CN1832683A - 用于封装和控制释放的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明包括用于封装和控制释放客体分子(如药物)的组合物和方法。本发明的组合物包括基质，该基质包括由多价阳离子非共价交联的分子，其中该非共价交联的分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性。该组合物的特征在于客体分子可以封装在该基质内，并且随后可释放。

Description

用于封装和控制释放的组合物

技术领域

本发明涉及封装和控制释放领域。特别地，本发明涉及用于封装和控制释放客体分子如药物的组合物和方法。

发明背景

可以通过许多方法实现物质或材料的封装和控制释放。通常，聚合物涂层可用于包围物质或与物质形成混合物。另一种常用方法是使用具有开口或膜的宏观结构来释放物质。封装和控制释放具有广泛的应用，特别适用于控制释放药物输送领域。

许多聚合物涂层通过在水存在下溶胀来控制释放。这依赖于溶胀基质的扩散机理，因而难于控制。可选择地，也可以通过腐蚀或降解聚合物使用聚合物涂层或聚合物与物质的混合物。在任一种情况下，都难于控制释放速率，因为大多数聚合物都具有高度多分散性。此外，适于药物输送聚合物的数量很有限，并且聚合物会与不同物质以相当不同和不可预测的方式相互作用。

宏观结构，如渗透泵，通过将水从环境中吸进含有物质的容器中，并通过输送孔从容器中推出物质来进行控制释放。然而，这需要被制备复杂的结构，并用待输送的物质填充。

在某些药物输送应用中，需要在不利环境条件下保护药物。胃肠道是一种环境例子，其会干扰药物的治疗功效。在某些环境条件下(如胃的低pH)选择性保护药物的能力，及在其他环境条件下(如小肠的中性pH)选择性和可控制地输送药物的能力，是非常需要的。

在某些药物输送应用中，也需要改变药物释放至生物活性受体的速率(即，缓释或控制释放药物)。缓释或控制药物释放对降低剂量频率、降低副作用和提高患者适应性具有所需的效果。

发明内容

在一个方面中，本发明提供用于封装和控制释放的组合物，该组合物包括水不溶基质，该基质包括由多价阳离子非共价交联的主体分子，其中该主体分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性。该组合物的特征在于客体分子可以封装在该基质内，并且随后可释放。

在另一个方面中，本发明是一种微粒组合物，其包括粒子，该粒子包括水不溶基质，该基质包括由多价阳离子非共价交联的主体分子，其中该主体分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性。该组合物的特征在于客体分子可以封装在该基质内，并且随后可释放。

本发明可以提供一种基质，其可在某些环境条件选择性地保护药物，然后在其他环境条件下可控地输送药物。在一个方面中，当将该基质给予至动物时，其在胃的酸性环境中是稳定的，被当通过肠的非酸性环境时可能溶解。在另一个方面中，该基质可以防止药物发生酶分解。

本发明也可以提供一种基质，其可以在粒子中有效地隔离药物分子，从而可以避免在混合剂型中的不同药物间的不利相互作用(例如，化学反应)，在单一药物成分中的不利变化(例如，Ostwald熟化或粒子生长，晶型变化)，和/或在药物和一种或多种赋形剂间的不利相互作用。在一个方面中，本发明的基质可以使在共存时通常不稳定的两种药物被配制成稳定的剂型。在另一个方面中，本发明的基质可以使在共存时通常不稳定的药物和赋形剂被配制成稳定的剂型。

本发明也提供制备在某些环境条件下选择性保护药物的基质的方法，包括直接混合主体分子、客体分子和多价交联离子。

下面结合本发明的各种示例性实施方式说明本发明的这些和其他特征及优点。

附图简要说明

图1是表明单个主体分子和单个多价阳离子的示意图。

图2是表明本发明水不溶基质的示意图。

图3是包括封装的客体分子的本发明水不溶基质的示意图。

图4是表明在一价阳离子存在下，水不溶基质的成分的解离并释放客体分子的示意图。

发明详细说明

本发明提供用于封装和控制释放的组合物，该组合物包括水不溶基质，该基质包括由多价阳离子非共价交联的主体分子，其中该主体分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性。该组合物的特征在于客体分子可以封装在该基质内，并且随后可释放。

现在，惊讶地发现，某些含有多于一个羧基官能团的非聚合分子能够与多价阳离子结合，形成水不溶基质，而水不溶基质能够封装客体分子，还能够在后来可控制地释放该客体分子。

尽管取决于特定的组合物及主体分子和多价阳离子的量可以有多种形态，但在图1a，图1b和图2中描述了示意性的一个实施方式。图1a和图1b示意性表明分离的主体分子100和分离的多价阳离子200。主体分子100具有芳香官能团110，其示意性地由主体分子100内的平面或薄板状区域来代表。所示的主体分子100也具有与芳香官能团110连接的两个羧基官能团120。多价阳离子200示意性地由椭圆形表示。图2表示水不溶基质300的一种可能排列。相邻主体分子100的芳香官能团110形成叠层主体分子。这些叠层在其羧基120和多价阳离子200之间发生相互作用，从而使叠层间发生连接。由于阳离子的多化合价，主体分子叠层可交联。如图2所示，二价阳离子能够在两个不同的主体分子100上的羧基120间产生非共价桥键。尽管没有显示，阳离子另外的化合价会在羧基120间提供另外的非共价桥键。

本发明水不溶基质的特征在于客体分子可以封装在该基质内，并且随后可释放。客体分子600的封装示意性表明在图3中，其中每个客体分子600封装在每对主体分子100之间。尽管图3中表明客体和主体分子交叉排列，但是应该理解，所述的封装可以有更广的解释。客体分子分散在基质内，从而可以被封装。如此，客体分子将被基质有效地与外部环境隔开。例如，通常在水中可溶的客体分子可以不溶于水中，因为它被封装在水不溶基质中。同样，在酸存在下不稳定的客体分子也可被基质有效地隔离。这样，它们封装在基质中时不会分解。在一个方面中，(如图3所示)客体分子插在基质中。即，客体分子在基质内作为被主体分子包围的孤立分子，而不是作为分散在基质中的客体分子的凝聚体。如果客体和主体分子具有相似尺寸，那么这种插入可以是主体和客体分子交替插入的形式。如果客体分子基本上大于主体分子，那么几个主体分子可以包围一个客体分子。相反，如果客体分子基本上小于主体分子，那么基质的间距可以使得多于一个的客体分子封装在相邻的主体分子间。多于一种类型的客体分子可以封装在基质中。

如图4所示，如果在水溶液中多价阳离子被一价阳离子500所置换，那么非共价桥键失去，因为一价阳离子将仅与一个羧基120结合。这使得主体分子100彼此解离，并释放客体分子600。客体分子的释放将取决于各种因素，包括客体分子的种类和数量，多价阳离子的种类和数量，主体分子的种类和数量以及基质所处的环境。

上述和图1-4中的说明用于阐明本发明的一般性质，但应该理解的是，这些说明不意图指定精确的结合相互作用或详细的三维结构，并且这些示意图也不被认为是限制本发明的范围。此外，下面的说明将进一步解释本发明的构成和其排列。

水不溶基质包括由多价阳离子非共价交联的主体分子。水不溶应该被理解成基质基本上不溶解在基本上纯的水中，如去离子水或蒸馏水。在许多情况下，当处于水溶液中时，本发明的基质将是沉淀物形式。在某些实施方式中，基质可以是小微粒形式，可以悬浮和/或均匀分散在水溶液中，但是这种分散体不等同于溶解。此外，在一些情况下，水溶液可以含有游离的主体分子和/或游离多价阳离子，它们溶解在水溶液中，以孤立或游离分子存在，但这些游离主体分子和/或游离多价阳离子不是本发明水不溶基质的形式。在某些条件下，这些基质能溶解在含阳离子水溶液中，这可从下面对客体分子的释放的说明来证实，但在特定含阳离子水溶液中的溶解不代表水溶解性。

主体分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性。非聚合指主体分子不满足聚合物标准定义(参见Handbook of Chemistry and Physics，78^th版，p.2-51，″一种由相对高分子质量(分子量)的分子组成的物质，其结构基本上包括从相对低分子质量的实际或概念上的分子衍生的多个重复单元。″)。尽管没有具体列出相对高和低分子量的精确定义，但对于本发明而言，术语非聚合包括短链低聚物，如二聚体，三聚体，及四聚体。在一个方面中，主体分子由一个分子单元组成，即，其不能由重复分子单元代表。与常见高分子量聚合物相比，非聚合主体分子通常具有相对低分子量，并优选其分子量小于2000g/mol，更优选小于1000g/mol，及最优选小于600g/mol。

主体分子具有多于一个羧基官能团，以化学结构-COOH表示其未电离形式。主体分子可以具有几个羧基官能团，例如两个或三个羧基官能团，在许多情况下为两个羧基官能团。羧基可以与主体分子上的相邻碳分子相连(即，HOOC-C-C-COOH)，但通常与被一个或多个插入原子分开的碳分子相连。应该理解，术语羧基官能团意图包括游离的电离形式，如化学结构-COO^-，及羧基官能团的盐(即，羧酸盐)，包括但不限于，例如，钠、钾和铵盐。

主体分子进一步定义成具有至少部分芳香或杂芳香特性。部分芳香特性指主体分子的至少一部分的特征是环状离域π-电子系统。通常，这些化合物都具有共同特性，即它们具有可以用带有4n+2π-电子的多重共振结构表达的离域π-电子。术语芳香指仅含有碳的环结构，其例子是苯基或萘基。部分杂芳香特性指主体分子的至少一部分的特征是与芳香特性相同的环状离域π-电子系统，除了环结构含有至少一个除碳之外的原子，例如氮、硫或氧。杂芳香官能团的例子包括吡咯，吡啶，呋喃，噻吩，及三嗪。主体分子优选具有多于一个芳基或杂芳基官能团。

在一个方面中，羧基可以直接与芳基或杂芳基官能团相连(例如，羧基苯基)。在另一个方面中，当主体分子具有多于一个芳基或杂芳基官能团时，排列羧基使得每一个芳香或杂芳香基团具有多于一个直接连接的羧基。这种主体分子的例子包括美国专利5,948,487(Sahouani，等人)中所述的金精三羧酸，11’-亚甲基双(羟基萘酸)，5-{4-[[4-(3-羧基-4-氯苯胺基)苯基](氯)苯基甲基]苯胺基}-2-氯苯甲酸，金精三羧酸铵盐，及三嗪衍生物，在此引入该文献作为参考。

