克隆的标号是2A(GenBank Acc.No AA621145；Clone ID 1046499)、3(AA931763；1564852)、4(AA127681；490311)和5(AW296186；2728688)；这些克隆通过测序验证。Image克隆4和5由于可变剪接而不同，分别编码a17和a22同种型。首先将来自Image克隆3的BamHI-NotI片段克隆至pcDNA3.1z+载体(Invitrogen)中，然后加入来自克隆2A的KpnI-BglII片段和来自克隆3的BglII-BamHI片段，得到5’区(bp1-2188)。分开将来自克隆4和5的NotI-BamHI片段转移至pIgplus载体中，然后将来自pcDNA3.1z+载体的KpnI-NotI片段插入以得到编码hNRP-2胞外域/IgG融合蛋白(SEQ ID NO：3，位置1-2577)的表达载体。对所得载体中的NRP-2插入物测序。Image克隆3编码的序列与GenBank序列相差一个氨基酸(AAA 1804-1806 GAG|K602E)。然而，Image克隆3中的氨基酸序列与Chen等(Chen等，Neuron，19：547，1997)公布的最初序列相同。
b)VEGFR-3-Fc构建体，其中包含头3个免疫球蛋白样结构域的VEGFR-3胞外域部分(SEQ ID NO：32，氨基酸1-329)与人IgG1的Fc部分融合[见Makinen等，Nat Med.，7：199-205(2001)]。全长VEGFR-3 cDNA和氨基酸序列显示在SEQ ID NO：31和32中。
c)NRP-1-Fc构建体，其中鼠源NRP-1的胞外域部分(SEQ ID NO：5的碱基对248-2914)与人IgG1的Fc部分融合(Markinen等，J.Biol.Chem 274：21217-222，1999)；和
d)在pREP7骨架中编码VEGF165(GenBank登录号M32997)或全长VEGF-C(SEQ ID NO：24)的表达载体近来已有描述(Olofsson等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：2576-81，1996；和Joukov等，EMBO J15：290-298，1996)。
B.VEGF-C与NRP-2共免疫沉淀
使用FUGENETM6转染试剂(Roche Molecular Biochemicals)，将NRP-2、NPR-1和VEGFR-3pIgplus融合构建体转染至293T细胞。在补加了10％胎牛血清(Gibco BRL)、谷氨酰胺和抗生素的Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基中培养细胞。培养基在转染后48小时用含有0.2％BSA的DMEM更换，并在20小时后收集。
为了产生生长因子，用编码VEGF165、前VEGF-C原的表达载体或空载体(模拟品)转染293EBNA细胞。转染后36小时，首先细胞在无甲硫氨酸和半胱氨酸的MEM(Gibco BRL)中孵育45分钟，在含有放射性标记的甲硫氨酸和半胱氨酸的补加100毫居[mCi]/ml Pro-mix[35S](Amersham)的相同培养基中代谢标记6-7小时(1mCi＝37kBq)。
对于免疫沉淀对照，1ml标记的培养基与MAB 293单克隆抗VEGF-Ab(R&D systems)或抗VEGF-C的兔抗血清882(Joukov等，EMBO J 16：3898-3911，1997)旋转下+4℃孵育2小时。用冰冷PBS-0.5％Tween 20洗涤免疫沉淀物2次，在Laemmli样品缓冲液中加热，15％SDS PAGE中电泳。干燥凝胶，曝光柯达Biomax MR胶片。
对于结合实验，首先来自模拟品或VEGF-C转染的细胞的标记上清液与VEGF抗体(R & D Systems)免疫沉淀以耗竭内源性VEGF。4ml含有hNRP-2a17-IgG或1ml含有VEGFR-3-IgG或NRP-1-IgG融合蛋白的培养基与1ml含有生长因子的培养基(模拟品、VEGF或VEGF-C)在结合缓冲液(0.5％BSA，0.02％Tween 20)中孵育2小时，加入蛋白A-Sepharose，孵育过夜。然后用冰冷结合缓冲液洗涤样品一次，用PBS洗涤三次，进行15％SDSPAGE。通过化学发光(ECL)检测到放射性标记的VEGF-C多肽。
结果显示，29kD同种型和21-23kD VEGF-C同种型(作为异二聚体)均结合NRP-2，而仅29kD形式结合NRP-1。VEGFR-3与VEGF-C的结合用作本试验中VEGF-C结合的阳性对照。先前已经证明，肝素有力地增加VEGF与NRP-2的结合(Gluzman-Poltorak等，J.Biol.Chem.275：18040-045，2000)。将肝素加入试验混合物中显示出，VEGF165与NRP-2的结合是肝素依赖性的，而VEGF165与NRP-1的结合则独立于肝素结合，并且肝素的存在对VEGF-C与其任何受体的结合无影响。
C.使用天然表达神经毡蛋白受体的细胞的基于细胞的试验
可以通过用天然表达神经毡蛋白受体(尤其是NRP-2)的细胞替代转染的293EBNA细胞，修饰前面的实验。尤其考虑使用表达神经毡蛋白受体的神经细胞的原代培养物，例如，来源于胚胎的培养的小脑颗粒细胞。此外，可以使用NRP受体特异性抗体鉴定表达NRP受体的其它细胞(例如，参与脉管系统的细胞)，例如人微脉管内皮细胞(HMVEC)、人皮下脂肪垫微脉管细胞(human cutaneous fat pad microvascular cell)(HUCEC)。
实施例2
神经毡蛋白-2与VEGFR-3相互作用
近来的结果指出，NRP-1是VEGF165结合的一个共受体，与VEGFR-2形成复合物，该复合物导致与VEGF165与单独VEGFR-2的结合相比，VEGF165通过VEGFR-2的信号转导增强，由此增强对该配体的生物学反应(Soker等，Cell92：735-45，1998)。相似的现象可以应用于VEGFC通过可能的VEGFR-3/NRP-2受体复合物的信号转导。
A.结合试验
如实施例1中所述克隆NRP-2(a22)表达载体，并在3’端添加可检测标签。对于3’端的构建，通过PCR构建Not I-BamHI片段(克隆5)，从而向3’端引入V5标签(GKPIPNPLLGLDST)(SEQ ID NO：33)和终止密码子。为了获得编码全长hNRP-2(a22)蛋白质的表达载体，将此3’端转移至含有5’片段的载体中。所得克隆称作V5 NRP-2。
为了确定VEGFR-3和NRP-2的相互作用，使用6μl FUGENE TM6(Roche Molecular Biochemicals，Indianapolis，Indiana)和2μg DNA，用V5NRP-2构建体或VEGFR-3转染人胚胎肾细胞(293T或293EBNA)的10cm板。在补加了10％胎牛血清(Gibro BRL)、谷氨酰胺和抗生素的Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基中培养细胞。对于模拟转染，使用2μg空载体。对于单受体转染，以1比1的比率，使用VEGFR3-myc/pcDNA3.1(Karkkainen等，Nat.Genet.25：153-59，2000)或NRP-2(a22)/pcDNA3.1z+和空载体。也以1比1的比率进行VEGFR-3/NRP-2共转染。24小时后，使293EBNA细胞饥饿过夜，并使用300ng/ml ANACVEGF-C(在巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)中表达；(Joukov等EMBO J 16：3898-3911，1997))刺激10分钟。然后用含有钒酸盐(100μM)和PMSF(100μM)的冰冷PBS洗涤细胞2次，在含有2mM钒酸盐、1mM PMSF、0.07U/ml抑酶肽和4μg/ml亮抑酶肽的二聚体化裂解缓冲液(20mM HEPES pH7.5，150mM NaCl，10％甘油，1％Triton X-100，2mM MgCl2，2mM CaCl2，10μg/ml牛血清白蛋白(BSA))中裂解。19,000g离心10分钟以澄清裂解物，在4℃与VEGFR-3的抗体(9d9F；(Jussila等，Cancer Res.58：1599-1604，1998))或V5抗体(Invitrogen)孵育5小时。然后免疫复合物与蛋白A-Sepharose(Pharmacia)在+4℃温育过夜，用无BSA的二聚体化裂解缓冲液洗涤免疫沉淀4次，样品在还原条件进行7.5％SDS-PAGE。使用半干转移装置，将蛋白转移至Protran硝化纤维素滤膜(Schleicher & Schuell)。用5％脱脂奶粉在TBS-T缓冲液(10mM Tris pH7.5，150mM NaCl，0.1％Tween 20)封闭后，滤膜与V5抗体一起孵育，之后与HRP缀合的兔抗小鼠免疫球蛋白(Dako)孵育，使用增强化学发光(ECL)观察。
转染至293T细胞中的VEGFR-3和NRP-2构建体的共沉淀说明，NRP-2与VEGFR-3当在相同细胞中共表达时将发生相互作用。向细胞培养基中加入VEGF-C后的免疫沉淀显示，NRP-2/VEGFR-3相互作用不依赖于VEGF-C配体的存在，提示这些受体在体内可能天然地在无VEGF-C的情况下缔合。此发现对脉管发生过程中VEGF-C的结合和活性可能有着巨大的意义。VEGF-C，一种促进淋巴脉管系统(lymphatic vasculature)生长和发育的必需分子，也高度参与癌细胞通过淋巴系统的转移以及显然地至少一些肿瘤的新脉管化(见国际专利申请WO00/21560)。神经毡蛋白与VEGF-C的此新相互作用提供了通过VEGF-C与VEGFR-3结合造成的对淋巴细胞迁移的抑制、特异地阻断此淋巴管向实体肿瘤中生长的方法。
实施例3
神经毡蛋白抑制VEGF-C与VEGFR-3结合
VEGF-C和神经毡蛋白受体分子间的结合亲和性提示VEGF-C诱导的VEGFR-3受体信号转导的调节剂可以作为治疗剂，以调节，即刺激或抑制VEGF-C受体介导的生物学过程。以下实施例设计用于提供有关此治疗概念的证据。
A.体外无细胞试验
为了证实神经毡蛋白-1-Fc和神经毡蛋白-2-Fc对VEGF-C刺激作用的抑制效应，将VEGF-C蛋白质与标记物例如生物素分子融合，首先与神经毡蛋白-1-Fc、神经毡蛋白-2-Fc、VEGFR-2-Fc和VEGFR-3-Fc以各种摩尔比一起孵育，然后加至预先用1μg/ml VEGFR-3和VEGFR-2包被的微量滴定板中。用1％BSA/PBS-T封闭后，将新鲜的标记的VEGF-C蛋白或VEGF-C/受体-Fc混合物加至该微量滴定板，4℃过夜。之后，用PBS-T洗涤板子，加入1∶1000亲和素-HPR。通过加入ABTS底物(KPL)检测结合的VEGF-C蛋白。在有和无可溶性神经毡蛋白或可溶性VEGFR存在时分析结合的标记的VEGF-C，并评价结合抑制百分数，以及神经毡蛋白对VEGFR-2或VEGFR-3包被的微量板的结合的影响。在一个相关变化方案中，用VEGF-D替代VEGF-C实施该试验。
B.体外基于细胞的试验
如上所述使用VEGF-C接触在细胞表面天然或重组表达NRP-2和VEGFR-3受体的细胞。例如，可以使用如上列出的通过重组方式改变而瞬时或稳定地表达神经毡蛋白和VEGFR-3的293EBNA或293T细胞。几种天然的内皮细胞表达这两种受体，因此也可以使用，这些细胞包括但不限于人微脉管内皮细胞(HMEC)和人皮下脂肪垫微脉管细胞(HUCEC)。
为了评价VEGFR-3的自身磷酸化，用FUGENE TM6转染试剂(RocheMolecular Biochemicals)和编码受体构建体(VEGFR-3或VEGFR-3-myc标签和/或神经毡蛋白-V5标签)的质粒DNA或者空pcDNA3.1z+载体(Invitrogen)，转染培养在补加了10％胎牛血清(GIBCO BRL)、谷氨酰胺和抗生素的Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基(DMEM)中的293T或293EBNA人胚胎肾细胞。对于刺激试验，在含有0.2％BSA的无血清培养基中使293EBNA细胞单层饥饿过夜(转染后36小时)。然后，为了测定对VEGF-C/VEGFR-3结合的抑制，在有或无神经毡蛋白-Fc存在下，在+37℃用300ng/ml重组DNDC VEGF-C(Joukov等，EMBO J.16：3898-3911，1997)刺激293EBNA细胞10分钟。然后用含有2mM钒酸盐和2mM苯基甲磺酰氟(PMSF)的冷磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞两次，在含有2mM钒酸盐、2mM PMSF、0.07％U/ml抑酶肽和4mg/ml亮抑酶肽的PLCLB缓冲液(150mMNaCl，5％甘油，1％Triton X-100，1.5M MgCl2和50mM Hepes，pH7.5)中裂解。裂解物以19000g离心10分钟，上清液与2μg/ml单克隆抗VEGFR-3抗体(9D9f9)(Jussila等，Cancer Res，58：1599-1604，1998)或与抗特异标签表位抗体(1.1mg/ml抗V5抗体(Invitrogen)或5μg/ml抗Myc抗体(BabCO))在冰上孵育2小时。免疫复合物与蛋白A-Sepharose(Pharmacia)一起在+4℃旋转孵育45分钟，用冷PLCLB缓冲液(2mM钒酸盐，2mM PMSF)洗涤Sepharose珠3次。通过7.5％SDS-PAGE分离结合的多肽，使用半干转移装置将其转移至Protran硝化纤维素滤膜(Schleicher & Schuell)。用5％BSA在TBS-T缓冲液(10mM Tris pH7.5，150mM NaCl，0.1％Tween 20)中封闭后，用磷酸酪氨酸特异性一抗(Upstate Biotechnology)，然后用生物素化的山羊抗小鼠免疫球蛋白(Dako)及生物素-链霉亲和素HRP复合体(Amersham)染色。通过增强化学发光(ECL)观察磷酸酪氨酸特异性条带。为了分析样品中是否存在VEGFR-3，在100mM 2-巯基乙醇、2％SDS、62.5mM Tris-HCl pH6.7中不时搅拌下+55℃剥离滤膜上的探针30分钟，用9D9f9抗体和HRP缀合的兔抗小鼠免疫球蛋白(Dako)染色以检测抗原。VEGFR-3自磷酸化的减少说明神经毡蛋白-Fc成功地介导了对VEGF-C/VEGFR-3结合的抑制。
在无血清Ham氏F-12营养混合物(GIBCO)(含有7％胎牛血清(FCS))中天然分泌至PC-3前列腺腺癌细胞系(ATCC CRL 1435)的条件培养基中的VEGF-C蛋白(美国专利6,221,839)可以用于体外激活VEGFR3表达细胞。对于体外试验目的，可以将细胞重新接种并培养在该培养基中，随后将该培养基改变为无血清培养基。如先前实验所显示的，用50微升与CNBr-活化的Sephorase CL-4B(Pharmacia；大约1mg VEGFR-3EC域/ml Sepharose树脂)偶联的VEGFR-3胞外域预先处理此浓缩的PC-3条件培养基，完全地消除VEGFR-3的酪氨酸磷酸化(美国专利6,221,839)。在一个相关实验中，可以用与Sepharose偶联的神经毡蛋白组合物或对照Fc预先处理该PC-3条件培养基。可以裂解细胞，使用抗VEGFR-3抗血清进行免疫沉淀，并使用先前描述的抗磷酸酪氨酸抗体通过Western印迹分析。由于神经毡蛋白对VEGF-C的隔离导致的对VEGF-C结合和下游VEGFR-3自磷酸化的抑制百分数可以在此更具有生物学相关性的情况下测定。
以上实验也可以使用相关的脑信号蛋白蛋白联合本发明的神经毡蛋白组合物进行，以确定神经毡蛋白受体的另一天然配体在封闭VEGF-C/神经毡蛋白受体相互作用上的效果。如果VEGF-C和脑信号蛋白通过神经毡蛋白受体上的相同位点与神经毡蛋白受体结合，则VEGF-C与VEGFR-3的结合以及VEGFR-3的自磷酸化将由于未结合至神经毡蛋白-Fc上的VEGF-C的增加而随后增加。然而，如果脑信号蛋白与VEGF-C结合神经毡蛋白受体上的不同位点并且相互不抑制对方的结合，则VEGF-C与VEGFR-3的结合量将与没有脑信号蛋白(即，单独使用神经毡蛋白-Fc)时的结合量相当。该试验还可以进一步阐释VEGF-C/神经毡蛋白的相互作用。
上述体外无细胞试验和基于细胞的试验也可以使用推测的调节剂化合物，例如影响VEGF-C分泌的细胞因子(TNFa，TGFb，PDGF，TGFa，FGF-4，EGF，IL-1a，IL-1b，IL-6)来实施，以确定神经毡蛋白组合物在VEGF-C调节剂——在炎症和肿瘤生长状况下具有生物学活性的调节剂——存在时封闭VEGF-C活性的效力，从而对神经毡蛋白组合物和目前的实验癌症治疗剂进行比较。
实施例4
神经毡蛋白-2/VEGF-C结合对VEGF-C相关生物学功能的影响
VEGF-C与许多有关淋巴管发生和内皮细胞生长的功能密切相关。可以使用如下试验研究体内NRP-2对这些VEGF-C功能的影响：
A.细胞迁移试验
例如，人微脉管内皮细胞(HMVEC)表达VEGFR-3和NRP-2，可以使用这些细胞研究可溶性和膜结合型神经毡蛋白受体对这些细胞的影响。由于神经毡蛋白和VEGF/VEGFR的相互作用被认为在细胞迁移中起作用，故可以通过利用HMVEC或其它适宜细胞的细胞迁移试验，阐明神经毡蛋白分子的刺激或抑制作用。
使用改良的Boyden室试验，用50μg/ml纤连蛋白(Sigma)、0.1％明胶在PBS中室温包被聚碳酸酯滤膜孔(Transwell，Costar，8微米孔)30分钟，之后在DMEM/0.1％BSA中37℃平衡1小时。将天然表达VEGFR-3和神经毡蛋白受体的HMVEC(第4-9代传代细胞，1×105个细胞)或重组表达VEGFR-3和/或NRP-2的内皮细胞系接种在滤膜孔的上方室中，在存在变化浓度的神经毡蛋白-1-Fc、神经毡蛋白-2-Fc和VEGFR-3-Fc蛋白下，允许细胞向滤膜的下侧、朝着含有补加了前VEGF-C原或酶学加工的VEGF-C的无血清培养基的孔的底部室迁移。5小时后，用棉拭子除去贴在transwell顶部的细胞，固定并染色向滤膜下侧迁移的细胞。为了定量细胞数量，每个滤膜计数6个随机选择的400X显微镜视野。
在另一变化方案中，使用稳定转染了构建体(例如先前描述的那些构建体)以表达NRP-2、VEGFR-3或NRP-2和VEGFR-3两者(即，PAE/NRP-2、PAE/VEGFR-3、或PAE/NRP-2/VEGFR-3)的猪主动脉内皮细胞(PACE)实施上述迁移试验。PACE使用Soker等(Cell92：735-745，1998)描述的方法进行转染。将转染的PAEC(1.5×104个细胞，在补加了0.1％BSA的无血清F12培养基中)接种在如上述用纤连蛋白准备的Boyden室的上方孔中。向下方室的孔中加入递增浓度的VEGF-C或VEGF-D，以诱导内皮细胞迁移。4小时后，通过相差显微镜定量迁移通过滤膜的细胞数量。
NRP-2/VEGFR-3双转染子比NRP-2或VEGFR-3单转染子在迁移和趋化性上的增加说明，神经毡蛋白-2的存在增强VEGF-C或VEGF-D通过VEGFR-3传递信号并刺激下游生物学效应(尤其是，细胞迁移，以及可能地，血管发生(angiogenesis)或淋巴管发生(lymphangiogenesis))的能力。
此外，还可以使用猪主动脉内皮细胞迁移试验鉴定NRP-2/VEGFR-3/VEGF-C在内皮细胞上介导的刺激作用的调节剂。在向Boyden室的下方孔添加组合物，例如可溶性受体肽、蛋白质或其它小分子(例如，单克隆和双特异性抗体或化学化合物)以及VEGF-C配体后，评价PAE/NRP-2/VEGFR-3表达细胞的迁移。由于任何肽、蛋白质或小分子的加入导致的迁移减少，将该化合物鉴定为NRP-2/VEGFR-3介导的趋化性的抑制剂。
B.有丝分裂原试验
在存在或不存在VEGFR-C多肽和该相互作用的潜在调节剂，例如脑信号蛋白，更尤其是Sema3F，以及已知上调VEGF-C活性的细胞因子(可以包括但不限于TGF-β，TNF-α，IL-1α和IL-1β、IL-6和PDGF)的情况下，培养单独表达VEGFR-3、单独表达NRP-2或表达VEGFR-3和NRP-2两者的胚胎内皮细胞，以便使用任何细胞生长或迁移试验，例如测量细胞数量增加的试验或测量氚化胸苷掺入的试验分析对细胞生长的影响。见例如，Thompson等，Am J.Physiol.Heart Cir.Physiol.281：H396-403(2001)。
实施例5
脉管发生试验
持续地长期感到需要可以刺激脉管发生，例如促进伤口愈合、或促进成功的组织移植和移植术的其它药剂，以及抑制脉管发生(例如，以抑制肿瘤生长)的药剂。而且，不同的脉管发生刺激剂和抑制剂可以协同地通过相同或不同受体以及对循环系统的不同部分(例如动脉或静脉或毛细血管；血管的或淋巴的)起作用。脉管发生试验可以用于测量神经毡蛋白/VEGF-C相互作用单独地或与其它生脉管因子和抗脉管发生因子联合对脉管发生过程的影响，以确定涉及神经毡蛋白和其它调节剂的优选联合疗法。示例性操作程序包括如下程序：
A.体外脉管发生试验
1.出芽试验(sprouting assay)
在胶原包被的珠子(Pharmacia)上培养HMVEC细胞(第5-9代传代细胞)5-7天至汇合。在含有5.5mg/ml纤连蛋白(Sigma)、2单位/ml凝血酶(Sigma)、DMEM/2％胎牛血清(FBS)以及如下待测蛋白和对照蛋白的凝胶基质中接种这些珠子：20ng/ml VEGF，20ng/ml VEGF-C，或生长因子加10μg/ml神经毡蛋白-2-Fc，以及生脉管因子和Fc融合蛋白的几种组合。每隔2天向明胶基质加入补加了待测蛋白和对照蛋白的无血清培养基，计数并评价超过珠子长度的内皮细胞芽的数量。
2.迁移试验
还可以使用前述transwell迁移试验，联合此出芽试验以确定本发明神经毡蛋白组合物对VEGF-C激活剂和细胞功能的相互作用的影响。分析在应答本发明神经毡蛋白组合物或者该组合物与已知生脉管剂或抗脉管发生剂的联合的情况下VEGF-C对细胞迁移的影响。在VEGF-C刺激作用后由于存在神经毡蛋白所导致的细胞迁移减少，说明本发明提供了抑制脉管发生的方法。
该试验也可以使用天然表达VEGFR-3或VEGFR-2的细胞，例如优先地表达VEGFR-2的牛内皮细胞来完成。可以使用展示出特定受体的天然或瞬时表达细胞确定本发明神经毡蛋白组合物可以用于优选治疗涉及VEGFR-3或VEGFR-2异常活性的疾病。
B.体内脉管发生试验
1.尿囊绒膜(CAM)试验
打开三日龄受精的白色Leghorn鸡蛋，将带有完整卵黄的鸡胚细心地放入20×100mm塑料培养皿。37℃在3％CO2中孵育6天后，在各胚胎的CAM上移植一个甲基纤维素园片——其中该园片含有VEGF-C以及神经毡蛋白组合物、VEGFR-3和神经毡蛋白-2及VEGFR-3复合物的各种组合并在尼龙网(3×3mm)上干燥——以确定神经毡蛋白对脉管发育的影响及其在促进或抑制脉管形成方面的潜在用途。通过使10微升0.45％甲基纤维素(在H2O中)脱水，制备所述的尼龙网片。4-5天孵育后，通过实体镜检查胚胎和CAM在植入片的区域中新血管和淋巴管的形成。含有PBS的甲基纤维素片用作阴性对照。识别血管和淋巴管细胞表面分子的抗体用于进一步表征这些脉管。
2.角膜试验
用改良的vor Graefe白内障刀在雄性5至6周龄C57BL6/J小鼠的双眼中产生角膜微袋。向每个微袋中植入NCC型Hydron聚合物(IFN Science，New Brunswick，NJ)包被的蔗糖硫酸铝(Bukh Meditec，Copenhagen，Denmark)微球(0.35×0.35mm)，该微球含有单独的或与如下物质联合的各种浓度的VEGF分子(尤其是VEGF-C或VEGF-D)：i)已知调节脉管生长的因子(例如，160ng VEGF或80ng FGF-2)；ii)上述神经毡蛋白多肽；或iii)神经毡蛋白多肽与天然神经毡蛋白配体例如脑信号蛋白，例如Sema-3C和Sema3F的联合。将微球放置在距离角膜缘0.6-0.8mm处。植入后，给眼睛施用红霉素/眼药膏。利用裂隙灯生物显微镜检查眼3-12天。测量脉管长度和周围新脉管化和淋巴管发生的时刻。此外，将眼切片并免疫染色血管和/或淋巴标志(LYVE-1[Prevo等，J.Biol.Chem.，276：19420-19430(2001)]，podoplanin[Breiteneder-Geleff等，Am.J.Pathol.154：385-94(1999)]和VEGFR-3)以进一步表征受到影响的脉管。
实施例6
体内肿瘤模型
有越来越多的证据证明神经毡蛋白受体可能在肿瘤进程中起重要作用。在几种肿瘤细胞系中发现了神经毡蛋白-1受体，而且将NRP-1转染至AT2.1细胞中可以促进肿瘤生长和脉管化(Miao等，FASEB J.14：2532-39，2000)。此外，对类癌瘤——消化道中衍生自神经内分泌细胞的缓慢发育肿瘤——中神经毡蛋白-2表达的研究指出，神经毡蛋白-2实际上在肿瘤周围的正常组织中表达，但不在肿瘤中心本身表达(Cohen等，Biochem.Biophys.Res.Comm.284：395-403，2001)，而且已经确立神经内分泌细胞分泌VEGF-C、VEGF-D并在其细胞表面表达VEGFR-3(Partanen等，FASEB J 14：2087-96，2000)。肿瘤中和肿瘤周围与VEGF分子(常常与脉管密度和肿瘤进展有关)结合的这些神经毡蛋白的差异表达水平可能指示肿瘤进展或消退。
A.异位肿瘤植入(ectopic tumor implantation)
在6至8周龄裸鼠(nu/nu)(SLC，Shizuoka，日本)的右肋腹上皮下移植0.1ml磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的C6大鼠成胶质细胞瘤细胞或PC-3前列腺癌细胞。将前面列出的神经毡蛋白多肽以各种浓度和剂量方案施用给这些动物。测量肿瘤的2维大小，并使用公式——宽2×长/2——计算肿瘤体积。14天后，人为处死小鼠并尸检，以评价响应神经毡蛋白多肽对VEGF-C的抑制作用而致的肿瘤脉管化数量和生理。
明显地，该试验也可以使用其它肿瘤细胞系植入裸鼠或其它小鼠株系中进行。特别考虑使用植入LLC肺癌细胞和B16黑素瘤的野生型小鼠。
B.同位肿瘤植入(orthotopic tumor implantation)
将PBS中大约1×107MCF-7乳房癌细胞接种在切除卵巢的SCID小鼠或裸鼠的第二(腋下)乳腺的脂肪垫中，所述小鼠皮下带有含0.72mg 17β-雌二醇的60天缓释小球(Innovative Research of America)。卵巢切除术和小球的植入在肿瘤细胞接种前4-8天进行。将前述神经毡蛋白多肽和VEGF-C多肽以及脑信号蛋白(尤其是Sema3C和Sema3F)以不同浓度和剂量方案施用给这些动物。测量肿瘤的2维大小，并使用公式——宽2×长/2——计算肿瘤体积。14天后，人为处死小鼠并尸检，以评价肿瘤脉管化的数量和生理。
实施相似操作方案，其中将PC-3细胞植入雄性小鼠前列腺。
C.淋巴转移瘤模型
VEGF-C/VEGFR3相互作用常常与成年组织中淋巴管的组构(organization)和生长相关，因此，神经毡蛋白受体在这些部位的存在可能涉及一些癌症的转移性质。以下方案用于说明神经毡蛋白多肽，尤其是神经毡蛋白-2多肽，或其片段抑制淋巴转移的能力。
将MDA-MB-435乳房癌细胞注射至无胸腺雌性8周龄裸鼠的第二乳腺脂肪垫两侧。这些细胞常常经12周转移至淋巴结。开始，可以使用之前确定的神经毡蛋白-VEGF-C结合的调节剂(尤其考虑脑信号蛋白)，评价神经毡蛋白-2与VEGF-C和VEGFR3结合在肿瘤转移中的作用。与NRP-2阻断相关的肿瘤转移减少说明NRP-2在肿瘤转移中具有关键作用。然后，将之前(通过本发明)确定的神经毡蛋白-VEGF-C结合的调节剂以各种浓度和剂量方案施用给这些动物。而且，可以联合施用神经毡蛋白-2多肽与其它物质以减少肿瘤转移。见，例如，国际专利公布号WO00/21560，完整并入此处作为参考。12周后处死小鼠，组织学分析淋巴结。由于施用神经毡蛋白组合物导致的淋巴管和肿瘤扩散的减少说明本发明可以作为治疗化合物抑制肿瘤转移。
实施例7
利用胶原排斥试验(Collagen repulsion assay)在生长锥萎陷方面评价VEGF-C
已经提出，中枢神经系统中脑信号蛋白的组成性表达是该区域中缺乏神经再生的主要因素。神经损伤，例如坐骨神经压伤后周围神经的再生可以通过损伤后脑信号蛋白-3A表达的立即下调来实现。损伤后大约36天Sema3A表达返回基线水平，但是该持续期的降低脑信号蛋白表达使得可以在脑信号蛋白活性造成再生停止前周围神经生长并再生进入损伤区域(综述见Pasterkamp和Verhaagen，Brain Res.Rev.35：36-54，2000)。尽管许多脑信号蛋白在CNS和PNS中广泛表达，但脑信号蛋白-3F，神经毡蛋白-2的主要配体，显示出在人脑中广泛分布，并且甚至已经发现其在阿尔茨海默氏病患者的某些脑区中过表达(Hirsch等，Brain Res.823：67-79，1999)。新发现的VEGF-C结合NRP-2的相互作用可以提供用于在许多神经变性病例如阿尔茨海默氏病或黄斑变性中特异抑制sema-3F活性在终止神经再生方面的作用的因子。而且，VEGF-C的明显神经营养作用(例如，见实施例8中的描述)可以协同地与sema-3F抑制活性联合以产生有益结果。
根据Chen等(Neuron，25：43-56，2000)和Giger等(Neuron，25：29-41，2000)的方法从E13.5或E15.5-17.5大鼠或小鼠胚胎中解剖出颈上神经节(SCG)，用于胶原排斥试验中。解剖后，在培养基[70∶25的OPTI-MEM和F12，补加1％P/S，Glutamax(Gibco)，5％FCS和40mM葡萄糖]中将后脑-中脑汇合处外植块与经重组修饰以表达碱性磷酸酶缀合的Sema3F的COS细胞或模拟转染的COS细胞在胶原基质中共同培养48小时。使用Giger等(Neuron，25：29-41，2000)给出的方案定量神经突的延伸，其中该方案可以简要地描述为：测定在培养基质中超过规定点的神经突延伸的百分数。可以在存在变化浓度的VEGF-C组合物时测量神经突的延伸并与不存在VEGF-C组合物时比较，可以评价由于VEGF-C加入培养基和封闭Sema3F与神经毡蛋白-2的相互作用所导致的神经突延伸的随后增加。
从本发明所致的Sema3F抑制作用的效果可以外延至几种由于脑信号蛋白的存在抑制了神经元再生的疾病，例如颅神经损伤后，以及可能地阿尔茨海默氏病患者脑中的结疤。
以上以及之后的实施例的变化方案将是明显的，并且被认为是权利要求中发明的方面。例如，前述实施例中描述的材料和方法可以用于和容易地作适应性修改以用于筛选本文所述多肽相互作用的新调节剂，以及用于阐明这些新调节剂在基于细胞的系统中和体内的效果。换言之，实施例的材料和方法中的操作程序可以用于鉴定调节剂并根据体外和体内活性筛选调节剂。
例如，实施例1描述研究VEGF-C与神经毡蛋白结合的实验方案。可以实施相似的结合实验，其中向结合实验中添加一或多个浓度的被测药剂，以确定该被测药剂是否调节(增加或减少)VEGF-C和神经毡蛋白之间的可测量结合。实施例2描述研究VEGFR3与神经毡蛋白结合的实验方案。可以实施类似的结合实验，其中在反应物中包括被测药剂，以确定该被测药剂是否调节(增加或减少)VEGFR-3和神经毡蛋白之间的可测量结合。在最初结合试验中鉴定为调节剂的被测药剂可以包括在随后实施例提供的基于细胞的和体内的试验中，以测量该被测药剂对表达目的受体的细胞(例如VEGFR-3或神经毡蛋白表达细胞)或对生物学系统和生物体的生物学作用。
类似地，多个实施例描述在实验中使用可溶性形式的神经毡蛋白受体或其它蛋白质进一步证实本文首次描述的分子间结合关系。这些实验也说明，可以将与配体/受体对或受体/共受体对之一或两个成员结合的分子加入系统以调节(尤其是抑制)该结合对相互作用的能力。例如，在实施例3中使用可溶性NRP分子调节(抑制)VEGF-C或VEGF-D与VEGFR-3或VEGFR-2的结合。破坏VEGF-C或VEGF-D与其各自VEGFR受体的结合，在治疗多种以不期望的配体介导的VEGFR-3或VEGFR-2刺激作用为特征的疾病方面具有实际用途。可以实施相似的结合实验，其中用被怀疑调节相同结合相互作用的被测药剂替代可溶性NRP分子。以此方式，可以使用实施例的材料和方法鉴定和验证被测药剂的治疗价值。
实施例8
VEGF-C-/-动物的表型
为了分析VEGF-C在淋巴管发生和神经元生长中的作用，通过用LacZ基因置换VEGF-C第一编码外显子，制备VEGF-C基因缺陷小鼠。
A.产生VEGF-C敲除小鼠：
从129Sv小鼠基因组文库以5’和3’区段形式分离VEGF-C基因。将2.9kbBamHI-PstI片段平末端克隆至pNTPloxP靶向载体的BamHI位点，以制备3’臂。利用HindIII和(部分)BsmBI消化切下3.3kb5’臂，将其插入pSDKlacZ质粒的LacZ/NeoR区上游。随后，将此构建体的SalI盒克隆至含有3’臂的pNTPloxP质粒的XhoI位点，产生最终靶向载体。5’臂经设计缺失了第一外显子，包括翻译起始位点上游125bp片段、编码区的头147bp(49个密码子)和第一内含子的143bp(包括信号肽)。这就将LacZ报道基因置于VEGF-C基因的调节区控制下。
电穿孔将此靶向构建体导入R1(129/Sv×129/SvJ)小鼠ES细胞中。使用NcoI消化物和5’外部探针，通过Southern印迹分析，筛选所述定向突变。阳性克隆与WT桑椹胚聚合以获得嵌合小鼠，该小鼠与ICR小鼠交配。通过Southern印迹或通过PCR使用引物5’-TCC GGT TTC CTG TGAGGC-3’(正向)(SEQ ID NO：34)、5’-AAG TTG GGT AAC GCC AGG-3’(反向，用于所靶向的等位基因)(SEQ ID NO：35)和5’-TGA CCT CGC CCC CGTC-3’(反向，用于VEGF-C第一外显子)(SEQ ID NO：36)，分析幼崽的基因型。
B.VEGF-C-/-基因型的致死性
在VEGF-C+/-小鼠的243只子代中仅发现少数VEGF-C-/-幼崽，提示VEGF-C缺陷导致胚胎致死性。发现了预期频率的VEGF-C-/-胚胎，但是大多数从E12.5起水肿，并且在E18.5时严重肿胀并生长停滞。所有VEGF-C-/-胚胎在晚期死亡。
在含有LacZ-VEGF-C标志基因的胚胎中整装片染色β-半乳糖苷酶活性，指示VEGF-C自E8.5起在第一淋巴囊形成的颈区中强烈地表达(Kukk等，Development 122，3829，1996)。因此，在E10.5 VEGF-C+/-胚胎切片中对β-半乳糖苷酶和VEGFR-3的双重染色显示，在VEGFR-3阳性颈静脉(其产生淋巴内皮)的背外侧间充质中存在丰富的VEGF-C。
VEGF-C表达的位置和时间提示，VEGF-C在淋巴脉管系统的发育中起作用。因此，在来自颈静脉区的切片上对淋巴标志VEGFR-3、LYVE-1或podoplanin的染色显示，VEGF-C-/-胚胎中没有形成淋巴囊，而在其VEGF-C+/-和VEGF-C+/+同窝出生仔中淋巴囊清晰可见。有趣的是，VEGFR-3也在VEGF-C-/-胚胎的一些含有红细胞的毛细管中继续表达，而在其同窝出生仔中下调。在PECAM-1和平滑肌肌动蛋白染色切片上静脉和动脉表现正常。E17.5的VEGF-C-/-胚胎的VEGFR-3整装片染色显示，在后期也不存在包括胸导管的淋巴管。
C.VEGF-C-/-胚胎的Prox-1表达
Prox-1是淋巴内皮细胞中表达的转录因子，其可以用于测量淋巴网络形成的程度。与VEGF-C-/-胚胎相似，Prox-1缺陷胚胎也不能形成原始淋巴囊(Wigle和Oliver，Cell 98，769(1999)Wigle等，EMBO J.21，1505(2002))。为了测量VEGF-C表达对Prox-1的影响，通过整装片免疫荧光，在VEGF-C-/-胚胎中研究Prox-1表达。
为了产生Prox-1抗体，将编码Prox-1(SEQ ID NO：37)同源异型框域(homeobox domain)和prospero域(人Prox-1的氨基酸578-750，SEQ ID NO：38)的cDNA亚克隆至pGEX2t载体中，产生GST-Prox-1融合构建体，使用谷胱甘肽Sepharose根据厂商说明书(Amersham，Piscataway，NJ)从大肠杆菌纯化该GST-Prox-1融合蛋白。使用融合蛋白根据标准方案免疫兔子，使用具有偶联GST-和GST-Prox-1的乙烯砜琼脂糖树脂(Sigma)的连续柱子，从兔血清分离Prox-1特异性抗体。此纯化的抗体识别来自转染了Prox-1的293细胞的裂解物中的85kD蛋白质，但不识别来自转染了空载体的细胞的裂解物。在小鼠皮肤的冰冻切片中，该抗体也特异地染色淋巴内皮细胞但不染色血管内皮细胞。
对于整装片外植块(whole mount explant)，分离来自E10-E13胚胎的轴向脉管系统(axial vascular system)、部分内胚层衍生物和所有中段中胚层衍生物。在E10.5，在所有胚胎的颈静脉中双侧检测到强烈的内皮Prox-1染色。这些表达Prox-1的淋巴内皮细胞在VEGF-C+/+和VEGF-C+/-胚胎中已经开始萌芽，而在VEGF-C-/-胚胎中表达Prox-1的内皮细胞局限在主静脉的壁上。随后，在VEGF-C+/+和VEGF-C+/-胚胎中表达Prox-1的内皮细胞形成颈静脉淋巴囊，在E13时清楚地见到该颈静脉淋巴囊。然而，在VEGF-C-/-胚胎中，在此阶段仅有少数表达Prox-1的内皮细胞留在主静脉(cardinal vein)中，而且未发现淋巴囊样结构。在分析的所有阶段，VEGF-C-/-胚胎的心肌细胞和肝细胞中的Prox-1表达显示正常。这提示，VEGF-C不是细胞向淋巴内皮细胞谱系定型(cell commitment)所必需的，但是旁分泌VEGF-C信号是表达Prox-1的内皮细胞自主静脉迁移所需的，并且是随后的淋巴囊形成所需的。在缺失VEGF-C时，表达Prox-1的内皮细胞的数量到E13时也减少，说明VEGF-C是这些细胞存活所必需的。
D.神经系统中的VEGF-C表达
在VEGF-C-/-除了淋巴发育之外的胚胎发育区域中对VEGF-C表达的分析显示，胚胎形成过程中VEGF-C的表达也定位在神经系统。对VEGF-C-/-小鼠中Prox-1表达的分析也说明，Prox-1与VEGF-C共同定位在中-后脑区中，而且，Prox-1还在发育中的眼和发育中的前肢区域中表达。在VEGF-C-/-胚胎的中-后脑区中未检测到Prox-1表达，而在VEGF-C-/-动物的其它位点水平保持相同。
VEGF-C在胚胎发生的各个阶段于中-后脑区中以及于小脑壁中强表达。通过VEGF-C+/-动物的原位杂交，检测VEGF-C在成年脑中的表达。在成年动物中大多数脑区，包括小脑(颗粒细胞和浦肯野细胞)，脑中的平滑肌细胞、脑室下区(SVZ)、嗅球神经胶质细胞、下丘脑、海马、脑干、视区、大脑皮质区域和脑神经节，检测到VEGF-C。
VEGF-C在脑中的广泛表达说明其在CNS中具有作用。VEGF-C可能作为神经保护剂或神经营养剂在CNS中起作用。此外，其在脉管周围平滑肌细胞中的表达提示，VEGF-C可能在脑中对内皮细胞发挥作用(例如，存活或通透性功能)。视区中的表达提示VEGF-C可能在视觉系统的发育和维持中有极其重要的作用。而且，已知SVZ含有神经祖先细胞(Picard-Riera等，Proc Natl.Acad.Sci.USA 99：13211-13216，2002)。这些祖先细胞从该区通过喙状迁移流迁移至嗅球，在此处它们置换球周和颗粒神经元细胞。然而，响应损伤，SVZ细胞可以被触发而更大量地增殖和分化为星形胶质细胞(Picard-Riera等，同上引文)。因此，VEGF-C可能在神经祖先细胞的存活和增殖和/或迁移中起作用。
D.1 VEGF-C诱导Prox-1阳性细胞增殖
在来自胚胎日(E)11.5的VEGF-C-/-和VEGF-C+/+胚胎的组织外植块中，通过VEGF-C自琼脂糖珠的释放，分析外源VEGF-C的影响。在含有100ng/μlVEGF-C(巴斯德毕赤酵母产生的hVEGF-CΔNΔC-6×His，描述在(Joukov等，1997))的PBS中孵育Affi-Gel Blue珠(筛目尺寸100-200；Bio-Rad，Hercules，CA)。对照样品中，使用含有100ng/μl人血清白蛋白(HAS)或1％BSA的琼脂糖珠。将珠子按如下方式加入组织外植块：两个珠子于紧靠后肾区的背主动脉的侧面，两个珠子于紧靠颅侧中肾区的背主动侧面，两个珠子于紧靠颈筋脉区的主动脉弓侧面。在Trowell型器官培养系统(Sainio，2003)中，在放置在金属栅格顶上的Tracktech Nucleopore滤膜(孔径0.1μm；Whatmann)上培养外植块48小时。
48小时培养后，固定胚胎并利用免疫组织化学分析Prox-1和PECAM-1表达。对于免疫组织化学染色，在-20℃甲醇中固定组织10分钟，用PBS洗涤3次，用1％BSA在4℃封闭1小时。然后组织与稀释在封闭溶液中的一抗一起孵育过夜。所用一抗是大鼠抗小鼠PECAM-1(PharMingen，SanDiego，CA)和亲和纯化的兔抗Prox-1。用Cy2、FITC或TRITC-1标记的二抗(Jackson  Laboratories)染色。用Immu-mountTM(Thermo  Shandon，Pittsburgh，PA)或用Vectashield(Vector Laboratories)进行组织封固，并通过Zeiss Axioplan 2荧光显微镜分析。
一般，所用的高浓度VEGF-C破坏了脉管的正常动脉/静脉分级(hierarchy)。在所有胚胎中，表达Prox-1/PECAM-1的淋巴内皮细胞向表达VEGF-C的珠子迁移。然而，在所有基因型中，VEGF-C也诱导Prox-1阳性和PECAM-1阳性细胞的大量增殖。由于所有其它表达Prox-1的细胞/组织(例如，肝原基、心脏、背神经节；见(Oliver等，Mech.Dev.44：3-16，1993)均是从组织制备物中解剖出来的，这些细胞必定来源于发育中的交感神经系统(交感神经节)，已经证明Prox-1在该交感神经系统中表达(Wigle等，EMBO J 21：1505-1513，2002)。
实施例9
VEGF-C和交感神经节的分化
A.VEGF-C或VEGF-D对神经元扩展的影响
为了更详细地分析神经细胞群体，分离并培养来自胚胎外植块的交感神经节。解剖E11野生型(NMRI小鼠)胚胎，使用VEGF-CΔNΔC如上实施VEGF-C珠实验。含有BSA的珠子用作对照。
如下解剖来自VEGF-C敲除小鼠的E11.5胚胎或E11小鼠(NMRI)野生型胚胎：从腹膜后区域，解剖尿殖组织和生殖腺、中肾和后肾肾原基(Sainio，2003)。除去小肠、肝原基、心脏和肺原基。保持其腹外侧中背主动脉和交感神经节链的完整。在颈静脉区，也保持主动脉弓和交感神经链的完整。
48小时后，野生型小鼠的交感神经节围绕VEGF-C珠形成一个清楚透明的扩大区域，将其移出并机械解剖。将两个含有VEGF-C珠的NMRI外植块从滤膜移到标准新鲜制备的培养基(D-MEM∶F12(3∶1)，补加B27)中，所述培养基含有EGF(20ng/ml)和FGF(40ng/ml)以支持未分化的神经元的存活和分化。向培养基加入VEGF-C(100ng/ml)，在37℃孵育这些块。72小时和，培养物中有清澈的神经球。然后收集并在含有VEGF-C(100ng/ml)的神经干细胞培养基(上述DMEM/F12)中培养这些神经球，或者在无EGF和FGF的情况下将神经球接种在培养基上，由此允许这些神经元分化。
对于分化试验，48小时培养后用冰冷甲醇固定4个含有VEGF-C珠的NMRI外植块和对照(含有BSA珠)外植块，并进行整装片免疫组织化学处理。或者，为了检测细胞分化，可以分离神经球，并以单细胞形式将其接种在24孔板孔中的聚赖氨酸包被的盖玻片上于补加了100ng/ml神经生长因子(NGF)的无EGF-FGF培养基中4天。使用检测原代神经元(Tuj-1和p75NGF-受体)、上皮结构(泛细胞角蛋白)和分化的神经元(酪氨酸羟化酶(TH)、神经丝抗体)的抗体，验证这些培养物中正是交感神经细胞在增殖并确定VEGF-C对神经分化的影响。
B.VEGF-C或VEGF-D对神经突和轴突向外生长的影响
以上实验说明VEGF-C作为神经营养因子起作用。为了确定VEGF-C或VEGF-D产物对成年轴突的增殖或再生的影响，在存在和不存在VEGF-C和VEGF-D产物的情况下在有或无利用其它神经营养因子的培养下实施轴突向外生长试验(axonal outgrowth assays)。
例如，如Sondell等(J.Neurosci.19：5731-40，1999)所述，从成年大鼠解剖出颈上神经节(SCG)并在MATRIGEL_中封固。每35mm培养皿封固2至3个神经节，在无血清RPMI1640培养基中在5％CO2的潮湿室中维持外植块培养物48小时或72小时。在封固后不同的时间点，包括移植后0时、4时、6时、8时、12时或24时，向培养物中加入VEGF-C产物或VEGF-D产物。VEGF-C或VEGF-D的添加剂量范围从ng/ml至μg/ml，例如，1，10，25，50，100或200ng/ml。使用神经生长因子作为阳性对照，而使用未处理的神经节或用无关蛋白处理的神经节作为阴性对照。
为了测量VEGF-C或VEGF-D产物诱导的轴突生长程度，测量培养中轴突生长的长度和密度。在VEGF-C或VEGF-D处理的神经节中增加的轴突长度和轴突密度说明，VEGF-C或VEGF-D诱导成年轴突生长，并且可能是在要求轴突再生的人类神经病中用于轴突生长的有用治疗剂。
实施其它实验测量用VEGF-C或VEGF-D联合其它神经营养因子或PDGF-A、B、C和/或D生长因子处理轴突外植块的协同效应。
可以进一步在胚胎轴突上评价VEGF-C和VEGF-D的作用。从E10-12大鼠胚胎解剖出三叉神经节，并埋入根据Ebendal(1989)制备的三维胶原基质中。典型地，在24孔组织培养板中，将3-5个神经节培养在0.5ml基质中。用0.5ml含有1％热失活的马血清的Eagle氏基础培养基(GIBCO BRL)覆盖该凝胶。所述胶原凝胶配制在相同培养中。向培养基加入重组VEGF-C或VEGF-D产物，对照培养物中无任何因子，NGF培养物可以充当阳性对照。典型地，以ng/ml或μg/ml浓度，例如1，10，25，50，100或200ng/ml，施加这些神经营养因子。在有或无VEGF-C产物或VEGF-D产物下在含有5％CO2的潮湿空气中37℃孵育外植块培养物，24和48小时后检查神经突的向外生长，以及任选地用抗神经丝抗体染色以更好地观察神经突。
C.VEGF-C或VEGF-D在脊髓损伤模型中的神经营养作用
治疗神经创伤或损伤的一个主要要求是损伤部位轴突的再生。为了评价VEGF-C和VEGF-D产物在刺激轴突再生方面的神经营养作用，使用脊髓损伤大鼠模型。例如，根据Facchiano等(J.Neurosurg，97：161-68，2002)在成年大鼠脊髓T8水平进行横切，在损伤部位施用悬浮在matrigel中的VEGF-C或VEGF-D产物，其中matrigel允许所示治疗剂缓慢释放。还可以通过其它成熟建立的治疗途径，例如腹膜内、静脉内或眼眶后注射，给动物施用VEGF-C或VEGF-D产物。系统施用是一种选择方案，但是优选在损伤部位的局部施用。以预先确定对所治疗动物的大小和类型有效的剂量施用VEGF-C或VEGF-D产物，并且可以在一次治疗中或经过一个疗程，例如，每2天，每周1次或对所治疗的动物有效的任何其它方案，施用VEGF-C或VEGF-D产物。对照动物无接受治疗或者接受无关蛋白，例如牛血清白蛋白的处理。
为了评价VEGF-C或VEGF-D处理的动物中轴突再生的程度，于处理后不同时间点，例如最初的脊髓横断后第14天、21天或28天，解剖出脊髓，并根据Facchiano等(同上引文)测量轴突生长，其中测量横断位点和新轴突末梢间的距离，从而说明轴突是否响应生长因子而出现生长或者轴突是否不能应答并简单地死亡。
与对照动物相比，VEGF-C或VEGF-D处理的动物中轴突再生的增加说明，VEGF-C或VEGF-D是有效的神经营养因子，并促进对于修复运动神经元损伤至关重要的轴突再生。
为了在上述实验中表征交感或运动神经元中的VEGF-C或VEGF-D受体表达，可以用针对VEGFR-2、VEGFR-3、NRP-1和NRP-2的抗体染色分离的神经元细胞(在VEGF-C或VEGF-D刺激之前和之后)。
实施例10
神经元祖先细胞在VEGF-C或VEGF-D存在时的增殖
为了定量VEGF-C或VEGF-D产物在交感神经元培养物中的促有丝分裂潜力，实行增殖(MTT)试验。
在饥饿培养基(无血清)中用VEGF-C、VEGF-D、VEGF-CΔC156或VEGF-C或VEGF-D产物的其它形式、VEGF(或其它生长因子)或用对照蛋白刺激在神经元细胞培养基中培养的神经球48小时。37℃细胞与MTT底物，溴化3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑嗡，(5mg/ml)孵育4小时，裂解细胞并测量540nm光密度。
此外，使用溴脱氧尿苷(BrdU)掺入和/或氚化胸苷掺入作为标记指数以及细胞增殖测量结果，测定VEGF-C或VEGF-D产物刺激细胞增殖的能力[Vicario-Abejon等，Neuron 15：105-114(1995)]。例如，接种神经元细胞，然后在固定细胞之前在有或无VEGF-C或对照蛋白下用BrdU脉冲一段规定的时间(例如，18个小时)。固定并中和细胞，与BrdU单克隆抗体一起孵育。然后用标记的二抗检测BrdU抗体。为了检测BrdU阳性细胞是否属于特定的神经元亚群，可以将BrdU标记与针对上述神经元特异性标志的染色结合起来。
也可以通过非侵入式方法利用NMR显微镜测量神经元密度，体内测定神经元的增殖(见美国专利号6,245,965)。此外，可以在施用VEGF-C之前、期间和/或之后，向动物模型和对照施用BrdU或氚化胸苷。最后的注射之后，麻醉和/或处死动物，取出目的组织。使用抗BrdU抗体通过BrdU掺入分析这些组织，或者通过测量细胞提取物中的[3H]计数量分析这些组织。
在以上增殖试验中可以使用VEGF-C和VEGF-D多肽的片段和类似物确定可用于介导神经干细胞生长和分化的最小VEGF-C片段。通过描绘能够刺激神经干细胞生长的最小VEGF-C或VEGF-D多肽片段，可以提供足够小以致能够横穿血脑屏障的VEGF-C或VEGF-D多肽。
通过开发能够流过血脑屏障的治疗剂，可以消除侵入式施用VEGF-C或VEGF-D多肽的方法，并导致更温和的治疗形式，例如静脉内或皮下注射。
实施例11
神经病治疗中表达VEGF-C或VEGF-D的腺病毒
基因治疗载体例如，腺病毒、腺相关病毒和慢病毒载体是有效的、外源施用的、用于诱导体内产生蛋白质的药剂，并且经过设计其可以在体内特定位点提供持久的、稳态蛋白质水平。
为了确定外源VEGF-C或VEGF-D对神经干细胞的体内影响，使用病毒基因治疗载体。例如，如Enholm等，Circ.Res.88：623-629(2001)；和Puumalainen等(同时引文)所述，构建含有VEGF-C(AdVEGF-C)或靶向核的LacZ(Ad-LacZ)转基因的腺病毒表达载体。简要地，对于Ad-VEGF-C，将全长人VEGF-C cDNA克隆在pcDNA3载体(Invitrogen)的巨细胞病毒启动子下面。然后，将载体的SV40来源的多腺苷酸化信号换成人生长激素基因的多腺苷酸化信号，并将此转录单位以BamHI片段形式插入pAdBglII载体。按以前的描述(Puumalainen等，Hum.Gene Ther.，9：1769-1774，1998)，在人胚胎肾293细胞中产生复制缺陷型重组E1-E3缺失腺病毒，并通过超离心浓缩。分析腺病毒制备物中无辅助病毒、脂多糖、和细菌学污染物(Laitinen等，Hum.Gene Ther.9：1481-1486m 1998)。
可以用于在神经病中评价VEGF-C的啮齿类动物模型包括但不限于：帕金森病的N-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)小鼠模型(Crocker等，J.Neurosci.23：4081-91，2003)、甲基苯异丙胺诱导的PD小鼠模型(Brown等，Genome Res.12：868-84，2002)、6-OHDA诱导的PD(Bjorklund等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99：2344-2349，2002)、转基因Tg2567小鼠阿尔茨海默氏病模型(Quinn等，J Neuroimmunol 137：32-41，2003)和PDAPP小鼠AD模型(Hartman等，J.Neurosci.22：10083-7，2002)。使用大鼠横断模型(例如，Krassioukov等(Am.J.Physiol.268：H2077-H2083，1995)中所述的横断第4胸椎，和脊髓压伤模型(Gorio等，Proc.Natl.Acad Sci.U.S.A.99：9450-5，20002)，评价VEGF-C在神经创伤中的作用。
以不同浓度(从5×106至5×109噬斑形成单位(pfu))将VEGF-C腺病毒载体(Ad-VEGF-C)或LacZ对照(Laitinen等，同上引文)注射至易感小鼠中。静脉内、腹膜内、皮下、颅内或在神经系统创伤位点局部地施用此腺病毒载体。在阿尔茨海默氏病或帕金森病神经变性样症状发作前施用Ad-VEGF-C。
对于帕金森病，如上述监测处理的和对照的动物的疾病进程，并在疾病发作后不同时间处死动物(疾病发作后第3天、7天、10天、14天或21天)，以便如上述组织学评价神经增殖、VEGF-C表达和神经细胞分化。在另一实施方案中，在病程中不同时间，包括诱导后第0、1、3、7、14和21天或于疾病发作后的时间，施用腺病毒载体，以在神经疾病的进展和改良方面研究VEGF-C的施用。进一步考虑，在疾病症状发作后任何的一天多次施用腺病毒载体，以维持神经病位点VEGF-C蛋白的恒定水平。
一般在动物模型中阿尔茨海默氏病模型需要更长的发展时间。在转基因动物出生后或在实验诱导的疾病模型中诱导疾病后几周至几月，针对AD进程评价VEGF-C施用。VEGF-C处理在AD症状发作前不同时间进行。当对照动物开始显示出疾病迹象时，处死VEGF-C处理的动物，分析脑切片中神经变性和斑块形成的程度。也考虑一直不施与VEGF-C处理直到出现AD的第一临床征兆，然后以预定剂量在不同时间点施用。考虑每天、每周、每两周、或以其它确定对减缓AD进程有效的时间间隔，施用VEGF-C或VEGF-D。
在任何动物模型VEGF-C处理后疾病症状的改善或疾病进程的延迟均指示VEGF-C抑制或逆转神经变性疾病进程的治疗益处。
实施例12
施用离体经VEGF-C或VEGF-D处理的神经干细胞
离体用VEGF-C产物或VEGF-D处理神经干细胞，诱导细胞增殖。然后将这些细胞植入需要产生神经元和使神经元增殖的个体中。
神经干细胞作为移植材料的用途已经通过神经祖先细胞克隆C17.2[见美国专利公布号2002/0045261；Snyder等，Cell 68：33-51，1992；Snyder等，Nature 374：367-370，1995；Park，J.Neurotrauma 16：675-87，1999；Aboody-Guterman等，NeuroReport 8：3801-08，1997]作了举例说明。C17.2是来自出生后第0天小脑的小鼠细胞系，该细胞系通过含有禽myc基因的逆转录病毒构建体的感染而无限增殖。该细胞系已经经过转导而组成性表达lacZ和neoR基因。移植至整个脑的胚区的C17.2细胞可以沿着小鼠轴索迁移，停止分裂，和参与多个区域在多个阶段(胎儿至成年)的正常发育，从而按预期地分化成各种神经元细胞和神经胶质细胞类型。已经证明此神经干细胞克隆是用于向CNS转移基因的有效运载体[Snyder等，Nature 374：367-70，1995；Lacorraza等，Nature Med 4：424-29，1996]。
在一个例子中，用上述VEGF-C珠体外培养神经干细胞，其中所述珠子具有有效地刺激神经干细胞生长和增殖的最佳浓度的可溶性VEGF-C。可以使用本领域常用的技术，例如经过给定时期细胞的增殖速率、形态学的改变、或细胞分化的状态，优化VEGF-C的浓度。一旦优化后，将VEGF-C与神经干细胞一起体外培养此段最佳时间，例如在珠子实验中48小时。
然后，将与VEGF-C一起培养的神经干细胞植入nu/nu小鼠(见美国专利公开号2002/0045261)。按如下实施神经干细胞向大脑内的注射：施用有效剂量的麻醉剂，例如腹膜内(i.p.)注射70μl由2份抑菌0.9％NaCl(AbbottLabs，Abbott，Ill.)和20mg/ml xylazine(Rompun，Miles，Kans.)和100mg/mlketamine(KetalarTM，Parke-Davis，N.J.)各一份组成的溶液，麻醉雄性6-8周龄nu/nu裸鼠。将动物放置在立体定位仪(Kopf，Tujunga，Calif.)中，作一个中线皮肤伤口，于前囟点的吻侧2mm和右侧2mm钻一个洞。使用Hamilton注射器，经过至少2分钟，将细胞注射至距离硬脑膜2.5mm深的地方。经2分钟逐渐退回针头，用骨蜡(Ethicon，Somerville，NJ)闭合该洞，用Betadine(Purdue Frederick，Norwalk，Conn.)洗涤伤口。对于第二次注射，重复相同程序。
经过一个时程，例如，在第2天、第4天、第5天、第6天、第7天、第10天、第14天或第21天，处死动物，评价VEGF-C处理的干细胞的迁移。给予动物过量麻醉剂，随后用PBS之后用4％低聚甲醛和2mM MgCl2(pH7.4)实施心脏内灌注。取出脑，4℃后固定过夜，然后转移至PBS和2mMMgCl2(pH7.4)中的30％的蔗糖中3-7天以对样品实施低温保护。-80℃贮存脑，然后使用低温恒温器(Leica CM 3000，Wetzlar，德国)切10-15微米冠状面系列切片。也考虑按本领域常用的方式用标志蛋白例如lacZ转染神经干细胞。用VEGF-C按如上所述在培养中处理这些细胞，或者用无关对照蛋白，例如牛血清白蛋白处理这些细胞，之后将细胞注射入动物体内，随后由于lacZ基因的存在可以基于β-gal染色容易地体内跟踪这些细胞。
染色脑切片以确定VEGF-C处理后的神经干细胞的增殖、迁移和分化程度。与对照组相比VEGF-C处理的群体中神经干细胞体内数量的增加或者神经来源细胞的整体增加，以及对增殖后这些细胞迁移至适当位置的评价结果，说明VEGF-C是神经元生长的有利刺激剂，而且为治疗需要神经元再生的患者提供了有用的治疗方法。经VEGF-C处理的细胞的组织分布的改变指示了VEGF-C对细胞的迁移和分化影响。
上述神经干细胞移植可以用于帕金森病、阿尔茨海默氏病或其它神经变性病动物模型中，以评价VEGF-C或VEGF-D处理的神经干细胞在慢性神经变性病中改善神经病的能力。
例如，将VEGF-C处理的神经干细胞移植入帕金森病(MPTP)小鼠模型(Crocker等，同上引文)。在疾病病程中于不同时间，例如疾病发作前或后，包括诱导疾病后第0、1、3、7、14或21天，施用所述神经干细胞，以研究VEGF-C处理的神经干细胞对神经元疾病的进程和改善的作用。在神经干细胞移植后经过一个时程，例如，第2天、第4天、第5天、第6天、第7天、第10天、第14天或第21天，处死动物，评价VEGF-C处理的神经干细胞的迁移和测量与对照处理小鼠相比脑损伤中改善的程度。在接受经过VEGF-C处理的神经干细胞的PD动物中脑损伤尺寸的减小或运动技能的改善指示，VEGF-C是有力的神经干细胞增殖激活剂，是用于改善神经变性病效果的有用治疗剂。
可以重复这些程序评价本文所述的药剂组合。
实施例13
VEGF-C或VEGF-D处理患有神经变性病的患者
A.用外源VEGF-C或VEGF-D处理患者
用VEGF-C或VEGF-D产物处理表现出神经变性病症状或有持久神经创伤或损伤的患者，以促进神经干细胞或神经祖先细胞再生、分化和迁移。
在表现出神经变性病征兆的患者中，将如前所述VEGF-C或VEGF-D产物直接施用至患者的脑中，例如，通过脑室内或壳核内注射，或者使用导管和输注泵(Olson，L.，Exp.Neurol.124：5-15(1993))。以预先确定对患者无毒的治疗有效量施用VEGF-C或VEGF-D。可以在单一一剂中或在多剂中施用VEGF-C或VEGF-D，并且可以在一天或一个由治疗医师确定为最有效的时程内多剂施用。
也考虑，将VEGF-C或VEGF-D产物施用至神经变性病患者或神经创伤或损伤患者的脑脊液(CSF)中。
对于有神经创伤或损伤的患者，还可以通过静脉内或皮下注射系统地施用治疗有效量的VEGF-C/D产物，或者可以在神经损伤或创伤位点局部地施用VEGF-C或VEGF-D。给药方式(即，治疗剂浓度和施用方案)由执行医师确定，并且可以配合所治疗的患者作修改。
B.向神经变性病患者移植VEGF-C或VEGF-D处理的干细胞
具有CNS的多能神经干细胞、神经元祖先细胞或神经胶质祖先细胞的特征的细胞(通过体外试验鉴定)，用VEGF-C或VEGF-D产物处理，或者用表达VEGF-C或VEGF-D产物的病毒载体(例如，腺病毒、腺相关病毒或慢病毒载体)感染，将细胞施用给表现出神经病症的哺乳动物以测定这些细胞的疗效。
这些细胞优选从具有相似MHC基因型的哺乳动物分离。一个方法中，分离并培养胚胎干细胞系以诱导向神经细胞方向的分化。这使用如上所述神经元生长因子实现。可以基于对神经元或神经胶质细胞谱系的细胞表面染色，评价细胞的分化状况。随后所述细胞与VEGF-C一起培养，并转移至神经变性病患者体内。
神经干细胞的分离可以如美国专利5,196,315中所述进行。在一个实例中，从可能正在经历针对其神经病理或移除神经元肿瘤的治疗的患者，分离大脑皮层组织。将皮层组织解剖成灰质和白质，灰质立即放入含有D-缬氨酸的极限必需培养基(MDV)(Gibco，Grand Island，N.Y.)和通过在有12,000至14,000道尔顿截断值的管中透析制备的15％透析后的胎牛血清(dFBS)(Gibco)中。然后，将组织细细切碎，并挤压通过150μm网目的金属丝网筛。将细胞悬浮液以每平方厘米大约1×104细胞的密度分配至35-mm培养孔中，并置于37℃的7％CO2潮湿孵育器中。在含有15％dFBS的MDV中维持细胞系，并通过胰蛋白酶消化[0.05％(w/v)，在Hank氏平衡盐溶液(Gibco)中]传代。用不同浓度的VEGF-C或VEGF-D体外处理细胞，或者用表达VEGF-C或VEGF-D的病毒载体转染细胞。
将培养的细胞注射至脊髓或脑或神经创伤或变性的其它位点。注射一系列浓度的细胞以确定注射入期望位点的最佳浓度，并将细胞显微注射至动物个体的脑和神经元中。
或者，将细胞引入血浆凝块、胶原凝胶或其它缓释系统，从而防止细胞自注射位点的快速消散。随后将缓释系统植入个体的神经病位置或该位置附近。例如，为了治疗帕金森病患者，从来自手术样本或死后捐赠物的胎儿/胚胎或成年脑组织(对该组织进行匀浆并用神经干细胞标志作标记)分离足够用于移植的细胞(假定20％成活力)。然后，使用荧光激活细胞分选(FACS)，分选细胞。收集神经标志阳性细胞并进一步在组织培养中培养并进行处理。然后将细胞植入帕金森患者的纹状体或黑质。监测移植物的成活力和细胞分化。
考虑联合常用的治疗剂使用VEGF-C或VEGF-D疗法以治疗神经变性病。例如，在一个用于治疗帕金森患者的方案中，与VEGF-C治疗联合，或者在施用VEGF-C培养的神经干细胞后，患者接受神经治疗剂，例如普拉克索或左旋多巴(剂量0.5mg，每天3次)。或者，在VEGF-C治疗之前、并行地或之后，或者在移植VEGF-C处理的神经干细胞后，患者接受卡比多巴/左旋多巴，25/100mg，每天3次。如果患者表现出持续的能力丧失，在头10周期间逐步升高剂量。本领域熟知，治疗方案常常由治疗医师进行修改和优化并且是患者特异的。因而，可以进一步改变任何化疗剂的剂量，并可以以能够有效地改善神经变性病的效果的任何组合方式给予。例如，如果使用辅酶Q10作为治疗剂，则可以以300或600或1200mg/天的剂量范围与VEGF-C产物联合给予。
这些技术和方法可以用于治疗神经变性病如阿尔茨海默氏病或帕金森病，或者用于治疗损伤了神经元细胞的创造性损伤，例如中风期间。监测治疗在患者个体的神经学状况上产生的效果。例如，可以通过MRI检测神经元干细胞在体内的增殖。在个体中期望的治疗效果包括受到神经病影响的个体中改善的运动神经元功能和减少的神经元结疤或神经元损伤。
上述任何实施例都可以使用VEGF-D产物代替VEGF-C产物来实施。考虑到VEGF-D产生与VEGF-C相似的神经细胞生长刺激活性，可以以与VEGF-C十分相同的方式施用于患有神经病的个体或者用于刺激体外神经细胞生长以便向表现神经病症状的患者进行移植。此外，可以如上述用于VEGF-C的方式，将表达VEGF-D的病毒载体用作基因治疗法。
实施例14
在少突胶质细胞前体细胞中检测到VEGF-C和VEGFR-3
除了调节神经元发育外，神经前体细胞还发育成神经胶质，例如星形胶质细胞和少突胶质细胞。VEGF-C对交感神经节的增殖和存活作用暗示，VEGF-C也可能在这些其它神经细胞类型中起作用。
少突胶质细胞祖先细胞(OPC)自E12起在胚胎CNS的受限制的发源点中产生(Spassky等，Glia 29，136-142，2000；Rowitch等，Trends in Neurosci.，25：417-422，2002)。OPC亚群的特征在于plp基因的早期表达，该plp基因编码主要蛋白质髓鞘脂，蛋白脂质蛋白(Spassky等，Development218：4993-5004，2001)。证据显示，plp+OPC在E41.5开始向胚胎视神经(ON)集群，并表达脑信号蛋白受体神经毡蛋白-1和-2。然而，在此视神经中未检测到神经毡蛋白配体Sema3F的转录物。
为了确定所选配体和受体分子在发育中胚胎的少突胶质细胞前体细胞中的表达，通过免疫标记，评价前脑，尤其是视神经中VEGF-C、VEGF-D、VEGF-A、VEGFR-2、VEGFR-3和神经毡蛋白-2的表达。用抗VEGF-C或VEGFR-3的抗体(R&D Systems)染色E15和E16脑的石蜡切片，或者用抗VEGF-C抗体之后用抗胶质原纤维酸性蛋白Ab(Dako)处理由此进行双标记以鉴定星形细胞。
在神经细胞中于E15鉴定到VEGF-C蛋白的强烈表达，主要定位在视束中，包括视神经、视神经交叉区域和腹侧间脑中的视神经带(optic strip)。在视交叉上域(suprachiasmatic domain)——已知产生向视神经集群的部分少突胶质细胞(Ono等，Neuron 19：283-292，1997)，可以在脑室层和下方实质中检测到VEGF-C+细胞。在E16，VEGF-C表达减少并更为局限于视神经的中间区域直到视网膜的乳头，并且表达VEGF-C的细胞是GFAP阴性的。VEGF-C+细胞部进入视网膜。在E18，该表达仍然强烈但是局限于视神经远端部分。在P4，VEGF-C表达变低并弥散。
VEGF-D蛋白质以低水平表达，显示出弥散的染色(E15，E16和P4)。在ON发育的任何阶段，在神经内均未检测到VEGF-A+细胞。在E15和E16，在视神经中检测低水平的VEGFR-3表达，而且该表达局限于该神经的中间区域。
除了视神经外，在视网膜神经节细胞中以及在脑的有效神经元群体，包括嗅球、大脑皮层、海马和视皮层、腹侧下丘脑、后连合及腹侧脑桥中也检测到VEGF-C表达。在人脑中也发现相似的VEGF-C mRNA表达模式。在周围神经系统中，脑神经节和背根神经节的细胞也强烈地表达VEGF-C。与VEGF-C相反，在所检测的任何发育阶段中在视神经中均未检测到VEGF-A和VEGF-D。在视神经附近的动脉的血管壁中观察到VEGF-A表达，在牙乳头中检测到VEGF-D。
为了表征VEGF-C表达细胞的表型，我们使用杂合Vegf-c基因敲入(knock-in)小鼠，在该小鼠中lacZ报道分子置换了一个Vegf-c等位基因(Karkkainen等，Nat Immunol 5：74-80，2004)。用抗β-gal Ab标记E15.5和E17.5 Vegf-c+/-脑的冰冻切片。β-gal表达的空间时间模式酷似内源VEGF-C的空间时间表达模式，这说明视神经细胞产生VEGF-C。用对放射状神经胶质和星形胶质细胞(抗Glast27)、成熟星形胶质细胞(抗GFAP)、神经元和轴突(TuJ1)、内皮细胞(抗PECAM)或OPC(抗Olig2)具有特异性的标志，双标记切片。进行免疫组织化学分析。
在E15.5，纵向延伸至该神经内的Glast+纤维表达β-gal。相反，在E17.5于该神经的外围中检测到GFAP+星形胶质细胞是β-gal阴性的。在自视网膜神经节细胞延伸的Tuj1+轴突中未观察到β-gal表达，该神经的罕见PECAM+脉管也不表达β-gal。在该神经或腹侧间脑的Olig2+OPC中未检测到β-gal表达。在后一区域中，VEGF-C在下丘脑的腹内侧核中局部表达。总之，这些结果说明，在血管内皮生长因子中，仅VEGF-C由发育中的视神经的放射状神经胶质和星形神经胶质前体细胞产生和合成。
使用针对VEGFR-1、VEGFR-2或VEGFR-3的抗体标记E15.5和E17.5头部系列冰冻切片，分析胚胎视神经中VEGF受体的表达。在所检测的所有发育阶段，在头部间充质内的脉管内皮和神经上皮中检测到VEGFR-1和VEGFR-2表达，而VEGFR-3在头部间充质中由淋巴内皮细胞表达。在E15.5，在视神经中观察到VEGFR-3表达，但无VEGFR-1和VEGFR-2的表达。在E17.5，在视神经中检测到许多VEGFR-3+细胞。为了确立VEGFR-3表达细胞的表型，用抗VEGFR-3和抗Olig2 Ab标记冰冻切片。在视神经中共同定位了VEGFR-3标记的点状链样模式和OPC的Olig2+核染色。除了视神经外，在视前区(在此发育阶段含有密集的OPC群体(Prestoz等，NeuronGlia Biol.1：73-83，2004)中，以及其它前脑区域如嗅球和杏仁核中也检测到VEGFR-3表达。在这些区域中检测到许多双标记的VEGFR-3+/Olig2+OPC。在来自E17.5的杂合Vegfr-3/lacZ-基因敲入小鼠(Dumont等，Science 282：946-9，1998)的脑中对β-gal和Olig2的双染色，也显示出双阳性细胞。
此外，利用目的基因杂合的LacZ报道小鼠，通过在成年中枢神经系统(CNS)中免疫染色VEGFR-2和VEGFR-3，还评价了成年脑中VEGF-C受体的表达。这些实验显示，在大脑的清楚确定区域，包括缰内侧核(medicalhabenular nuclei)、丘脑的前核和中央旁核，以及穹窿下器(subfornical organ)中，检测到VEGFR-3表达。VEGFR-2由脑血管以及室管膜细胞层表达。
这些观察结果说明，在视神经和成年CNS中辅助神经胶质细胞群体选择性地表达VEGF-C以及其高亲和受体VEGFR-3。该神经所固有的放射状神经胶质和/或未成熟的星形胶质细胞表达VEGF-C，而来源于脑并向该神经集群的OPC表达VEGFR-3。这些结果提示，来自视神经的放射状神经胶质细胞(radial glial)/星形胶质前体细胞衍生的VEGF-C可能对表达其受体VEGFR-3的OPC产生作用。
实施例15
VEGF-C诱导少突胶质细胞增殖
为了确定VEGF-C对少突胶质细胞前体细胞的增殖作用，用生长因子培养分散的E16视神经的细胞培养物，并测量存活和增殖效应。
从E16.5野生型或神经毡蛋白-2-/-lacZ基因敲入(NPN2ki)小鼠分离视神经。使细胞分散并在对照培养基(含有50％的未转染的COS细胞的上清液)中培养或在存在50％的分泌Sema3F、VEGF-C或VEGF165的COS细胞的上清液下培养。体外第1天(1DIV)，掺入BrdU 48小时。在3DIV，在4％低聚甲醛中固体培养物，然后用抗A2B5少突胶质细胞Ab和抗BrdU染色。计数A2B5+细胞和A2B5+/BrdU+细胞的数量。VEGF-C诱导了超过对照细胞2倍的BrdU掺入，而VEGF165处理的细胞的增殖与对照细胞类似。Sema3F也显示出对OPC的营养作用。VEGF-C和Sema3F的联合未显著地增加OPC的增殖。该结果提示，两种配体使用相同的受体，可能为神经毡蛋白-2，以诱导它们对OPC的营养作用。Sema3F的作用在OPC表面上缺少神经毡蛋白-2表达时消失。
VEGF-C存在时，少突胶质细胞前体细胞与其它神经细胞类型相比表现出存活增加。
实施例16
鉴定促进少突胶质细胞生长的VEGF-C分泌细胞
不仅在视神经和视神经交叉中而且在脑的大部分Olig2+少突胶质细胞前体细胞中，VEGFR-3看来似乎特异地由少突胶质细胞祖先表达。为了确定VEGFR-3表达在OPC中的作用，有用的是：鉴定通过VEGFR-3或神经毡蛋白受体刺激OPC生长的VEGF-C分泌细胞的表型。
使用表达plp-GFP构建体的小鼠评价CNS中的VEGF-C表达(Jiang等，JNeurobiol.44：7-19，2000)。当绿色荧光蛋白(GFP)构建体与含有PLP启动子的PLP表达构建体连接后，GFP特异地在来自原代混合的神经胶质培养物的少突胶质细胞中表达。从plp-GFP+和plp-GFP阴性细胞分离E16.5视神经和腹侧间脑的细胞，分离每种细胞类型的mRNA以评价VEGF-C转录物的存在。此外，如以前描述的固定这些分离的细胞，并用针对VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、GFAP和nkx2.1(一种由内源视神经细胞于E12.5开始表达的转录因子)和上述其它神经细胞标志的抗体免疫标记以检测VEGF-C蛋白。
VEGF-C在神经细胞中的表达也通过分析VEGF-C“基因敲入”小鼠中的lacZ标记进行评价，在所述小鼠中VEGF-C通过与角蛋白K14启动子(Veikkola等，EMBO J.20：1223-1231，2001)连接而过表达，该小鼠也被设计表达lacZ基因。在E15.5-16.5进行WT、+/-和-/-视神经的整装片X-Gal和Blue-O-Gal染色。对于视神经的整装片染色，通过在每只眼的壶腹帽(cupula)的刚好后面切断神经并移出脑和附着的视神经，从胚胎分离脑。一旦分离了脑，除去脑膜，尤其是腹侧间脑和视神经周围的脑膜。在4％PFA中固定神经1小时，将其切成300微米厚的切片，注意至少其中一个切片包括视神经交叉和两个视神经。洗涤这些组织切片，浸泡在X-Gal或BOG中以显示染色和VEGF-C的表达。
由于少突胶质细胞自E14.5开始进入视神经，预期如果少突胶质细胞分泌VEGF-C则在该发育阶段在WT和无效突变体之间X-Gal染色将发生改变。WT和突变细胞之间在X-Gal方面缺少任何变化，说明VEGF-C不由少突胶质细胞分泌而由内源神经细胞分泌。
使用如上和本领域中描述的外植块(explant)和细胞染色实验(Wang等，JNeurosci.14：4446-57，1994；Bansal等，Dev Neurosci.25：83-95，2003)，实现所述的VEGF-C和VEGF-D对少突胶质细胞和少突胶质细胞前体细胞的迁移和分化的影响。此外，有用的是分析VEGF-CK14或VEGFR-3K14转基因动物中的少突胶质细胞增殖和迁移，以确定VEGF-C/VEGFR-3信号转导对少突胶质细胞功能的影响。
实施例17A
VEGF-C特异地促进少突胶质细胞前体细胞而非神经胶质细胞的增殖和存活
为了分析VEGF-C/VEGFR-3信号转导在OPC中的生物学意义，体外检查OPC对VEGF-C的增殖反应。从E16.5视神经获得分散的细胞，在BrdU和递增浓度的重组大鼠VEGF-C(10-150ng/ml)存在下培养24小时和48小时。这些培养物由星形胶质细胞前体和OPC组成(Shi等，J.Neurosci.18：4627-36，1998；Small等，Nature 328：155-7，1987；Mi等，J Neurosci 19：1049-61，1999)。OPC通过用A2B5 mAb染色来鉴定(Shi等，同上引文；Eisenbarth等，Proc Natl Acad Sci USA 76：4913-7，1979；Raff等，J Neurosci 3：1289-1300，1983)；以培养物中BrdU+/A2B5+双极细胞的百分数定量OPC的增殖。
对于免疫组织化学分析，在0.1M硼酸盐缓冲液中微波处理冰冻切片6分钟。所有一抗和二抗(Ab)分别于4℃孵育过夜和于室温孵育2小时。使用200ng/ml的山羊抗VEGF-A、-C、-D、-R1、-R2和-R3 Ab(R&D Systems)。用Tyramide信号放大试剂盒(TBS Biotin Systems，Perkin Elmer，Life Sciences)扩增反应。在Vegf-c/lacZ和Vegfr-3/lacZ基因敲入小鼠中，用山羊抗β-半乳糖苷酶Ab(Biotrend(1∶500)，之后用抗山羊生物素化的Ab(Amersham)(1∶200)和链霉亲和素-Alexafluor-594(Molecular Probes)(1∶2000)，检测lacZ+细胞。用豚鼠多克隆Ab抗-Glast(Shibata等，J Neurosci17：9212-9，1997)和抗豚鼠Ab缀合的Alexafluor-488(Molecular Probes)(两者均1∶1000稀释)标记放射状神经胶质前体细胞/星形胶质前体细胞。用兔多克隆Ab抗胶质原纤维酸性蛋白(抗GFAP，Dako)(1∶200)和抗兔Ab缀合的Alexafluor-488(Molecular Probes)(1∶1000)检测成熟星形细胞。用1∶500稀释的小鼠单克隆Ab TuJ1(IgG2a；Virginia大学的A.Frankfurter惠赠)和1∶400稀释的cy3-缀合的抗小鼠IgG2a(Jackson)鉴定神经元和轴突。使用小鼠单克隆A2B5 Ab(IgM；美国典型培养物保藏中心，Rockville，MD)，或者兔多克隆抗Olig2 Ab(Sun等，J Neurosci 23：9547-56，2003)或小鼠单克隆O4 Ab(IgM)(Sommer等，DevBiol 83：311-27，1981)检测OPC。抗Olig2 Ab被1∶800稀释，而A2B5和O4Ab被1∶10稀释。用1∶50稀释的单克隆大鼠抗小鼠Ki-67 Ab(Dakocytomation，Denmark)标记增殖的细胞。通过切片和5mM Hoechst 33258(Sigma，St-Louis，MO)一起孵育，观察细胞核。
37℃用极限培养基(MM)或BS(补加1％胎牛血清和9.3μg/ml胰岛素的MM)，在多聚-L-赖氨酸包被的96孔板中培养来自E16.5视神经(OF1小鼠)的离散细胞(2.5×104个细胞/孔)。对于增殖试验，在含有BrdU(1∶1000)和不同浓度的大鼠重组VEGF-C(10-150ng/ml，Reliatech)、人VEGF-C156S(100ng/ml；R&D Systems)或VEGF-A(100ng/ml；R&D Systems)的BS中培养离散的E16.5视神经48小时。对于VEGFR-3阻断实验，细胞与VEGFR-3-Fc(6μg/ml；R&D Systems)预孵育，然后与BrdU、VEGFR-3-Fc和VEGF-C一起培养。
仅在用BrdU处理48小时的培养物中观察到分裂的细胞，说明视神经细胞在该发育阶段有相当长的细胞周期。VEGF-C的存在诱导了OPC的剂量依赖性有丝分裂反应，在150ng/ml VEGF-C存在时BrdU+/A2B5+细胞的数量加倍。相反地，VEGF-A不诱导统计学显著的OPC增殖。VEGF-A和VEGF-C均与VEGFR-2结合，但仅VEGF-C结合VEGFR-3。响应VEGF-C出现的选择性增殖提示，该信号转导由VEGFR-3介导。在用VEGF-C处理前用可溶性VEGFR-3-Fc预先孵育培养物，阻断了VEGF-C对OPC的增殖作用，细胞增殖仅比对照水平稍高。而且，人VEGF-C的重组突变形式(VEGF-C156S)不结合VEGFR-2(Joukov等，J.Biol.Chem 273：6599-602，1998)，其也显著地增加OPC增殖，显示出超过对照细胞大约50％的增加，证实VEGF-C的增殖作用通过VEGFR-3的活化来介导。
为了检查放射状神经胶质前体细胞/星形胶质前体细胞(radialglial/astroglial precursor cells)和星形胶质细胞是否可以在VEGF-C存在下被诱导而增殖，使用抗Glast标记放射状神经胶质前体细胞/星形胶质前体细胞并用抗GFAP标记成熟星形胶质细胞，重复了这些增殖试验。VEGF-C不诱导Glast+前体细胞和GFAP+星形胶质细胞的增殖增加，神经胶质细胞的增殖大约与对照细胞相同。这些数据提示，VEGF-C对OPC但不对星形胶质细胞具有促有丝分裂作用，该作用似乎由VEGFR-3介导。
OPC的存活直接依赖于VEGF-C
VEGF-C对OPC的营养作用进一步通过检测其促进细胞存活的能力进行了探究。
对于存活试验，在极限培养基(MM)或BS中在存在大鼠重组VEGF-A(100ng/ml)、大鼠VEGF-C(100ng/ml)、PDGF-A(10ng/ml；Pepro Tech.Inc.，Rocky Hill，NJ)或bFGF(20ng/ml；Roche)、大鼠VEGF-C(100ng/ml)+VEGFR-3-Fc(6μg/ml)、VEGF-C156S(100ng/ml)下，培养E16.5离散的视神经20小时，104个细胞/孔。将无细胞核浓缩和断裂的Hoechst+细胞鉴定为存活细胞。对于每孔，计数存活的Hoechst+和Hoechst+A2B5+细胞的总数，用Student t检验比较数据。
离散E16.5视神经细胞，并在单独的或补加了VEGF-C或其它生长因子的极限培养基(MM)存在下低密度(104细胞/孔)培养。20小时的培养后，通过计数A2B5+细胞的数量，定量OPC的存活。在此短培养期中，OPC不复制，存活的OCP的数量反映培养基中的存活性质。比较对VEGF-A(100ng/ml)和VEGF-C(100ng/ml)产生的增殖应答，结果显示VEGF-A对OPC不具有存活作用，而VEGF-C诱导存活的OPC的数量增加5倍(对照：37±7A2B5+细胞/孔；VEGF-C：183±38 A2B5+细胞/孔)。然后，将VEGF-C的存活作用与其它已知促进神经胶质细胞存活的因子例如胰岛素(9.3μg/ml)、bFGF(20ng/ml)或PDGF-A(10ng/ml)(其是表达PDGFR-α的OPC的营养因子(Barres等，Cell 70：31-46，1992；Richardson等，Cell 53：309-19，1988)进行比较。与VEGF-C不同，胰岛素、bFGF、PDGF-A均不能提高A2B5+OPC在该发育阶段的存活。总之，这些数据说明，VEGF-C对PDGF-A非依赖性的OPC具有特异的促生存作用。
VEGF-C诱导OPC迁移
由于视神经是自腹侧间脑吸引OPC的分泌因子的来源，故检查VEGF-C是否能够作为视神经交叉OPC的化学引诱物。
使用多聚-L-赖氨酸包被的Transwell Permeable支持物(Corning)，实施趋化性试验。从E18.5 OF1(Iffa-Credo，法国)分离视神经交叉区域，并将离散的视神经交叉细胞(7.5×104)加入transwell室的上方孔，细胞在含有N2补充物(Gibco)的DMEM(Gibco)和F12培养基(Promocell)的50/50混合物中。向下方孔加入补加了VEGF-C(10，50或100ng/ml，Reliatech)或VEGF-C156S(100ng/ml；R&D Systems)的相同培养基。37℃温育16小时后，在PBS中的4％低聚甲醛(PFA)中固定膜15分钟，滤膜底面上的OPC用抗Olig2和抗O4免疫标记。为了定量OPC/mm2的数量，每孔拍摄(×20物镜)10-14个视野，使用Metamorph软件(University Imaging Corporation，US，6.1.r4版本)分析。使用Mann-Whitney试验比较6个独立实验的数据。
将来源于E18.5视神经交叉区域的OPC用于显微趋化室试验(microchemotaxis chamber assays)，其中在下方孔中存在单独的对照培养基或补加了递增浓度的VEGF-C(10-100ng/ml)的培养基。用抗Olig2抗体染色后定量迁移的OPC，并通过用O4抗体(OPC的一个标志，Sommer等，Dev Biol83：311-27，1981)双染色，验证Olig2+细胞的少突胶质表型。大多数的Olig2+细胞是O4+OPC(Olig2+O4+/Olig2+：92±6)。与对照相比，50ng/ml和100ng/mlVEGF-C显著地增加了通过滤膜的迁移的Olig2+细胞的数量，显示出迁移细胞增加2倍以上。较低VEGF-C浓度(10ng/ml)对OPC的迁移无显著作用。将VEGF-C加入上方和下方室两室都显示出对OPC迁移的显著刺激(大约2倍)，提示VEGF-C对视神经交叉OPC具有化学动力学作用(chemokinetic role)而非化学吸引作用(chemoattractive effect)。在用VEGF-C156S处理的细胞中观察到OPC迁移的增加，但是其比VEGF-C诱导较少的迁移，说明VEGFR-3介导VEGF-C的此刺激作用。因此，视神经分泌的VEGF-C可能募集视神经交叉OPC进入该神经并移生该神经(colonize the nerve)。
实施例17B
在VEGF-C缺陷小鼠的胚胎和新生视神经中OPC严重耗竭
VEGF-C影响视神经的胚胎发育。Vegf-c-/-小鼠展示出淋巴脉管系统发育不全和组织水肿，导致纯合动物在E18.5之前死亡(Karkkainen等，NatImmunol 5：74-80，2004)。基于上述体外发现，在VEGF-C缺陷小鼠中评价VEGF-C调节少突胶质细胞发育的能力。为了确定VEGF-C对胚胎发育的影响，检查了处于胚胎期E15.5和E17.5的vegf-c+/-和vegf-c-/-突变体的视神经。
在E15.5，检查了视网膜神经节细胞(RGC)和视神经的固有细胞群(基本上由放射状神经胶质前体细胞/星形胶质前体细胞组成)。在视网膜中，表达VEGF-C的β-gal+RGC正常存在于+/-和-/-胚胎中。使用TuJl mAb标记轴突，观察到RGC轴突的数量和成束现象在野生型(WT)和Vegf-c-/-动物之间是相似的。通过在系列切片上计数Hoechst+细胞核评价的视神经总数在WT和Vegf-c-/-(+/+：2317；-/-：1821，各组n＝1只动物)中是相似的。因此，在E15.5，在缺乏Vegf-c时，视神经的放射状神经胶质前体细胞/星形胶质前体细胞和RGC的神经元群体似乎均未受到影响。
此外，分析E17.5的vegf-c突变体的少突胶质表型。在WT、Vegf-c+/-和Vegf-c-/-胚胎的视神经交叉和视神经的水平冰冻切片上定量Olig2+OPC数量。在杂合和纯合Vegf-c胚胎的视神经交叉中，与对照相比Olig2+细胞数量减少50％以上(+/+：912±55，+/-：275±39；-/-：398±175，各组n＝2只动物)。在Vegf-c+/-和-/-动物的视神经中，观察到与对照相比Olig2+细胞损失大约85％(+/+：576±63，+/-：83±35；-/-：112±37，各组n＝3只动物)。因此，在E17.5，杂合和纯合Vegf-c突变体的视神经中OPC群体均被严重地耗竭。
到E18.5时Vegf-c-/-胚胎的致死性使得不可能分析其少突胶质表型的演化。相反地，Vegf-c+/-小鼠存活至出生后，尽管有皮肤淋巴发育不全和淋巴水肿。在P1，与WT同窝出生仔相比，Vegf-c+/-的视神经中Olig2+OPC的数量仍然减少50％，相当于每神经损失大约1000个OPC(+/+：2030±30，+/-：1038±144，n＝1)。通过计数每神经的Hoechs+细胞核总数，显示出细胞数量的相应减少(+/+：10648±264，+/-：9286±198)，说明OPC的选择性耗竭。在E17.5和P1之间比较Vegf-c+/-小鼠，显示OPC群体在P1部分恢复。
为了确定此部分回复是否由P1时细胞增殖的增加所致，用Ki-67和抗Olig2抗体标记已经进入此细胞周期的细胞。视神经中Ki-67+分裂细胞的数量(Vegf-c+/+：72±7个细胞/神经，Vegf-c+/-：61±17个细胞/神经，n＝2)以及增殖的OPC的百分数(Ki-67+Olig2+/Olig2+细胞：Vegf-c+/+：8.44±1，Vegf-c+/-：7.7±0.8)在WT和Vegf-c+/-小鼠之间无显著区别。因此，Vegf-c+/-幼崽中由OPC引起的视神经的部分群体恢复不是由该神经中已经存在的OPC的增殖所致，而更可能是由于新一波的来自腹侧间脑的OPC的移生(colonization)所致。
VEGF-C在CNS中的作用以前从未有过报道，这些结果说明VEGF-C引发该神经的移生和先驱(pioneer)OPC的扩充。VEGF-C/VEGFR-3信号转导系统由此似乎是少突胶质细胞发育所必需的。这些结果暗示VEGF-C在少突胶质细胞病理，例如多发性硬化中的作用，在这些疾病中VEGF-C和VEGFR-3可能是恢复少突胶质细胞的潜在治疗靶标。
实施例17C
VEGF-C和PDGF在少突胶质细胞前体细胞生长中的作用
在PDGF-A缺陷动物中对少突胶质发生的先前研究(Fruttiger等，Development 126：457-67，1999)指出，尽管在PDGF-A缺陷动物中少突胶质细胞已经从脊髓和视神经中消失，但是它们在脑干中仍正常发育并且仍然存在于皮层中。这说明，存在其它的生长因子刺激少突胶质细胞生长、存活和分化。
为了研究PDGF和VEGF-C在少突胶质细胞发育中的作用，通过plp-GFP转基因小鼠(Spassky等，Development，128：4993-5004，2001)和杂合vegf-c缺陷动物(Karkkainen等，同上引文)杂交，制备plp-GFP×vegf-c+/-小鼠。使用针对Olig2+细胞的免疫染色，自E9.5开始进入成年阶段，按上述检查plp细胞的体内发育。
