CN1817904A - 截短胰高血糖素样肽1(sGLP－1)、制法及其应用 - Google Patents
截短胰高血糖素样肽1(sGLP－1)、制法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1817904A CN1817904A CNA2005100478014A CN200510047801A CN1817904A CN 1817904 A CN1817904 A CN 1817904A CN A2005100478014 A CNA2005100478014 A CN A2005100478014A CN 200510047801 A CN200510047801 A CN 200510047801A CN 1817904 A CN1817904 A CN 1817904A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sglp
- peptide
- glucagon
- brachymemma
- ser
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 5
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 title 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 title 1
- 108010067035 Pancrelipase Proteins 0.000 title 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 title 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 title 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 claims description 45
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 42
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 22
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 18
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 18
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 18
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 claims description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 13
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 9
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 9
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 4
- 229940100691 oral capsule Drugs 0.000 claims description 4
- 229940096978 oral tablet Drugs 0.000 claims description 4
- 239000007935 oral tablet Substances 0.000 claims description 4
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 claims description 4
- ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylbutane Chemical group CC(C)C(C)C ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N Phenylpropyl alcohol Natural products CCC(O)C1=CC=CC=C1 DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 3
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N antipyrene Natural products C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 3
- -1 hydroxyl phenylpropyl Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 3
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 3
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims description 3
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 claims description 3
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940090044 injection Drugs 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 2
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 2