在一个方面中，主体分子含有至少一个形式正电荷。在另一个方面中，主体分子可以是两性离子，即，带有至少一个形式正电荷和一个形式负电荷。本发明的两性离子主体分子将带有至少一个负电荷。在一个方面中，负电荷将通过带有一个解离的氢原子的羧基携带，-COO^-。负电荷可以由存在的多个羧基官能团共亨，这使得适合的主体分子由两种或多种共振结构组成。可选择地，负电荷或部分负电荷可以由主体分子中的其他酸基团携带。

如下结构的三嗪衍生物是优选的主体分子。

上述式I表明羧基(-COOH)的方向相对于化合物三嗪骨架的氨基键处于对位。上述主体分子是中性的，但其可以有可选择的形式，如两性离子或质子互变异构体，例如氢原子从一个羧基解离，并与三嗪环中的一个氮原子连接。主体分子也可以是盐。如下式II所示，羧基也可以相对于氨基键处于间位(或者是对位和间位的组合，图未示)。

每个R₂独立地选自任何供电子基，吸电子基和电子中性基团。优选地，R₂是氢或取代或未取代烷基。更优选地，R₂是氢，未取代烷基，或用羟基、醚、酯、磺酸酯或卤化物官能团取代的烷基。最优选R₂是氢。

R₃可以选自：取代杂芳环，未取代杂芳环，取代杂环，及未取代杂环，并通过R₃环中的氮原子与三嗪基团连接。R₃可以是，但不限于，衍生于吡啶，哒嗪，嘧啶，吡嗪，咪唑，噁唑，异噁唑，噻唑，噁二唑，噻二唑，吡唑，三唑，三嗪，喹啉，及异喹啉的杂芳环。优选地，R₃包括衍生于吡啶或咪唑的杂芳环。杂芳环R₃的取代基可以选自，但不限于，下列任何取代和未取代的基团：烷基，羧基，氨基，烷氧基，硫，氰基，酰胺，磺酸酯，羟基，卤化物，全氟烷基，芳基，醚，及酯。R₃的取代基优选选自烷基，磺酸酯，羧基，卤化物，全氟烷基，芳基，醚，及用羟基、磺酸酯、羧基、卤化物、全氟烷基、芳基和醚取代的烷基。当R₃是取代吡啶时，取代基优选位于4-位。当R₃是取代咪唑时，取代基优选位于3-位。适合的R₃例子包括，但不限于：如下式IV～XIII所示，4-(二甲基氨基)吡啶鎓-1-基，3-甲基咪唑鎓-1-基，4-(吡咯烷-1-基)吡啶鎓-1-基，4-异丙基吡啶鎓-1-基，4-[(2-羟基乙基)甲基氨基]吡啶鎓-1-基，4-(3-羟基丙基)吡啶鎓-1-基，4-甲基吡啶鎓-1-基，喹啉鎓-1-基，4-叔丁基吡啶鎓-1-基，及4-(2-磺乙基)吡啶鎓-1-基。R₃可以选择的杂环例子包括例如，吗啉，吡咯烷，哌啶，及哌嗪。

在一个方面中，如下所示，上述式V中所示的R₃基团也可以具有除甲基之外与咪唑环相连的取代基，

其中R₄是氢或取代或未取代烷基。更优选地，R₄是氢，未取代烷基，或用羟基、醚、酯、磺酸酯或卤化物官能团取代的烷基。最优选地，R₄是丙基磺酸，甲基，或油基。

上述式I和II的主体分子是中性的，然而，本发明主体分子可以以离子形式存在，其中它们含有至少一个形式正电荷。在一个实施方式中，主体分子可以是两性离子。

这种两性离子主体分子的例子，4-{[4-(4-羧基苯胺基)-6-(1-吡啶鎓基)-1，3，5-三嗪-2-基]氨基}苯甲酸酯，如下式III所示，其中R₃是通过吡啶环的氮原子与三嗪基团连接的吡啶环。如图所示，吡啶氮携带正电荷，一个羧基官能团携带负电荷(并具有一个解离的阳离子，如氢原子)，-COO^-。

式III中所述的分子也可以以其他互变异构体形式存在，如两个羧基官能团携带负电荷，而正电荷由三嗪基团中的一个氮原子和吡啶基团中的氮原子所携带。

如美国专利5,948,487(Sahouani等人)所述，式I的三嗪衍生物可以制备成水溶液，或可以制备成盐，而盐以后可再溶解形成水溶液。上述式I中所示三嗪分子的典型合成路线涉及两步过程。用4-氨基苯甲酸处理氰尿酰氯得到4-{[4-(4-羧基苯胺基)-6-氯-1，3，5-三嗪-2-基]氨基}苯甲酸。用取代或未取代含氮杂环处理中间体。杂环的氮原子置换三嗪上的氯原子形成相应的氯化物盐。如上式III所示的两性离子衍生物按如下制备：将氯化物盐溶解在氢氧化铵中，使其向下通过阴离子交换柱以用氢氧化物置换氯化物，然后除去溶剂。如上式II所示的可选择结构可通过使用3-氨基苯甲酸代替4-氨基苯甲酸来得到。

在一个实施方式中，非共价交联的分子当溶解在水溶液中并存在于多价阳离子中之前(即，它们被交联之前)，能够形成Chromonic相(chromonic phase)或集合。

在另一个实施方式中，非共价交联的分子当溶解在碱性水溶液中并存在于多价阳离子中之前(即，它们被交联之前)，能够形成Chromonic相或聚集体。Chromonic相或聚集体是公知的(参见，例如，Handbook ofLiquid Crystals，Volume 2B，Chapter XVIII，Chromonics，John Lydon，pp.981-1007，1998)，由平面多环芳香分子堆叠而成。分子由疏水性核和包围该核的亲水性基团组成。堆叠有多种形态，但通常的特征是有形成由叠层形成的柱状物的趋势。随着浓度增大形成有序的堆叠分子，但是它们明显不同于胶束态，它们通常不具有类似于表面活性剂的性能，并且没有表现出临界胶束浓度。通常，Chromonic相表现出等键的行为，即，向有序叠层中加入分子会使自由能单调递减。在一个方面中，非共价交联的分子是主体分子，在存在于多价阳离子中之前(即，它们被交联之前)，在水溶液中会形成Chromonic M或N相。在另一个方面中，非共价交联的分子是主体分子，在存在于多价阳离子中之前(即，它们被交联之前)，在碱性水溶液中会形成Chromonic M或N相。胆甾M相的通常特征是排列在六角点阵中的有序堆叠分子。胆甾N相的特征是柱的向列排列，即，沿着向列相的柱方向，有较长的有序范围，但是在各柱间有序程度较小或没有顺序，因此与M相相比更无序。胆甾N相通常表现出条纹织构，其特征是在透明介质中折射率的变化区。

本发明的水不溶基质由被多价阳离子非共价交联的主体分子组成。这种交联形成了在水中不溶解的三维基质。非共价指交联不会形成永久的共价(或化学)键。即，交联不会引发形成新的大分子的化学反应，而是使阳离子与主体分子结合，结合强度足以使它们在一起但不会发生化学反应。这种相互作用通常是离子性质的，并能使主体分子上的形式负电荷与多价阳离子的形式正电荷发生相互作用。因为多价阳离子具有至少两个正电荷，因此其能够与两个或多个主体分子形成离子键，即，在两个或多个主体分子间交联。交联的水不溶基质起因于直接的主体分子-主体分子相互作用和主体分子-阳离子相互作用的组合。二价和/或三价阳离子是优选的。更优选大部分多价阳离子是二价的。适合的阳离子包括任何二价或三价阳离子，其中钙，镁，锌，铝，及铁是特别优选的。

在一个方面中，如果主体分子在水溶液中形成Chromonic相或聚集体，那么主体分子可以形成由叠层主体分子产生的柱。多价阳离子在这些柱间提供交联。尽管不希望限于任何特定的理论，但是可以认为，主体分子通过芳香官能团和羧基官能团的相互作用而彼此连接。可选择地，多价阳离子可以与两个或多个主体分子连接，而在二价阳离子的情况下形成从溶液中沉淀出的″二聚体″，沉淀的″二聚体″通过主体分子官能团而彼此相互作用形成水不溶基质。

组合物的特征在于，可以封装并释放客体分子。有用的客体分子的例子包括染料，化妆品，香料，调味品，及生物活性化合物，如药物，除草剂，杀虫剂，信息素，及抗真菌剂。本发明中生物活性化合物指用于诊断、治愈、缓解、治疗或预防疾病或者影响活有机体结构或功能的化合物。药物(即，药物活性成分)是特别有用的客体分子，其对有机体具有治疗效果。可选择地，除草剂和杀虫剂是对活有机体(如植物或害虫)具有负面作用的生物活性化合物的例子。尽管任何类型的药物都可用于本发明的组合物中，但是特别适合的药物包括如下药物：当配制成固体剂型时相对不稳定的那些，因胃的低pH条件而有不利影响的那些，因接触胃肠道中的酶而有不利影响的那些，及需要通过缓释或控制释放而给予患者的那些。适合药物的例子包括抗炎药物，甾类(例如，氢化可的松，脱氢皮质醇，去炎松)和非甾类(例如，萘普生，吡罗昔康)；全身性抗菌药(例如，红霉素，四环素，庆大霉素，磺胺噻唑，呋喃咀啶，万古霉素，青霉菌如青霉菌V，头孢菌素如头孢氨苄，及喹诺酮如诺氟沙星，富美喹，环丙沙星，及依巴沙星)；抗滴虫药(例如，灭滴灵)；抗真菌剂(例如，制真菌素)；冠状血管扩张药；钙通道阻断剂(例如，硝苯地平，地尔硫卓)；气管扩张药(例如，茶叶碱，吡布特罗，沙美特罗，异丙去甲肾上腺素)；酶抑制剂如胶原酶抑制剂，蛋白酶抑制剂，弹性蛋白酶抑制剂，脂质氧化酶抑制剂，及血管紧缩素转化酶抑制剂(例如，卡托普利，赖诺普利)；其他抗高血压药(例如，心得安)；白细胞三烯拮抗剂；抗溃疡药如H2拮抗剂；甾类激素(例如，孕酮，睾丸激素，雌二醇)；局部麻醉剂(例如，利多卡因，苯坐卡因，丙泊酚)；强心剂(例如，洋地黄制剂，地高辛)；止咳药(例如，可待因，右美沙芬)；抗组胺剂(例如，苯海拉明，扑尔敏，特非那定)；止痛药(例如，吗啡，芬太奴)；肽激素(例如，人或动物生长激素，LHRH)；心脏产品如心房肽；蛋白产品(例如，胰岛素)；酶(例如，抗血小板酶，溶菌酶，葡聚糖酶)；抗呕吐剂；抗痉挛药(例如，卡巴麻辛)；免疫抑制剂(例如，环孢素)；精神安定剂(例如，苯甲二氮卓)；镇静剂(例如，苯巴比妥)；抗凝血剂(例如，肝磷脂)；止痛剂(例如，退热净)；抗偏头痛药(例如，麦角胺，褪黑激素，sumatripan)；抗心律失常药(例如，氟卡尼)；止呕吐药(例如，胃复安，昂丹司琼)；抗癌药(例如，氨甲叶酸)；神经药如抗抑郁剂(例如，氟西汀)和抗焦虑药(例如，帕罗西汀)；止血剂；等，及其药物可接受的盐和酯。蛋白和肽特别适用于本发明的组合物。适合的例子包括红细胞生成素，干扰素，胰岛素，单克隆抗体，血液因子，集落刺激因子，生长激素，白细胞介素，生长因子，治疗性疫苗，及预防性疫苗。本领域所属技术人员结合特定的药物、特定的载体、特定的剂量方案及所需的治疗效果，可以容易地确定构成治疗有效量的药物的量。药物量通常为约水不溶基质总重量的0.1～70wt.％。在一个方面中，药物插入在基质中。