预期plp细胞的发育将在VEGF-C不存在时受损，至少在PLP、VEGF-C和VEGFR-3表达的区域，例如视神经和嗅球中将如此。此外，使用plp-GFP×vegf-c+/-系确定VEGF-C在OPC发育的哪一步起作用。在发育早期(E9.5-14.5)脑室层中plp细胞的不足和不存在说明，VEGF-C是plp细胞特化所必需的。在胚胎发育后期观察到的plp细胞群体的异常提示，VEGF-C对plp前体细胞的存活、增殖或迁移起作用。而且，出生后小鼠中的可检测表型说明，VEGF-C影响plp少突胶质细胞的分化和髓鞘脂成熟。
为了进一步研究PDGF和VEGF-C对少突胶质细胞发育的双重作用，通过杂合pdgf-a敲除小鼠(Bostrom等，Cell，85：863-73，1996)和杂合vegf-c缺陷小鼠(Kakkainen等，同上引文)的杂交，产生pdgf-a+/-×vegf-c+/-小鼠。在E12.5天开始检查少突胶质细胞的发育。
预期pdgf-a+/-×vegf-c+/-动物将比仅仅pdgf-a缺陷的动物显示出更严重的少突胶质表型。此观察结果可以证实不同少突胶质细胞谱系的存在和说明少突胶质发育的区域特异性。pdgf-a+/-×vegf-c+/-双敲除动物中OPC的存在说明，存在不对PDGF-A或VEGF-C产生应答的其它OPC来源。
实施例18
在脱髓鞘疾病动物模型中进行VEGF-C或VEGF-D处理
少突胶质细胞是蛋白脂质性蛋白质和髓鞘碱性蛋白(MBP)——髓鞘的首要组分——的主要生产者。髓鞘在中枢和周围神经系统中造成神经的绝缘(insultation)并辅助神经信号传导。以中枢或周围神经的脱髓鞘为特征的疾病或病症导致神经学功能和神经信号传递受损。
可以使用脱髓鞘疾病的动物模型研究治疗人类脱髓鞘疾病的潜在治疗剂和治疗方案。例如，使用啮齿类动物脊髓损伤模型(Bambakidis等，J.Neurosurg.99：70-5，2003)，研究体内VEGF-C对脱髓鞘的影响。此外，存在许多脱髓鞘疾病的动物模型，包括用于Guilane-Barre综合症(Zou等，J.Neuroimmunol.98：168-75，1999)、多发性硬化(Begolka等，J Immunol.161：4437-46，1998)、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(Jander等，J Neuroimmunol.114：253-8，2001)、遗传性周围神经病(Schmid等，J.Neurosci.20：729-35，2000)和化学诱导的脱髓鞘的模型(Matsushima等Brain Pathol.11：107-16，2001)。人类脱髓鞘疾病，如Pelizaeus-Merzbacher(PM)病(Boulloche等，JChild Neurol.1：233-9，1986)，也有动物模型，例如啮齿类动物中突变的plp(蛋白脂质蛋白)基因，包括Jimpy(jp)小鼠(Gencic等，J Neurosci.10：117-24，1990)或髓鞘脂缺陷大鼠(Boison等，EMBO J.8：3295-302，1989)。所有这些均并入此处作为参考。
具有显著临床重要性的一种脱髓鞘疾病是自身免疫病多发性硬化(MS)。MS患者表现出受损的运动神经元功能，在疾病晚期显示出受损的精神功能(mental function)。MS患者在病理学上表现出称作斑块的神经脱髓鞘区域。存在MS的几种实验动物模型，例如，在小鼠(Begolka等，J Immunol.161：4437-46，1998；Liblau等，Trends Neurosci.3：134-5，2001)或大鼠(Penkowa等，J Neurosci Res.2003 72：574-86，2003)中的实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)。患有EAE的动物表现为以受损的运动能力为特征的复发-缓解型脱髓鞘病形式，可以用于体内研究VEGF-C或VEGF-D处理对少突胶质细胞损伤的进程和神经轴突脱髓鞘的影响。
为了检查VEGF-C和VEGFR-3在MS样斑中的表达，在一个实例中，用抗原性蛋白脂质蛋白(proteolipid protein)在佐剂中或用髓鞘脂少突胶质细胞糖蛋白(MOG)在佐剂中(Begolka等，同上引文；Liblau等，同上引文)免疫SJL/J小鼠，允许小鼠出现复发-缓解型脱髓鞘病。在不同时间点，例如，疾病症状(尾软弱无力和行走能力受损)发作之前或之后第5天、第7天、第10天、第12天、第14天、第16天、第18天或第21天，用预先确定可以有效地诱导少突胶质细胞增殖和损伤轴突重新形成髓鞘的VEGF-C或VEGF-D量，处理动物。经历该病程后处死动物，如Dal Canto等(Mult Scler.1：95-103，1995)所述，评价脑和脊髓的轴突脱髓鞘和重新形成髓鞘的程度。
此外，VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、VEGFR-2、NRP-1或NRP-2在少突胶质细胞中的表达通过用上述相应抗体免疫染色脑和脊髓组织，以及通过使用针对VEGF-C/-D受体的反义核酸探针原位杂交，进行评价。
在VEGF-C或VEGF-D处理的复发-缓解型脱髓鞘病动物中受损轴突重新髓鞘化的增加说明，VEGF-C诱导少突胶质细胞增殖以及随后的髓鞘脂增加，或者诱导已经存在的少突胶质细胞上调表达髓鞘脂产物。此外，在用VEGF-C或VEGF-D处理的患病小鼠中临床症状严重性的降低也说明，VEGF-C/-D处理是MS实验室模型中降低脱髓鞘的严重性的有效疗法，并可能有效地用于人类MS患者。
此外，可以使用多发性硬化的动物模型评价移植的神经干细胞改善疾病症状的效力(Pluchio等，Nature 422：688-94，2003；Totoiu等，Exp.Neurol.187：254-65，2004)。来自动物或者衍生自上述神经干细胞克隆的神经干细胞首先用可检测标志进行标记，例如，通过用LacZ基因或绿色荧光蛋白转染进行标记，之后体外与单独的或与其它上述神经生长因子联合的VEGF-C一起培养，以刺激神经干细胞增殖。培养后，通过静脉内、脑室内或其它适当途径，在EAE疾病诱导(Pluchino等，同上引文)之前、并行地或之后的不同时间，将细胞施用至EAE患病动物或对照动物体内。然后通过免疫标记跟踪移植的细胞，以确定迁移模式和增殖状况。
还考虑，在移植神经干细胞后，将VEGF-C组合物施用给接受了离体刺激的细胞的小鼠以继续促进神经干细胞增殖。进一步地，可以用VEGF-C基因转染少突胶质细胞前体细胞(见Magy等，Ex.Neurol.184：912-22，2003)，然后将细胞植入患有脱髓鞘疾病的动物体内。
在接受了VEGF-C/D刺激的细胞和/或接受了补充的VEGF-C/D处理的动物中，脊髓中髓鞘重新形成的增加，或者通过Ki-67染色检测到的少突胶质细胞前体增殖的增加，说明VEGF-C和/或VEGF-D是刺激少突胶质细胞前体的有效刺激物，并且其在患有脱髓鞘介导的疾病或病症的个体中提供了有用的治疗方法。
可以使用本文所述的联合疗法重复这些程序。
实施例19
用VEGF-C或VEGF-D产物治疗人类脱髓鞘疾病
类似于实施例12和13中描述的用于神经病治疗的方案，用于VEGF-C和VEGF-D治疗人类患者，或者向人类患者施用少突胶质细胞前体细胞，以改善由脱髓鞘疾病导致的状况。中枢神经系统的炎性脱髓鞘性疾病包括多发性硬化和脑白质营养不良。此外，由中枢神经系统中一定程度的脱髓鞘所致的疾病或病症包括苯丙酮酸尿症、脑室周围白质软化(PVL)、HIV-1脑炎(HIVE)、格林-巴利综合征(Guillian-Barre′syndrome，GBS)、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP)、急性运动性轴索型神经病(AMAN)、急性运动感觉性轴索型神经病(AMSAN)、Fisher综合症、急性全自主神经病变(pandysautonomia)和Krabbe氏病。基于VEGF-C和-D在周围神经系统中的高表达，也可以在周围脱髓鞘疾病的治疗中测试VEGF-C或VEGF-D产物，其中所述周围脱髓鞘疾病包括慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病(CIDP)，包括MADSAM(多病灶获得性脱髓鞘感觉运动性神经病，也称作Lewis-Sumner综合症)和DADS(远端获得性脱髓鞘对称性神经病)。
例如，可以将VEGF-C或VEGF-D产物的施用与多种治疗联合以改善多发性硬化患者的症状。目前用于MS的许多疗法包括免疫调节性治疗，例如干扰素β1-a(Avonex_)、干扰素β1-b(Betaseron_)、Glatiramer acetate(Copaxone_)、干扰素β-1a(Rebif_)、Natalizumab(Antegren)——一种抗α4整联蛋白的抗体、daclizumab——一种抗CD25分子的抗体、或者抗肿瘤药物米托蒽醌(Novantrone_)(在非常具有攻击性的情况下)。此外考虑，本发明也包括将VEGF-C或VEGF-D产物与旨在缓解炎症的药物，包括非类固醇抗炎药(NSAID)，镇痛药、糖皮质激素、缓和疾病的抗风湿药(DMARD)或生物学反应调节物联合施用的制剂。
将任一种上述免疫调节性治疗以推荐剂量施用给MS患者，例如，Rebif以44mcg的剂量每周3次施用，并且给予患者治疗剂量的VEGF-C或VEGF-D产物。每种产物的剂量可以针对联合疗法进行优化，例如，由于VEGF-C/D治疗的加入，可以减少MS治疗的量。然后评价患者疾病症状的变化，例如伤残进展的危险性的减少、疾病严重性的恶化更弱、脑中活动性损伤的数量和尺寸的减小(在MRI中显示)、以及第二次病势加重在时间上的任何延迟。考虑将VEGF-C和VEGF-D产物与上述治疗剂放在相同的组合物中给药和/或使用与上述治疗剂相同的方法给药，例如，肌内注射Avonex_，而皮下注射Betaseron_、Glatiramer_和Rebif_。或者，以不同的治疗性组合物通过静脉注射给予VEGF-C/D产物。
此外，在表现由于中枢神经系统中脱髓鞘所致的病症迹象的患者中，可以将VEGF-C或VEGF-D产物直接施用至患者脑或脊髓中，例如通过脑室内或壳核内注射，或者通过使用导管和输注泵(Olson，L. Exp.Neurol.124：5-15(1993))。VEGF-C或VEGF-D以预先确定对患者无毒的治疗有效量施用。可以在单一一剂中或在多剂中施用VEGF-C或VEGF-D，并且可以在一天或一个由治疗医师确定为最有效的时程内多剂施用。也考虑，将VEGF-C或VEGF-D产物施用至患有由中枢神经系统脱髓鞘所致的病症的患者的脑脊液(CSF)中。
还考虑向患有因脱髓鞘所致的病症的患者移植经VEGF-C或VEGF-D处理的干细胞或经处理的少突胶质细胞前体细胞。
具有CNS的多能神经干细胞、神经元祖先细胞或少突胶质细胞/神经胶质细胞祖先细胞的特征的细胞(通过体外试验鉴定)，用VEGF-C或VEGF-D产物处理，或者用表达VEGF-C或VEGF-D产物的病毒载体(例如，腺病毒、腺相关病毒或慢病毒载体)感染，将细胞施用给表现出神经病症的哺乳动物以测定这些细胞的疗效。
这些细胞优选从具有相似MHC基因型的哺乳动物分离。一个方法中，分离并培养胚胎干细胞系以诱导向少突胶质细胞方向的分化。这使用如上所述的少突胶质细胞生长因子实现。可以基于对少突胶质细胞或神经胶质细胞谱系的细胞表面染色，评价细胞的分化状况。随后细胞与VEGF-C一起培养，并转移至患有因中枢神经系统脱髓鞘所致的疾病或病症的患者体内。评价接受少突胶质细胞移植的个体的疾病症状改善，例如使用MRI扫描技术评价损伤大小/髓鞘形成，或者测试患者的运动性和强度，ExpandedDisability Status Scale(EDSS)(O’Connor等，Neurology 62：2038-43，2004)。
由于作为MS治疗剂的生长因子，例如FGF-2、PDGF-A、IGF-2常常具有生血管性质(angiogenic)和/或致癌性，因此，使用这些生长因子的尝试通常都不成功，考虑到VEGF-C具有生淋巴管性质(lymphangiogenic)以及CNS中几乎没有至完全没有淋巴，这提示当用VEGF-C产物治疗时可能最小化有害的生脉管副作用，这使得该因子(包括VEGF-CΔC156)成为神经病治疗的治疗剂开发中的良好候选者。此外，研究提示，VEGFR-3阳性和PDGFR-α阳性OPC是两个不同的细胞群体。因此，通过使用VEGF-C/D和PDGF-A，可以在治疗脱髓鞘疾病患者时获得更宽疗效。
尤其可以考虑，使用通过筛选肽文库或化学化合物文库鉴定的小有机或无机分子代替神经毡蛋白或VEGF-C和VEGF-D多肽来实施这些实施例。鉴定为神经毡蛋白/VEGF-C、VEGFR-3/VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3和/或神经毡蛋白/VEGFR-3相互作用的调节剂的小分子和化学化合物将可以以治疗组合物形式用于治疗需要神经元细胞生长和再生的情况，以及用于制备药物从而治疗以VEGF-C或VEGF-D活性介导的神经元细胞或少突胶质细胞前体细胞生长、迁移或增殖的异常为特征的疾病。
之前描述和举例说明了本发明，但不旨在限制由后随权利要求定义的本发明。
序列表
<110>路德维格癌症研究院(Alitalo et al)
<120>VEGF-C或VEGF-D物质及刺激神经干细胞的方法
<130>28967/39670A
<160>38
<170>PatentIn version 3.0
<210>1
<211>2772
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2772)
<400>1
atg gag agg ggg ctg ccg ctc ctc tgc gcc gtg ctc gcc ctc gtc ctc    48
Met Glu Arg Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Val Leu Ala Leu Val Leu
1               5                   10                  15
gcc ccg gcc ggc gct ttt cgc aac gat gaa tgt ggc gat act ata aaa    96
Ala Pro Ala Gly Ala Phe Arg Asn Asp Glu Cys Gly Asp Thr Ile Lys
            20                  25                  30
att gaa agc ccc ggg tac ctt aca tct cct ggt tat cct cat tct tat    144
Ile Glu Ser Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr
        35                  40                  45
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        115                 120                 125
aca cat ggt gca gga ttt tcc ata cgt tat gaa att ttc aag aga ggt    432
Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly
    130                 135                 140
cct gaa tgt tcc cag aac tac aca aca cct agt gga gtg ata aag tcc    480
Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Thr Pro Ser Gly Val Ile Lys Ser
145                 150                 155                 160
ccc gga ttc cct gaa aaa tat ccc aac agc ctt gaa tgc act tat att    528
Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Ser Leu Glu Cys Thr Tyr Ile
                165                 170                 175
gtc ttt gcg cca aag atg tca gag att atc ctg gaa ttt gaa agc ttt    576
Val Phe Ala Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe
            180                 185                 190
gac ctg gag cct gac tca aat cct cca ggg ggg atg ttc tgt cgc tac    624
Asp Leu Glu Pro Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr
        195                 200                 205
gac cgg cta gaa atc tgg gat gga ttc cct gat gtt ggc cct cac att    672
Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Asp Val Gly Pro His Ile
    210                 215                 220
ggg cgt tac tgt gga cag aaa aca cca ggt cga atc cga tcc tca tcg    720
Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser
225                 230                 235                 240
ggc att ctc tcc atg gtt ttt tac acc gac agc gcg ata gca aaa gaa    768
Gly lle Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu
                245                 250                 255
ggt ttc tca gca aac tac agt gtc ttg cag agc agt gtc tca gaa gat    816
Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Val Ser Glu Asp
            260                 265                 270
ttc aaa tgt atg gaa gct ctg ggc atg gaa tca gga gaa att cat tct    864
Phe Lys Cys Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser
        275                 280                 285
gac cag atc aca gct tct tcc cag tat agc acc aac tgg tct gca g8g    912
Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Ser Thr Asn Trp Ser Ala Glu
    290                 295                 300
cgc tcc cgc ctg aac tac cct gag aat ggg tgg act ccc gga gag gat    960
Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp
305                 310                 315                 320
tcc tac cga gag tgg ata cag gta gac ttg ggc ctt ctg cgc ttt gtc    1008
Ser Tyr Arg Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val
                325                 330                 335
acg gct gtc ggg aca cag ggc gcc att tca aaa gaa acc aag aag aaa    1056
Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys
            340                 345                 350
tat tat gtc aag act tac aag atc gac gtt agc tcc aac ggg gaa gac    1104
Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Lys Ile Asp Val Ser Ser Asn Gly Glu Asp
        355                 360                 365
tgg atc acc ata aaa gaa gga aac aaa cct gtt ctc ttt cag gga aac    1152
Trp Ile Thr Ile Lys Glu Gly Asn Lys Pro Val Leu Phe Gln Gly Asn
    370                 375                 380
acc aac ccc aca gat gtt gtg gtt gca gta ttc ccc aaa cca ctg ata    1200
Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Val Ala Val Phe Pro Lys Pro Leu Ile
385                 390                 395                 400
act cga ttt gtc cga atc aag cct gca act tgg gaa act ggc ata tct    1248
Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Ala Thr Trp Glu Thr Gly Ile Ser
                405                 410                 415
atg aga ttt gaa gta tac ggt tgc aag ata aca gat tat cct tgc tct    1296
Met Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser
            420                 425                 430
gga atg ttg ggt atg gtg tct gga ctt att tct gac tcc cag atc aca    1344
Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr
        435                 440                 445
tca tcc aac caa gga gac aga aac tgg atg cct gaa aac atc cgc ctg    1392
Ser Ser Asn Gln Gly Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu
    450                 455                 460
gta acc agt cgc tct ggc tgg gca ctt cca ccc gca cct cat tcc tac    1440
Val Thr Ser Arg Ser Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ala Pro His Ser Tyr
465                 470                 475                 480
atc aat gag tgg ctc caa ata gac ctg ggg gag gag aag atc gtg agg    1488
Ile Asn Glu Trp Leu Gln Ile Asp Leu Gly Glu Glu Lys Ile Val Arg
                485                 490                 495
ggc atc atc att cag ggt ggg aag cac cga gag aac aag gtg ttc atg    1536
Gly Ile Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met
            500                 505                 510
agg aag ttc aag atc ggg tac agc aac aac ggc tcg gac tgg aag atg    1584
Arg Lys Phe Lys Ile Gly Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Met
        515                 520                 525
atc atg gat gac agc aaa cgc aag gcg aag tct ttt gag ggc aac aac    1632
Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn
    530                 535                 540
aac tat gat aca cct gag ctg cgg act ttt cca gct ctc tcc acg cga    1680
Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Pro Ala Leu Ser Thr Arg
545                 550                 555                 560
ttc atc agg atc tac ccc gag aga gcc act cat ggc gga ctg ggg ctc    1728
Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Gly Gly Leu Gly Leu
                565                 570                 575
aga atg gag ctg ctg ggc tgt gaa gtg gaa gcc cct aca gct gga ccg    1776
Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro
            580                 585                 590
acc act ccc aac ggg aac ttg gtg gat gaa tgt gat gac gac cag gcc    1824
Thr Thr Pro Asn Gly Asn Leu Val Asp Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala
        595                 600                 605
aac tgc cac agt gga aca ggt gat gac ttc cag ctc aca ggt ggc acc    1872
Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr
    610                 6l5                 620
act gtg ctg gcc aca gaa aag ccc acg gtc ata gac agc acc ata caa    1920
Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Val Ile Asp Ser Thr Ile Gln
625                 630                 635                 640
tca gag ttt cca aca tat ggt ttt aac tgt gaa ttt ggc tgg ggc tct    1968
Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser
                645                 650                 655
cac aag acc ttc tgc cac tgg gaa cat gac aat cac gtg cag ctc aag    2016
His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Asn His Val Gln Leu Lys
            660                 665                 670
tgg agt gtg ttg acc agc aag acg gga ccc att cag gat cac aca gga    2064
Trp Ser Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly
        675                 680                 685
gat ggc aac ttc atc tat tcc caa gct gac gaa aat cag aag ggc aaa    2112
Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys
    690                 695                 700
gtg gct cgc ctg gtg agc cct gtg gtt tat tcc cag aac tct gcc cac    2160
Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Asn Ser Ala His
705                 710                 715                 720
tgc atg acc ttc tgg tat cac atg tct ggg tcc cac gtc ggc aca ctc    2208
Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu
                725                 730                 735
agg gtc aaa ctg cgc tac cag aag cca gag gag tac gat cag ctg gtc    2256
Arg Val Lys Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val
            740                 745                 750
tgg atg gcc att gga cac caa ggt gac cac tgg aag gaa ggg cgt gtc    2304
Trp Met Ala Ile Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val
        755                 760                 765
ttg ctc cac aag tct ctg aaa ctt tat cag gtg att ttc gag ggc gaa    2352
Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu
    770                 775                 780
atc gga aaa gga aac ctt ggt ggg att gct gtg gat gac att agt att    2400
Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile
785                 790                 795                 800
aat aac cac att tca caa gaa gat tgt gca aaa cca gca gac ctg gat    2448
Asn Asn His Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Ala Asp Leu Asp
                805                 810                 815
aaa aag aac cca gaa att aaa att gat gaa aca ggg agc acg cca gga    2496
Lys Lys Asn Pro Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly
            820                 825                 830
tac gaa ggt gaa gga gaa ggt gac aag aac atc tcc agg aag cca ggc    2544
Tyr Glu Gly Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly
        835                 840                 845
aat gtg ttg aag acc tta gaa ccc atc ctc atc acc atc ata gcc atg    2592
Asn Val Leu Lys Thr Leu Glu Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met
    850                 855                 860
agc gcc ctg ggg gtc ctc ctg ggg gct gtc tgt ggg gtc gtg ctg tac    2640
Ser Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr
865                 870                 875                 880
tgt gcc tgt tgg cat aat ggg atg tca gaa aga aac ttg tct gcc ctg    2688
Cys Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu
                885                 890                 895
gag aac tat aac ttt gaa ctt gtg gat ggt gtg aag ttg aaa aaa gac    2736
Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp
            900                 905                 910
aaa ctg aat aca cag agt act tat tcg gag gca tga                    2772
Lys Leu Asn Thr Gln Ser Thr Tyr Ser Glu Ala
        915                 920
<210>2
<211>923
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>2
Met Glu Arg Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Val Leu Ala Leu Val Leu
1               5                   10                  15
Ala Pro Ala Gly Ala Phe Arg Asn Asp Glu Cys Gly Asp Thr Ile Lys
            20                  25                  30
Ile Glu Ser Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr
        35                  40                  45
His Pro Ser Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Asp Pro Tyr
    50                  55                  60
Gln Arg Ile Met Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg
65                  70                  75                  80
Asp Cys Lys Tyr Asp Tyr Val Glu Val Phe Asp Gly Glu Asn Glu Asn
                85                  90                  95
Gly His Phe Arg Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Pro Pro VaI
            100                 105                 110
Val Ser Ser Gly Pro Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu
        115                 120                 125
Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly
    130                 135                 140
Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Thr Pro Ser Gly Val Ile Lys Ser
145                 150                 155                 160
Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Ser Leu Glu Cys Thr Tyr Ile
                165                 170                 175
Val Phe Ala Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe
            180                 185                 190
Asp Leu Glu Pro Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr
        195                 200                 205
Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Asp Val Gly Pro His Ile
    210                 215                 220
Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser
225                 230                 235                 240
Gly Ile Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu
                245                 250                 255
Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Val Ser Glu Asp
            260                 265                 270
Phe Lys Cys Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser
        275                 280                 285
Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Ser Thr Asn Trp Ser Ala Glu
    290                 295                 300
Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp
305                 310                 315                 320
Ser Tyr Arg Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val
                325                 330                 335
Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys
            340                 345                 350
Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Lys Ile Asp Val Ser Ser Asn Gly Glu Asp
        355                 360                 365
Trp Ile Thr Ile Lys Glu Gly Asn Lys Pro Val Leu Phe Gln Gly Asn
    370                 375                 380
Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Val Ala Val Phe Pro Lys Pro Leu Ile
385                 390                 395                 400
Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Ala Thr Trp Glu Thr Gly Ile Ser
                405                 410                 415
Met Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser
            420                 425                 430
Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr
        435                 440                 445
Ser Ser Asn Gln Gly Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu
    450                 455                 460
Val Thr Ser Arg Ser Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ala Pro His Ser Tyr
465                 470                 475                 480
Ile Asn Glu Trp Leu Gln Ile Asp Leu Gly Glu Glu Lys Ile Val Arg
                485                 490                 495
Gly Ile Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met
            500                 505                 510
Arg Lys Phe Lys Ile Gly Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Met
        515                 520                 525
Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn
    530                 535                 540
Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Pro Ala Leu Ser Thr Arg
545                 550                 555                 560
Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Gly Gly Leu Gly Leu
                565                 570                 575
Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro
            580                 585                 590
Thr Thr Pro Asn Gly Asn Leu Val Asp Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala
        595                 600                 605
Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr
    610                 615                 620
Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Val Ile Asp Ser Thr Ile Gln
625                 630                 635                 640
Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser
                645                 650                 655
His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Asn His Val Gln Leu Lys
            660                 665                 670
Trp Ser Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly
        675                 680                 685
Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys
    690                 695                 700
Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Asn Ser Ala His
705                 710                 715                 720
Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu
                725                 730                 735
Arg Val Lys Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val
            740                 745                 750
Trp Met Ala Ile Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val
        755                 760                 765
Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu
    770                 775                 780
Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile
785                 790                 795                 800
Asn Asn His Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Ala Asp Leu Asp
                805                 810                 815
Lys Lys Asn Pro Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly
            820                 825                 830
Tyr Glu Gly Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly
        835                 840                 845
Asn Val Leu Lys Thr Leu Glu Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met
    850                 855                 860
Ser Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr
865                 870                 875                 880
Cys Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu
                885                 890                 895
Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp
            900                 905                 910
Lys Leu Asn Thr Gln Ser Thr Tyr Ser Glu Ala
        915                 920
<210>3
<211>2781
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2781)
<400>3
atg gat atg ttt cct ctc acc tgg gtt ttc tta gcc ctc tac ttt tca    48
Met Asp Met Phe Pro Leu rhr Trp Val Phe Leu Ala Leu ryr Phe Ser
1               5                   10                  15
aga cac caa gtg aga ggc caa cca gac cca ccg tgc gga ggt cgt ttg    96
Arg His Gln Val Arg Gly Gln Pro Asp Pro Pro Cys Gly Gly Arg Leu
            20                  25                  30
aat tcc aaa gat gct ggc tat atc acc tct ccc ggt tac ccc cag gac    144
Asn Ser Lys Asp Ala Gly Tyr Ile Thr Ser Pro Gly Tyr Pro Gln Asp
        35                  40                  45
tac ccc tcc cac cag aac tgc gag tgg att gtt tac gcc ccc gaa ccc    192
Tyr Pro Ser His Gln Asn Cys Glu Trp Ile Val Tyr Ala Pro Glu Pro
    50                  55                  60
aac cag aag att gtc ctc aac ttc aac cct cac ttt gaa atc gag aag    240
Asn Gln Lys Ile Val Leu Asn Phe Asn Pro His Phe Glu Ile Glu Lys
65                  70                  75                  80
cac gac tgc aag tat gac ttt atc gag att cgg gat ggg gac agt gaa    288
His Asp Cys Lys Tyr Asp Phe Ile Glu Ile Arg Asp Gly Asp Ser Glu
                85                  90                  95
tcc gca gac ctc ctg ggc aaa cac tgt ggg aac atc gcc ccg ccc acc    336
Ser Ala Asp Leu Leu Gly Lys His Cys Gly Asn Ile Ala Pro Pro Thr
            100                 105                 110
atc atc tcc tcg ggc tcc atg ctc tac atc aag ttc acc tcc gac tac    384
Ile Ile Ser Ser Gly Ser Met Leu Tyr Ile Lys Phe Thr Ser Asp Tyr
        1l5                 120                 125
gcc cgg cag ggg gca ggc ttc tct ctg cgc tac gag atc ttc aag aca    432
Ala Arg Gln Gly Ala Gly Phe Ser Leu Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Thr
    130                 135                 140
ggc tct gaa gat tgc tca aaa aac ttc aca agc ccc aac ggg acc atc    480
Gly Ser Glu Asp Cys Ser Lys Asn Phe Thr Ser Pro Asn Gly Thr Ile
145                 150                 155                 160
gaa tct cct ggg ttt cct gag aag tat cca cac aac ttg gac tgc acc    528
Glu Ser Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro His Asn Leu Asp Cys Thr
                165                 170                 175
ttt acc atc ctg gcc aaa ccc aag atg gag atc atc ctg cag ttc ctg    576
Phe Thr Ile Leu Ala Lys Pro Lys Met Glu Ile Ile Leu Gln Phe Leu
            180                 185                 190
atc ttt gac ctg gag cat gac cct ttg cag gtg gga gag ggg gac tgc    624
Ile Phe Asp Leu Glu His Asp Pro Leu Gln Val Gly Glu Gly Asp Cys
        195                 200                 205
aag tac gat tgg ctg gac atc tgg gat ggc att cca cat gtt ggc ccc    672
Lys Tyr Asp Trp Leu Asp Ile Trp Asp Gly Ile Pro His Val Gly Pro
    210                 215                 220
ctg att ggc aag tac tgt ggg acc aaa aca ccc tct gaa ctt cgt tca    720
Leu Ile Gly Lys Tyr Cys Gly Thr Lys Thr Pro Ser Glu Leu Arg Ser
225                 230                 235                 240
tcg acg ggg atc ctc tcc ctg acc ttt cac acg gac atg gcg gtg gcc    768
Ser Thr Gly Ile Leu Ser Leu Thr Phe His Thr Asp Met Ala Val Ala
                245                 250                 255
aag gat ggc ttc tct gcg cgt tac tac ctg gtc cac caa gag cca cta    816
Lys Asp Gly Phe Ser Ala Arg Tyr Tyr Leu Val His Gln Glu Pro Leu
            260                 265                 270
gag aac ttt cag tgc aat gtt cct ctg ggc atg gag tct ggc cgg att    864
Glu Asn Phe Gln Cys Asn Val Pro Leu Gly Met Glu Ser Gly Arg Ile
        275                 280                 285
gct aat gaa cag atc agt gcc tca tct acc tac tct gat ggg agg tgg    912
Ala Asn Glu Gln Ile Ser Ala Ser Ser Thr Tyr Ser Asp Gly Arg Trp
    290                 295                 300
acc cct caa caa agc cgg ctc cat ggt gat  gac aat ggc tgg acc ccc   960
Thr Pro Gln Gln Ser Arg Leu His Gly Asp Asp Asn Gly Trp Thr Pro
305                 310                 315                 320
aac ttg gat tcc aac aag gag tat ctc cag gtg gac ctg cgc ttt tta    1008
Asn Leu Asp Ser Asn Lys Glu Tyr Leu Gln Val Asp Leu Arg Phe Leu
                325                 330                 335
acc atg ctc acg gcc atc gca aca cag gga gcg att tcc agg gaa aca    1056
Thr Met Leu Thr Ala Ile Ala Thr Gln Gly Ala Ile Ser Arg Glu Thr
            340                 345                 350
cag aat ggc tac tac gtc aaa tcc tac aag ctg gaa gtc agc act aat    1104
Gln Asn Gly Tyr Tyr Val Lys Ser Tyr Lys Leu Glu Val Ser Thr Asn
        355                 360                 365
gga gag gac tgg atg gtg tac cgg cat ggc aaa aac cac aag gta ttt    1152
Gly Glu Asp Trp Met Val Tyr Arg His Gly Lys Asn His Lys Val Phe
    370                 375                 380
caa gcc aac aac gat gca act gag gtg gtt ctg aac aag ctc cac gct    1200
Gln Ala Asn Asn Asp Ala Thr Glu Val Val Leu Asn Lys Leu His Ala
385                 390                 395                 400
cca ctg ctg aca agg ttt gtt aga atc cgc cct cag acc tgg cac tca    1248
Pro Leu Leu Thr Arg Phe Val Arg Ile Arg Pro Gln Thr Trp His Ser
                405                 410                 415
ggt atc gcc ctc cgg ctg gag ctc ttc ggc tgc cgg gtc aca gat gct    1296
Gly Ile Ala Leu Arg Leu Glu Leu Phe Gly Cys Arg Val Thr Asp Ala
            420                 425                 430
ccc tgc tcc aac atg ctg ggg atg ctc tca ggc ctc att gca gac tcc    1344
Pro Cys Ser Asn Met Leu Gly Met Leu Ser Gly Leu Ile Ala Asp Ser
        435                 440                 445
cag atc tcc gcc tct tcc acc cag gaa tac ctc tgg agc ccc agt gca    1392
Gln Ile Ser Ala Ser Ser Thr Gln Glu Tyr Leu Trp Ser Pro Ser Ala
    450                 455                 460
gcc cgc ctg gtc agc agc cgc tcg ggc tgg ttc cct cga atc cct cag    1440
Ala Arg Leu Val Ser Ser Arg Ser Gly Trp Phe Pro Arg Ile Pro Gln
465                 470                 475                 480
gcc cag ccc ggt gag gag tgg ctt cag gta gat ctg gga aca ccc aag    1488
Ala Gln Pro Gly Glu Glu Trp Leu Gln Val Asp Leu Gly Thr Pro Lys
                485                 490                 495
aca gtg aaa ggt gtc atc atc cag gga gcc cgc gga gga gac agt atc    1536
Thr Val Lys Gly Val Ile Ile Gln Gly Ala Arg Gly Gly Asp Ser Ile
            500                 505                 510
act gct gtg gaa gcc aga gca ttt gtg cgc aag ttc aaa gtc tcc tac    1584
Thr Ala Val Glu Ala Arg Ala Phe Val Arg Lys Phe Lys Val Ser Tyr
        515                 520                 525
agc cta aac ggc aag gac tgg gaa tac att cag gac ccc agg acc cag    1632
Ser Leu Asn Gly Lys Asp Trp Glu Tyr Ile Gln Asp Pro Arg Thr Gln
    530                 535                 540
cag cca aag ctg ttc gaa ggg aac atg cac tat gac acc cct gac atc    1680
Gln Pro Lys Leu Phe Glu Gly Asn Met His Tyr Asp Thr Pro Asp Ile
545                 550                 555                 560
cga agg ttt gac ccc att ccg gca cag tat gtg cgg gta tac ccg gag    1728
Arg Arg Phe Asp Pro Ile Pro Ala Gln Tyr Val Arg Val Tyr Pro Glu
                565                 570                 575
agg tgg tcg ccg gcg ggg att ggg atg cgg ctg gag gtg ctg ggc tgt    1776
Arg Trp Ser Pro Ala Gly Ile Gly Met Arg Leu Glu Val Leu Gly Cys
            580                 585                 590
gac tgg aca gac tcc aag ccc acg gta aaa acg ctg gga ccc act gtg    1824
Asp Trp Thr Asp Ser Lys Pro Thr Val Lys Thr Leu Gly Pro Thr Val
        595                 600                 605
aag agc gaa gag aca acc acc ccc tac ccc acc gaa gag gag gcc aca    1872
Lys Ser Glu Glu Thr Thr Thr Pro Tyr Pro Thr Glu Glu Glu Ala Thr
    610                 615                 620
gag tgt ggg gag aac tgc agc ttt gag gat gac aaa gat ttg cag ctc     1920
Glu Cys Gly Glu Asn Cys Ser Phe Glu Asp Asp Lys Asp Leu Gln Leu
625                 630                 635                 640
cct tcg gga ttc aat tgc aac ttc gat ttc ctc gag gag ccc tgt ggt     1968
Pro Ser Gly Phe Asn Cys Asn Phe Asp Phe Leu Glu Glu Pro Cys Gly
                645                 650                 655
tgg atg tat gac cat gcc aag tgg ctc cgg acc acc tgg gcc agc agc     2016
Trp Met Tyr Asp His Ala Lys Trp Leu Arg Thr Thr Trp Ala Ser Ser
            660                 665                 670
tcc agc cca aac gac cgg acg ttt cca gat gac agg aat ttc ttg cgg     2064
Ser Ser Pro Asn Asp Arg Thr Phe Pro Asp Asp Arg Asn Phe Leu Arg
        675                 680                 685
ctg cag agt gac agc cag aga gag ggc cag tat gcc cgg ctc atc agc     2112
Leu Gln Ser Asp Ser Gln Arg Glu Gly Gln Tyr Ala Arg Leu Ile Ser
    690                 695                 700
ccc cct gtc cac ctg ccc cga agc ccg gtg tgc atg gag ttc cag tac     2160
Pro Pro Val His Leu Pro Arg Ser Pro Val Cys Met Glu Phe Gln Tyr
705                 710                 715                 720
cag gcc acg ggc ggc cgc ggg gtg gcg ctg cag gtg gtg cgg gaa gcc     2208
Gln Ala Thr Gly Gly Arg Gly Val Ala Leu Gln Val Val Arg Glu Ala
                725                 730                 735
agc cag gag agc aag ttg ctg tgg gtc atc cgt gag gac cag ggc ggc     2256
Ser Gln Glu Ser Lys Leu Leu Trp Val Ile Arg Glu Asp Gln Gly Gly
            740                 745                 750
gag tgg aag cac ggg cgg atc atc ctg ccc agc tac gac atg gag tac     2304
Glu Trp Lys His Gly Arg Ile Ile Leu Pro Ser Tyr Asp Met Glu Tyr
        755                 760                 765
cag att gtg ttc gag gga gtg ata ggg aaa gga cgt tcc gga gag att     2352
Gln Ile Val Phe Glu Gly Val Ile Gly Lys Gly Arg Ser Gly Glu Ile
    770                 775                 780
gcc att gat gac att cgg ata agc act gat gtc cca ctg gag aac tgc     2400
Ala Ile Asp Asp Ile Arg Ile Ser Thr Asp Val Pro Leu Glu Asn Cys
785                 790                 795                 800
atg gaa ccc atc tcg gct ttt gca gtg gac atc cca gaa ata cat gag     2448
Met Glu Pro Ile Ser Ala Phe Ala Val Asp Ile Pro Glu Ile His Glu
                805                 810                 815
aga gaa gga tat gaa gat gaa att gat gat gaa tac gag gtg gac tgg     2496
Arg Glu Gly Tyr Glu Asp Glu Ile Asp Asp Glu Tyr Glu Val Asp Trp
            820                 825                 830
agc aat tct tct tct gca acc tca ggg tct ggc gcc ccc tcg acc gac     2544
Ser Asn Ser Ser Ser Ala Thr Ser Gly Ser Gly Ala Pro Ser Thr Asp
        835                 840                 845
aaa gaa aag agc tgg ctg tac acc ctg gat ccc atc ctc atc acc atc     2592
Lys Glu Lys Ser Trp Leu Tyr Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile
    850                 855                 860
atc gcc atg agc tca ctg ggc gtc ctc ctg ggg gcc acc tgt gca ggc     2640
Ile Ala Met Ser Ser Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala rhr Cys Ala Gly
865                 870                 875                 880
ctc ctg ctc tac tgc acc tgt tcc tac tcg ggc ctg agc tcc cga agc     2688
Leu Leu Leu Tyr Cys Thr Cys Ser Tyr Ser Gly Leu Ser Ser Arg Ser
                885                 890                 895
tgc acc aca ctg gag aac tac aac ttc gag ctc tac gat ggc ctt aag     2736
Cys Thr Thr Leu Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Tyr Asp Gly Leu Lys
            900                 905                 910
cac aag gtc aag atg aac cac caa aag tgc tgc tcc gag gca tga         2781
His Lys Val Lys Met Asn His Gln Lys Cys Cys Ser Glu Ala
        915                 920                 925
<210>4
<211>926
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>4
Met Asp Met Phe Pro Leu Thr Trp Val Phe Leu Ala Leu Tyr Phe Ser
1               5                   10                  15
Arg His Gln Val Arg Gly Gln Pro Asp Pro Pro Cys Gly Gly Arg Leu
            20                  25                  30
Asn Ser Lys Asp Ala Gly Tyr Ile Thr Ser Pro Gly Tyr Pro Gln Asp
        35                  40                  45
Tyr Pro Ser His Gln Asn Cys Glu Trp Ile Val Tyr Ala Pro Glu Pro
    50                  55                  60
Asn Gln Lys Ile Val Leu Asn Phe Asn Pro His Phe Glu Ile Glu Lys
65                  70                  75                  80
His Asp Cys Lys Tyr Asp Phe Ile Glu Ile Arg Asp Gly Asp Ser Glu
                85                  90                  95
Ser Ala Asp Leu Leu Gly Lys His Cys Gly Asn Ile Ala Pro Pro Thr
            100                 105                 110
Ile Ile Ser Ser Gly Ser Met Leu Tyr Ile Lys Phe Thr Ser Asp Tyr
        115                 120                 125
Ala Arg Gln Gly Ala Gly Phe Ser Leu Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Thr
    130                 135                 140
Gly Ser Glu Asp Cys Ser Lys Asn Phe Thr Ser Pro Asn Gly Thr Ile
145                 150                 155                 160
Glu Ser Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro His Asn Leu Asp Cys Thr
                165                 170                 175
Phe Thr Ile Leu Ala Lys Pro Lys Met Glu Ile Ile Leu Gln Phe Leu
            180                 185                 190
Ile Phe Asp Leu Glu His Asp Pro Leu Gln Val Gly Glu Gly Asp Cys
        195                 200                 205
Lys Tyr Asp Trp Leu Asp Ile Trp Asp Gly Ile Pro His Val Gly Pro
    210                 215                 220
Leu Ile Gly Lys Tyr Cys Gly Thr Lys Thr Pro Ser Glu Leu Arg Ser
225                 230                 235                 240
Ser Thr Gly Ile Leu Ser Leu Thr Phe His Thr Asp Met Ala Val Ala
                245                 250                 255
Lys Asp Gly Phe Ser Ala Arg Tyr Tyr Leu Val His Gln Glu Pro Leu
            260                 265                 270
Glu Asn Phe Gln Cys Asn Val Pro Leu Gly Met Glu Ser Gly Arg Ile
        275                 280                 285
Ala Asn Glu Gln Ile Ser Ala Ser Ser Thr Tyr Ser Asp Gly Arg Trp
    290                 295                 300
Thr Pro Gln Gln Ser Arg Leu His Gly Asp Asp Asn Gly Trp Thr Pro
305                 310                 315                 320
Asn Leu Asp Ser Asn Lys Glu Tyr Leu Gln Val Asp Leu Arg Phe Leu
                325                 330                 335
Thr Met Leu Thr Ala Ile Ala Thr Gln Gly Ala Ile Ser Arg Glu Thr
            340                 345                 350
Gln Asn Gly Tyr Tyr Val Lys Ser Tyr Lys Leu Glu Val Ser Thr Asn
        355                 360                 365
Gly Glu Asp Trp Met Val Tyr Arg His Gly Lys Asn His Lys Val Phe
    370                 375                 380
Gln Ala Asn Asn Asp Ala Thr Glu Val Val Leu Asn Lys Leu His Ala
385                 390                 395                 400
Pro Leu Leu Thr Arg Phe Val Arg Ile Arg Pro Gln Thr Trp His Ser
                405                 410                 415
Gly Ile Ala Leu Arg Leu Glu Leu Phe Gly Cys Arg Val Thr Asp Ala
            420                 425                 430
Pro Cys Ser Asn Met Leu Gly Met Leu Ser Gly Leu Ile Ala Asp Ser
        435                 440                 445
Gln Ile Ser Ala Ser Ser Thr Gln Glu Tyr Leu Trp Ser Pro Ser Ala
    450                 455                 460
Ala Arg Leu Val Ser Ser Arg Ser Gly Trp Phe Pro Arg Ile Pro Gln
465                 470                 475                 480
Ala Gln Pro Gly Glu Glu Trp Leu Gln Val Asp Leu Gly Thr Pro Lys
                485                 490                 495
