CN1886125A - 普伐他汀的纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供纯普伐他汀组合物和纯美伐他汀组合物，以及其制备方法。

Description

普伐他汀的纯化方法

              相关申请的交叉引用

本申请要求2003年11月24日提交的美国临时专利申请60/525,944、2003年12月22日提交的60/532,314和2004年3月18日提交的60/554,165的权益，并且其全部内容引用于此作为参考。

                      发明领域

本发明包括用于从在含水发酵液中进行的反应分离和纯化普伐他汀的方法。本发明特别包括普伐他汀例如通过美伐他汀(compactin)发酵制备的普伐他汀的合成、分离和纯化。

                      发明背景

例如心肌梗死、中风和周围性血管疾病的心血管疾病并发症占美国导致死亡原因的一半。血流中高水平的低密度脂蛋白(LDL)已经被与冠状病变的形成联系起来，冠状病变阻碍血液流动并可能破坏和促进血栓形成。Goodman和Gilman，THE PHARMACOLOGICALBASIS OF THERAPEUTICS，第879页(1996年第9版)。已经证明，降低血浆LDL水平能够减少患有心血管疾病的患者和虽然没有心血管疾病却患有高胆固醇血症的患者的临床发病危险。ScandinavianSimvastatin Survival Study Group，1994；Lipid Research ClinicsProgram，1984a，1984b。

他汀药物是当前可使用的降低患有心血管疾病的患者血流中LDL水平最治疗有效的药物。这类药物尤其包括美伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀和氟伐他汀。他汀药物的作用机制已经详细说明。通过竞争性抑制3-羟基-3-甲基-戊二酰-辅酶A还原酶(“HMG-CoA还原酶”)，他汀类药物在肝脏中破坏胆固醇和其它固醇的合成。HMG-CoA还原酶催化HMG-CoA到甲羟戊酸盐的转化，这在胆固醇的生物合成中为速率控制步骤。因此，HMG-CoA还原酶抑制在肝脏中导致了胆固醇形成速率的降低。

普伐他汀是化合物[1S-[1α(β^*，δ^*)2α，6α，8β(R^*)，8aα]]-1，2，6，7，8，8a-六氢-β，δ，6-三羟基-2-甲基-8-(2-甲基-1-氧代丁氧基)-1-萘-庚酸(CAS登记号：No.81093-370)的通常的药物名称。普伐他汀游离酸形式的分子结构由式(I)表示：

                        式(I)

普伐他汀具有被羧酸基终端并具有两个羟基的烷基链，相对于羧酸基一个羟基在β位另一个羟基在δ位，其中所述羧酸基闭合为内酯。烷基链为分子中与HMG-CoA还原酶结合的部分。所述羧基和8位的羟基易于内酯化。形成内酯的化合物，例如他汀药物，可以游离酸形式或内酯形式存在，或以两者平衡混合物的形式存在。由于化合物的游离酸和内酯形式具有不同极性，所以形成内酯的化合物导致在他汀药物制造期间处理困难。除去杂质纯化一种形式的方法可能会除去另一种形式，由此导致总收率的下降。因此，当处理可内酯化的化合物以将其以高收率分离时，必须非常小心。

与其它他汀药物相比，普伐他汀显示出重要的疗效。普伐他汀在肝脏和小肠中选择性抑制胆固醇合成，然而却基本不影响胆固醇在外围细胞中的合成。Koga，T.等人，Bjochim.Biophys，Acta，1045，115-120(1990)。选择性看起来部分是由于六氢萘环的C-6位置上羟基的存在。美伐他汀的C-6位置为氢原子，洛伐他汀的C-6位置为甲基。与其它更亲脂的同类物相比，普伐他汀透过外围细胞的亲脂性膜的能力较差。Serajuddin et al.，J.Pharm.Sci.，80，830-34(1991)。并且，普伐他汀有限的流动性被认为是其在肝脏和小肠内更具定位作用的原因。

根据专利4,346,227，普伐他汀可使用多种微生物通过美伐他汀的发酵得到：Absidia coerulea IFO 4423孢子、Cunninghamella echinulataIFO 4445、Streptomyces rosochromogenus NRRL 1233、Syncephalastrum racemosum IFO 4814和Syncephalastrumracemosum IFO 4828。在专利4,346,227的实施例1中，发酵后，通过将发酵液酸化到pH为3并使用乙酸乙酯萃取普伐他汀和其它非亲水性有机物，然后用盐水洗涤，从发酵液中分离普伐他汀。通过加入催化量的三氟乙酸，然后用稀碳酸氢钠中和、硫酸钠干燥并蒸干，将普伐他汀游离酸内酯化。残余物通过制备性反相高效液相色谱法(“HPLC”)纯化。

US 5,942,423公开了使用Actinomadura菌株由美伐他汀的微生物羟基化作用产生普伐他汀。在优选实施方案中，普伐他汀使用通常的已知技术，例如沉淀、萃取和色谱法析出、富集、分离或纯化。公开HPLC作为从发酵液中分离普伐他汀的优选方法。