在一个实施方式中，客体分子可以是用作疫苗的抗原。在一个实施方式中，客体分子可以是免疫反应调节剂化合物。在一个特定的实施方式中，抗原和免疫反应调节剂同时存在作为客体分子，从而免疫反应调节剂化合物通过活化钟状(toll-like)受体而作为疫苗佐剂。免疫反应调节剂的例子包括可诱导细胞因子释放的分子，例如，Type I干扰素，TNF-α，IL-1，IL-6，IL-8，IL-10，IL-12，IP-10，MIP-1，MIP-3，和/或MCP-1，并且也能够抑制某些TH-2细胞因子的制备和分泌，如IL-4和IL-5。一些IRM化合物据说可以抑制IL-1和TNF(美国专利6,518,265)。适合免疫反应调节剂的例子包括咪唑并喹啉，如咪喹莫特，resiquimod，4-氨基-α，α，2-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇盐酸盐，及美国专利4,689,338(Gerster)、4,929,624(Gerster等人)、5,756,747(Gerster)、5,977,366(Gerster等人)、5,268,376(Gerster)和5,266,575(Gerster等人)中所述的化合物，所有这些专利在此引入作为参考。免疫反应调节剂和抗原的混合输送可以增强细胞免疫反应(例如，CTL活化作用)和从Th2到Th1免疫反应的转变。除了治疗和预防其他疾病外，这类免疫调节可用于调节过敏反应和接种预防过敏症。

用作客体分子的IRM化合物可以是所谓的小分子IRM，其是相对较小的有机化合物(例如，分子量低于约1000道尔顿，优选低500道尔顿)，或较大生物分子，如寡核苷酸(例如，CpG)型IRM。也可使用这些化合物的组合物。许多IRM化合物包括与五元含氮杂环稠合的2-氨基吡啶。小分子IRM化合物的例子包括但不限于咪唑并喹啉胺衍生物，包括但不限于酰胺取代的咪唑并喹啉胺，磺酰胺取代的咪唑并喹啉胺，脲取代的咪唑并喹啉胺，芳基醚取代的咪唑并喹啉胺，杂环醚取代的咪唑并喹啉胺，酰胺基醚取代的咪唑并喹啉胺，磺酰胺基醚取代的咪唑并喹啉胺，脲取代的咪唑并喹啉醚，及硫醚取代的咪唑并喹啉胺；四氢咪唑并喹啉胺，包括但不限于酰胺取代的四氢咪唑并喹啉胺，磺酰胺取代的四氢咪唑并喹啉胺，脲取代的四氢咪唑并喹啉胺，芳基醚取代的四氢咪唑并喹啉胺，杂环醚取代的四氢咪唑并喹啉胺，酰胺基醚取代的四氢咪唑并喹啉胺，磺酰胺基醚取代的四氢咪唑并喹啉胺，脲取代的四氢咪唑并喹啉醚，及硫醚取代的四氢咪唑并喹啉胺；咪唑并吡啶胺，包括但不限于酰胺取代的咪唑并吡啶，磺酰胺基取代的咪唑并吡啶，及脲取代的咪唑并吡啶；1，2-桥连的咪唑并喹啉胺；6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺；咪唑并二氮杂萘胺；四氢咪唑并二氮杂萘胺；噁唑并喹啉胺；噻唑并喹啉胺；噁唑并吡啶胺；噻唑并吡啶胺；噁唑并二氮杂萘胺；和噻唑并二氮杂萘胺，如公开在例如美国专利4,689,338；4,929,624；4,988,815；5,037,986；5,175,296；5,238,944；5,266,575；5,268,376；5,346,905；5,352,784；5,367,076；5,389,640；5,395,937；5,446,153；5,482,936；5,693,811；5,741,908；5,756,747；5,939,090；6,039,969；6,083,505；6,110,929；6,194,425；6,245,776；6,331,539；6,376,669；6,451,810；6,525,064；6,545,016；6,545,017；6,558,951；和6,573,273；欧洲专利0 394 026；美国专利公开2002/0055517；和国际专利公开WO 01/74343；WO 02/46188；WO02/46189；WO 02/46190；WO 02/46191；WO 02/46192；WO 02/46193；WO 02/46749；WO 02/102377；WO 03/020889；WO 03/043572和WO03/045391中的那些。可诱导干扰素的小分子IRM的其他例子(其中)包括嘌呤衍生物(如公开于美国专利6,376,501，及6,028,076中的那些)，咪唑并喹啉酰胺衍生物(如公开于美国专利6,069,149中的那些)，及benzimidazole衍生物(如公开于美国专利6,387,938中的那些)。1H-咪唑并吡啶衍生物(如公开于美国专利6,518,265中的那些)据说可抑制TNF和IL-1细胞因子。可以是TLR 7激动剂的其他小分子IRM公开于U.S.2003/0199461 A1。

包括与五元含氮杂环稠合的4-氨基嘧啶的小分子IRM的例子包括腺嘌呤衍生物(如公开于美国专利6,376,501；6,028,076和6,329,381；和WO 02/08595中的那些)。

其他IRM化合物包括生物大分子如寡核苷酸序列。一些IRM寡核苷酸序列含有胞核嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸(CpG)，并公开在例如美国专利6,194,388；6,207,646；6,239,116；6,339,068；和6,406,705中。一些含CpG的寡核苷酸可以包括合成免疫调节结构基元，如公开在例如美国专利6,426,334和6,476,000中的那些。CpG7909是具体的例子。其他IRM核苷序列缺少CpG，并公开在例如国际专利公开WO 00/75304中。

在本发明组合物中，抗原和免疫反应调节剂中的一种或另一种或者是两种都存在作为客体分子的组合可以提高疫苗功效或反应。在一个方面中，在本发明组合物中抗原和免疫反应调节剂的组合可以提高治疗疫苗的疫苗功效或反应，这需要Th1或CTL增生。在另一个方面中，提高疫苗功效或反应可以通过增强抗原表达来实现(例如，通过聚集的抗原决定部位)。在一个方面中，提高疫苗功效或反应可以通过贮存作用来实现。本发明的微粒组合物其大小可以与病原体相比拟，而病原体是免疫系统抗击的对象，并因而自然被抗原表达细胞吸收成为靶。此外，本发明组合物可以通过靶向方式输送，从而实现局部输送至引流淋巴结。

含有抗原和免疫反应调节剂的粒子的噬菌作用使得可以同时输送免疫反应调节剂和抗原至同一细胞。这样可以增强其他细胞外抗原的交叉表达，就好象它是细胞内抗原(如肿瘤和病毒抗原)。这样会提高抗原识别，及CTL活化和增生，并允许有效地攻击受感染细胞。

当客体分子是药物时，主体分子通常是非治疗的。如果主体分子是交联的水不溶基质，那么它可以调节或控制封装药物的释放，这通常将影响药物的治疗活性。尽管对治疗活性的这种影响可以是本发明主体分子的功能的直接结果，但是主体分子一旦从水不溶基质中释放出来后，其本身通常是非治疗的。因此，非治疗指当将主体分子以孤立分子形式输送至目标有机体(例如，如人，哺乳动物，鱼，或植物)时，其基本上没有治疗活性。主体分子就与有机体的生物相互作用而言优选惰性较大，从而可用作药物载体，和用作控制药物释放的方式。当以适合量和剂型输送至有机体时，主体分子优选是非毒性、非突变性及非刺激性的。

在一个方面中，本发明可以提供包括粒子的微粒组合物，该粒子包括水不溶基质，该基质包括由多价阳离子非共价交联的主体分子，其中该主体分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性。该组合物的特征在于客体分子可以封装在该基质内，并且随后可释放。粒子适合的大小和形状可根据目标用途变化。例如，当在基质中封装药物时，粒子的适合大小和形状可根据在基质内分散的药物种类和量、粒子的输送路线和所需的治疗效果变化。

尽管可以制备较大的粒子(例如，直径为几毫米)，但本发明粒子的物质平均直径通常小于100μm，经常小于25μm，在一些情况下小于10μm。在某些例子中，需要粒子小于1μm。特别地，这些粒子的大小需要口服输送在某些酶存在下在肠中不稳定的药物。这种药物的例子包括对身体的酶过程特别敏感的蛋白、肽、抗体及其他生物分子。在这种情况下，这些小粒子可直接吸收在肠壁上，使得粒子主要在通过肠屏障之后溶解，这样可以最小化敏感药物接触肠环境的量。粒子总体形状通常是球形的，但也可以是任何其他适合形状，如针状、圆柱状或板状。

粒子可以在一价阳离子或其他非离子化合物(如表面活性剂)的水溶液中溶解。常见一价阳离子包括钠和钾。需要溶解粒子的一价阳离子的浓度取决于基质内的主体分子的种类和量，但为完全溶解粒子，通常至少一价阳离子的摩尔量相当于基质中的羧基的摩尔量。按这种方式，至少一个一价阳离子将与每个羧基结合。