Thr Val Lys Gly Val Ile Ile Gln Gly Ala Arg Gly Gly Asp Ser Ile
            500                 505                 510
Thr Ala Val Glu Ala Arg Ala Phe Val Arg Lys Phe Lys Val Ser Tyr
        515                 520                 525
Ser Leu Asn Gly Lys Asp Trp Glu Tyr Ile Gln Asp Pro Arg Thr Gln
    530                 535                 540
Gln Pro Lys Leu Phe Glu Gly Asn Met His Tyr Asp Thr Pro Asp Ile
545                 550                 555                 560
Arg Arg Phe Asp Pro Ile Pro Ala Gln Tyr Val Arg Val Tyr Pro Glu
                565                 570                 575
Arg Trp Ser Pro Ala Gly Ile Gly Met Arg Leu Glu Val Leu Gly Cys
            580                 585                 590
Asp Trp Thr Asp Ser Lys Pro Thr Val Lys Thr Leu Gly Pro Thr Val
        595                 600                 605
Lys Ser Glu Glu Thr Thr Thr Pro Tyr Pro Thr Glu Glu Glu Ala Thr
    610                 615                 620
Glu Cys Gly Glu Asn Cys Ser Phe Glu Asp Asp Lys Asp Leu Gln Leu
625                 630                 635                 640
Pro Ser Gly Phe Asn Cys Asn Phe Asp Phe Leu Glu Glu Pro Cys Gly
                645                 650                 655
Trp Met Tyr Asp His Ala Lys Trp Leu Arg Thr Thr Trp Ala Ser Ser
            660                 665                 670
Ser Ser Pro Asn Asp Arg Thr Phe Pro Asp Asp Arg Asn Phe Leu Arg
        675                 680                 685
Leu Gln Ser Asp Ser Gln Arg Glu Gly Gln Tyr Ala Arg Leu Ile Ser
    690                 695                 700
Pro Pro Val His Leu Pro Arg Ser Pro Val Cys Met Glu Phe Gln Tyr
705                 710                 715                 720
Gln Ala Thr Gly Gly Arg Gly Val Ala Leu Gln Val Val Arg Glu Ala
                725                 730                 735
Ser Gln Glu Ser Lys Leu Leu Trp Val Ile Arg Glu Asp Gln Gly Gly
            740                 745                 750
Glu Trp Lys His Gly Arg Ile Ile Leu Pro Ser Tyr Asp Met Glu Tyr
        755                 760                 765
Gln Ile Val Phe Glu Gly Val Ile Gly Lys Gly Arg Ser Gly Glu Ile
    770                 775                 780
Ala Ile Asp Asp Ile Arg Ile Ser Thr Asp Val Pro Leu Glu Asn Cys
785                 790                 795                 800
Met Glu Pro Ile Ser Ala Phe Ala Val Asp Ile Pro Glu Ile His Glu
                805                 810                 815
Arg Glu Gly Tyr Glu Asp Glu Ile Asp Asp Glu Tyr Glu Val Asp Trp
            820                 825                 830
Ser Asn Ser Ser Ser Ala Thr Ser Gly Ser Gly Ala Pro Ser Thr Asp
        835                 840                 845
Lys Glu Lys Ser Trp Leu Tyr Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile
    850                 855                 860
Ile Ala Met Ser Ser Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Thr Cys Ala Gly
865                 870                 875                 880
Leu Leu Leu Tyr Cys Thr Cys Ser Tyr Ser Gly Leu Ser Ser Arg Ser
                885                 890                 895
Cys Thr Thr Leu Glu Asn Tyr Asn Phe Gl u Leu Tyr Asp Gly Leu Lys
            900                 905                  910
His Lys Val Lys Met Asn His Gln Lys Cys Cys Ser Glu Ala
        915                 920                 925
<210>5
<211>3652
<212>DNA
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>CDS
<222>(348)..(3119)
<220>
<221>misc_feature
<222>(348)..(410)
<223>信号肽
<400>5
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttcctcc ttcttcttct tcctgagaca    60
tggcccgggc agtggctcct ggaagaggaa caagtgtggg aaaagggaga ggaaatcgga    120
gctaaatgac aggatgcagg cgacttgaga cacaaaaaga gaagcgcttc tcgcgaattc    180
aggcattgcc tcgccgctag ccttccccgc caagacccgc tgaggatttt atggttctta    240
ggcggactta agagcgtttc ggattgttaa gattatcgtt tgctggtttt tcgtccgcgc    300
aatcgtgttc tcctgcggct gcctggggac tggcttggcg aaggagg atg gag agg      356
                                                    Met Glu Arg
                                                    1
ggg ctg ccg ttg ctg tgc gcc acg ctc gcc ctt gcc ctc gcc ctg gcg      404
Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Thr Leu Ala Leu Ala Leu Ala Leu Ala
    5                   10                  15
ggc gct ttc cgc agc gac aaa tgt ggc ggg acc ata aaa atc gaa aac      452
Gly Ala Phe Arg Ser Asp Lys Cys Gly Gly Thr Ile Lys Ile Glu Ash
20                  25                  30                  35
cca ggg tac ctc aca tct ccc ggt tac cct cat tct tac cat cca agt      500
Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr His Pro Ser
                40                  45                  50
gag aag tgt gaa tgg cta atc caa gct ccg gaa ccc tac cag aga atc      548
Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Glu Pro Tyr Gln Arg Ile
            55                  60                  65
ata atc aac ttc aac cea cat ttc gat ttg gag gac aga gac tgc aag      596
Ile Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg Asp Cys Lys
        70                  75                  80
tat gac tac gtg gaa gta att gat ggg gag aat gaa ggc ggc cgc ctg      644
Tyr Asp Tyr Val Glu Val Ile Asp Gly Glu Asn Glu Gly Gly Arg Leu
    85                  90                  95
tgg ggg aag ttc tgt ggg aag att gca cct tct cct gtg gtg tct tca    692
Trp Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Ser Pro Val Val Ser Ser
100                 105                 110                 115
ggg ccc ttt ctc ttc atc aaa ttt gtc tct gac tat gag aca cat ggg    740
Gly Pro Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu Thr His Gly
                120                 125                 130
gca ggg ttt tcc atc cgc tat gaa atc ttc aag aga ggg ccc gaa tgt    788
Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly Pro Glu Cys
            135                 140                 145
tct cag aac tat aca gca cct act gga gtg ata aag tcc cct ggg ttc    836
Ser Gln Asn Tyr Thr Ala Pro Thr Gly Val Ile Lys Ser Pro Gly Phe
        150                 155                 160
cct gaa aaa tac ccc aac tgc ttg gag tgc acc tac atc atc ttt gca    884
Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Cys Leu Glu Cys Thr Tyr Ile Ile Phe Ala
    165                 170                 175
cca aag atg tct gag ata atc ctg gag ttt gaa agt ttt gac ctg gag    932
Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe Asp Leu Glu
180                 185                 190                 195
caa gac tcg aat cct ccc gga gga atg ttc tgt cgc tat gac cgg ctg    980
Gln Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr Asp Arg Leu
                200                 205                 210
gag atc tgg gat gga ttc cct gaa gtt ggc cct cac att ggg cgt tat    1028
Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Glu Val Gly Pro His Ile Gly Arg Tyr
            215                 220                 225
tgt ggg cag aaa act cct ggc cgg atc cgc tcc tct tca ggc gtt cta    1076
Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser Gly Val Leu
        230                 235                 240
tcc atg gtc ttt tac act gac agc gca ata gca aaa gaa ggt ttc tca    1124
Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu Gly Phe Ser
    245                 250                 255
gcc aac tac agt gtg cta cag agc agc atc tct gaa gat ttt aag tgt    1172
Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Ile Ser Glu Asp Phe Lys Cys
260                 265                 270                 275
atg gag gct ctg ggc atg gaa tct gga gag atc cat tct gat cag atc    1220
Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser Asp Gln Ile
                280                 285                 290
act gca tct tca cag tat ggt acc aac tgg tct gta gag cgc tcc cgc    1268
Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Gly Thr Asn Trp Ser Val Glu Arg Ser Arg
            295                 300                 305
ctg aac tac cct gaa aat ggg tgg act cca gga gaa gac tcc tac aag    1316
Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp Ser Tyr Lys
        3l0                 315                 320
gag tgg atc cag gtg gac ttg ggc ctc ctg cga ttc gtt act gct gta    l364
Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val Thr Ala Val
    325                 330                 335
ggg aca cag ggt gcc att tcc aag gaa acc aag aag aaa tat tat gtc    1412
Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys Tyr Tyr Val
340                 345                 350                 355
aag act tac aga gta gac atc agc tcc aac gga gag gac tgg atc tcc    1460
Lys Thr Tyr Arg Val Asp Ile Ser Ser Asn Gly Glu Asp Trp Ile Ser
                360                 365                 370
ctg aaa gag gga aat aaa gcc att atc ttt cag gga aac acc aac ccc    1508
Leu Lys Glu Gly Asn Lys Ala Ile Ile Phe Gln Gly Asn Thr Asn Pro
            375                 110                 385
aca gat gtt gtc tta gga gtt ttc tcc aaa cca ctg ata act cga ttt    1556
Thr Asp Val Val Leu Gly Val Phe Ser Lys Pro Leu Ile Thr Arg Phe
        390                 395                 400
gtc cga atc aaa cct gta tcc tgg gaa act ggt ata tct atg aga ttt    1604
Val Arg Ile Lys Pro Val Ser Trp Glu Thr Gly Ile Ser Met Arg Phe
    405                 410                 415
gaa gtt tat ggc tgc aag ata aca gat tat cct tgc tct gga atg ttg    1652
Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser Gly Met Leu
420                 425                 430                 435
ggc atg gtg tct gga ctt att tca gac tcc cag att aca gca tcc aat    1700
Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr Ala Ser Asn
                440                 445                 450
caa gcc gac agg aat tgg atg cca gaa aac atc cgt ctg gtg acc agt    1748
Gln Ala Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu Val Thr Ser
            455                 460                 465
cgt acc ggc tgg gca ctg cca ccc tca ccc cac cca tac acc aat gaa    1796
Arg Thr Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ser Pro His Pro Tyr Thr Asn Glu
        470                 475                 480
tgg ctc caa gtg gac ctg gga gat gag aag ata gta aga ggt gtc atc    1844
Trp Leu Gln Val Asp Leu Gly Asp Glu Lys Ile Val Arg Gly Val Ile
    485                 490                 495
att cag ggt ggg aag cac cga gaa aac aag gtg ttc atg agg aag ttc    1892
Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met Arg Lys Phe
500                 505                 510                 515
aag atc gcc tat agt aac aat ggc tct gac tgg aaa act atc atg gat    1940
Lys Ile Ala Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Thr Ile Met Asp
                520                 525                 530
gac agc aag cgc aag gct aag tcg ttc gaa ggc aac aac aac tat gac    1988
Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn Asn Tyr Asp
            535                 540                 545
aca cct gag ctt cgg acg ttt tca cct ctc tcc aca agg ttc atc agg    2036
Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Ser Pro Leu Ser Thr Arg Phe Ile Arg
        550                 555                 560
atc tac cct gag aga gcc aca cac agt ggg ctt ggg ctg agg atg gag    2084
Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Ser Gly Leu Gly Leu Arg Met Glu
    565                 570                 575
cta ctg ggc tgt gaa gtg gaa gca cct aca gct gga cca acc aca ccc    2132
Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro Thr Thr Pro
580                 585                 590                 595
aat ggg aac cca gtg cat gag tgt gac gac gac cag gcc aac tgc cac    2180
Asn Gly Asn Pro Val His Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala Asn Cys His
                600                 605                 610
agt ggc aca ggt gat gac ttc cag ctc aca gga ggc acc act gtc ctg    2228
Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr Thr Val Leu
            615                 620                 625
gcc aca gag aag cca acc att ata gac agc acc atc caa tca gag ttc    2276
Ala Thr Glu Lys Pro Thr Ile Ile Asp Ser Thr Ile Gln Ser Glu Phe
        630                 635                 640
ccg aca tac ggt ttt aac tgc gag ttt ggc tgg ggc tct cac aag aca    2324
Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser His Lys Thr
    645                 650                 655
ttc tgc cac tgg gag cat gac agc cat gca cag ctc agg tgg agt gtg    2372
Phe Cys His Trp Glu His Asp Ser His Ala Gln Leu Arg Trp Ser Val
660                 665                 670                 675
ctg acc agc aag aca ggg ccg att cag gac cat aca gga gat ggc aac    2420
Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly Asp Gly Asn
                680                 685                 690
ttc atc tat tcc caa gct gat gaa aat cag aaa ggc aaa gta gcc cgc      2468
Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys Val Ala Arg
            695                 700                 705
ctg gtg agc cct gtg gtc tat tcc cag agc tct gcc cac tgt atg acc      2516
Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Ser Ser Ala His Cys Met Thr
        710                 715                 720
ttc tgg tat cac atg tcc ggc tct cat gtg ggt aca ctg agg gtc aaa      2564
Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu Arg Val Lys
    725                 730                 735
cta cgc tac cag aag cca gag gaa tat gat caa ctg gtc tgg atg gtg      2612
Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val Trp Met Val
740                 745                 750                 755
gtt ggg cac caa gga gac cac tgg aaa gaa gga cgt gtc ttg ctg cac      2660
Val Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val Leu Leu His
                760                 765                 770
aaa tct ctg aaa cta tat cag gtt att ttt gaa ggt gaa atc gga aaa      2708
Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu Ile Gly Lys
            775                 780                 785
gga aac ctt ggt gga att gct gtg gat gat atc agt att aac aac cat      2756
Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile Asn Asn His
        790                 795                 800
att tct cag gaa gac tgt gca aaa cca aca gac cta gat aaa aag aac      2804
Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Thr Asp Leu Asp Lys Lys Asn
    805                 810                 815
aca gaa att aaa att gat gaa aca ggg agc act cca gga tat gaa gga      2852
Thr Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly Tyr Glu Gly
820                 825                 830                 835
gaa ggg gaa ggt gac aag aac atc tcc agg aag cca ggc aat gtg ctt      2900
Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly Asn Val Leu
                840                 845                 850
aag acc ctg gat ccc atc ctg atc acc atc ata gcc atg agt gcc ctg      2948
Lys Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met Ser Ala Leu
            855                 860                 865
gga gta ctc ctg ggt gca gtc tgt gga gtt gtg ctg tac tgt gcc tgt      2996
Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr Cys Ala Cys
        870                 875                 880
tgg cac aat ggg atg tca gaa agg aac cta tct gcc ctg gag aac tat      3044
Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu Glu Asn Tyr
    885                 890                 895
aac ttt gaa ctt gtg gat ggt gta aag ttg aaa aaa gat aaa ctg aac      3092
Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp Lys Leu Asn
900                 905                 910                 915
cca cag agt aat tac tca gag gcg tga aggcacggag ctggagggaa            3139
Pro Gln Ser Asn Tyr Ser Glu Ala
                920
caagggagga gcacggcagg agaacaggtg gaggcatggg gactctgtta ctctgctttc    3199
actgtaagct gggaagggcg gggactctgt tactccgctt tcactgtaag ctcggaaggg    3259
catccacgat gccatgccag gcttttctca ggagcttcaa tgagcgtcac ctacagacac    3319
aagcaggtga ctgcggtaac aacaggaatc atgtacaagc ctgctttctt ctcttggttt    3379
catttgggta atcagaagcc atttgagacc aagtgtgact gacttcatgg ttcatcctac    3439
tagccccctt ttttcctctc tttctcctta ccctgtggtg gattcttctc ggaaactgca    3499
aaatccaaga tgctggcact aggcgttatt cagtgggccc ttttgatgga catgtgacct  3559
gtagcccagt gcccagagca tattatcata accacatttc aggggacgcc aacgtccatc  3619
cacctttgca tcgctacctg cagcgagcac agg                               3652
<210>6
<211>923
<212>PRT
<213>小鼠
<220>
<221>misc_feature
<222>(348)..(410)
<223>信号肽
<400>6
Met Glu Arg Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Thr Leu Ala Leu Ala Leu
1               5                   10                  15
Ala Leu Ala Gly Ala Phe Arg Ser Asp Lys Cys Gly Gly Thr Ile Lys
            20                  25                  30
Ile Glu Asn Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr
        35                  40                  45
His Pro Ser Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Glu Pro Tyr
    50                  55                  60
Gln Arg Ile Ile Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg
65                  70                  75                  80
Asp Cys Lys Tyr Asp Tyr Val Glu Val Ile Asp Gly Glu Asn Glu Gly
                85                  90                  95
Gly Arg Leu Trp Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Ser Pro Val
            100                 105                 110
Val Ser Ser Gly Pro Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu
        115                 120                 125
Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly
    130                 135                 140
Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Ala Pro Thr Gly Val Ile Lys Ser
145                 150                 155                 160
Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Cys Leu Glu Cys Thr Tyr Ile
                165                 170                 175
Ile Phe Ala Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe
            180                 185                 190
Asp Leu Glu Gln Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr
        195                 200                 205
Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Glu Val Gly Pro His Ile
    210                 215                 220
Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser
225                 230                 235                 240
Gly Val Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu
                245                 250                 255
Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Ile Ser Glu Asp
            260                 265                 270
Phe Lys Cys Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser
        275                 280                 285
Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Gly Thr Asn Trp Ser Val Glu
    290                 295                 300
Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp
305                 310                 315                 320
Ser Tyr Lys Glu Trp lle Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val
                325                 330                 335
Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys
            340                 345                 350
Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Arg Val Asp Ile Ser Ser Asn Gly Glu Asp
        355                 360                 365
Trp Ile Ser Leu Lys Glu Gly Asn Lys Ala Ile Ile Phe Gln Gly Asn
    370                 375                 380
Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Leu Gly Val Phe Ser Lys Pro Leu Ile
385                 390                 395                 400
Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Val Ser Trp Glu Thr Gly Ile Ser
                405                 410                 415
Met Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser
            420                 425                 430
Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr
        435                 440                 445
Ala Ser Asn Gln Ala Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu
    450                 455                 460
Val Thr Ser Arg Thr Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ser Pro His Pro Tyr
465                 470                 475                 480
Thr Asn Glu Trp Leu Gln Val Asp Leu Gly Asp Glu Lys Ile Val Arg
                485                 490                 495
Gly Val Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met
            500                 505                 5I0
Arg Lys Phe Lys Ile Ala Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Thr
        515                 520                 525
Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn
    530                 535                 540
Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Ser Pro Leu Ser Thr Arg
545                 550                 555                 560
Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Ser Gly Leu Gly Leu
                565                 570                 575
Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro
            580                 585                 590
Thr Thr Pro Asn Gly Asn Pro Val His Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala
        595                 600                 605
Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr
    610                 615                 620
Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Ile Ile Asp Ser Thr Ile Gln
625                 630                 635                 640
Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser
                645                 650                 655
His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Ser His Ala Gln Leu Arg
            660                 665                 670
Trp Ser Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly
        675                 680                 685
Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys
    690                 695                 700
Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Ser Ser Ala His
705                 710                 715                 720
Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu
                725                 730                 735
Arg Val Lys Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val
            740                 745                 750
Trp Met Val Val Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val
        755                 760                 765
Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu
    770                 775                 780
Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile
785                 790                 795                 800
Asn Asn His Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Thr Asp Leu Asp
                805                 810                 815
Lys Lys Asn Thr Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly
            820                 825                 830
Tyr Glu Gly Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn lle Ser Arg Lys Pro Gly
        835                 840                 845
Asn Val Leu Lys Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met
    850                 855                 860
Ser Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr
865                 870                 875                 880
Cys Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu
                885                 890                 895
Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp
            900                 905                 910
Lys Leu Asn Pro Gln Ser Asn Tyr Ser Glu Ala
        915                 920
<210>7
<211>4769
<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(567)..(3347)
<400>7
aaactggagc tccaccgcgg tggcggccgc ccgggcaggt ctagaattca gcggccgctg    60
aattctatcc agcggtcggt gcctctgccc gcgtgtgtgt cccgggtgcc gggggacctg    120
tgtcagttag cgcttctgag atcacacagc tgcctagggg ccgtgtgatg cccagggcaa    180
ttcttggctt tgatttttat tattattact attattttgc gttcagcttt cgggaaaccc    240
tcgtgatgtt gtaggataaa ggaaatgaca ctttgaggaa ctggagagaa catacacgcg    300
tttgggtttg aagaggaaac cggtctccgc ttccttagct tgctccctct ttgctgattt    360
caagagctat ctcctatgag gtggagatat tccagcaaga ataaaggtga agacagactg    420
actgccagga cccaggagga aaacgttgat cgttagagac ctttgcagaa gacaccacca    480
ggaggaaaat tagagaggaa aaacacaaag acataattat aggagatccc acaaacctag    540
cccgggagag agcctctctg tcaaaa atg gat atg ttt cct ctt acc tgg gtt     593
                             Met Asp Met Phe Pro Leu Thr Trp Val
                             1               5
ttc tta gct ctg tac ttt tca gga cac gaa gtg aga agc cag caa gat      641
Phe Leu Ala Leu Tyr Phe Ser Gly His Glu Val Arg Ser Gln Gln Asp
10                  15                  20                  25
cca ccc tgc gga ggt cgg ccg aat tcc aaa gat gct ggc tac atc act      689
Pro Pro Cys Gly Gly Arg Pro Asn Ser Lys Asp Ala Gly Tyr Ile Thr
                30                  35                  40
tcc cca ggc tac ccc cag gac tat ccc tcc cac cag aac tgt gag tgg      737
Ser Pro Gly Tyr Pro Gln Asp Tyr Pro Ser His Gln Asn Cys Glu Trp
            45                  50                  55
att gtc tac gcc ccc gaa ccc aac cag aag att gtt ctc aac ttc aac      785
Ile Val Tyr Ala Pro Glu Pro Asn Gln Lys Ile Val Leu Asn Phe Asn
        60                  65                  70
cct cac ttt gaa atc gag aaa cac gac tgc aag tat gac ttc att gag    833
Pro His Phe Glu Ile Glu Lys His Asp Cys Lys Tyr Asp Phe Ile Glu
    75                  80                  85
att cgg gat ggg gac agt gag tca gct gac ctc ctg ggc aag cac tgt    881
Ile Arg Asp Gly Asp Ser Glu Ser Ala Asp Leu Leu Gly Lys His Cys
90                  95                  100                 105
ggg aac atc gcc ccg ccc acc atc atc tcc tca ggc tcc gtg tta tac    929
Gly Asn Ile Ala Pro Pro Thr Ile Ile Ser Ser Gly Ser Val Leu Tyr
                110                 115                 120
atc aag ttc acc tca gac tac gcc cgg cag ggg gca ggt ttc tct cta    977
I1e Lys Phe Thr Ser Asp Tyr Ala Arg Gln Gly Ala Gly Phe Ser Leu
            125                 130                 135
cgc tat gag atc ttc aaa aca ggc tct gaa gat tgt tcc aag aac ttt    1025
Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Thr Gly Ser Glu Asp Cys Ser Lys Asn Phe
        140                 145                 150
aca agc ccc aat ggg acc att gaa tct cca ggg ttt cca gag aag tat    1073
Thr Ser Pro Asn Gly Thr Ile Glu Ser Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr
    155                 160                 165
cca cac aat ctg gac tgt acc ttc acc atc ctg gcc aaa ccc agg atg    1121
Pro His Asn Leu Asp Cys Thr Phe Thr Ile Leu Ala Lys Pro Arg Met
170                 175                 180                 185
gag atc atc cta cag ttc ctg acc ttt gac ctg gag cat gac cct cta    1169
Glu Ile Ile Leu Gln Phe Leu Thr Phe Asp Leu Glu His Asp Pro Leu
                190                 195                 200
caa gtg ggg gaa gga gac tgt aaa tat gac tgg ctg gac atc tgg gat    1217
Gln Val Gly Glu Gly Asp Cys Lys Tyr Asp Trp Leu Asp Ile Trp Asp
            205                 210                 215
ggc att cca cat gtt gga cct ctg att ggc aag tac tgt ggg acg aaa    1265
Gly Ile Pro His Val Gly Pro Leu Ile Gly Lys Tyr Cys Gly Thr Lys
        220                 225                 230
aca ccc tcc aaa ctc cgc tcg tcc acg ggg atc ctc tcc ttg acc ttt    1313
Thr Pro Ser Lys Leu Arg Ser Ser Thr Gly lle Leu Ser Leu Thr Phe
    235                 240                 245
cac acg gac atg gca gtg gcc aag gat ggc ttc tcc gca cgt tac tat    1361
His Thr Asp Met Ala Val Ala Lys Asp Gly Phe Ser Ala Arg Tyr Tyr
250                 255                 260                 265
ttg atc cac cag gag cca cct gag aat ttt cag tgc aat gtc cct ttg    1409
Leu Ile His Gln Glu Pro Pro Glu Asn Phe Gln Cys Asn Val Pro Leu
                270                 275                 280
gga atg gag tct ggc cgg att gct aat gaa cag atc agt gcc tcc tcc    1457
Gly Met Glu Ser Gly Arg Ile Ala Asn Glu Gln Ile Ser Ala Ser Ser
            285                 290                 295
acc ttc tct gat ggg agg tgg act cct caa cag agc cgg ctc cat ggt    1505
Thr Phe Ser Asp Gly Arg Trp Thr Pro Gln Gln Ser Arg Leu His Gly
        300                 305                 310
gat gac aat ggc tgg aca ccc aat ttg gat tcc aac aag gag tat ctc    1553
Asp Asp Asn Gly Trp Thr Pro Asn Leu Asp Ser Asn Lys Glu Tyr Leu
    315                 320                 325
cag gtg gac ctg cgc ttc cta acc atg ctc aca gcc att gca aca cag    1601
Gln Val Asp Leu Arg Phe Leu Thr Met Leu Thr Ala Ile Ala Thr Gln
330                 335                 340                 345
gga gcc att tcc agg gaa acc cag aaa ggc tac tac gtc aaa tcg tac    1649
Gly Ala Ile Ser Arg Glu Thr Gln Lys Gly Tyr Tyr Val Lys Ser Tyr
                350                 355                 360
aag ctg gaa gtc agc aca aat ggt gaa gat tgg atg gtc tac cgg cat    1697
Lys Leu Glu Val Ser Thr Asn Gly Glu Asp Trp Met Val Tyr Arg His
            365                 370                 375
ggc aaa aac cac aag ata ttc caa gcg aac aat gat gcg acc gag gtg    1745
Gly Lys Asn His Lys Ile Phe Gln Ala Asn Asn Asp Ala Thr Glu Val
        380                 385                 390
gtg cta aac aag ctc cac atg cca ctg ctg act cgg ttc atc agg atc    1793
Val Leu Asn Lys Leu His Met Pro Leu Leu Thr Arg Phe Ile Arg Ile
    395                 400                 405
cgc ccg cag acg tgg cat ttg ggc att gcc ctt cgc ctg gag ctc ttt    1841
Arg Pro Gln Thr Trp His Leu Gly Ile Ala Leu Arg Leu Glu Leu Phe
410                 415                 420                 425
ggc tgc cgg gtc aca gat gca ccc tgc tcc aac atg ctg ggg atg ctc    1889
Gly Cys Arg Val Thr Asp Ala Pro Cys Ser Asn Met Leu Gly Met Leu
                430                 435                 440
tcg ggc ctc att gct gat acc cag atc tct gcc tcc tcc acc cga gag    1937
Ser Gly Leu Ile Ala Asp Thr Gln Ile Ser Ala Ser Ser Thr Arg Glu
            445                 450                 455
tac ctc tgg agc ccc agt gct gcc cgc ctg gtt agt agc cgc tct ggc    1985
Tyr Leu Trp Ser Pro Ser Ala Ala Arg Leu Val Ser Ser Arg Ser Gly
        460                 465                 470
tgg ttt cct cgg aac cct caa gcc cag cca ggt gaa gaa tgg ctt cag    2033
Trp Phe Pro Arg Asn Pro Gln Ala Gln Pro Gly Glu Glu Trp Leu Gln
    475                 480                 485
gta gac ctg ggg aca ccc aag aca gtg aaa ggg gtc atc atc cag gga    2081
Val Asp Leu Gly Thr Pro Lys Thr Val Lys Gly Val Ile Ile Gln Gly
490                 495                 500                 505
gcc cga gga gga gac agc atc act gcc gtg gaa gcc agg gcg ttt gta    2129
Ala Arg Gly Gly Asp Ser Ile Thr Ala Val Glu Ala Arg Ala Phe Val
                510                 515                 520
cgc aag ttc aaa gtc tcc tac agc cta aat ggc aag gac tgg gaa tat    2177
Arg Lys Phe Lys Val Ser Tyr Ser Leu Asn Gly Lys Asp Trp Glu Tyr
            525                 530                 535
atc cag gac ccc agg act cag cag aca aag ctg ttt gaa ggg aac atg    2225
Ile Gln Asp Pro Arg Thr Gln Gln Thr Lys Leu Phe Glu Gly Asn Met
        540                 545                 550
cac tat gac acc cct gac atc cga agg ttc gat cct gtt cca gcg cag    2273
His Tyr Asp Thr Pro Asp Ile Arg Arg Phe Asp Pro Val Pro Ala Gln
    555                 560                 565
tat gtg cgg gtg tac cca gag agg tgg tcg cca gca ggc atc ggg atg    2321
Tyr Val Arg Val Tyr Pro Glu Arg Trp Ser Pro Ala Gly Ile Gly Met
570                 575                 580                 585
agg ctg gag gtg ctg ggc tgt gac tgg aca gac tca aag ccc aca gtg    2369
Arg Leu Glu Val Leu Gly Cys Asp Trp Thr Asp Ser Lys Pro Thr Val
                590                 595                 600
gag acg ctg gga ccc acc gtg aag agt gaa gag act acc acc cca tat    2417
Glu Thr Leu Gly Pro Thr Val Lys Ser Glu Glu Thr Thr Thr Pro Tyr
            605                 610                 615
ccc atg gat gag gat gcc acc gag tgt ggg gaa aac tgc agc ttt gag    2465
Pro Met Asp Glu Asp Ala Thr Glu Cys Gly Glu Asn Cys Ser Phe Glu
        620                 625                 630
gat gac aaa gat ttg caa ctt cct tca gga ttc aac tgc aac ttt gat    2513
Asp Asp Lys Asp Leu Gln Leu Pro Ser Gly Phe Asn Cys Asn Phe Asp
    635                 640                 645
ttt ccg gaa gag acc tgt ggt tgg gtg tac gac cat gcc aag tgg ctc    2561
Phe Pro Glu Glu Thr Cys Gly Trp Val Tyr Asp His Ala Lys Trp Leu
650                 655                 660                 665
cgg agc acg tgg atc agc agc gct aac ccc aat gac aga aca ttt cca    2609
Arg Ser Thr Trp Ile Ser Ser Ala Asn Pro Asn Asp Arg Thr Phe Pro
                670                 675                 680
gat gac aag aac ttc ttg aaa ctg cag agt gat ggc cga cga gag ggc    2657
Asp Asp Lys Asn Phe Leu Lys Leu Gln Ser Asp Gly Arg Arg Glu Gly
            685                 690                 695
cag tac ggg cgg ctc atc agc cca ccg gtg cac ctg ccc cga agc cct    2705
Gln Tyr Gly Arg Leu Ile Ser Pro Pro Val His Leu Pro Arg Ser Pro
        700                 705                 710
gtg tgc atg gag ttc cag tac caa gcc atg ggc ggc cac ggg gtg gca    2753
Val Cys Met Glu Phe Gln Tyr Gln Ala Met Gly Gly His Gly Val Ala
    715                 720                 725
ctg cag gtg gtt cgg gaa gcc agc cag gaa agc aaa ctc ctt tgg gtc    2801
Leu Gln Val Val Arg Glu Ala Ser Gln Glu Ser Lys Leu Leu Trp Val
730                 735                 740                 745
atc cgt gag gac cag ggc agc gag tgg aag cac ggg cgc att atc ctg    2849
Ile Arg Glu Asp Gln Gly Ser Glu Trp Lys His Gly Arg Ile Ile Leu
                750                 755                 760
ccc agc tat gac atg gag tat cag atc gtg ttc gag gga gtg ata ggg    2897
Pro Ser Tyr Asp Met Glu Tyr Gln Ile Val Phe Glu Gly Val Ile Gly
            765                 770                 775
aag gga cga tcg gga gag att tcc ggc gat gac att cgg ata agc act    2945
Lys Gly Arg Ser Gly Glu Ile Ser Gly Asp Asp Ile Arg Ile Ser Thr
        780                 785                 790
gat gtc cca ctg gag aac tgc atg gaa ccc ata tca gct ttt gca gtg    2993
Asp Val Pro Leu Glu Asn Cys Met Glu Pro Ile Ser Ala Phe Ala Val
    795                 800                 805
gac atc cca gaa acc cat ggg gga gag ggc tat gaa gat gag att gat    3041
Asp Ile Pro Glu Thr His Gly Gly Glu Gly Tyr Glu Asp Glu Ile Asp
810                 815                 820                 825
gat gaa tat gaa gga gat tgg agc aac tct tct tcc tct acc tca ggg    3089
Asp Glu Tyr Glu Gly Asp Trp Ser Asn Ser Ser Ser Ser Thr Ser Gly
                830                 835                 840
gct ggt gac ccc tca tct ggc aaa gaa aag agc tgg ctg tac acc cta    3137
Ala Gly Asp Pro Ser Ser Gly Lys Glu Lys Ser Trp Leu Tyr Thr Leu
            845                 850                 855
gat ccc att ctg atc acc atc atc gcc atg agc tcg ctg ggg gtc ctg    3185
Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met Ser Ser Leu Gly Val Leu
        860                 865                 870
ctg ggg gcc acc tgt gcg ggc ctc ctc ctt tac tgc acc tgc tcc tat    3233
Leu Gly Ala Thr Cys Ala Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Thr Cys Ser Tyr
    875                 880                 885
tcg ggt ctg agt tcg agg agc tgc acc aca ctg gag aac tac aac ttt    3281
Ser Gly Leu Ser Ser Arg Ser Cys Thr Thr Leu Glu Asn Tyr Asn Phe
890                 895                 900                 905
gag ctc tac gat ggc ctc aag cac aag gtc aag atc aat cat cag aag    3329
Glu Leu Tyr Asp Gly Leu Lys His Lys Val Lys Ile Asn His Gln Lys
                910                 915                 920
tgc tgc tcg gag gca tga ccgattgtgt ctggatcgct tctggcgttt           3377
Cys Cys Ser Glu Ala
            925
cattccagtg agaggggcta gcgaagatta cagttttgtt ttgttttgtt ttgttttccc  3437
tttggaaact gaatgccata atctggatca aagtgttcca gaatactgaa ggtatggaca  3497
ggacagacag gccagtctag ggagaaaggg agatgcagct gtgaagggga tcgttgccca    3557
ccaggactgt ggtggccaag tgaatgcagg aaccgggccc ggaattccgg ctctcggcta    3617
aaatctcagc tgcctctgga aaggctcaac catactcagt gccaactcag actctgttgc    3677
tgtggtgtca acatggatgg atcatctgta ccttgtattt ttagcagaat tcatgctcag    3737
atttctttgt tctgaatcct tgctttgtgc tagacacaaa gcatacatgt ccttctaaaa    3797
ttaatatgat cactataatc tcctgtgtgc agaattcaga aatagacctt tgaaaccatt    3857
tgcattgtga gtgcagatcc atgactgggg ctagtgcagc aatgaaacag aattccagaa    3917
acagtgtgtt ctttttatta tgggaaaata cagataaaaa tggccactga tgaacatgaa    3977
agttagcact ttcccaacac agtgtacact tgcaaccttg ttttggattt ctcatacacc    4037
aagactgtga aacacaaatt tcaagaatgt gttcaaatgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt    4097
gtgtgtgtgt gtgtgtatgt gtgtgtgtgt gtgtgtgctt gtgtgtttct gtcagtggta    4157
tgagtgatat gtatgcatgt gtgtatgtat atgtatgtat gtatgtatgt atgtacgtac    4217
atatgtatgt atgtatgtat gtatgtatgt atgtatatgt gtgtgtgtgt ttgtgtgtgt    4277
gtgtgtttgt gtgtgtgtgt gtggtaagtg tggtatgtgt gtatgcattt gtctatatgt    4337
gtatctgtgt gtctatgtgt ttctgtcagt ggaatgagtg gcatgtgtgc atgtgtatgt    4397
atgtggatat gtgtgttgtg tttatgtgct tgtgtataag aggtaagtgt ggtgtgtgtg    4457
catgtgtctc tgtgtgtgtt tgtctgtgta cctctttgta taagtacctg tgtttgtatg    4517
tgggaatatg tatattgagg cattgctgtg ttagtatgtt tatagaaaag aagacagtct    4577
gagatgtctt cctcaatacc tctccactta tatcttggat agacaaaagt aatgacaaaa    4637
aattgctggt gtgtatatgg aaaaggggga cacatatcca tggatggtag aagtgtaaac    4697
tgtgcagtca ctgtggacat caatatgcag gttcttcaca aatgtagata taaagctact    4757
atagttatac cc                                                        4769
<210>8
<211>926
<212>PRT
<213>小鼠
<400>8
Met Asp Met Phe Pro Leu Thr Trp Val Phe Leu Ala Leu Tyr Phe Ser
1               5                   10                  15
Gly His Glu Val Arg Ser Gln Gln Asp Pro Pro Cys Gly Gly Arg Pro
            20                  25                  30
Asn Ser Lys Asp Ala Gly Tyr Ile Thr Ser Pro Gly Tyr Pro Gln Asp
        35                  40                  45
Tyr Pro Ser His Gln Asn Cys Glu Trp Ile Val Tyr Ala Pro Glu Pro
    50                  55                  60
Asn Gln Lys Ile Val Leu Asn Phe Asn Pro His Phe Glu Ile Glu Lys
65                  70                  75                  80
His Asp Cys Lys Tyr Asp Phe Ile Glu Ile Arg Asp Gly Asp Ser Glu
                85                  90                  95
Ser Ala Asp Leu Leu Gly Lys His Cys Gly Asn Ile Ala Pro Pro Thr
            100                 105                 110
Ile Ile Ser Ser Gly Ser Val Leu Tyr Ile Lys Phe Thr Ser Asp Tyr
        115                 120                 125
Ala Arg Gln Gly Ala Gly Phe Ser Leu Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Thr
    130                 135                 140
Gly Ser Glu Asp Cys Ser Lys Asn Phe Thr Ser Pro Asn Gly Thr Ile
145                 150                 155                 160
Glu Ser Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro His Asn Leu Asp Cys Thr
                165                 170                 175
Phe Thr Ile Leu Ala Lys Pro Arg Met Glu Ile Ile Leu Gln Phe Leu
