CN1798572A - 用于严重急性呼吸道综合征(SARS)的干扰素β - Google Patents

Abstract

本发明描述了干扰素在制备用于治疗和/或预防严重急性呼吸道综合征(SARS)的药物中的用途。

Description

用于严重急性呼吸道综合征(SARS)的干扰素β

发明领域

本发明涉及干扰素(IFN)在制备用于治疗和/或预防严重急性呼吸道综合征(SARS)的药物中的应用。

发明背景

肺炎(pneumonitis)是一种包括肺泡腔和间质组织的肺实质的急性感染。它可累及整个肺叶(肺叶肺炎)、肺叶的某区段(区段或小叶肺炎)、邻近肺泡到支气管(支气管肺炎)、或间质组织(间织肺炎)。这些通常根据X-线观察进行区别。

在30岁以上的成人中，细菌是肺炎的最常见病因。其中，肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)最为常见。其它病原体包括厌氧细菌、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、流感嗜血杆菌(Haemopholus influenzea)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniea)、鹦鹉热衣原体(C.psittaci)、砂眼衣原体(C.trachomatis)、黏膜炎莫拉菌(Moraxella(Branhamella)catarrhalis)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae)、和其它革兰阴性杆菌。肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)是一种细菌样微生物，在较年长的儿童和年轻成人中特别常见，通常是在春季。在婴儿和儿童中，主要的肺部病原体是病毒：呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus)、副流感病毒(parainfluenza virus)、和流感A，B病毒。这些病原体也可在成人中引起肺炎；但是，在本来健康的成人中唯一常见的病毒是流感A病毒，偶尔是流感B病毒，罕见水痘-带状疱疹病毒。其它病原体是较高级的细菌，包括诺卡菌属(Nocardia)和放线菌属(Actinomyces sp.)；分支杆菌属(Mycobacteria)，包括结核分支杆菌(Mycobacteria tuberculosis)和非典型的菌株(主要是堪萨斯分支杆菌(M.kansasii)和鸟-细胞内分支杆菌(M.avium-intracellulare))；真菌，包括荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、球孢子菌属(Coccidioides immitis)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、和卡氏肺囊虫(Pneumocystiscarinii)；和立克次体族(rickettsiae)，主要是伯纳特立克次体(Coxiella bumetii)(Q热)。

典型的症状包括咳嗽、发热、多痰，通常延续数日，有时伴随胸膜炎。体检可检出呼吸急促和实变体征，如伴有支气管呼吸声的爆裂声。该综合征通常由细菌引起，如肺炎链球菌和流感嗜血杆菌。

诊断的根据是特征性症状结合X-线胸透。

尽管有细菌性肺炎的临床印象，但30-50％的病人没有可鉴定的病原体。虽然经受时间考验的鉴定细菌病原体方法是培养咳出的痰液，但由于痰液经过上气道时可能受到口咽部正常菌群的污染，这些标本常常造成误导。最可靠的标本取自正常无菌部位，如细菌性肺炎病人的血或脓胸病人的胸膜液。需要特殊的培养技术、特殊的染色、血清学试验、或肺活检来鉴定某些病原体：分支杆菌、支原体、厌氧细菌、衣原体、病毒、真菌、军团菌、立克次体、和寄生虫。

治疗包括呼吸支持(明确指出使，可包括O₂)和抗生素(根据革兰染色结果选用)。如果没有进行革兰染色，或者革兰染色不能诊断，就应根据病人年龄、流行病学、病人的风险因子、和疾病严重程度的可能性选用抗生素。

一种严重的非典型性肺炎，即严重急性呼吸道综合征(SARS)，是病因学未知的一种疾病，该病最近已在亚洲、北美和欧洲有所描述。

大多数被鉴定为患有SARS的病人是原来健康的25-70岁的成人。少数SARS疑似病例在年龄不到15岁的儿童中有报道。

SARS的潜伏期一般是2-7天，但一些独立的报告提示潜伏期可长达10天。发病的前驱症状一般是发热(＞100.4°F，〔＞38.0℃〕)。常常是高热，有时伴有发冷和寒战，还可伴有其它症状，包括头痛、不适和肌痛。发病时，一些人有轻度的呼吸症状。通常没有皮疹和神经或胃肠道发现；然而，有些病人在发热前驱症状期间报告有腹泻。

3-7天后，开始出现呼吸状态减弱，同时发生无痰干咳或呼吸困难，可能伴有或发展成低氧血症。在10-20％病例中，呼吸不良严重到需要插喉管和机械供气。符合现行WHO的SARS病例定义的病人中病例死亡率大约是3％。