可以通过调节用于交联的多价阳离子的种类和量来调节粒子溶解的速率。尽管二价阳离子足以交联基质，但是较高价态的阳离子会提高额外的交联，并使溶解速率降低。除了价态外，溶解速率也取决于特定的阳离子种类。例如，非配位二价阳离子(如镁)通常得到比配位二价阳离子(如钙或锌)更快的溶解，配位二价阳离子具有能够与自由电子对形成配位键的空电子轨道。可以混合不同的阳离子种类，从而使阳离子平均价态不是整数。特别地，二价和三价阳离子的混合物与所有阳离子均为二价的相似基质相比，通常产生较慢的溶解速率。在一个方面中，所有的客体分子都随时间释放出来，但是在某些应用中，需要仅有部分客体分子被释放出来。例如，可以调节主体分子和多价阳离子的种类和量，使得被释放的客体分子的总量随它们所处的环境而变化。在一个实施方式中，粒子不会溶解在酸性溶液中，从而防止酸敏感性客体分子降解。在另一个实施方式中，粒子不会溶解在含有一价阳离子的酸性溶液中，从而防止酸敏感性客体分子降解。在客体分子是药物的特定例子中，两种常用释放方案是即释和缓释。对于即释而言，通常大部分药物在小于约4小时，通常小于约1小时，经常小于约30分钟的时间内释放，而在一些情况下小于约10分钟。在一些例子中，需要药物释放接近瞬间，也就是说在几秒内。对于缓释(或控制释放)而言，通常大部分药物在大于或等于约4小时的时间内释放。也可以是一个月或更长时间，例如在各种移植应用中。口服缓释剂型通常在约4小时至约14天内释放大部分药物，有时约12小时至约7天。在一个方面中，需要在约24至约48小时内释放大部分药物。也可以使用即释和缓释组合，例如，某一剂型需要提供开始的大量释放以快速减轻特别的疾病，然后缓释输送以对疾病提供长时间治疗。

在一些例子中，需要脉动式或多模式药物释放，使得释放速率随时间而变化，例如提高或降低，以适合有机体的生物钟。同样，也可以提供延时释放药物，使得可以在便利时间给服药剂，如只在入睡前给服，但可阻止药物释放，直到可以更有功效的稍后时间，如在睡醒之前。实现脉动式、多模式或延时释放的一种方法是混合两种或多种类型的具有不同药物释放特性的粒子。可选择地，也可以形成具有两种或多种明显不同态的粒子，如核和壳，它们具有不同药物释放特性。

用于封装药物的本发明粒子对于口服剂型药物输送中具有特别的用途。常见口服剂型包括固体剂型，如片剂和胶囊，但是也可以包括其他口服剂型，如悬浮液和糖浆。在一个方面中，本发明的组合物是在酸性溶液中稳定并可溶解在一价阳离子水溶液中的粒子。在另一个方面中，在将粒子给服至动物时，其在胃的酸性环境中稳定，并当其通过肠的非酸性环境时可以溶解。当粒子在酸性溶液中稳定时，粒子通常可以稳定大于1小时，有时大于12小时，并当处于pH小于7.0(例如小于约5.0，在一些例子中小于约3.0)的酸性环境中时，可以稳定大于24小时。

例如，本发明的粒子可以防止青霉素G在酸性环境中降解。当接触酸性环境，如pH小于约5.0的溶液时，青霉素G快速降解。当将青霉素G置于pH约2.0的溶液中并在37℃保存2小时时，其几乎完全降解。青霉素G可以封装在本发明的粒子中，如包括式I的三嗪衍生物的那些，从而防止在酸性环境中降解。例如，封装在交联的粒子中的青霉素G，可以在37℃下接触pH为2.0的酸性溶液达2小时，该粒子包括4-[4-(4-羧基苯胺基)-6-(3-甲基-1H-咪唑-3-鎓-1-基)-1，3，5-三嗪-2-基]氨基}苯甲酸盐及镁和铝阳离子的混合物，。在从酸性溶液中取出粒子并将粒子溶解在氯化钠溶液中之后，大部分青霉素仍未降解。

在另一个方面中，含药物的粒子的物质平均空气动力学直径经常小于10μm，在一些例子中小于5μm，这使得当通过吸入路线将粒子输送至动物的呼吸道时，其是可呼吸的。通过吸入输送粒子是公知的，并可用各种装置来实现，包括加压定量吸入器，例如，公开于美国专利5,836,299(Kwon，等人)中的那些，在此引入该专利作为参考；干粉吸入器，例如，公开于美国专利5,301,666(Lerk，等人)中的那些，在此引入该专利作为参考；和喷雾器，例如，公开于美国专利6,338,443(Piper等人)中的那些，在此引入该专利作为参考。应该理解，本发明的可呼吸粒子可以使用本领域所属技术人员可使用的各种方法制成吸入剂型。

本发明的含药物粒子可用于除口服或吸入之外的药物输送剂型中，例如，静脉内、肌肉内或腹膜内注射液，如水溶液或油溶液或悬浮液；皮下注射液；或经皮、局部或粘膜剂型的组合，如霜剂、凝胶、粘性补片、栓剂及鼻雾剂。本发明的组合物也可以植入或注射进各种内部器官和组织，例如，恶性肿瘤，或者可以直接施加至内部体腔，如在手术过程中。

在一个实施方式中，本发明包括医用悬浮液制剂，其包括本发明的粒子和液体。在气雾剂基质中的粒子悬浮液，如氟代烃或其他适合气雾剂基质中，可用于吸入或鼻部药物输送的加压定量吸入器中。水基介质中的粒子悬浮液可用于吸入或鼻部药物输送的喷雾器中。可选择地，水性介质中的粒子悬浮液也可以用于静脉内或肌肉内输送中。

可以通过混合主体分子与多价阳离子制备粒子。通常这可通过将主体分子溶解在水溶液中，然后加入多价阳离子以沉淀出粒子来实现，或可选择地，通过将溶解的主体分子的水溶液加到多价阳离子的溶液中来实现。通过在沉淀前将药物加到主体分子的水溶液中或加到多价阳离子溶液中，可以把药物(或其他客体分子)分散或插入到基质中。可选择地，在与主体分子或多价阳离子溶液混合之前，药物可以分散或溶解在另一种赋形剂或载体中，如油或气雾剂基质。例如可以通过过滤、喷雾或其他方式收集粒子，并干燥以除去水性载体。

在一个方面中，可以在引入主体分子之前，将客体分子，如药物，溶解在含表面活性剂的溶液中。适合表面活性剂包括，例如，长链饱和脂肪酸或醇及单或多不饱和脂肪酸或醇。油基磷酸是适合表面活性剂的实例。尽管不限于任何特定的理论，但是可以想到，表面活性剂有助于分散客体分子，从而使其更好地被封装。

在一个方面中，在引入主体分子之前，将碱性化合物加到客体分子溶液中。可选择地，在混合客体分子和主体分子溶液之前，将碱性化合物加到主体分子溶液中。适合碱性化合物的例子包括乙醇胺，氢氧化钠或氢氧化锂，或胺，如单、二、三胺或多胺。尽管不限于理论，认为碱性化合物有助于溶解主体化合物，特别在主体化合物是如公开于上面式I和II中的那些三嗪化合物时。

在一个方面中，本发明提供制备用于封装和控制释放的组合物的方法，包括混合水溶液和包括多于一个羧基官能团的至少部分芳香或杂芳香化合物以形成具有Chromonic相的溶液，及混合具有Chromonic相的溶液与多价离子溶液以形成用于药物输送的沉淀组合物。可选择地，本发明组合物可以制备成直接与患者接触的薄膜、涂层或贮存药。例如，多价阳离子和非聚合主体分子可以混合在一起或连续施加至患者的特定位置，从而根据应用方法在该位置上形成涂层或贮存药。一个实例是通过独立地将多价阳离子和非聚合主体分子施加到患者皮肤，并使它们接触足够时间以形成交联的基质来形成局部涂层。另一个实例是独立地将多价阳离子和非聚合主体分子注射进身体组织或器官，如肿瘤，并并使它们接触足够时间以形成交联的基质。另一个实例是在手术过程中独立地将多价阳离子和非聚合主体分子直接应用至内部组织，例如，形成包括抗生素的交联基质，以降低手术过程后感染的机会。

在一个方面中，本发明包括用封装组合物治疗患者的试剂盒，其包括交联剂，交联剂包括多价阳离子；包括非聚合主体分子，具有多于一个羧基官能团和至少部分芳香或杂芳香特性的主体分子试剂；和药物。试剂盒式还可包括用于将主体分子施加至患者的涂药器；用于将交联剂施加至患者的涂药器；和用于将药物施加至患者的涂药器。用于将主体分子、交联剂和药物施加至患者的涂药器其特征在于，主体分子、交联剂和药物形成非共价交联的水不溶基质，该基质的特征在于，药物封装在基质内并可随后释放。交联剂、主体分子试剂和药物可以以适合于应用至患者的任何形式存在。通常形式包括干燥形式或粉末形式，多价阳离子的溶液，例如水溶液，或霜剂或凝胶。在一个方面中，主体分子试剂和药物以混合物存在，例如，水溶液中的混合物。

用于将主体分子试剂施加至患者的涂药器，用于将交联剂施加至患者的涂药器，及用于将药物施加至患者的涂药器可以独立地选自适合于将每种成分与患者接触的任何方法。适合的涂药器包括，例如，注射器，喷雾泵，刷子，滚搽式涂药器，及定量吸入器。在一个实施方式中，用于将主体分子施加至患者的涂药器是注射器，用于将交联剂施加至患者的涂药器是注射器，及用于将药物施加至患者的涂药器是注射器。一个涂药器可用于施加主体分子试剂、交联剂及药物中的一种或多种。在一个实施方式中，用于施加主体分子试剂和药物的混合物及施加交联剂的涂药器是双筒注射器。在一个方面中，在施加至患者时，双筒注射器用于使主体分子试剂和药物的混合物与交联剂混合。在另一个方面中，双筒注射器用于独立地将主体分子试剂和药物的混合物，和交联剂施加至患者。

本发明组合物可选择地包括一种或多种添加剂，例如，引发剂、填充剂、增塑剂、交联剂、增稠剂、粘合剂、抗氧化剂、稳定剂、表面活性剂、增溶剂、渗透增强剂、粘合剂、粘度增强剂、着色剂、调味品及其混合物。