            180                 185                 190
Thr Phe Asp Leu Glu His Asp Pro Leu Gln Val Gly Glu Gly Asp Cys
        195                 200                 205
Lys Tyr Asp Trp Leu Asp Ile Trp Asp Gly Ile Pro His Val Gly Pro
    210                 215                 220
Leu Ile Gly Lys Tyr Cys Gly Thr Lys Thr Pro Ser Lys Leu Arg Ser
225                 230                 235                 240
Ser Thr Gly Ile Leu Ser Leu Thr Phe His Thr Asp Met Ala Val Ala
                245                 250                 255
Lys Asp Gly Phe Ser Ala Arg Tyr Tyr Leu Ile His Gln Glu Pro Pro
            260                 265                 270
Glu Asn Phe Gln Cys Asn Val Pro Leu Gly Met Glu Ser Gly Arg Ile
        275                 280                 285
Ala Asn Glu Gln lle Ser Ala Ser Ser Thr Phe Ser Asp Gly Arg Trp
    290                 295                 300
Thr Pro Gln Gln Ser Arg Leu His Gly Asp Asp Asn Gly Trp Thr Pro
305                 310                 315                 320
Asn Leu Asp Ser Asn Lys Glu Tyr Leu Gln Val Asp Leu Arg Phe Leu
                325                 330                 335
Thr Met Leu Thr Ala Ile Ala Thr Gln Gly Ala Ile Ser Arg Glu Thr
            340                 345                 350
Gln Lys Gly Tyr Tyr Val Lys Ser Tyr Lys Leu Glu Val Ser Thr Asn
        355                 360                 365
Gly Glu Asp Trp Met Val Tyr Arg His Gly Lys Asn His Lys Ile Phe
    370                 375                 380
Gln Ala Asn Asn Asp Ala Thr Glu Val Val Leu Asn Lys Leu His Met
385                 390                 395                 400
Pro Leu Leu Thr Arg Phe Ile Arg Ile Arg Pro Gln Thr Trp His Leu
                405                 410                 415
Gly Ile Ala Leu Arg Leu Glu Leu Phe Gly Cys Arg Val Thr Asp Ala
            420                 425                 430
Pro Cys Ser Asn Met Leu Gly Met Leu Ser Gly Leu Ile Ala Asp Thr
        435                 440                 445
Gln Ile Ser Ala Ser Ser Thr Arg Glu Tyr Leu Trp Ser Pro Ser Ala
    450                 455                 460
Ala Arg Leu Val Ser Ser Arg Ser Gly Trp Phe Pro Arg Asn Pro Gln
465                 470                 475                 480
Ala Gln Pro Gly Glu Glu Trp Leu Gln Val Asp Leu Gly Thr Pro Lys
                485                 490                 495
Thr Val Lys Gly Val Ile Ile Gln Gly Ala Arg Gly Gly Asp Ser Ile
            500                 505                 510
Thr Ala Val Glu Ala Arg Ala Phe Val Arg Lys Phe Lys Val Ser Tyr
        515                 520                 525
Ser Leu Asn Gly Lys Asp Trp Glu Tyr Ile Gln Asp Pro Arg Thr Gln
    530                 535                 540
Gln Thr Lys Leu Phe Glu Gly Asn Met His Tyr Asp Thr Pro Asp Ile
545                 550                 555                 560
Arg Arg Phe Asp Pro Val Pro Ala Gln Tyr Val Arg Val Tyr Pro Glu
                565                 570                 575
Arg Trp Ser Pro Ala Gly Ile Gly Met Arg Leu Glu Val Leu Gly Cys
            580                 585                 590
Asp Trp Thr Asp Ser Lys Pro Thr Val Glu Thr Leu Gly Pro Thr Val
        595                 600                 605
Lys Ser Glu Glu Thr Thr Thr Pro Tyr Pro Met Asp Glu Asp Ala Thr
    610                 615                 620
Glu Cys Gly Glu Asn Cys Ser Phe Glu Asp Asp Lys Asp Leu Gln Leu
625                 630                 635                 640
Pro Ser Gly Phe Asn Cys Asn Phe Asp Phe Pro Glu Glu Thr Cys Gly
                645                 650                 655
Trp Val Tyr Asp His Ala Lys Trp Leu Arg Ser Thr Trp Ile Ser Ser
            660                 665                 670
Ala Asn Pro Asn Asp Arg Thr Phe Pro Asp Asp Lys Asn Phe Leu Lys
        675                 680                 685
Leu Gln Ser Asp Gly Arg Arg Glu Gly Gln Tyr Gly Arg Leu Ile Ser
    690                 695                 700
Pro Pro Val His Leu Pro Arg Ser Pro Val Cys Met Glu Phe Gln Tyr
705                 710                 715                 720
Gln Ala Met Gly Gly His Gly Val Ala Leu Gln Val Val Arg Glu Ala
                725                 730                 735
Ser Gln Glu Ser Lvs Leu Leu Trp Val Ile Arg Glu Asp Gln Gly Ser
            740                 745                 750
Glu Trp Lys His Gly Arg Ile Ile Leu Pro Ser Tyr Asp Met Glu Tyr
        755                 760                 765
Gln Ile Val Phe Glu Gly Val Ile Gly Lys Gly Arg Ser Gly Glu Ile
    770                 775                 780
Ser Gly Asp Asp Ile Arg Ile Ser Thr Asp Val Pro Leu Glu Asn Cys
785                 790                 795                 800
Met Glu Pro Ile Ser Ala Phe Ala Val Asp Ile Pro Glu Thr His Gly
                805                 810                 815
Gly Glu Gly Tyr Glu Asp Glu Ile Asp Asp Glu Tyr Glu Gly Asp Trp
            820                 825                 830
Ser Asn Ser Ser Ser Ser Thr Ser Gly Ala Gly Asp Pro Ser Ser Gly
        835                 840                 845
Lys Glu Lys Ser Trp Leu Tyr Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile
    850                 855                 860
Ile Ala Met Ser Ser Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Thr Cys Ala Gly
865                 870                 875                 880
Leu Leu Leu Tyr Cys Thr Cys Ser Tyr Ser Gly Leu Ser Ser Arg Ser
                885                 890                 895
Cys Thr Thr Leu Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Tyr Asp Gly Leu Lys
            900                 905                 910
His Lys Val Lys Ile Asn His Gln Lys Cys Cys Ser Glu Ala
        915                 920                 925
<210>9
<211>2530
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(16)..(2331)
<400>9
ggaattccct gcagc atg ggc tgg tta act agg att gtc tgt ctt ttc tgg    51
                 Met Gly Trp Leu Thr Arg Ile Val Cys Leu Phe Trp
                 1               5                   10
gga gta tta ctt aca gca aga gca aac tat cag aat ggg aag aac aat    99
Gly Val Leu Leu Thr Ala Arg Ala Asn Tyr Gln Asn Gly Lys Asn Asn
        15                  20                  25
gtg cca agg ctg aaa tta tcc tac aaa gaa atg ttg gaa tcc aac aat    147
Val Pro Arg Leu Lys Leu Ser Tyr Lys Glu Met Leu Glu Ser Asn Asn
    30                  35                  40
gtg atc act ttc aat ggc ttg gcc aac agc tcc agt tat cat acc ttc    195
Val Ile Thr Phe Asn Gly Leu Ala Asn Ser Ser Ser Tyr His Thr Phe
45                  50                  55                  60
ctt ttg gat gag gaa cgg agt agg ctg tat gtt gga gca aag gat cac    243
Leu Leu Asp Glu Glu Arg Ser Arg Leu Tyr Val Gly Ala Lys Asp His
                65                  70                  75
ata ttt tca ttc gac ctg gtt aat atc aag gat ttt caa aag att gtg    291
Ile Phe Ser Phe Asp Leu Val Asn Ile Lys Asp Phe Gln Lys Ile Val
            80                  85                  90
tgg cca gta tct tac acc aga aga gat gaa tgc aag tgg gct gga aaa    339
Trp Pro Val Ser Tyr Thr Arg Arg Asp Glu Cys Lys Trp Ala Gly Lys
        95                  100                 105
gac atc ctg aaa gaa tgt gct aat ttc atc aag gta ctt aag gca tat    387
Asp Ile Leu Lys Glu Cys Ala Asn Phe Ile Lys Val Leu Lys Ala Tyr
    110                 115                 120
aat cag act cac ttg tac gcc tgt gga acg ggg gct ttt cat cca att    435
Asn Gln Thr His Leu Tyr Ala Cys Gly Thr Gly Ala Phe His Pro Ile
125                 130                 135                 140
tgc acc tac att gaa att gga cat cat cct gag gac aat att ttt aag    483
Cys Thr Tyr Ile Glu Ile Gly His His Pro Glu Asp Asn Ile Phe Lys
                145                 150                 155
ctg gag aac tca cat ttt gaa aac ggc cgt ggg aag agt cca tat gac    531
Leu Glu Asn Ser His Phe Glu Asn Gly Arg Gly Lys Ser Pro Tyr Asp
            160                 165                 170
cct aag ctg ctg aca gca tcc ctt tta ata gat gga gaa tta tac tct    579
Pro Lys Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Ile Asp Gly Glu Leu Tyr Ser
        175                 180                 185
gga act gca gct gat ttt atg ggg cga gac ttt gct atc ttc cga act    627
Gly Thr Ala Ala Asp Phe Met Gly Arg Asp Phe Ala Ile Phe Arg Thr
    190                 195                 200
ctt ggg cac cac cac cca atc agg aca gag cag cat gat tcc agg tgg    675
Leu Gly His His His Pro Ile Arg Thr Glu Gln His Asp Ser Arg Trp
205                 210                 215                 220
ctc aat gat cca aag ttc att agt gcc cac ctc atc tca gag agt gac    723
Leu Asn Asp Pro Lys Phe Ile Ser Ala His Leu Ile Ser Glu Ser Asp
                225                 230                 235
aat cct gaa gat gac aaa gta tac ttt ttc ttc cgt gaa aat gca ata    771
Asn Pro Glu Asp Asp Lys Val Tyr Phe Phe Phe Arg Glu Asn Ala Ile
            240                 245                 250
gat gga gaa cac tct gga aaa gct act cac gct aga ata ggt cag ata    819
Asp Gly Glu His Ser Gly Lys Ala Thr His Ala Arg Ile Gly Gln Ile
        255                 260                 265
tgc aag aat gac ttt gga ggg cac aga agt ctg gtg aat aaa tgg aca    867
Cys Lys Asn Asp Phe Gly Gly His Arg Ser Leu Val Asn Lys Trp Thr
    270                 275                 280
aca ttc ctc aaa gct cgt ctg att tgc tca gtg cca ggt cca aat ggc    915
Thr Phe Leu Lys Ala Arg Leu Ile Cys Ser Val Pro Gly Pro Asn Gly
285                 290                 295                 300
att gac act cat ttt gat gaa ctg cag gat gta ttc cta atg aac ttt    963
Ile Asp Thr His Phe Asp Glu Leu Gln Asp Val Phe Leu Met Asn Phe
                305                 310                 315
aaa gat cct aaa aat cca gtt gta tat gga gtg ttt acg act tcc agt    1011
Lys Asp Pro Lys Asn Pro Val Val Tyr Gly Val Phe Thr Thr Ser Ser
            320                 325                 330
aac att ttc aag gga tca gcc gtg tgt atg tat agc atg agt gat gtg    1059
Asn Ile Phe Lys Gly Ser Ala Val Cys Met Tyr Ser Met Ser Asp Val
        335                 340                 345
aga agg gtg ttc ctt ggt cca tat gcc cac agg gat gga ccc aac tat    1107
Arg Arg Val Phe Leu Gly Pro Tyr Ala His Arg Asp Gly Pro Asn Tyr
    350                 355                 360
caa tgg gtg cct tat caa gga aga gtc ccc tat cca cgg cca gga act    1155
Gln Trp Val Pro Tyr Gln Gly Arg Val Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Thr
365                 370                 375                 380
tgt ccc agc aaa aca ttt ggt ggt ttt gac tct aca aag gac ctt cct    1203
Cys Pro Ser Lys Thr Phe Gly Gly Phe Asp Ser Thr Lys Asp Leu Pro
                385                 390                 395
gat gat gtt ata acc ttt gca aga agt cat cca gcc atg tac aat cca    1251
Asp Asp Val Ile Thr Phe Ala Arg Ser His Pro Ala Met Tyr Asn Pro
            400                 405                 410
gtg ttt cct atg aac aat cgc cca ata gtg atc aaa acg gat gta aat    1299
Val Phe Pro Met Asn Asn Arg Pro Ile Val Ile Lys Thr Asp Val Asn
        415                 420                 425
tat caa ttt aca caa att gtc gta gac cga gtg gat gca gaa gat gga    1347
Tyr Gln Phe Thr Gln Ile Val Val Asp Arg Val Asp Ala Glu Asp Gly
    430                 435                 440
cag tat gat gtt atg ttt atc gga aca gat gtt ggg acc gtt ctt aaa    1395
Gln Tyr Asp Val Met Phe Ile Gly Thr Asp Val Gly Thr Val Leu Lys
445                 450                 455                 460
gta gtt tca att cct aag gag act tgg tat gat tta gaa gag gtt ctg    1443
Val Val Ser Ile Pro Lys Glu Thr Trp Tyr Asp Leu Glu Glu Val Leu
                465                 470                 475
ctg gaa gaa atg aca gtt ttt cgg gaa ccg act gct att tca gca atg    1491
Leu Glu Glu Met Thr Val Phe Arg Glu Pro Thr Ala Ile Ser Ala Met
            480                 485                 490
gag ctt tcc act aag cag caa caa cta tat att ggt tca acg gct ggg    1539
Glu Leu Ser Thr Lys Gln Gln Gln Leu Tyr Ile Gly Ser Thr Ala Gly
        495                 500                 505
gtt gcc cag ctc cct tta cac cgg tgt gat att tac ggg aaa gcg tgt    1587
Val Ala Gln Leu Pro Leu His Arg Cys Asp lle Tyr Gly Lys Ala Cys
    510                 515                 520
gct gag tgt tgc ctc gcc cga gac cct tac tgt gct tgg gat ggt tct    1635
Ala Glu Cys Cys Leu Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Ser
525                 530                 535                 540
gca tgt tct cgc tat ttt ccc act gca aag aga cgc aca aga cga caa    1683
Ala Cys Ser Arg Tyr Phe Pro Thr Ala Lys Arg Arg Thr Arg Arg Gln
                545                 550                 555
gat ata aga aat gga gac cca ctg act cac tgt tca gac tta cac cat    1731
Asp Ile Arg Asn Gly Asp Pro Leu Thr His Cys Ser Asp Leu His His
            560                 565                 570
gat aat cac cat ggc cac agc cct gaa gag aga atc atc tat ggt gta    1779
Asp Asn His His Gly His Ser Pro Glu Glu Arg Ile Ile Tyr Gly Val
        575                 580                 585
gag aat agt agc aca ttt ttg gaa tgc agt ccg aag tcg cag aga gcg    1827
Glu Asn Ser Ser Thr Phe Leu Glu Cys Ser Pro Lys Ser Gln Arg Ala
    590                 595                 600
ctg gtc tat tgg caa ttc cag agg cga aat gaa gag cga aaa gaa gag      1875
Leu Val Tyr Trp Gln Phe Gln Arg Arg Asn Glu Glu Arg Lys Glu Glu
605                 6l0                 615                 620
atc aga gtg gat gat cat atc atc agg aca gat caa ggc ctt ctg cta      1923
Ile Arg Val Asp Asp His Ile Ile Arg Thr Asp Gln Gly Leu Leu Leu
                625                 630                 635
cgt agt cta caa cag aag gat tca ggc aat tac ctc tgc cat gcg gtg      1971
Arg Ser Leu Gln Gln Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Leu Cys His Ala Val
            640                 645                 650
gaa cat ggg ttc ata caa act ctt ctt aag gta acc ctg gaa gtc att      2019
Glu His Gly Phe Ile Gln Thr Leu Leu Lys Val Thr Leu Glu Val Ile
        655                 660                 665
gac aca gag cat ttg gaa gaa ctt ctt cat aaa gat gat gat gga gat      2067
Asp Thr Glu His Leu Glu Glu Leu Leu His Lys Asp Asp Asp Gly Asp
    670                 675                 680
ggc tct aag acc aaa gaa atg tcc aat agc atg aca cct agc cag aag      2115
Gly Ser Lys Thr Lys Glu Met Ser Asn Ser Met Thr Pro Ser Gln Lys
685                 690                 695                 700
gtc tgg tac aga gac ttc atg cag ctc atc aac cac ccc aat ctc aac      2163
Val Trp Tyr Arg Asp Phe Met Gln Leu Ile Asn His Pro Asn Leu Asn
                705                 710                 715
acg atg gat gag ttc tgt gaa caa gtt tgg aaa agg gac cga aaa caa      2211
Thr Met Asp Glu Phe Cys Glu Gln Val Trp Lys Arg Asp Arg Lys Gln
            720                 725                 730
cgt cgg caa agg cca gga cat acc cca ggg aac agt aac aaa tgg aag      2259
Arg Arg Gln Arg Pro Gly His Thr Pro Gly Asn Ser Asn Lys Trp Lys
        735                 740                 745
cac tta caa gaa aat aag aaa ggt aga aac agg agg acc cac gaa ttt      2307
His Leu Gln Glu Asn Lys Lys Gly Arg Asn Arg Arg Thr His Glu Phe
    750                 755                 760
gag agg gca ccc agg agt gtc tga gctgcattac ctctagaaac ctcaaacaag     2361
Glu Arg Ala Pro Arg Ser Val
765                 770
tagaaacttg cctagacaat aactggaaaa acaaatgcaa tatacatgaa cttttttcat    2421
ggcattatgt ggatgtttac aatggtggga aattcagctg agttccacca attataaatt    2481
aaatccatga gtaactttcc taataggctt ttttttccta ataccaccg                2530
<210>10
<211>771
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>10
Met Gly Trp Leu Thr Arg Ile Val Cys Leu Phe Trp Gly Val Leu Leu
1               5                   10                  15
Thr Ala Arg Ala Asn Tyr Gln Asn Gly Lys Asn Asn Val Pro Arg Leu
            20                  25                  30
Lys Leu Ser Tyr Lys Glu Met Leu Glu Ser Asn Asn Val Ile Thr Phe
        35                  40                  45
Asn Gly Leu Ala Asn Ser Ser Ser Tyr His Thr Phe Leu Leu Asp Glu
    50                  55                  60
Glu Arg Ser Arg Leu Tyr Val Gly Ala Lys Asp His Ile Phe Ser Phe
65                  70                  75                  80
Asp Leu Val Asn Ile Lys Asp Phe Gln Lys Ile Val Trp Pro Val Ser
                85                  90                  95
Tyr Thr Arg Arg Asp Glu Cys Lys Trp Ala Gly Lys Asp Ile Leu Lys
            100                 105                 110
Glu Cys Ala Asn Phe Ile Lys Val Leu Lys Ala Tyr Asn Gln Thr His
        115                 120                 125
Leu Tyr Ala Cys Gly Thr Gly Ala Phe His Pro Ile Cys Thr Tyr Ile
    130                 135                 140
Glu Ile Gly His His Pro Glu Asp Asn Ile Phe Lys Leu Glu Asn Ser
145                 150                 155                 160
His Phe Glu Asn Gly Arg Gly Lys Ser Pro Tyr Asp Pro Lys Leu Leu
                165                 170                 175
Thr Ala Ser Leu Leu Ile Asp Gly Glu Leu Tyr Ser Gly Thr Ala Ala
            180                 185                 190
Asp Phe Met Gly Arg Asp Phe Ala Ile Phe Arg Thr Leu Gly His His
        195                 200                 205
His Pro Ile Arg Thr Glu Gln His Asp Ser Arg Trp Leu Asn Asp Pro
    210                 215                 220
Lys Phe Ile Ser Ala His Leu Ile Ser Glu Ser Asp Asn Pro Glu Asp
225                 230                 235                 240
Asp Lys Val Tyr Phe Phe Phe Arg Glu Asn Ala Ile Asp Gly Glu His
                245                 250                 255
Ser Gly Lys Ala Thr His Ala Arg Ile Gly Gln Ile Cys Lys Asn Asp
            260                 265                 270
Phe Gly Gly His Arg Ser Leu Val Asn Lys Trp Thr Thr Phe Leu Lys
        275                 280                 285
Ala Arg Leu Ile Cys Ser Val Pro Gly Pro Asn Gly Ile Asp Thr His
    290                 295                 300
Phe Asp Glu Leu Gln Asp Val Phe Leu Met Asn Phe Lys Asp Pro Lys
305                 310                 315                 320
Asn Pro Val Val Tyr Gly Val Phe Thr Thr Ser Ser Asn Ile Phe Lys
                325                 330                 335
Gly Ser Ala Val Cys Met Tyr Ser Met Ser Asp Val Arg Arg Val Phe
            340                 345                 350
Leu Gly Pro Tyr Ala His Arg Asp Gly Pro Asn Tyr Gln Trp Val Pro
        355                 360                 365
Tyr Gln Gly Arg Val Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Thr Cys Pro Ser Lys
    370                 375                 380
Thr Phe Gly Gly Phe Asp Ser Thr Lys Asp Leu Pro Asp Asp Val Ile
385                 390                 395                 400
Thr Phe Ala Arg Ser His Pro Ala Met Tyr Asn Pro Val Phe Pro Met
                405                 410                 415
Asn Asn Arg Pro Ile Val Ile Lys Thr Asp Val Asn Tyr Gln Phe Thr
            420                 425                 430
Gln Ile Val Val Asp Arg Val Asp Ala Glu Asp Gly Gln Tyr Asp Val
        435                 440                 445
Met Phe Ile Gly Thr Asp Val Gly Thr Val Leu Lys Val Val Ser Ile
    450                 455                 460
Pro Lys Glu Thr Trp Tyr Asp Leu Glu Glu Val Leu Leu Glu Glu Met
465                 470                 475                 480
Thr Val Phe Arg Glu Pro Thr Ala Ile Ser Ala Met Glu Leu Ser Thr
                485                 490                 495
Lys Gln Gln Gln Leu Tyr Ile Gly Ser Thr Ala Gly Val Ala Gln Leu
            500                 505                 510
Pro Leu His Arg Cys Asp Ile Tyr Gly Lys Ala Cys Ala Glu Cys Cys
        515                 520                 525
Leu Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Ser Ala Cys Ser Arg
    530                 535                 540
Tyr Phe Pro Thr Ala Lys Arg Arg Thr Arg Arg Gln Asp Ile Arg Asn
545                 550                 555                 560
Gly Asp Pro Leu Thr His Cys Ser Asp Leu His His Asp Asn His His
                565                 570                 575
Gly His Ser Pro Glu Glu Arg Ile Ile Tyr Gly Val Glu Asn Ser Ser
            580                 585                 590
Thr Phe Leu Glu Cys Ser Pro Lys Ser Gln Arg Ala Leu Val Tyr Trp
        595                 600                 605
Gln Phe Gln Arg Arg Asn Glu Glu Arg Lys Glu Glu Ile Arg Val Asp
    610                 615                 620
Asp His Ile Ile Arg Thr Asp Gln Gly Leu Leu Leu Arg Ser Leu Gln
625                 630                 635                 640
Gln Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Leu Cys His Ala Val Glu His Gly Phe
                645                 650                 655
Ile Gln Thr Leu Leu Lys Val Thr Leu Glu Val Ile Asp Thr Glu His
            660                 665                 670
Leu Glu Glu Leu Leu His Lys Asp Asp Asp Gly Asp Gly Ser Lys Thr
        675                 680                 685
Lys Glu Met Ser Asn Ser Met Thr Pro Ser Gln Lys Val Trp Tyr Arg
    690                 695                 700
Asp Phe Met Gln Leu Ile Asn His Pro Asn Leu Asn Thr Met Asp Glu
705                 710                 715                 720
Phe Cys Glu Gln Val Trp Lys Arg Asp Arg Lys Gln Arg Arg Gln Arg
                725                 730                 735
Pro Gly His Thr Pro Gly Asn Ser Asn Lys Trp Lys His Leu Gln Glu
            740                 745                 750
Asn Lys Lys Gly Arg Asn Arg Arg Thr His Glu Phe Glu Arg Ala Pro
        755                 760                 765
Arg Ser Val
    770
<210>11
<211>2919
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(236)..(2485)
<400>11
tctgtgattg tggccaggcg gggcaccctc ggaggggagg gttcggaagt ggaatgcgac    60
cccccagcct ctttccccta ggggctgtaa tctgatccct ggggactccc cccctagcct    120
cccgccctcg ccctcactgc tgactcctct tccagatcct ggggcagagt ccagggcagc    180
tcaaggctcc tccacacaca cacccgctga accctgagca ccctgagctg ctgag atg     238
                                                             Met
                                                             1
ggg cgg gcc ggg gct gcc gcc gtg atc ccg ggc ctg gcc ctg ctc tgg      286
Gly Arg Ala Gly Ala Ala Ala Val Ile Pro Gly Leu Ala Leu Leu Trp
            5                   10                  15
gca gtg ggg ctg ggg agt gcc gcc ccc agc ccc cca cgc ctt cgg ctc      334
Ala Val Gly Leu Gly Ser Ala Ala Pro Ser Pro Pro Arg Leu Arg Leu
        20                  25                  30
tcc ttc caa gag ctc cag gcc tgg cat ggt ctc cag act ttc agc ctg      382
Ser Phe Gln Glu Leu Gln Ala Trp His Gly Leu Gln Thr Phe Ser Leu
    35                  40                  45
gag cga acc tgc tgc tac cag gcc ttg ctg gtg gat gag gag cgt gga      430
Glu Arg Thr Cys Cys Tyr Gln Ala Leu Leu Val Asp Glu Glu Arg Gly
50                  55                  60                  65
cgc ctg ttt gtg ggt gcc gag aac cat gtg gcc tcc ctc aac ctg gac      478
Arg Leu Phe Val Gly Ala Glu Asn His Val Ala Ser Leu Asn Leu Asp
                70                  75                  80
aac atc agc aag cgg gcc aag aag ctg gcc tgg ccg gcc cct gtg gaa      526
Asn Ile Ser Lys Arg Ala Lys Lys Leu Ala Trp Pro Ala Pro Val Glu
            85                  90                  95
tgg cga gag gag tgc aac tgg gca ggg aag gac att ggt act gag tgc    574
Trp Arg Glu Glu Cys Asn Trp Ala Gly Lys Asp Ile Gly Thr Glu Cys
        100                 105                 110
atg aac ttc gtg aag ttg ctg cat gcc tac aac cgc acc cat ttg ctg    622
Met Asn Phe Val Lys Leu Leu His Ala Tyr Asn Arg Thr His Leu Leu
    115                 120                 125
gcc tgt ggc acg gga gcc ttc cac cca acc tgt gcc ttt gtg gaa gtg    670
Ala Cys Gly Thr Gly Ala Phe His Pro Thr Cys Ala Phe Val Glu Val
130                 135                 140                 145
ggc cac cgg gca gag gag ccc gtc ctc cgg ctg gac cca gga agg ata    718
Gly His Arg Ala Glu Glu Pro Val Leu Arg Leu Asp Pro Gly Arg Ile
                150                 155                 160
gag gat ggc aag ggg aag agt cct tat gac ccc agg cat cgg gct gcc    766
Glu Asp Gly Lys Gly Lys Ser Pro Tyr Asp Pro Arg His Arg Ala Ala
            165                 170                 175
tcc gtg ctg gtg ggg gag gag cta tac tca ggg gtg gca gca gac ctc    814
Ser Val Leu Val Gly Glu Glu Leu Tyr Ser Gly Val Ala Ala Asp Leu
        180                 185                 190
atg gga cga gac ttt acc atc ttt cgc agc cta ggg caa cgt cca agt    862
Met Gly Arg Asp Phe Thr Ile Phe Arg Ser Leu Gly Gln Arg Pro Ser
    195                 200                 205
ctc cga aca gag cca cac gac tcc cgc tgg ctc aat gag ccc aag ttt    910
Leu Arg Thr Glu Pro His Asp Ser Arg Trp Leu Asn Glu Pro Lys Phe
210                 215                 220                 225
gtc aag gta ttt tgg atc ccg gag agc gag aac cca gac gac gac aaa    958
Val Lys Val Phe Trp Ile Pro Glu Ser Glu Asn Pro Asp Asp Asp Lys
                230                 235                 240
atc tac ttc ttc ttt cgt gag acg gcg gta gag gcg gcg ccg gca ctg    1006
Ile Tyr Phe Phe Phe Arg Glu Thr Ala Val Glu Ala Ala Pro Ala Leu
            245                 250                 255
gga cgc ctg tcc gtg tcc cgc gtt ggc cag atc tgc cgg aac gac gtg    1054
Gly Arg Leu Ser Val Ser Arg Val Gly Gln Ile Cys Arg Asn Asp Val
        260                 265                 270
ggc ggc cag cgc agc ctg gtc aac aag tgg acg acg ttc ctg aag gcg    1102
Gly Gly Gln Arg Ser Leu Val Asn Lys Trp Thr Thr Phe Leu Lys Ala
    275                 280                 285
cgg ctg gtg tgc tcg gtg ccc ggc gtc gag ggc gac acc cac ttc gat    1150
Arg Leu Val Cys Ser Val Pro Gly Val Glu Gly Asp Thr His Phe Asp
290                 295                 300                 305
cag ctc cag gat gtg ttt ctg ttg tcc tcg cgg gac cac cgg acc ccg    1198
Gln Leu Gln Asp Val Phe Leu Leu Ser Ser Arg Asp His Arg Thr Pro
                310                 315                 320
ctg ctc tat gcc gtc ttc tcc acg tcc agc agc atc ttc cag ggc tct    1246
Leu Leu Tyr Ala Val Phe Ser Thr Ser Ser Ser Ile Phe Gln Gly Ser
            325                 330                 335
gcg gtg tgc gtg tac agc atg aac gac gtg cgc cgg gcc ttc ttg gga    1294
Ala Val Cys Val Tyr Ser Met Asn Asp Val Arg Arg Ala Phe Leu Gly
        340                 345                 350
ccc ttt gca cac aag gag ggg ccc atg cac cag tgg gtg tca tac cag    1342
Pro Phe Ala His Lys Glu Gly Pro Met His Gln Trp Val Ser Tyr Gln
    355                 360                 365
ggt cgc gtc ccc tac ccg cgg cca ggc atg tgc ccc agc aag acc ttt    1390
Gly Arg Val Pro Tyr Pro A rg Pro Gly Met Cys Pro Ser Lys Thr Phe
370                 375                  380                 385
ggc acc ttc agt tcc acc aag gac ttc cca gac gat gtc atc cag ttt    1438
Gly Thr Phe Ser Ser Thr Lys Asp Phe Pro Asp Asp Val Ile Gln Phe
                390                 395                 400
gcg cgg aac cac ccc ctc atg tac aac tct gtc ctg ccc act ggg ggg    1486
Ala Arg Asn His Pro Leu Met Tyr Asn Ser Val Leu Pro Thr Gly Gly
            405                 410                 415
cgc cct ctt ttc cta caa gtt gga gcc aat tac acc ttc act caa att    1534
Arg Pro Leu Phe Leu Gln Val Gly Ala Asn Tyr Thr Phe Thr Gln Ile
        420                 425                 430
gcc gcg gac cgg gtt gca gcc gct gac gga cac tat gac gtc ctc ttc    1582
Ala Ala Asp Arg Val Ala Ala Ala Asp Gly His Tyr Asp Val Leu Phe
    435                 440                 445
att ggc aca gac gtt ggc acg gtg ctg aag gtg atc tcg gtc ccc aag    1630
Ile Gly Thr Asp Val Gly Thr Val Leu Lys Val Ile Ser Val Pro Lys
450                 455                 460                 465
ggc agt agg ccc agc gca gag ggg ctg ctc ctg gag gag ctg cac gtg    1678
Gly Ser Arg Pro Ser Ala Glu Gly Leu Leu Leu Glu Glu Leu His Val
                470                 475                 480
ttt gag gac tcg gcc gct gtc acc agc atg caa att tct tcc aag agg    1726
Phe Glu Asp Ser Ala Ala Val Thr Ser Met Gln Ile Ser Ser Lys Arg
            485                 490                 495
cac cag ctg tac gta gcc tcg cgg agc gcg gtg gcc cag atc gcg ttg    1774
His Gln Leu Tyr Val Ala Ser Arg Ser Ala Val Ala Gln Ile Ala Leu
        500                 505                 510
cac cgc tgc gct gcc cac ggc cgc gtc tgc acc gaa tgc tgt ctg gcg    1822
His Arg Cys Ala Ala His Gly Arg Val Cys Thr Glu Cys Cys Leu Ala
    515                 520                 525
cgt gac ccc tac tgc gcc tgg gac ggg gtc gcg tgc acg cgc ttc cag    1870
Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Val Ala Cys Thr Arg Phe Gln
530                 535                 540                 545
ccc agt gcc aag agg cgg ttc cgg cgg caa gac gta agg aat ggc gac    1918
Pro Ser Ala Lys Arg Arg Phe Arg Arg Gln Asp Val Arg Asn Gly Asp
                550                 555                 560
ccc agc acg ttg tgc tcc gga gac tcg tct cgt ccc gcg ctg ctg gaa    1966
Pro Ser Thr Leu Cys Ser Gly Asp Ser Ser Arg Pro Ala Leu Leu Glu
            565                 570                 575
cac aag gtg ttc ggc gtg gag ggc agc agc gcc ttt ctg gag tgt gag    2014
His Lys Val Phe Gly Val Glu Gly Ser Ser Ala Phe Leu Glu Cys Glu
        580                 585                 590
ccc cgc tcg ctg cag gcg cgc gtg gag tgg act ttc cag cgc gca ggg    2062
Pro Arg Ser Leu Gln Ala Arg Val Glu Trp Thr Phe Gln Arg Ala Gly
    595                 600                 605
gtg aca gcc cac acc cag gtg ctg gca gag gag cgc acc gag cgc acc    2110
Val Thr Ala His Thr Gln Val Leu Ala Glu Glu Arg Thr Glu Arg Thr
610                 615                 620                 625
gcc cgg gga cta ctg ctg cgc agg ctg cgg cgc cgg gac tcg ggc gtg    2158
Ala Arg Gly Leu Leu Leu Arg Arg Leu Arg Arg Arg Asp Ser Gly Val
                630                 635                 640
tac ttg tgc gcc gcc gtc gag cag ggc ttt acg caa ccg ctg cgt cgc    2206
Tyr Leu Cys Ala Ala Val Glu Gln Gly Phe Thr Gln Pro Leu Arg Arg
            645                 650                 655
ctg tcg ctg cac gtg ttg agt gct acg cag gcc gaa cga ctg gcg cgg    2254
Leu Ser Leu His Val Leu Ser Ala Thr Gln Ala Glu Arg Leu Ala Arg
        660                 665                 670
gcc gag gag gct gcg ccc gcc gcg ccg ccg ggc ccc aaa ctc tgg tac    2302
Ala Glu Glu Ala Ala Pro Ala Ala Pro Pro Gly Pro Lys Leu Trp Tyr
    675                 680                 685
cgg gac ttt ctg cag ctg gtg gag ccg ggc gga ggt ggc agc gcg aac      2350
Arg Asp Phe Leu Gln Leu Val Glu Pro Gly Gly Gly Gly Ser Ala Asn
690                 695                 700                 705
tcc ctg cgc atg tgc cgc ccg cag cct gcg ctg cag tca ctg ccc ctg      2398
Ser Leu Arg Met Cys Arg Pro Gln Pro Ala Leu Gln Ser Leu Pro Leu
                710                 715                 720
gag tcg cgg aga aag ggc cgt aac cgg agg acc cac gcc cct gag cct      2446
Glu Ser Arg Arg Lys Gly Arg Asn Arg Arg Thr His Ala Pro Glu Pro
            725                 730                 735
cgc gct gag cgg ggg ccg cgc agc gca acg cac tgg tga ccagactgtc       2495
Arg Ala Glu Arg Gly Pro Arg Ser Ala Thr His Trp
        740                 745
cccacgccgg gaaccaagca ggagacgaca ggcgagagag gagccagaca gaccctgaaa    2555
agaaggacgg gttggggccg ggcacattgg gggtcaccgg ccgatggaga caccaaccga    2615
caggccctgg ctgagggcag ctgcgcgggc ttatttatta acaggataac ccttgaatgt    2675
agcagccccg ggagggcggc acaggtcggg cgcaggattc agccggaggg aagggacggg    2735
gaagccgagc tccagagcaa cgaccagggc cgaggaggtg cctggagtgc ccaccctggg    2795
agacagaccc cacctccttg ggtagtgagc agtgagcaga aagctgtgaa caggctgggc    2855
tgctggaggt ggggcgaggc aggccgactg tactaaagta acgcaataaa cgcattatca    2915
gcca                                                                 2919
<210>12
<211>749
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>12
Met Gly Arg Ala Gly Ala Ala Ala Val Ile Pro Gly Leu Ala Leu Leu
1               5                   10                  15
Trp Ala Val Gly Leu Gly Ser Ala Ala Pro Ser Pro Pro Arg Leu Arg
            20                  25                  30
Leu Ser Phe Gln Glu Leu Gln Ala Trp His Gly Leu Gln Thr Phe Ser
        35                  40                  45
Leu Glu Arg Thr Cys Cys Tyr Gln Ala Leu Leu Val Asp Glu Glu Arg
    50                  55                  60
Gly Arg Leu Phe Val Gly Ala Glu Asn His Val Ala Ser Leu Asn Leu
65                  70                  75                  80
Asp Asn Ile Ser Lys Arg Ala Lys Lys Leu Ala Trp Pro Ala Pro Val
                85                  90                  95
Glu Trp Arg Glu Glu Cys Asn Trp Ala Gly Lys Asp Ile Gly Thr Glu
            100                 105                 110
Cys Met Asn Phe Val Lys Leu Leu His Ala Tyr Asn Arg Thr His Leu
        115                 120                 125
Leu Ala Cys Gly Thr Gly Ala Phe His Pro Thr Cys Ala Phe Val Glu
    130                 135                 140
Val Gly His Arg Ala Glu Glu Pro Val Leu Arg Leu Asp Pro Gly Arg
145                 150                 155                 160
Ile Glu Asp Gly Lys Gly Lys Ser Pro Tyr Asp Pro Arg His Arg Ala
                165                 170                 175
Ala Ser Val Leu Val Gly Glu Glu Leu Tyr Ser Gly Val Ala Ala Asp
            180                 185                 190
Leu Met Gly Arg Asp Phe Thr Ile Phe Arg Ser Leu Gly Gln Arg Pro
        195                 200                 205
Ser Leu Arg Thr Glu Pro His Asp Ser Arg Trp Leu Asn Glu Pro Lys
    210                 215                 220
Phe Val Lys Val Phe Trp Ile Pro Glu Ser Glu Asn Pro Asp Asp Asp
225                 230                 235                 240
Lys Ile Tyr Phe Phe Phe Arg Glu Thr Ala Val Glu Ala Ala Pro Ala
                245                 250                 255
Leu Gly Arg Leu Ser Val Ser Arg Val Gly Gln Ile Cys Arg Asn Asp
            260                 265                 270
Val Gly Gly Gln Arg Ser Leu Val Asn Lys Trp Thr Thr Phe Leu Lys
        275                 280                 285
Ala Arg Leu Val Cys Ser Val Pro Gly Val Glu Gly Asp Thr His Phe
    290                 295                 300
Asp Gln Leu Gln Asp Val Phe Leu Leu Ser Ser Arg Asp His Arg Thr
305                 310                 315                 320
Pro Leu Leu Tyr Ala Val Phe Ser Thr Ser Ser Ser Ile Phe Gln Gly
                325                 330                 335
Ser Ala Val Cys Val Tyr Ser Met Asn Asp Val Arg Arg Ala Phe Leu
            340                 345                 350
Gly Pro Phe Ala His Lys Glu Gly Pro Met His Gln Trp Val Ser Tyr
        355                 360                 365
Gln Gly Arg Val Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Met Cys Pro Ser Lys Thr
    370                 375                 380
Phe Gly Thr Phe Ser Ser Thr Lys Asp Phe Pro Asp Asp Val Ile Gln
385                 390                 395                 400
Phe Ala Arg Asn His Pro Leu Met Tyr Asn Ser Val Leu Pro Thr Gly
                405                 410                 415
Gly Arg Pro Leu Phe Leu Gln Val Gly Ala Asn Tyr Thr Phe Thr Gln
            420                 425                 430
Ile Ala Ala Asp Arg Val Ala Ala Ala Asp Gly His Tyr Asp Val Leu
        435                 440                 445
Phe Ile Gly Thr Asp Val Gly Thr Val Leu Lys Val Ile Ser Val Pro
    450                 455                 460
Lys Gly Ser Arg Pro Ser Ala Glu Gly Leu Leu Leu Glu Glu Leu His
465                 470                 475                 480
Val Phe Glu Asp Ser Ala Ala Val Thr Ser Met Gln Ile Ser Ser Lys
                485                 490                 495
Arg His Gln Leu Tyr Val Ala Ser Arg Ser Ala Val Ala Gln Ile Ala
            500                 505                 510
Leu His Arg Cys Ala Ala His Gly Arg Val Cys Thr Glu Cys Cys Leu
        515                 520                 525
Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Val Ala Cys Thr Arg Phe
    530                 535                 540
Gln Pro Ser Ala Lys Arg Arg Phe Arg Arg Gln Asp Val Arg Asn Gly
545                 550                 555                 560
Asp Pro Ser Thr Leu Cys Ser Gly Asp Ser Ser Arg Pro Ala Leu Leu
                565                 570                 575
Glu His Lys Val Phe Gly Val Glu Gly Ser Ser Ala Phe Leu Glu Cys
            580                 585                 590
Glu Pro Arg Ser Leu Gln Ala Arg Val Glu Trp Thr Phe Gln Arg Ala
        595                 600                 605
Gly Val Thr Ala His Thr Gln Val Leu Ala Glu Glu Arg Thr Glu Arg
    610                 615                 620
Thr Ala Arg Gly Leu Leu Leu Arg Arg Leu Arg Arg Arg Asp Ser Gly
625                 630                 635                 640
Val Tyr Leu Cys Ala Ala Val Glu Gln Gly Phe Thr Gln Pro Leu Arg
                645                 650                 655
Arg Leu Ser Leu His Val Leu Ser Ala Thr Gln Ala Glu Arg Leu Ala
            660                 665                 670
Arg Ala Glu Glu Ala Ala Pro Ala Ala Pro Pro Gly Pro Lys Leu Trp
        675                 680                 685
Tyr Arg Asp Phe Leu Gln Leu Val Glu Pro Gly Gly Gly Gly Ser Ala
    690                 695                 700
Asn Ser Leu Arg Met Cys Arg Pro Gln Pro Ala Leu Gln Ser Leu Pro
705                 710                 715                 720
Leu Glu Ser Arg Arg Lys Gly Arg Asn Arg Arg Thr His Ala Pro Glu
                725                 730                 735
Pro Arg Ala Glu Arg Gly Pro Arg Ser Ala Thr His Trp
            740                 745
<210>13
<211>5177
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(563)..(2818)
<400>13
ggactgcgaa aggagcaggg ttgcggagct agggctccag cctgcggccg cgcattcttg    60
cgtctggcca gccgcgagct ctaagggtcg gccccgcccg gtccgccccc gcggctccct    120
gccaggctct cgcgggcgcg ctcggggtgg ggcctcgcgg ctggcggaga tgcggccggg    180
gctgcgcggt ggtgatgcga gcctgctggg cggcgcgccg gggcagccgg agccgcgcgc    240
cgcggcgctg taatcggaca ccaagagcgc tcgcccccgg cctccggcca ctttccattc    300
actccgaggt gcttgattga gcgacgcgga gaagagctcc gggtgccgcg gcactgcagc    360
gctgagattc ctttacaaag aaactcagag gaccgggaag aaagaatttc acctttgcga    420
cgtgctagaa aataaggtcg tctgggaaaa ggactggaga cacaagcgca tccaaccccg    480
gtagcaaact gatgactttt ccgtgctgat ttctttcaac ctcggtattt tcccttggat    540
attaacttgc atatctgaag aa atg gca ttc cgg aca att tgc gtg ttg gtt     592
                         Met Ala Phe Arg Thr Ile Cys Val Leu Val
                         1               5                   10
gga gta ttt att tgt tct atc tgt gtg aaa gga tct tcc cag ccc caa      640
Gly Val Phe Ile Cys Ser Ile Cys Val Lys Gly Ser Ser Gln Pro Gln
                15                  20                  25
gca aga gtt tat tta aca ttt gat gaa ctt cga gaa acc aag acc tct      688
Ala Arg Val Tyr Leu Thr Phe Asp Glu Leu Arg Glu Thr Lys Thr Ser
            30                  35                  40
gaa tac ttc agc ctt tcc cac cat cct tta gac tac agg att tta tta      736
Glu Tyr Phe Ser Leu Ser His His Pro Leu Asp Tyr Arg Ile Leu Leu
        45                  50                  55
atg gat gaa gat cag gac cgg ata tat gtg gga agc aaa gat cac att      784
Met Asp Glu Asp Gln Asp Arg Ile Tyr Val Gly Ser Lys Asp His Ile
    60                  65                  70
ctt tcc ctg aat att aac aat ata agt caa gaa gct ttg agt gtt ttc      832
Leu Ser Leu Asn Ile Asn Asn Ile Ser Gln Glu Ala Leu Ser Val Phe