US 5,202,029公开了使用HPLC纯化HMG-CoA还原酶抑制剂的方法。本领域技术人员将认识到，HPLC并非大量制备化合物经济可行的纯化方法，并且与高容量纯化相关的困难可能阻止HPLC的应用。在通过HPLC柱分离杂质后，HMG-CoA还原醇抑制剂作为溶于洗脱液的溶质从HPLC柱洗脱出来。将洗脱液部分蒸发，然后加入水以产生HMG-CoA还原酶抑制剂的结晶。

US 5,616,595公开了通过切向过滤从发酵液中回收不溶于水的化合物的连续方法。发酵液循环通过过滤器，并且由于水份通过过滤器时流失导致发酵液在每次循环后浓度增加。一旦达到所需浓度，发酵液用溶剂浆液化，其中所需化合物在该溶剂中可溶。然后将浆液通过过滤器循环。所需化合物作为滤液收集并随后从滤液中分离。所得化合物任选进一步纯化。专利中指出，该方法适于包括洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀的各种化合物。

当前制造普伐他汀最经济合算的方法为通过美伐他汀在C-6位置上的酶羟基化作用。然而，用于从发酵液中分离他汀药物的已知方法不适于分离纯普伐他汀，特别是不适于从普伐他汀钠盐中分离普伐他汀。并且当前使用的方法不能得到药学上接受的纯度级别，或者为达到高纯度需要经济上不可行的色谱分离。

                      发明概述

本发明包括合成含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀的方法，所述方法包括：

a)纯化含有美伐他汀C的美伐他汀，直到美伐他汀C的量少于约0.16重量％，和

b)利用得自a)的美伐他汀合成普伐他汀。

a)中的纯化步骤可通过结晶法进行，包括：在至少一种水可混溶性的有机溶剂中溶解或悬浮美伐他汀；以水与水可混溶性有机溶剂的体积比为约0.16-约0.4的量向反应混合物中加入水；将反应混合物冷却到美伐他汀结晶的温度；并收集纯美伐他汀晶体。

在另一实施方案中，本发明包括根据上述结晶法制备的美伐他汀，以及含有该美伐他汀的药物制剂。

在一个实施方案中，本发明包括合成含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀的方法，所述方法包括：

a)将包括美伐他汀和美伐他汀C的组合物溶解或悬浮在至少一种水可混溶性有机溶剂中；

b)以水与水可混溶性有机溶剂的体积比为约0.16-约0.4的量向水可混溶性有机溶剂中加入水；

c)冷却反应混合物；

d)分离由c)得到的包括美伐他汀和美伐他汀C的组合物的样品；

e)测量由d)得到的分离样品中美伐他汀C的量；

f)确定e)中美伐他汀C的量是否小于约0.16重量％；和

g)如果e)中测量的美伐他汀C的量为约0.16重量％或更多，通过结晶纯化d)中得到的组合物，直到美伐他汀C的量小于约0.16重量％，并由如此纯化的组合物合成普伐他汀组合物；或

h)如果e)中测量的美伐他汀C的量小于约0.16重量％，由步骤d)的组合物合成普伐他汀组合物。

在另一实施方案中，本发明包括通过含有少于约0.16重量％美伐他汀C的美伐他汀的发酵制备的含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀，以及包括该普伐他汀的药物制剂。

在又一实施方案中，本发明包括通过美伐他汀羟基化合成普伐他汀的方法，其中所述美伐他汀中含有少于约0.16重量％的美伐他汀C。

在一个实施方案中，本发明提供了制备含有普伐他汀钠的组合物的方法，其中所述普伐他汀钠中含有少于约0.1重量％的普伐他汀C。该方法包括从含有足够低量的美伐他汀C的美伐他汀样品开始。美伐他汀样品中美伐他汀C的量优选少于约0.16重量％。该方法包括：

a)得到至少一种美伐他汀批料的至少一种样品；

b)测量a)样品中美伐他汀C的含量；

c)根据步骤b)中的测量，选择含有少于约0.16重量％美伐他汀C的美伐他汀批料；

d)使用c)中选择的批料合成普伐他汀钠。

在另一实施方案中，本发明提供了包括含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀钠的组合物，以及包括该组合物的药物制剂。

在又一实施方案中，本发明提供了含有少于约0.16重量％美伐他汀C的美伐他汀组合物，以及含有该美伐他汀组合物的药物制剂。

在一个实施方案中，本发明提供了纯化普伐他汀的方法，其包括在水中溶解普伐他汀盐以形成普伐他汀水溶液；将普伐他汀水溶液的pH调节到约6.7-约10；将普伐他汀水溶液与吸附柱床接触；用洗脱溶液洗脱普伐他汀；并收集具有纯普伐他汀的级分。水溶液中的普伐他汀盐可通过美伐他汀的羟基化得到。