在一个方面中，本发明包括用于将药物输送至有机体的方法，如植物或动物。本方法包括提供组合物，其包括水不溶基质，该基质包括由多价阳离子非共价交联的主体分子和封装在该基质中的药物。该主体分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性。将该组合物输送至有机体，使得其与一价阳离子接触，并释放封装的药物，及释放的药物可以与有机体的一部分接触足够时间，以达到所需的治疗效果。在一个实施方式中，该组合物口服输送至动物。在另一个实施方式中，该组合物直到其进入肠时才释放封装的药物。当进入肠时，可以立即释放封装的药物，或者当停留在肠内时可以以缓释的方式释放。在一些例子中，封装的药物也可以进入或穿过肠膜，并在动物中的其他地方释放药物，如在循环系统中。在另一个实施方式中，通过口腔或鼻腔吸入输送该组合物。

实施例

制备Evan’s蓝颜色标准

如下制备待用作颜色标准的一系列20mL溶液。制备0.0108gEvan’s蓝(6，6′-[二甲基[1，1′-联苯基]-4，4′-二基)双(偶氮)]双[4-氨基-5-羟基-1，3-萘二磺酸]四钠盐)在20mL水中的溶液。其被用作100％强度颜色标准。通过稀释100％强度颜色标准溶液来制备0.0086g，0.0065g，0.0043g，0.0022g，0.0011g Evan’s蓝在20mL水中的溶液，分别为颜色标准的80％，60％，40％，20％，及10％。纯水样品用作0％颜色标准。如果待与颜色标准比较的溶液不能精确匹配任何单一颜色标准，可通过插值法测定估计的颜色。

实施例1

通过将6.5046g纯去离子水和2.0087g 1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物加到玻璃容器中并混合约5分钟，来制备混合物。向此混合物中加入0.5047g 1N乙醇胺，并搅拌直到1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物完全溶解。在此步骤中，除去3.0174g混合物，然后将0.1666g Evan’s蓝染料加到残余溶液中，并搅拌直到染料完全溶解。Evan’s蓝的浓度为2.7％(w/w)。

在玻璃小瓶中制备20mL 35％的氯化镁六水合物水溶液(w/w)。将上面制备的一份0.4g Evan’s蓝溶液加到氯化镁溶液中。得到的混合物由透明溶液中的小的沉淀珠组成。在溶液中没有观察到Evan’s蓝。加入Evan’s蓝溶液后将混合物放置20分钟，然后倾析出溶液，沉淀珠用约10ml纯去离子水漂洗两次。然后将沉淀珠转移至空玻璃小瓶中。

实施例2

按实施例1所述制备沉淀珠，除了35％的氯化镁六水合物水溶液还含有0.1％乳酸铝(w/w)。

实施例3

按实施例1所述制备沉淀珠，除了35％的氯化镁六水合物水溶液还含有1.0％乳酸铝(w/w)。

实施例4

按实施例1所述制备沉淀珠，除了用10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)代替35％的氯化镁六水合物水溶液。

实施例5

按实施例4所述制备沉淀珠，除了10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)还含有0.1％乳酸铝。

实施例6

按实施例4所述制备沉淀珠，除了10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)还含有1.0％乳酸铝。

实施例7

按实施例4所述制备沉淀珠，除了使用20％氯化钙二水合物水溶液(w/w)。

通过将20mL氯化钠缓冲溶液(pH约7.5)加到含有沉淀珠的小瓶中，并观察得到的溶液的颜色随时间的变化，来测量从在实施例1～7中制备的沉淀珠中Evan’s蓝的释放。通过将溶液颜色与上面制备的颜色标准来对比，评估在选定时间点的释放百分比，并记录在表1中。

表1
														Evan’s蓝释放(释放％)
实施例编号	0分钟	1分钟	2分钟	5分钟	10分钟	25分钟	30分钟	45分钟	60分钟	90rain	150分钟	240分钟	360分钟
														1	0	0	1	2	15	-	40	-	40	-	40	-	-
2	0	0	0	3	15	-	-	-	-	-	-	35	60
														3	0	0	0	2	5	-	-	15	-	-	-	-	-
4	0	0	9	10	25	-	-	-	-	38	-	-	-
														5	0	0	0	7	20	90	-	-	-	-	-	99	-
6	0	0	0	9	20	-	-	-	90	-	-	99	-
														7	0	0	8	10	30	-	-	-	-	-	40	-	-

实施例8

通过将5.9907g纯去离子水和1.9938g 1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物加到玻璃容器中并混合约5分钟，来制备混合物。向此混合物中加入0.5006g 1N乙醇胺，并搅拌直到1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物完全溶解。在此步骤中，除去2.9820g混合物，然后将0.1659gEvan’s蓝染料加到残余溶液中，并搅拌直到染料完全溶解。Evan’s蓝的浓度为2.7％(w/w)。

在玻璃小瓶中制备20mL 35％的氯化镁六水合物水溶液(w/w)。将上面制备的一份0.4g Evan’s蓝溶液加到氯化镁溶液中。得到的混合物由透明溶液中的小的沉淀珠组成。在溶液中没有观察到Evan’s蓝。加入Evan’s蓝溶液后将混合物放置20分钟，然后倾析出溶液，沉淀珠用约10ml纯去离子水漂洗两次。然后将沉淀珠转移至空玻璃小瓶中。

实施例9

按实施例8所述制备沉淀珠，除了35％的氯化镁六水合物水溶液还含有0.1％乳酸铝(w/w)。

实施例10

按实施例8所述制备沉淀珠，除了35％的氯化镁六水合物水溶液还含有1.0％乳酸铝(W/W)。

实施例11

按实施例8所述制备沉淀珠，除了用10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)代替35％的氯化镁六水合物水溶液。

实施例12

按实施例11所述制备沉淀珠，除了10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)还含有0.1％乳酸铝。

实施例13

按实施例11所述制备沉淀珠，除了10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)还含有1.0％乳酸铝。

实施例14

按实施例11所述制备沉淀珠，除了使用20％氯化钙二水合物水溶液(w/w)。

通过将20mL氯化钠缓冲溶液(pH约7.5)加到含有沉淀珠的小瓶中，并观察得到的溶液的颜色随时间的变化，来测量从在实施例8～14中制备的沉淀珠中Evan’s蓝的释放。通过将溶液颜色与上面制备的颜色标准来对比，评估在选定时间点的释放百分比，并记录在表2中。

表2
														Evan’s蓝释放(释放％)
实施例号	0分钟	1分钟	2分钟	5分钟	10分钟	25分钟	30分钟	45分钟	60分钟	90分钟	150分钟	240分钟	360分钟
														8	0	0	1	3	10	-	20	-	20	-	20	-	-
9	0	0	0	2	9	-	-	-	-	-	-	25	40
														10	0	0	0	1	1	-	-	9	-	-	-	-	-
11	0	0	0	9	20	-	-	-	-	38	-	-	-
														12	0	0	0	8	20	35	-	-	-	-	-	50	-
13	0	0	0	0	1	-	-	-	10	-	-	15	-
														14	0	0	0	6	12	-	-	-	-	-	21	-	-

实施例15

通过将6.5046g纯去离子水和2.0087g 1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物加到玻璃容器中并混合约5分钟，来制备混合物。向此混合物中加入0.5047g 1N乙醇胺，并搅拌直到1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物完全溶解。在此步骤中，将3.0174g得到的混合物和3.6123g纯去离子水加到玻璃容器中，并混合约5分钟。向此溶液中，加入0.1789g Evan’s蓝染料，并搅拌直到染料完全溶解。Evan’s蓝的浓度为2.6％(w/w)。

在玻璃小瓶中制备20mL 35％的氯化镁六水合物水溶液(w/w)。将上面制备的一份0.4g Evan’s蓝溶液加到氯化镁溶液中。得到的混合物由透明溶液中的小的沉淀珠组成。在溶液中没有观察到Evan’s蓝。加入Evan’s蓝溶液后将混合物放置20分钟，然后倾析出溶液，沉淀珠用约10ml纯去离子水漂洗两次。然后将沉淀珠转移至空玻璃小瓶中。

实施例16

按实施例15所述制备沉淀珠，除了35％的氯化镁六水合物水溶液还含有0.1％乳酸铝(w/w)。

实施例17

按实施例15所述制备沉淀珠，除了35％的氯化镁六水合物水溶液还含有1.0％乳酸铝(w/w)。

实施例18

按实施例15所述制备沉淀珠，除了用10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)代替35％的氯化镁六水合物水溶液。

实施例19

按实施例18所述制备沉淀珠，除了10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)还含有0.1％乳酸铝。

实施例20

按实施例18所述制备沉淀珠，除了10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)还含有1.0％乳酸铝。

实施例21

按实施例18所述制备沉淀珠，除了使用20％氯化钙二水合物水溶液(w/w)。

通过将20mL氯化钠缓冲溶液(pH约7.5)加到含有沉淀珠的小瓶中并观察得到的溶液的颜色随时间的变化，来测量从在实施例15～21中制备的沉淀珠中Evan’s蓝的释放。通过将溶液颜色与上面制备的颜色标准来对比，评估在选定时间点的释放百分比，并记录在表3中。

表3
														Evan’s蓝释放(释放％)
实施例号	0分钟	1分钟	2分钟	5分钟	10分钟	25分钟	30分钟	45分钟	60分钟	90分钟	150分钟	240分钟	360分钟
														15	0	0	1	1	8	-	15	-	15	-	20	-	-
16	0	1	1	1	8	-	-	-	-	-	-	12	20
														17	0	0	0	0	0	-	-	1	-	-	-	-	-
18	0	0	0	7	15	-	-	-	-	20	-	-	-
														19	0	0	0	6	15	25	-	-	-	-	-	60	-
20	0	0	0	1	3	-	-	-	20	-	-	20	-
														21	0	0	0	5	6	-	-	-	-	-	10	-	-

实施例22

通过将5.9907g纯去离子水和1.9938g 1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物加到玻璃容器中并混合约5分钟，来制备混合物。向此混合物中加入0.5006g 1N乙醇胺，并搅拌约5分钟。向此混合物中，加入0.5163g氯酸铵并搅拌直到1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物完全溶解。在此步骤中，将2.9820g得到的混合物和3.6405g纯去离子水加到玻璃容器中，并混合约5分钟。向此溶液中，加入0.1783g Evan’s蓝染料，并搅拌直到染料完全溶解。Evan’s蓝的浓度为2.6％(w/w)。

在玻璃小瓶中制备20mL 35％的氯化镁六水合物水溶液(w/w)。将上面制备的一份0.4g Evan’s蓝溶液加到氯化镁溶液中。得到的混合物由透明溶液中的小的沉淀珠组成。在溶液中没有观察到Evan’s蓝。加入Evan’s蓝溶液后将混合物放置20分钟，然后倾析出溶液，沉淀珠用约10ml纯去离子水漂洗两次。然后将沉淀珠转移至空玻璃小瓶中。