75                  80                  85                  90
tgg cca gca tct aca atc aaa gtt gaa gaa tgc aaa atg gct ggc aaa      880
Trp Pro Ala Ser Thr Ile Lys Val Glu Glu Cys Lys Met Ala Gly Lys
                95                  100                 105
gat ccc aca cac ggc tgt ggg aac ttt gtc cgt gta att cag act ttc      928
Asp Pro Thr His Gly Cys Gly Asn Phe Val Arg Val Ile Gln Thr Phe
            110                 115                 120
aat cgc aca cat ttg tat gtc tgt ggg agt ggc gct ttc agt cct gtc      976
Asn Arg Thr His Leu Tyr Val Cys Gly Ser Gly Ala Phe Ser Pro Val
        125                 130                 135
tgt act tac ttg aac aga ggg agg aga tca gag gac caa gtt ttc atg      1024
Cys Thr Tyr Leu Asn Arg Gly Arg Arg Ser Glu Asp Gln Val Phe Met
    140                 145                 150
att gac tcc aag tgt gaa tct gga aaa gga cgc tgc tct ttc aac ccc    1072
Ile Asp Ser Lys Cys Glu Ser Gly Lys Gly Arg Cys Ser Phe Asn Pro
155                 160                 165                 170
aac gtg aac acg gtg tct gtt atg atc aat gag gag ctt ttc tct gga    1120
Asn Val Asn Thr Val Ser Val Met Ile Asn Glu Glu Leu Phe Ser Gly
                175                 180                 185
atg tat ata gat ttc atg ggg aca gat gct gct att ttt cga agt tta    1168
Met Tyr Ile Asp Phe Met Gly Thr Asp Ala Ala Ile Phe Arg Ser Leu
            190                 195                 200
acc aag agg aat gcg gtc aga act gat caa cat aat tcc aaa tgg cta    1216
Thr Lys Arg Asn Ala Val Arg Thr Asp Gln His Asn Ser Lys Trp Leu
        205                 210                 215
agt gaa cct atg ttt gta gat gca cat gtc atc cca gat ggt act gat    1264
Ser Glu Pro Met Phe Val Asp Ala His Val Ile Pro Asp Gly Thr Asp
    220                 225                 230
cca aat gat gct aag gtg tac ttc ttc ttc aaa gaa aaa ctg act gac    1312
Pro Asn Asp Ala Lys Val Tyr Phe Phe Phe Lys Glu Lys Leu Thr Asp
235                 240                 245                 250
aat aac agg agc acg aaa cag att cat tcc atg att gct cga ata tgt    1360
Asn Asn Arg Ser Thr Lys Gln Ile His Ser Met Ile Ala Arg Ile Cys
                255                 260                 265
cct aat gac act ggt gga ctg cgt agc ctt gtc aac aag tgg acc act    1408
Pro Asn Asp Thr Gly Gly Leu Arg Ser Leu Val Asn Lys Trp Thr Thr
            270                 275                 280
ttc tta aag gcg agg ctg gtg tgc tcg gta aca gat gaa gac ggc cca    1456
Phe Leu Lys Ala Arg Leu Val Cys Ser Val Thr Asp Glu Asp Gly Pro
        285                 290                 295
gaa aca cac ttt gat gaa tta gag gat gtg ttt ctg ctg gaa act gat    1504
Glu Thr His Phe Asp Glu Leu Glu Asp Val Phe Leu Leu Glu Thr Asp
    300                 305                 310
aac ccg agg aca aca cta gtg tat ggc att ttt aca aca tca agc tca    1552
Asn Pro Arg Thr Thr Leu Val Tyr Gly Ile Phe Thr Thr Ser Ser Ser
315                 320                 325                 330
gtt ttc aaa gga tca gcc gtg tgt gtg tat cat tta tct gat ata cag    1600
Val Phe Lys Gly Ser Ala Val Cys Val Tyr His Leu Ser Asp Ile Gln
                335                 340                 345
act gtg ttt aat ggg cct ttt gcc cac aaa gaa ggg ccc aat cat cag    1648
Thr Val Phe Asn Gly Pro Phe Ala His Lys Glu Gly Pro Asn His Gln
            350                 355                 360
ctg att tcc tat cag ggc aga att cca tat cct cgc cct gga act tgt    1696
Leu Ile Ser Tyr Gln Gly Arg Ile Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Thr Cys
        365                 370                 375
cca gga gga gca ttt aca ccc aat atg cga acc acc aag gag ttc cca    1744
Pro Gly Gly Ala Phe Thr Pro Asn Met Arg Thr Thr Lys Glu Phe Pro
    380                 385                 390
gat gat gtt gtc act ttt att cgg aac cat cct ctc atg tac aat tcc    1792
Asp Asp Val Val Thr Phe Ile Arg Asn His Pro Leu Met Tyr Asn Ser
395                 400                 405                 410
atc tac cca atc cac aaa agg cct ttg att gtt cgt att ggc act gac    1840
Ile Tyr Pro Ile His Lys Arg Pro Leu Ile Val Arg Ile Gly Thr Asp
                415                 420                 425
tac aag tac aca aag ata gct gtg gat cga gtg aac gct gct gat ggg    1888
Tyr Lys Tyr Thr Lys Ile Ala Val Asp Arg Val Asn Ala Ala Asp Gly
            430                 435                 440
aga tac cat gtc ctg ttt ctc gga aca gat cgg ggt act gtg caa aaa    1936
Arg Tyr His Val Leu Phe Leu Gly Thr Asp Arg Gly Thr Val Gln Lys
        445                 450                 455
gtg gtt gtt ctt cct act aac aac tct gtc agt ggc gag ctc att ctg    1984
Val Val Val Leu Pro Thr Asn Asn Ser Val Ser Gly Glu Leu Ile Leu
    460                 465                 470
gag gag ctg gaa gtc ttt aag aat cat gct cct ata aca aca atg aaa    2032
Glu Glu Leu Glu Val Phe Lys Asn His Ala Pro Ile Thr Thr Met Lys
475                 480                 485                 490
att tca tct aaa aag caa cag ttg tat gtg agt tcc aat gaa ggg gtt    2080
Ile Ser Ser Lys Lys Gln Gln Leu Tyr Val Ser Ser Asn Glu Gly Val
                495                 500                 505
tcc caa gta tct ctg cac cgc tgc cac atc tat ggt aca gcc tgt gct    2128
Ser Gln Val Ser Leu His Arg Cys His Ile Tyr Gly Thr Ala Cys Ala
            510                 515                 520
gac tgc tgc ctg gcg cgg gac cct tat tgc gcc tgg gat ggc cat tcc    2176
Asp Cys Cys Leu Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly His Ser
        525                 530                 535
tgt tcc aga ttc tac cca act ggg aaa cgg agg agc cga aga caa gat    2224
Cys Ser Arg Phe Tyr Pro Thr Gly Lys Arg Arg Ser Arg Arg Gln Asp
    540                 545                 550
gtg aga cat gga aac cca ctg act caa tgc aga gga ttt aat cta aaa    2272
Val Arg His Gly Asn Pro Leu Thr Gln Cys Arg Gly Phe Asn Leu Lys
555                 560                 565                 570
gca tac aga aat gca gct gaa att gtg cag tat gga gta aaa aat aac    2320
Ala Tyr Arg Asn Ala Ala Glu Ile Val Gln Tyr Gly Val Lys Asn Asn
                575                 580                 585
acc act ttt ctg gag tgt gcc ccc aag tct ccg cag gca tct atc aag    2368
Thr Thr Phe Leu Glu Cys Ala Pro Lys Ser Pro Gln Ala Ser Ile Lys
            590                 595                 600
tgg ctg tta cag aaa gac aaa gac agg agg aaa gag gtt aag ctg aat    2416
Trp Leu Leu Gln Lys Asp Lys Asp Arg Arg Lys Glu Val Lys Leu Asn
        605                 610                 615
gaa cga ata ata gcc act tca cag gga ctc ctg atc cgc tct gtt cag    2464
Glu Arg Ile Ile Ala Thr Ser Gln Gly Leu Leu Ile Arg Ser Val Gln
    620                 625                 630
ggt tct gac caa gga ctt tat cac tgc att gct aca gaa aat agt ttc    2512
Gly Ser Asp Gln Gly Leu Tyr His Cys Ile Ala Thr Glu Asn Ser Phe
635                 640                 645                 650
aag cag acc ata gcc aag atc aac ttc aaa gtt tta gat tca gaa atg    2560
Lys Gln Thr Ile Ala Lys Ile Asn Phe Lys Val Leu Asp Ser Glu Met
                655                 660                 665
gtg gct gtt gtg acg gac aaa tgg tcc ccg tgg acc tgg gcc agc tct    2608
Val Ala Val Val Thr Asp Lys Trp Ser Pro Trp Thr Trp Ala Ser Ser
            670                 675                 680
gtg agg gct tta ccc ttc cac ccg aag gac atc atg ggg gca ttc agc    2656
Val Arg Ala Leu Pro Phe His Pro Lys Asp Ile Met Gly Ala Phe Ser
        685                 690                 695
cac tca gaa atg cag atg att aac caa tac tgc aaa gac act cgg cag    2704
His Ser Glu Met Gln Met Ile Asn Gln Tyr Cys Lys Asp Thr Arg Gln
    700                 705                 710
caa cat cag cag gga gat gaa tca cag aaa atg aga ggg gac tat ggc    2752
Gln His Gln Gln Gly Asp Glu Ser Gln Lys Met Arg Gly Asp Tyr Gly
715                 720                 725                 730
aag tta aag gcc ctc atc aat agt cgg aaa agt aga aac agg agg aat    2800
Lys Leu Lys Ala Leu Ile Asn Ser Arg Lys Ser Arg Asn Arg Arg Asn
                735                 740                 745
cag ttg cca gag tca taa tattttctta tgtgggtctt atgcttccat              2848
Gln Leu Pro Glu Ser
            750
taacaaatgc tctgtcttca atgatcaaat tttgagcaaa gaaacttgtg ctttaccaag    2908
gggaattact gaaaaaggtg attactcctg aagtgagttt tacacgaact gaaatgagca    2968
tgcattttct tgtatgatag tgactagcac tagacatgtc atggtcctca tggtgcatat    3028
aaatatattt aacttaaccc agattttatt tatatcttta ttcacctttt cttcaaaatc    3088
gatatggtgg ctgcaaaact agaattgttg catccctcaa ttgaatgagg gccatatccc    3148
tgtggtattc ctttcctgct ttggggcttt agaattctaa ttgtcagtga ttttgtatat    3208
gaaaacaagt tccaaatcca cagcttttac gtagtaaaag tcataaatgc atatgacaga    3268
atggctatca aaagaaatag aaaaggaaga cggcatttaa agttgtataa aaacacgagt    3328
tattcataaa gagaaaatga tgagttttta tggttccaat gaaatatctt cccctttttt    3388
taagattgta aaaataatca gttactggta tctgtcactg acctttgttt ccttattcag    3448
gaagataaaa atcagtaacc taccccatga agatatttgg tgggagttat atcagtgaag    3508
cagtttggtt tatattctta tgttatcacc ttccaaacaa aagcacttac tttttttgga    3568
agttatttaa tttattttag actcaaagaa tataatcttg cactactcag ttattactgt    3628
ttgttctctt attccctagt ctgtgtggca aattaaacaa tataagaagg aaaaatttga    3688
agtattagac ttctaaataa ggggtgaaat catcagaaag aaaaatcaaa gtagaaacta    3748
ctaatttttt aagaggaatt tataacaaat atggctagtt ttcaacttca gtactcaaat    3808
tcaatgattc ttccttttat taaaaccagt ctcagatatc atactgattt ttaagtcaac    3868
actatatatt ttatgatctt ttcagtgtga tggcaaggtg cttgttatgt ctagaaagta    3928
agaaaacaat atgaggagac attctgtctt tcaaaaggta atggtacata cgttcactgg    3988
tctctaagtg taaaagtagt aaattttgtg atgaataaaa taattatctc ctaattgtat    4048
gttagaataa ttttattaga ataatttcat actgaaatta ttttctccaa ataaaaatta    4108
gatggaaaaa tgtgaaaaaa attattcatg ctctcatata tattttaaaa acactacttt    4168
tgctttttta tttacctttt aagacatttt catgcttcca ggtaaaaaca gatattgtac    4228
catgtaccta atccaaatat catataaaca ttttatttat agttaataat ctatgatgaa    4288
ggtaattaaa gtagattatg gcctttttaa gtattgcagt ctaaaacttc aaaaactaaa    4348
atcattgtca aaattaatat gattattaat cagaatatca gatatgattc actatttaaa    4408
ctatgataaa ttatgataat atatgaggag gcctcgctat agcaaaaata gttaaaatgc    4468
tgacataaca ccaaacttca ttttttaaaa aatctgttgt tccaaatgtg tataatttta    4528
aagtaatttc taaagcagtt tattataatg gtttgcctgc ttaaaaggta taattaaact    4588
tcttttctct tctacattga cacacagaaa tgtgtcaatg taaagccaaa accatcttct    4648
gtgtttatgg ccaatctatt ctcaaagtta aaagtaaaat tgtttcagag tcacagttcc    4708
ctttatttca cataagccca aactgataga cagtaacggt gtttagtttt atactatatt    4768
tgtgctattt aattctttct attttcacaa ttattaaatt gtgtacactt tcattacttt    4828
taaaaatgta gaaattcttc atgaacataa ctctgctgaa tgtaaaagaa aatttttttt    4888
caaaaatgct gttaatgtat actactggtg gttgattggt tttattttat gtagcttgac    4948
aattcagtga cttaatatct attccatttg tattgtacat aaaattttct agaaatacac    5008
ttttttccaa agtgtaagtt tgtgaataga ttttagcatg atgaaactgt cataatggtg    5068
aatgttcaat ctgtgtaaga aaacaaacta aatgtagttg tcacactaaa atttaattgg    5128
atattgatga aatcattggc ctggcaaaat aaaacatgtt gaattcccc                5177
<210>14
<211>751
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>14
Met Ala Phe Arg Thr Ile Cys Val Leu Val Gly Val Phe Ile Cys Ser
1               5                   10                  15
Ile Cys Val Lys Gly Ser Ser Gln Pro Gln Ala Arg Val Tyr Leu Thr
            20                  25                  30
Phe Asp Glu Leu Arg Glu Thr Lys Thr Ser Glu Tyr Phe Ser Leu Ser
        35                  40                  45
His His Pro Leu Asp Tyr Arg Ile Leu Leu Met Asp Glu Asp Gln Asp
    50                  55                  60
Arg Ile Tyr Val Gly Ser Lys Asp His Ile Leu Ser Leu Asn Ile Asn
65                  70                  75                  80
Asn Ile Ser Gln Glu Ala Leu Ser Val Phe Trp Pro Ala Ser Thr Ile
                85                  90                  95
Lys Val Glu Glu Cys Lys Met Ala Gly Lys Asp Pro Thr His Gly Cys
            100                 105                 110
Gly Asn Phe Val Arg Val Ile Gln Thr Phe Asn Arg Thr His Leu Tyr
        115                 120                 125
Val Cys Gly Ser Gly Ala Phe Ser Pro Val Cys Thr Tyr Leu Asn Arg
    130                 135                 140
Gly Arg Arg Ser Glu Asp Gln Val Phe Met Ile Asp Ser Lys Cys Glu
145                 150                 155                 160
Ser Gly Lys Gly Arg Cys Ser Phe Asn Pro Asn Val Asn Thr Val Ser
                165                 170                 175
Val Met Ile Asn Glu Glu Leu Phe Ser Gly Met Tyr Ile Asp Phe Met
            180                 185                 190
Gly Thr Asp Ala Ala Ile Phe Arg Ser Leu Thr Lys Arg Asn Ala Val
        195                 200                 205
Arg Thr Asp Gln His Asn Ser Lys Trp Leu Ser Glu Pro Met Phe Val
    210                 215                 220
Asp Ala His Val Ile Pro Asp Gly Thr Asp Pro Asn Asp Ala Lys Val
225                 230                 235                 240
Tyr Phe Phe Phe Lys Glu Lys Leu Thr Asp Asn Asn Arg Ser Thr Lys
                245                 250                 255
Gln Ile His Ser Met Ile Ala Arg Ile Cys Pro Asn Asp Thr Gly Gly
            260                 265                 270
Leu Arg Ser Leu Val Asn Lys Trp Thr Thr Phe Leu Lys Ala Arg Leu
        275                 280                 285
Val Cys Ser Val Thr Asp Glu Asp Gly Pro Glu Thr His Phe Asp Glu
    290                 295                 300
Leu Glu Asp Val Phe Leu Leu Glu Thr Asp Asn Pro Arg Thr Thr Leu
305                 310                 315                 320
Val Tyr Gly Ile Phe Thr Thr Ser Ser Ser Val Phe Lys Gly Ser Ala
                325                 330                 335
Val Cys Val Tyr His Leu Ser Asp Ile Gln Thr Val Phe Asn Gly Pro
            340                 345                 350
Phe Ala His Lys Glu Gly Pro Asn His Gln Leu Ile Ser Tyr Gln Gly
        355                 360                 365
Arg Ile Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Thr Cys Pro Gly Gly Ala Phe Thr
    370                 375                 380
Pro Asn Met Arg Thr Thr Lys Glu Phe Pro Asp Asp Val Val Thr Phe
385                 390                 395                 400
Ile Arg Asn His Pro Leu Met Tyr Asn Ser Ile Tyr Pro Ile His Lys
                405                 410                 415
Arg Pro Leu Ile Val Arg Ile Gly Thr Asp Tyr Lys Tyr Thr Lys Ile
            420                 425                 430
Ala Val Asp Arg Val Asn Ala Ala Asp Gly Arg Tyr His Val Leu Phe
        435                 440                 445
Leu Gly Thr Asp Arg Gly Thr Val Gln Lys Val Val Val Leu Pro Thr
    450                 455                 460
Asn Asn Ser Val Ser Gly Glu Leu Ile Leu Glu Glu Leu Glu Val Phe
465                 470                 475                 480
Lys Asn His Ala Pro Ile Thr Thr Met Lys Ile Ser Ser Lys Lys Gln
                485                 490                 495
Gln Leu Tyr Val Ser Ser Asn Glu Gly Val Ser Gln Val Ser Leu His
            500                 505                 510
Arg Cys His Ile Tyr Gly Thr Ala Cys Ala Asp Cys Cys Leu Ala Arg
        515                 520                 525
Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly His Ser Cys Ser Arg Phe Tyr Pro
    530                 535                 540
Thr Gly Lys Arg Arg Ser Arg Arg Gln Asp Val Arg His Gly Asn Pro
545                 550                 555                 560
Leu Thr Gln Cys Arg Gly Phe Asn Leu Lys Ala Tyr Arg Asn Ala Ala
                565                 570                 575
Glu Ile Val Gln Tyr Gly Val Lys Asn Asn Thr Thr Phe Leu Glu Cys
            580                 585                 590
Ala Pro Lys Ser Pro Gln Ala Ser Ile Lys Trp Leu Leu Gln Lys Asp
        595                 600                 605
Lys Asp Arg Arg Lys Glu Val Lys Leu Asn Glu Arg Ile Ile Ala Thr
    610                 615                 620
Ser Gln Gly Leu Leu Ile Arg Ser Val Gln Gly Ser Asp Gln Gly Leu
625                 630                 635                 640
Tyr His Cys Ile Ala Thr Glu Asn Ser Phe Lys Gln Thr Ile Ala Lys
                645                 650                 655
Ile Asn Phe Lys Val Leu Asp Ser Glu Met Val Ala Val Val Thr Asp
            660                 665                 670
Lys Trp Ser Pro Trp Thr Trp Ala Ser Ser Val Arg Ala Leu Pro Phe
        675                 680                 685
His Pro Lys Asp Ile Met Gly Ala Phe Ser His Ser Glu Met Gln Met
    690                 695                 700
Ile Asn Gln Tyr Cys Lys Asp Thr Arg Gln Gln His Gln Gln Gly Asp
705                 710                 715                 720
Glu Ser Gln Lys Met Arg Gly Asp Tyr Gly Lys Leu Lys Ala Leu Ile
                725                 730                 735
Asn Ser Arg Lys Ser Arg Asn Arg Arg Asn Gln Leu Pro Glu Ser
            740                 745                 750
<210>15
<211>6474
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(467)..(2794)
<400>15
gtttggcaag tcagtgcaag aggctgactt ctgagaggct tccaggagcc cgaagagagg    60
acctccacgg gagaagggag tgcgtgtgct cggttttttt tttttctctc tttttttttt    120
ttttttctga atgaacagct ttgcccaagt gactgaaaaa tacagcttct tcctgaatct    180
accggcgtag ttgctgaaga gcgctctaga caggacatgg ctctgaagac tcactctttg    240
gaatgtcctc ttgctcccgg cttataaaca actgtcccga ggaaagaaag gttttacata    300
gccaaataca gcctgacaaa tggcacttcg gaactgtgct ttctgatgac aacgcgttcg   360
atttctgaca aagcctctcg cacgctgccc ctggagggaa gtcctaagta aaactcagac   420
cctccttaaa gtgaggagcg agggcttgga cggtgaacac ggcagc atg gca tcc      475
                                                   Met Ala Ser
                                                   1
gcg ggg cac att atc acc ttg ctc ctg tgg ggt tac tta ctg gag ctt     523
Ala Gly His Ile Ile Thr Leu Leu Leu Trp Gly Tyr Leu Leu Glu Leu
    5                   10                  15
tgg aca gga ggt cat aca gct gat act acc cac ccc cgg tta cgc ctg     571
Trp Thr Gly Gly His Thr Ala Asp Thr Thr His Pro Arg Leu Arg Leu
20                  25                  30                  35
tca cat aaa gag ctc ttg aat ctg aac aga aca tca ata ttt cat agc     619
Ser His Lys Glu Leu Leu Asn Leu Asn Arg Thr Ser Ile Phe His Ser
                40                  45                  50
cct ttt gga ttt ctt gat ctc cat aca atg ctg ctg gat gaa tat caa     667
Pro Phe Gly Phe Leu Asp Leu His Thr Met Leu Leu Asp Glu Tyr Gln
            55                  60                  65
gag agg ctc ttc gtg gga ggc agg gac ctt gta tat tcc ctc agc ttg     715
Glu Arg Leu Phe Val Gly Gly Arg Asp Leu Val Tyr Ser Leu Ser Leu
        70                  75                  80
gag aga atc agt gac ggc tat aaa gag ata cac tgg ccg agt aca gct     763
Glu Arg Ile Ser Asp Gly Tyr Lys Glu Ile His Trp Pro Ser Thr Ala
    85                  90                  95
cta aaa atg gaa gaa tgc ata atg aag gga aaa gat gcg ggt gaa tgt     811
Leu Lys Met Glu Glu Cys Ile Met Lys Gly Lys Asp Ala Gly Glu Cys
100                 105                 110                 115
gca aat tat gtt cgg gtt ttg cat cac tat aac agg aca cac ctt ctg     859
Ala Asn Tyr Val Arg Val Leu His His Tyr Asn Arg Thr His Leu Leu
                120                 125                 130
acc tgt ggt act gga gct ttt gat cca gtt tgt gcc ttc atc aga gtt     907
Thr Cys Gly Thr Gly Ala Phe Asp Pro Val Cys Ala Phe Ile Arg Val
            135                 140                 145
gga tat cat ttg gag gat cct ctg ttt cac ctg gaa tca ccc aga tct     955
Gly Tyr His Leu Glu Asp Pro Leu Phe His Leu Glu Ser Pro Arg Ser
        150                 155                 160
gag aga gga agg ggc aga tgt cct ttt gac ccc agc tcc tcc ttc atc     1003
Glu Arg Gly Arg Gly Arg Cys Pro Phe Asp Pro Ser Ser Ser Phe Ile
    165                 170                 175
tcc act tta att ggt agt gaa ttg ttt gct gga ctc tac agt gac tac     1051
Ser Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Phe Ala Gly Leu Tyr Ser Asp Tyr
180                 185                 190                 195
tgg agc aga gac gct gcg atc ttc cgc agc atg ggg cga ctg gcc cat     1099
Trp Ser Arg Asp Ala Ala Ile Phe Arg Ser Met Gly Arg Leu Ala His
                200                 205                 210
atc cgc act gag cat gac gat gag cgt ctg ttg aaa gaa cca aaa ttt     1147
Ile Arg Thr Glu His Asp Asp Glu Arg Leu Leu Lys Glu Pro Lys Phe
            215                 220                 225
gta ggt tca tac atg att cct gac aat gaa gac aga gat gac aac aaa     1195
Val Gly Ser Tyr Met Ile Pro Asp Asn Glu Asp Arg Asp Asp Asn Lys
        230                 235                 240
gta tat ttc ttt ttt act gag aag gca ctg gag gca gaa aac aat gct     1243
Val Tyr Phe Phe Phe Thr Glu Lys Ala Leu Glu Ala Glu Asn Asn Ala
    245                 250                 255
cac gca att tac acc agg gtc ggg cga ctc tgt gtg aat gat gta gga     1291
His Ala Ile Tyr Thr Arg Val Gly Arg Leu Cys Val Asn Asp Val Gly
260                 265                 270                 275
ggg cag aga ata ctg gtg aat aag tgg agc act ttc cta aaa gcg aga    1339
Gly Gln Arg Ile Leu Val Asn Lys Trp Ser Thr Phe Leu Lys Ala Arg
                280                 285                 290
ctc gtt tgc tca gta cca gga atg aat gga att gac aca tat ttt gat    1387
Leu Val Cys Ser Val Pro Gly Met Asn Gly Ile Asp Thr Tyr Phe Asp
            295                 300                 305
gaa tta gag gac gtt ttt ttg cta cct acc aga gat cat aag aat cca    1435
Glu Leu Glu Asp Val Phe Leu Leu Pro Thr Arg Asp His Lys Asn Pro
        310                 315                 320
gtg ata ttt gga ctc ttt aac act acc agt aat att ttt cga ggg cat    1483
Val Ile Phe Gly Leu Phe Asn Thr Thr Ser Asn Ile Phe Arg Gly His
    325                 330                 335
gct ata tgt gtc tat cac atg tct agc att cgg gca gcc ttc aac gga    1531
Ala Ile Cys Val Tyr His Met Ser Ser Ile Arg Ala Ala Phe Asn Gly
340                 345                 350                 355
cca tat gca cat aag gaa gga cct gaa tac cac tgg tca gtc tat gaa    1579
Pro Tyr Ala His Lys Glu Gly Pro Glu Tyr His Trp Ser Val Tyr Glu
                360                 365                 370
gga aaa gtc cct tat cca agg cct ggt tct tgt gcc agc aaa gta aat    1627
Gly Lys Val Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Ser Cys Ala Ser Lys Val Asn
            375                 380                 385
gga ggg aga tac gga acc acc aag gac tat cct gat gat gcc atc cga    1675
Gly Gly Arg Tyr Gly Thr Thr Lys Asp Tyr Pro Asp Asp Ala Ile Arg
        390                 395                 400
ttt gca aga agt cat cca cta atg tac cag gcc ata aaa cct gcc cat    1723
Phe Ala Arg Ser His Pro Leu Met Tyr Gln Ala Ile Lys Pro Ala His
    405                 410                 415
aaa aaa cca ata ttg gta aaa aca gat gga aaa tat aac ctg aaa caa    1771
Lys Lys Pro Ile Leu Val Lys Thr Asp Gly Lys Tyr Asn Leu Lys Gln
420                 425                 430                 435
ata gca gta gat cga gtg gaa gct gag gat ggc caa tat gac gtc ttg    1819
Ile Ala Val Asp Arg Val Glu Ala Glu Asp Gly Gln Tyr Asp Val Leu
                440                 445                 450
ttt att ggg aca gat aat gga att gtg ctg aaa gta atc aca att tac    1867
Phe Ile Gly Thr Asp Asn Gly Ile Val Leu Lys Val Ile Thr Ile Tyr
            455                 460                 465
aac caa gaa atg gaa tca atg gaa gaa gta att cta gaa gaa ctt cag    1915
Asn Gln Glu Met Glu Ser Met Glu Glu Val Ile Leu Glu Glu Leu Gln
        470                 475                 480
ata ttc aag gat cca gtt cct att att tct atg gag att tct tca aaa    1963
Ile Phe Lys Asp Pro Val Pro Ile Ile Ser Met Glu Ile Ser Ser Lys
    485                 490                 495
cgg caa cag ctg tat att gga tct gct tct gct gtg gct caa gtc aga    2011
Arg Gln Gln Leu Tyr Ile Gly Ser Ala Ser Ala Val Ala Gln Val Arg
500                 505                 510                 515
ttc cat cac tgt gac atg tat gga agt gct tgt gct gac tgc tgc ctg    2059
Phe His His Cys Asp Met Tyr Gly Ser Ala Cys Ala Asp Cys Cys Leu
                520                 525                 530
gct cga gac cct tac tgt gcc tgg gat ggc ata tcc tgc tcc cgg tat    2107
Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Ile Ser Cys Ser Arg Tyr
            535                 540                 545
tac cca aca ggc aca cat gca aaa agg cgt ttc cgg aga caa gat gtt    2155
Tyr Pro Thr Gly Thr His Ala Lys Arg Arg Phe Arg Arg Gln Asp Val
        550                 555                 560
cga cat gga aat gca gct cag cag tgc ttt gga caa cag ttt gtt ggg    2203
Arg His Gly Asn Ala Ala Gln Gln Cys Phe Gly Gln Gln Phe Val Gly
    565                 570                 575
gat gct ttg gat aag act gaa gaa cat ctg gct tat ggc ata gag aac    2251
Asp Ala Leu Asp Lys Thr Glu Glu His Leu Ala Tyr Gly Ile Glu Asn
580                 585                 590                 595
aac agt act ttg ctg gaa tgt acc cca cga tct tta caa gcg aaa gtt    2299
Asn Ser Thr Leu Leu Glu Cys Thr Pro Arg Ser Leu Gln Ala Lys Val
                600                 605                 610
atc tgg ttt gta cag aaa gga cgt gag aca aga aaa gag gag gtg aag    2347
Ile Trp Phe Val Gln Lys Gly Arg Glu Thr Arg Lys Glu Glu Val Lys
            615                 620                 625
aca gat gac aga gtg gtt aag atg gac ctt ggt tta ctc ttc cta agg    2395
Thr Asp Asp Arg Val Val Lys Met Asp Leu Gly Leu Leu Phe Leu Arg
        630                 635                 640
tta cac aaa tca gat gct ggg acc tat ttt tgc cag aca gta gag cat    2443
Leu His Lys Ser Asp Ala Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Thr Val Glu His
    645                 650                 655
agc ttt gtc cat acg gtc cgt aaa atc acc ttg gag gta gtg gaa gag    2491
Ser Phe Val His Thr Val Arg Lys Ile Thr Leu Glu Val Val Glu Glu
660                 665                 670                 675
gag aaa gtc gag gat atg ttt aac aag gac gat gag gag gac agg cat    2539
Glu Lys Val Glu Asp Met Phe Asn Lys Asp Asp Glu Glu Asp Arg His
                680                 685                 690
cac agg atg cct tgt cct gct cag agt agc atc tcg cag gga gca aaa    2587
His Arg Met Pro Cys Pro Ala Gln Ser Ser Ile Ser Gln Gly Ala Lys
            695                 700                 705
cca tgg tac aag gaa ttc ttg cag ctg atc ggt tat agc aac ttc cag    2635
Pro Trp Tyr Lys Glu Phe Leu Gln Leu Ile Gly Tyr Ser Asn Phe Gln
        710                 715                 720
aga gtg gaa gaa tac tgc gag aaa gta tgg tgc aca gat aga aag agg    2683
Arg Val Glu Glu Tyr Cys Glu Lys Val Trp Cys Thr Asp Arg Lys Arg
    725                 730                 735
aaa aag ctt aaa atg tca ccc tcc aag tgg aag tat gcc aac cct cag    2731
Lys Lys Leu Lys Met Ser Pro Ser Lys Trp Lys Tyr Ala Asn Pro Gln
740                 745                 750                 755
gaa aag aag ctc cgt tcc aaa cct gag cat tac cgc ctg ccc agg cac    2779
Glu Lys Lys Leu Arg Ser Lys Pro Glu His Tyr Arg Leu Pro Arg His
                760                 765                 770
acg ctg gac tcc tga tggggtgaga ctatctactg tcttttgaag aatttatatt    2834
Thr Leu Asp Ser
            775
tggaaagtaa aaaagtaaaa aaataaatca tccaacttct ttgcattact taaaagagat  2894
ttctgtaata caggaatgac tatgaaggtg ttataataaa ttattctaca tactcatttg  2954
actggataaa ctttacataa aattaactaa ttttttaaat aaatgcattg cttaatggtt  3014
tctcattatg tttatcaaaa aacaactgta gctgttattt tcagtacttg gctgcttttc  3074
tgtgaaaatt attattttac ttttggaaga caagattatt agaatattga agaaaaattg  3134
gagacttata atcatggtaa atataaaact aaatatgttt taatatttct gaatttttct  3194
tttccatcac aatgtaagat atgcagaata caagatactt tggcattctc atgtgaactt  3254
tctgtactct ttaaggatta ttttattagt gttgtttaag ccatgagtgt taagtagcag  3314
gtgtgttgtg agtgctgtaa cccatgaaag gaaaaatgtc attctgaggc ttgtgccctt  3374
cgtaaaatat tcattaaagt acattcacac tatttttgct ttataacaca gtctttaatt    3434
ttcactcact gtggaaataa aaactaaggt aacttctcag aaagatatca aatctcagaa    3494
agaatgtcaa atcagatgaa gttatagtta ggattctaac tactgtaaaa gatttttgct    3554
tccctcttgt ggtaaaaaaa attatattct cacacatttc ttttttctct acagacggat    3614
atctgtttag gaaagatttg aaagcagatt atcagtaggt acatggatac atcaagttca    3674
tttgcagaaa caaataactg aaataaaaaa catgttaatc cttgtatcat actttaatat    3734
gaaagtattg tttatagata atttatctca caagtcaaaa atgaagattt tgcagcactg    3794
aaaatctatt aaagctccaa attttaagtt tctaaataat cttcgctgaa atctaaaata    3854
tactataaca accgtgtttt atttgtgaaa aaaatattaa agtgatttgc tctcaaatat    3914
caaattttct tctctctttt atattaagag acagaaaatt gtttcatgag ttcacttaac    3974
tactgagata ttcagagcat ttttacctct ctcttaaatg ttataaaaaa caattgtatt    4034
tttaagaatg tttatttatc aaagtctttc cttcttctat taaatattta gcaattacct    4094
ttctaaaata tgaaattttg taagatgttt tcacctaaat aaaaattgaa agcaagtgga    4154
ttacacagga gaaccattat gaacatttat ttagatatta atcttaaaca gtgtttattt    4214
cagttttcaa agttagctta taggttatac atttaagtta aagtgctcat aatcacttgc    4274
aatttcattg taaaatgaac aaatacataa atattttaag aaaaatttaa gtttattcag    4334
ataagtcacc atgcttcaaa agatctaaga aatgcaaata tactgaaaat tgacatcctc    4394
tgaaaattcc acttgctatt tacccaagaa tccactggag gtcattactg ccattaaata    4454
ataactgaaa agactatgta gtgaaatgta tttttaaaaa ctatattcag taaaagcctg    4514
ctcaatttgg agaaatagaa ccacaaacac agatcacagg ggccttacaa agtttatgtc    4574
tgaacaaata agtcaattaa gtacacttta ttgaaaattg ccttccatta acacacaaga    4634
aagaaagcag gattttctcc tgtatctgaa ttttaaaatt aaaaaggcag ataagacata    4694
aatagttatc attttaattg caataacaca gacaagtagt taatgatgat aacaatggtg    4754
taacttgtaa actaaatatt tggtaactga agcaataggc agaggaaaat agcttttcta    4814
tgacacaagt cataagaagt ccatatactg aagagcgttt gattaaaata aagtgactat    4874
taaccagaaa agaaacattt tacataaaat gctaaaattt attataggaa aataaatcaa    4934
acccaaagaa agtttattca atgctaattt gaaagaaaat tgataagaaa actttgaggg    4994
cccaagtcca caatttggtg agaccactaa attttacata taattataca cacacatatg    5054
tacatatata tgtatataat cttgcttccc gcctgtttat ggcagtactg aagagaaatg    5114
ggaaagaaga gggagggaga gagaaagacg aagggagaga gaaagcagtt tccaaggata    5174
tgtttcatgt cccaccattt tctcagtttc tccctctctc tcccaacaca cacacacaca    5234
cacccctcac atactataaa ataaatcttc actgccctat caaaatacaa ataaatcaat    5294
ctatgctgtt ctgtccttct tgagaatcta aaacatacca caaaaataca tccccagtct    5354
tttgttctgt ctgaggttag aattaattca aattcagaat ctgttgtgag aaatgcccag    5414
gctttaaaaa ttaaaaatgg atggatcttc tctgaactca gggagggcac atacttagat    5474
acctacaaga cttggaggaa ttaagagttc acccttcatc tcaccaaatt ttccccattt    5534
ttctctttct tgtagaagga gagaaaccat gctctctagc aacattgagc aaaaatcata    5594
accactcatc taatttctaa gaggcacctc catcgagggc cggtctcctg cttctttaga    5654
cctcttctat ctttgttaca ggagaggacc tgtggataga cttagttttg acataaaaca    5714
atgcccattc acctcctcct tcagcacaac gtcacccatt gggcaagaga tccagatttg    5774
ttaacaaaaa agattttact tcgtgattcc acgtctataa ttctatattg ctaatttttt    5834
cttttgtgtg aattactgaa tatttcagag caaagctatc aacttggaga aacagggatt    5894
aaaaataagg ataaacacta ataagagctc tagaaaaaag ggaacagaaa gtctgcctgt    5954
ttagtaagtg gcaattccat acatatttta gagttttttc tatctaaaat tagttaaata    6014
cttagaatgt ttgtaatgag tgttcgatat ttgctatagg ttttagggtt ttgtaaatct    6074
tcatagtaat tataaacatt tgtaaaattt gtaaaatact ataagtcatt ttgagtgttg    6134
gtgttaagca tgaaacaaac agcagctgtt gtccttaaaa atgaattgac ctggccgggc    6194
gcggtggctc acgcctgtaa tcccagcact ttgggaggcc gaggcgggtg gatcatgagg    6254
tcaggagatg gagaccatcc tggctaacaa ggtgaaaccc cgtctctact aaaaatacaa    6314
aaaattagcc gggcgcggtg gcgggcgcct gtagtcccag ctacttggga ggctgaggca    6374
ggagaatggc gtgaacccgg gaagcggagc ttgcagtgag ccgagattgc gccactgcag    6434
tccgcagtcc ggcctgggcg acagagcgag actccgtctc                          6474
<210>16
<211>775
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>16
Met Ala Ser Ala Gly His Ile Ile Thr Leu Leu Leu Trp Gly Tyr Leu
1               5                   10                  15
Leu Glu Leu Trp Thr Gly Gly His Thr Ala Asp Thr Thr His Pro Arg
            20                  25                  30
Leu Arg Leu Ser His Lys Glu Leu Leu Asn Leu Asn Arg Thr Ser Ile
        35                  40                  45
Phe His Ser Pro Phe Gly Phe Leu Asp Leu His Thr Met Leu Leu Asp
    50                  55                  60
Glu Tyr Gln Glu Arg Leu Phe Val Gly Gly Arg Asp Leu Val Tyr Ser
65                  70                  75                  80
Leu Ser Leu Glu Arg Ile Ser Asp Gly Tyr Lys Glu Ile His Trp Pro
                85                  90                  95
Ser Thr Ala Leu Lys Met Glu Glu Cys Ile Met Lys Gly Lys Asp Ala
            100                 105                 110
Gly Glu Cys Ala Asn Tyr Val Arg Val Leu His His Tyr Asn Arg Thr
        115                 l20                 125
His Leu Leu Thr Cys Gly Thr Gly Ala Phe Asp Pro Val Cys Ala Phe
    130                 135                 140
Ile Arg Val Gly Tyr His Leu Glu Asp Pro Leu Phe His Leu Glu Ser
145                 150                 155                 160
Pro Arg Ser Glu Arg Gly Arg Gly Arg Cys Pro Phe Asp Pro Ser Ser
                165                 170                 175
Ser Phe Ile Ser Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Phe Ala Gly Leu Tyr
            180                 185                 190
Ser Asp Tyr Trp Ser Arg Asp Ala Ala Ile Phe Arg Ser Met Gly Arg
        195                 200                 205
Leu Ala His Ile Arg Thr Glu His Asp Asp Glu Arg Leu Leu Lys Glu
    210                 215                 220
Pro Lys Phe Val Gly Ser Tyr Met Ile Pro Asp Asn Glu Asp Arg Asp
225                 230                 235                 240
Asp Asn Lys Val Tyr Phe Phe Phe Thr Glu Lys Ala Leu Glu Ala Glu
                245                 250                 255
Asn Asn Ala His Ala Ile Tyr Thr Arg Val Gly Arg Leu Cys Val Asn
            260                 265                 270
Asp Val Gly Gly Gln Arg lle Leu Val Asn Lys Trp Ser Thr Phe Leu
        275                 280                 285
Lys Ala Arg Leu Val Cys Ser Val Pro Gly Met Asn Gly Ile Asp Thr
    290                 295                 300
Tyr Phe Asp Glu Leu Glu Asp Val Phe Leu Leu Pro Thr Arg Asp His
305                 310                 315                 320
Lys Asn Pro Val Ile Phe Gly Leu Phe Asn Thr Thr Ser Asn Ile Phe
                325                 330                 335
Arg Gly His Ala Ile Cys Val Tyr His Met Ser Ser Ile Arg Ala Ala
            340                 345                 350
Phe Asn Gly Pro Tyr Ala His Lys Glu Gly Pro Glu Tyr His Trp Ser
        355                 360                 365
Val Tyr Glu Gly Lys Val Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Ser Cys Ala Ser
    370                 375                 380
Lys Val Asn Gly Gly Arg Tyr Gly Thr Thr Lys Asp Tyr Pro Asp Asp
385                 390                 395                 400
Ala Ile Arg Phe Ala Arg Ser His Pro Leu Met Tyr Gln Ala Ile Lys
                405                 410                 415
Pro Ala His Lys Lys Pro Ile Leu Val Lys Thr Asp Gly Lys Tyr Asn
            420                 425                 430
Leu Lys Gln Ile Ala Val Asp Arg Val Glu Ala Glu Asp Gly Gln Tyr
        435                 440                 445
Asp Val Leu Phe Ile Gly Thr Asp Asn Gly Ile Val Leu Lys Val Ile
    450                 455                 460
Thr Ile Tyr Asn Gln Glu Met Glu Ser Met Glu Glu Val Ile Leu Glu
465                 470                 475                 480
Glu Leu Gln Ile Phe Lys Asp Pro Val Pro Ile Ile Ser Met Glu Ile
                485                 490                 495
Ser Ser Lys Arg Gln Gln Leu Tyr Ile Gly Ser Ala Ser Ala Val Ala
            500                 505                 510
Gln Val Arg Phe His His Cys Asp Met Tyr Gly Ser Ala Cys Ala Asp
        515                 520                 525
Cys Cys Leu Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Ile Ser Cys
    530                 535                 540
Ser Arg Tyr Tyr Pro Thr Gly Thr His Ala Lys Arg Arg Phe Arg Arg
545                 550                 555                 560
Gln Asp Val Arg His Gly Asn Ala Ala Gln Gln Cys Phe Gly Gln Gln
                565                 570                 575
Phe Val Gly Asp Ala Leu Asp Lys Thr Glu Glu His Leu Ala Tyr Gly
            580                 585                 590
Ile Glu Asn Asn Ser Thr Leu Leu Glu Cys Thr Pro Arg Ser Leu Gln
        595                 600                 605
Ala Lys Val Ile Trp Phe Val Gln Lys Gly Arg Glu Thr Arg Lys Glu
    610                 615                 620
Glu Val Lys Thr Asp Asp Arg Val Val Lys Met Asp Leu Gly Leu Leu
625                 630                 635                 640
Phe Leu Arg Leu His Lys Ser Asp Ala Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Thr
                645                 650                 655
Val Glu His Ser Phe Val His Thr Val Arg Lys Ile Thr Leu Glu Val
            660                 665                 670
Val Glu Glu Glu Lys Val Glu Asp Met Phe Asn Lys Asp Asp Glu Glu
        675                 680                 685
Asp Arg His His Arg Met Pro Cys Pro Ala Gln Ser Ser Ile Ser Gln
    690                 695                 700
Gly Ala Lys Pro Trp Tyr Lys Glu Phe Leu Gln Leu Ile Gly Tyr Ser
705                 710                 715                 720
Asn Phe Gln Arg Val Glu Glu Tyr Cys Glu Lys Val Trp Cys Thr Asp
                725                 730                 735
Arg Lys Arg Lys Lys Leu Lys Met Ser Pro Ser Lys Trp Lys Tyr Ala
            740                 745                 750
Asn Pro Gln Glu Lys Lys Leu Arg Ser Lys Pro Glu His Tyr Arg Leu
        755                 760                 765
Pro Arg His Thr Leu Asp Ser
    770                 775
<210>17
<211>2719
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(79)..(2436)
<400>17
cggggcccag gccccgccgc tgcggaagag gtttctagag agt ggagcct gcttcctggg 60
ccctaggccc ctcccaca atg ctt gtc gcc ggt ctt ctt ctc tgg gct tcc    111
                    Met Leu Val Ala Gly Leu Leu Leu Trp Ala Ser
                    1               5                   10
cta ctg acc ggg gcc tgg cca tcc ttc ccc acc cag gac cac ctc ccg    159
Leu Leu Thr Gly Ala Trp Pro Ser Phe Pro Thr Gln Asp His Leu Pro
            15                  20                  25
gcc acg ccc cgg gtc cgg ctc tca ttc aaa gag ctg aag gcc aca ggc    207
Ala Thr Pro Arg Val Arg Leu Ser Phe Lys Glu Leu Lys Ala Thr Gly
        30                  35                  40
acc gcc cac ttc ttc aac ttc ctg ctc aac aca acc gac tac cga atc    255
Thr Ala His Phe Phe Asn Phe Leu Leu Asn Thr Thr Asp Tyr Arg Ile
    45                  50                  55
ttg ctc aag gac gag gac cac gac cgc atg tac gtg ggc agc aag gac    303
Leu Leu Lys Asp Glu Asp His Asp Arg Met Tyr Val Gly Ser Lys Asp
60                  65                  70                  75
tac gtg ctg tcc ctg gac ctg cac gac atc aac cgc gag ccc ctc att    351
Tyr Val Leu Ser Leu Asp Leu His Asp Ile Asn Arg Glu Pro Leu Ile
                80                  85                  90
ata cac tgg gca gcc tcc cca cag cgc atc gag gaa tgc gtg ctc tca    399
Ile His Trp Ala Ala Ser Pro Gln Arg Ile Glu Glu Cys Val Leu Ser
            95                  100                 105