- 102400000322 Glucagon-like peptide 1 Human genes 0.000 claims 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 abstract 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 abstract 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 abstract 1
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 34
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 26
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 26
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 26
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 15
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 11
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 8
- JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N chembl1210015 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@]3(O[C@@H](C[C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)C(O)=O)O2)O)[C@@H](CO)O1)NC(C)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N 0.000 description 8
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000035554 Proglucagon Human genes 0.000 description 4
- 108010058003 Proglucagon Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- NGJOFQZEYQGZMB-KTKZVXAJSA-N (4S)-5-[[2-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[2-[[(1S)-4-carbamimidamido-1-carboxybutyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 NGJOFQZEYQGZMB-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 2
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 description 2
- 101800004266 Glucagon-like peptide 1(7-37) Proteins 0.000 description 2
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 2
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrate Chemical compound O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 description 1
- 101800004295 Glucagon-like peptide 1(7-36) Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- FRJIAZKQGSCKPQ-FSPLSTOPSA-N His-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 FRJIAZKQGSCKPQ-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 101500016420 Oncorhynchus mykiss Glucagon-like peptide 1-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 238000013096 assay test Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960000673 dextrose monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002473 insulinotropic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及促胰岛素分泌的胰高血糖素样肽1(glucagon－likepeptide－1，GLP－1)的类似物，截短胰高血糖素样肽1(sGLP－1)，其由26个氨基酸组成，其序列如下：His－X1－Glu－Gly－Thr－Phe－Thr－Ser－Asp－Val－Ser－Ser－Tyr－Leu－Glu－Gly－Gln－Ala－Ala－Lys－Glu－Phe－Ile－Ala－Trp－Leu。发明所述的截短胰高血糖素样肽1(sGLP－1)与目前GLP－1及其类似物相比，具有突出的特点：1.截短肽链改构后与胰岛细胞受体结合力更强，刺激更强的胰岛素分泌作用；2.通过第二位氨基酸序列的改变，由Ala改为Gly或Ser使改构的模拟序列可抵抗二肽基肽酶降解作用，从而使半衰期延长，药效增强；3.通过截短肽链，降低合成成本。
Description
技术领域：