实施例23

按实施例22所述制备沉淀珠，除了35％的氯化镁六水合物水溶液还含有0.1％乳酸铝(w/w)。

实施例24

按实施例22所述制备沉淀珠，除了35％的氯化镁六水合物水溶液还含有1.0％乳酸铝(w/w)。

实施例25

按实施例22所述制备沉淀珠，除了用10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)代替35％的氯化镁六水合物水溶液。

实施例26

按实施例25所述制备沉淀珠，除了10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)还含有0.1％乳酸铝。

实施例27

按实施例25所述制备沉淀珠，除了10％氯化钙二水合物水溶液(w/w)还含有1.0％乳酸铝。

实施例28

按实施例25所述制备沉淀珠，除了使用20％氯化钙二水合物水溶液(w/w)。

通过将20mL氯化钠缓冲溶液(pH约7.5)加到含有沉淀珠的小瓶中，并观察得到的溶液的颜色随时间的变化，来测量从在实施例22～28中制备的沉淀珠中Evan’s蓝的释放。通过将溶液颜色与上面制备的颜色标准来对比，评估在选定时间点的释放百分比，并记录在表4中。

表4
														Evan’s蓝释放(释放％)
实施例号	0分钟	1分钟	2分钟	5分钟	10分钟	25rain	30分钟	45分钟	60分钟	90分钟	150分钟	240分钟	360分钟
														22	0	0	1	4	9	-	20	-	20	-	20	-	-
23	0	0	0	0	7	-	-	-	-	-	-	18	20
														24	0	0	1	3	3	-	-	10	-	-	-	-	-
25	0	0	8	8	30	-	-	-	-	40	-	-	-
														26	0	0	0	9	35	40	-	-	-	-	-	60	-
27	0	0	0	1	4	-	-	-	20	-	-	21	-
														28	0	2	9	10	18	-	-	-	-	-	30	-	-

实施例29

11’-亚甲基双(羟基萘酸)二钠盐(3.079g)和纯去离子水(12.000g)被加到容器中并搅拌几分钟，直到固体化合物完全分散。加入1N(5.031g)乙醇胺，直到固体化合物完全溶解。得到的溶液是黄色的。加入Evan’s蓝染料(0.0345g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是紫色的。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中形成浅蓝色沉淀珠。加入30分钟后，10％氯化钙二水合物溶液是透明的。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水是浅紫色的。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠部分溶解，溶液变成紫色的。

实施例30

5-{4-[[4-(3-羧基-4-氯苯胺基)苯基](氯)苯基甲基]苯胺基}-2-氯苯甲酸(3.0020g)和纯去离子水(12.0176g)被加到容器中，并搅拌几分钟直到固体化合物完全分散。加入1N(1.1840g)乙醇胺直到固体化合物完全溶解。得到的溶液是深蓝/绿色。加入Evan’s蓝染料(0.0333g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是深蓝/绿色。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中形成深蓝/绿色沉淀珠。30分钟后，在10％氯化钙二水合物溶液中观察到少量蓝染料。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水是透明的。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠溶解，溶液变成深蓝/绿色。

实施例31

血卟啉(3.011g)和纯去离子水(12.037g)被加到容器中，并搅拌几分钟直到固体化合物完全分散。加入1N乙醇胺(0.3945g)直到固体化合物完全溶解。得到的溶液是棕/黑色。加入Evan’s蓝染料(0.033g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是黑色。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中形成棕色沉淀珠。30分钟后，10％氯化钙二水合物溶液是透明的。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水是透明的。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠溶解，溶液变成棕色。

实施例32

将金精三羧酸铵盐(3.0069g)和纯去离子水(12.0264g)加到容器中，并搅拌几分钟直到固体化合物完全溶解。得到红色溶液。加入Evan’s蓝染料(0.0337g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是深红色。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中，形成红色沉淀珠。30分钟后，10％氯化钙二水合物溶液是浅红色。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水是红色。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠溶解，溶液变成深红/紫色。

实施例33

将金精三羧酸(3.0006g)和纯去离子水(12.0209g)加到容器中，并搅拌几分钟直到固体化合物完全分散。加入1N乙醇胺(0.5972g)直到固体化合物完全溶解。得到的溶液是红色。加入Evan’s蓝染料(0.0389g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是深红色。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中，形成红色沉淀珠。30分钟后，10％氯化钙二水合物溶液是透明的红色。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水保持透明红色。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠溶解，溶液变成深红/紫色。

实施例34

将1H-咪唑-4，5-二羧酸(3.0161g)和纯去离子水(12.0092g)加到容器中，并搅拌几分钟直到固体化合物完全分散。加入1N乙醇胺(3.9644g)直到固体化合物完全溶解。得到的溶液是白色。加入Evan’s蓝染料(0.0318g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是深蓝色。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中，形成蓝色沉淀珠。30分钟后，10％氯化钙二水合物溶液是透明的。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水是浅蓝色。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠溶解，溶液变成深蓝色。

实施例35

将2，6-萘二羧酸二钾盐(3.0129g)和纯去离子水(12.0263g)加到容器中，并搅拌几分钟直到固体化合物完全溶解。得到的溶液是白色。加入Evan’s蓝染料(0.0339g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是深蓝色。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中，形成浅蓝/灰色沉淀珠。30分钟后，10％氯化钙二水合物溶液是透明的。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水是浅蓝色。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠溶解，溶液变成深蓝色。

实施例36

将11’-亚甲基双(羟基萘酸)(3.2300g)和纯去离子水(12.5899g)加到容器中，并搅拌几分钟直到固体化合物完全分散。加入1N乙醇胺(0.1737g)直到固体化合物完全溶解。得到的溶液是白色。加入Evan’s蓝染料(0.0375g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是深蓝色。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中，形成蓝色沉淀珠。30分钟后，10％氯化钙二水合物溶液是浅蓝色。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水是极浅蓝色。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠溶解，溶液变成深蓝色。

实施例37

茜素络合酮二水合物(0.3433g)和纯去离子水(1.7399g)被加到容器中，并搅拌几分钟直到固体化合物完全分散。加入1N乙醇胺(0.2717g)直到固体化合物完全溶解。得到的溶液是橙色。加入Evan’s蓝染料(0.0339g)，搅拌混合物直到染料完全溶解。得到的中间体溶液是深紫色。

将五滴中间体溶液加到10％氯化钙二水合物溶液中，形成蓝色沉淀珠。30分钟后，10％氯化钙二水合物溶液是浅紫色。倾析出10％氯化钙二水合物溶液，用纯去离子水置换。30分钟后，水保持浅紫色。然后倾析出纯去离子水，用1％氯化钠溶液置换。沉淀珠溶解，溶液变成深红/紫色。

实施例38

青霉素G钾盐(0.8089g)，1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物(2.0018g)，1N乙醇胺(0.4705g)，及纯去离子水(6.0153g)混合到一起形成贮存溶液。在玻璃小瓶中制备35％氯化镁/0.5％乳酸铝在纯去离子水中的约20mL交联溶液。将一份0.3057g的贮存溶液滴加到交联溶液中，从而在交联溶液中形成沉淀珠。加到交联溶液中的贮存溶液所含的青霉素G钾盐的总量是26.6mg。

将贮存溶液加到交联溶液中5分钟之后，倾析出交联溶液中的残余液体。用0.45μm过滤器过滤倾析出的液体，并分析青霉素G和苄基青霉素酸(BPA)，一种公知的青霉菌-G降解物。这记录在表5中作为″交联溶液中的量″。

将约20mL纯去离子水加到玻璃小瓶中残余的沉淀珠中，并轻柔地搅拌约30秒。倾析掉水，用0.45μm过滤器过滤，分析青霉素G和BPA。这记录在表5中作为″漂洗水中的量″。

将约50mL 2％氯化钠溶液加到玻璃小瓶中残余的沉淀珠中，并在270rpm的轨道震荡器上震荡。沉淀珠开始大小为2mm。目测沉淀珠随时间的溶解，并定量记录为分解的3个阶段。当粒子开始表现出分解时为观察阶段1。当沉淀珠完全破裂成大小为0.5～1.0mm的粒子时，为观察阶段2。当没有大粒子残余，并且任何残余的固体是细粉末时，为观察阶段3。粒子溶解结果根据每一分解阶段首先开始到达的时间(分钟)记录在表6中。

震荡60分钟后，用0.45μm过滤器过滤溶液，分析青霉素G和BPA。这记录在表5中作为″氯化钠溶液中的量″。

从上面3种溶液中回收和分析的青霉素G和BPA的总量，除以加到交联溶液中的贮存溶液中所含的青霉素G的总量，并按百分比记录为″质量平衡″。″氯化钠溶液中的量″除以从上面3种溶液中回收和分析的青霉素G和BPA的总量，并按百分比记录为″封装效率″。

实施例39

按实施例38所述制备贮存溶液和交联溶液。将一份0.2933g的贮存溶液滴加到交联溶液中，从而在交联溶液中形成沉淀珠。加到交联溶液中的贮存溶液所含的青霉素G钾盐的总量是25.5mg。

将贮存溶液加到交联溶液中15分钟之后，倾析出交联溶液中的残余液体。用0.45μm过滤器过滤倾析出的液体，并分析青霉素G和苄基青霉素酸(BPA)，一种公知的青霉菌-G降解物。这记录在表5中作为″交联溶液中的量″。

将约20mL纯去离子水加到玻璃小瓶中残余的沉淀珠中，并轻柔地搅拌约30秒。倾析掉水，用0.45μm过滤器过滤，分析青霉素G和BPA。这记录在表5中作为″漂洗水中的量″。

将约50mL 2％氯化钠溶液加到玻璃小瓶中残余的沉淀珠中，并在270rpm的轨道震荡器上震荡。目测沉淀珠随时间的溶解。根据对实施例38的说明，将粒子溶解结果记录在表6中。

震荡60分钟后，用0.45μm过滤器过滤溶液，分析青霉素G和BPA。这记录在表5中作为″氯化钠溶液中的量″。

根据实施例38计算质量平衡和封装效率，并记录在表5中。

实施例40

青霉素G钾盐(0.8149g)，1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物(2.0055g)，1N乙醇胺(0.4741g)，天冬酰胺酸(0.757g)，及纯去离子水(6.0298g)混合到一起形成贮存溶液。在玻璃小瓶中制备35％氯化镁/0.5％乳酸铝在纯去离子水中的约20mL交联溶液。将一份0.3275g的贮存溶液滴加到交联溶液中，从而在交联溶液中形成沉淀珠。加到交联溶液中的贮存溶液所含的青霉素G钾盐的总量是26.5mg。

