CN1879615B - 抗肿瘤的协同药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及含有下述通式(I)的化合物和肿瘤化疗药物如顺铂和/或5-氟脲嘧啶的具有协同抗肿瘤作用的药物组合物；本发明还涉及该通式化合物及其可药用盐的制药用途：

Description

抗肿瘤的协同药物组合物

技术领域

本发明涉及一种具有协同作用的抗肿瘤药物组合物，具体涉及一种含有黄酮类化合物和肿瘤化疗药物的具有协同作用的抗肿瘤药物组合物。本发明还涉及该黄酮类化合物的制药用途。

背景技术

化疗是“化学药物治疗”的简称。目前化疗的概念一般被理解为“肿瘤的化疗”，即使用抗肿瘤化学药物，采用某些措施和方案治疗肿瘤的方法。然而，常见的化疗药物如长春新碱、顺铂、甲氨喋呤、环磷酰胺、5-氟脲嘧啶(5-Fu)等可产生注射局部疼痛、静脉栓塞、骨髓抑制、胃肠道反应、外周神经病变等毒副作用。

为减少化疗药物的毒副作用、提高疗效、减少肿瘤复发和避免抗药性的产生，选择不同的化疗药物联合使用，已成为肿瘤化疗的重要手段之一。例如，临床上将顺铂与5-Fu、博来霉素或表鬼臼毒素等联合使用治疗食管癌。

“协同作用”(Synergistic Effect)是指两种药物联合使用时所产生的疗效大于相同剂量时两药单独使用时的疗效之和。根据中效原理(Joseph R.Bertino，Ting-Chao Chou，Chemotherapy：Synergism and Antagonism，Encyclopedia of Cancer；1996，Academic Press，Inc.)，两药联合使用时的作用效果可通过“联合指数”(Combination Index，CI)进行判断：

$\mathrm{CI}=\frac{D1}{\left(\mathrm{Dx}\right)1}+\frac{D2}{\left(\mathrm{Dx}\right)2}+\mathrm{\α}\×\frac{D1\×D2}{\left(\mathrm{Dx}\right)1\×\left(\mathrm{Dx}\right)2}$

其中，D1、D2分别为药物1和药物2单独使用时，细胞增殖抑制率达到x％时的药物浓度；(Dx)1、(Dx)2为达到相同细胞增殖抑制率时混和物中药物1和药物2的浓度。

对相互独立的两种药物α＝0；而互不独立的药物α＝1。

当CI＜1时，为协同作用，CI＝1时，为相加作用；CI＞1时，为拮抗作用。

根据美国国立癌症研究所在1983年确立的抗肿瘤物质筛选的动物试验模式，用于小鼠体内移植瘤株的有：小鼠黑色素细胞瘤细胞株B16，小鼠纤维肉瘤细胞株M5076等同体肿瘤(实体肿瘤)瘤株；小鼠白血病细胞株L1210等血液系肿瘤瘤株。故本领域的普通技术人员多采用选用某种肿瘤瘤株来作为针对移植肿瘤的动物体内试验模式：如选用小鼠黑色素细胞瘤细胞株B16的小鼠动物试验来作为针对实体肿瘤的动物体内试验模式；选用小鼠白血病细胞株L1210的小鼠动物试验来作为针对血液系肿瘤的动物体内试验模式。通过结合体内外试验结果来判断待测物质是否具有抗肿瘤作用。

中药黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)首载于《神农本草经》，又名黄文、无芩等。其药理功效味苦、性寒，功能泄实火、除湿热，具有抑菌、除热、解毒、镇静、降压、利胆等作用。

黄芩甙及黄芩甙元是黄芩根里所含的主要黄酮类化合物，两者具有相同的黄酮母体结构：

黄芩甙元是黄芩的主要活性成分之一，分子式C₁₅H₁₀O₅，分子量270.25，可由黄芩甙水解而得。其化学结构为：黄酮母体结构上5、6、7三个氢基(-H)被羟基(-OH)取代。

黄芩甙的化学结构为：黄酮母体结构上5、6二个氢基(-H)被羟基(-OH)取代，7位上羟基(-OH)与葡萄糖醛酸缩合，即黄芩甙元-7-O-葡萄糖醛酸，分子式C₁₂H₁₈O₁₁，分子量446.37。

近年来有文献报道，黄芩甙和黄芩甙元对体外培养的乳腺癌细胞的生长具有抑制作用(So F.V.，et al.Cancer Lett.，112：127-133，1997)。也有专利文献报道黄芩甙及黄芩甙元对食道癌和胃癌细胞有很明显的杀伤效应(CN 03109933.5；CN 03109942.4)。迄今未见有关黄芩甙元和/或黄芩甙对肿瘤化疗药物具有协同作用的报道。

发明内容

本发明的问世部分是基于这样一个发现：黄芩甙元和/或黄芩甙对顺铂或5-氟脲嘧啶具有协同作用，可明显提高后者对肿瘤细胞的杀伤活性；含有黄芩甙元和/或黄芩甙与顺铂和/或5-氟脲嘧啶的药物组合物具有增强的抗肿瘤作用，并且比仅含单一的黄芩甙元、黄芩甙、顺铂或5-氟脲嘧啶的药物组合物更有效。