在发热前驱症状期和整个病程中胸部放射照片都可能是正常的。但是，在相当一部分病人中，呼吸状态的特征表现为早期病灶性间质渗出进展到更普遍的斑片状间质渗出。有些SARS晚期病人的胸部放射照片还显示实变区域。

在病程早期，绝对淋巴细胞计数常常降低。总白细胞计数一般正常或降低。在呼吸不良高峰时，大约50％的病人白细胞减少和血小板减少或血小板计数低于正常(50000-150000个/微升)。在呼吸不良早期，可见肌酸磷酸激酶水平升高(高达3000国际单位/升)和肝转氨酶水平升高(正常值上限的2-6倍)。大多数病人，肾功能保持正常。

疾病的严重程度很不同，从轻度不适到死亡。虽然一些SARS病人的亲密接触者罹患了类似的疾病，但大多数人保持良好。一些亲密接触者报告有轻度发热不适，而无呼吸病征或症状，提示该病可能并非一定发展成呼吸不良状态。

SARS传播的主要途径是人与人的亲密接触。大多数SARS病例涉及护理SARS病人的人或与之一起生活的人，或直接接触SARS病人排出的传染性物质(例如呼吸分泌物)的人。SARS传播的潜在途径包括触摸过被传染性飞沫污染的别人的皮肤或物体，然后又去触摸自己的眼睛、鼻子、或嘴。当某些SARS病人咳嗽或打喷嚏把飞沫撒到自己身上或别人身上或附近表面上时，就会发生这种情况。也有可能通过空气或目前未知的其它途径，可将SARS传播得更广。

迄今的信息表明，当人们出现症状(如发热或咳嗽)时，最具传染性。但是，尚不知道在症状出现之前或之后多久，SARS病人可能会将疾病传染给他人。

疾病控制预防中心(CDC)和其它实验室的科学家已经在SARS病人中检测到一种先前未认识到的冠状病毒。

目前，关于此病的病因只得到初步的资料。主要假说是一种新的冠状病毒引起了SARS(Ksiazek等人，一种与严重急性呼吸道综合征相关的新型冠状病毒。The New England Journal of Medicine. www.nejm.org 16 April2003)。但是，作为潜在的病因，仍在研究其它病毒。

冠状病毒是一族病毒，当在显微镜下观察时，它们具有晕轮样或冠状(晕边)外观。这些病毒是人的轻度到中度上呼吸道疾病的常见的病因，并与动物的呼吸道、胃肠道、肝脏和神经疾病有关。冠状病毒在环境中可存活达3小时之久。

CDC科学家从两位SARS病人的组织分离到一种病毒，并用几种实验室方法对其进行了鉴定。电镜观察揭示，该病毒具有冠状病毒的独特形状和外观，遗传学分析提示，这种新的病毒确实属于冠状病毒科，但与已先前鉴定的该科成员不同。SARS病人的血清样品试验表明，他们看来最近曾被该病毒感染过。其它试验说明，这种先前未认识到的冠状病毒存在于其它与这次爆发直接或间接有关的SARS病人的临床样品中(包括通过鼻和喉拭子得到的样品)。参与世界卫生组织(WHO)网络的实验室报告的这些结果和其它发现，对支持这种新的冠状病毒是SARS病因的假说提供了日益增加的证据。关于该冠状病毒和SASR之间的联系的其它研究还正在进行。

冠状病毒偶尔与人的肺炎有关，特别是免疫系统衰弱的人。该病毒也能引起动物的严重疾病，包括猫、狗、猪、鼠和鸟。

几个参与WHO网络的实验室的研究者已经报告了在SARS病人的临床样品中鉴定到副黏病毒。这些实验室还在研究副黏病毒是SARS病因的可能性。

现在，还不知道最有效的治疗方案(如果有的话)。在一些地区，治疗包括抗病毒药物，如奥赛他米韦(oseltamivir)或利巴韦林(ribavirin)。类固醇也可与利巴韦林和其它抗微生物剂联用，口服或静脉内给予病人。但是，因为缺少对照的临床试验，这些方案的效果仍然未知。实验室实验的早期信息提示，利巴韦林并不能抑制病毒生长或被测的该新型冠状病毒一种分离物的细胞-至-细胞的扩散。正在进行利巴韦林和其它抗病毒药物的进一步实验室检测来观察，是否能发现一种有效的治疗方法。

干扰素是细胞因子，即在细胞之间传递信息并通过帮助摧毁引起感染的微生物和修补任何造成的损伤，因而在免疫系统中起关键作用的可溶性蛋白质。干扰素由受感染的细胞自然分泌，于1957年首次得到鉴定。它们的名字源于它们能“干扰”病毒复制和产生。

干扰素表现出抗病毒和抗增殖活性。根据其生物化学和免疫学性质，天然产生的人干扰素可分为三大类：干扰素-α(白细胞)、干扰素-β(成纤维细胞)和干扰素-γ(免疫)。α-干扰素现已在美国和其它国家被批准用于治疗毛细胞白血病、性病疣、卡波氏肉瘤(通常发生在患有获得性免疫缺陷综合症(AIDS，艾滋病)病人中的一种癌)、以及慢性非甲非乙肝炎。

而且，干扰素(IFN)是机体对病毒感染应答反应中产生的糖蛋白。它们能抑制受保护细胞中的病毒增殖。由于由低分子量蛋白质构成，IFN的作用是显著非特异性的，即，一种病毒诱生的干扰素对其它广范围的病毒有效。但它们是物种特异性的，即，由一种动物产生的IFN只在相同或密切相关种类动物的细胞中才能刺激抗病毒活性。IFN是因其潜在抗肿瘤和抗病毒活性而被开发利用的第一类细胞因子。

这三类主要的IFN称为IFN-α、IFN-β和FN-γ。它们最初是按其细胞来源(白细胞、成纤维细胞或T细胞)分类的。但是，后来知道一种细胞能产生几类IFN。因此白细胞IFN现称为IFN-α，成纤维细胞IFN称为IFN-β，T细胞IFN称为IFN-γ。还有第四类IFN，即“Namalwa”细胞系(衍生自Burkitt氏淋巴瘤)产生的成淋巴细胞样IFN，该细胞系似乎能产生白细胞IFN和成纤维细胞IFN的混合物。

干扰素单位(U)或干扰素国际单位(IU)报告为IFN活性的量度，其定义是能保护50％的细胞免受病毒伤害所需的量。可用于测定生物活性的试验方法是细胞病变效应抑制试验(见Rubinstein等人，1981；Familletti，P.C.，等人，1981中所述)。在该干扰素抗病毒试验中，能产生50％细胞病变作用所需的量约为1单位/毫升干扰素。该单位是用国立卫生研究院提供的Hu-IFN-β国际参照标准品确定的(Pestka，S.1986)。

每一类IFN都含有几个不同的型。IFI-β和IFN-γ各是单一基因的产物。

归类为IFN-α的蛋白质是多样性最大的一组，含有大约15个型。在9号染色体上有一簇IFN-α基因，含有至少23个成员，其中15个是活性和被转录的。成熟的IFN-α没有糖基化。

IFN-α和IFN-β长度相同(165或166个氨基酸)，具有类似的生物活性。IFN-γ的长度为146个氨基酸，与α和β类类似性较少。只有IFN-γ能激活巨噬细胞或诱导杀伤性T细胞的成熟。这些新型的治疗剂有时可称为生物应答修饰剂(BRM)，因为它们在机体对肿瘤的应答中具有作用，通过免疫调节影响识别。

人成纤维细胞干扰素(IFN-β)具有抗病毒活性，也能激治自然杀伤细胞对抗肿瘤细胞。它是一种约20000Da的多肽，由病毒和双链RNA诱生。从用重组DNA技术克隆的成纤维细胞干扰素基因核苷酸序列，(Derynk等人，1980)推导出了该蛋白质的完全氨基酸序列。它的长度为166个氨基酸。

Shepard等人(1981)描述了碱基842的突变(141位Cys→Tyr)，该突变废除了它的抗病毒活性，还描述了一个变体克隆，该克隆删除了1119-1121位的核苷酸。

Mark等人(1984)通过用(A)代替碱基469(T)，造成17位氨基酸从Cys转换为Ser插入一个人造突变。据报道，所产生的IFN-β具有与“天然”IFN-β同样的活性并且在长时间储存(-70℃)中稳定。

Rebif(重组的人干扰素-β)是最近开发的用于多发性硬化病(MS)干扰素治疗的，是哺乳动物细胞系产生的干扰素(IFN)-β1a。

在文献中尚未见报道干扰素单用或与其它抗病毒制剂联用来治疗SARS。

发明内容

本发明的主要目的是干扰素(IFN)单独或与抗病毒制剂联用来制备用于治疗和/或预防严重急性呼吸道综合征(SARS)的药物。

干扰素对抗SARS-CoV(严重急性呼吸道综合征相关的冠状病毒)的两种临床分离物的抗病毒作用业已由法兰克福大学的几位科学家证明(见J.Cintal等人，The Lancet，362，293-294，2003)。在该论文中这些科学家表明，干扰素能在体外抑制SARS-CoV的复制。具体说，他们评价了重组干扰素(IFN-α，IFN-β和IFN-γ)对抗从法兰克福和香港病人的SARS-CoV-FFM-1两种临床分离物在Vero和Caco2细胞中复制的抗病毒潜力。

干扰素-β是最强的，在注射两种分离物后显示了预防性保护作用和抗病毒潜力。而且，这些科学家还测试了病毒感染之前24小时和病毒感染后立即用干扰素-β处理的培养物中抑制病毒复制与抑制病毒诱导的细胞病变效应之间的关联性。在培养物中干扰素-β显示了对感染病毒产生的剂量依赖性抑制作用。

术语“治疗”在本文中指对于疾病进展的任何有益的作用，包括疾病发作后病理学发展的减弱、减轻、减少或降低。

术语“干扰素”或“IFN”在本文中包括文献中如此定义的任何分子，包含例如在上一节“发明背景”中提到的任何类型的IFN。具体说，在上述定义中包括IFN-α，IFN-β和IFN-γ。本发明优选的IFN是IFN-β。适合于本发明的IFN-β可从市场购得，如Rebif(Serono)，Avonex(Biogen)，或Betaferon(Schering)。本发明也优选采用人源干扰素。本文中，干扰素包括它的盐、功能性衍生物、变体、突变蛋白质、融合蛋白质、类似物以及其活性片段。

术语“干扰素-β(IFN-β)”在本文中包括成纤维细胞干扰素，特别是人源的，从生物体液中分离得到的，或通过DNA重组技术从原核或真核宿主细胞得到的，以及它的盐、功能性衍生物、变体、类似物和活性片段。

本文中术语“突变蛋白质”指IFN的类似物，该类似物中天然IFN的一个或多个氨基酸残基被不同的氨基酸残基替代，或被删除，或一个或多个氨基酸残基被加入天然IFN的序列中，但与野生型IFN相比较，所得产物的活性没有显著改变。这些突变蛋白质可用已知的合成技术和/或定点诱变技术，或适合的任何其他已知技术制备。优选的突变蛋白质包括如Shepard等人(1981)或Mark等人(1984)所叙述的那些。

任何这样的突变蛋白质优选具有与IFN序列足够相同的氨基酸序列，从而具有与IFN基本类似或甚至更好的活性。干扰素的生物功能是本领域技术人员公知的，其生物学标准品例如已由国立生物学标准品和控制研究所建立并可从该处获得( http：//immunology.org/links/NIBSC)。

业已描述了测定IFN活性的生物试验方法。例如可按Rubinstein等人1981所述进行IFN试验。因此，通过常规的实验可测定任何给定的突变蛋白质是否具有与IFN基本类似的活性，或甚至其活性比IFN更好。

因此，可用于本发明的IFN突变蛋白质或其编码核酸，包括明确的一组基本上相应的序列作为肽或多肽替代物，本领域技术人员无需过多的实验便可按照本文所提供的说明和指南常规地得到它们。

本发明优选的突变蛋白质的改变是所谓的“保守”性替代。本发明多肽或蛋白质的保守性氨基酸替代可包括一组内的同义氨基酸，它们具有足够类似的理化性质，使得同组成员之间的替代将保留该分子的生物学功能。显然也可在以上定义的序列中进行氨基酸的插入或删除而不改变它们的功能，特别是如果该插入或删除只涉及少数氨基酸，例如，在三十个以下，优选十个以下，并且不要除去或取代对功能性构象至关重要的氨基酸，如半胱氨酸残基。蛋白质和通过这种删除和/或插入产生的突变蛋白质包括在本发明范围之内。

优选同义氨基酸分组是表I所定义的那些。更优选同义氨基酸分组是表II中所定义的那些，最优选同义氨基酸分组是表III中所定义的那些。

表I

优选的同义氨基酸分组

              氨基酸                 同义分组

              Ser                    Ser，Thr，Gly，Asn

              Arg                    Arg，Gln，Lys，Glu，His

              Leu                    Me，Phe，Tyr，Met，Val，Leu

              Pro                    Gly，Ala，Thr，Pro

              Thr                    Pro，Ser，Ala，Gly，His，Gln，Thr

              Ala                    Gly，Thr，Pro，Ala

              Val                    Met，Tyr，Phe，Ile，Leu，Val

              Gly                    Ala，Thr，Pro，Ser，Gly

              Ile                    Met，Tyr，Phe，Val，Leu，Ile

              Phe                    Trp，Met，Tyr，Ile，Val，Leu，Phe

              Tyr                    Trp，Met，Phe，Ile，Val，Leu，Tyr

              Cys                    Ser，Thr，Cys

              His                    Glu，Lys，Gln，Thr，Arg，His

              Gln                    Glu，Lys，Asn，His，Thr，Arg，Gln

              Asn                    Glu，Asp，Ser，Asn

              Lys                    Glu，Gln，His，Arg，Lys

              Asp                    Glu，Asn，Asp

              Glu                    Asp，Lys，Asn，Gln，His，Arg，Glu

              Met                    Phe，Ile，Val，Leu，Met

              Trp                    Trp

表II

更优选的同义氨基酸分组

              氨基酸                 同义分组

              Ser                    Ser

              Arg                    His，Lys，Arg

              Leu                    Leu，Ile，Phe，Met

              Pro                    Als，Pro

              Thr                    Thr

              Ala                    Pro，Ala

              Val                    Val，Met，Ile

              Gly                    Gly

              Ile                    Ile，Met，Phe，Val，Leu

              Phe                    Met，Tyr，Ile，Leu，Phe

              Tyr                    Phe，Tyr

              Cys                    Cys，Ser

              His                    His，Gln，Arg

              Gln                    Glu，Gln，His

              Asn                    Asp，Asn

              Lys                    Lys，Arg

              Asp                    Asp，Asn

              Glu                    Glu，Gln

              Met                    MeL，Phe，Ile，Val，Leu

              Trp                    Trp

表III

最优选的同义氨基酸分组

              氨基酸                 同义分组

              Ser                    Ser

              Arg                    Arg

              Leu                    Leu，Ile，Met

              Pro                    Pro

              Thr                    Thr

              Ala                    Ala

              Val                    Val

              Gly                    Gly

              Ile                    Ile，Met，Leu

              Phe                    Phe

              Tyr                    Tyr

              Cys                    Cys，Ser

              His                    His

              Gln                    Gln

              Asn                    Asn

              Lys                    Lys

              Asp                    Asp

              Glu                    Glu

              Met                    Met，Ile，Leu

              Trp                    Met

可用于本发明在蛋白质中产生氨基酸替代以获得IFN突变蛋白质的例子包括任何已知的方法步骤，如授予Mark等人的美国专利4,959,314，4,588,585和4,737,462；授予Koths等人的5,116,943；授予Namen等人的4,965,195；授予Chong等人的4,879,111；和授予Lee等人的5，017,691；以及在美国专利4,904,584(Shaw等人)中所述的赖氨酸取代的蛋白质。IFN-β的特异性突变蛋白质例如已经由Mark等人在1984年叙述。

术语“融合蛋白”指包含融合于另一个蛋白的IFN或其突变蛋白的多肽，例如其在体液中停留时间延长。因此，IFN可与另一个蛋白质、多肽等，例如免疫球蛋白或其片段融合。

“功能性衍生物”本文包括IFN的衍生物、它们的突变蛋白和融合蛋白，可通过本领域已知的方法，从残基侧链的功能基团或N-或C-末端基团等来制备，并且只要它们仍然是药学上可接受的，即它们不破坏基本上类似于活性IFN的该蛋白质的活性，并且不使含有它们的组合物具有毒性，那么它们都包括在本发明之中。这些衍生物例如可包括，能遮蔽抗原位点并延长IFN在体液中滞留的聚乙二醇侧链。其它衍生物包括羧基的脂肪族酯、羧基与氨或与伯胺或仲胺反应产生的酰胺、氨基酸残基的游离氨基与酰基部分(如烷酰基或碳环芳酰基)形成的N-酰基衍生物，或游离羟基(如丝氨酰或苏氨酰残基的游离羟基)与酰基部分形成的O-酰基衍生物。

作为IFN的“活性部分”，或突变蛋白质和融合蛋白质，本发明涵盖蛋白质分子的多肽链的任何片段或前体，所述蛋白质分子是单独的或与连于其上的结合分子一起，如糖或磷酸残基，或蛋白质分子或糖残基自身的聚集体，前提是所述的部分与相应的IFN比较没有显著降低活性。

术语“盐”本文指上述蛋白质或其类似物的羧基盐和氨基的酸加成盐。羧基盐可通过本领域已知的方法形成，包括无机盐，例如钠、钙、铵、铁或锌盐等，以及与有机碱如与胺，如三乙醇胺、精氨酸或赖氨酸、哌啶、普鲁卡因等形成的盐。酸加成盐包括例如与无机酸如盐酸或硫酸的盐，以及与有机酸例如乙酸或草酸形成的盐。当然，任何这类盐必须保留本发明相关的此蛋白质(IFN)的生物活性，即，与相应受体结合并启动受体信号传递的能力。

根据本发明，可将抗病毒制剂与干扰素联用以强化其有益作用。根据本发明，特别优选将利巴韦林(1-β-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)作为抗病毒制剂。

根据本发明，还特别优选采用重组的人IFN-β和本发明化合物。

最近已经报道了一种特别类型的干扰素变体。所谓的“复合干扰素”(“consensus interferons”)是非天然存在的IFN变体(美国专利6,013,253)。按照本发明的优选实施方案，本发明的化合物与共有序列干扰素联用。

如本发明所用，人复合干扰素(IFN-con)应指一种非天然存在的多肽，它主要包含以IFN-α为代表的大部分天然存在的人白细胞干扰素亚型序列的亚组所共有的氨基酸残基，在一个或多个不存在所有亚型共有氨基酸的位置上，复合干扰素包含在该位置上主要出现的氨基酸，在任何情况下，复合干扰素都不包含在至少一个天然存在的亚型的该位置上都不存在的氨基酸残基。IFN-con包括但不限于美国专利4,695,623，4,897,471和5,541,293所公开的称为IFN-con1，IFN-con2和IFN-con3的氨基酸序列。编码IFN-con的DNA序列可按上述专利所述的方法或用其它标准方法产生。

在另一优选实施方案中，融合蛋白质包括Ig融合物。融合可以是直接的，或通过短接头肽，该接头肽可短至1-3个氨基酸残基或更长，例如13个氨基酸残基的长度。所述的接头可以例如是序列为E-F-M(Glu-Phe-Met)的三肽，或包含Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met的13个氨基酸接头序列，引入在IFN和免疫球蛋白序列之间。形成的融合蛋白质可具有改善的性质，如在体液中滞留时间(半寿期)延长，比活性提高，表达水平提高，或有利于该融合蛋白质的纯化。

在另一优选实施方案中，IFN与Ig分子的恒定区融合。优选与重链区，例如人IgG11的CH2和CH3域融合。Ig分子的其它同工型也适用于产生本发明的融合蛋白质，如同工型IgG₂，IgG₃或IgG₄，或其它Ig类，如IgM或IgA。融合蛋白质可以是单体的或多聚体的，杂合-或纯合多聚体。

在另一优选实施方案中，该功能性衍生物包含至少一个连接于一个或多个功能基团的部分，该功能基团位于一个或多个氨基酸残基侧链上。优选该部分是聚乙二醇(PEG)部分。聚乙二醇化可用已知方法，如WO99/55377中所述的方法进行。

给予个体的剂量(单剂或多剂)根据多种因素而不同，包括药物动力学性能、给药途径、病人状况和特征(性别、年龄、体重、健康、身材)、症状的程度、并行的治疗、治疗的频率和所希望的效果。

人IFN-β的标准剂量范围为每日80000IU/kg-200000IU/kg，或每人每天6-12MIU(百万国际单位)，或每人22-44μg(微克)。按照本发明，优选给予IFN每人每天约1-50μg，更优选约10-30μg，或约10-20μg。

本发明活性成分的给药可通过静脉内、肌肉内或皮下途径。IFN给药的优选途径是皮下途径。

IFN可每日或隔日或以更低的频率给予。优选IFN每周给予一次、两次或三次。

给药的优选途径是皮下给药，如每周给药三次。另一个优选的给药途径是肌肉内给药，如每周一次。

优选每周皮下注射三次22-44μg或6MIU-12MIU的IFN-β。

IFN-β可皮下给药，剂量为隔日25-30μg或8-9.6MIU。

还可每周一次肌肉内给予IFN-β30μg或9.6MIU。

在一优选实施方案中，利巴韦林和IFN-β联合给药，给药剂量为约每人每日100-2000mg，优选每人每日约400-1200mg，更优选每人每日约800-1000mg，或每人每日约1000-1200mg。对于体重小于65kg的病人，常用剂量为每天800mg，对于体重65-85kg的病人，常用剂量为每天1000mg，对于体重超过85kg的病人，常用剂量为每天1200mg。应用的实际剂量可根据病人的需要和待治疗疾病的严重程度而不同。具体情况的合适剂量方案的确定在本领域技能范围内。为方便起见，可按需要在一天里把总日剂量分成几份给药。

在一优选实施方案中，利巴韦林口服给药。

利巴韦林可通过注射或优选口服给药。取决于给药模式，该化合物可与合适的稀释剂和运载体配制形成含有该化合物约0.01-15重量％，优选约1-10重量％的油膏、霜剂、泡沫剂、和溶液。用于注射，利巴韦林是溶液形式或悬浮液形式，溶解或悬浮在生理上相容的溶液中，浓度为约10mg/ml-1500mg/ml。可以静脉内、肌肉内、脑内、皮下或腹腔内注射。

用于口服，利巴韦林可以是胶囊、药片、口服悬浮液或糖浆剂型。药片或胶囊可含有约10-500mg利巴韦林。它们优选含有约300mg利巴韦林。胶囊可采用常用的明胶胶囊，除上述量的利巴韦林外，还可含有少量的(如低于5重量％的)硬脂酸镁或其它赋形剂。药片可含有上述量的该化合物和黏合剂，黏合剂可以是明胶溶液、水淀粉糊、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇水溶液等，可有通常的糖包衣。

本发明化合物和IFN可配制在药物组合物中。

术语“药学上可接受的”指包含不干扰活性组分的生物活性效力，对接受的宿主无毒性的任何运载体。例如，对于胃肠道外给药，可将该活性蛋白质配制在如盐水、右旋糖溶液、血清白蛋白或Ringer氏溶液等运载体中，配成单位剂量形式用于注射。

本发明药物组合物的活性成分可以多种途径给予个体。给药途径包括皮内、透皮(如缓释制剂)、肌肉内、腹腔内、静脉内、皮下、经口、硬膜外、局部、和鼻内途径。可采用任何其它治疗有效的给药途径，例如通过上皮或内皮组织吸收或通过基因治疗，其中将编码活性制剂的DNA给予病人(如通过载体)，使该活性制剂在体内表达分泌。此外，本发明的蛋白质可与生物活性制剂的其他组分，如药学上可接受的表面活性剂、赋形剂、载体、稀释剂和运载体一起给予。

本发明优选皮下途径(给药)。

实施本发明的另一种可能是内源激活IFN基因。在此情况下，采用能诱导和/或增强正常情况下IFN表达沉默的细胞或IFN表达量不足的细胞产生内源性IFN的载体来治疗SARS。该载体可包含调控序列，能在需要表达IFN的细胞中发挥功能。这类调控序列可以例如是启动子或增强子。然后可将该调控序列通过同源重组引入染色体组的正确位置，从而使该调控序列与需要诱导或增强其表达的基因操作性相连接。这种技术一般称为“内源基因活化”(EGA)，在WO91/09955中有描述。

本发明还涉及经遗传修饰以产生IFN的细胞在制备用于治疗和/或预防SARS的药物中的用途。

对于胃肠道外给药(如静脉内、皮下、肌肉内)，可将IFN与药学上可接受的胃肠道外运载体(如水、盐水、右旋糖溶液)和能保持等渗性(如甘露醇)或化学稳定性的添加剂(如防腐剂和缓冲剂)一起配制为溶液、悬浮液、乳液或冻干粉末。该制剂用普通技术灭菌。

按照本发明，可将治疗有效量的本发明的化合物和IFN，在其它治疗方案或药物(如多种药物方案)之前，同时或之后，预防性或治疗性地给予个体。与其它治疗药物同时给予的活性制剂可在相同或不同的组合物中给予。

所有本文引用的参考文献，包括杂志论文或摘要、已出版的或未出版的美国或外国专利申请书、已发布的美国或外国专利或其它参考文献，全部纳入作为参考，包括所引用的参考文献中所有的数据、表、图和文字。此外，本文引用参考文献中所引用的全部参考内容也纳入作为参考。

对已知方法步骤、常规方法步骤、已知方法或常规方法的参考绝不是承认说本发明的任何方面内容，阐述或实施方案已在相关的领域中公开、说明或提出。

前面具体实施方案的叙述已完全揭示了本发明的总体性质，所以其他人无需过多的实验就可以通过应用本领域的知识(包括本文引用参考文献的内容)不难修改和/或修正这些具体实施方案的各种应用，这并不脱离本发明的总体思路。因此，根据本文提供的说明和指南，这些修改或修正均在本发明所公开的实施方案的等价物含义范围之内。应该理解，本文的用辞或术语是为了叙述而不是限制本发明，因此本说明书的术语或用辞应由本领域技术人员借助本文提供的说明和指南，结合本领域普通技术人员的知识加以解释。