在另一实施方案中，本发明提供了通过该纯化方法得到的普伐他汀，以及包括该普伐他汀的药物制剂。

                      发明详述

本发明方法生产高纯度普伐他汀，通过：i)使用相对纯的起始物料合成普伐他汀或ii)使用吸附色谱法。因此在本发明的一个方面，高纯度普伐他汀通过使用纯美伐他汀合成，所述纯美伐他汀通过在普伐他汀合成前的至少一个美伐他汀纯化步骤或通过选择纯美伐他汀批料得到。

高纯度和高收率普伐他汀无须多次提取或无须通过HPLC纯化就可得到。因此与先前用于分离普伐他汀的方法相比，本发明更加经济合算并具有实用性，满足现有技术中以制备规模制备普伐他汀的经济可行方法的需要。

此处使用的术语“普伐他汀C”(也用于欧洲药典)指的是化学名称为3S，5S-3，5-二羟基-7-[(1S，2S，6S，8S，8aR)-6-羟基-2-甲基-8-[[(2S)-2-甲基戊酰基]氧]-1，2，6，7，8，8a-六氢萘-1-基]庚酸的普伐他汀杂质。

此处使用的术语“美伐他汀C”指的是化学名称为戊酸2-甲基-1，2，3，7，8，8a-六氢-7-甲基-8-[2-(四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基)乙基]-1-萘酯，[1S-[1α(R^*)，7β，8β(2S^*，4S^*)，8αβ]]的美伐他汀杂质。登记号为159225-32-8。

此处使用的术语“美伐他汀批料”指的是基本上由美伐他汀组成的组合物，其中可含有低浓度的杂质，其中一种杂质可能为美伐他汀C。相对于美伐他汀批料，此处使用的术语“样品”指的是用于测量美伐他汀C浓度而取出的“美伐他汀批料”的一部分。

本发明提供了用于合成含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀组合物的方法，所述方法包括：

a)纯化含有美伐他汀和美伐他汀C的组合物，直到得到含有少于约0.16重量％美伐他汀C的组合物，和

b)使用a)中得到的组合物合成普伐他汀组合物。

a)中的组合物可通过结晶纯化。优选将a)中的组合物结晶，直到其中含有少于约0.15重量％美伐他汀C。b)中合成的普伐他汀组合物优选含有少于约0.04重量％的普伐他汀C，更优选含有少于约0.03重量％的普伐他汀C，并且组合物中最优选包括少于约0.02重量％的普伐他汀C。

结晶法包括将美伐他汀溶解或悬浮在至少一种水可混溶性有机溶剂中以形成反应混合物；以水与水可混溶性有机溶剂的体积比为约0.16-约0.4的量向反应混合物中加入水；将反应混合物冷却到直到美伐他汀结晶的温度；并收集纯美伐他汀晶体。根据需要可任选重复结晶过程，以得到所需美伐他汀纯度。

水可混溶性有机溶剂优选包括C_3-5酮、腈和C_1-4醇中的至少一种。水可混溶性有机溶剂更优选是丙酮、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙腈、甲乙酮或四氢呋喃中的至少一种。水可混溶性有机溶剂最优选是丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇或乙腈中的至少一种。

本领域普通技术人员通过少量试验或无需试验就可容易地确定溶解或悬浮美伐他汀所需的水可混溶性有机溶剂的体积。有机溶剂的体积可根据美伐他汀的量和水可混溶性有机溶剂的沸点而变化。水可混溶性有机溶剂的体积通常在水可混溶性有机溶剂的回流温度下足以溶解或悬浮美伐他汀。水可混溶性有机溶剂的体积优选约为美伐他汀质量的7倍，更优选约为美伐他汀质量的5倍。

加入的水量优选为水可混溶性有机溶剂的约0.17-约0.4倍。在加入水之前，将反应混合物加热到约30℃-约回流温度的温度，更优选加热到约20℃-约25℃的温度。

反应混合物应冷却到美伐他汀结晶的温度。由于在该温度时可以看到结晶，本领域技术人员可容易地确定该合适的温度。美伐他汀反应混合物通常冷却到约0℃-约30℃的温度，并优选冷却到约20℃-约25℃的温度。反应混合物通常以每小时约1℃-约6℃的速率冷却，并优选以每小时约2℃-约4℃的速率冷却。冷却后，反应混合物可任选在再次冷却前加热到约30℃16小时。

然后美伐他汀晶体使用本领域普通技术人员通常已知的任何方法收集。这些方法包括但不限于离心、过滤漏斗、带式过滤或压滤。然后，美伐他汀晶体用水和水可混溶性有机溶剂的溶液洗涤，优选1∶1体积比的水和水可混溶性有机溶剂的溶液。随后收集的美伐他汀晶体使用本领域普通技术人员通常已知的方法干燥。然后该纯美伐他汀用于合成高纯度普伐他汀组合物。