本发明涉及促胰岛素分泌的胰高血糖素样肽1(glucagon-likepeptide-1，GLP-1)的类似物，另外还涉及其制法及其应用。
背景技术：
近年来对促胰岛素分泌肽GLP-1和Exendin 4的研究进展很快，两者具有很高的同源性，应用于治疗II型糖尿病取得较好的效果。GLP-1是人肠道中分离纯化得到的多肽，Exendin 4是从墨西哥巨蜥蜴的毒液中分离得到的一种短肽。两者在很低浓度下即可促进胰脏合成和分泌胰岛素，从而能帮助糖尿病人控制血糖。
GLP-1是人体分泌的一种肠道激素，由胰高血糖素原(Proglucagon)分子经肠道蛋白水解酶作用而产生，因而称为胰高血糖素类多肽。当血糖浓度高于6mmol/L时，GLP-1能显著促进胰岛素分泌；而一旦血糖浓度恢复至正常值则不再继续作用，这一点对II型糖尿病的治疗十分有用。人体内的GLP-1有两种形式，一种为GLP-1(7-36)NH2，是由30个氨基酸残基组成的多肽，即由胰高血糖素原中第7位至第36位氨基酸组成，其C端是酰胺化了的；另一种为GLP-1(7-37)，是由31个氨基酸残基组成的多肽，即胰高血糖素原中第7位至第37位氨基酸，GLP-1(7-36)NH2和GLP-1(7-37)有相同的促胰岛素分泌作用，实验证明，在1×10-10-1×10-111mol/L浓度下，GLP-1与离体胰岛细胞作用时，可促进其分泌胰岛素，故又称它们为促胰岛素分泌肽。美国专利USP 05424286公开了Exendin4和GLP-1促胰岛素分泌的对比实验。与GLP-1相比，产生胰岛素分泌作用所需的Exendin 4浓度更低，而且Exendin 4在人体内的半衰期更长。这些研究表明，GLP-1或Exendin 4可能成为一种较为理想的II型糖尿病治疗药物。
一个治疗II型糖尿病的理想药物应该是既能降低空腹血糖，也能降低餐后血糖，又不会导致低血糖，还能减少心血管系统的并发症，并且没有其它的副反应。GLP-1是由30个氨基酸组成的肽，其序列His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg。虽然该序列用于治疗糖尿病优点是该序列为人体产生的天然序列，具有上述的多种特性，副反应少，比如它能象糖原那样抑制糖原的分泌，减慢胃肠排空，抑制食欲等；此外，GLP-1受体的刺激还可以促进细胞增殖及更新，从而使胰岛素分泌增多，对糖的耐受性提高。但缺点是，头两个氨基酸His-Ala很快就被体内的二肽基肽酶降解而丧失活性，在体内的半衰期太短，只有90至120秒，几乎没有太大的临床实用价值。目前国内外进行GLP-1序列改构的研究和专利均有很多，但没有在GLP-1序列改构同时进行序列长度缩减的。
Exendin 4在人体内的半衰期长，降血糖作用明显，但化学合成的Exendin 4是39个氨基酸组成的肽，成本高，而且作为异源多肽，长期使用有诱发人体产生对应抗体而失效的可能。
发明内容：
本发明的目的是克服上述不足问题，提供一种截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)，与胰岛细胞受体结合力更强，刺激胰岛素分泌作用更强；半衰期延长，另外还提供其制法，合成成本低，最后还提供其应用。
本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)，其由26个氨基酸组成，其序列如下：His-X1-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
式中英文缩写表示：His(缩写为：H，以下相同。)组氨酸、Gly(G)甘氨酸、Glu(E)谷氨酸、Thr(T)苏氨酸、Phe(F)苯丙氨酸、Ser(S)丝氨酸、Asp(D)天冬氨酸、Val(V)缬氨酸、Tyr(Y)酪氨酸、Leu(L)亮氨酸、Gln(Q)谷氨酰胺、Lys(K)赖氨酸、Ile(I)异亮氨酸、Trp(W)色氨酸。
其中所述的X1为Gly或Ser。
本发明所述截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)的制法：
第一步：sGLP-1肽树脂的合成：
称取0.5克的多肽合成树脂倒入合成反应柱中，加入二甲基甲酰胺溶剂溶胀，按照sGLP-1氨基酸序列依次称取0.1克的9芘甲氧羰基进行氨基酸N端(FMOC)保护的氨基酸于反应器的容器中，采用Merrifield发明的固相化学合成方法合成，sGLP-1的氨基酸序列从C端开始依次进行，在合成反应柱中，加入用二甲基甲酰胺溶解的N，N二异丙级碳二亚胺(DIC)，4-二甲氨基吡啶(DMAP)，C端第一个氨基酸(FMOC-Leu)，反应2-3小时中止，减压抽干反应液，洗树脂，分别用异丙醇洗3次，二氯甲烷洗3次，二甲基甲酰胺洗3次，加入含20％(V/V)6-氢吡啶的二甲基甲酰胺脱保护溶液，反应30分钟，抽干反应液，分别用异丙醇洗3次，二氯甲烷洗3次，二甲基甲酰胺3次，随后加入的第二个FMOC保护的氨基酸，和无水羟基苯丙三氮唑(HOBT)，2-苯骈三氮唑-1，1，3，3，-四甲基脲四氟硼酸酯(HBTU)，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，溶解活化5分钟，立即加入反应器中反应2小时，按上法洗树脂，脱保护，随后依照序列结构偶连反应直到序列完全，偶连完成后，用二甲基甲酰胺充分洗去残余的未偶连试剂，用惰性气体N2吹干肽树脂，备用。
第二步：sGLP-1树脂的裂解：
取上述肽树脂于容器中，加入裂解液：9.5ml三氟乙酸，0.4ml硫代苯甲醚，0.4ml苯甲醚，0.2ml-1，2-乙二硫醇，于室温避光反应2小时，过滤，滤液于室温浓缩后加入预先冷冻的无水乙醚中，冰冻过夜，离心，弃上清液，沉淀用水或冰醋酸溶解后，冷冻后置冷冻干燥机中干燥，得粗肽。第三步：sGLP-1肽纯化
取上述粗肽，加入无热源水溶解，得到样品溶液，过滤并收集样品滤液；将乙腈及无热源水用0.45u滤膜过滤，分别加入0.1％三氟乙酸，混匀，用C18反向柱分离纯化，分离条件采用：流动相A：0.1％三氟乙酸+100％H2O；流动相B：0.1％三氟乙酸+100％乙腈；0→90分钟梯度洗脱纯化制备，收集纯化的sGLP-1洗脱液，冷冻后置冷冻干燥机中干燥，得到sGLP-1多肽纯品。