实施例

临床试验

采用2种不同剂量的IFN-β进行临床试验。目的是测量SARS CoV-感染的病人的临床结果。该临床结果是定量测定病人鼻咽吸出物中SARS-CoV病毒的滴度和患者的PBMC，以及检测可预见该结果的免疫学参数。

临床试验的设计

第一项临床试验是为儿童设计的。在儿童中进行该试验的理由如下。首先，该疾病在儿童中严重性较小，至今还没有登记到死亡。这可最大程度减少治疗病得很重因而不能耐受该药物初始剂量的病人的风险。而且，从儿科试验得到的经验可安全地应用到成年病人上。

募集18岁以下的年轻病人进行随机对照试验。选择病人的根据是他们的临床状态和肺透视片，按照世界卫生组织所定义的标准。将病人分为3组，每组10个病人：(1)不用IFN-β的对照组，(2)低剂量IFN-β(1百万单位/m²/天)，(3)中等剂量IFN-β(3百万单位/m²/天)。根据他们的临床病程，治疗病人1-4周。治疗结束时评价他们的临床结果，病毒负荷，和免疫应答。

测量CoV-SARS感染的病人的临床结果

在该试验过程中收集了以下病人资料用于分析：发热^*、发冷或寒战、咳嗽^*、呼吸困难或呼吸窘迫^*、肌痛、不适、昏睡或兴奋、营养差、鼻溢、咽喉疼痛、厌食、腹泻或呕吐、头晕或神经学抱怨，以及发疹。(^*号指SARS病人的主要症状)。临床结果的测量根据病人的住院过程、呼吸状态(呼吸困难或发绀)、动脉血气体测定结果、对通气支持的需要和肺透视改变。

病人鼻咽吸出物和粪便中SARS-CoV病毒滴度的测定

收集三周期间：治疗前，第3，6，9，12，15和21天受感染病人的一系列鼻咽吸出物和粪便样品。用FRhK-4细胞培养样品中的SARS-CoV。进行间接免疫荧光试验来鉴定被感染的细胞。细胞用光学显微镜观察细胞病变效应以及测定每毫升病毒滴度。此外，提取样品的总RNA作逆转录和随后的定量-PCR试验，用特异性寡核苷酸引物鉴定SARS-CoV。

收集血清样品用于测定SARS-CoV抗体。

预示治疗结果的免疫学参数

测定IFN-激活的基因的表达，它是外源性IFN体内效果的指标。待测定的IFN激活的基因包括2-5合成酶、PKR和Mx。这些基因是已明确确定的细胞中IFN活性的标志。此外，选出典型的反应者(临床结果较好和治疗后病毒负荷降低)和非反应者(临床结果差和IFN-β治疗后病毒负荷改变很少或没有改变)。

在表述时，用微阵列系统(如Affimetrix)研究病人外周血单核细胞的基因表达谱并进行蛋白质组学研究。这些结果可用于鉴定治疗反应的标志物。

参考文献

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Claims (13)

1.干扰素(IFN)在制备用于治疗和/或预防严重急性呼吸道综合征(SARS)的药物中的用途。

2.IFN与抗病毒制剂联用在制备用于治疗和/或预防SARS的药物中的用途，所述IFN与抗病毒制剂同时、依次或分别使用。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的抗病毒制剂是利巴韦林。

4.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，所述的IFN是重组的人IFN-β。

5.如权利要求1-9任何一项所述的用途，其特征在于，所述的IFN是复合干扰素。

6.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，所述的IFN是至少含有一个免疫球蛋白结构域的融合蛋白质。

7.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，所述的IFN给药剂量是：每人每天约1-50μg，或每人每天约10-30μg，或每人每天约10-20μg。

8.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，所述的IFN每天或隔天给药。

9.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，所述IFN每周给药两次或三次。

10.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，所述的IFN皮下给药。

11.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，所述的IFN肌肉内给药。

12.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，所述抗病毒制剂的给药剂量是：每人每天约100-2000mg，或每人每天约400-1200mg，或每人每天约800-1000mg，或每人每天约1000-1200mg。

13.如前述权利要求任何一项所述的用途，其特征在于，利巴韦林为口服给药。