本发明的一个方面是涉及一种具有协同抗肿瘤作用的药物组合物，该组合物包括顺铂和下式(I)的化合物，其中所述顺铂和式(I)化合物的摩尔浓度比为1∶2.5至1∶10：

其中，R代表氢或葡萄糖醛酸基。

其中所述肿瘤为实体肿瘤；优选为黑色素瘤。

在本发明的一个优选例中，当R代表氢时，所述化合物为黄芩甙元，所述顺铂和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶2.5至1∶10；

在本发明的另一优选例中，当R代表葡萄糖醛酸基时，所述化合物为黄芩甙，所述顺铂和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶5至1∶10。

本发明的另一方面是涉及上述式(I)的化合物及其可药用盐在制备对顺铂具有协同作用的抗肿瘤药物中的用途；其中所述肿瘤选自肝癌、大肠癌、肺癌、胃癌或食道癌。

在本发明的一个优选例中，当R代表氢时，所述化合物为黄芩甙元，所述顺铂和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶1至1∶10：

当所述肿瘤为胃癌时，所述顺铂和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶1至1∶10；

当所述肿瘤为肝癌、大肠癌、肺癌或食道癌时，所述顺铂和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶2.5至1∶10。

在本发明的另一优选例中，当R代表葡萄糖醛酸基时，所述化合物为黄芩甙，所述顺铂和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶2.5至1∶10：

当所述肿瘤为胃癌时，所述顺铂和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶2.5至1∶10；

当所述肿瘤为大肠癌或食道癌时，所述顺铂和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶5至1∶10；

当所述肿瘤为肝癌或肺癌时，所述顺铂和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶7.5至1∶10。

本发明的另一方面是涉及一种具有协同抗肿瘤作用的药物组合物，该组合物包括5-氟脲嘧啶和上述式(I)的化合物，其中所述5-氟脲嘧啶和式(I)化合物的摩尔浓度比为1∶2至2∶1。

其中所述肿瘤为实体肿瘤；优选为黑色素瘤。

在本发明的一个优选例中，当R代表氢时，所述化合物为黄芩甙元，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶2至2∶1；

在本发明的另一优选例中，当R代表葡萄糖醛酸基时，所述化合物为黄芩甙，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶1至1∶2。

本发明的另一方面是涉及上述式(I)的化合物及其可药用盐在制备对5-氟脲嘧啶具有协同作用的抗肿瘤药物中的用途；其中所述肿瘤选自肝癌、大肠癌、胃癌、食道癌或乳腺癌。

在本发明的一个优选例中，当R代表氢时，所述化合物为黄芩甙元，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶2至2∶1：

当所述肿瘤为肝癌、大肠癌、胃癌、食道癌或乳腺癌时，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶2至2∶1。

在本发明的另一优选例中，当R代表葡萄糖醛酸基时，所述化合物为黄芩甙，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶1至1∶4：

当所述肿瘤为大肠癌、胃癌、食道癌或乳腺癌时，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶1至1∶2；

当所述肿瘤为肝癌时，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶2至1∶4。

可用于本发明的肿瘤化疗药物包括，但不限于：顺铂(cisplatin)、丝裂霉素(mitomycinC)、依立替康(Irinotecan)、多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、表鬼臼素(podophyllotoxin)、长春新碱(vincristine，VCR)、普卡霉素(plicamycin)、柔红霉素(daunorubicin，DNR)、放线菌素(dactinomycin，DACT)、阿霉素(doxorubicin，adriamycin，ADM)、5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil)、激素、激素拮抗剂以及细胞因子(如白介素-2和β转化生长因子)。

本发明的具体实施方式将在以下部分阐述。本发明的其他特点、目的和优势将通过以下阐述得以彰显。

具体实施方式：

本发明人研究发现，当本发明的通式(I)的黄酮类化合物与肿瘤化疗药物同时给药时，可明显提高化疗药物的抗肿瘤活性，具有协同作用。从而可减少化疗药物的用量，降低其毒副作用。因此，本发明的通式(I)的黄酮类化合物可用于制备对肿瘤化疗药物具有协同作用的药物。

本发明的通式(I)的黄酮类化合物其中有些是自然存在的且可以从植物中分离得到。例如，黄芩甙元和黄芩甙可从黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)根中提取得到。本发明的化合物也可通过商业途径获得或者通过本领域的普通合成技术制得。用于分离或合成本发明的黄酮类化合物的化学品包括溶剂、试剂、催化剂、保护基团试剂、去保护基团试剂。所述分离与合成还可以包括加入或去除适宜的保护基团以最终得到所需黄酮类化合物的步骤。用于制备本发明的黄酮类化合物的合成化学转化和基团保护(去保护)的方法对本领域的普通技术人员来说是公知的，可参见R.Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH Publishers(1989)；T.W.Green and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rdEd.，John Wiley and Sons(1999)，L.Fieser and M.Fieser，Fieser and Fieser’s Reagents forOrganic Synthesis，John Wiley and Sons(1994)；and L.Paquette，ed.，Encyclopedia of Reagentsfor Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1995)及其后续著作。

本发明的黄酮类化合物的可药用盐包括各种无机或有机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、扁桃酸盐和草酸盐；各种无机或有机碱盐如氢氧化钠、三羟甲基氨基甲烷(TRIS，tromethane)和N-甲基-葡萄糖胺等。

可用于本发明的化疗药物已在《发明内容》部分做了阐述。亦可参见Isselbacher et al.，Harrison’s Principles of Internal Medicine 13^th，McGraw-Hill，1994.。这些化疗药物均可通过商业途径获得或者经由本领域的公知技术制得。选择适宜的化疗药物的标准是基于，例如，肿瘤类型、肿瘤标记以及患者的年龄和一般健康状况。

本发明的黄酮类化合物可以和肿瘤化疗药物同时给药或者非同时给药；可通过肠道或者非肠道途径给药。肠道给药制剂包括丸剂、颗粒剂、胶囊剂、悬浮液或溶液。非肠道给药制剂包括注射剂、霜剂、膏剂、贴剂或喷雾剂。非肠道给药途径包括皮下、皮内、动脉、静脉、肌肉、关节、滑液、胸骨、鞘内、病灶内、颅内注射或滴注。其它给药途径可包括局部、直肠、经鼻、经颊、阴道、舌下、粘膜、气管或尿道。此外，本发明的黄酮类化合物还可以通过气雾吸入或植入蓄积或针刺等方式给药。

本发明的黄酮类化合物的肠道给药制剂包括但不限于胶囊、片剂、乳剂、水悬浮剂、胶体液、溶液、微胶囊、丸剂、锭剂、颗粒剂、粉剂。常用于片剂的可药用载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还会加入硬脂酸镁等润滑剂。常用于胶囊剂的可药用载体包括乳糖和干玉米淀粉。当制成口服水悬浮剂和/或乳剂时，黄酮类化合物可悬浮或溶解于油相里并与乳化剂或悬浮剂相结合。如果需要，也可以加入一些甜味剂和/或香味剂和/或增色剂。

本发明的黄酮类化合物药可被制成无菌注射剂，如无菌水相或油相悬浮液。该悬浮液可按本领域的常规方法，使用适宜的分散剂或湿润剂(如Tween 80)及悬浮剂等制得。其还可以是在可肠道外给药的无毒稀释剂或溶剂中的水溶液或悬浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。相关的可用载体或溶剂包括甘露醇、水、林格氏液、等渗氯化钠等。另外，无菌的固定油(bland fixed oil)常被作为溶剂或悬浮剂的媒介，因而包括合成甘油单酯或甘油二酯在内的多种柔和的固定油均适用。脂肪酸，如十八烯酸及其甘油酯衍生物(如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙烯基衍生物)等可用于制备所述注射剂。所述油溶液或悬浮液还可包含一种长链的乙醇稀释剂或分散剂或羧甲基纤维素或类似的其他分散剂，此类物质常用于制备可药用乳剂和/或悬浮剂。其它一些制剂常用的表面活性剂如Tweens或Spans和/或其他类似的乳化剂或生物利用度促进剂等也同样可用于制备本制剂。

本发明的黄酮类化合物可制成栓剂通过直肠给药，方法是将黄酮类化合物与适宜的非刺激性赋形剂混合，后者在室温下为固体而在直肠温度下为液体，因而该栓剂可溶解于直肠中并释放出活性成份。此类赋形剂包括但不限于：可可油、蜂蜡和聚乙烯。本发明的黄酮类化合物的局部给药制剂(如油膏)可直接用于患处。此类局部制剂含有活性成份及可药用载体，后者包括但不限于矿物油、液体石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯或聚氧丙稀化合物、乳化腊或水。另外，本发明的黄酮类化合物还可制成洗剂或油剂。适用的载体包括但不限于：矿物油、三梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸腊酯、十六烷醇、2-十八烷醇、苯甲基乙醇或水。本发明的黄酮类化合物还可制成灌肠剂等用于直肠局部给药。局部透皮贴剂亦在本发明的保护范围之内。本发明的黄酮类化合物亦可经鼻喷雾或者吸入给药，即按本领域的常规方法，使用苯甲基乙醇或其他防腐剂、吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他增溶剂或分散剂制得盐溶液。

本发明的黄酮类化合物还可通过植入给药。采用植入给药方式可达到在给药对象体内持续，定时释放本发明的黄酮类化合物的效果。另外，植入给药还能在局部组织和器官定位给药(Negrin et al.，Biomaterials 22(6)：563，2001)定时释放技术亦可用于本发明黄酮类化合物的给药中，如基于聚合体技术的定时释药胶囊、缓释技术和制剂包裹技术(如聚合体和脂质体)等。

贴剂同样包括在本发明的保护范围之内。其包括基层(如聚合体、布、纱和绷带)和本发明的药物组合物。基层的一边可设有一保护层以防止活性成份的流出。所述贴剂还可含有一用于固定的粘合剂，后者可以是一种自然的或者合成的物质，当其与给药对象的皮肤接触时可暂时粘附于皮肤上。粘合剂可以是防水的。

“可药用载体”不会破坏本发明的黄酮类化合物的药学活性，同时其有效用量，即能够起到药物载体作用时的用量对人体无毒。“可药用载体”包括但不限于：离子交换材料、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物传递系统(SEDDS)如d-α-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯、吐温(Tweens)或其他类似聚合介质等药物制剂用的表面活化剂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合物、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二纳、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、硅酸镁等。聚乙烯吡咯酮、纤维素物质、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚丙稀酸酯、乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊毛酯、环糊精如α-、β-及γ-环糊精或其经化学修饰的衍生物如2-和3-羟丙基-β-环糊精等羟烷基环糊精或其他可溶性衍生物等均可用于促进本发明的黄酮类化合物的药物传递。

本发明的黄酮类化合物与顺铂或5-氟脲嘧啶协同作用的有效范围(摩尔浓度比)已通过合适的体外试验(in vitro assay)得以验证。作为两种常用的肿瘤化疗药物，顺铂和5-氟脲嘧啶的常规用量及给药途径如下：顺铂20-150mg/日，静脉滴注或动静脉灌注；5-氟脲嘧啶500-1000mg/日，静脉滴注或动静脉灌注；5-氟脲嘧啶200-300mg/日，口服。尚未见有关黄芩甙元和黄芩甙临床抗肿瘤剂量及其适宜的给药途径的文献报道。

本领域的普通技术人员应知如何通过本领域的常规技术，按照本发明公开的摩尔浓度比，将黄芩甙元和黄芩甙、顺铂或5-氟脲嘧啶混合在一起，制备本发明的具有协同作用的抗肿瘤药物组合物。

为了便于理解本发明，特列举以下实施例。其作用应被理解为是对本发明的诠释而绝非对本发明的任何形式的限制。

实施例1

黄芩甙元或黄芩甙联合顺铂(CDDP)在人肿瘤细胞株体外生长抑制的协同作用

将各类人肿瘤细胞株细胞悬浮在含有10％(小)牛胎儿血清的细胞培养液中，以5×10³/孔播种于96孔细胞培养盘。在培养24小时后，加入黄芩甙元(昆明同持医药有限公司产品)，黄芩甙(四川超人植化开发有限公司)，并与顺铂(Sigma公司产品)以不同浓度比混合加入培养液里。培养72小时后作MTT测定。用四氮唑盐(MTT)法染色并计算单用及联用黄芩甙元或黄芩甙和顺铂时对细胞增殖的抑制率，用CalcuSyn统计软件及联合用药指数值(CI)法进行数据分析。当CI＜1时，为协同作用，CI＝1时，为相加作用；CI＞1时，为拮抗作用。

单独用药和联合用药时的细胞增殖抑制率，以及联合用药指数值见表1-5

各类人肿瘤细胞株为：

人肝癌细胞株    HepG2   表1

人大肠          HCT116  表2

人肺癌细胞株    A549    表3

人胃癌细胞株    MKN45   表4

人食道癌细胞株  TE2     表5

表1

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率(％)	联合用药系数值(CI)
				黄元2.5		0.2
黄元5		17.43±1.2
				黄元10		40.5±2
黄元20		59.8±3
				黄元40		91±2.5
黄甙5		0.1

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率(％)	联合用药系数值(CI)
				黄甙10		5±0.2
黄甙20		25.2±2
				黄甙40		75.2±3
Pt 1		2±0.5
				Pt 2		30±3
Pt 4		33±3
				Pt 8		77.5±2.5
	Pt 1+黄元2.5	5±2	1.32
					Pt 2+黄元5	37.8±3	0.96
	Pt 4+黄元10	95±2.7	0.47
					Pt 1+黄元5	21.2±2	0.78
	Pt 2+黄元10	42.9±3	0.98
					Pt 4+黄元20	85±2	0.98
	Pt 1+黄元10	35±3	0.9
					Pt 2+黄元20	73.3±1.2	0.98
	Pt 4+黄元40	95.5±2	0.88
					Pt 1+黄甙7.5	10±1.5	1.07
	Pt 2+黄甙15	59.2±2.5	0.875
					Pt 4+黄甙30	92±3	0.85
	Pt 1+黄甙10	11.2±2	1.2
					Pt 2+黄甙20	65±3	0.958

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率(％)	联合用药系数值(CI)
					Pt 4+黄甙40	95±2	0.9

表2

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元5		24.43±1.5
黄元10		35.933±3
				黄元20		57.02±2
黄元40		72±1
				黄甙5		27.62±2
黄甙10		33.25±2
				黄甙20		37.65±3
黄甙40		68.7±3
				Pt 1		5±0.5
Pt 2		27.33±2
				Pt 4		61.18±3
	Pt 2+黄元5	47.52±2	0.99
					Pt 4+黄元10	83.9±3	0.766
	Pt 8+黄元20	97.5±2	0.6
					Pt 1+黄元5	29.8±3	1.17
	Pt 2+黄元10	60±3	0.95
					Pt 4+黄元20	90±3	0.658
	Pt 1+黄元10	58.2±1.5	0.729

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
					Pt 2黄元20	75±2	0.83
	Pt 4+黄元40	98	0.3
					Pt 1+黄甙5	28.75±2	1.1
	Pt 2+黄甙10	62.9±3.2	0.736
					Pt 4+黄甙20	88±2	0.626
	Pt 1+黄甙10	44.32±3	0.95
					Pt 2+黄甙20	67.76±1.2	0.85
	Pt 4+黄甙40	95±2	0.42

表3

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元5		1±0.5
黄元10		17.43±3
				黄元20		38±2
黄元40		91.2±1
				黄甙5		5±1
黄甙10		10.3±2
				黄甙20		35.8±2
黄甙40		62.1±3
				Pt 1		31±2.5
Pt 2		42.3±3
				Pt 4		49±3

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
					Pt 1+黄元2.5	15±2	5.8
	Pt 2+黄元5	52.5±3	0.661
					Pt 4+黄元10	66±3	0.677
	Pt 1+黄元5	19±1	3.7
					Pt 2+黄元10	59.5±2.5	0.69
	Pt 4+黄元20	90.2±2	0.515
					Pt 1+黄元10	67±3	0.47
	Pt 2+黄元20	85±2	0.6
					Pt 4+黄元40	95±2	0.79
	Pt 1+黄甙7.5	26.7±2	2
					Pt 2+黄甙15	55.7±3.1	0.762
	Pt 4+黄甙30	78±2	0.578
					Pt 1+黄甙10	29.8±2.1	1.15
	Pt 2+黄甙20	61.9±2.1	0.7025
					Pt 4+黄甙40	82.7±3	0.6

表4

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元1		5±0.5
黄元2		17.6±2
				黄元4		21.5±2
黄元8		43±3

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元16		51.25±3
黄甙2.5		0.01
				黄甙5		23.6±2
黄甙10		40.25±3
				黄甙20		47.87±3
黄甙40		82.78±3
				Pt 1		5±0.5
Pt 2		29.67±3
				Pt 4		43.3±3
Pt 8		51.5±2.5
					Pt 1+黄元1	10.02±2	1.8
	Pt 2+黄元2	37±3	0.769
					Pt 4+黄元4	55±2	0.88
	Pt 8+黄元8	77.12±2	0.7727
					Pt 1+黄元2.5	19±3	1.28
	Pt 2+黄元5	55±2	0.628
					Pt 4+黄元10	65±3	0.8838
	Pt 1+黄元5	22.2±2	1.26
					Pt 2+黄元10	57±2	0.89
	Pt 4+黄元20	85±2	0.505
					Pt 1+黄元10	52±3	0.9
	Pt 2+黄元20	82±3	0.49

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
					Pt 4+黄元40	95±2	0.272
	Pt 1+黄甙2.5	10.2±2	1.0625
					Pt 2+黄甙5	51.3±3	0.605
	Pt 4+黄甙10	67.2±2	0.863
					Pt 1+黄甙5	23.22±3	0.783
	Pt 2+黄甙10	55.35±1.2	0.819
					Pt 4+黄甙20	85±2	0.91
	Pt 1+黄甙10	45.65±2	0.772
					Pt 2+黄甙20	76.7±3	0.4825
	Pt 4+黄甙40	95±2	1

表5

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元5		0.9
黄元10		16.8±1.7
				黄元20		49±2
黄元40		91.3±3
				黄甙5		1
黄甙10		9±1
				黄甙20		45.2±3
黄甙40		71.2±3
				Pt 1		8.8±0.5

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				Pt 2		31.99±3
Pt 4		44.42±3
				Pt 8		75±2.5
	Pt 1+黄元2.5	12±3	1.13
					Pt 2+黄元5	32.2±2	1.12
	Pt 4+黄元10	70±2.7	0.98
					Pt 8+黄元20	92±3	0.91
	Pt 1+黄元5	22±2	0.95
					Pt 2+黄元10	52±2	0.988
	Pt 4+黄元20	86±3	0.91
					Pt 1+黄元10	38±3	0.95
	Pt 2+黄元20	71±3	0.99
					Pt 4+黄元40	95±4.2	0.932
	Pt 1+黄甙5	11±1	0.9
					Pt 2+黄甙10	49.5±3	0.9
	Pt 4+黄甙20	82.35±3	0.82
					Pt 1+黄甙10	32.5±2.5	0.926
	Pt 2+黄甙20	69.8±3	0.876
					Pt 4+黄甙40	95±2	0.69

黄元＝黄芩甙元，黄甙＝黄芩甙

抑制率％；均值±SD，n＝3

当CI＜1时，为协同作用，CI＝1时，为相加作用；CI＞1时，为拮抗作用。

表1-5显示出在顺铂对和黄芩甙元对各细胞株的IC50之摩尔浓度比约为(1∶5)，并显示在此浓度比附近的区域(1∶2.5～1∶10)内均有良好的联合用药指数，可以明显地表明黄芩甙元与顺铂对各人肿瘤细胞株；人肝癌细胞株HepG2，人大肠HCT116，人肺癌细胞株A549，人胃癌细胞株MKN45，食道癌细胞株TE2都具有良好的联合用药效果。

顺铂和黄芩甙对各细胞株的IC50之摩尔浓度比约为(1∶5-7.5)，并显示在此浓度比附近的区域(1∶5～1∶10)内均有良好的联合用药指数，可以明显地表明黄芩甙与顺铂对各人肿瘤细胞株；人肝癌细胞株HepG2，人大肠HCT116，人肺癌细胞株A549，人胃癌细胞株MKN45，食道癌细胞株TE2都具有良好的联合用药效果。

实施例2黄芩甙元或黄芩甙联合顺铂(CDDP)对移植性肿瘤的抗肿瘤协同作用

将B16黑色素瘤细胞株在体外培养两代后，以2×106细胞/只接种于实验动物雌性C57BL/6(体重在20克左右)小鼠腋下皮下。接种后第二天随机分组，并按0.1ml/10g体重开始给药。黄芩甙元(昆明同持医药有限公司产品)，黄芩甙(四川超人植化开发有限公司)并与顺铂(Sigma公司产品)以单独给药，联合合给药等不同的给药方式分组进行抗肿瘤试验。每组的实验动物均为10只。给药前测定动物体重，试验第15日称动物体重后脱颈处死，剥取瘤块组织称重。抑瘤率的测定按计算公式；抑瘤率＝(1-治疗组瘤重/空白对照组瘤重)×100％计算瘤重抑制率和进行统计学(t检验)处理。

试验结果见表6

表6单独用药和联合顺铂用药时对移植B16黑色素瘤的动物试验结果

黄元＝黄芩甙元，黄甙＝黄芩甙

给药方式：顺铂；腹腔，黄芩甙元和黄芩甙；腹腔给药

*与单用顺铂组相比P＜0.05

**与单用顺铂组相比P＜0.01

试验结果可见黄芩甙元和顺铂合用时体现了明显的抗肿瘤增效作用。顺铂+黄芩甙元5mg/kg，顺铂+黄芩甙元10mg/kg，顺铂+黄芩甙元20mg/kg各组与单用顺铂组相比较都具有统计学上显著差异。动物试验结果明显地支持了体外试验的结果，即顺铂对和黄芩甙元在1∶2.5～1∶10浓度比附近的区域具有比较明显的协同用药效果。

黄芩甙和顺铂合用时也体现了明显的增效作用。顺铂+黄芩甙16.5mg/kg，顺铂+黄芩甙33mg/kg与单用顺铂组相比较都具有统计学上显著差异。动物试验结果明显地支持了体外试验的结果，即顺铂对和黄芩甙在1∶5～1∶10浓度比附近的区域具有比较明显的协同用药效果。

从动物体重变化可以看到，各合用组未见有任何毒性增强趋势。

综合动物试验可见；黄芩甙元或黄芩甙和顺铂具有良好的协同抗肿瘤作用。实施例3黄芩甙元或黄芩甙联合5-氟脲嘧啶(5-FU)在人肿瘤细胞株体外生长抑制的协同作用

将各类人肿瘤细胞株细胞悬浮在含有10％(小)牛胎儿血清的细胞培养液中，以5×103/孔播种于96孔细胞培养盘。在培养24小时后，加入黄芩甙元(昆明同持医药有限公司产品)，或黄芩甙(四川超人植化开发有限公司)，并与5-Fu(Sigma公司产品)以不同浓度比混合加入培养液里。培养72小时后作MTT测定。用四氮唑盐(MTT)法染色并计算单用及联用黄芩甙元或黄芩甙和5-氟脲嘧啶时对细胞增殖的抑制率，用CalcuSyn统计软件及联合用药指数值(CI)法进行数据分析。当CI＜1时，为协同作用，CI＝1时，为相加作用；CI＞1时，为拮抗作用。

单独用药和联合用药时的细胞增殖抑制率，以及联合用药指数值见表7-12

各人肿瘤细胞株为；

人肝癌细胞株       HepG2   表7

人大肠(结肠，直肠) HCT116  表8

人胃癌细胞株       MKN45   表9

人食道癌细胞株     TE2     表10

人乳腺癌细胞株     MCF-7   表11

表7

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率(％)	联合用药系数值(CI)
				黄元2.5		0.2
黄元5		17.43±1.2
				黄元10		40.5±2

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率(％)	联合用药系数值(CI)
				黄元20		59.8±3
黄元40		91±2.5
				黄甙5		0.1
黄甙10		5±0.2
				黄甙20		25.2±2
黄甙40		75.2±3
				5-Fu 5		8±2
5-Fu 10		20.2±3.5
				5-Fu 20		48±2.78
5-Fu 40		87.72±1.7
					5-Fu 10+黄元5	35±3	0.98
	5-Fu 20+黄元10	69±2	1
					5-Fu 40+黄元20	95	0.85
	5-Fu 5+黄元5	18±2	0.755
					5-Fu 10+黄元10	48.2±2	0.98
	5-Fu 20+黄元20	88	0.98
					5-Fu 5+黄元10	35±3	0.95
	5-Fu 10+黄元20	75±3	0.98
					5-Fu 20+黄元40	98±3	0.79
	5-Fu 5+黄甙10	12±2.5	1.2
					5-Fu 10+黄甙20	77±2	0.85
	5-Fu 20+黄甙40	92.5±3	1

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率(％)	联合用药系数值(CI)
					5-Fu 2.5+黄甙10	11±1.5	0.962
	5-Fu 5+黄甙20	57±3	0.91
					5-Fu 10+黄甙40	91.7±3	0.947

表8

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元5		24.43±1.5
黄元10		35.933±3
				黄元20		57.02±2
黄元40		72±1
				黄甙5		27.62±2
黄甙10		33.25±2
				黄甙20		37.65±3
黄甙40		68.7±3
				5-Fu 5		25.8±2
5-Fu 10		61.5±3.5
				5-Fu 20		68.5±2.78
	5-Fu 2.5+黄元5	28.2±3	1.31
					5-Fu 5+黄元10	62.5±2	0.7
	5-Fu 10+黄元20	77.1±2.7	0.8
					5-Fu 20+黄元40	91.2±2.79	0.37
	5-Fu 2.5+黄元2.5	21.2±1.9	1.275

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
					5-Fu 5+黄元5	49.2±3	0.86
	5-Fu 10+黄元10	75.2±3	0.662
					5-Fu 20+黄元20	91.2±2.7	0.485
	5-Fu 5+黄元2.5	38±2.2	1
					5-Fu 10+黄元5	63.21±2	0.882
	5-Fu 20+黄元10	82.67±3.2	0.78
					5-Fu 2.5+黄甙2.5	20.5±2.5	1.37
	5-Fu 5+黄甙5	38.9±2	1.1
					5-Fu 10+黄甙10	75.2±3	0.56
	5-Fu 20+黄甙20	87.6±4	0.55
					5-Fu 2.5+黄甙5	23.7±2	1.49
	5-Fu 5+黄甙10	52.7±3	0.88
					5-Fu 10+黄甙20	82.65±3	0.45

表9

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元1		5±0.5
黄元2		17.6±2
				黄元4		21.5±2
黄元8		43±3
				黄元16		51.25±3
黄甙2.5		0.01

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄甙5		23.6±2
黄甙10		40.25±3
				黄甙20		47.87±3
黄甙40		82.78±3
				5-Fu 5		25.2±2
5-Fu 10		48.91±3.5
				5-Fu 20		65.32±2.78
	5-Fu 5+黄元2.5	29.8±2	1.32
					5-Fu 10+黄元5	61.8±3	0.84
	5-Fu 20+黄元10	82±3.2	0.7
					5-Fu 10+黄元5	95±2	0.42
	5-Fu 2.5+黄元2.5	22.5±3	1.23
					5-Fu 5+黄元5	47±3	0.92
	5-Fu 10+黄元10	72±3	0.727
					5-Fu 20+黄元20	87.8±2	0.6
	5-Fu 2.5+黄元5	29±2	1.38
					5-Fu 5+黄元10	61.5±3	0.8
	5-Fu 10黄元20	75±3	0.749
					5-Fu 2.5+黄甙2.5	17.2±3	0.9655
	5-Fu 5+黄甙5	37.7±3	0.9568
					5-Fu 10+黄甙10	71±3	0.857
	5-Fu 20+黄甙20	89.2±3	0.91

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
					5-Fu 2.5+黄甙5	28.2±2.7	0.81
	5-Fu 5+黄甙10	57.2±3	0.85
					5-Fu 10+黄甙20	81.5±3	0.98

表10

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元5		0.9
黄元10		16.8±1.7
				黄元20		49±2
黄元40		91.3±3
				黄甙5		1
黄甙10		9±1
				黄甙20		45.2±3
黄甙40		71.2±3
				5-Fu 5		7.2±2
5-Fu 10		13.9±3.5
				5-Fu 20		39.08±2.78
5-Fu 40		44.2±1.7
					5-Fu 5+黄元2.5	8±2.8	1.22
	5-Fu 10+黄元5	25.8±2	0.95
					5-Fu 20+黄元10	65.2±3	0.725
	5-Fu 40+黄元20	92.2±3	0.62

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
					5-Fu 5+黄元5	12.5±2	1.1
	5-Fu 10+黄元10	42.2±3	0.9
					5-Fu 20+黄元20	74.2±3	0.97
	5-Fu 5+黄元10	22.5±2	1.1
					5-Fu 10+黄元20	67±3	0.98
	5-Fu 20+黄元40	95±3	0.9
					5-Fu 5+黄甙5	11.2±1.5	1.12
	5-Fu 10+黄甙10	40.7±2	0.8
					5-Fu 20+黄甙20	75.5±3	0.717
	5-Fu 5+黄甙10	21.2±2	1
					5-Fu 10+黄甙20	65.8±3	0.767
	5-Fu 20+黄甙40	95±2	0.57

表11

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				黄元2.5		1±0.5
黄元5		8.7±3
				黄元10		37.7±2
黄元20		55.8±1
				黄甙5		5±1
黄甙10		21.5±2
				黄甙40		85.2±3

单剂药物作用浓度(μm)	联合药物作用浓度(μm)	细胞生长抑制率％	联合用药系数值(CI)
				5-Fu5		22.5±2
5-Fu10		45.2±3
				5-Fu20		65.2±2
5-Fu40		82.7±1.8
					5-Fu 5+黄元2.5	25±3	1.18
	5-Fu 10+黄元5	55.8±2.2	0.97
					5-Fu 20+黄元10	82.1±2.1	0.83
	5-Fu 40+黄元20	95±2	0.72
					5-Fu 5+黄元5	25±3	1.41
	5-Fu 10+黄元10	67.8±2	0.93
					5-Fu 20+黄20	90.2±2	0.8
	5-Fu 5+黄元10	36.5±4	1.3
					5-Fu 10+黄元20	82±2	0.93
	5-Fu 20+黄元40	95	0.769
					5-Fu 5+黄甙5	22.5±2.5	1.5
	5-Fu 10+黄甙10	65.2±2	0.825
					5-Fu 20+黄甙20	87.2±3	0.84
	5-Fu 5+黄甙10	35.2±2	1.36
					5-Fu 10+黄甙20	79.8±3	0.877
	5-Fu 20+黄甙40	95±5.7	0.76

黄元＝黄芩甙元；黄甙＝黄芩甙；5Fu＝5-氟脲嘧啶

抑制率％；均值±SD，n＝3

当CI＜1时，为协同作用，CI＝1时，为相加作用；CI＞1时，为拮抗作用。

表7-11显示出在黄芩甙元和5Fu在对各细胞株的IC50之摩尔浓度比约为(1∶1)，并显示在此浓度比附近的区域(2∶1～1∶2)内均有良好的联合用药指数，可以明显地表明黄芩甙元与5Fu对各人肿瘤细胞株；人肝癌细胞株HepG2，人大肠HCT116，人胃癌细胞株MKN45，人食道癌细胞株TE2，人乳腺癌细胞株MCF-7都具有良好的联合用药效果。

黄芩甙和5Fu在对除HepG2外各细胞株的IC50之摩尔浓度比约为(1∶1)，并显示在此浓度比附近的区域(1∶1～1∶2)内均有良好的联合用药指数。在对HepG2细胞株时摩尔浓度比区域1∶2～1∶4内均有良好的联合用药指数。综合上述可以明显地表明黄芩甙与5Fu对各人肿瘤细胞株；人肝癌细胞株HepG2，人大肠HCT116，人胃癌细胞株MKN45，人食道癌细胞株TE2，人乳腺癌细胞株MCF-7都具有良好的联合用药效果。

实施例4黄芩甙元或黄芩甙联合5-氟脲嘧啶(5-FU)在对移植性肿瘤的抗肿瘤协同作用

将B16黑色素瘤细胞株在体外培养两代后，以2×106细胞/只接种于实验动物雌性C57BL/6(体重在20克左右)小鼠腋部皮下。接种后第二天随机分组，并按0.1ml/10g体重开始给药。黄芩甙元(昆明同持医药有限公司产品)，黄芩甙(四川超人植化开发有限公司)，并与5-氟脲嘧啶(上海旭东海普药业公司产品)以单独给药，联合合给药等不同的给药方式分组进行抗肿瘤试验。每组的实验动物均为10只。给药前测定动物体重，试验第15日称动物体重后脱颈处死，剥取瘤块组织称重。抑瘤率的测定按计算公式；抑瘤率＝(1-治疗组瘤重/空白对照组瘤重)×100％计算瘤重抑制率和进行统计学(t检验)处理。

试验结果见表12

表12单独用药和联合5-氟脲嘧啶用药时对移植B16黑色素瘤的动物试验结果

黄元＝黄芩甙元；黄甙＝黄芩甙；5Fu＝5-氟脲嘧啶

给药方式：5-氟脲嘧啶；皮下给药，黄芩甙元和黄芩甙；腹腔给药

**与单用5-氟脲嘧啶组相比P＜0.01

试验结果可见黄芩甙元和5-氟脲嘧啶合用时体现了明显的抗肿瘤增效作用。5-氟脲嘧啶+黄芩甙元2.5mg/kg，5-氟脲嘧啶+黄芩甙元5mg/kg，顺铂+黄芩甙元10mg/kg各组与单用5-氟脲嘧啶组相比较都具有统计学上显著差异。动物试验结果明显地支持了体外试验的结果，即5-氟脲嘧啶对和黄芩甙元在1∶2～2∶1浓度比附近的区域具有比较明显的协同用药效果。

黄芩甙和5-氟脲嘧啶合用时也体现了明显的增效作用。5-氟脲嘧啶+黄芩甙8.25mg/kg，顺铂+黄芩甙16.5mg/kg与单用5-氟脲嘧啶和组相比较都具有统计学上显著差异。动物试验结果明显地支持了体外试验的结果，即5-氟脲嘧啶对和黄芩甙在1∶1～1∶2浓度比附近的区域具有比较明显的协同用药效果。从动物体重变化可以看到，各合用组未见有任何毒性增强趋势。

综合动物试验可见；黄芩甙元或黄芩甙和5-氟脲嘧啶具有良好的协同抗肿瘤作用。

上文所列的各相关文献均以全篇引入本中请作为参考。本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明之精神与范围的前提下，对上述描述的任何修饰都是允许的。同样，类似的情况也包括在权利要求中。

Claims (12)

1.具有协同抗肿瘤作用的药物组合物，该组合物包括5-氟脲嘧啶和下式(I)的化合物，其特征在于，所述5-氟脲嘧啶和式(I)化合物的摩尔浓度比为1∶2至2∶1：

其中，R代表氢或葡萄糖醛酸基。

2.权利要求1的药物组合物，其中所述肿瘤为实体肿瘤。

3.权利要求1的药物组合物，其中所述肿瘤为黑色素瘤。

4.权利要求1或2或3的药物组合物，其中当R代表氢时，所述化合物为黄芩甙元，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶2至2∶1。

5.权利要求1或2或3的药物组合物，其中当R代表葡萄糖醛酸基时，所述化合物为黄芩甙，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶1至1∶2。

6.下式(I)的化合物及其可药用盐在制备对5-氟脲嘧啶具有协同作用的抗肿瘤药物中的用途：

其中，R₁代表氢或葡萄糖醛酸基。

7.权利要求6的用途，其中所述肿瘤选自肝癌、大肠癌、胃癌、食道癌或乳腺癌。

8.权利要求6或7的用途，其中当R代表氢时，所述化合物为黄芩甙元，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶2至2∶1。

9.权利要求8的用途，其中当所述肿瘤为肝癌、大肠癌、胃癌、食道癌或乳腺癌时，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙元的摩尔浓度比为1∶2至2∶1。

10.权利要求6或7的用途，其中当R代表葡萄糖醛酸基时，所述化合物为黄芩甙，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶1至1∶4。

11.权利要求10的用途，其中当所述肿瘤为大肠癌、胃癌、食道癌或乳腺癌时，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶1至1∶2。

12.权利要求10的用途，其中当所述肿瘤为肝癌时，所述5-氟脲嘧啶和黄芩甙的摩尔浓度比为1∶2至1∶4。