本发明所述截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)在治疗II型糖尿病药物中的应用。如在治疗II型糖尿病注射针剂、口服片剂或胶囊、喷雾剂中的应用。
所述中成分除sGLP-1外，注射针剂包含sGLP-1及人体可接受的稀释液体，如注射用水、生理盐水和磷酸盐缓冲液等；口服片剂或胶囊包括sGLP-1及医药可接受的稳定剂、固型剂等。
本发明所述的截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)与目前GLP-1及其类似物相比，具有突出的特点：1.截短肽链改构后与胰岛细胞受体结合力更强，刺激更强的胰岛素分泌作用；2.通过第二位氨基酸序列的改变，由Ala改为Gly或Ser使改构的模拟序列可抵抗二肽基肽酶降解作用，从而使半衰期延长，药效增强；3.通过截短肽链，降低合成成本。多肽的制备一般可采用化学合成和基因工程技术两种方法生产。但生产的成本很高，这成为其进入药品市场的障碍。本发明提供的合成方法，通过改变肽链中的少数若干个氨基酸可得到多肽的类似物，同时又可以大规模、低成本地进行生产。通过用II型糖尿病大鼠模型试验，进行II型糖尿病降血糖治疗试验，结果表明本发明sGLP-1降血糖作用优于GLP-1及其改构序列，动物试验表明降糖效果明显提高。用改构的缩短序列与胰岛细胞受体结合，具有更佳的刺激胰岛素分泌作用，具有较好的用于II型糖尿病病人的治疗药物的应用前景。
附图说明：
图1为本发明sGLP-1液相色谱纯度鉴定图。
图2为本发明sGLP-1分子量质谱鉴定图。
具体实施方式：
实施例1
按下述方法合成sGLP-1，其序列如下：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu
第一步：sGLP-1肽树脂的合成：称取0.5克的Wang树脂(或其他多肽合成树脂)倒入合成反应柱中，加入二甲基甲酰胺溶剂溶胀，按照本发明的降血糖肽的氨基酸序列依次称取0.1克的FMOC(9芘甲氧羰基进行氨基酸N端保护的)氨基酸于反应器的容器中，按照Merrifield发明的固相化学合成方法(具体方法如下)依照本发明的sGLP-1的氨基酸序列从C端开始依次进行，在合成反应柱中，加入用10ml的二甲基甲酰胺溶解的4ml N，N二异丙级碳二亚胺(DIC)，0.012克4-二甲氨基吡啶的C端第一个氨基酸(FMOC-氨基酸)，反应2-3小时中止，减压抽干反应液，洗树脂，分别用异丙醇洗3次，二氯甲烷洗3次，二甲基甲酰胺3次，加入含20％(V/V)6-氢吡啶的二甲基甲酰胺脱保护溶液，反应30分钟，抽干反应液，分别用异丙醇洗3次，二氯甲烷洗3次，二甲基甲酰胺3次，随后加入的第二个FMOC保护的氨基酸，和0.22克无水羟基苯丙三氮唑，0.6克2-苯骈三氮唑-1，1，3，3，-四甲基脲四氟硼酸酯(HBTU)，0.35mlN，N-二异丙基乙胺，溶解活化5分钟，立即加入反应器中反应2小时，按上法洗树脂，脱保护，随后依照序列结构偶连反应直到序列完全，偶连完成后，用二甲基甲酰胺充分洗去残余的未偶连试剂，用惰性气体N2吹干肽树脂，备用。
第二步：sGLP-1树脂的裂解：
取上述肽树脂于容器中，加入裂解液：9.5ml三氟乙酸，0.4ml硫代苯甲醚，0.4ml苯甲醚，0.2ml-1，2-乙二硫醇，于室温避光反应2小时，过滤，滤液与室温浓缩后加入预先冷冻的无水乙醚中，冰冻过夜，离心，弃上清液，沉淀用200ml水或冰醋酸溶解后，冷冻后置冷冻干燥机中干燥，得粗肽。
第三步：sGLP-1肽纯化：
取粗肽，加入200ml无热源水溶解，得到样品溶液，过滤并收集样品滤液；将乙腈及无热源水用0.45u滤膜过滤，分别加入0.1％三氟乙酸，混匀，用C18反向柱分离纯化，分离条件采用：流动相A：0.1％三氟乙酸+100％H2O；流动相B：0.1％三氟乙酸+100％乙腈；0→90分钟梯度洗脱纯化制备，收集纯化的sGLP-1洗脱液，冷冻后置冷冻干燥机中干燥，得到sGLP-1多肽纯品。
实施例2
按照实施例1所述方法合成sGLP-1，其序列如下：His-Ser-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu。
动物实验：
1、降血糖效果实验：
材料和方法
GK糖尿病大鼠(中国科学院上海动物中心提供)
sGLP-1序列如下：
No1：HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR
No2：HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWL
No3：HSEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWL
No4：HSEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFI
No5：HGEGTFTSDVSSYLEGQAVRLFI
No6：HGEGTFTSDVSSYMEEEAVR
No7：HGE GTFTSDVSSYM
No8：HGEGTFTSDVSS
上述8种序列多肽用0.9％NaCl溶液配置成1mg/ml溶液，备用。
大鼠随机分组，禁食过夜后，用刻度毛细管(注射前以肝素处理)从眼窦取血20微升，置入300微升生理盐水中混匀，3000转/分离心除去红血球，血清用于空腹血糖浓度测定。然后各组分别注射不同多肽，用生理盐水作阴性对照，每只大鼠每天注射两次，每次0.1mg，连续注射两周，禁食过夜后，再次按上法取血，测定空腹血糖。
结果见附表1，No1～No5均有降血糖作用，其中No1序列是第2位氨基酸由A改为G的全长GLP-1序列作为阳性对照；No2～No5为不同截短长度的改构序列，而且No2和No3组降血糖作用明显高于No1组，为最终确定的本发明sGLP-1序列。
2、对NOD小鼠的降血糖作用
实验材料与方法：
NOD小鼠禁食过夜(中国科学院上海动物中心提供)40％葡萄糖、0.9％NaCl溶液、sGLP-1纯品(实施例1所得产品)、GLP-1纯品、血糖测定试剂盒(中国卫生部上海生物制品所出品)