ggc aag gat gtc aac ggc gag tgt ggg aac ttc gtc agg ctc atc cag    447
Gly Lys Asp Val Asn Gly Glu Cys Gly Asn Phe Val Arg Leu Ile Gln
        110                 115                 120
ccc tgg aac cga aca cac ctg tat gtg tgc ggg aca ggt gcc tac aac    495
Pro Trp Asn Arg Thr His Leu Tyr Val Cys Gly Thr Gly Ala Tyr Asn
    125                 130                 135
ccc atg tgc acc tat gtg aac cgc gga cgc cgc gcc cag gcc aca cca    543
Pro Met Cys Thr Tyr Val Asn Arg Gly Arg Arg Ala Gln Ala Thr Pro
140                 145                 150                 155
tgg acc cag act cag gcg gtc aga ggc cgc ggc agc aga gcc acg gat    591
Trp Thr Gln Thr Gln Ala Val Arg Gly Arg Gly Ser Arg Ala Thr Asp
                160                 165                 170
ggt gcc ctc cgc ccg atg ccc aca gcc cca cgc cag gat tac atc ttc    639
Gly Ala Leu Arg Pro Met Pro Thr Ala Pro Arg Gln Asp Tyr Ile Phe
            175                 180                 185
tac ctg gag cct gag cga ctc gag tca ggg aag ggc aag tgt ccg tac    687
Tyr Leu Glu Pro Glu Arg Leu Glu Ser Gly Lys Gly Lys Cys Pro Tyr
        190                 195                 200
gat ccc aag ctg gac aca gca tcg gcc ctc atc aat gag gag ctc tat    735
Asp Pro Lys Leu Asp Thr Ala Ser Ala Leu Ile Asn Glu Glu Leu Tyr
    205                 210                 215
gct ggt gtg tac atc gat ttt atg ggc act gat gca gcc atc ttc cgc    783
Ala Gly Val Tyr Ile Asp Phe Met Gly Thr Asp Ala Ala Ile Phe Arg
220                 225                 230                 235
aca ctt gga aag cag aca gcc atg cgc acg gat cag tac aac tcc cgg    831
Thr Leu Gly Lys Gln Thr Ala Met Arg Thr Asp Gln Tyr Asn Ser Arg
                240                 245                 250
tgg ctg aac gac ccg tcg ttc atc cat gct gag ctc att cct gac agt    879
Trp Leu Asn Asp Pro Ser Phe Ile His Ala Glu Leu Ile Pro Asp Ser
            255                 260                 265
gcg gag cgc aat gat gat aag ctt tac ttc ttc ttc cgt gag cgg tcg    927
Ala Glu Arg Asn Asp Asp Lys Leu Tyr Phe Phe Phe Arg Glu Arg Ser
        270                 275                 280
gca gag gcg ccg cag agc ccc gcg gtg tac gcc cgc atc ggg cgc att    975
Ala Glu Ala Pro Gln Ser Pro Ala Val Tyr Ala Arg Ile Gly Arg Ile
    285                 290                 295
tgc ctg aac gat gac ggt ggt cac tgt tgc ctg gtc aac aag tgg agc    1023
Cys Leu Asn Asp Asp Gly Gly His Cys Cys Leu Val Asn Lys Trp Ser
300                 305                 310                 315
aca ttc ctg aag gcg cgg ctc gtc tgc tct gtc ccg ggc gag gat ggc    1071
Thr Phe Leu Lys Ala Arg Leu Val Cys Ser Val Pro Gly Glu Asp Gly
                320                 325                 330
att gag act cac ttt gat gag ctc cag gac gtg ttt gtc cag cag acc    1119
Ile Glu Thr His Phe Asp Glu Leu Gln Asp Val Phe Val Gln Gln Thr
            335                 340                 345
cag gac gtg agg aac cct gtc att tac gct gtc ttt acc tcc tct ggc    1167
Gln Asp Val Arg Asn Pro Val Ile Tyr Ala Val Phe Thr Ser Ser Gly
        350                 355                 360
tcc gtg ttc cga ggc tct gcc gtg tgt gtc tac tcc atg gct gat att    1215
Ser Val Phe Arg Gly Ser Ala Val Cys Val Tyr Ser Met Ala Asp Ile
    365                 370                 375
cgc atg gtc ttc aac ggg ccc ttt gcc cac aaa gag ggg ccc aac tac    1263
Arg Met Val Phe Asn Gly Pro Phe Ala His Lys Glu Gly Pro Asn Tyr
380                 385                 390                 395
cag tgg atg ccc ttc tca ggg aag atg ccc tac cca cgg ccg ggc acg    1311
Gln Trp Met Pro Phe Ser Gly Lys Met Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Thr
                400                 405                 410
tgc cct ggt gga acc ttc acg cca tct atg aag tcc acc aag gat tat    1359
Cys Pro Gly Gly Thr Phe Thr Pro Ser Met Lys Ser Thr Lys Asp Tyr
            415                 420                 425
cct gat gag gtg atc aac ttc atg cgc agc cac cca ctc atg tac cag    1407
Pro Asp Glu Val Ile Asn Phe Met Arg Ser His Pro Leu Met Tyr Gln
        430                 435                 440
gcc gtg tac cct ctg cag cgg cgg ccc ctg gta gtc cgc aca ggt gct    1455
Ala Val Tyr Pro Leu Gln Arg Arg Pro Leu Val Val Arg Thr Gly Ala
    445                 450                 455
ccc tac cgc ctt acc act att gcc gtg gac cag gtg gat gca ggc gac    l503
Pro Tyr Arg Leu Thr Thr Ile Ala Val Asp Gln Val Asp Ala Gly Asp
460                 465                 470                 475
ggg cgc tat gag gtg ctt ttc ctg ggc aca gac cgc ggg aca gtg cag    1551
Gly Arg Tyr Glu Val Leu Phe Leu Gly Thr Asp Arg Gly Thr Val Gln
                480                 485                 490
aag gtc att gtg ctg ccc aag gat gac cag gag atg gag gag ctc atg    1599
Lys Val Ile Val Leu Pro Lys Asp Asp Gln Glu Met Glu Glu Leu Met
            495                 500                 505
ctg gag gag gtg gag gtc ttc aag gat cca gca ccc gtc aag acc atg    1647
Leu Glu Glu Val Glu Val Phe Lys Asp Pro Ala Pro Val Lys Thr Met
        510                 515                 520
acc atc tct tct aag agg caa caa ctc tac gtg gcg tca gcc gtg ggt    1695
Thr Ile Ser Ser Lys Arg Gln Gln Leu Tyr Val Ala Ser Ala Val Gly
    525                 530                 535
gtc aca cac ctg agc ctg cac cgc tgc cag gcg tat ggg gct gcc tgt    1743
Val Thr His Leu Ser Leu His Arg Cys Gln Ala Tyr Gly Ala Ala Cys
540                 545                 550                 555
gct gac tgc tgc ctt gcc cgg gac cct tac tgt gcc tgg gat ggc cag    1791
Ala Asp Cys Cys Leu Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Gln
                560                 565                 570
gcc tgc tcc cgc tat aca gca tcc tcc aag agg cgg agc cgc cgg cag    1839
Ala Cys Ser Arg Tyr Thr Ala Ser Ser Lys Arg Arg Ser Arg Arg Gln
            575                 580                 585
gac gtc cgg cac gga aac ccc atc agg cag tgc cgt ggg ttc aac tcc    1887
Asp Val Arg His Gly Asn Pro Ile Arg Gln Cys Arg Gly Phe Asn Ser
        590                 595                 600
aat gcc aac aag aat gcc gtg gag tct gtg cag tat ggc gtg gcc ggc    1935
Asn Ala Asn Lys Asn Ala Val Glu Ser Val Gln Tyr Gly Val Ala Gly
    605                 6l0                 615
agc gca gcc ttc ctt gag tgc cag ccc cgc tcg ccc caa gcc act gtt    1983
Ser Ala Ala Phe Leu Glu Cys Gln Pro Arg Ser Pro Gln Ala Thr Val
620                 625                 630                 635
aag tgg ctg ttc cag cga gat cct ggt gac cgg cgc cga gag att cgt    2031
Lys Trp Leu Phe Gln Arg Asp Pro Gly Asp Arg Arg Arg Glu Ile Arg
                640                 645                 650
gca gag gac cgc ttc ctg cgc aca gag cag ggc ttg ttg ctc cgt gca    2079
Ala Glu Asp Arg Phe Leu Arg Thr Glu Gln Gly Leu Leu Leu Arg Ala
            655                 660                 665
ctg cag ctc agc gat cgt ggc ctc tac tcc tgc aca gcc act gag aac    2127
Leu Gln Leu Ser Asp Arg Gly Leu Tyr Ser Cys Thr Ala Thr Glu Asn
        670                 675                 680
aac ttt aag cac gtc gtc aca cga gtg cag ctg cat gta ctg ggc cgg    2175
Asn Phe Lys His Val Val Thr Arg Val Gln Leu His Val Leu Gly Arg
    685                 690                 695
gac gcc gtc cat gct gcc ctc ttc cca cca ctg tcc atg agc gcc ccg    2223
Asp Ala Val His Ala Ala Leu Phe Pro Pro Leu Ser Met Ser Ala Pro
700                 705                 710                 715
cca ccc cca ggc gca ggc ccc cca acg cct cct tac cag gag tta gcc    2271
Pro Pro Pro Gly Ala Gly Pro Pro Thr Pro Pro Tyr Gln Glu Leu Ala
                720                 725                 730
cag ctg ctg gcc cag cca gaa gtg ggc ctc atc cac cag tac tgc cag    2319
Gln Leu Leu Ala Gln Pro Glu Val Gly Leu Ile His Gln Tyr Cys Gln
            735                 740                 745
ggt tac tgg cgc cat gtg ccc ccc agc ccc agg gag gct cca ggg gca    2367
Gly Tyr Trp Arg His Val Pro Pro Ser Pro Arg Glu Ala Pro Gly Ala
        750                 755                 760
ccc cgg tct cct gag ccc cag gac cag aaa aag ccc cgg aac cgc cgg    2415
Pro Arg Ser Pro Glu Pro Gln Asp Gln Lys Lys Pro Arg Asn Arg Arg
    765                 770                 775
cac cac cct ccg gac aca tga ggccagctgc ctgtgcctgc catgggccag         2466
His His Pro Pro Asp Thr
780                 785
gctaggcctt ggtccctttt aatataaaag atatatatat atatatatat atatattaaa    2526
atatcggggt ggggggtgat tggaagggag ggaggtggcc ttcccaatgc gcgttattcg    2586
gggttattga agaataatat tgcaagtgac agccagaagt agactttctg tcctcacacc    2646
gaagaacccg agtgagcagg agggagggag agacgcgaag agaccttttt tcctttttgg    2706
agaccttgtc cgc                                                       2719
<210>18
<211>785
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>18
Met Leu Val Ala Gly Leu Leu Leu Trp Ala Ser Leu Leu Thr Gly Ala
1               5                   10                  15
Trp Pro Ser Phe Pro Thr Gln Asp His Leu Pro Ala Thr Pro Arg Val
            20                  25                  30
Arg Leu Ser Phe Lys Glu Leu Lys Ala Thr Gly Thr Ala His Phe Phe
        35                  40                  45
Asn Phe Leu Leu Asn Thr Thr Asp Tyr Arg Ile Leu Leu Lys Asp Glu
    50                  55                  60
Asp His Asp Arg Met Tyr Val Gly Ser Lys Asp Tyr Val Leu Ser Leu
65                  70                  75                  80
Asp Leu His Asp Ilr Asn Arg Glu Pro Leu Ile Ile His Trp Ala Ala
                85                  90                  95
Ser Pro Gln Arg Ile Glu Glu Cys Val Leu Ser Gly Lys Asp Val Asn
            100                 105                 110
Gly Glu Cys Gly Asn Phe Val Arg Leu Ile Gln Pro Trp Asn Arg Thr
        115                 120                 125
His Leu Tyr Val Cys Gly Thr Gly Ala Tyr Asn Pro Met Cys Thr Tyr
    130                 135                 140
Val Asn Arg Gly Arg Arg Ala Gln Ala Thr Pro Trp Thr Gln Thr Gln
145                 150                 155                 160
Ala Val Arg Gly Arg Gly Ser Arg Ala Thr Asp Gly Ala Leu Arg Pro
                165                 170                 175
Met Pro Thr Ala Pro Arg Gln Asp Tyr Ile Phe Tyr Leu Glu Pro Glu
            180                 185                 190
Arg Leu Glu Ser Gly Lys Gly Lys Cys Pro Tyr Asp Pro Lys Leu Asp
        195                 200                 205
Thr Ala Ser Ala Leu Ile Asn Glu Glu Leu Tyr Ala Gly Val Tyr Ile
    210                 215                 220
Asp Phe Met Gly Thr Asp Ala Ala Ile Phe Arg Thr Leu Gly Lys Gln
225                 230                 235                 240
Thr Ala Met Arg Thr Asp Gln Tyr Asn Ser Arg Trp Leu Asn Asp Pro
                245                 250                 255
Ser Phe Ile His Ala Glu Leu Ile Pro Asp Ser Ala Glu Arg Asn Asp
            260                 265                 270
Asp Lys Leu Tyr Phe Phe Phe Arg Glu Arg Ser Ala Glu Ala Pro Gln
        275                 280                 285
Ser Pro Ala Val Tyr Ala Arg Ile Gly Arg Ile Cys Leu Asn Asp Asp
    290                 295                 300
Gly Gly His Cys Cys Leu Val Asn Lys Trp Ser Thr Phe Leu Lys Ala
305                 310                 315                 320
Arg Leu Val Cys Ser Val Pro Gly Glu Asp Gly Ile Glu Thr His Phe
                325                 330                 335
Asp Glu Leu Gln Asp Val Phe Val Gln Gln Thr Gln Asp Val Arg Asn
            340                 345                 350
Pro Val Ile Tyr Ala Val Phe Thr Ser Ser Gly Ser Val Phe Arg Gly
        355                 360                 365
Ser Ala Val Cys Val Tyr Ser Met Ala Asp Ile Arg Met Val Phe Asn
    370                 375                 380
Gly Pro Phe Ala His Lys Glu Gly Pro Asn Tyr Gln Trp Met Pro Phe
385                 390                 395                 400
Ser Gly Lys Met Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Thr Cys Pro Gly Gly Thr
                405                 410                 415
Phe Thr Pro Ser Met Lys Ser Thr Lys Asp Tyr Pro Asp Glu Val Ile
            420                 425                 430
Asn Phe Met Arg Ser His Pro Leu Met Tyr Gln Ala Val Tyr Pro Leu
        435                 440                 445
Gln Arg Arg Pro Leu Val Val Arg Thr Gly Ala Pro Tyr Arg Leu Thr
    450                 455                 460
Thr Ile Ala Val Asp Gln Val Asp Ala Gly Asp Gly Arg Tyr Glu Val
465                 470                 475                 480
Leu Phe Leu Gly Thr Asp Arg Gly Thr Val Gln Lys Val Ile Val Leu
                485                 490                 495
Pro Lys Asp Asp Gln Glu Met Glu Glu Leu Met Leu Glu Glu Val Glu
            500                 505                 510
Val Phe Lys Asp Pro Ala Pro Val Lys Thr Met Thr Ile Ser Ser Lys
        515                 520                 525
Arg Gln Gln Leu Tyr Val Ala Ser Ala Val Gly Val Thr His Leu Ser
    530                 535                 540
Leu His Arg Cys Gln Ala Tyr Gly Ala Ala Cys Ala Asp Cys Cys Leu
545                 550                 555                 560
Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Gln Ala Cys Ser Arg Tyr
                565                 570                 575
Thr Ala Ser Ser Lys Arg Arg Ser Arg Arg Gln Asp Val Arg His Gly
            580                 585                 590
Asn Pro Ile Arg Gln Cys Arg Gly Phe Asn Ser Asn Ala Asn Lys Asn
        595                 600                 605
Ala Val Glu Ser Val Gln Tyr Gly Val Ala Gly Ser Ala Ala Phe Leu
    610                 615                 620
Glu Cys Gln Pro Arg Ser Pro Gln Ala Thr Val Lys Trp Leu Phe Gln
625                 630                 635                 640
Arg Asp Pro Gly Asp Arg Arg Arg Glu Ile Arg Ala Glu Asp Arg Phe
                645                 650                 655
Leu Arg Thr Glu Gln Gly Leu Leu Leu Arg Ala Leu Gln Leu Ser Asp
            660                 665                 670
Arg Gly Leu Tyr Ser Cys Thr Ala Thr Glu Asn Asn Phe Lys His Val
        675                 680                 685
Val Thr Arg Val Gln Leu His Val Leu Gly Arg Asp Ala Val His Ala
    690                 695                 700
Ala Leu Phe Pro Pro Leu Ser Met Ser Ala Pro Pro Pro Pro Gly Ala
705                 710                 715                 720
Gly Pro Pro Thr Pro Pro Tyr Gln Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln
                725                 730                 735
Pro Glu Val Gly Leu Ile His Gln Tyr Cys Gln Gly Tyr Trp Arg His
            740                 745                 750
Val Pro Pro Ser Pro Arg Glu Ala Pro Gly Ala Pro Arg Ser Pro Glu
        755                 760                 765
Pro Gln Asp Gln Lys Lys Pro Arg Asn Arg Arg His His Pro Pro Asp
    770                 775                 780
Thr
785
<210>19
<211>649
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(17)..(592)
<220>
<221>mi sc_feature
<222>(17)..(94)
<223>信号肽
<400>19
tcgggcctcc gaaacc atg aac ttt ctg ctg tct tgg gtg cat tgg agc ctt    52
                  Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu
                  1               5                   10
gcc ttg ctg ctc tac ctc cac cat gcc aag tgg tcc cag gct gca ccc      100
Ala Leu Leu Leu Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro
        15                  20                  25
atg gca gaa gga gga ggg cag aat cat cac gaa gtg gtg aag ttc atg      148
Met Ala Glu Gly Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met
    30                  35                  40
gat gtc tat cag cgc agc tac tgc cat cca atc gag acc ctg gtg gac      196
Asp Val Tyr Gln Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp
45                  50                  55                  60
atc ttc cag gag tac cct gat gag atc gag tac atc ttc aag cca tcc      244
Ile Phe Gln Glu Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phc Lys Pro Ser
                65                  70                  75
tgt gtg ccc ctg atg cga tgc ggg ggc tgc tgc aat gac gag ggc ctg      292
Cys Val Pro Leu Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu
            80                  85                  90
gag tgt gtg ccc act gag gag tcc aac atc acc atg cag att atg cgg      340
Glu Cys Val Pro Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg
        95                  100                 105
atc aaa cct cac caa ggc cag cac ata gga gag atg agc ttc cta cag      388
Ile Lys Pro His Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln
    110                 115                 120
cac aac aaa tgt gaa tgc aga cca aag aaa gat aga gca aga caa gaa      436
His Asn Lys Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu
125                 130                 135                 140
aat ccc tgt ggg cct tgc tca gag cgg aga aag cat ttg ttt gta caa      484
Asn Pro Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe Val Gln
                145                 150                 155
gat ccg cag acg tgt aaa tgt tcc tgc aaa aac aca gac tcg cgt tgc      532
Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser Arg Cys
            160                 165                 170
aag gcg agg cag ctt gag tta aac gaa cgt act tgc aga tgt gac aag      580
Lys Ala Arg Gln Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys Asp Lys
        175                 180                 185
ccg agg cgg tga gccgggcagg aggaaggagc ctccctcagc gtttcgggaa          632
Pro Arg Arg
    190
ccagatctct caccagg                                                   649
<210>20
<211>191
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>misc_feature
<222>(17)..(94)
<223>信号肽
<400>20
Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly
            20                  25                  30
Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln
        35                  40                  45
Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu
    50                  55                  60
Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu
65                  70                  75                  80
Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro
                85                  90                  95
Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His
            100                 105                 110
Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys
        115                 120                 125
Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Asn Pro Cys Gly
    130                 135                 140
Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr
145                 150                 155                 160
Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln
                165                 170                 175
Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg
            180                 185                 190
<210>21
<211>755
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(5)..(628)
<400>21
cacc atg agc cct ctg ctc cgc cgc ctg ctg ctc gcc gca ctc ctg cag 49
     Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln
     1               5                   10                  15
ctg gcc ccc gcc cag gcc cct gtc tcc cag cct gat gcc cct ggc cac    97
Leu Ala Pro Ala Gln Ala Pro Val Ser Gln Pro Asp Ala Pro Gly His
                20                  25                  30
cag agg aaa gtg gtg tca tgg ata gat gtg tat act cgc gct acc tgc    145
Gln Arg Lys Val Val Ser Trp Ile Asp Val Tyr Thr Arg Ala Thr Cys
            35                  40                  45
cag ccc cgg gag gtg gtg gtg ccc ttg act gtg gag ctc atg ggc acc    193
Gln Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Thr Val Glu Leu Met Gly Thr
        50                  55                  60
gtg gcc aaa cag ctg gtg ccc agc tgc gtg act gtg cag cgc tgt ggt    241
Val Ala Lys Gln Leu Val Pro Ser Cys Val Thr Val Gln Arg Cys Gly
    65                  70                  75
ggc tgc tgc cct gac gat ggc ctg gag tgt gtg ccc act ggg cag cac    289
Gly Cys Cys Pro Asp Asp Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Gly Gln His
80                  85                  90                  95
caa gtc cgg atg cag atc ctc atg atc cgg tac ccg agc agt cag ctg    337
Gln Val Arg Met Gln Ile Leu Met Ile Arg Tyr Pro Ser Ser Gln Leu
                100                 105                 110
ggg gag atg tcc ctg gaa gaa cac agc cag tgt gaa tgc aga cct aaa    385
Gly Glu Met Ser Leu Glu Glu His Ser Gln Cys Glu Cys Arg Pro Lys
            115                 120                 125
aaa aag gac agt gct gtg aag cca gac agg gct gcc act ccc cac cac    433
Lys Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Arg Ala Ala Thr Pro His His
        130                 135                 140
cgt ccc cag ccc cgt tct gtt ccg ggc tgg gac tct gcc ccc gga gca    481
Arg Pro Gln Pro Arg Ser Val Pro Gly Trp Asp Ser Ala Pro Gly Ala
    l45                 150                 155
ccc tcc cca gct gac atc acc cat ccc act cca gcc cca ggc ccc tct    529
Pro Ser Pro Ala Asp Ile Thr His Pro Thr Pro Ala Pro Gly Pro Ser
160                 165                 170                 175
gcc cac gct gca ccc agc acc acc agc gcc ctg acc ccc gga cct gcc    577
Ala His Ala Ala Pro Ser Thr Thr Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Ala
                180                 185                 190
gcc gcc gct gcc gac gcc gca gct tcc tcc gtt gcc aag ggc ggg gct    625
Ala Ala Ala Ala Asp Ala Ala Ala Ser Ser Val Ala Lys Gly Gly Ala
            195                 200                 205
tag agctcaaccc agacacctgc aggtgccgga agctgcgaag gtgacacatg         678
gcttttcaga ctcagcaggg tgacttgcct cagaggctat atcccagtgg gggaacaaag  738
aggagcctgg taaaaaa                                                 755
<210>22
<211>207
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>22
Met Ser Pro Leu Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Gln Leu
1               5                   10                  15
Ala Pro Ala Gln Ala Pro Val Ser Gln Pro Asp Ala Pro Gly His Gln
            20                  25                  30
Arg Lys Val Val Ser Trp Ile Asp Val Tyr Thr Arg Ala Thr Cys Gln
        35                  40                  45
Pro Arg Glu Val Val Val Pro Leu Thr Val Glu Leu Met Gly Thr Val
    50                  55                  60
Ala Lys Gln Leu Val Pro Ser Cys Val Thr Val Gln Arg Cys Gly Gly
65                  70                  75                  80
Cys Cys Pro Asp Asp Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Gly Gln His Gln
                85                  90                  95
Val Arg Met Gln Ile Leu Met Ile Arg Tyr Pro Ser Ser Gln Leu Gly
            100                 105                 110
Glu Met Ser Leu Glu Glu His Ser Gln Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys
        115                 120                 125
Lys Asp Ser Ala Val Lys Pro Asp Arg Ala Ala Thr Pro His His Arg
    130                 135                 140
Pro Gln Pro Arg Ser Val Pro Gly Trp Asp Ser Ala Pro Gly Ala Pro
145                 150                 155                 160
Ser Pro Ala Asp Ile Thr His Pro Thr Pro Ala Pro Gly Pro Ser Ala
                165                 170                 175
His Ala Ala Pro Ser Thr Thr Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Ala Ala
            180                 185                 190
Ala Ala Ala Asp Ala Ala Ala Ser Ser Val Ala Lys Gly Gly Ala
        195                 200                 205
<210>23
<211>1997
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(352)..(1611)
<400>23
cccgccccgc ctctccaaaa agctacaccg acgcggaccg cggcggcgtc ctccctcgcc    60
ctcgcttcac ctcgcgggct ccgaatgcgg ggagctcgga tgtccggttt cctgtgaggc    120
ttttacctga cacccgccgc ctttccccgg cactggctgg gagggcgccc tgcaaagttg    180
ggaacgcgga gccccggacc cgctcccgcc gcctccggct cgcccagggg gggtcgccgg    240
gaggagcccg ggggagaggg accaggaggg gcccgcggcc tcgcaggggc gcccgcgccc    300
ccacccctgc ccccgccagc ggaccggtcc cccacccccg gtccttccac c atg cac     357
                                                         Met His
                                                         1
ttg ctg ggc ttc ttc tct gtg gcg tgt tct ctg ctc gcc gct gcg ctg      405
Leu Leu Gly Phe Phe Ser Val Ala Cys Ser Leu Leu Ala Ala Ala Leu
        5                   10                  15
ctc ccg ggt cct cgc gag gcg ccc gcc gcc gcc gcc gcc ttc gag tcc      453
Leu Pro Gly Pro Arg Glu Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Glu Ser
    20                  25                  30
gga ctc gac ctc tcg gac gcg gag ccc gac gcg ggc gag gcc acg gct      501
Gly Leu Asp Leu Ser Asp Ala Glu Pro Asp Ala Gly Glu Ala Thr Ala
35                  40                  45                  50
tat gca agc aaa gat ctg gag gag cag tta cgg tct gtg tcc agt gta    549
Tyr Ala Ser Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu Arg Ser Val Ser Ser Val
                55                  60                  65
gat gaa ctc atg act gta ctc tac cca gaa tat tgg aaa atg tac aag    597
Asp Glu Leu Met Thr Val Leu Tyr Pro Glu Tyr Trp Lys Met Tyr Lys
            70                  75                  80
tgt cag cta agg aaa gga ggc tgg caa cat aac aga gaa cag gcc aac    645
Cys Gln Leu Arg Lys Gly Gly Trp Gln His Asn Arg Glu Gln Ala Asn
        85                  90                  95
ctc aac tca agg aca gaa gag act ata aaa ttt gct gca gca cat tat    693
Leu Asn Ser Arg Thr Glu Glu Thr Ile Lys Phe Ala Ala Ala His Tyr
    100                 105                 110
aat aca gag atc ttg aaa agt att gat aat gag tgg aga aag act caa    741
Asn Thr Glu Ile Leu Lys Ser Ile Asp Asn Glu Trp Arg Lys Thr Gln
115                 120                 125                 130
tgc atg cca cgg gag gtg tgt ata gat gtg ggg aag gag ttt gga gtc    789
Cys Met Pro Arg Glu Val Cys Ile Asp Val Gly Lys Glu Phe Gly Val
                135                 140                 145
gcg aca aac acc ttc ttt aaa cct cca tgt gtg tcc gtc tac aga tgt    837
Ala Thr Asn Thr Phe Phe Lys Pro Pro Cys Val Ser Val Tyr Arg Cys
            150                 155                 160
ggg ggt tgc tgc aat agt gag ggg ctg cag tgc atg aac acc agc acg    885
Gly Gly Cys Cys Asn Ser Glu Gly Leu Gln Cys Met Asn Thr Ser Thr
        165                 170                 175
agc tac ctc agc aag acg tta ttt gaa att aca gtg cct ctc tct caa    933
Ser Tyr Leu Ser Lys Thr Leu Phe Glu Ile Thr Val Pro Leu Ser Gln
    180                 185                 190
ggc ccc aaa cca gta aca atc agt ttt gcc aat cac act tcc tgc cga    981
Gly Pro Lys Pro Val Thr Ile Ser Phe Ala Asn His Thr Ser Cys Arg
195                 200                 205                 210
tgc atg tct aaa ctg gat gtt tac aga caa gtt cat tcc att att aga    1029
Cys Met Ser Lys Leu Asp Val Tyr Arg Gln Val His Ser Ile Ile Arg
                215                 220                 225
cgt tcc ctg cca gca aca cta cca cag tgt cag gca gcg aac aag acc    1077
Arg Ser Leu Pro Ala Thr Leu Pro Gln Cys Gln Ala Ala Asn Lys Thr
            230                 235                 240
tgc ccc acc aat tac atg tgg aat aat cac atc tgc aga tgc ctg gct    1125
Cys Pro Thr Asn Tyr Met Trp Asn Asn His Ile Cys Arg Cys Leu Ala
        245                 250                 255
cag gaa gat ttt atg ttt tcc tcg gat gct gga gat gac tca aca gat    1173
Gln Glu Asp Phe Met Phe Ser Ser Asp Ala Gly Asp Asp Ser Thr Asp
    260                 265                 270
gga ttc cat gac atc tgt gga cca aac aag gag ctg gat gaa gag acc    1221
Gly Phe His Asp Ile Cys Gly Pro Asn Lys Glu Leu Asp Glu Glu Thr
275                 280                 285                 290
tgt cag tgt gtc tgc aga gcg ggg ctt cgg cct gcc agc tgt gga ccc    1269
Cys Gln Cys Val Cys Arg Ala Gly Leu Arg Pro Ala Ser Cys Gly Pro
                295                 300                 305
cac aaa gaa cta gac aga aac tca tgc cag tgt gtc tgt aaa aac aaa    1317
His Lys Glu Leu Asp Arg Asn Ser Cys Gln Cys Val Cys Lys Asn Lys
            310                 315                 320
ctc ttc ccc agc caa tgt ggg gcc aac cga gaa ttt gat gaa aac aca    1365
Leu Phe Pro Ser Gln Cys Gly Ala Asn Arg Glu Phe Asp Glu Asn Thr
        325                 330                 335
tgc cag tgt gta tgt aaa aga acc tgc ccc aga aat caa ccc cta aat      1413
Cys Gln Cys Val Cys Lys Arg Thr Cys Pro Arg Asn Gln Pro Leu Asn
    340                 345                 350
cct gga aaa tgt gcc tgt gaa tgt aca gaa agt cca cag aaa tgc ttg      1461
Pro Gly Lys Cys Ala Cys Glu Cys Thr Glu Ser Pro Gln Lys Cys Leu
355                 360                 365                 370
tta aaa gga aag aag ttc cac cac caa aca tgc agc tgt tac aga cgg      1509
Leu Lys Gly Lys Lys Phe His His Gln Thr Cys Ser Cys Tyr Arg Arg
                375                 380                 385
cca tgt acg aac cgc cag aag gct tgt gag cca gga ttt tca tat agt      1557
Pro Cys Thr Asn Arg Gln Lys Ala Cys Glu Pro Gly Phe Ser Tyr Ser
            390                 395                 400
gaa gaa gtg tgt cgt tgt gtc cct tca tat tgg aaa aga cca caa atg      1605
Glu Glu Val Cys Arg Cys Val Pro Ser Tyr Trp Lys Arg Pro Gln Met
        405                 410                 415
agc taa gattgtactg ttttccagtt catcgatttt ctattatgga aaactgtgtt       1661
Ser
gccacagtag aactgtctgt gaacagagag acccttgtgg gtccatgcta acaaagacaa    1721
aagtctgtct ttcctgaacc atgtggataa ctttacagaa atggactgga gctcatctgc    1781
aaaaggcctc ttgtaaagac tggttttctg ccaatgacca aacagccaag attttcctct    1841
tgtgatttct ttaaaagaat gactatataa tttatttcca ctaaaaatat tgtttctgca    1901
ttcattttta tagcaacaac aattggtaaa actcactgtg atcaatattt ttatatcatg    1961
caaaatatgt ttaaaataaa atgaaaattg tattat                              1997
<210>24
<211>419
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>24
Met His Leu Leu Gly Phe Phe Ser Val Ala Cys Ser Leu Leu Ala Ala
1               5                   10                  15
Ala Leu Leu Pro Gly Pro Arg Glu Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe
            20                  25                  30
Glu Ser Gly Leu Asp Leu Ser Asp Ala Glu Pro Asp Ala Gly Glu Ala
        35                  40                  45
Thr Ala Tyr Ala Ser Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu Arg Ser Val Ser
    50                  55                  60
Ser Val Asp Glu Leu Met Thr Val Leu Tyr Pro Glu Tyr Trp Lys Met
65                  70                  75                  80
Tyr Lys Cys Gln Leu Arg Lys Gly Gly Trp Gln His Asn Arg Glu Gln
                85                  90                  95
Ala Asn Leu Asn Ser Arg Thr Glu Glu Thr Ile Lys Phe Ala Ala Ala
            100                 105                 110
His Tyr Asn Thr Glu Ile Leu Lys Ser Ile Asp Asn Glu Trp Arg Lys
        115                 120                 125
Thr Gln Cys Met Pro Arg Glu Val Cys Ile Asp Val Gly Lys Glu Phe
    130                 135                 140
Gly Val Ala Thr Asn Thr Phe Phe Lys Pro Pro Cys Val Ser Val Tyr
145                 150                 155                 160
Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Ser Glu Gly Leu Gln Cys Met Asn Thr
                165                 170                 175
Ser Thr Ser Tyr Leu Ser Lys Thr Leu Phe Glu Ile Thr Val Pro Leu
            180                 185                 190
Ser Gln Gly Pro Lys Pro Val Thr Ile Ser Phe Ala Asn His Thr Ser
        195                 200                 205
Cys Arg Cys Met Ser Lys Leu Asp Val Tyr Arg Gln Val His Ser Ile
    210                 215                 220
Ile Arg Arg Ser Leu Pro Ala Thr Leu Pro Gln Cys Gln Ala Ala Asn
225                 230                 235                 240
Lys Thr Cys Pro Thr Asn Tyr Met Trp Asn Asn His Ile Cys Arg Cys
                245                 250                 255
Leu Ala Gln Glu Asp Phe Met Phe Ser Ser Asp Ala Gly Asp Asp Ser
            260                 265                 270
Thr Asp Gly Phe His Asp Ile Cys Gly Pro Asn Lys Glu Leu Asp Glu
        275                 280                 285
Glu Thr Cys Gln Cys Val Cys Arg Ala Gly Leu Arg Pro Ala Ser Cys
    290                 295                 300
Gly Pro His Lys Glu Leu Asp Arg Asn Ser Cys Gln Cys Val Cys Lys
305                 310                 315                 320
Asn Lys Leu Phe Pro Ser Gln Cys Gly Ala Asn Arg Glu Phe Asp Glu
                325                 330                 335
Asn Thr Cys Gln Cys Val Cys Lys Arg Thr Cys Pro Arg Asn Gln Pro
            340                 345                 350
Leu Asn Pro Gly Lys Cys Ala Cys Glu Cys Thr Glu Ser Pro Gln Lys
        355                 360                 365
Cys Leu Leu Lys Gly Lys Lys Phe His His Gln Thr Cys Ser Cys Tyr
    370                 375                 380
Arg Arg Pro Cys Thr Asn Arg Gln Lys Ala Cys Glu Pro Gly Phe Ser
385                 390                 395                 400
Tyr Ser Glu Glu Val Cys Arg Cys Val Pro Ser Tyr Trp Lys Arg Pro
                405                 410                 415
Gln Met Ser
<210>25
<211>2029
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(411)..(1475)
<400>25
gttgggttcc agctttctgt agctgtaagc attggtggcc acaccacctc cttacaaagc  60
aactagaacc tgcggcatac attggagaga tttttttaat tttctggaca tgaagtaaat  120
ttagagtgct ttctaatttc aggtagaaga catgtccacc ttctgattat ttttggagaa  180
cattttgatt tttttcatct ctctctcccc acccctaaga ttgtgcaaaa aaagcgtacc  240
ttgcctaatt gaaataattt cattggattt tgatcagaac tgattatttg gttttctgtg  300
tgaagttttg aggtttcaaa ctttccttct ggagaatgcc ttttgaaaca attttctcta  360
gctgcctgat gtcaactgct tagtaatcag tggatattga aatattcaaa atg tac     416
                                                       Met Tyr
                                                       1
aga gag tgg gta gtg gtg aat gtt ttc atg atg ttg tac gtc cag ctg    464
Arg Glu Trp Val Val Val Asn Val Phe Met Met Leu Tyr Val Gln Leu
        5                   10                  15
gtg cag ggc tcc agt aat gaa cat gga cca gtg aag cga tca tct cag    512
Val Gln Gly Ser Ser Asn Glu His Gly Pro Val Lys Arg Ser Ser Gln
    20                  25                  30
tcc aca ttg gaa cga tct gaa cag cag atc agg gct gct tct agt ttg    560
Ser Thr Leu Glu Arg Ser Glu Gln Gln Ile Arg Ala Ala Ser Ser Leu
35                  40                  45                  50
gag gaa cta ctt cga att act cac tct gag gac tgg aag ctg tgg aga    608
Glu Glu Leu Leu Arg Ile Thr His Ser Glu Asp Trp Lys Leu Trp Arg
                55                  60                  65
tgc agg ctg agg ctc aaa agt ttt acc agt atg gac tct cgc tca gca    656
Cys Arg Leu Arg Leu Lys Ser Phe Thr Ser Met Asp Ser Arg Ser Ala
            70                  75                  80
tcc cat cgg tcc act agg ttt gcg gca act ttc tat gac att gaa aca    704
Ser His Arg Ser Thr Arg Phe Ala Ala Thr Phe Tyr Asp Ile Glu Thr
        85                  90                  95
cta aaa gtt ata gat gaa gaa tgg caa aga act cag tgc agc cct aga    752
Leu Lys Val Ile Asp Glu Glu Trp Gln Arg Thr Gln Cys Ser Pro Arg
    100                 105                 110
gaa acg tgc gtg gag gtg gcc agt gag ctg ggg aag agt acc aac aca    800
Glu Thr Cys Val Glu Val Ala Ser Glu Leu Gly Lys Ser Thr Asn Thr
115                 120                 125                 130
ttc ttc aag ccc cct tgt gtg aac gtg ttc cga tgt ggt ggc tgt tgc    848
Phe Phe Lys Pro Pro Cys Val Asn Val Phe Arg Cys Gly Gly Cys Cys
                135                 140                 145
aat gaa gag agc ctt atc tgt atg aac acc agc acc tcg tac att tcc    896
Asn Glu Glu Ser Leu Ile Cys Met Asn Thr Ser Thr Ser Tyr Ile Ser
            150                 155                 160
aaa cag ctc ttt gag ata tca gtg cct ttg aca tca gta cct gaa tta    944
Lys Gln Leu Phe Glu Ile Ser Val Pro Leu Thr Ser Val Pro Glu Leu
        165                 170                 175
gtg cct gtt aaa gtt gcc aat cat aca ggt tgt aag tgc ttg cca aca    992
Val Pro Val Lys Val Ala Asn His Thr Gly Cys Lys Cys Leu Pro Thr
    180                 185                 190
gcc ccc cgc cat cca tac tca att atc aga aga tcc atc cag atc cct      1040
Ala Pro Arg His Pro Tyr Ser Ile Ile Arg Arg Ser Ile Gln Ile Pro
195                 200                 205                 210
gaa gaa gat cgc tgt tcc cat tcc aag aaa ctc tgt cct att gac atg      1088
Glu Glu Asp Arg Cys Ser His Ser Lys Lys Leu Cys Pro Ile Asp Met
                215                 220                 225
cta tgg gat agc aac aaa tgt aaa tgt gtt ttg cag gag gaa aat cca      1136
Leu Trp Asp Ser Asn Lys Cys Lys Cys Val Leu Gln Glu Glu Asn Pro
            230                 235                 240
ctt gct gga aca gaa gac cac tct cat ctc cag gaa cca gct ctc tgt      1184
Leu Ala Gly Thr Glu Asp His Ser His Leu Gln Glu Pro Ala Leu Cys
        245                 250                 255
ggg cca cac atg atg ttt gac gaa gat cgt tgc gag tgt gtc tgt aaa      1232
Gly Pro His Met Met Phe Asp Glu Asp Arg Cys Glu Cys Val Cys Lys
    260                 265                 270
aca cca tgt ccc aaa gat cta atc cag cac ccc aaa aac tgc agt tgc      1280
Thr Pro Cys Pro Lys Asp Leu Ile Gln His Pro Lys Asn Cys Ser Cys
275                 280                 285                 290
ttt gag tgc aaa gaa agt ctg gag acc tgc tgc cag aag cac aag cta      1328
Phe Glu Cys Lys Glu Ser Leu Glu Thr Cys Cys Gln Lys His Lys Leu
                295                 300                 305
ttt cac cca gac acc tgc agc tgt gag gac aga tgc ccc ttt cat acc      1376
Phe His Pro Asp Thr Cys Ser Cys Glu Asp Arg Cys Pro Phe His Thr
            310                 315                 320
aga cca tgt gca agt ggc aaa aca gca tgt gca aag cat tgc cgc ttt      1424
Arg Pro Cys Ala Ser Gly Lys Thr Ala Cys Ala Lys His Cys Arg Phe
        325                 330                 335
cca aag gag aaa agg gct gcc cag ggg ccc cac agc cga aag aat cct      1472
Pro Lys Glu Lys Arg Ala Ala Gln Gly Pro His Ser Arg Lys Asn Pro
    340                 345                 350
tga ttcagcgttc caagttcccc atccctgtca tttttaacag catgctgctt           1525
tgccaagttg ctgtcactgt ttttttccca ggtgttaaaa aaaaaatcca ttttacacag    1585
caccacagtg aatccagacc aaccttccat tcacaccagc taaggagtcc ctggttcatt    1645
gatggatgtc ttctagctgc agatgcctct gcgcaccaag gaatggagag gaggggaccc    1705
atgtaatcct tttgtttagt tttgtttttg ttttttggtg aatgagaaag gtgtgctggt    1765
catggaatgg caggtgtcat atgactgatt actcagagca gatgaggaaa actgtagtct    1825
ctgagtcctt tgctaatcgc aactcttgtg aattattctg attctttttt atgcagaatt    1885
tgattcgtat gatcagtact gactttctga ttactgtcca gcttatagtc ttccagttta    1945
atgaactacc atctgatgtt tcatatttaa gtgtatttaa agaaaataaa caccattatt    2005
caagccaaaa aaaaaaaaaa aaaa                                           2029
<210>26
<211>354
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>26
Met Tyr Arg Glu Trp Val Val Val Asn Val Phe Met Met Leu Tyr Val
1               5                   10                  15
Gln Leu Val Gln Gly Ser Ser Asn Glu His Gly Pro Val Lys Arg Ser
            20                  25                  30
Ser Gln Ser Thr Leu Glu Arg Ser Glu Gln Gln Ile Arg Ala Ala Ser
        35                  40                  45
Ser Leu Glu Glu Leu Leu Arg Ile Thr His Ser Glu Asp Trp Lys Leu
    50                  55                  60