将贮存溶液加到交联溶液中5分钟之后，倾析出交联溶液中的残余液体。用0.45μm过滤器过滤倾析出的液体，并分析青霉素G和苄基青霉素酸(BPA)，一种公知的青霉菌-G降解物。这记录在表5中作为″交联溶液中的量″。

将约20mL纯去离子水加到玻璃小瓶中残余的沉淀珠中，并轻柔地搅拌约30秒。倾析掉水，用0.45μm过滤器过滤，分析青霉素G和BPA。这记录在表5中作为″漂洗水中的量″。

将约50mL 2％氯化钠溶液加到玻璃小瓶中残余的沉淀珠中，并在270rpm的轨道震荡器上震荡。目测沉淀珠随时间的溶解。根据对实施例38的说明，将粒子溶解结果记录在表6中。

震荡60分钟后，用0.45μm过滤器过滤溶液，分析青霉素G和BPA。这记录在表5中作为″氯化钠溶液中的量″。

根据实施例38计算质量平衡和封装效率，并记录在表5中。

实施例41

按实施例40所述制备贮存溶液和交联溶液。将一份0.3036g的贮存溶液滴加到交联溶液中，从而在交联溶液中形成沉淀珠。加到交联溶液中的贮存溶液所含的青霉素G钾盐的总量是24.5mg。

将贮存溶液加到交联溶液中15分钟之后，倾析出交联溶液中的残余液体。用0.45μm过滤器过滤倾析出的液体，并分析青霉素G和苄基青霉素酸(BPA)，一种公知的青霉菌-G降解物。这记录在表5中作为″交联溶液中的量″。

将约20mL纯去离子水加到玻璃小瓶中残余的沉淀珠中，并轻柔地搅拌约30秒。倾析掉水，用0.45μm过滤器过滤，分析青霉素G和BPA。这记录在表5中作为″漂洗水中的量″。

将约50mL 2％氯化钠溶液加到玻璃小瓶中残余的沉淀珠中，并在270rpm的轨道震荡器上震荡。目测沉淀珠随时间的溶解。根据对实施例38的说明，将粒子溶解结果记录在表6中。

震荡60分钟后，用0.45μm过滤器过滤溶液，分析青霉素G和BPA。这记录在表5中作为″氯化钠溶液中的量″。

根据实施例38计算质量平衡和封装效率，并记录在表5中。

表5-青霉素G的封装和释放
									实施例号	交联溶液中的量[mg]		漂洗水中的量[mg]		氯化钠溶液中的量[mg]		封装效率[％]	质量平衡[％]
	青霉素G	BPA	青霉素G	BPA	青霉素G	BPA
									38	0.0	1.4	4.7	0.1	17.4	0.0	73.7	88.7
39	0.0	0.6	2.4	0.1	21.5	0.0	87.4	92.9
									40	0.0	1.5	2.3	0.1	18.2	0.0	82.4	90.1
41	0.0	2.0	2.8	0.1	20.5	0.0	80.7	99.5

表6-青霉素G沉淀珠溶解[分钟]
						实施例38	实施例39	实施例40	实施例41
阶段1	5	5	7	7
					阶段2	8	15	30	30
阶段3	20	15	35	54

实施例42

通过将去离子水(18g)，1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-4-(二甲基氨基)吡啶氯化物(2g)，及N-乙基二异丙基胺(0.05g)加到玻璃小瓶中，并混合来制备贮存溶液。将额外一滴N-乙基二异丙基胺加到小瓶中，搅拌混合物直到所有固体溶解。通过加入盐酸将贮存溶液的pH调节到7.4。

在玻璃小瓶中混合一份(5g)贮存溶液和腺苷脱氨酶(0.020g，Sigma，批号70H8145)，直到腺苷脱氨酶完全溶解，以制备中间体溶液。

用盐酸将10％氯化钙水溶液调节至pH为5.24，以用作交联溶液。

将一部分交联溶液置于玻璃小瓶中，滴加一份中间体溶液以形成交联珠。倾析出交联溶液并弃去。用10mL去离子水洗涤残余交联珠约10秒。倾析出水并弃去。将水洗后的交联珠分成约两等份用于进一步的测试。

一部分交联珠被加到含有20ml 0.1％三氟乙酸水测试溶液(pH 2.0)的小瓶中。交联珠在室温下接触酸性测试溶液2小时。然后倾析出酸性测试溶液并弃去。交联珠用10mL去离子水漂洗。然后倾析出水并弃去。将磷酸盐缓冲液(20mL，pH 7.0，含有0.15M NaCl)加到含有残余交联珠的小瓶中，在手腕活动震荡器中搅拌小瓶1小时以溶解交联珠。用0.22μm聚(偏氟乙烯)过滤器过滤得到的溶液。

通过将过滤的溶液与1.35mM腺苷溶液(pH 7.0)以1∶1比例混合，然后在30℃水浴中培育2分钟，来测定腺苷脱氨酶活性。然后用高效液相色谱(柱子：Hypercarb，100×4.6mm；流动相，A＝水，B＝乙腈，梯度，0min＝25％B，5min＝25％B，10min＝95％B；流速：1mL/min；检测器：215和260nm的UV；注射体积：10μL；运行时间：15分钟)分析得到的溶液中肌苷浓度。肌苷峰面积是733个单位。

将另一部分交联珠加到含有20mL去离子水(pH约7.5)的小瓶中。交联珠接触水溶液2小时。然后倾析出水并弃去。将磷酸盐缓冲液(20mL，pH 7.0，含有0.15M NaCl)加到含有残余交联珠的小瓶中，在手腕活动震荡器中搅拌小瓶1小时以溶解交联珠。用0.22μm聚(偏氟乙烯)过滤器过滤得到的溶液。如上所述，测定腺苷脱氨酶活性。肌苷峰面积是812个单位。

比较例

将腺苷脱氨酶加到20mL 0.1％三氟乙酸水溶液(pH 2.0)中，以制备浓度约110μg/mL腺苷脱氨酶的酸性测试溶液。溶液在室温下保存2小时，并通过加入1N氢氧化钠调节至pH 7.0。如上所述，测定腺苷脱氨酶活性。肌苷峰面积是5个单位。

实施例43

通过用胰岛素溶液(0.001g胰岛素/100g纯去离子水)处理10分钟，钝化所用的所有玻璃器具和搅拌棒。将牛胰岛素(0.143g，SigmaAldrich Company)加到含有油基磷酸钠盐(0.005g)和乙醇胺(0.023g)的纯去离子水(8.0113g)中，并混合10分钟。向混合物中加入1.0051g1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓，然后加入0.1012g乙醇胺，以制备Chromonic相溶液。搅拌上述混合物，直到1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓溶解。得到的胰岛素溶液具有Chromonic相。

通过将氯化钙(0.9973g)和氯化锌(0.0049g)加到纯去离子水(9.0018g)中制备交联溶液。

将几滴胰岛素溶液释放进交联溶液中形成珠。使形成的珠进一步交联30分钟。

从珠中倾析出溶液，并进行分析以测定不含在珠内的胰岛素浓度。胰岛素的残余量以封装在珠内的量记录。用封装的量除以加入的总量，记录为封装效率。封装效率是93％。将珠再悬浮在三氨基甲烷盐酸缓冲液(Tris)中，用组织撕裂器高速微粉化30秒，然后静置1小时，然后离心溶液，分析上清液测定胰岛素浓度。微粉化的珠再悬浮在三氨基甲烷盐酸缓冲液(Tris)中，这种过程在时间点第2、3和4小时时进行重复，以测量胰岛素释放。在每个时间点，在倾析溶液进行分析之前离心样品。

用高效液相色谱(柱子：ProntoSIL C-18300A，150×2.0mm；流动相，A＝含有0.1％三氟乙酸的水，B＝含有0.1％三氟乙酸的乙腈，梯度，0min＝20％B，10min＝50％B，10.01min＝95％B；流速：1mL/min；检测器：210和280nm的UV；注射体积：5μL；运行时间：15分钟)分析胰岛素浓度。结果列于表7中。

表7-胰岛素释放[小时]
						1	2	3	4
释放％	3.9	24.9	31.9	39.6

实施例44

通过使1-[4，6-双(4-羧基苯胺基)-1，3，5-三嗪-2-基]-3-甲基-1H-咪唑-3-氯化物(1.0g)与乙醇胺(0.12g)和纯去离子水(9.0g)混合，来制备溶液。向此溶液中加入IRM化合物4-氨基-α，α，2-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇盐酸盐(0.05g)和卵清蛋白(10mL 50mg/mL溶液，0.5g固体)，搅拌直到IRM和卵清蛋白溶解。得到的IRM-卵清蛋白溶液具有Chromonic相。

通过将氯化镁六水合物(7.0g)加到纯去离子水(13.0g)中制备交联溶液。

将几滴IRM-卵清蛋白溶液(总量0.537g)释放进15mL交联溶液中形成珠。形成的珠被留下，进一步交联30分钟。

从含有珠的溶液中倾析出液体，并分析IRM和卵清蛋白含量。结果在下面的表8中记录作″步骤1″含量。随后用10mL纯去离子水洗涤珠。从珠中倾析出洗涤液体，分析IRM和卵清蛋白含量。结果在下面的表8中记录作″洗涤″含量。然后将20mL 0.9％NaCl缓冲溶液(pH＝7.0，50mM磷酸盐缓冲液)加到珠中，得到的悬浮液在4℃保存约3天。然后在注射进HPLC之前，用0.22μm PVDF注射过滤器过滤溶液。分析过滤的溶液浓度，以测定IRM和卵清蛋白含量。结果在下面的表8中记录作″封装″含量。IRM和卵清蛋白的封装百分比记录作每种″珠″含量除以在″步骤1″、″洗涤″和″珠″测量值总量的百分比。

用高效液相色谱(柱子：ProntoSIL C-18，150×3.0mm；流动相，A＝含有0.1％甲酸的水，B＝乙腈，梯度，0min＝10％B，10min＝40％B，15min＝95％B；流速：0.5mL/min；检测器：254nm的UV；注射体积：2μL；运行时间：18分钟)分析IRM浓度。用高效液相色谱(柱子：Tosoh SW2000水性GPC，300×4.6mm；移动相，等梯度50mM磷酸盐缓冲液pH 7.0，0.15M NaCl；流速：0.35mL/min；检测器：215nm的UV；注射体积：10μL；运行时间：30分钟)分析卵清蛋白浓度。