NOD小鼠禁食过夜，分为三组。第一组腹腔注射200微升40％葡萄糖和10微克sGLP-1，第二组腹腔注射200微升40％葡萄糖和10微克GLP-1，第三组为对照组，只注射葡萄糖。立刻用刻度毛细管(注射前以肝素处理)从眼窦取血20微升，置入300微升生理盐水中混匀，3000转/分离心除去红血球，血清用于血糖浓度测定。分别于30，60，120分钟按同样操作取血，分离血清。三组血清均按照试剂盒所述方法测定血糖浓度，以检验各组的降血糖作用。
结果如表1所示。
对照组血糖浓度大幅度升高后，逐渐回落到正常水平；而给药组血糖浓度未出现显著升高，一直保持在正常水平附近。这是由于给药后促进了胰岛素分泌，从而避免了血糖浓度的大幅波动。由此可证明sGLP-1和GLP-1的降血糖作用。
表1.sGLP-1对NOD小鼠的降血糖作用
| 给药后时间 | 0min | 30min | 60min | 120min |
| sGLP-1 | 4.08 | 4.34 | 4.28 | 3.98 |
| GLP-1 | 4.11 | 5.12 | 4.87 | 4.03 |
| 对照组 | 4.09 | 8.07 | 6.30 | 5.16 |
注：表中血糖浓度值为：mmol/L
3、sGLP-1的促胰岛素分泌作用
实验材料与方法：
NOD小鼠(中国科学院上海动物中心提供)
0.9％NaCl溶液、sGLP-1纯品(实施例1所得产品)、GLP-1纯品放射免疫胰岛素测定试剂盒(中国卫生部上海生物制品所出品)
NOD小鼠分成三组。首先用刻度毛细管(先以1mg/mL肝素润洗毛细管内壁并晾干)从眼窦取血50微升，然后三组小鼠分别腹腔注射10微克sGLP-1、10微克GLP-1和200微升生理盐水，并记此时为零时刻。然后分别于5，10，20，30分钟按同样操作取血。取血后各血样立刻加入盛有50微升生理盐水的离心管中，混匀，3000转/分离心除去红血球，按放射免疫试剂盒使用方法测定血清中胰岛素浓度，以检验sGLP-1的促胰岛素分泌作用。
实验结果如表2所示。该结果表明，腹腔注射sGLP-1能显著促进胰岛素的分泌，短时间刺激产生胰岛素能力与GLP-1相当，中长时间刺激产生胰岛素能力超过GLP-1。
表2.sGLP-1的促胰岛素分泌作用
| 给药后时间 | 0min | 5min | 10min | 20min | 30min |
| sGLP-1 | 2.88 | 10.56 | 19.88 | 24.67 | 16.45 |
| GLP-1 | 3.11 | 9.76 | 10.63 | 11.23 | 6.27 |
| 对照组 | 2.09 | 2.07 | 1.80 | 1.90 | 1.86 |
注：表中胰岛素值为：10-6国际单位
4.sGLP-1的促C肽分泌作用
实验材料与方法：
健康C57/BL小鼠(中国科学院上海动物中心提供)0.9％NaCl溶液、sGLP-1纯品(实施例1所得产品)、GLP-1纯品。放射免疫C-肽测定试剂盒(中国卫生部上海生物制品所出品)
健康C57/BL小鼠分成三组。首先用刻度毛细管(先以1mg/mL肝素润洗毛细管内壁并晾干)从眼窦取血50微升，然后两组小鼠分别腹腔注射10微克sGLP-1、10微克GLP-1和200微升生理盐水，并记此时为零时刻。然后分别于5，10，20，30分钟按同样操作取血。取血后各血样立刻加入盛有50微升生理盐水的离心管中，混匀，3000转/分离心除去红血球，按放射免疫试剂盒使用方法测定血清中C肽浓度，以检验sGLP-1的促C肽分泌作用。
实验结果如表3所示。该结果表明，腹腔注射sGLP-1能显著促进c肽的分泌，而且促进c肽的分泌能力高于GLP-1。
表3.sGLP-1的促胰岛素分泌作用
| 给药后时间 | 0min | 5min | 10min | 20min | 30min |
| sGLP-1 | 0.07 | 0.08 | 0.20 | 0.16 | 0.15 |
| GLP-1 | 0.07 | 0.08 | 0.15 | 0.11 | 0.09 |
| 对照组 | 0.07 | 0.06 | 0.08 | 0.06 | 0.06 |
注：表中c肽浓度为：pmol/mL
附表1 降血糖效果实验
| 给药组 | 试验动物血糖测定值 | 平均值 | 与对照组差值 | ||||||
| No1 | 6.7178 | 6.4751 | 7.488 | 7.2322 | 7.3233 | 7.1411 | 6.5342 | 6.978275 | 2.252205 |
| No2 | 5.1729 | 3.0507 | 3.3886 | 3.314 | 4.43259 | 3.8536 | 4.131 | 3.906199 | 5.324281 |
| No3 | 6.1934 | 6.62873 | 4.084 | 4.0045 | 5.1729 | 5.5309 | 6.5114 | 5.446547 | 3.96498 |
| No4 | 9.2146 | 7.1244 | 7.4364 | 6.915 | 6.60755 | 5.6346 | 6.7982 | 7.104393 | 2.126087 |
| No5 | 6.2663 | 8.9084 | 7.0863 | 7.1229 | 7.848 | 8.0304 | 8.2343 | 7.642371 | 1.588109 |
| No6 | 9.1616 | 9.0243 | 8.37 | 7.3035 | 6.9875 | 6.4176 | 7.4175 | 7.811714 | 1.41876 |
| No7 | 8.3869 | 9.8194 | 9.0325 | 9.0344 | 9.2661 | 7.8949 | 8.906 | 8.9057 | 0.32478 |
| No8 | 9.417 | 9.0365 | 8.3983 | 7.2232 | 8.7884 | 9.014 | 8.0691 | 8.563786 | 0.6666 |
| 对照组 | 8.1364 | 10.7211 | 9.5314 | 9.2867 | 8.4768 | 9.441 | 9.026 | 9.23048 | 0 |
Claims (7)