Trp Arg Cys Arg Leu Arg Leu Lys Ser Phe Thr Ser Met Asp Ser Arg
65                  70                  75                  80
Ser Ala Ser His Arg Ser Thr Arg Phe Ala Ala Thr Phe Tyr Asp Ile
                85                  90                  95
Glu Thr Leu Lys Val Ile Asp Glu Glu Trp Gln Arg Thr Gln Cys Ser
            100                 105                 110
Pro Arg Glu Thr Cys Val Glu Val Ala Ser Glu Leu Gly Lys Ser Thr
        115                 120                 125
Asn Thr Phe Phe Lys Pro Pro Cys Val Asn Val Phe Arg Cys Gly Gly
    130                 135                 140
Cys Cys Asn Glu Glu Ser Leu Ile Cys Met Asn Thr Ser Thr Ser Tyr
145                 150                 155                 160
Ile Ser Lys Gln Leu Phe Glu Ile Ser Val Pro Leu Thr Ser Val Pro
                165                 170                 175
Glu Leu Val Pro Val Lys Val Ala Asn His Thr Gly Cys Lys Cys Leu
            180                 185                 190
Pro Thr Ala Pro Arg His Pro Tyr Ser Ile Ile Arg Arg Ser Ile Gln
        195                 200                 205
Ile Pro Glu Glu Asp Arg Cys Ser His Ser Lys Lys Leu Cys Pro Ile
    210                 215                 220
Asp Met Leu Trp Asp Ser Asn Lys Cys Lys Cys Val Leu Gln Glu Glu
225                 230                 235                 240
Asn Pro Leu Ala Gly Thr Glu Asp His Ser His Leu Gln Glu Pro Ala
                245                 250                 255
Leu Cys Gly Pro His Met Met Phe Asp Glu Asp Arg Cys Glu Cys Val
            260                 265                 270
Cys Lys Thr Pro Cys Pro Lys Asp Leu Ile Gln His Pro Lys Asn Cys
        275                 280                 285
Ser Cys Phe Glu Cys Lys Glu Ser Leu Glu Thr Cys Cys Gln Lys His
    290                 295                 300
Lys Leu Phe His Pro Asp Thr Cys Ser Cys Glu Asp Arg Cys Pro Phe
305                 310                 315                 320
His Thr Arg Pro Cys Ala Ser Gly Lys Thr Ala Cys Ala Lys His Cys
                325                 330                 335
Arg Phe Pro Lys Glu Lys Arg Ala Ala Gln Gly Pro His Ser Arg Lys
            340                 345                 350
Asn Pro
<210>27
<211>1645
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(322)..(771)
<400>27
gggattcggg ccgcccagct acgggaggac ctggagtggc actgggcgcc cgacggacca  60
tccccgggac ccgcctgccc ctcggcgccc cgccccgccg ggccgctccc cgtcgggttc  120
cccagccaca gccttaccta cgggctcctg actccgcaag gcttccagaa gatgctcgaa  180
ccaccggccg gggcctcggg gcagcagtga gggaggcgtc cagcccccca ctcagctctt  240
ctcctcctgt gccaggggct ccccggggga tgagcatggt ggttttccct cggagccccc  300
tggctcggga cgtctgagaa  g atg ccg gtc atg agg ctg ttc cct tgc ttc   351
                         Met Pro Val Met Arg Leu Phe Pro Cys Phe
                         1               5                   10
ctg cag ctc ctg gcc ggg ctg gcg ctg cct gct gtg ccc ccc cag cag    399
Leu Gln Leu Leu Ala Gly Leu Ala Leu Pro Ala Val Pro Pro Gln Gln
                15                  20                  25
tgg gcc ttg tct gct ggg aac ggc tcg tca gag gtg gaa gtg gta ccc    447
Trp Ala Leu Ser Ala Gly Asn Gly Ser Ser Glu Val Glu Val Val Pro
            30                  35                  40
ttc cag gaa gtg tgg ggc cgc agc tac tgc cgg gcg ctg gag agg ctg    495
Phe Gln Glu Val Trp Gly Arg Ser Tyr Cys Arg Ala Leu Glu Arg Leu
        45                  50                  55
gtg gac gtc gtg tcc gag tac ccc agc gag gtg gag cac atg ttc agc    543
Val Asp Val Val Ser Glu Tyr Pro Ser Glu Val Glu His Met Phe Ser
    60                  65                  70
cca tcc tgt gtc tcc ctg ctg cgc tgc acc ggc tgc tgc ggc gat gag    591
Pro Ser Cys Val Ser Leu Leu Arg Cys Thr Gly Cys Cys Gly Asp Glu
75                  80                  85                  90
aat ctg cac tgt gtg ccg gtg gag acg gcc aat gtc acc atg cag ctc    639
Asn Leu His Cys Val Pro Val Glu Thr Ala Asn Val Thr Met Gln Leu
                95                  100                 105
cta aag atc cgt tct ggg gac cgg ccc tcc tac gtg gag ctg acg ttc    687
Leu Lys Ile Arg Ser Gly Asp Arg Pro Ser Tyr Val Glu Leu Thr Phe
            110                 115                 120
tct cag cac gtt cgc tgc gaa tgc cgg cct ctg cgg gag aag atg aag    735
Ser Gln His Val Arg Cys Glu Cys Arg Pro Leu Arg Glu Lys Met Lys
        125                 130                 135
ccg gaa agg tgc ggc gat gct gtt ccc cgg agg taa cccacccctt         781
Pro Glu Arg Cys Gly Asp Ala Val Pro Arg Arg
    140                 145
ggaggagaga gaccccgcac ccggctcgtg tatttattac cgtcacactc ttcagtgact  841
cctgctggta cctgccctct atttattagc caactgtttc cctgctgaat gcctcgctcc    901
cttcaagacg aggggcaggg aaggacagga ccctcaggaa ttcagtgcct tcaacaacgt    961
gagagaaaga gagaagccag ccacagaccc ctgggagctt ccgctttgaa agaagcaaga    1021
cacgtggcct cgtgaggggc aagctaggcc ccagaggccc tggaggtctc caggggcctg    1081
cagaaggaaa gaagggggcc ctgctacctg ttcttgggcc tcaggctctg cacagacaag    1141
cagcccttgc tttcggagct cctgtccaaa gtagggatgc ggattctgct ggggccgcca    1201
cggcctggtg gtgggaaggc cggcagcggg cggaggggat tcagccactt ccccctcttc    1261
ttctgaagat cagaacattc agctctggag aacagtggtt gcctgggggc ttttgccact    1321
ccttgtcccc cgtgatctcc cctcacactt tgccatttgc ttgtactggg acattgttct    1381
ttccggccga ggtgccacca ccctgccccc actaagagac acatacagag tgggccccgg    1441
gctggagaaa gagctgcctg gatgagaaac agctcagcca gtggggatga ggtcaccagg    1501
ggaggagcct gtgcgtccca gctgaaggca gtggcagggg agcaggttcc ccaagggccc    1561
tggcaccccc acaagctgtc cctgcagggc catctgactg ccaagccaga ttctcttgaa    1621
taaagtattc tagtgtggaa acgc                                           1645
<210>28
<211>149
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>28
Met Pro Val Met Arg Leu Phe Pro Cys Phe Leu Gln Leu Leu Ala Gly
1               5                   10                  15
Leu Ala Leu Pro Ala Val Pro Pro Gln Gln Trp Ala Leu Ser Ala Gly
            20                  25                  30
Asn Gly Ser Ser Glu Val Glu Val Val Pro Phe Gln Glu Val Trp Gly
        35                  40                  45
Arg Ser Tyr Cys Arg Ala Leu Glu Arg Leu Val Asp Val Val Ser Glu
    50                  55                  60
Tyr Pro Ser Glu Val Glu His Met Phe Ser Pro Ser Cys Val Ser Leu
65                  70                  75                  80
Leu Arg Cys Thr Gly Cys Cys Gly Asp Glu Asn Leu His Cys Val Pro
                85                  90                  95
Val Glu Thr Ala Asn Val Thr Met Gln Leu Leu Lys Ile Arg Ser Gly
            100                 105                 110
Asp Arg Pro Ser Tyr Val Glu Leu Thr Phe Ser Gln His Val Arg Cys
        115                 120                 125
Glu Cys Arg Pro Leu Arg Glu Lys Met Lys Pro Glu Arg Cys Gly Asp
    130                 135                 140
Ala Val Pro Arg Arg
145
<210>29
<211>4230
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(4065)
<400>29
agc aag gtg ctg ctg gcc gtc gcc ctg tgg ctc tgc gtg gag acc cgg    48
Ser Lys Val Leu Leu Ala Val Ala Leu Trp Leu Cys Val Glu Thr Arg
1               5                   10                  15
gcc gcc tct gtg ggt ttg cct agt gtt tct ctt gat ctg ccc agg ctc    96
Ala Ala Ser Val Gly Leu Pro Ser Val Ser Leu Asp Leu Pro Arg Leu
            20                  25                  30
agc ata caa aaa gac ata ctt aca att aag gct aat aca act ctt caa    144
Ser Ile Gln Lys Asp Ile Leu Thr Ile Lys Ala Asn Thr Thr Leu Gln
        35                  40                  45
att act tgc agg gga cag agg gac ttg gac tgg ctt tgg ccc aat aat    192
Ile Thr Cys Arg Gly Gln Arg Asp Leu Asp Trp Leu Trp Pro Asn Asn
    50                  55                  60
cag agt ggc agt gag caa agg gtg gag gtg act gag tgc agc gat ggc    240
Gln Ser Gly Ser Glu Gln Arg Val Glu Val Thr Glu Cys Ser Asp Gly
65                  70                  75                  80
ctc ttc tgt aag aca ctc aca att cca aaa gtg atc gga aat gac act    288
Leu Phe Cys Lys Thr Leu Thr Ile Pro Lys Val Ile Gly Asn Asp Thr
                85                  90                  95
gga gcc tac aag tgc ttc tac cgg gaa act gac ttg gcc tcg gtc att    336
Gly Ala Tyr Lys Cys Phe Tyr Arg Glu Thr Asp Leu Ala Ser Val Ile
            100                 105                 110
tat gtc tat gtt caa gat tac aga tct cca ttt att gct tct gtt agt    384
Tyr Val Tyr Val Gln Asp Tyr Arg Ser Pro Phe Ile Ala Ser Val Ser
        115                 120                 125
gac caa cat gga gtc gtg tac att act gag aac aaa aac aaa act gtg    432
Asp Gln His Gly Val Val Tyr Ile Thr Glu Asn Lys Asn Lys Thr Val
    130                 135                 140
gtg att cca tgt ctc ggg tcc att tca aat ctc aac gtg tca ctt tgt    480
Val Ile Pro Cys Leu Gly Ser Ile Ser Asn Leu Asn Val Ser Leu Cys
145                 150                 155                 160
gca aga tac cca gaa aag aga ttt gtt cct gat ggt aac aga att tcc    528
Ala Arg Tyr Pro Glu Lys Arg Phe Val Pro Asp Gly Asn Arg Ile Ser
                165                 170                 175
tgg gac agc aag aag ggc ttt act att ccc agc tac atg atc agc tat    576
Trp Asp Ser Lys Lys Gly Phe Thr Ile Pro Ser Tyr Met Ile Ser Tyr
            180                 185                 190
gct ggc atg gtc ttc tgt gaa gca aaa att aat gat gaa agt tac cag    624
Ala Gly Met Val Phe Cys Glu Ala Lys Ile Asn Asp Glu Ser Tyr Gln
        195                 200                 205
tct att atg tac ata gtt gtc gtt gta ggg tat agg att tat gat gtg    672
Ser Ile Met Tyr Ile Val Val Val Val Gly Tyr Arg Ile Tyr Asp Val
    210                 215                 220
gtt ctg agt ccg tct cat gga att gaa cta tct gtt gga gaa aag ctt    720
Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu
225                 230                 235                 240
gtc tta aat tgt aca gca aga act gaa cta aat gtg ggg att gac ttc    768
Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe
                245                 250                 255
aac tgg gaa tac cct tct tcg aag cat cag cat aag aaa ctt gta aac    816
Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu Val Asn
            260                 265                 270
cga gac cta aaa acc cag tct ggg agt gag atg aag aaa ttt ttg agc    864
Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser
        275                 280                 285
acc tta act ata gat ggt gta acc cgg agt gac caa gga ttg tac acc    912
Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr
    290                 295                 300
tgt gca gca tcc agt ggg ctg atg acc aag aag aac agc aca ttt gtc    960
Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val
305                 310                 315                 320
agg gtc cat gaa aaa cct ttt gtt gct ttt gga agt ggc atg gaa tct    1008
Arg Val His Glu Lys Pro Phe Val Ala Phe Gly Ser Gly Met Glu Ser
                325                 330                 335
ctg gtg gaa gcc acg gtg ggg gag cgt gtc aga atc cct gcg aag tac    1056
Leu Val Glu Ala Thr Val Gly Glu Arg Val Arg Ile Pro Ala Lys Tyr
            340                 345                 350
ctt ggt tac cca ccc cca gaa ata aaa tgg tat aaa aat gga ata ccc    1104
Leu Gly Tyr Pro Pro Pro Glu Ile Lys Trp Tyr Lys Asn Gly Ile Pro
        355                 360                 365
ctt gag tcc aat cac aca att aaa gcg ggg cat gta ctg acg att atg    1152
Leu Glu Ser Asn His Thr Ile Lys Ala Gly His Val Leu Thr Ile Met
    370                 375                 380
gaa gtg agt gaa aga gac aca gga aat tac act gtc atc ctt acc aat    1200
Glu Val Ser Glu Arg Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Val Ile Leu Thr Asn
385                 390                 395                 400
ccc att tca aag gag aag cag agc cat gtg gtc tct ctg gtt gtg tat    1248
Pro Ile Ser Lys Glu Lys Gln Ser His Val Val Ser Leu Val Val Tyr
                405                 410                 415
gtc cca ccc cag att ggt gag aaa tct cta atc tct cct gtg gat tcc    1296
Val Pro Pro Gln Ile Gly Glu Lys Ser Leu Ile Ser Pro Val Asp Ser
            420                 425                 430
tac cag tac ggc acc act caa acg ctg aca tgt acg gtc tat gcc att    1344
Tyr Gln Tyr Gly Thr Thr Gln Thr Leu Thr Cys Thr Val Tyr Ala Ile
        435                 440                 445
cct ccc ccg cat cac atc cac tgg tat tgg cag ttg gag gaa gag tgc    1392
Pro Pro Pro His His Ile His Trp Tyr Trp Gln Leu Glu Glu Glu Cys
    450                 455                 460
gcc aac gag ccc agc caa gct gtc tca gtg aca aac cca tac cct tgt    l440
Ala Asn Glu Pro Ser Gln Ala Val Ser Val Thr Asn Pro Tyr Pro Cys
465                 470                 475                 480
gaa gaa tgg aga agt gtg gag gac ttc cag gga gga aat aaa att gaa    1488
Glu Glu Trp Arg Ser Val Glu Asp Phe Gln Gly Gly Asn Lys Ile Glu
                485                 490                 495
gtt aat aaa aat caa ttt gct cta att gaa gga aaa aac aaa act gta    1536
Val Asn Lys Asn Gln Phe Ala Leu Ile Glu Gly Lys Asn Lys Thr Val
            500                 505                 510
agt acc ctt gtt atc caa gcg gca aat gtg tca gct ttg tac aaa tgt    1584
Ser Thr Leu Val Ile Gln Ala Ala Asn Val Ser Ala Leu Tyr Lys Cys
        515                 520                 525
gaa gcg gtc aac aaa gtc ggg aga gga gag agg gtg atc tcc ttc cac    1632
Glu Ala Val Asn Lys Val Gly Arg Gly Glu Arg Val Ile Ser Phe His
    530                 535                 540
gtg acc agg ggt cct gaa att act ttg caa cct gac atg cag ccc act    1680
Val Thr Arg Gly Pro Glu Ile Thr Leu Gln Pro Asp Met Gln Pro Thr
545                 550                 555                 560
gag cag gag agc gtg tct ttg tgg tgc act gca gac aga tct acg ttt    1728
Glu Gln Glu Ser Val Ser Leu Trp Cys Thr Ala Asp Arg Ser Thr Phe
                565                 570                 575
gag aac ctc aca tgg tac aag ctt ggc cca cag cct ctg cca atc cat    1776
Glu Asn Leu Thr Trp Tyr Lys Leu Gly Pro Gln Pro Leu Pro Ile His
            580                 585                 590
gtg gga gag ttg ccc aca cct gtt tgc aag aac ttg gat act ctt tgg    1824
Val Gly Glu Leu Pro Thr Pro Val Cys Lys Asn Leu Asp Thr Leu Trp
        595                 600                 605
aaa ttg aat gcc acc atg ttc tct aat agc aca aat gac att ttg atc    1872
Lys Leu Asn Ala Thr Met Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asp Ile Leu Ile
    610                 615                 620
atg gag ctt aag aat gca tcc ttg cag gac caa gga gac tat gtc tgc    1920
Met Glu Leu Lys Asn Ala Ser Leu Gln Asp Gln Gly Asp Tyr Val Cys
625                 630                 635                 640
ctt gct caa gac agg aag acc aag aaa aga cat tgc gtg gtc agg cag    1968
Leu Ala Gln Asp Arg Lys Thr Lys Lys Arg His Cys Val Val Arg Gln
                645                 650                 655
ctc aca gtc cta gag cgt gtg gca ccc acg atc aca gga aac ctg gag    2016
Leu Thr Val Leu Glu Arg Val Ala Pro Thr Ile Thr Gly Asn Leu Glu
            660                 665                 670
aat cag acg aca agt att ggg gaa agc atc gaa gtc tca tgc acg gca    2064
Asn Gln Thr Thr Ser Ile Gly Glu Ser Ile Glu Val Ser Cys Thr Ala
        675                 680                 685
tct ggg aat ccc cct cca cag atc atg tgg ttt aaa gat aat gag acc    2112
Ser Gly Asn Pro Pro Pro Gln Ile Met Trp Phe Lys Asp Asn Glu Thr
    690                 695                 700
ctt gta gaa gac tca ggc att gta ttg aag gat ggg aac cgg aac ctc    2160
Leu Val Glu Asp Ser Gly Ile Val Leu Lys Asp Gly Asn Arg Asn Leu
705                 710                 715                 720
act atc cgc aga gtg agg aag gag gac gaa ggc ctc tac acc tgc cag    2208
Thr Ile Arg Arg Val Arg Lys Glu Asp Glu Gly Leu Tyr Thr Cys Gln
                725                 730                 735
gca tgc agt gtt ctt ggc tgt gca aaa gtg gag gca ttt ttc ata ata    2256
Ala Cys Ser Val Leu Gly Cys Ala Lys Val Glu Ala Phe Phe Ile Ile
            740                 745                 750
gaa ggt gcc cag gaa aag acg aac ttg gaa atc att att cta gta ggc    2304
Glu Gly Ala Gln Glu Lys Thr Asn Leu Glu Ile Ile Ile Leu Val Gly
        755                 760                 765
acg acg gtg att gcc atg ttc ttc tgg cta ctt ctt gtc atc atc cta    2352
Thr Thr Val Ile Ala Met Phe Phe Trp Leu Leu Leu Val Ile Ile Leu
    770                 775                 780
ggg acc gtt aag cgg gcc aat gga ggg gaa ctg aag aca ggc tac ttg    2400
Gly Thr Val Lys Arg Ala Asn Gly Gly Glu Leu Lys Thr Gly Tyr Leu
785                 790                 795                 800
tcc atc gtc atg gat cca gat gaa ctc cca ttg gat gaa cat tgt  gaa   2448
Ser Ile Val Met Asp Pro Asp Glu Leu Pro Leu Asp Glu His Cys Glu
                805                 810                 815
cga ctg cct tat gat gcc agc aaa tgg gaa ttc ccc aga gac cgg ctg    2496
Arg Leu Pro Tyr Asp Ala Ser Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asp Arg Leu
            820                 825                 830
aac cta ggt aag cct ctt ggc cgt ggt gcc ttt ggc caa gag att gaa    2544
Asn Leu Gly Lys Pro Leu Gly Arg Gly Ala Phe Gly Gln Glu Ile Glu
        835                 840                 845
gca gat gcc ttt gga att gac aag aca gca act tgc agg aca gta gca    2592
Ala Asp Ala Phe Gly Ile Asp Lys Thr Ala Thr Cys Arg Thr Val Ala
    850                 855                 860
gtc aaa atg ttg aaa gaa gga gca aca cac agt gag cat cga gct ctc    2640
Val Lys Met Leu Lys Glu Gly Ala Thr His Ser Glu His Arg Ala Leu
865                 870                 875                 880
atg tct gaa ctc aag atc ctc att cat att ggt cac cat ctc aat gtg    2688
Met Ser Glu Leu Lys Ile Leu Ile His Ile Gly His His Leu Asn Val
                885                 890                 895
gtc aac ctt cta ggt gcc tgt acc aag cca gga ggg cca ctc atg gtg    2736
Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Lys Pro Gly Gly Pro Leu Met Val
            900                 905                 910
att gtg gaa ttc tgc aaa ttt gga aac ctg tcc act tac ctg agg agc    2784
Ile Val Glu Phe Cys Lys Phe Gly Asn Leu Ser Thr Tyr Leu Arg Ser
        915                 920                 925
aag aga aat gaa ttt gtc ccc tac aag acc aaa ggg gca cga ttc cgt    2832
Lys Arg Asn Glu Phe Val Pro Tyr Lys Thr Lys Gly Ala Arg Phe Arg
    930                 935                 940
caa ggg aaa gac tac gtt gga gca atc cct gtg gat ctg aaa cgg cgc    2880
Gln Gly Lys Asp Tyr Val Gly Ala Ile Pro Val Asp Leu Lys Arg Arg
945                 950                 955                 960
ttg gac agc atc acc agt agc cag agc tca gcc agc tct gga ttt gtg    2928
Leu Asp Ser Ile Thr Ser Ser Gln Ser Ser Ala Ser Ser Gly Phe Val
                965                 970                 975
gag gag aag tcc ctc agt gat gta gaa gaa gag gaa gct cct gaa gat    2976
Glu Glu Lys Ser Leu Ser Asp Val Glu Glu Glu Glu Ala Pro Glu Asp
            980                 985                 990
ctg tat aag gac ttc ctg acc ttg  gag cat ctc atc tgt  tac agc ttc  3024
Leu Tyr Lys Asp Phe Leu Thr Leu  Glu His Leu Ile Cys  Tyr Ser Phe
        995                 1000                 1005
caa gtg  gct aag ggc atg gag  ttc ttg gca tcg cga  aag tgt atc     3069
Gln Val  Ala Lys Gly Met Glu  Phe Leu Ala Ser Arg  Lys Cys Ile
    1010                 1015                 1020
cac agg  gac ctg gcg gca cga  aat atc ctc tta tcg  gag aag aac     3114
His Arg  Asp Leu Ala Ala Arg  Asn Ile Leu Leu Ser  Glu Lys Asn
    1025                 1030                 1035
gtg gtt  aaa atc tgt gac ttt  ggc ttg gcc cgg gat  att tat aaa     3159
Val Val  Lys Ile Cys Asp Phe  Gly Leu Ala Arg Asp  Ile Tyr Lys
    1040                 1045                 1050
gat cca  gat tat gtc aga aaa  gga gat gct cgc ctc  cct ttg aaa     3204
Asp Pro  Asp Tyr Val Arg Lys  Gly Asp Ala Arg Leu  Pro Leu Lys
    1055                 1060                 1065
tgg atg  gcc cca gaa aca att  ttt gac aga gtg tac  aca atc cag     3249
Trp Met  Ala Pro Glu Thr Ile  Phe Asp Arg Val Tyr  Thr Ile Gln
    1070                 1075                 1080
agt gac  gtc tgg tct ttt ggt  gtt ttg ctg tgg gaa  ata ttt tcc     3294
Ser Asp  Val Trp Ser Phe Gly  Val Leu Leu Trp Glu  Ile Phe Ser
    1085                 1090                 1095
tta ggt  gct tct cca tat cct  ggg gta aag att gat  gaa gaa ttt     3339
Leu Gly  Ala Ser Pro Tyr Pro  Gly Val Lys Ile Asp  Glu Glu Phe
    1100                 1105                 1110
tgt agg  cga ttg aaa gaa gga  act aga atg agg gcc  cct gat tat     3384
Cys Arg  Arg Leu Lys Glu Gly  Thr Arg Met Arg Ala  Pro Asp Tyr
    1115                 1120                 1125
act aca  cca gaa atg tac cag  acc atg ctg gac tgc  tgg cac ggg     3429
Thr Thr  Pro Glu Met Tyr Gln  Thr Met Leu Asp Cys  Trp His Gly
    1130                 1135                 1140
gag ccc  agt cag aga ccc acg  ttt tca gag ttg gtg  gaa cat ttg       3474
Glu Pro  Ser Gln Arg Pro Thr  Phe Ser Glu Leu Val  Glu His Leu
    1145                 1150                 1155
gga aat  ctc ttg caa gct aat  gct cag cag gat ggc  aaa gac tac       3519
Gly Asn  Leu Leu Gln Ala Asn  Ala Gln Gln Asp Gly  Lys Asp Tyr
    1160                 1165                 1170
att gtt  ctt ccg ata tca gag  act ttg agc atg gaa  gag gat tct       3564
Ile Val  Leu Pro Ile Ser Glu  Thr Leu Ser Met Glu  Glu Asp Ser
    1175                 1180                 1185
gga ctc  tct ctg cct acc tca  cct gtt tcc tgt atg  gag gag gag       3609
Gly Leu  Ser Leu Pro Thr Ser  Pro Val Ser Cys Met  Glu Glu Glu
    1190                 1195                 1200
gaa gta  tgt gac ccc aaa ttc  cat tat gac aac aca  gca gga atc       3654
Glu Val  Cys Asp Pro Lys Phe  His Tyr Asp Asn Thr  Ala Gly Ile
    1205                 1210                 1215
agt cag  tat ctg cag aac agt  aag cga aag agc cgg  cct gtg agt       3699
Ser Gln  Tyr Leu Gln Asn Ser  Lys Arg Lys Ser Arg  Pro Val Ser
    1220                 1225                 1230
gta aaa  aca ttt gaa gat atc  ccg tta gaa gaa cca  gaa gta aaa       3744
Val Lys  Thr Phe Glu Asp Ile  Pro Leu Glu Glu Pro  Glu Val Lys
    1235                 1240                 1245
gta atc  cca gat gac aac cag  acg gac agt ggt atg  gtt ctt gcc       3789
Val Ile  Pro Asp Asp Asn Gln  Thr Asp Ser Gly Met  Val Leu Ala
    1250                 1255                 1260
tca gaa  gag ctg aaa act ttg  gaa gac aga acc aaa  tta tct cca       3834
Ser Glu  Glu Leu Lys Thr Leu  Glu Asp Arg Thr Lys  Leu Ser Pro
    1265                 1270                 1275
tct ttt  ggt gga atg gtg ccc  agc aaa agc agg gag  tct gtg gca       3879
Ser Phe  Gly Gly Met Val Pro  Ser Lys Ser Arg Glu  Ser Val Ala
    1280                 1285                 1290
tct gaa  ggc tca aac cag aca  agc ggc tac cag tcc  gga tat cac       3924
Ser Glu  Gly Ser Asn Gln Thr  Ser Gly Tyr Gln Ser  Gly Tyr His
    1295                 1300                 1305
tcc gat  gac aca gac acc acc  gtg tac tcc agt gag  gaa gca gaa       3969
Ser Asp  Asp Thr Asp Thr Thr  Val Tyr Ser Ser Glu  Glu Ala Glu
    1310                 1315                 1320
ctt tta  aag ctg ata gag att  gga gtg caa acc ggt  agc aca gcc       4014
Leu Leu  Lys Leu Ile Glu Ile  Gly Val Gln Thr Gly  Ser Thr Ala
    1325                 1330                 1335
cag att  ctc cag cct gac acg  ggg acc aca ctg agc  tct cct cct       4059
Gln Ile  Leu Gln Pro Asp Thr  Gly Thr Thr Leu Ser  Ser Pro Pro
    1340                 1345                 1350
gtt taa aaggaagcat ccacacccca actcccggac atcacatgag aggtctgctc       4115
Val
agattttgaa gtgttgttct ttccaccagc aggaagtagc cgcatttgat tttcatttcg    4175
acaacagaaa aaggacctcg gactgcaggg agccagctct tctaggcttg tgacc         4230
<210>30
<211>1354
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<4nn>30
Ser Lys Val Leu Leu Ala Val Ala Leu Trp Leu Cys Val Glu Thr Arg
1               5                   10                  15
Ala Ala Ser Val Gly Leu Pro Ser Val Ser Leu Asp Leu Pro Arg Leu
            20                  25                  30
Ser Ile Gln Lys Asp Ile Leu Thr Ile Lys Ala Asn Thr Thr Leu Gln
        35                  40                  45
Ile Thr Cys Arg Gly Gln Arg Asp Leu Asp Trp Leu Trp Pro Asn Asn
    50                  55                  60
Gln Ser Gly Ser Glu Gln Arg Val Glu Val Thr Glu Cys Ser Asp Gly
65                  70                  75                  80
Leu Phe Cys Lys Thr Leu Thr Ile Pro Lys Val Ile Gly Asn Asp Thr
                85                  90                  95
Gly Ala Tyr Lys Cys Phe Tyr Arg Glu Thr Asp Leu Ala Ser Val Ile
            100                 105                 110
Tyr Val Tyr Val Gln Asp Tyr Arg Ser Pro Phe Ile Ala Ser Val Ser
        115                 120                 125
Asp Gln His Gly Val Val Tyr Ile Thr Glu Asn Lys Asn Lys Thr Val
    130                 135                 140
Val Ile Pro Cys Leu Gly Ser Ile Ser Asn Leu Asn Val Ser Leu Cys
145                 150                 155                 160
Ala Arg Tyr Pro Glu Lys Arg Phe Val Pro Asp Gly Asn Arg Ile Ser
                165                 170                 175
Trp Asp Ser Lys Lys Gly Phe Thr Ile Pro Ser Tyr Met Ile Ser Tyr
            180                 185                 190
Ala Gly Met Val Phe Cys Glu Ala Lys Ile Asn Asp Glu Ser Tyr Gln
        195                 200                 205
Ser Ile Met Tyr Ile Val Val Val Val Gly Tyr Arg Ile Tyr Asp Val
    210                 215                 220
Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu
225                 230                 235                 240
Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe
                245                 250                 255
Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu Val Asn
            260                 265                 270
Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser
        275                 280                 285
Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr
    290                 295                 300
Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val
305                 310                 315                 320
Arg Val His Glu Lys Pro Phe Val Ala Phe Gly Ser Gly Met Glu Ser
                325                 330                 335
Leu Val Glu Ala Thr Val Gly Glu Arg Val Arg Ile Pro Ala Lys Tyr
            340                 345                 350
Leu Gly Tyr Pro Pro Pro Glu Ile Lys Trp Tyr Lys Asn Gly Ile Pro
        355                 360                 365
Leu Glu Ser Asn His Thr Ile Lys Ala Gly His Val Leu Thr Ile Met
    370                 375                 380
Glu Val Ser Glu Arg Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Val Ile Leu Thr Asn
385                 390                 395                 400
Pro Ile Ser Lys Glu Lys Gln Ser His Val Val Ser Leu Val Val Tyr
                405                 410                 415
Val Pro Pro Gln Ile Gly Glu Lys Ser Leu Ile Ser Pro Val Asp Ser
            420                 425                 430
Tyr Gln Tyr Gly Thr Thr Gln Thr Leu Thr Cys Thr Val Tyr Ala Ile
        435                 440                 445
Pro Pro Pro His His Ile His Trp Tyr Trp Gln Leu Glu Glu Glu Cys
    450                 455                 460
Ala Asn Glu Pro Ser Gln Ala Val Ser Val Thr Asn Pro Tyr Pro Cys
465                 470                 475                 480
Glu Glu Trp Arg Ser Val Glu Asp Phe Gln Gly Gly Asn Lys Ile Glu
                485                 490                 495
Val Asn Lys Asn Gln Phe Ala Leu Ile Glu Gly Lys Asn Lys Thr Val
            500                 505                 510
Ser Thr Leu Val Ile Gln Ala Ala Asn Val Ser Ala Leu Tyr Lys Cys
        515                 520                 525
Glu Ala Val Asn Lys Val Gly Arg Gly Glu Arg Val Ile Ser Phe His
    530                 535                 540
Val Thr Arg Gly Pro Glu Ile Thr Leu Gln Pro Asp Met Gln Pro Thr
545                 550                 555                 560
Glu Gln Glu Ser Val Ser Leu Trp Cys Thr Ala Asp Arg Ser Thr Phe
                565                 570                 575
Glu Asn Leu Thr Trp Tyr Lys Leu Gly Pro Gln Pro Leu Pro Ile His
            580                 585                 590
Val Gly Glu Leu Pro Thr Pro Val Cys Lys Asn Leu Asp Thr Leu Trp
        595                 600                 605
Lys Leu Asn Ala Thr Met Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asp Ile Leu Ile
    610                 615                 620
Met Glu Leu Lys Asn Ala Ser Leu Gln Asp Gln Gly Asp Tyr Val Cys
625                 630                 635                 640
Leu Ala Gln Asp Arg Lys Thr Lys Lys Arg His Cys Val Val Arg Gln
                645                 650                 655
Leu Thr Val Leu Glu Arg Val Ala Pro Thr Ile Thr Gly Asn Leu Glu
            660                 665                 670
Asn Gln Thr Thr Ser Ile Gly Glu Ser Ile Glu Val Ser Cys Thr Ala
        675                 680                 685
Ser Gly Asn Pro Pro Pro Gln Ile Met Trp Phe Lys Asp Asn Glu Thr
    690                 695                 700
Leu Val Glu Asp Ser Gly Ile Val Leu Lys Asp Gly Asn Arg Asn Leu
705                 710                 715                 720
Thr Ile Arg Arg Val Arg Lys Glu Asp Glu Gly Leu Tyr Thr Cys Gln
                725                 730                 735
Ala Cys Ser Val Leu Gly Cys Ala Lys Val Glu Ala Phe Phe Ile Ile
            740                 745                 750
Glu Gly Ala Gln Glu Lys Thr Asn Leu Glu Ile Ile Ile Leu Val Gly
        755                 760                 765
Thr Thr Val Ile Ala Met Phe Phe Trp Leu Leu Leu Val Ile Ile Leu
    770                 775                 780
Gly Thr Val Lys Arg Ala Asn Gly Gly Glu Leu Lys Thr Gly Tyr Leu
785                 790                 795                 800
Ser Ile Val Met Asp Pro Asp Glu Leu Pro Leu Asp Glu His Cys Glu
                805                 810                 815
Arg Leu Pro Tyr Asp Ala Ser Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asp Arg Leu
            820                 825                 830
Asn Leu Gly Lys Pro Leu Gly Arg Gly Ala Phe Gly Gln Glu Ile Glu
        835                 840                 845
Ala Asp Ala Phe Gly Ile Asp Lys Thr Ala Thr Cys Arg Thr Val Ala
    850                 855                 860
Val Lys Met Leu Lys Glu Gly Ala Thr His Ser Glu His Arg Ala Leu
865                 870                 875                 880
Met Ser Glu Leu Lys Ile Leu Ile His Ile Gly His His Leu Asn Val
                885                 890                 895
Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Lys Pro Gly Gly Pro Leu Met Val
            900                 905                 910
Ile Val Glu Phe Cys Lys Phe Gly Asn Leu Ser Thr Tyr Leu Arg Ser
        915                 920                 925
Lys Arg Asn Glu Phe Val Pro Tyr Lys Thr Lys Gly Ala Arg Phe Arg
    930                 935                 940
Gln Gly Lys Asp Tyr Val Gly Ala Ile Pro Val Asp Leu Lys Arg Arg
945                 950                 955                 960
Leu Asp Ser Ile Thr Ser Ser Gln Ser Ser Ala Ser Ser Gly Phe Val
                965                 970                 975
Glu Glu Lys Ser Leu Ser Asp Val Glu Glu Glu Glu Ala Pro Glu Asp
            980                 985                 990
Leu Tyr Lys Asp Phe Leu Thr Leu  Glu His Leu Ile Cys  Tyr Ser Phe
        995                 1000                 1005
Gln Val  Ala Lys Gly Met Glu  Phe Leu Ala Ser Arg  Lys Cys Ile
    1010                 1015                 1020
His Arg  Asp Leu Ala Ala Arg  Asn Ile Leu Leu Ser  Glu Lys Asn
    1025                 1030                 1035
Val Val  Lys Ile Cys Asp Phe  Gly Leu Ala Arg Asp  Ile Tyr Lys
    1040                 1045                 1050
Asp Pro  Asp Tyr Val Arg Lys  Gly Asp Ala Arg Leu  Pro Leu Lys
    1055                 1060                 1065
Trp Met  Ala Pro Glu Thr Ile  Phe Asp Arg Val Tyr  Thr Ile Gln
    1070                 1075                 1080
Ser Asp  Val Trp Ser Phe Gly  Val Leu Leu Trp Glu  Ile Phe Ser
    1085                 1090                 1095
Leu Gly  Ala Ser Pro Tyr Pro  Gly Val Lys Ile Asp  Glu Glu Phe
    1100                 1105                 1110
Cys Arg  Arg Leu Lys Glu Gly  Thr Arg Met Arg Ala  Pro Asp Tyr
    1115                 1120                 1125
Thr Thr  Pro Glu Met Tyr Gln  Thr Met Leu Asp Cys  Trp His Gly
    1130                 1135                 1140
Glu Pro  Ser Gln Arg Pro Thr  Phe Ser Glu Leu Val  Glu His Leu
    1145                 1150                 1155
Gly Asn  Leu Leu Gln Ala Asn  Ala Gln Gln Asp Gly  Lys Asp Tyr
    1160                 1165                 1170
Ile Val  Leu Pro Ile Ser Glu  Thr Leu Ser Met Glu  Glu Asp Ser
    1175                 1180                 1185
Gly Leu  Ser Leu Pro Thr Ser  Pro Val Ser Cys Met  Glu Glu Glu
    l190                 1195                 1200
Glu Val  Cys Asp Pro Lys Phe  His Tyr Asp Asn Thr  Ala Gly Ile
    1205                 1210                 1215
Ser Gln  Tyr Leu Gln Asn Ser  Lys Arg Lys Ser Arg  Pro Val Ser
    1220                 1225                 1230
Val Lys  Thr Phe Glu Asp Ile  Pro Leu Glu Glu Pro  Glu Val Lys
    1235                 1240                 1245
Val Ile  Pro Asp Asp Asn Gln  Thr Asp Ser Gly Met  Val Leu Ala
    1250                 1255                 1260
Ser Glu  Glu Leu Lys Thr Leu  Glu Asp Arg Thr Lys  Leu Ser Pro
    1265                 1270                 1275
Ser Phe  Gly Gly Met Val Pro  Ser Lys Ser Arg Glu  Ser Val Ala
    1280                 1285                 1290
Ser Glu  Gly Ser Asn Gln Thr  Ser Gly Tyr Gln Ser  Gly Tyr His
    1295                 1300                 1305
Ser Asp  Asp Thr Asp Thr Thr  Val Tyr Ser Ser Glu  Glu Ala Glu
    1310                 1315                 1320
Leu Leu  Lys Leu Ile Glu Ile  Gly Val Gln Thr Gly  Ser Thr Ala
    1325                 1330                 1335
Gln Ile  Leu Gln Pro Asp Thr  Gly Thr Thr Leu Ser  Ser Pro Pro
    1340                 1345                 1350
Val
<210>31
<211>4195
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(20)..(3913)
<400>31
ccacgcgcag cggccggag atg cag cgg ggc gcc gcg ctg tgc ctg cga ctg   52
                     Met Gln Arg Gly Ala Ala Leu Cys Leu Arg Leu
                       1               5                  10
tgg ctc tgc ctg gga ctc ctg gac ggc ctg gtg agt ggc tac tcc atg    100
Trp Leu Cys Leu Gly Leu Leu Asp Gly Leu Val Ser Gly Tyr Ser Met
             15                  20                  25
acc ccc ccg acc ttg aac atc acg gag gag tca cac gtc atc gac acc    148
Thr Pro Pro Thr Leu Asn Ile Thr Glu Glu Ser His Val Ile Asp Thr
         30                  35                  40
ggt gac agc ctg tcc atc tcc tgc agg gga cag cac ccc ctc gag tgg    196
Gly Asp Ser Leu Ser Ile Ser Cys Arg Gly Gln His Pro Leu Glu Trp
     45                  50                  55
gct tgg cca gga gct cag gag gcg cca gcc acc gga gac aag gac agc    244
Ala Trp Pro Gly Ala Gln Glu Ala Pro Ala Thr Gly Asp Lys Asp Ser
 60                  65                  70                  75
gag gac acg ggg gtg gtg cga gac tgc gag ggc aca gac gcc agg ccc    292
Glu Asp Thr Gly Val Val Arg Asp Cys Glu Gly Thr Asp Ala Arg Pro
                 80                  85                  90
tac tgc aag gtg ttg ctg ctg cac gag gta cat gcc aac gac aca ggc    340
Tyr Cys Lys Val Leu Leu Leu His Glu Val His Ala Asn Asp Thr Gly
             95                 100                 105
agc tac gtc tgc tac tac aag tac atc aag gca cgc atc gag ggc acc    388
Ser Tyr Val Cys Tyr Tyr Lys Tyr Ile Lys Ala Arg Ile Glu Gly Thr
        110                 115                 120
acg gcc gcc agc tcc tac gtg ttc gtg aga gac ttt gag cag cca ttc    436
Thr Ala Ala Ser Ser Tyr Val Phe Val Arg Asp Phe Glu Gln Pro Phe
    125                 130                 135
atc aac aag cct gac acg ctc ttg gtc aac agg aag gac gcc atg tgg    484
Ile Asn Lys Pro Asp Thr Leu Leu Val Asn Arg Lys Asp Ala Met Trp
140                 145                 150                 155
gtg ccc tgt ctg gtg tcc atc ccc ggc ctc aat gtc acg ctg cgc tcg    532
Val Pro Cys Leu Val Ser Ile Pro Gly Leu Asn Val Thr Leu Arg Ser
                160                 165                 170
caa agc tcg gtg ctg tgg cca gac ggg cag gag gtg gtg tgg gat gac    580
Gln Ser Ser Val Leu Trp Pro Asp Gly Gln Glu Val Val Trp Asp Asp
            175                 180                 185
cgg cgg ggc atg ctc gtg tcc acg cca ctg ctg cac gat gcc ctg tac    628
Arg Arg Gly Met Leu Val Ser Thr Pro Leu Leu His Asp Ala Leu Tyr
        190                 195                 200
ctg cag tgc gag acc acc tgg gga gac cag gac ttc ctt tcc aac ccc    676
Leu Gln Cys Glu Thr Thr Trp Gly Asp Gln Asp Phe Leu Ser Asn Pro
    205                 210                 215
ttc ctg gtg cac atc aca ggc ac gag ctc tat gac atc cag ctg ttg     724
Phe Leu Val His Ile Thr Gly Asn Glu Leu Tyr Asp Ile Gln Leu Leu
220                 225                 230                 235
ccc agg aag tcg ctg gag ctg ctg gta ggg gag aag ctg gtc ctg aac    772
Pro Arg Lys Ser Leu Glu Leu Leu Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn
                240                 245                 250
tgc acc gtg tgg gct gag ttt aac tca ggt gtc acc ttt gac tgg gac    820
Cys Thr Val Trp Ala Glu Phe Asn Ser Gly Val Thr Phe Asp Trp Asp
            255                 260                 265
tac cca ggg aag cag gca gag cgg ggt aag tgg gtg ccc gag cga cgc    868
Tyr Pro Gly Lys Gln Ala Glu Arg Gly Lys Trp Val Pro Glu Arg Arg
        270                 275                 280
tcc cag cag acc cac aca gaa ctc tcc agc atc ctg acc atc cac aac    916
Ser Gln Gln Thr His Thr Glu Leu Ser Ser Ile Leu Thr Ile His Asn
    285                 290                 295
gtc agc cag cac gac ctg ggc tcg tat gtg tgc aag gcc aac aac ggc    964
Val Ser Gln His Asp Leu Gly Ser Tyr Val Cys Lys Ala Asn Asn Gly
300                 305                 310                 315
atc cag cga ttt cgg gag agc acc gag gtc att gtg cat gaa aat ccc    1012
Ile Gln Arg Phe Arg Glu Ser Thr Glu Val Ile Val His Glu Asn Pro
                320                 325                 330
ttc atc agc gtc gag tgg ctc aaa gga ccc atc ctg gag gcc acg gca    1060
Phe Ile Ser Val Glu Trp Leu Lys Gly Pro Ile Leu Glu Ala Thr Ala
            335                 340                 345
gga gac gag ctg gtg aag ctg ccc gtg aag ctg gca gcg tac ccc ccg    1108
Gly Asp Glu Leu Val Lys Leu Pro Val Lys Leu Ala Ala Tyr Pro Pro
        350                 355                 360
ccc gag ttc cag tgg tac aag gat gga aag gca ctg tcc ggg cgc cac    1156
Pro Glu Phe Gln Trp Tyr Lys Asp Gly Lys Ala Leu Ser Gly Arg His
    365                 370                 375
agt cca cat gcc ctg gtg ctc aag gag gtg aca gag gcc agc aca ggc    1204
Ser Pro His Ala Leu Val Leu Lys Glu Val Thr Glu Ala Ser Thr Gry
380                 385                 390                 395
acc tac acc ctc gcc ctg tgg aac tcc gct gct ggc ctg agg cgc aac    1252
Thr Tyr Thr Leu Ala Leu Trp Asn Ser Ala Ala Gly Leu Arg Arg Asn
                400                 405                 410