本发明还提供了含有少于约0.16％美伐他汀C的美伐他汀，以及含有该美伐他汀的药物制剂。美伐他汀C优选以少于约0.15重量％的量存在。

本发明另外提供了根据上述方法制备的美伐他汀，以及含有该美伐他汀的药物制剂。

用于得到含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀组合物的另一方法包括测量制造的美伐他汀批料样品中的美伐他汀C。该方法包括选择含有少于约0.16重量％美伐他汀C的那些美伐他汀批料，并通过所述选择的批料合成普伐他汀组合物。若美伐他汀批料中含有约0.16重量％或更多的美伐他汀C，该美伐他汀批料可根据例如如上所述的方法通过结晶纯化。本发明的一个优点是无须通过HPLC纯化就可得到高纯度普伐他汀。

美伐他汀批料样品中美伐他汀C的测量可通过标准分析化学技术进行，例如反相HPLC或其它合适的色谱法。通过美伐他汀的酶羟基化作用进行的普伐他汀钠的合成以及纯普伐他汀的分离描述于US5,942,423和US 4,346,227中，所述专利引用于此作为参考。随后从其分离普伐他汀的发酵或羟基化液可为美伐他汀工业规模发酵中已知的任何含水发酵液。

本发明提供了含有普伐他汀钠和少于约0.1重量％普伐他汀C的组合物，优选少于约0.04重量％的普伐他汀C，更优选少于约0.03重量％的普伐他汀C，并且最优选少于约0.02重量％的普伐他汀C。

本发明提供了包括使用吸附色谱法的用于纯化普伐他汀或普伐他汀盐的方法。该方法包括将普伐他汀或其盐溶于水中以形成水溶液；将水溶液的pH调节到约6.7-约10；将水溶液加入到吸附柱床，用洗脱液洗脱普伐他汀；并收集具有高纯度普伐他汀的级分。根据需要可重复该纯化方法，以得到所需的普伐他汀纯度。

使用的水量应当足以溶解普伐他汀或普伐他汀盐，由于使用的水量可根据普伐他汀或盐的量变化，本领域普通技术人员可容易地确定使用的水量。使用的水量通常为每克普伐他汀盐约8毫升水，优选每克普伐他汀盐约6毫升水。

水溶液的pH可通过本领域已知的任何方法调节。水溶液的pH通常可使用碱溶液调节，例如25％的氢氧化钠，碱溶液的量应足以达到约6.7-约10的pH。

吸附柱床通常包括树脂，例如具有高孔隙度结构的聚合吸附剂，根据其使用环境，其内表面可吸收并随后解吸各种不同物质。在这种情况下，对于极性溶剂例如水聚合吸附剂显示出非极性或憎水行为，并可吸附微溶的有机物质。在一个实施方案中，吸附柱床可为反相硅胶柱。市场上可买到的树脂包括Rohm and Haas，PhiladelphiaPennsylvania制造的那些，例如AMBERLITE^TM XAD^TM 4、XAD^TM 7、XAD^TM 16、XAD^TM 16HP、XAD^TM 761和XAD^TM 1180。其它适于本发明方法的树脂包括Mitsubishi Kasei Corporation，Japan制造和出售的那些，例如DAION^TM HP 10、DAION^TM HP 20、DAION^TM HP 21、DAION^TM HP 30、DAION^TM HP 40、DAION^TM HP 50、DAION^TM SP800、DAION^TM SP 825、DAION^TM SP 850、DAION^TM SP 875、DAION^TMSP 205、DAION^TM SP207、DAION^TM HP1MG和DAION^TM HP2MG。反相硅胶包括Merck & Co.，Whitehouse Station，N.J.制造和出售的那些，例如C-18、RP-2、RP-8和RP-18。

使用洗脱液洗脱普伐他汀或普伐他汀盐可使用本领域普通技术人员已知的方法进行。洗脱溶液通常包括水和丙酮、乙腈、甲醇、乙醇或异丙醇中的至少一种。水和丙酮、乙腈、甲醇、乙醇或异丙醇的体积比优选为约7∶3-约9∶1，更优选为8∶2。然后收集具有高纯度普伐他汀的级分，减少体积并干燥。参见欧洲药典4.5(2003)。

通过这种方法生产的普伐他汀含有少于约0.1重量％的普伐他汀C。普伐他汀优选含有少于约0.1重量％的普伐他汀C，更优选少于约0.03重量％的普伐他汀C，并且最优选少于约0.02重量％的普伐他汀C。

本发明进一步提供了通过本发明方法生产的纯化的普伐他汀和普伐他汀盐，以及含有该普伐他汀和普伐他汀盐的药物制剂。

本发明药物制剂含有例如此处公开的纯化的普伐他汀或美伐他汀。除了活性组分外，本发明药物制剂可含有一种或多种赋形剂。赋形剂以多种目的加入到制剂中。稀释剂增加固态药物组合物的体积，并可以使得含有所述组合物的药物剂型易于被护理人员和患者进行处理。用于固态组合物的稀释剂包括例如微晶纤维素(如Avicel)、微粒型纤维素、乳糖、淀粉、预胶凝淀粉、碳酸钙、硫酸钙、糖、葡萄糖结合剂(dextrates)、糊精、右旋糖、磷酸氢钙二水合物、正磷酸钙、高岭土、碳酸镁、氧化镁、麦芽糖糊精、甘露糖醇、聚甲基丙烯酸酯(如Eudragit)、氯化钾、粉状纤维素、氯化钠、山梨醇和滑石。

压缩为例如片剂的剂型的固态药物组合物中可包括功能包含在压缩后帮助活性组分与其它赋形剂粘合在一起的赋形剂。用于固态药物组合物的粘合剂包括阿拉伯胶、藻酸、卡波姆(如聚羧乙烯)、羧甲基纤维素钠、糊精、乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、氢化植物油、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素(如Klucel)、羟丙基甲基纤维素(如Methocel)、液态葡萄糖、硅酸镁铝、麦芽糖糊精、甲基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯吡咯烷酮(如Kollidon、Plasdone)、预胶凝淀粉、藻酸钠和淀粉。

压缩的固态药物组合物在患者胃中的溶解速率可通过向组合物中加入崩解剂而增加。崩解剂包括藻酸、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠(如Ac-Di-Sol，Primellose)、胶态二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯聚吡咯烷酮(如Kollidon，Polyplasdone)、瓜尔胶、硅酸镁铝、甲基纤维素、微晶纤维素、波拉克林钾、粉状纤维素、预胶凝淀粉、藻酸钠、淀粉羟基乙酸钠(如Explotab)和淀粉。

可加入助流剂以改善非压缩固态组合物的流动性并提高计量精确度。可作为助流剂的赋形剂包括但不限于胶态二氧化硅、三硅酸镁、粉状纤维素、淀粉、滑石和正磷酸钙。

当例如片剂的剂型通过粉状组合物的压缩制成时，组合物受到冲压机和模具的压力。某些赋形剂和活性组分具有粘合到冲压机和模具表面的倾向，这可能导致产品具有凹点或其它表面不规则。润滑剂可加入到组合物中以减少粘合力，并使得产品易于从模具中离开。润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸甘油酯、氢化蓖麻油、氢化植物油、矿物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠、硬脂基富马酸钠、硬脂酸、滑石和硬脂酸锌。

调味剂和增香剂使得剂型对患者来说更加可口。可包括在本发明组合物中的用于药剂的常用调味剂和增香剂包括但不限于：麦芽酚、香草醛、乙基香草醛、薄荷醇、柠檬酸、富马酸、乙基麦芽酚和酒石酸。

固态和液态组合物还可使用药学上接受的着色剂染色，以改善其外观和/或利于病人识别产品和单位剂量水平。

在本发明液态药物组合物中，普伐他汀或美伐他汀与其它任何固态赋形剂一起溶解或悬浮在例如水、植物油、醇、聚乙二醇、丙二醇或甘油的液态载体中。

液态药物组合物中还可含有乳化剂，以使不溶于液态载体中的活性组分或其它赋形剂均匀分散于整个组合物中。可用于本发明液态组合物中的乳化剂包括例如明胶、蛋黄、酪蛋白、胆固醇、阿拉伯胶、黄芪胶、角叉菜胶(chondrus)、果胶、甲基纤维素、卡波姆、十八醇十六醇混合物和鲸蜡醇。

本发明液态药物组合物中还可含有增粘剂，以改善产品的口感和/或涂布胃肠道的内侧。这种增粘剂包括但不限于阿拉伯胶、藻酸、膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钙或钠、十八醇十六醇混合物、甲基纤维素、乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糖糊精、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、碳酸亚丙酯、藻酸丙二醇酯、藻酸钠、淀粉羟基乙酸钠、淀粉、黄芪胶和黄原胶。

还可加入例如山梨醇、糖精、糖精钠、蔗糖、天冬甜素、果糖、甘露糖醇和转化糖的甜味剂以改善味道。

可以以摄取安全的浓度加入例如醇、苯甲酸钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基茴香醚和乙二胺四乙酸的防腐剂和螯合剂以改善储存稳定性。

根据本发明，液相组合物中还可含有例如guconic acid、乳酸、柠檬酸或乙酸、sodium guconate、乳酸钠、柠檬酸钠或乙酸钠的缓冲剂。制剂人员根据经验并考虑到本领域的标准方法和工具书，可以很容易地选择这些赋形剂并确定其用量。

本发明固态组合物包括粉状、粒状、聚集体和压制组合物。药剂包括适于口服、口腔、直肠、肠胃外(包括皮下、肌肉内和静脉内)、吸入和眼部给药的剂型。虽然在所有给定情况下最适当的给药方式取决于需要治疗疾病的特性和严重程度，但是本发明最优选的给药路线为口服给药。这种剂型可方便的以单位剂型存在并可通过药物领域任何公知的方法制备。

剂型包括例如片剂、粉剂、胶囊、栓剂、袋剂、锭剂(troches)和糖锭(losenges)的固体剂型，以及液态糖浆、悬浮剂和酏剂。

本发明剂型可为在硬或软壳内含有组合物的胶囊，组合物优选为本发明的粉状或粒状固体组合物。外壳可由明胶制成，并任选含有例如甘油和山梨醇的增塑剂和遮光剂或着色剂。

活性组分和赋形剂可根据本领域公知的方法配制成组合物和剂型。

用于片剂或胶囊装料的组合物可通过湿法成粒制备。在湿法成粒中，将部分或全部粉状活性组分和赋形剂混合，并进一步在液体的存在下混合，这使得粉末团聚成颗粒，其中所述液体通常为水。将颗粒过筛和/或研磨，干燥并再次过筛和/或研磨到所需粒经大小。然后可将颗粒压片，或在压片之前可以加入例如助流剂和/或润滑剂的其它赋形剂。

片剂组合物通常可通过干混合制备。例如，混合的活性组分和赋形剂的组合物可压制成小块或薄板，然后粉碎成压制颗粒。压制颗粒可随后压缩成片剂。

作为干法成粒的代替，混合的组合物可使用直接压制技术直接压制成压制剂型。直接压制产生没有颗粒的更均匀的片剂。特别适于直接压片的赋形剂包括微晶纤维素、喷雾干燥乳糖、二水合磷酸二钙和胶态二氧化硅。在直接压片中适当使用这些和其它赋形剂为本领域技术人员特别是直接压片领域技术人员所公知。

本发明胶囊装料可包括在上述片剂中所述的任何混合物和颗粒，然而它们不进行最后的压片步骤。

PLAVIX的剂型可用作指导。PLAVIX经口服给药。PLAVIX推荐的口服剂量为75毫克每天每次。

已经描述了本发明特定的优选实施方案，考虑到说明书的描述，其它实施方案将对本领域技术人员显而易见。本发明进一步参考以下实施例说明，以下实施例详细公开了组合物的制备和本发明的有用方法。在不离开本发明范围的前提下，对材料和方法的多种改变对本领域普通技术人员来说是显而易见的。

                       实施例

普伐他汀的发酵和回收通过本领域技术人员所公知的方法进行，例如US 6,444,452中所述的方法，将其内容引用于此。

实施例1：普伐他汀的合成

使用具有流动相(a)用25％氢氧化钠调节pH的0.1％磷酸和(b)蒸馏水和乙腈(1∶9)混合物的Waters柱RP18(5米，2.1×150毫米)，通过HPLC分析起始美伐他汀。使用240纳米的检测波长，所述色谱柱在40℃运行50分钟。美伐他汀的量使用10毫克美伐他汀和10毫克美伐他汀铵盐的标准溶液确定。

表1：HPLC美伐他汀分析
			时间(分钟)	溶液(a)％	溶液(b)％
0	70	30
			7	70	30
18	55	45
			33	30	70
42	10	90
			42.1	70	30
50	70	30

以0.4毫克/毫升浓度制备样品，并以峰面积和标准化的样品相比确定杂质分布。对于该样品，杂质美伐他汀C的量为0.25重量％。

然后将纯美伐他汀发酵成普伐他汀，并根据US 6,444,452中所述的方法分离。通过HPLC分析普伐他汀盐，确定杂质普伐他汀C以0.12重量％的量存在。

实施例2：普伐他汀的纯化

将得自实施例1的普伐他汀盐(90克)溶于水(540毫升)，然后用25％氢氧化钠将pH调节到6.7-10。将普伐他汀盐溶液通过吸附树脂床(550毫升吸附树脂XAD^TM 1180)。柱直径为3.2厘米并且施加的流速为90毫升/小时。在吸附普伐他汀盐后，将柱子用4升的水：丙酮(8∶2)洗脱，并合并含有普伐他汀的级分(1760毫升)，减少体积并分离普伐他汀盐(64.8克)。如欧洲药典所述通过HPLC分析杂质，确定普伐他汀C以0.04重量％的量存在。

实施例3：美伐他汀的纯化

具有0.2重量％美伐他汀C的美伐他汀样品通过结晶纯化。美伐他汀样品(30克)悬浮在丙酮(5倍体积)中并加热至回流。向加热的悬浮液中加入水(1.25倍体积)，并以2℃/小时的冷却速度将溶液冷却到20℃。在冷却后，形成晶体并将晶体在20℃搅拌2小时，随后通过过滤收集，用水∶丙酮(1∶1)溶液洗涤并干燥。干燥后收集结晶的美伐他汀(28.2克)，并如欧洲药典所述通过HPLC分析。结晶的美伐他汀中含有0.15重量％的美伐他汀C。

实施例4：高纯度普伐他汀的合成

含有0.2重量％美伐他汀C的美伐他汀样品通过结晶纯化。美伐他汀样品(30克)悬浮在甲醇(5倍体积)中并加热至回流。向加热的悬浮液中加入水(1.5倍体积)，并以2℃/小时的冷却速度将溶液冷却到20℃。然后将溶液加热到30℃并搅拌16小时。冷却后，通过过滤收集形成的结晶，用水∶甲醇(1∶1)溶液洗涤并干燥。干燥后收集结晶美伐他汀(27.2克)并通过HPLC分析。结晶美伐他汀中含有0.15重量％的美伐他汀C。

然后将纯美伐他汀发酵成普伐他汀，并根据US 6,444,452中所述的方法分离普伐他汀。可达到的普伐他汀C浓度为0.02重量％。

实施例5：高纯度普伐他汀的合成

含有0.2重量％美伐他汀C的美伐他汀样品通过结晶纯化。美伐他汀样品(30克)悬浮在异丙醇(5倍体积)中并加热至回流。向加热的悬浮液中加入水(1.5倍体积)，并以2℃/小时的冷却速度将溶液冷却到25℃。冷却后，通过过滤收集形成的结晶，用水∶异丙醇(1∶1)溶液洗涤并干燥。干燥后收集结晶美伐他汀(22.9克)并通过HPLC分析。结晶美伐他汀中含有0.16重量％的美伐他汀C。

然后将纯美伐他汀发酵成普伐他汀，并根据US 6,444,452中所述的方法分离普伐他汀。可达到的普伐他汀C浓度为0.03重量％。

实施例6：高纯度普伐他汀的合成

含有0.2重量％美伐他汀C的美伐他汀样品通过结晶纯化。美伐他汀样品(30克)悬浮在乙腈(5倍体积)中并加热至回流。向加热的悬浮液中加入水(1.5倍体积)，并以2℃/小时的冷却速度将溶液冷却到25℃。冷却后，通过过滤收集形成的结晶，用水∶乙腈(1∶1)溶液洗涤并干燥。干燥后收集结晶美伐他汀(24.2克)并通过HPLC分析。结晶美伐他汀中含有0.15重量％的美伐他汀C。

然后将纯美伐他汀发酵成普伐他汀，并根据US 6,444,452中所述的方法分离普伐他汀。可达到的普伐他汀C浓度为0.02重量％。

Claims (48)

1.包括普伐他汀和少于约0.1重量％普伐他汀C的组合物。

2.权利要求1的组合物，其中所述组合物包括少于约0.04重量％的普伐他汀C。

3.权利要求2的组合物，其中所述组合物包括少于约0.03重量％的普伐他汀C。

4.权利要求3的组合物，其中所述组合物包括少于约0.02重量％的普伐他汀C。

5.包括美伐他汀和少于约0.16重量％美伐他汀C的组合物。

6.权利要求5的组合物，其中所述组合物包括少于约0.15重量％的美伐他汀C。

7.一种用于合成含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀的方法，包括：

a)得到包括美伐他汀和美伐他汀C的至少一种批料的至少一种样品；

b)测量a)中每个样品中美伐他汀C的含量；

c)选择含有少于约0.16％美伐他汀C的美伐他汀批料；和

d)使用c)中选择的批料合成所述普伐他汀组合物。

8.权利要求7的方法，其中步骤c)的美伐他汀批料包括少于约0.15重量％的美伐他汀C。

9.一种用于合成含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀组合物的方法，包括：

a)纯化含有美伐他汀C和美伐他汀的组合物，直到得到含有少于约0.16重量％的美伐他汀C的组合物，和

b)利用得自a)的组合物合成普伐他汀组合物。

10.权利要求9的方法，其中步骤a)中的纯化包括：

a)将含有美伐他汀C和美伐他汀的组合物溶解或悬浮在至少一种水可混溶性有机溶剂中；

b)以水与水可混溶性有机溶剂的比例为约0.16-约0.4的量加入水；

c)冷却；和

d)回收美伐他汀和少于约0.16重量％的美伐他汀C的组合物。

11.权利要求9和10中任一项的方法，其中纯化的组合物含有少于约0.15重量％的美伐他汀C。

12.一种合成含有少于约0.1重量％普伐他汀C的普伐他汀组合物的方法，包括：

a)将含有美伐他汀C的组合物溶解或悬浮在至少一种水可混溶性有机溶剂中；

b)以水与水可混溶性有机溶剂的比例为约0.16-约0.4的量加入水；

c)冷却；

d)分离由c)得到的含有美伐他汀和美伐他汀C的组合物的样品；

e)测量由d)得到的分离样品中美伐他汀C的量；

f)确定e)中美伐他汀C的量是否小于约0.16重量％；和

g)如果e)中测量的美伐他汀C的量为约0.16重量％或更多，通过结晶纯化d)中得到的组合物，直到美伐他汀C的量小于约0.16重量％，并由如此纯化的组合物合成普伐他汀组合物；或

h)如果e)中测量的美伐他汀C的量小于约0.16重量％，由步骤d)的组合物合成普伐他汀组合物。

13.权利要求12的方法，其中f)和h)中美伐他汀C的量小于约0.15重量％。

14.权利要求12的方法，其中g)中美伐他汀C的量为约0.15重量％或更多。

15.权利要求7、9和12中任意一项的方法，其中普伐他汀组合物通过美伐他汀的羟基化或发酵合成。

16.权利要求10和12中任意一项的方法，其中水可混溶性溶剂包括C_3-5酮、腈和C_1-4醇。

17.权利要求16的方法，其中水可混溶性有机溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙腈、甲乙酮或四氢呋喃中的至少一种。

18.权利要求10和12中任意一项的方法，其中在步骤b)中，以水与水可混溶性有机溶剂的比例为约0.17-约0.4的量加入水。

19.权利要求10和12中任意一项的方法，其中步骤a)在约30℃至约水可混溶性有机溶剂回流温度的温度进行。

20.权利要求10和12中任意一项的方法，其中步骤a)中水可混溶性有机溶剂的量为美伐他汀质量的约5倍。

21.权利要求10和12中任意一项的方法，其中在步骤c)中冷却到约0℃-约30℃的温度。

22.权利要求21的方法，其中在步骤c)中冷却到约15℃-约30℃的温度。

23.权利要求22的方法，其中在步骤c)中冷却到约20℃-约25℃的温度。

24.权利要求10和12中任意一项的方法，其中在步骤c)中的冷却以约1℃/小时至约6℃/小时的速率进行。

25.权利要求24的方法，其中在步骤c)中的冷却以约2℃/小时至约4℃/小时的速率进行。

26.权利要求10和12中任意一项的方法，其在步骤d)之前另外包括加热到约30℃的温度16小时，然后再次冷却。

27.权利要求10和12中任意一项的方法，其中另外包括干燥d)中得到的组合物。

28.一种纯化普伐他汀的方法，包括：

a)将普伐他汀或普伐他汀钠溶解在水中以形成水溶液；

b)将水溶液的pH调节到约6.7-约10；

c)将水溶液加入到吸附柱床；

d)用洗脱液洗脱普伐他汀；和

e)收集具有纯普伐他汀的级分。

29.权利要求28的方法，其中纯化的普伐他汀中含有少于约0.1％的普伐他汀C

30.权利要求28的方法，其中用于溶解普伐他汀钠的水的数量为每克盐约6毫升水至每克盐8毫升水。

31.权利要求30的方法，其中用于溶解普伐他汀钠的水的数量为每克盐约6毫升水。

32.权利要求28的方法，其中水溶液的pH可使用足量的碱溶液调节，直到达到约6.7-约10的pH。

33.权利要求28的方法，其中用于调节pH的碱溶液为氢氧化钠。

34.权利要求28的方法，其中吸附柱床包括树脂或反相硅胶。

35.权利要求28的方法，其中洗脱液包括水以及丙酮、乙腈、甲醇、乙醇或异丙醇中的至少一种。

36.权利要求35的方法，其中水与丙酮、乙腈、甲醇、乙醇或异丙醇的体积比例为约7∶3-约9∶1.

37.权利要求36的方法，其中水与丙酮、乙腈、甲醇、乙醇或异丙醇的体积比为约8∶2。

38.权利要求7、9、12和29中任意一项的方法，其中普伐他汀组合物包括少于约0.04重量％的普伐他汀C。

39.权利要求38的方法，其中普伐他汀组合物包括少于约0.03重量％的普伐他汀C。

40.权利要求38的方法，其中普伐他汀组合物包括少于约0.02重量％的普伐他汀C。

41.根据权利要求7、9、12和28中任意一项方法制备的普伐他汀组合物。

42.根据权利要求10的方法制备的美伐他汀。

43.包括权利要求1、2、3、4和41中任意一项的普伐他汀组合物和药学上接受的载体的药物组合物。

44.包括权利要求5、6和42中任意一项的美伐他汀组合物和药学上接受的载体的药物组合物。

45.含有少于约0.16％美伐他汀C的美伐他汀组合物在制造含有少于约0.1％普伐他汀C的普伐他汀组合物中的应用。

46.权利要求45的应用，其中制造的普伐他汀组合物含有少于约0.04重量％的普伐他汀C。

47.权利要求46的应用，其中制造的普伐他汀组合物含有少于约0.03重量％的普伐他汀C。

48.权利要求47的应用，其中制造的普伐他汀组合物含有少于约0.02重量％的普伐他汀C。