1、截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)，其特征在于：其由26个氨基酸组成，其序列如下：
His-Xl-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu。
2、根据权利要求1所述的截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)，其特征在于：其中Xl为Gly或Ser。
3、根据权利要求1所述的截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)的制法，其特征在于：
第一步：sGLP-1肽树脂的合成：
称取0.5克的多肽合成树脂倒入合成反应柱中，加入二甲基甲酰胺溶剂溶胀，按照sGLP-1氨基酸序列依次称取0.1克的9芘甲氧羰基进行氨基酸N端(FMOC)保护的氨基酸于反应器的容器中，采用Merrifield发明的固相化学合成方法合成，sGLP-1的氨基酸序列从C端开始依次进行，在合成反应柱中，加入用二甲基甲酰胺溶解的N，N二异丙级碳二亚胺(DIC)，4-二甲氨基吡啶(DMAP)，C端第一个氨基酸(FMOC-Leu)，反应2-3小时中止，减压抽干反应液，洗树脂，分别用异丙醇洗3次，二氯甲烷洗3次，二甲基甲酰胺洗3次，加入含20％(V/V)6-氢吡啶的二甲基甲酰胺脱保护溶液，反应30分钟，抽干反应液，分别用异丙醇洗3次，二氯甲烷洗3次，二甲基甲酰胺3次，随后加入的第二个FMOC保护的氨基酸，和无水羟基苯丙三氮唑(HOBT)，2-苯骈三氮唑-1，1，3，3，-四甲基脲四氟硼酸酯(HBTU)，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，溶解活化5分钟，立即加入反应器中反应2小时，按上法洗树脂，脱保护，随后依照序列结构偶连反应直到序列完全，偶连完成后，用二甲基甲酰胺充分洗去残余的未偶连试剂，用惰性气体N2吹干肽树脂，备用；
第二步：sGLP-1树脂的裂解：
取上述肽树脂于容器中，加入裂解液：9.5ml三氟乙酸，0.4ml硫代苯甲醚，0.4ml苯甲醚，0.2ml-1，2-乙二硫醇，于室温避光反应2小时，过滤，滤液于室温浓缩后加入预先冷冻的无水乙醚中，冰冻过夜，离心，弃上清液，沉淀用水或冰醋酸溶解后，冷冻后置冷冻干燥机中干燥，得粗肽；
第三步：sGLP-1肽纯化
取上述粗肽，加入无热源水溶解，得到样品溶液，过滤并收集样品滤液；将乙腈及无热源水用0.45u滤膜过滤，分别加入0.1％三氟乙酸，混匀，用C18反向柱分离纯化，分离条件采用：流动相A：0.1％三氟乙酸+100％H2O；流动相B：0.1％三氟乙酸+100％乙腈；0→90分钟梯度洗脱纯化制备，收集纯化的sGLP-1洗脱液，冷冻后置冷冻干燥机中干燥，得到sGLP-1多肽纯品。
4、根据权利要求1所述的截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)在治疗II型糖尿病药物中的应用。
5、根据权利要求1所述的截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)在治疗II型糖尿病注射针剂、口服片剂或胶囊、喷雾剂中的应用。
6、根据权利要求4所述的截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)在治疗II型糖尿病药物中的应用，其特征在于：注射针剂包含sGLP-1及人体可接受的稀释液体，如注射用水、生理盐水和磷酸盐缓冲液。
7、根据权利要求4所述的截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)在治疗II型糖尿病药物中的应用，其特征在于：口服片剂或胶囊包括sGLP-1及医药可接受的稳定剂、固型剂。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005100478014A CN100374462C (zh) | 2005-11-21 | 2005-11-21 | 截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)、制法及其应用 |
| PCT/CN2006/000562 WO2007056907A1 (fr) | 2005-11-21 | 2006-03-30 | Glucagon-like peptide-1 tronque (sglp-1) et son procede de preparation et son utilisation |
| US11/665,277 US7834142B2 (en) | 2005-11-21 | 2006-03-30 | Shortened glucagon-like peptide 1(sGLP-1) preparation method and application |
| DK06722214.1T DK1953172T3 (da) | 2005-11-21 | 2006-03-30 | TRUNKERET GLUCAGON-LIGNENDE PEPTID-1 (sGLP-1) OG DETS FREMGANGSMÅDE OG ANVENDELSE |
| EP06722214.1A EP1953172B1 (en) | 2005-11-21 | 2006-03-30 | TRUNCATED GLUCAGON-LIKE PEPTIDE-1 (sGLP-1) AND ITS PREPARING METHOD AND USE |
| US12/946,677 US20110144012A1 (en) | 2005-11-21 | 2010-11-15 | Shortened glucagon-like peptide 1(sglp-1) preparation method and application |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005100478014A CN100374462C (zh) | 2005-11-21 | 2005-11-21 | 截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)、制法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1817904A true CN1817904A (zh) | 2006-08-16 |