atc agc ctg gag ctg gtg gtg aat gtg ccc ccc cag ata cat gag aag    1300
Ile Ser Leu Glu Leu Val Val Asn Val Pro Pro Gln Ile His Glu Lys
            415                 420                 425
gag gcc tcc tcc ccc agc atc tac tcg cgt cac agc cgc cag gcc ctc    1348
Glu Ala Ser Ser Pro Ser Ile Tyr Ser Arg His Ser Arg Gln Ala Leu
        430                 435                 440
acc tgc acg gcc tac ggg gtg ccc ctg cct ctc agc atc cag tgg cac    1396
Thr Cys Thr Ala Tyr Gly Val Pro Leu Pro Leu Ser Ile Gln Trp His
    445                 450                 455
tgg cgg ccc tgg aca ccc tgc aag atg ttt gcc cag cgt agt ctc cgg    1444
Trp Arg Pro Trp Thr Pro Cys Lys Met Phe Ala Gln Arg Ser Leu Arg
460                 465                 470                 475
cgg cgg cag cag caa gac ctc atg cca cag tgc cgt gac tgg agg gcg    1492
Arg Arg Gln Gln Gln Asp Leu Met Pro Gln Cys Arg Asp Trp Arg Ala
                480                 485                 490
gtg acc acg cag gat gcc gtg aac ccc atc gag agc ctg gac acc tgg    1540
Val Thr Thr Gln Asp Ala Val Asn Pro Ile Glu Ser Leu Asp Thr Trp
            495                 500                 505
acc gag ttt gtg gag gga aag aat aag act gtg agc aag ctg gtg atc    1588
Thr Glu Phe Val Glu Gly Lys Asn Lys Thr Val Ser Lys Leu Val Ile
        510                 515                 520
cag aat gcc aac gtg tct gcc atg tac aag tgt gtg gtc tcc aac aag    1636
Gln Asn Ala Asn Val Ser Ala Met Tyr Lys Cys Val Val Ser Asn Lys
    525                 530                 535
gtg ggc cag gat gag cgg ctc atc tac ttc tat gtg acc acc atc ccc    1684
Val Gly Gln Asp Glu Arg Leu Ile Tyr Phe Tyr Val Thr Thr Ile Pro
540                 545                 550                 555
gac ggc ttc acc atc gaa tcc aag cca tcc gag gag cta cta gag ggc    1732
Asp Gly Phe Thr Ile Glu Ser Lys Pro Ser Glu Glu Leu Leu Glu Gly
                560                 565                 570
cag ccg gtg ctc ctg agc tgc caa gcc gac agc tac aag tac gag cat    1780
Gln Pro Val Leu Leu Ser Cys Gln Ala Asp Ser Tyr Lys Tyr Glu His
            575                 580                 585
ctg cgc tgg tac cgc ctc aac ctg tcc acg ctg cac gat gcg cac ggg    1828
Leu Arg Trp Tyr Arg Leu Asn Leu Ser Thr Leu His Asp Ala His Gly
        590                 595                 600
aac ccg ctt ctg ctc gac tgc aag aac gtg cat ctg ttc gcc acc cct    1876
Asn Pro Leu Leu Leu Asp Cys Lys Asn Val His Leu Phe Ala Thr Pro
    605                 610                 615
ctg gcc gcc agc ctg gag gag gtg gca cct ggg gcg cgc cac gcc acg    1924
Leu Ala Ala Ser Leu Glu Glu Val Ala Pro Gly Ala Arg His Ala Thr
620                 625                 630                 635
ctc agc ctg agt atc ccc cgc gtc gcg ccc gag cac gag ggc cac tat    1972
Leu Ser Leu Ser Ile Pro Arg Val Ala Pro Glu His Glu Gly His Tyr
                640                 645                 650
gtg tgc gaa gtg caa gac cgg cgc agc cat gac aag cac tgc cac aag    2020
Val Cys Glu Val Gln Asp Arg Arg Ser His Asp Lys His Cys His Lys
            655                 660                 665
aag tac ctg tcg gtg cag gcc ctg gaa gcc cct cgg ctc acg cag aac    2068
Lys Tyr Leu Ser Val Gln Ala Leu Glu Ala Pro Arg Leu Thr Gln Asn
        670                 675                 680
ttg acc gac ctc ctg gtg aac gtg agc gac tcg ctg gag atg cag tgc    2116
Leu Thr Asp Leu Leu Val Asn Val Ser Asp Ser Leu Glu Met Gln Cys
    685                 690                 695
ttg gtg gcc gga gcg cac gcg ccc agc atc gtg tgg tac aaa gac gag    2164
Leu Val Ala Gly Ala His Ala Pro Ser Ile Val Trp Tyr Lys Asp Glu
700                 705                 710                 715
agg ctg ctg gag gaa aag tct gga gtc gac ttg gcg gac tcc aac cag    2212
Arg Leu Leu Glu Glu Lys Ser Gly Val Asp Leu Ala Asp Ser Asn Gln
                720                 725                 730
aag ctg agc atc cag cgc gtg cgc gag gag gat gcg gga cgc tat ctg    2260
Lys Leu Ser Ile Gln Arg Val Arg Glu Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu
            735                 740                 745
tgc agc gtg tgc aac gcc aag ggc tgc gtc aac tcc tcc gcc agc gtg    2308
Cys Ser Val Cys Asn Ala Lys Gly Cys Val Asn Ser Ser Ala Ser Val
        750                 755                 760
gcc gtg gaa ggc tcc gag gat aag ggc agc atg gag atc gtg atc ctt    2356
Ala Val Glu Gly Ser Glu Asp Lys Gly Ser Met Glu Ile Val Ile Leu
    765                 770                 775
gtc ggt acc ggc gtc atc gct gtc ttc ttc tgg gtc ctc ctc ctc ctc    2404
Val Gly Thr Gly Val Ile Ala Val Phe Phe Trp Val Leu Leu Leu Leu
780                 785                 790                 795
atc ttc tgt aac atg agg agg ccg gcc cac gca gac atc aag acg ggc    2452
Ile Phe Cys Asn Met Arg Arg Pro Ala His Ala Asp Ile Lys Thr Gly
                800                 805                 810
tac ctg tcc atc atc atg gac ccc ggg gag gtg cct ctg gag gag caa    2500
Tyr Leu Ser Ile Ile Met Asp Pro Gly Glu Val Pro Leu Glu Glu Gln
            815                 820                 825
tgc gaa tac ctg tcc tac gat gcc agc cag tgg gaa ttc ccc cga gag    2548
Cys Glu Tyr Leu Ser Tyr Asp Ala Ser Gln Trp Glu Phe Pro Arg Glu
        830                 835                 840
cgg ctg cac ctg ggg aga gtg ctc ggc tac ggc gcc ttc ggg aag gtg    2596
Arg Leu His Leu Gly Arg Val Leu Gly Tyr Gly Ala Phe Gly Lys Val
    845                 850                 855
gtg gaa gcc tcc gct ttc ggc atc cac aag ggc agc agc tgt gac acc    2644
Val Glu Ala Ser Ala Phe Gly Ile His Lys Gly Ser Ser Cys Asp Thr
860                 865                 870                 875
gtg gcc gtg aaa atg ctg aaa gag ggc gcc acg gcc agc gag cac cgc    2692
Val Ala Val Lys Met Leu Lys Glu Gly Ala Thr Ala Ser Glu His Arg
                880                 885                 890
gcg ctg atg tcg gag ctc aag atc ctc att cac atc ggc aac cac ctc    2740
Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Leu Ile His Ile Gly Asn His Leu
            895                 900                 905
aac gtg gtc aac ctc ctc ggg gcg tgc acc aag ccg cag ggc ccc ctc    2788
Asn Val Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Lys Pro Gln Gly Pro Leu
        910                 915                 920
atg gtg atc gtg gag ttc tgc aag tac ggc aac ctc tcc aac ttc ctg    2836
Met Val Ile Val Glu Phe Cys Lys Tyr Gly Asn Leu Ser Asn Phe Leu
    925                 930                 935
cgc gcc aag cgg gac gcc ttc agc ccc tgc gcg gag aag tct ccc gag    2884
Arg Ala Lys Arg Asp Ala Phe Ser Pro Cys Ala Glu Lys Ser Pro Glu
940                 945                 950                 955
cag cgc gga cgc ttc cgc gcc atg gtg gag ctc gcc agg ctg gat cgg    2932
Gln Arg Gly Arg Phe Arg Ala Met Val Glu Leu Ala Arg Leu Asp Arg
                960                 965                 970
agg cgg ccg ggg agc agc gac agg gtc ctc ttc gcg cgg ttc tcg aag    2980
Arg Arg Pro Gly Ser Ser Asp Arg Val Leu Phe Ala Arg Phe Ser Lys
            975                 980                 985
acc gag ggc gga gcg agg cgg gct tct cca gac caa gaa gct gag gac    3028
Thr Glu Gly Gly Ala Arg Arg Ala Ser Pro Asp Gln Glu Ala Glu Asp
        990                 995                1000
ctg tgg ctg agc ccg ctg acc atg gaa gat ctt gtc tgc tac agc ttc    3076
Leu Trp Leu Ser Pro Leu Thr Met Glu Asp Leu Val Cys Tyr Ser Phe
   1005                 1010                1015
cag gtg  gcc aga ggg atg gag ttc ctg gct tcc cga aag tgc atc cac   3124
Gln Val  Ala Arg Gly Met Glu Phe Leu Ala Ser Arg Lys Cys Ile His
1020                1025                1030                1035
aga gac ctg gct gct cgg aac att ctg ctg tcg gaa agc gac gtg gtg    3172
Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Leu Ser Glu Ser Asp Val Val
               1040                1045                1050
aag atc tgt gac ttt ggc ctt gcc cgg gac atc tac aaa gac cct gac    3220
Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Tyr Lys Asp Pro Asp
           1055                1060                1065
tac gtc cgc aag ggc agt gcc cgg ctg ccc ctg aag tgg atg gcc cct    3268
Tyr Val Arg Lys Gly Ser Ala Arg Leu Pro Leu Lys Trp Met Ala Pro
       1070                1075                1080
gaa agc atc ttc gac aag gtg tac acc acg cag agt gac gtg tgg tcc    3316
Glu Ser Ile Phe Asp Lys Val Tyr Thr Thr Gln Ser Asp Val Trp Ser
   1085                1090                1095
ttt ggg gtg ctt ctc tgg gag atc ttc tct ctg ggg gcc tcc ccg tac    3364
Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Phe Ser Leu Gly Ala Ser Pro Tyr
1100               1105                1110                1115
cct ggg gtg cag atc aat gag gag ttc tgc cag cgg ctg aga gac ggc    3412
Pro Gly Val Gln Ile Asn Glu Glu Phe Cys Gln Arg Leu Arg Asp Gly
               1120                1125                1130
aca agg atg agg gcc ccg gag ctg gcc act ccc gcc ata cgc cgc atc    3460
Thr Arg Met Arg Ala Pro Glu Leu Ala Thr Pro Ala Ile Arg Arg Ile
           1135                1140                1145
atg ctg aac tgc tgg tcc gga gac ccc aag gcg aga cct gca ttc tcg    3508
Met Leu Asn Cys Trp Ser Gly Asp Pro Lys Ala Arg Pro Ala Phe Ser
       1150                1155                1160
gag ctg gtg gag atc ctg ggg gac ctg ctc cag ggc agg ggc ctg caa    3556
Glu Leu Val Glu Ile Leu Gly Asp Leu Leu Gln Gly Arg Gly Leu Gln
   1165                1170                1175
gag gaa gag gag gtc tgc atg gcc ccg cgc agc tct cag agc tca gaa    3604
Glu Glu Glu Glu Val Cys Met Ala Pro Arg Ser Ser Gln Ser Ser Glu
1180               1185                1190                1195
gag ggc agc ttc tcg cag gtg tcc acc atg gcc cta cac atc gcc cag    3652
Glu Gly Ser Phe Ser Gln Val Ser Thr Met Ala Leu His Ile Ala Gln
               1200                1205                1210
gct gac gct gag gac agc ccg cca agc ctg cag cgc cac agc ctg gcc    3700
Ala Asp Ala Glu Asp Ser Pro Pro Ser Leu Gln Arg His Ser Leu Ala
           1215                1220                1225
gcc agg tat tac aac tgg gtg tcc ttt ccc ggg tgc ctg gcc aga ggg    3748
Ala Arg Tyr Tyr Asn Trp Val Ser Phe Pro Gly Cys Leu Ala Arg Gly
       1230                1235                1240
gct gag acc cgt ggt tcc tcc agg atg aag aca ttt gag gaa ttc ccc    3796
Ala Glu Thr Arg Gly Ser Ser Arg Met Lys Thr Phe Glu Glu Phe Pro
   1245                1250                1255
atg acc cca acg acc tac aaa ggc tct gtg gac aac cag aca gac agt    3844
Met Thr Pro Thr Thr Tyr Lys Gly Ser Val Asp Asn Gln Thr Asp Ser
1260               1265                1270                1275
ggg atg gtg ctg gcc tcg gag gag ttt gag cag ata gag agc agg cat    3892
Gly Met Val Leu Ala Ser Glu Glu Phe Glu Gln Ile Glu Ser Arg His
               1280                1285                1290
aga caa gaa agc ggc ttc agg tagctgaagc agagagagag aaggcagcat       3943
Arg Gln Glu Ser Gly Phe Arg
           1295
acgtcagcat tttcttctct gcacttataa gaaagatcaa agactttaag actttcgcta  4003
tttcttctac tgctatctac tacaaacttc aaagaggaac caggaggaca agaggagcat  4063
gaaagtggac aaggagtgtg accactgaag caccacaggg aaggggttag gcctccggat  4123
gactgcgggc aggcctggat aatatccagc ctcccacaag aagctggtgg agcagagtgt  4183
tccctgactc ct                                                      4195
<210>32
<211>1298
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>32
Met Gln Arg Gly Ala Ala Leu Cys Leu Arg Leu Trp Leu Cys Leu Gly
  1               5                  10                  15
Leu Leu Asp Gly Leu Val Ser Gly Tyr Ser Met Thr Pro Pro Thr Leu
             20                  25                  30
Asn Ile Thr Glu Glu Ser His Val Ile Asp Thr Gly Asp Ser Leu Ser
         35                  40                  45
Ile Ser Cys Arg Gly Gln His Pro Leu Glu Trp Ala Trp Pro Gly Ala
     50                  55                  60
Gln Glu Ala Pro Ala Thr Gly Asp Lys Asp Ser Glu Asp Thr Gly Val
 65                  70                  75                  80
Val Arg Asp Cys Glu Gly Thr Asp Ala Arg Pro Tyr Cys Lys Val Leu
                 85                  90                  95
Leu Leu His Glu Val His Ala Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Val Cys Tyr
            100                 105                 110
Tyr Lys Tyr Ile Lys Ala Arg Ile Glu Gly Thr Thr Ala Ala Ser Ser
        115                 120                 125
Tyr Val Phe Val Arg Asp Phe Glu Gln Pro Phe Ile Asn Lys Pro Asp
    130                 135                 140
Thr Leu Leu Val Asn Arg Lys Asp Ala Met Trp Val Pro Cys Leu Val
145                 150                 155                 160
Ser Ile Pro Gly Leu Asn Val Thr Leu Arg Ser Gtn Ser Ser Val Leu
                165                 170                 175
Trp Pro Asp Gly Gln Glu Val Val Trp Asp Asp Arg Arg Gly Met Leu
            180                 185                 190
Val Ser Thr Pro Leu Leu His Asp Ala Leu Tyr Leu Gln Cys Glu Thr
        195                 200                 205
Thr Trp Gly Asp Gln Asp Phe Leu Ser Asn Pro Phe Leu Val His Ile
    210                 215                 220
Thr Gly Asn Glu Leu Tyr Asp Ile Gln Leu Leu Pro Arg Lys Ser Leu
225                 230                 235                 240
Glu Leu Leu Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Val Trp Ala
                245                 250                 255
Glu Phe Asn Ser Gly Val Thr Phe Asp Trp Asp Tyr Pro Gly Lys Gln
            260                 265                 270
Ala Glu Arg Gly Lys Trp Val Pro Glu Arg Arg Ser Gln Gln Thr His
        275                 280                 285
Thr Glu Leu Ser Ser Ile Leu Thr Ile His Asn Val Ser Gln His Asp
    290                 295                 300
Leu Gly Ser Tyr Val Cys Lys Ala Asn Asn Gly Ile Gln Arg Phe Arg
305                 310                 315                 320
Glu Ser Thr Glu Val Ile Val His Glu Asn Pro Phe Ile Ser Val Glu
                325                 330                 335
Trp Leu Lys Gly Pro Ile Leu Glu Ala Thr Ala Gly Asp Glu Leu Val
            340                 345                 350
Lys Leu Pro Val Lys Leu Ala Ala Tyr Pro Pro Pro Glu Phe Gln Trp
        355                 360                 365
Tyr Lys Asp Gly Lys Ala Leu Ser Gly Arg His Ser Pro His Ala Leu
    370                 375                 380
Val Leu Lys Glu Val Thr Glu Ala Ser Thr Gly Thr Tyr Thr Leu Ala
385                 390                 395                 400
Leu Trp Asn Ser Ala Ala Gly Leu Arg Arg Asn Ile Ser Leu Glu Leu
                405                 410                 415
Val Val Asn Val Pro Pro Gln Ile His Glu Lys Glu Ala Ser Ser Pro
            420                 425                 430
Ser Ile Tyr Ser Arg His Ser Arg Gln Ala Leu Thr Cys Thr Ala Tyr
        435                 440                 445
Gly Val Pro Leu Pro Leu Ser Ile Gln Trp His Trp Arg Pro Trp Thr
    450                 455                 460
Pro Cys Lys Met Phe Ala Gln Arg Ser Leu Arg Arg Arg Gln Gln Gln
465                 470                 475                 480
Asp Leu Met Pro Gln Cys Arg Asp Trp Arg Ala Val Thr Thr Gln Asp
                485                 490                 495
Ala Val Asn Pro Ile Glu Ser Leu Asp Thr Trp Thr Glu Phe Val Glu
            500                 505                 510
Gly Lys Asn Lys Thr Val Ser Lys Leu Val Ile Gln Asn Ala Asn Val
        515                 520                 525
Ser Ala Met Tyr Lys Cys Val Val Ser Asn Lys Val Gly Gln Asp Glu
    530                 535                 540
Arg Leu Ile Tyr Phe Tyr Val Thr Thr Ile Pro Asp Gly Phe Thr Ile
545                 550                 555                 560
Glu Ser Lys Pro Ser Glu Glu Leu Leu Glu Gly Gln Pro Val Leu Leu
                565                 570                 575
Ser Cys Gln Ala Asp Ser Tyr Lys Tyr Glu His Leu Arg Trp Tyr Arg
            580                 585                 590
Leu Asn Leu Ser Thr Leu His Asp Ala His Gly Asn Pro Leu Leu Leu
        595                 600                 605
Asp Cys Lys Asn Val His Leu Phe Ala Thr Pro Leu Ala Ala Ser Leu
    610                 615                 620
Glu Glu Val Ala Pro Gly Ala Arg His Ala Thr Leu Ser Leu Ser Ile
625                 630                 635                 640
Pro Arg Val Ala Pro Glu His Glu Gly His Tyr Val Cys Glu Val Gln
                645                 650                 655
Asp Arg Arg Ser His Asp Lys His Cys His Lys Lys Tyr Leu Ser Val
            660                 665                 670
Gln Ala Leu Glu Ala Pro Arg Leu Thr Gln Asn Leu Thr Asp Leu Leu
        675                 680                 685
Val Asn Val Ser Asp Ser Leu Glu Met Gln Cys Leu Val Ala Gly Ala
    690                 695                 700
His Ala Pro Ser Ile Val Trp Tyr Lys Asp Glu Arg Leu Leu Glu Glu
705                 710                 715                 720
Lys Ser Gly Val Asp Leu Ala Asp Ser Asn Gln Lys Leu Ser Ile Gln
                725                 730                 735
Arg Val Arg Glu Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Leu Cys Ser Val Cys Asn
            740                 745                 750
Ala Lys Gly Cys Val Asn Ser Ser Ala Ser Val Ala Val Glu Gly Ser
        755                 760                 765
Glu Asp Lys Gly Ser Met Glu Ile Val Ile Leu Val Gly Thr Gly Val
    770                 775                 780
Ile Ala Val Phe Phe Trp Val Leu Leu Leu Leu Ile Phe Cys Asn Met
785                 790                 795                 800
Arg Arg Pro Ala His Ala Asp Ile Lys Thr Gly Tyr Leu Ser Ile Ile
                805                 810                 815
Met Asp Pro Gly Glu Val Pro Leu Glu Glu Gln Cys Glu Tyr Leu Ser
            820                 825                 830
Tyr Asp Ala Ser Gln Trp Glu Phe Pro Arg Glu Arg Leu His Leu Gly
        835                 840                 845
Arg Val Leu Gly Tyr Gly Ala Phe Gly Lys Val Val Glu Ala Ser Ala
    850                 855                 860
Phe Gly Ile His Lys Gly Ser Ser Cys Asp Thr Val Ala Val Lys Met
865                 870                 875                 880
Leu Lys Glu Gly Ala Thr Ala Ser Glu His Arg Ala Leu Met Ser Glu
                885                 890                 895
Leu Lys Ile Leu Ile His Ile Gly Asn His Leu Asn Val Val Asn Leu
            900                 905                 910
Leu Gly Ala Cys Thr Lys Pro Gln Gly Pro Leu Met Val Ile Val Glu
        915                 920                 925
Phe Cys Lys Tyr Gly Asn Leu Ser Asn Phe Leu Arg Ala Lys Arg Asp
    930                 935                 940
Ala Phe Ser Pro Cys Ala Glu Lys Ser Pro Glu Gln Arg Gly Arg Phe
945                 950                 955                 960
Arg Ala Met Val Glu Leu Ala Arg Leu Asp Arg Arg Arg Pro Gly Ser
                965                 970                 975
Ser Asp Arg Val Leu Phe Ala Arg Phe Ser Lys Thr Glu Gly Gly Ala
            980                 985                 990
Arg Arg Ala Ser Pro Asp Gln Glu  Ala Glu Asp Leu Trp  Leu Ser Pro
        995                 1000                 1005
Leu Thr  Met Glu Asp Leu Val  Cys Tyr Ser Phe Gln  Val Ala Arg Gly
    1010                 1015                 1020
Met  Glu Phe Leu Ala Ser  Arg Lys Cys Ile His  Arg Asp Leu Ala Ala
1025                 1030                 1035                 1040
Arg Asn Ile Leu Leu  Ser Glu Ser Asp Val  Val Lys Ile Cys Asp  Phe
                1045                 1050                 1055
Gly Leu Ala Arg  Asp Ile Tyr Lys Asp  Pro Asp Tyr Val Arg  Lys Gly
            1060                 1065                 1070
Ser Ala Arg  Leu Pro Leu Lys Trp  Met Ala Pro Glu Ser  Ile Phe Asp
        1075                 1080                 1085
Lys Val  Tyr Thr Thr Gln Ser  Asp Val Trp Ser Phe  Gly Val Leu Leu
    1090                 1095                 1100
Trp  Glu Ile Phe Ser Leu  Gly Ala Ser Pro Tyr  Pro Gly Val Gln Ile
1105                 1110                 1115                 1120
Asn Glu Glu Phe Cys  Gln Arg Leu Arg Asp  Gly Thr Arg Met Arg  Ala
                1125                 1130                 1135
Pro Glu Leu Ala  Thr Pro Ala Ile Arg  Arg Ile Met Leu Asn  Cys Trp
            1140                 1145                 1150
Ser Gly Asp  Pro Lys Ala Arg Pro  Ala Phe Ser Glu Leu  Val Glu Ile
        1155                 1160                 1165
Leu Gly  Asp Leu Leu Gln Gly  Arg Gly Leu Gln Glu  Glu Glu Glu Val
    1170                 1175                 1180
Cys  Met Ala Pro Arg Ser  Ser Gln Ser Ser Glu  Glu Gly Ser Phe Ser
1185                 1190                 1195                 1200
Gln Val Ser Thr Met  Ala Leu His Ile Ala  Gln Ala Asp Ala Glu  Asp
                1205                 1210                 1215
Ser Pro Pro Ser  Leu Gln Arg His Ser  Leu Ala Ala Arg Tyr  Tyr Asn
            1220                 1225                 1230
Trp Val Ser  Phe Pro Gly Cys Leu  Ala Arg Gly Ala Glu  Thr Arg Gly
        1235                 1240                 1245
Ser Ser  Arg Met Lys Thr Phe  Glu Glu Phe Pro Met  Thr Pro Thr Thr
    1250                 1255                 1260
Tyr  Lys Gly Ser Val Asp  Asn Gln Thr Asp Ser  Gly Met Val Leu Ala
1265                 1270                 1275                 1280
Ser Glu Glu Phe Glu  Gln Ile Glu Ser Arg  His Arg Gln Glu Ser  Gly
                1285                 1290                 1295
Phe Arg
<210>33
<211>14
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>33
Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr
1               5                   10
<210>34
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的引物
<400>34
tccggtttcc tgtgaggc                                                  18
<210>35
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的引物
<400>35
aagttgggta acgccagg                                                  18
<210>36
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的引物
<400>36
tgacctcgcc cccgt                                                     15
<210>37
<211>3088
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>37
ccccttttcc agaatcactt gcactgtctt gttcttgaat gagaaaggaa gaaaagagcc    60
tcccattact cagacccgtg taaacattat tccccccagg agaaaatggt gttattcaaa    120
tgaarcataa taaaatagcc tctaaacagt ttctaagcgg gagcctccgt ggaactcagc    180
gctccgctcc tcccagttcc taagaggtcc cgggattctt gagctgtgcc cagctgacga    240
gcttttgaag atggcacaat aaccgtccag tgatgcctga ccatgacagc acagccctct    300
taagccggca aaccaagagg agaagagttg acattggagt gaaaaggacg gtagggacag    360
catctgcatt ttttgctaag gcaagagcaa cgttttttag tgccatgaat ccccaaggtt    420
ctgagcagga tgttgagtat tcagtggtgc agcatgcaga tggggaaaag tcaaatgtac    480
tccgcaagct gctgaagagg gcgaactcgt atgaagatgc catgatgcct tttccaggag    540
caaccataat ttcccagctg ttgaaaaata acatgaacaa aaatggtggc acggagccca    600
gtttccaagc cagcggtctc tctagtacag gctccgaagt acatcaggag gatatatgca    660
gcaactcttc aagagacagc cccccagagt gtctttcccc ttttggcagg cctactatga    720
gccagtttga tatggatcgc ttatgtgatg agcacctgag agcaaagcgc gcccgggttg    780
agaatataat tcggggtatg agccattccc ccagtgtggc attaaggggc aatgaaaatg    840
aaagagagat ggccccgcag tctgtgagtc cccgagaaag ttacagagaa aacaaacgca    900
agcaaaagct tccccagcag cagcaacaga gtttccagca gctggtttca gcccgaaaag    960
aacagaagcg agaggagcgc cgacagctga aacagcagct ggaggacatg cagaaacagc    1020
tgcgccagct gcaggaaaag ttctaccaaa tctatgacag cactgattcg gaaaatgatg    1080
aagatggtaa cctgtctgaa gacagcatgc gctcggagat cctggatgcc agggcccagg    1140
actctgtcgg aaggtcagat aatgagatgt gcgagctaga cccaggacag tttattgacc    1200
gagctcgagc cctgatcaga gagcaggaaa tggctgaaaa caagccgaag cgagaaggca    1260
acaacaaaga aagagaccat gggccaaact ccttacaacc ggaaggcaaa catttggctg    1320
agaccttgaa acaggaactg aacactgcca tgtcgcaagt tgtggacact gtggtcaaag    1380
tcttttcggc caagccctcc cgccaggttc ctcaggtctt cccacctctc cagatccccc    1440
aggccagatt tgcagtcaat ggggaaaacc acaatttcca caccgccaac cagcgcctgc    1500
agtgctttgg cgacgtcatc attccgaacc ccctggacac ctttggcaat gtgcagatgg    1560
ccagttccac tgaccagaca gaagcactgc ccctggttgt ccgcaaaaac tcctctgacc    1620
agtctgcctc cggccctgcc gctggcggcc accaccagcc cctgcaccag tcgcctctct    1680
ctgccaccac gggcttcacc acgtccacct tccgccaccc cttccccctt cccttgatgg    1740
cctatccatt tcagagccca ttaggtgctc cctccggctc cttctctgga aaagacagag    1800
cctctcctga atccttagac ttaactaggg ataccacgag tctgaggacc aagatgtcat    1860
ctcaccacct gagccaccac ccttgttcac cagcacaccc gcccagcacc gccgaagggc    1920
tctccttgtc gctcataaag tccgagtgcg gcgatcttca agatatgtct gaaatatcac    1980
cttattcggg aagtgcaatg caggaaggat tgtcacccaa tcacttgaaa aaagcaaagc    2040
tcatgttttt ttatacccgt tatcccagct ccaatatgct gaagacctac ttctccgacg    2100
taaagttcaa cagatgcatt acctctcagc tcatcaagtg gtttagcaat ttccgtgagt    2160
tttactacat tcagatggag aagtacgcac gtcaagccat caacgatggg gtcaccagta    2220
ctgaagagct gtctataacc agagactgtg agctgtacag ggctctgaac atgcactaca    2280
ataaagcaaa tgactttgag gttccagaga gattcctgga agttgctcag atcacattac    2340
gggagttttt caatgccatt atcgcaggca aagatgttga tccttcctgg aagaaggcca    2400
tatacaaggt catctgcaag ctggatagtg aagtccctga gattttcaaa tccccgaact    2460
gcctacaaga gctgcttcat gagtagaaat ttcaacaact ctttttgaat gtatgaagag    2520
tagcagtccc ctttggatgt ccaagttata tgtgtctaga ttttgatttc atatatatgt    2580
gtatgggagg catggatatg ttatgaaatc agctggtaat tcctcctcat cacgtttctc    2640
tcattttctt ttgttttcca ttgcaagggg atggttgttt tctttctgcc tttagtttgc    2700
ttttgcccaa ggcccttaac atttggacac ttaaaatagg gttaattttc agggaaaaag    2760
aatgttggcg tgtgtaaagt ctctattagc aatgaaggga atttgttaac gatgcatcca    2820
cttgattgat gacttattgc aaatggcggt tggctgagga aaacccatga cacagcacaa    2880
ctctacagac agtgatgtgt ctcttgtttc tactgctaag aaggtctgaa aatttaatga    2940
aaccacttca tacatttaag tattttgttt ggtttgaact caatcagtag cttttcctta    3000
catgtttaaa aataattcca atgacagatg agcagctcac ttttccaaag taccccaaaa    3060
ggccaaatta aaaaaaaaaa aaaaaaaa                                       3088
<210>38
<211>737
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>38
Met Pro Asp His Asp Ser Thr Ala Leu Leu Ser Arg Gln Thr Lys Arg
1               5                   10                  15
Arg Arg Val Asp Ile Gly Val Lys Arg Thr Val Gly Thr Ala Ser Ala
            20                  25                  30
Phe Phe Ala Lys Ala Arg Ala Thr Phe Phe Ser Ala Met Asn Pro Gln
        35                  40                  45
Gly Ser Glu Gln Asp Val Glu Tyr Ser Val Val Gln His Ala Asp Gly
    50                  55                  60
Glu Lys Ser Asn Val Leu Arg Lys Leu Leu Lys Arg Ala Asn Ser Tyr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ala Met Met Pro Phe Pro Gly Ala Thr Ile Ile Ser Gln Leu
                85                  90                  95
Leu Lys Asn Asn Met Asn Lys Asn Gly Gly Thr Glu Pro Ser Phe Gln
            100                 105                 110
Ala Ser Gly Leu Ser Ser Thr Gly Ser Glu Val His Gln Glu Asp Ile
        115                 120                 125
Cys Ser Asn Ser Ser Arg Asp Ser Pro Pro Glu Cys Leu Ser Pro Phe
    130                 135                 140
Gly Arg Pro Thr Met Ser Gln Phe Asp Met Asp Arg Leu Cys Asp Glu
145                 150                 155                 160
His Leu Arg Ala Lys Arg Ala Arg Val Glu Asn Ile Ile Arg Gly Met
                165                 170                 175
Ser His Ser Pro Ser Val Ala Leu Arg Gly Asn Glu Asn Glu Arg Glu
            180                 185                 190
Met Ala Pro Gln Ser Val Ser Pro Arg Glu Ser Tyr Arg Glu Asn Lys
        195                 200                 205
Arg Lys Gln Lys Leu Pro Gln Gl n Gln Gln Gln Ser Phe Gln Gln Leu
    210                 215                  220
Val Ser Ala Arg Lys Glu Gln Lys Arg Glu Glu Arg Arg Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Gln Gln Leu Glu Asp Met Gln Lys Gln Leu Arg Gln Leu Gln Glu Lys
                245                 250                 255
Phe Tyr Gln Ile Tyr Asp Ser Thr Asp Ser Glu Asn Asp Glu Asp Gly
            260                 265                 270
Asn Leu Ser Glu Asp Ser Met Arg Ser Glu Ile Leu Asp Ala Arg Ala
        275                 280                 285
Gln Asp Ser Val Gly Arg Ser Asp Asn Glu Met Cys Glu Leu Asp Pro
    290                 295                 300
Gly Gln Phe Ile Asp Arg Ala Arg Ala Leu Ile Arg Glu Gln Glu Met
305                 310                 315                 320
Ala Glu Asn Lys Pro Lys Arg Glu Gly Asn Asn Lys Glu Arg Asp His
                325                 330                 335
Gly Pro Asn Ser Leu Gln Pro Glu Gly Lys His Leu Ala Glu Thr Leu
            340                 345                 350
Lys Gln Glu Leu Asn Thr Ala Met Ser Gln Val Val Asp Thr Val Val
        355                 360                 365
Lys Val Phe Ser Ala Lys Pro Ser Arg Gln Val Pro Gln Val Phe Pro
    370                 375                 380
Pro Leu Gln Ile Pro Gln Ala Arg Phe Ala Val Asn Gly Glu Asn His
385                 390                 395                 400
Asn Phe His Thr Ala Asn Gln Arg Leu Gln Cys Phe Gly Asp Val Ile
                405                 410                 415
Ile Pro Asn Pro Leu Asp Thr Phe Gly Asn Val Gln Met Ala Ser Ser
            420                 425                 430
Thr Asp Gln Thr Glu Ala Leu Pro Leu Val Val Arg Lys Asn Ser Ser
        435                 440                 445
Asp Gln Ser Ala Ser Gly Pro Ala Ala Gly Gly His His Gln Pro Leu
    450                 455                 460
His Gln Ser Pro Leu Ser Ala Thr Thr Gly Phe Thr Thr Ser Thr Phe
465                 470                 475                 480
Arg His Pro Phe Pro Leu Pro Leu Met Ala Tyr Pro Phe Gln Ser Pro
                485                 490                 495
Leu Gly Ala Pro Ser Gly Ser Phe Ser Gly Lys Asp Arg Ala Ser Pro
            500                 505                 510
Glu Ser Leu Asp Leu Thr Arg Asp Thr Thr Ser Leu Arg Thr Lys Met
        515                 520                 525
Ser Ser His His Leu Ser His His Pro Cys Ser Pro Ala His Pro Pro
    530                 535                 540
Ser Thr Ala Glu Gly Leu Ser Leu Ser Leu Ile Lys Ser Glu Cys Gly
545                 550                 555                 560
Asp Leu Gln Asp Met Ser Glu Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Ser Ala Met
                565                 570                 575
Gln Glu Gly Leu Ser Pro Asn His Leu Lys Lys Ala Lys Leu Met Phe
            580                 585                 590
Phe Tyr Thr Arg Tyr Pro Ser Ser Asn Met Leu Lys Thr Tyr Phe Ser
        595                 600                 605
Asp Val Lys Phe Asn Arg Cys Ile Thr Ser Gln Leu Ile Lys Trp Phe
    610                 615                 620
Ser Asn Phe Arg Glu Phe Tyr Tyr Ile Gln Met Glu Lys Tyr Ala Arg
625                 630                 635                 640
Gln Ala Ile Asn Asp Gly Val Thr Ser Thr Glu Glu Leu Ser Ile Thr
                645                 650                 655
Arg Asp Cys Glu Leu Tyr Arg Ala Leu Asn Met His Tyr Asn Lys Ala
            660                 665                 670
Asn Asp Phe Glu Val Pro Glu Arg Phe Leu Glu Val Ala Gln Ile Thr
        675                 680                 685
Leu Arg Glu Phe Phe Asn Ala Ile Ile Ala Gly Lys Asp Val Asp Pro
    690                 695                 700
Ser Trp Lys Lys Ala Ile Tyr Lys Val Ile Cys Lys Leu Asp Ser Glu
705                 710                 715                 720
Val Pro Glu Ile Phe Lys Ser Pro Asn Cys Leu Gln Glu Leu Leu His
                725                 730                 735
Glu

Claims (80)

1.血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物在制备促进神经细胞或神经前体细胞募集、增殖、分化、迁移或存活的药物中的用途。
2.根据权利要求1的用途，其中所述药物促进神经元细胞或神经元前体细胞的募集、增殖、分化、迁移或存活
3.根据权利要求1的用途，其中所述药物促进少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞的募集、增殖或分化。
4.根据权利要求1-3之任一项的用途，其中所述药物用于治疗以神经元细胞的异常生长、神经元结疤或神经变性为特征的疾病或病症。
5.根据权利要求1-3之任一项的用途，其中所述药物用于治疗由选自阿尔茨海默氏病、帕金森病、亨廷顿病、运动神经元疾病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、痴呆和大脑麻痹的神经变性病导致的神经变性。
6.根据权利要求1-3之任一项的用途，其中所述药物用于治疗以少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞的异常生长为特征的疾病或病症。
7.根据权利要求6的用途，其中所述病症的特征在于神经系统脱髓鞘。
8.根据权利要求1-8之任一项的用途，其中所述药物用于治疗选自如下的病症：多发性硬化、苯丙酮酸尿症、脑室周围白质软化(PVL)、HIV-1脑炎(HIVE)、格林-巴利综合征(GBS)、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP)、急性运动性轴索型神经病(AMAN)、急性运动感觉性轴索型神经病(AMSAN)、Fisher综合症、急性全自主神经病变和Krabbe氏病。
9.根据权利要求1-3之任一项的用途，其中所述药物用于治疗慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病(CIDP)。
10.根据权利要求9的用途，其中CIPD选自多病灶获得性脱髓鞘感觉运动性神经病(MADSAM，也称作Lewis-Sumner综合症)和远端获得性脱髓鞘对称性神经病(DADS)。
11.根据权利要求1-3之任一项的用途，其中所述药物用于治疗神经创伤或神经损伤。
12.根据权利要求11的用途，其中所述神经创伤选自：中风相关的损伤、脊髓损伤、手术后损伤和脑局部缺血。
13.在哺乳动物个体中促进神经细胞或神经前体细胞募集、增殖、分化、迁移或存活的方法，包括：
鉴定需要治疗以促进神经细胞或神经前体细胞募集、增殖、分化、迁移或存活的哺乳动物个体，和
向所述个体施用包含血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)产物的组合物，其中施用量为在所述个体中有效地刺激神经细胞或神经前体细胞募集、增殖、分化、迁移或存活的量。
14.根据权利要求13的方法，其中所述鉴定包括鉴定需要治疗以促进神经元细胞或神经元前体细胞募集、增殖、分化、迁移或存活的哺乳动物个体。
15.根据权利要求13的方法，其中所述鉴定包括鉴定需要治疗以促进少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞募集、增殖或分化的哺乳动物个体。
16.促进神经干细胞或神经前体细胞增殖、分化、迁移或存活的方法，包括：
使纯化的神经干细胞或神经前体细胞与可以有效地促进所述细胞存活或刺激所述细胞增殖或分化的量的、含有血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物的组合物接触。
17.根据权利要求16的方法，其中神经干细胞选自：C17.2、纯化的神经干细胞、HSN-1细胞、胎猪细胞、神经嵴细胞、骨髓来源的神经干细胞、hNT细胞和人神经元祖先细胞系。
18.体外诱导少突胶质细胞前体细胞增殖的方法，包括使少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞与含有VEGF-C产物或VEGF-D产物的组合物接触，其中少突胶质细胞前体细胞选自CG-4细胞、SVG p12胎儿神经胶质细胞系、DBTRG-05MG神经胶质细胞系、纯化的少突胶质细胞前体细胞、分离的NG2蛋白聚糖(NG2+)细胞、骨髓来源的神经干细胞和人神经元祖先细胞系。
19.刺激神经干细胞增殖或分化的方法，包括
从哺乳动物个体获得生物学样品，其中所述样品包含神经干细胞，和
使所述神经干细胞与含有血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物的组合物接触。
20.刺激神经元前体细胞增殖或分化的方法，包括
从哺乳动物个体获得生物学样品，其中所述样品包含神经元前体细胞，和
使所述神经元前体细胞与含有血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物的组合物接触。
21.刺激少突胶质细胞前体细胞增殖或分化的方法，包括
从哺乳动物个体获得生物学样品，其中所述样品包含少突胶质细胞前体细胞，和
使所述少突胶质细胞前体细胞与含有血管内皮生长因子C(VEGF-C)产物或血管内皮生长因子D(VEGF-D)产物的组合物接触。
22.根据权利要求16-21之任一项的方法，其中所述接触包括在含有VEGF-C产物或VEGF-D产物的培养基中培养细胞。
23.根据权利要求19-22之任一项的方法，还包括在所述接触步骤之前从样品纯化和分离所述细胞的步骤。
24.根据权利要求16-23之任一项的方法，还包括在接触步骤之后纯化和分离所述细胞的步骤。
25.根据权利要求16-24之任一项培养的、纯化的和分离的神经细胞。
26.根据权利要求19-24之任一项的方法，还包括在所述接触步骤之后将所述细胞施用给哺乳动物个体的步骤。
27.根据权利要求19-24之任一项的方法，还包括在所述接触步骤之后将细胞移植入不同的哺乳动物个体中的步骤。
28.根据权利要求16-18之任一项的方法，还包括在所述接触步骤之后将所述细胞施用给哺乳动物个体的步骤。
29.权利要求26-28之任一项的方法，其中将所述细胞离体接种在组织、器官、或人工基质中，并将所述组织、器官或人工基质附着到、植入或移植入所述哺乳动物个体
30.根据权利要求13-15或26-29之任一项的方法，其中所述个体患有以神经元细胞的异常生长、神经元结疤或神经变性为特征的疾病或病症。
31.根据权利要求30的方法，其中所述神经变性由选自阿尔茨海默氏病、帕金森病、亨廷顿病、运动神经元疾病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、痴呆和大脑麻痹的神经变性病导致。
32.根据权利要求13-15或26-29之任一项的方法，其中所述个体患有以少突胶质细胞或少突胶质细胞前体细胞的异常生长为特征的疾病或病症。
33.根据权利要求13-15或26-29之任一项的方法，其中所述个体患有以神经系统脱髓鞘为特征的病症。
34.根据权利要求33的方法，其中所述病症是多发性硬化、苯丙酮酸尿症、脑室周围白质软化(PVL)、HIV-1脑炎(HIVE)、格林-巴利综合征(GBS)、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP)、急性运动性轴索型神经病(AMAN)、急性运动感觉性轴索型神经病(AMSAN)、Fisher综合症、急性全自主神经病变和Krabbe氏病。
35.根据权利要求13-15或26-29之任一项的方法，其中所述个体患有慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病(CIDP)。
36.根据权利要求35的方法，其中CIPD选自MADSAM(多病灶获得性脱髓鞘感觉运动性神经病，也称作Lewis-Sumner综合症)和DADS(远端获得性脱髓鞘对称性神经病)。
37.根据权利要求13-15或26-29之任一项的方法，其中所述疾病或病症选自神经创伤或神经损伤。
38.根据权利要求37的方法，其中所述神经创伤选自：中风相关的损伤、脊髓损伤、手术后损伤和脑局部缺血。
39.根据权利要求13-15或26-38之任一项的方法，其中所述哺乳动物个体是人。
40.根据权利要求1-24或26-28之任一项的方法或用途，其中所述产物是VEGF-C产物。
41.根据权利要求40的方法或用途，其中所述VEGF-C产物包含纯化的哺乳动物前VEGF-C原多肽或其结合VEGFR-3或神经毡蛋白-2的片段。
42.根据权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含VEGF-CΔC156多肽。
43.根据权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含嵌合肝素结合型VEGF-C多肽。
44.根据权利要求40的方法，其中所述个体是人，而前VEGF-C原多肽是人的。
45.根据权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含含有与SEQID NO：24的氨基酸32-227有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽，其中所述多肽结合VEGFR-3。
46.根据权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含含有与SEQID NO：24的氨基酸103-227有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽，其中所述多肽结合VEGFR-3。
47.权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含选自如下的多核苷酸：
(a)含有与SEQ ID NO：23的核苷酸序列有至少90％同一性的核苷酸序列并编码结合VEGFR-3的多肽的多核苷酸；和
(b)编码结合VEGFR-3的多肽的(a)的片段。
48.权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含选自如下的多核苷酸：
(a)含有编码包含与SEQ ID NO：24有至少90％同一性的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述多肽结合VEGFR-3；和
(b)编码结合VEGFR-3的多肽的(a)的片段。
49.根据权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含与SEQ IDNO：23的互补序列在如下杂交和洗涤条件下杂交并编码结合VEGFR-3的多肽的多核苷酸：在0.5M NaHPO4、7％十二烷基硫酸钠(SDS)、1mM EDTA中65℃杂交，以及在0.2XSSC/0.1％SDS中42℃洗涤。
50.权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含选自如下的多核苷酸：
(a)包含编码SEQ ID NO：24人VEGF-C氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸；和
(b)编码结合VEGFR-3的多肽的(a)的片段。
51.权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含编码VEGF-CΔC156多肽的多核苷酸。
52.权利要求40的方法或用途，其中VEGF-C产物包含编码嵌合肝素结合型VEGF-C多肽的核苷酸序列。
53.根据权利要求47-52之任一项的方法或用途，其中VEGF-C产物包含含有所述多核苷酸的病毒载体。
54.根据权利要求53的方法或用途，其中所述载体包括复制缺陷型腺病毒、腺相关病毒或慢病毒。
55.根据权利要求1-24或26-39之任一项的方法或用途，其中所述产物是VEGF-D产物。
56.根据权利要求1-24或26-55之任一项的方法或用途，其中所述组合物还包含可药用载体。
57.根据权利要求13-24或26-55之任一项的方法，还包括向哺乳动物个体施用神经治疗剂。
58.根据权利要求1-12之任一项的用途，还包括在所述药物中包含神经治疗剂。
59.根据权利要求57-58之任一项的方法或用途，其中所述神经治疗剂包含选自如下的一种或多种神经生长因子：干扰素γ、神经生长因子、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、neurogenin、脑衍生神经营养因子(BDNF)、甲状腺激素、骨形态发生蛋白(BMP)、白血病抑制因子(LIF)、sonic hedgehog、神经胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素、干扰素、干细胞因子(SCF)、活化素、抑制素、趋化因子、视黄酸和睫状神经营养因子(CNTF)。
60.根据权利要求57-58之任一项的方法或用途，其中神经治疗剂包含含有编码神经生长因子的核苷酸序列的多核苷酸，所述神经生长因子选自如下的一种或多种：干扰素γ、神经生长因子、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、neurogenin、脑衍生神经营养因子(BDNF)、甲状腺激素、骨形态发生蛋白(BMP)、白血病抑制因子(LIF)、sonic hedgehog、神经胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素、干扰素、干细胞因子(SCF)、活化素、抑制素、趋化因子、视黄酸和睫状神经营养因子(CNTF)。
61.根据权利要求57或58的方法或用途，其中神经治疗剂选自tacrine(Cognex)、多奈哌齐(Aricept)、酒石酸卡巴拉汀(Exelon)、galantamine(Reminyl)，胆碱脂酶抑制剂和抗炎药。
62.根据权利要求57或58的方法或用途，其中神经治疗剂选自：抗胆碱能药物、多巴胺激动剂、儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)、金刚胺(Symmetrel)、Sinemet_、司来吉兰、卡比多巴、罗匹尼罗(Requip)、辅酶Q10、普拉克索(Mirapex)和左旋多巴(L-dopa)。
63.根据权利要求1-24或26-62之任一项的方法或用途，其中VEGF-C或VEGF-D产物与PDGF-A或PDGF-C联合使用或施用。
64.在可药用稀释剂或载体中包含VEGF-C产物和神经生长因子的组合物。
65.在可药用稀释剂或载体中包含VEGF-C产物和神经治疗剂的组合物。
66.在可药用稀释剂或载体中包含VEGF-D产物和神经生长因子的组合物。
67.在可药用稀释剂或载体中包含VEGF-D产物和神经治疗剂的组合物。
68.权利要求64-67之任一项的组合物，还包含PDGF-A产物或PDGF-C产物。
69.VEGF-C抑制剂在制备用于治疗成神经细胞瘤或神经肿瘤的药物中的用途。
70.抑制成神经细胞瘤和神经肿瘤生长和进展的方法，包括向患有成神经细胞瘤或神经元肿瘤的个体施用包含VEGF-C抑制剂的组合物。
71.权利要求69或70的方法或用途，其中VEGF-C抑制剂选自：
(a)包含结合VEGF-C的VEGFR-2胞外片段的多肽；
(b)包含结合VEGF-C的VEGFR-3胞外片段的多肽；
(c)与VEGF-C多肽免疫反应的抗体物质；
(d)VEGF-C反义分子；和
(e)VEGF-C siRNA。
72.权利要求69或70的方法或用途，其中VEGF-C抑制剂选自：包含结合VEGF-C的VEGFR-3胞外片段的多肽、包含结合VEGF-C的NRP-1胞外片段的多肽、和包含结合VEGF-C的NRP-2胞外片段的多肽。
73.权利要求67-70之任一项的方法或用途，其中VEGF-C或VEGF-D产物与PDGF-A抑制剂或PDGF-C抑制剂联合使用或施用。
74.筛选调节VEGF-C对神经干细胞或神经前体细胞的生长、迁移、分化或存活的刺激作用的调节剂，包括：
使包含VEGF-C多肽的组合物和神经细胞或神经前体细胞在有和无被测药剂存在时接触；
测量细胞在有和无所述药剂存在时的生长、迁移、分化或存活；和
基于存在所述被测药剂时相对于不存在所述被测药剂时的差别测量结果，将所述被测药剂鉴定为调节VEGF-C对神经细胞或神经前体细胞的作用的调节剂。
75.筛选调节VEGF-D对神经干细胞或神经前体细胞的生长、迁移、分化或存活的刺激作用的调节剂，包括：
使包含VEGF-D多肽的组合物和神经细胞或神经前体细胞在有和无被测药剂存在时接触；
测量所述细胞在有和无所述药剂存在时的生长、迁移、分化或存活；和
基于存在所述被测药剂时相对于不存在所述被测药剂时的差别测量结果，将所述被测药剂鉴定为调节VEGF-D对神经细胞或神经前体细胞的作用的调节剂。
76.权利要求74或75的方法，其中所述细胞包含神经干细胞系。
77.权利要求74或75的方法，其中所述细胞包含表达VEGFR-3的神经细胞或神经祖先细胞。
78.权利要求74、75和76之任一项的方法，其中所述细胞表达神经毡蛋白2。
79.权利要求74和75的方法，其用于检测作为神经干细胞或神经前体细胞生长、迁移、分化或存活刺激的激动剂的调节剂，
其中通过细胞表面神经细胞标志染色的增加或在细胞中检测到增殖标志的增加，检测激动剂。
80.权利要求74或75的方法，用于检测作为神经干细胞或神经前体细胞生长、迁移、分化或存活刺激的拮抗剂的调节剂，
其中通过细胞表面神经细胞标志染色的减少或在细胞中检测到增殖标志的减少，检测拮抗剂。
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