表8-IRM-卵清蛋白封装
				IRM[μg]	卵清蛋白[μg]
步骤1	71	*
			洗涤	16	73
封装	2530	1456
			封装％	96.6％	95.2％

^*30μg测定量的下限

上面结合了几个实施方式说明了本发明。上述详细说明和实施例仅用于理解，并不应被理解成对其进行不必须的限制。本领域所属技术人员可以认识到，在不脱离本发明的精神和范围内，可以对所述实施方式作出多种变化。因此，本发明的范围不限于所述组合物和结构的精确说明内，它们由所附权利要求来限制。所引述专利、专利文献和出版物的全部公开内容在这里引入作为参考，如它们每个都单独结合一样。在有任何不一致的情况下，将以本发明的说明书(包括定义)为准。

Claims (54)

1.一种组合物，包括：一种基质，该基质包括由多价阳离子非共价交联的分子，其中该非共价交联的分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性。

2.一种包括如权利要求1所述的组合物并用于封装和控制释放的组合物，其中所述非共价交联的分子是主体分子，该组合物的特征在于客体分子可以封装在该基质内，并且随后可释放。

3.如权利要求2所述用于封装和控制释放的组合物，其中该主体分子是两性离子的。

4.如权利要求2所述用于封装和控制释放的组合物，还包括客体分子。

5.如权利要求4所述用于封装和控制释放的组合物，其中该客体分子是药物。

6.如权利要求1所述的组合物，其中该非共价交联的分子在它们存在于多价阳离子中之前，能够在水溶液中形成Chromonic M或N相。

7.如权利要求1所述的组合物，其中该非共价交联的分子具有至少部分芳香特性。

8.如权利要求1所述的组合物，其中该非共价交联分子的至少一个羧基直接与芳基或杂芳基官能团相连。

9.如权利要求1所述的组合物，其中大部分多价阳离子是二价的。

10.如权利要求1所述的组合物，其中该多价阳离子选自钙、镁、锌、铝及铁。

11.如权利要求1所述的组合物，其中该非共价交联的分子包括：

或

其中每个R₂独立地选自任何供电子基、吸电子基和电子中性基团；以及

R₃选自取代和未取代的杂芳环和杂环，它们通过R₃环中的氮原子与三嗪基团连接，

及其质子互变异构体和盐。

12.如权利要求11所述的组合物，其中每个R₂独立地选自氢，未取代烷基，或用羟基、醚、酯、磺酸酯或卤化物官能团取代的烷基。

13.如权利要求12所述的组合物，其中R₃包括衍生于如下的杂芳环：吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、咪唑、噁唑、异噁唑、噻唑、噁二唑、噻二唑、吡唑、三唑、三嗪、喹啉及异喹啉。

14.如权利要求12所述的组合物，其中R₃包括衍生于吡啶或咪唑的杂芳环。

15.如权利要求12所述的组合物，其中R₃选自吡啶鎓-1-基、4-(二甲基氨基)吡啶鎓-1-基、3-甲基咪唑鎓-1-基、4-(吡咯烷-1-基)吡啶鎓-1-基、4-异丙基吡啶鎓-1-基、4-[(2-羟基乙基)甲基氨基]吡啶鎓-1-基、4-(3-羟基丙基)吡啶鎓-1-基、4-甲基吡啶鎓-1-基、喹啉鎓-1-基、4-叔丁基吡啶鎓-1-基及4-(2-磺乙基)吡啶鎓-1-基。

16.如权利要求11所述的组合物，其中该主体分子包括：

及其质子互变异构体和盐。

17.如权利要求16所述的组合物，其中每个R₂独立地选自氢，未取代烷基，或用羟基、醚、酯、磺酸酯或卤化物官能团取代的烷基。

18.如权利要求17所述的组合物，其中R₃包括衍生于如下的杂芳环：吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、咪唑、噁唑、异噁唑、噻唑、噁二唑、噻二唑、吡唑、三唑、三嗪、喹啉及异喹啉。

19.如权利要求17所述的组合物，其中R₃包括衍生于吡啶或咪唑的杂芳环。

20.如权利要求17所述的组合物，其中R₃选自吡啶鎓-1-基、4-(二甲基氨基)吡啶鎓-1-基、3-甲基咪唑鎓-1-基、4-(吡咯烷-1-基)吡啶鎓-1-基、4-异丙基吡啶鎓-1-基、4-[(2-羟基乙基)甲基氨基]吡啶鎓-1-基、4-(3-羟基丙基)吡啶鎓-1-基、4-甲基吡啶鎓-1-基、喹啉鎓-1-基、4-叔丁基吡啶鎓-1-基及4-(2-磺乙基)吡啶鎓-1-基。

21.一种微粒组合物，其包括粒子，该粒子包括水不溶基质，该基质包括由多价阳离子非共价交联的主体分子，其中该主体分子是非聚合的，具有多于一个的羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性，该粒子的特征在于客体分子可以封装在该基质内，并且随后可释放。

22.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该粒子可溶解在一价阳离子的水溶液中。

23.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该粒子基本上不溶解在pH小于约5.0的溶液中。

24.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该粒子的物质平均直径小于100μm。

25.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该主体分子是两性离子的。

26.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该主体分子具有两个羧基官能团。

27.如权利要求21所述的微粒组合物，还包括客体分子。

28.如权利要求27所述的微粒组合物，其中该客体分子是药物。

29.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该主体分子在它存在于多价阳离子中之前，能够在水溶液中形成Chromonic M或N相。

30.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该主体分子具有至少部分芳香特性。

31.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该主体分子的至少一个羧基与芳基或杂芳基官能团直接相连。

32.如权利要求21所述的微粒组合物，其中大部分多价阳离子是二价的。

33.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该多价阳离子选自钙、镁、锌、铝及铁。

34.如权利要求21所述的微粒组合物，其中该主体分子包括：

或

其中每个R₂独立地选自任何供电子基，吸电子基和电子中性基团；以及

R₃选自取代和未取代的杂芳环和杂环，它们通过R₃环中的氮原子与三嗪基团连接，

及其质子互变异构体和盐。

35.如权利要求34所述的微粒组合物，其中每个R₂独立地选自氢，未取代烷基，或用羟基、醚、酯、磺酸酯或卤化物官能团取代的烷基。

36.如权利要求35所述的微粒组合物，其中R₃包括衍生于如下的杂芳环：吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、咪唑、噁唑、异噁唑、噻唑、噁二唑、噻二唑、吡唑、三唑、三嗪、喹啉及异喹啉。

37.如权利要求35所述的微粒组合物，其中R₃包括衍生于吡啶或咪唑的杂芳环。

38.如权利要求35所述的微粒组合物，其中R₃选自吡啶鎓-1-基、4-(二甲基氨基)吡啶鎓-1-基、3-甲基咪唑鎓-1-基、4-(吡咯烷-1-基)吡啶鎓-1-基、4-异丙基吡啶鎓-1-基、4-[(2-羟基乙基)甲基氨基]吡啶鎓-1-基、4-(3-羟基丙基)吡啶鎓-1-基、4-甲基吡啶鎓-1-基、喹啉鎓-1-基、4-叔丁基吡啶鎓-1-基及4-(2-磺乙基)吡啶鎓-1-基。

39.如权利要求34所述的微粒组合物，其中该主体分子包括：

及其质子互变异构体和盐。

40.如权利要求39所述的微粒组合物，其中每个R₂独立地选自氢，未取代烷基，或用羟基、醚、酯、磺酸酯或卤化物官能团取代的烷基。

41.如权利要求40所述的微粒组合物，其中R₃包括衍生于如下的杂芳环：吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、咪唑、噁唑、异噁唑、噻唑、噁二唑、噻二唑、吡唑、三唑、三嗪、喹啉及异喹啉。

42.如权利要求40所述的微粒组合物，其中R₃包括衍生于吡啶或咪唑的杂芳环。

43.如权利要求40所述的微粒组合物，其中R₃选自吡啶鎓-1-基、4-(二甲基氨基)吡啶鎓-1-基、3-甲基咪唑鎓-1-基、4-(吡咯烷-1-基)吡啶鎓-1-基、4-异丙基吡啶鎓-1-基、4-[(2-羟基乙基)甲基氨基]吡啶鎓-1-基、4-(3-羟基丙基)吡啶鎓-1-基、4-甲基吡啶鎓-1-基、喹啉鎓-1-基、4-叔丁基吡啶鎓-1-基及4-(2-磺乙基)吡啶鎓-1-基。

44.一种医用悬浮液制剂，其包括如权利要求21所述的微粒组合物和液体。

45.一种用于封装和控制释放的组合物的制备方法，包括：

(a)混合水溶液和包括多于一个羧基官能团的至少部分芳香或杂芳香化合物以形成具有Chromonic相的溶液；及

(b)混合具有Chromonic相的溶液与多价离子溶液以形成沉淀的组合物。

46.如权利要求45所述的用于封装和控制释放的组合物的制备方法，其中该沉淀的组合物还包括生物活性化合物。

47.一种药物输送方法，包括：

(a)提供组合物，其包括水不溶基质，该基质包括：

(i)由多价阳离子非共价交联的主体分子，其中该主体分子是非聚合的，具有多于一个羧基官能团，并具有至少部分芳香或杂芳香特性，及

(ii)封装在该基质中的药物；

(b)将该组合物输送至有机体，使得其与一价阳离子接触，并释放封装的药物；及

(c)使释放的药物与有机体的一部分接触足够时间以达到所需的治疗效果。

48.如权利要求47所述药物输送的方法，其中该组合物口服输送至动物。

49.如权利要求48所述药物输送的方法，其中封装的药物被输送至肠。

50.如权利要求47所述药物输送的方法，其中封装的药物在释放之前被输送至系统循环。

51.如权利要求47所述药物输送的方法，其中通过吸入将该组合物输送至动物。

52.如权利要求47所述药物输送的方法，其中通过静脉内或肌肉内将该组合物输送至动物。

53.一种提供用于封装和控制释放的药物输送组合物的方法，包括：

(i)给服包括多价阳离子的交联剂；

(ii)给服主体分子试剂，其包括非聚合主体分子，该主体分子具有多于一个的羧基官能团和至少部分芳香或杂芳香特性；及

(iii)给服药物；

其中该交联剂和该药物形成非共价交联的水不溶基质，该药物封装在该基质内，并且随后可释放。

54.如权利要求53所述的方法，其中至少一种成分独立于其他成分被给服，随后在所需位置形成输送组合物。

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