| CN100374462C CN100374462C (zh) | 2008-03-12 |
Family
ID=36918124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2005100478014A Active CN100374462C (zh) | 2005-11-21 | 2005-11-21 | 截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)、制法及其应用 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7834142B2 (zh) |
| EP (1) | EP1953172B1 (zh) |
| CN (1) | CN100374462C (zh) |
| DK (1) | DK1953172T3 (zh) |
| WO (1) | WO2007056907A1 (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109280083A (zh) * | 2017-07-21 | 2019-01-29 | 苏州瑞德升跃制药技术有限公司 | 具有glp-1受体激动剂活性的glp-1多肽及其用途 |
| CN115353554A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-11-18 | 上海理工大学 | 一种刺激胰高血糖肽-1分泌的活性肽及其制备方法和应用 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA113977C2 (xx) | 2012-02-17 | 2017-04-10 | Фармацевтична композиція з покращеною стабільністю | |
| DK2976325T3 (en) | 2013-03-21 | 2017-06-06 | Sanofi Aventis Deutschland | SYNTHESIS OF PEPTIDE PRODUCTS CONTAINING CYCLIC IMID |
| CA2907454C (en) | 2013-03-21 | 2021-05-04 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of hydantoin containing peptide products |
| HUP1300496A2 (hu) | 2013-08-16 | 2015-03-02 | Egis Gyogyszergyar Nyilvanosan Muekoedoe Reszvenytarsasag | Stabil kombinációs gyógyszerkészítmény |
| CN110386962A (zh) * | 2019-07-04 | 2019-10-29 | 苏州强耀生物科技有限公司 | 一种阿霉素偶联靶向多肽的合成方法 |
| CN114774395B (zh) * | 2022-06-02 | 2023-08-22 | 亿彤科技发展(福建)有限公司 | 肝病检测的高纯度壳多糖酶3样蛋白1抗原表位肽及制法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5118666A (en) * | 1986-05-05 | 1992-06-02 | The General Hospital Corporation | Insulinotropic hormone |
| EP0512042B1 (en) * | 1990-01-24 | 1998-04-08 | BUCKLEY, Douglas I. | Glp-1 analogs useful for diabetes treatment |
| US5545618A (en) * | 1990-01-24 | 1996-08-13 | Buckley; Douglas I. | GLP-1 analogs useful for diabetes treatment |
| US5424286A (en) | 1993-05-24 | 1995-06-13 | Eng; John | Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same |
| US5705483A (en) * | 1993-12-09 | 1998-01-06 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods |
| US6268343B1 (en) * | 1996-08-30 | 2001-07-31 | Novo Nordisk A/S | Derivatives of GLP-1 analogs |
| PL206302B1 (pl) * | 2000-06-16 | 2010-07-30 | Elli Lilly And Companyelli Lilly And Company | Związek GLP-1 |
| EP1351984A2 (en) * | 2000-12-13 | 2003-10-15 | Eli Lilly And Company | Amidated glucagon-like peptide-1 |
| CN1162446C (zh) * | 2001-05-10 | 2004-08-18 | 上海华谊生物技术有限公司 | 促胰岛素分泌肽衍生物 |
| CN1220702C (zh) * | 2003-07-30 | 2005-09-28 | 北京中科亚光生物科技有限公司 | 促胰岛素分泌肽及其用途 |
| AU2005261740A1 (en) * | 2004-07-08 | 2006-01-19 | Novo Nordisk A/S | Polypeptide protracting tags comprising a tetrazole moiety |
| TWI372629B (en) * | 2005-03-18 | 2012-09-21 | Novo Nordisk As | Acylated glp-1 compounds |
-
2005
- 2005-11-21 CN CNB2005100478014A patent/CN100374462C/zh active Active
-
2006
- 2006-03-30 US US11/665,277 patent/US7834142B2/en active Active
- 2006-03-30 DK DK06722214.1T patent/DK1953172T3/da active
- 2006-03-30 WO PCT/CN2006/000562 patent/WO2007056907A1/zh active Application Filing
- 2006-03-30 EP EP06722214.1A patent/EP1953172B1/en not_active Not-in-force
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109280083A (zh) * | 2017-07-21 | 2019-01-29 | 苏州瑞德升跃制药技术有限公司 | 具有glp-1受体激动剂活性的glp-1多肽及其用途 |
| CN109280083B (zh) * | 2017-07-21 | 2023-05-16 | 苏州瑞德升跃制药技术有限公司 | 具有glp-1受体激动剂活性的glp-1多肽及其用途 |
| CN115353554A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-11-18 | 上海理工大学 | 一种刺激胰高血糖肽-1分泌的活性肽及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1953172A4 (en) | 2010-02-17 |
| EP1953172A1 (en) | 2008-08-06 |
| US7834142B2 (en) | 2010-11-16 |
| US20090118172A1 (en) | 2009-05-07 |
| WO2007056907A9 (zh) | 2013-04-11 |
| DK1953172T3 (da) | 2013-12-09 |
| WO2007056907A1 (fr) | 2007-05-24 |
| CN100374462C (zh) | 2008-03-12 |
| EP1953172B1 (en) | 2013-10-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100374462C (zh) | 截短胰高血糖素样肽1(sGLP-1)、制法及其应用 | |
| WO2003018516A2 (en) | Glucagon-like peptide-1 analogs | |
| CN103492412A (zh) | 分枝型peg修饰的glp-1类似物及其可药用盐 | |
| CN102443064A (zh) | 一种基于凝血酶活性的双靶向作用的嵌合多肽及其应用 | |
| CN1724563A (zh) | Exendin4多肽片段 | |
| CN112358529A (zh) | 多肽及其衍生物和水凝胶、以及在制备预防和/或治疗i型糖尿病药物中的应用 | |
| CN103265630B (zh) | 艾塞那肽的制备方法 | |
| CN110128526A (zh) | 长效化艾塞那肽衍生物及其盐与制备方法和用途 | |
| CN103275187A (zh) | 一种镇痛肽fi及其基因和应用 | |
| CN100392070C (zh) | 表达人胰高血糖素样肽-1的基因工程菌及其构建方法和应用 | |
| WO2024098718A1 (zh) | 一种新型长效多肽化合物、组合物及其应用 | |
| CN1651463A (zh) | 一种单甲氧基聚乙二醇－胰岛素复合物及其制备方法 | |
| CN106432471B (zh) | 一种新型非洲爪蟾胰高血糖素样肽-1(glp-1)缀合肽及其应用 | |
| CN100417662C (zh) | 无指盘臭蛙胰岛素释放促进肽和在制药中的应用 | |
| CN1927888B (zh) | Glp-1及其类似物与人溶菌酶融合的重组蛋白及其用途 | |
| CN106699870A (zh) | 长效非洲爪蟾胰高血糖素样肽‑1（glp‑1）类似物及其应用 | |
| CN1309740C (zh) | 可溶性肿瘤坏死因子受体ⅱ－“脂联素”球部融合蛋白 | |
| CN1338463A (zh) | 一种增强多肽在体内稳定性的方法及其应用 | |
| CN100344323C (zh) | 一种人胰高血糖素样肽－1的复合物及其制备方法 | |
| CN107266556A (zh) | 一种非洲爪蟾胰高血糖素样肽‑1（glp‑1）类似物及其应用 | |
| CN1131433C (zh) | 促胰岛素分泌肽生物活性测定方法 | |
| CN101195656B (zh) | 重组日本七鳃鳗口腔腺分泌l-250蛋白抗凝血功效 | |
| CN100445297C (zh) | 棕点湍蛙胰岛素释放促进肽 | |
| CN103087178A (zh) | 长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用 | |
| CN103159851A (zh) | 预防和抑制炎症的小分子多肽及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |