CN1793311A - 一株降解多氯联苯的兼性厌氧菌及获得方法 - Google Patents
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Abstract
环境生物工程领域中的一株降解多氯联苯的兼性厌氧菌及获得方法，包括：从多氯联苯的污染点取样，经过初筛、分离、纯化菌株，再经筛选及强化驯化PCBs降解菌株的步骤，获得了一株高效降解PCBs的新菌株Raoultella terrigena LY402。该菌株为兼性厌氧菌，能够利用生物表面活性剂蔗糖脂为碳源快速降解2，3′，4，4′－四氯联苯；在好氧情况下对Aroclor1242的70小时降解率为98.02～99.15％；在兼性厌氧情况下，对土壤中Aroclor1260的8天降解率为96.55％。优点：①能够降解不同取代位点的PCBs；②能够利用蔗糖脂高效降解PCBs，无二次污染。
Description
技术领域
本发明特别涉及到从多氯联苯(polychlorinated biphenyls，PCBs)的污染点筛选、分离、纯化并强化驯化出高效降解PCBs的新菌株Raoultella terrigenaLY402，及对该菌株性能的研究，属于环境生物工程领域。
背景技术
近几十年来，化学工业的快速发展使得大量的有害废物被排放到自然环境中，其中，12类有机污染物因为稳定性强、难以自然生物降解、对人体和环境危害巨大而被联合国环境规划署列为优先控制的持久性有毒有机污染物。多氯联苯(polychlorinated biphenyls，PCBs)是其中最具有代表性的一类，也被称为二恶英(dioxins)类似化合物。
PCBs是一组由一个或多个氯原子取代联苯分子中的氢原子而形成的具有广泛应用价值的氯代芳香族化合物，其结构复杂，有209种同系物。PCBs具有优良的稳定性、热传导性和绝缘性，曾在世界范围内被大量生产，主要被作为变压器油、添加剂等应用在电力、化工等行业，80年代中期被停止生产。对PCBs的毒理研究表明，少量的PCBs即可对人产生严重的致癌、致畸作用，极强的稳定性也使其很难被自然界中的微生物降解，会在自然界中长期存在，在动植物体内富集并通过食物链进入人体，对环境和人类健康危害巨大。近十几年来，有关PCBs污染土壤修复方法的研究一直是学术界的研究热点和难点。物理的、化学的及生物的方法均被采用研究PCBs污染点的修复。其中，生物修复方法因具备修复费用低、能彻底清除污染物、不会对环境造成二次污染而被认为是最有前景的修复手段。目前对PCBs的生物修复手段主要通过优势微生物的生物降解实现。微生物降解主要有好氧降解和厌氧降解两种方式。好氧降解是通过开环破坏PCBs，而厌氧降解则是从高氯取代的同系物中通过催化还原移走氯，即把高氯代同系物变成低氯代同系物，通过改变同系物的分布来减少氯取代的数量和位点、降低混合物的毒性而使混合物更易被好氧微生物降解。
迄今为止，PCBs好氧降解和厌氧降解已经有20余年的研究历程，已经从污染点筛选出了40余种PCBs好氧降解菌株，对每种菌株的PCBs降解性能进行了详细的研究，除了少数几株菌能够降解6个氯以下的PCBs外，其余只能降解低于4氯的PCBs[C.MhiritetN.et al，Bioremediation of sites polluted by commercial PCBs：problematical questions andperspectives，Bull Inst Pasteur 1997，95，3-28(review)；贾凌云等，生物降解多氯联苯的研究进展，现代化工，2002(增刊)：24-28；Josephine Borja et al，Polychlorinated biphenyls and their biodegradation(review)，Process Biochemistry 2005(40)：1999-2013]。其中，降解效果最好的是假单胞菌(Pseudomonas sp.)LB400。在美国通用电子公司(General Electric Company GE)的两篇专利U.S.Pat.No.4,843,009和5,009,999中，详细描述了Pseudomonas sp.LB400的筛选、分离和纯化方法，并实验证实：该菌株对低氯取代PCBs占主体的Aroclor 1242(主要为2、3、4氯取代的PCBs)和Aroclor 1254(主要为3、4、5氯取代的PCBs)有较快的降解速率，但对邻位或2，3位点或3，4位点被氯取代的PCBs不具有降解能力，专利中未对高于6氯取代的PCBs进行降解实验，也未对含有大量土著菌的实际土壤进行降解实验。1987年，美国通用电子公司[Bedard，D.L.，J.A.Bergeron.Studies of a PCB-Contaminated Industrial Sludge.In Seventh Progress Report for the Research andDevelopment Program for the Destruction of PCBs.1988，pp.17-21.General Electric Co.Corporate Research and Development，Schenectady，NY.]在纽约附近进行了首次PCBs生物修复的区域放大实验，污染地PCBs的初始浓度范围从50到525ppm。修复方法为将假单胞菌属的LB400菌株投放到污染地，监测PCBs浓度的变化，发现在4个月内，PCBs的浓度只降低了约20％，其降解速率远低于实验室水平。研究过程中发现，在实际PCBs的污染点，高氯取代的PCBs同系物毒性更大，更难被降解。目前，PCBs污染点的生物修复还存在诸多问题没有解决，因而阻碍了生物修复技术在实际污染点的应用。存在的主要问题如下：
(1)目前发现的降解菌株只能降解部分PCBs，邻位或2，3位点或3，4位点被氯取代的PCBs以及6氯以上取代的高毒性PCBs不能被微生物有效降解；
(2)在好氧降解中需要加入联苯作为诱导底物，联苯本身也是一种有毒的有机化合物，其加入会对环境造成二次污染，所以在实际的降解过程中要尽可能解除联苯的添加，必须获得不需要联苯作为底物仍能降解PCBs的菌株；
(3)在实际的PCBs污染点，由于杂菌等环境因素的影响，优势微生物数量和活性受到很大影响，对PCBs的降解效率显著降低，在实际土壤体系中达到明显的降解一般需要几个月甚至几年的时间；
因此，筛选能够降解所有PCB的同系物，特别是降解6氯以上的高毒性PCB同系物的微生物菌株，提高其在实际PCBs污染点的生存能力和降解速率，降低二次污染，是微生物修复技术迈向实用化的关键。
发明内容
本发明的目的是：提供一株降解多氯联苯的兼性厌氧菌株及获得方法，以克服现有技术中存在的：(1)邻位或2，3位点或3，4位点被氯取代的以及6氯以上取代的高毒性PCBs不能被微生物有效降解；(2)联苯作为诱导底物会对环境造成二次污染；(3)在实际污染点降解效率低的不足。特提出本发明的技术解决方案。
本发明的基本构思是：首先从PCBs污染点大量筛选、分离、纯化能够降解PCBs的菌株，从中进一步筛选出高效菌株，以解决邻位或2，3位点或3，4位点被氯取代的以及6氯以上取代的高毒性PCBs不能被有效生物降解的问题。目前，在环境体系中进行有效的筛选，进而进行合理的驯化是获得高效PCBs降解菌株的有效途经。从环境中筛选PCBs降解菌的理论基础是：虽然在自然环境中几乎不存在能够降解PCBs的微生物，但自然界中的微生物尤其是细菌较易发生变异，长期在PCBs存在的环境中生存，基因会发生某些突变，使得某些微生物能够利用或部分利用PCBs，如果将其纯化并在较高的PCBs浓度下进一步驯化、强化，将显著提高其降解能力。因此，在筛选、分离纯化降解菌株方面，采用以联苯为碳源的培养基进行初步筛选，用稀释及平板划线法分离纯化菌株，以对2，3′，4，4′-四氯联苯的降解速率为标准进一步筛选纯菌株，利用联苯培养基中外加PCBs混合物的方法对筛选出的菌株进行反复的强化驯化以稳定菌株性状，提高对PCBs的降解效率。
其次，为了避免联苯作为诱导底物对环境造成二次污染，本发明的基本构思是以能够促进降解菌的生长并能提高PCBs的降解速率为准则筛选能够取代联苯的环境友好碳源。
最后，为了确定降解菌在PCBs实际污染点的降解能力和范围，分别采用水相体系和土壤相体系对低氯和高氯取代的PCBs进行降解实验，并在降解体系中加入取代联苯的碳源，以提高在实际污染点的生物修复效率。
本发明所提出的一株降解多氯联苯的兼性厌氧菌及获得方法，包括：从多氯联苯的污染点取样，经过初筛、分离、纯化菌株，再经筛选及强化驯化PCBs降解菌株的步骤，获得了一株高效降解PCBs的新菌株，其特征在于：
a)经中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC鉴定，该菌株的种属为Raoultella terrigena，别名为Klebsiella terrigena，命名为LY402，保藏中心编号为1420，该菌株是兼性厌氧菌，能够在温度-20℃～60℃、pH值为3.0～12.0的环境中存活，适宜生长的温度为20℃～40℃，适宜生长的pH值为5.0～10.0；
b)该菌株Raoultella terrigena LY402的获得方法，是第一步采用1～3g/L联苯为碳源的培养基进行初筛，利用第二步稀释及平板划线法分离纯化菌株，通过第三步检测不同菌株对2mg/L的2，3′，4，4′-四氯联苯的降解能力进一步筛选，得到该PCBs降解菌株，该菌株对2mg/L的2，3′，4，4′-四氯联苯的3～5天降解率为59.26％～64.69％；为了进一步提高该菌株对PCBs的降降解能力，第四步采用了2g/L联苯及PCBs混合物为碳源进行强化驯化，其中，PCBs是商用Aroclor 1242与Aroclor1260的等量混合物，含量为10-50mg/L，驯化时间为2-3个月，2mg/L的2，3′，4，4′-四氯联苯的3天降解率提高到86.7％，提高了25％以上。
本发明的进一步特征在于：筛选出能够取代联苯、促进PCBs降解的其它碳源，该菌株分别采用联苯、葡萄糖、甘油、非离子表面活性剂OP-10、Tween-20、Tween-80、Triton-100以及生物表面活性剂蔗糖脂为碳源，3天～5天，对2，3′，4，4′-四氯联苯的降解率分别为79.21～85.43％、20.50～28.13％、18.32～25.46％、38.61～46.71％、46.52～57.63％、48.45～63.78％、43.54～55.69％和85.24～86.73％，其中，每种碳源的用量均为2g/L，2，3′，4，4′-四氯联苯的用量为2mg/L，通过筛选证实该菌株利用联苯以外的其它碳源也能降解PCB，并获得了可以取代联苯的高效碳源—蔗糖脂。
应用一株降解多氯联苯的兼性厌氧菌及获得方法，其特征在于：
a)在好氧的水相体系中，针对2mg/L的Arolor1242，在30℃，经过70小时的降解，Aroclor 1242的总降解率为98.02～99.15％，其中不同氯取代PCBs的降解速率为：2氯99.21～99.92％，3氯82.71～99.91％，4氯68.77～99.93％，5氯43.32～86.42％，6氯18.94～77.92％，7氯16.32～51.64％，对2-5氯取代的PCBs降解效率明显高于6-7氯取代物；
b)在兼性厌氧条件下即100％水含量的土壤泥浆体系中，针对2.8mg/Kg土壤的Aroclor1260，在30℃，经过8天降解，Aroclor 1260的总降解率为96.55％，其中，不同氯取代PCBs的降解速率为：2氯15.39～92.59％、3氯7.74～78.99％、4氯-13.65～96.85％、5氯50.31～99.20％、6氯86.91～99.46％、7氯98.87～99.88％、8氯93.36～99.84％，9氯99.55％，对5-9氯PCBs降解效率明显高于2-4氯取代物；
c)在好氧及兼性厌氧的条件下，该菌株能够降解2-9氯不同氯取代位点的PCBs。
本发明的主要优点是：①筛选得到了PCBs高效降解菌株—Raoultellaterrigena LY402，这是目前提出的唯一一株能够降解2-9氯不同取代位点PCBs的兼性厌氧菌，采用该降解菌解决了邻位或2，3位点或3，4位点被氯取代的、以及6氯以上取代的高毒性PCBs不能有效生物降解的难题；②筛选获得了取代联苯的高效碳源—蔗糖脂，解决了联苯作为PCBs降解菌碳源对环境造成的二次污染问题；③在PCBs污染的水相，PCBs(Aroclor1242)的70小时生物降解率达到98.02～99.15％；在土壤相，PCBs(Aroclor1260)的8天的生物降解率达到96.55％，远高于文献值。
附表说明：
共设两个表，分别说明如下：
表1 Raoultella terrigena LY402在水相中对Aroclor 1242中各组分的降解率降解条件：好氧降解，降解时间70小时，降解菌浓度OD650nm＝1.0，Aroclor1242浓度2mg/L，即2ppm，降解的溶液为1ml蔗糖脂合成培养基，降解在30℃、150转/分的摇床中进行。
表头说明：降解率一栏中的1、2、3表示同时进行的三个平行样实验，平行实验即在所有实验条件相同情况下进行的两组或多组实验。
降解率＝降解样中PCBs的减少总量/对照样PCBs的总量×100％
分析设备：日本岛津2010气相色谱仪，电子捕获检测器(ECD)
色谱柱：毛细管气相色谱柱：型号DB-1701，内径0.25mm，涂层厚度0.25μm，长度60m
分析条件：分析时间120分钟，标准品定性，八氯萘作为内标物，进样1μL，不分流进样。程序升温，炉温初始温度150℃，以1.1℃/min的速度升温至280℃，进样口和检测器的温度分别是290℃和310℃，载气：纯度为99.999％的超纯氮。
实验结果：经过70小时的降解，平行实验样1、2、3的Aroclor 1242的总降解率分别为98.02、98.23％和99.15％
其中，不同氯取代PCBs的降解速率分别为：2氯99.21～99.92％，3氯82.71～99.91％，4氯68.77～99.93％，5氯43.32～86.42％，6氯18.94～77.92％，7氯16.32～51.64％，降解结果说明，在好氧情况下，对2-5氯取代的PCBs降解效率明显高于6-7氯取代物。
表2 Raoultella terrigena LY402在土壤相中对Aroclor 1260各组分的降解率降解条件：50g的粘土，Aroelor1260在其中的浓度为2.8mg/kg土壤，即2.8ppm，降解菌浓度为109个/g土壤，土著菌浓度为1011个/g土壤，含水量100％，为兼性厌氧体系，土壤的含水量用蔗糖脂合成培养基调节，在30℃静止放置。
分析仪器、色谱柱、分析条件、降解率计算方法同表1。
实验结果：
(1)降解2天，Aroclor 1260的总降解率为30.71％，其中不同氯取代PCBs的降解速率分别为2氯32.00～61.53％、3氯43.03～83.83％、4氯24.26～83.83％、5氯19.00～42.73％、6氯19.18～20.85％、7氯16.84～43.68％、8氯17.52～29.95％，9氯26.30％；
(2)降解4天，Aroclor 1260的总降解率为76.85％
其中不同氯取代PCBs的降解速率分别为2氯-5.26～84.25％、3氯-41.74～72.07％、4氯-41.64～56.91％、5氯36.67～72.96％、6氯46.96～52.41％、7氯49.33～68.50％、8氯45.86～62.33％，9氯55.99％；
(3)降解6天，Aroclor 1260的总降解率为95.40％
其中不同氯取代PCBs的降解速率分别为2氯26.24～91.43％、3氯63.46～82.45％、4氯-19.04～80.79％、5氯0.83～95.43％、6氯84.27～99.23％、7氯97.01～99.87％、8氯90.16～98.41％，9氯98.32％；
(4)降解8天，Aroclor 1260的总降解率为96.55％；
其中不同氯取代PCBs的降解速率分别为2氯15.39～92.59％、3氯7.74～78.99％、4氯-13.65～96.85％、5氯50.31～99.20％、6氯86.91～99.46％、7氯98.87～99.88％、8氯93.36～99.84％，9氯99.55％。结果说明，在兼性厌氧条件下，对5-9氯PCBs降解效率明显高于2-4氯取代物。
注解：Aroclor是PCBs混合物的商品名称，12代表联苯环上的12个碳原子，42和60分别表示PCBs混合物中氯含量为42％和60％。氯含量越高表示PCBs混合物中高氯代的PCBs同系物越多。
菌种保藏说明：
Raoultella terrigena LY402目前保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市海淀区中关村北一条13号，保藏日期为2005年7月20日，保藏中心编号为1420。
并在此特向专利局提供：(1)中国科学院微生物研究所检测鉴定报告(2005)微检字第139号；(2)中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心所作出的保藏受理通知书及存活性报告书。
具体实施方式
以下详述本发明的最佳实施例。
实施例1：
PCBs降解菌株的筛选
Raoultella terrigena LY402降解菌株的获得是通过筛选、分离纯化、强化驯化等步骤进行，具体如下：
第一步，初步筛选
配制以联苯为碳源并含各种矿物质的液体合成培养基，将PCBs污染土壤加入到合成培养基中，其中能够利用联苯生长的细菌将大量繁殖，将其反复进行传代培养5～10次，依据传代培养的混合菌对2，3′，4，4′-四氯联苯的降解能力确定进一步进行菌株分离纯化的对象。
配置联苯含量分别为1和3g/L的液体合成培养基，培养基中矿物盐组成相同，含量各为：KH2PO41.7g/L，K2HPO44.4g/L，NH4Cl2.1g/L，NaCl3.0g/L，酵母浸膏0.05g/L，MgSO4·7H2O 0.195g/L，MnSO4.H2O 0.05g/L，FeSO4·7H2O 0.01g/L，CaCl2·2H2O 0.003g/L，pH值为7.0-7.2。将从不同污染点采到的土壤样品各取1克，分别加入到50毫升的初筛培养基中，在30℃，150转/分的摇床中培养3-5天，再取菌悬液1毫升，加入到50毫升的初筛培养基中，在相同条件下进行传代培养。传代培养5-10次，其中能够大量繁殖的菌株均能够利用联苯作为碳源。取上述来自不同污染点的菌悬液10毫升，分别加入2，3′，4，4′-四氯联苯，使其浓度为2mg/L，在30℃，150转/分的摇床中降解3-5天，用正己烷萃取2，3′，4，4′-四氯联苯，用气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD)确定2，3′，4，4′-四氯联苯的残余量，其目的是减少进一步分离纯化的工作量。在50个土壤样品的菌悬液中，均发现有利用联苯的微生物生长，但只有三个样品含有能够降解2，3′，4，4′-四氯联苯的微生物。
第二步，菌株的分离纯化
配制联苯液体培养基，组成与第一步相同，但在其中加入10-15g/L的琼脂，使其成为固体培养基并在表面皿中铺成固体平板，将第一步中能够降解2，3′，4，4′-四氯联苯的混合菌悬液分别用无菌水稀释100～10000倍，在固体培养基中划线培养，培养温度为30℃，培养时间2-5天，从中分离出12个不同的单菌落，再用相同成分的液体培养基分别进行传代培养。
第三步，降解PCBs菌株的进一步筛选
取第二步中已经分离纯化的12种细菌的菌悬液各50毫升，离心，取沉淀的菌泥，加入0.1mol/L的磷酸缓冲液中，使其OD650nm＝1.0，分别加入2，3′，4，4′-四氯联苯，使其浓度为2mg/L，在30℃，150转/分的摇床中降解3天和5天，检测其中2，3′，4，4′-四氯联苯的残余量，结果有三个菌株对2，3′，4，4′-四氯联苯有降解，将菌株命名为1号、2号、3号。1号、2号、3号菌株对2，3′，4，4′-四氯联苯的3天和5天的降解率分别为13.21％和18.34％、25.82％和33.51％、59.26％和64.69％，其中3号菌株的降解效果最显著。
第四步，3号菌株的进一步强化驯化
按照第一步的方法制备联苯液体合成培养基，外加10和50mg/L等比例的Aroclor 1242与Aroclor 1260混合物，作为3号菌株的强化驯化培养基，对3号菌株进行3个月的传代培养，培养条件同第一步，其中联苯的用量为2g/L。强化驯化过程中，每隔10天对3号菌株的2，3′，4，4′-四氯联苯降解能力进行一次测试。测试方法为取菌悬液50毫升，离心，取沉淀的菌泥，加入0.1mol/L的磷酸缓冲液中，使其OD650nm＝1.0，分别加入2，3′，4，4′-四氯联苯，使其浓度为2mg/L，在30℃，150转/分的摇床中降解3天，利用GC-ECD检测其中2，3′，4，4′-四氯联苯的残余量，计算降解率。10天、20天、30天、40天、50天、60天、70天、80天、90天对2，3′，4，4′-四氯联苯的相对降解率分别为65.8％、70.1％、78.2％、81.4％、83.2％、85.5％、86.8％、87.1％、86.7％，结果显示出强化驯化能够提高3号菌株的降解效率，但在2个月以后菌株的降解效果已基本稳定，即可将2mg/L的2，3′，4，4′-四氯联苯降解约85％以上，降解能力提高25％以上。
实施例2：
菌株的鉴定和特性：
经中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)鉴定，3号菌株的种属为Raoultella terrigena，别名为Klebsiella terrigena，命名为LY402，该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市海淀区中关村北一条13号，保藏日期为2005年7月20日，保藏中心编号为1420，该菌株是兼性厌氧菌。对该菌株能够生长的温度和酸度范围进行了实验。首先利用200毫升蔗糖脂合成培养基对Raoultella terrigena LY402进行悬浮培养，培养条件与培养基的组成与实施例1中的第一步相同，用紫外分光光度计检测菌体密度达到OD650nm＝1.0时，停止培养，将菌悬液平均分装在20个样品管中，每管的菌悬液体积为10毫升，取出10管进行温度耐受实验，另外10管进行酸度耐受实验。取的温度范围是：-80℃、-20℃、0℃、10℃、20℃、30℃、40℃、60℃、80℃、100℃；pH值范围是：1.0、2.0、3.0、5.0、6.0、7.0、8.0、10.0、12.0、14.0(用0.1mol/L的盐酸和氢氧化钠调节菌悬液的pH值)。20个样品管在上述不同的环境条件下放置24小时，用紫外分光光度计检测菌悬液的密度，用0.1％的次甲基兰染色法检测细胞的存活程度。结果发现，在-80℃、-20℃、0℃、10℃、20℃、30℃、40℃、60℃、80℃、100℃的温度下，悬浮液的菌密度分别是0.83、0.94、0.95、1.08、1.2、1.58、1.45、0.98、0.64、0.34，在100℃，细胞沉降严重，几乎未发现活的细胞。在80℃，部分细胞沉降，有约3/5的细胞存活，在-80℃，约70％的细胞存活，-20℃～60℃，细胞活性较好，但只在20℃～40℃有明显的生长。在不同pH值情况下，LY402生长状况和活性检测结果如下：在pH值为1.0、2.0、3.0、5.0、6.0、7.0、8.0、10.0、12.0、14.0的酸度下，悬浮液的菌密度分别是0.23、0.56、0.85、1.28、1.42、1.67、1.68、1.38、0.92、0.31，在pH1.0及pH14.0，几乎没有LY402存活，在pH2.0的体系中，约有1/3的LY402存活，在pH3.0～12.0，LY402均具有较好的活性，在pH5.0～10.0，LY402有明显的生长。
实施例3
取代联苯、促进PCBs生物降解碳源的筛选
分别以联苯、葡萄糖、甘油、非离子表面活性剂OP-10、Tween-20、Tween-80、Triton-100以及生物表面活性剂蔗糖脂为碳源，外加与实施例1第一步中初筛培养基含量相同的矿物质，制备8种液体合成培养基，其中，碳源的用量为2g/L。取Raoultella terrigena LY402菌悬液1毫升，分别加入到上述50毫升含有不同碳源的8种培养基中，在30℃，150转/分的摇床中培养3-5天，使其达到菌密度OD650nm＞2.0，取出，传代培养3次。分别将不同碳源培养的50毫升菌悬液离心，取沉淀的菌泥，加入0.1mol/L的磷酸缓冲液中，使其OD650nm＝1.0，分别加入2，3′，4，4′-四氯联苯，使其浓度为2mg/L。在30℃，150转/分的摇床中降解3天和5天，利用GC-ECD检测其中2，3′，4，4′-四氯联苯的残余量，计算2，3′，4，4′-四氯联苯降解率分别为79.21％和85.43％、20.50％和28.13％、18.32％和25.46％、38.61％和46.71％、46.52％和57.63％、48.45％和63.78％、43.54％和55.69％、85.24％和86.73％，其中，以生物表面活性剂蔗糖脂为碳源的菌株对2，3′，4，4′-四氯联苯的降解效率最高。
实施例4
Raoultella terrigena LY402对好氧体系中Aroclor 1242的降解
取1ml浓度为2mg/L的Aroclor 1242正己烷溶液，加入到5ml的灭菌瓶中，同样方法制备12瓶，用氮气吹干，使PCBs吸附到玻璃瓶底部。将生长于蔗糖脂合成培养基中的OD650nm＝1.0的菌悬液分别取出1ml加入到上述9个吸附瓶中，剩余的3个吸附瓶加不含降解菌的蔗糖脂合成培养基，以此作为对照样，用8层纱布封口，使空气自由进入，过程完全好氧。其中，每个瓶中Aroclor 1242浓度均为2mg/L，在30℃，150转/分的摇床中降解，降解4、10、70小时，分别取出3瓶降解样、1瓶对照样，正己烷萃取，GC-ECD分析其中Aroclor 1242的浓度，降解率的计算方法是降解样中PCBs的减少总量除以对照样中PCBs的总量再乘以100％。实验结果显示：降解时间为4、10、70小时时，三个平行样Aroclor 1242的总降解率分别为71.87％、74.68％和75.03％；96.13％、97.16％和97.62％；98.02、98.23％和99.15％。在70小时时，对Aroclor 1242中不同氯取代PCBs的降解速率分别为：2氯99.21～99.92％，3氯82.71～99.91％，4氯68.77～99.93％，5氯43.32～86.42％，6氯18.94～77.92％，7氯16.32～51.64％。降解结果说明，在好氧情况下，对2-5氯取代的PCBs降解效率明显高于6-7氯取代物，对于低氯取代PCBs占主体的Aroclor 1242(主要为2氯、3氯、4氯取代的PCBs同系物)，好氧降解效果显著。
实施例5
Raoultella terrigena LY402对兼性厌氧体系中Aroclor1260的降解
取50ml浓度为2.8mg/L的Aroclor1260(主要成分为高氯取代的PCBs)正己烷溶液，与25g的粘土混匀，旋转蒸发除去正己烷，PCBs均匀地吸附在粘土表面，再与25g含有土著菌的粘土混匀。用这一方法制备了每Kg土壤含2.8mgAroclor 1260(2.8ppm)的模拟PCBs污染土壤。利用蔗糖脂合成培养基培养Raoultella terrigena LY402，使其浓度达到OD650nm＝2.0，取菌悬液50ml加入到50g含有2.8mg/Kg土壤的Aroclor1260的粘土中，混合均匀，制成100％水含量的泥浆体系，其中，降解菌浓度为109个/g土壤，土著菌浓度为1011个/g土壤。在30℃静止放置。每隔两天取出2克湿重的泥浆，利用索氏萃取(正己烷为萃取剂)将土壤中的PCBs充分脱附下来、旋转蒸发浓缩，定容，GC-ECD分析其中PCBs同系物含量的变化，利用60米长的DB1701色谱柱定性、定量了从2氯取代～9氯取代的102种PCBs同系物，结果表明：
(1)降解2天，Aroclor 1260的总降解率为30.71％，其中不同氯取代PCBs的降解速率分别为2氯32.00～61.53％、3氯43.03～83.83％、4氯24.26～83.83％、5氯19.00～42.73％、6氯19.18～20.85％、7氯16.84～43.68％、8氯17.52～29.95％，9氯26.30％；
(2)降解4天，Aroclor 1260的总降解率为76.85％，其中不同氯取代PCBs的降解速率分别为2氯-5.26～84.25％、3氯-41.74～72.07％、4氯-41.64～56.91％、5氯36.67～72.96％、6氯46.96～52.41％、7氯49.33～68.50％、8氯45.86～62.33％，9氯55.99％；
(3)降解6天，Aroclor 1260的总降解率为95.40％，其中不同氯取代PCBs的降解速率分别为2氯26.24～91.43％、3氯63.46～82.45％、4氯-19.04～80.79％、5氯0.83～95.43％、6氯84.27～99.23％、7氯97.01～99.87％、8氯90.16～98.41％，9氯98.32％；
(4)降解8天，Aroelor 1260的总降解率为96.55％，其中不同氯取代PCBs的降解速率分别为2氯15.39～92.59％、3氯7.74～78.99％、4氯-13.65～96.85％、5氯50.31～99.20％、6氯86.91～99.46％、7氯98.87～99.88％、8氯93.36～99.84％，9氯99.55％。
从以上结果说明，在100％水含量的泥浆体系中，6氯取代以上的PCBs同系物均得到了有效的降解，8天的降解率为86.91～99.46％，其中，绝大部分高氯取代的PCBs同系物8天的降解率达到90％以上。对于5氯以下取代的PCBs同系物，在降解第二天时，降解速率明显高于6氯取代以上的PCBs同系物，降解效果明显，但随着降解时间的增加，降解速率增加缓慢，明显低于6氯取代以上的PCBs同系物，个别低氯取代的PCBs同系物，其含量在第四天有明显的增加，但随着降解时间的进一步延长，其含量逐渐减少。以上的数据说明，静止的泥浆体系，是一缺氧环境，在降解初期，水中有一定的溶氧量，好氧降解占主导，所以低氯取代同系物降解效果明显，但随着氧气的消耗，体系逐渐转变为缺氧甚至厌氧的环境，高氯取代同系物含量的迅速减少，部分低氯取代PCBs同系物的增加说明高氯取代的PCBs存在明显的脱氯现象，即高氯取代的PCBs同系物脱掉一部分氯原子成为某些低氯取代的PCB。但在缺氧严重的情况下，低氯取代同系物的降解速度缓慢，由此推测，向降解体系中补充空气，提高水中溶氧量，低氯取代的PCBs同系物将得到快速降解。
附表：
表1 Raoultella terrigena LY402在水相中对Aroclor1242中各组分的降解率
| PCB国际标准序列号 | 氯取代位置 | 氯取代数 | 降解率％ | ||
| 1 | 2 | 3 | |||
| 10+4 | 2，6/2，2′ | 2 | 99.21 | 99.55 | 99.84 |
| 9 | 2，5 | 2 | 99.53 | 99.71 | 99.92 |
| 7 | 2，4 | 2 | 99.32 | 99.56 | 99.82 |
| 6 | 2.3′ | 2 | 99.46 | 99.61 | 99.91 |
| 8 | 2，4′ | 2 | 99.37 | 99.83 | 99.67 |
| 19 | 2，2′，6 | 3 | 99.38 | 99.52 | 99.62 |
| 18+17 | 2，2′，5/2，2′，4 | 3 | 99.44 | 99.34 | 99.96 |
| 15 | 4，4’ | 2 | 99.64 | 99.94 | 99.65 |
| 24+27 | 2，3，6/2，3’，6 | 3 | 82.71 | 83.92 | 84.32 |
| 31+28 | 2，4′，5/2，4，4′ | 3 | 95.62 | 94.31 | 96.42 |
| 53+33 | 2，2′，5，6′/2′，3，4 | 4/3 | 87.11 | 88.21 | 86.44 |
| 51+20 | 2，2′，4，6′/2，3，3′ | 4/3 | 99.53 | 99.12 | 99.91 |
| 22+45 | 2，3，4′/2，2′，3，6 | 3/4 | 84.91 | 85.72 | 83.46 |
| 52 | 2，2′，5，5′ | 4 | 99.39 | 99.81 | 99.52 |
| 46+49+47 | 2，2′，3，6′/2，2′，4，5′/2，2′，4，4′ | 4 | 74.43 | 75.36 | 73.43 |
| 44+59+42 | 2，2′，3，5′/2，3，3′，6/2，2′，3，4′ | 4 | 86.61 | 85.34 | 87.26 |
| 64+71 | 2，3，4′，6/2，3′，4′，6 | 4 | 71.23 | 70.33 | 73.34 |
| 67 | 2，3′，4，5 | 4 | 99.80 | 99.61 | 99.93 |
| 63 | 2，3，4’，6 | 4 | 82.21 | 82.95 | 81.76 |
| 40 | 2，2’，3，3’ | 4 | 87.45 | 86.53 | 88.43 |
| 70 | 2，3′，4′，5 | 4 | 69.37 | 70.22 | 68.77 |
| 95+66 | 2，3′，4，4′/2，2′，3，5′，6 | 4/5 | 81.97 | 80.75 | 82.81 |
| 91 | 2，2′，3，4′，6 | 5 | 74.10 | 75.84 | 73.29 |
| 101 | 2，2′，4，5，5′ | 5 | 69.84 | 68.55 | 70.42 |
| 60+99 | 2，3，4，4′/2，2′，4，4′，5 | 4/5 | 85.30 | 84.21 | 86.42 |
| 56 | 2，3，3′，4′ | 4 | 70.4 | 71.32 | 68.96 |
| 84 | 2，2′，3，3′，6 | 5 | 76.91 | 77.12 | 76.43 |
| 119 | 2，3′，4，4′，6 | 5 | 81.13 | 80.91 | 81.67 |
| 83 | 2，2’，3，3’ | 4 | 89.26 | 88.63 | 90.72 |
| 97+105 | 2，2’，3’4，5/2，3，3′，4，4′ | 5 | 58.54 | 57.91 | 59.42 |
| 87 | 2，2′，3，4，5′ | 5 | 78.91 | 79.21 | 78.56 |
| 85+136 | 2，2′，3，4，4′/2，2′，3，3′，6，6′ | 5/6 | 52.98 | 53.53 | 52.32 |
| 110+151 | 2，3，3′，4′，6/2，2′，3，5，5′，6 | 5/6 | 47.45 | 46.03 | 48.14 |
| 147+144+77 | 3，3′，4，4′/2，2′，3，4′，5，6/2，2′，3，4，5′，6 | 4/5/6 | 60.84 | 63.91 | 56.85 |
| 124 | 2′，3，4，5，5′ | 5 | 48.78 | 45.82 | 51.33 |
| 118+123 | 2，3′，4，4′，5/2′，3，4，4′，5 | 5 | 57.33 | 55.22 | 59.01 |
续表1首页
| 114+146 | 2，3，4，4′，5/2，2′，3，4′，5，5′ | 5/6 | 58.81 | 53.91 | 64.1 |
| 153 | 2，2′，4，4′，5，5′ | 6 | 76.11 | 77.92 | 75.31 |
| 122 | 2′，3，3′，4，5 | 5 | 45.46 | 48.13 | 43.32 |
| 132+179 | 2，2′，3，3′，4，6′/2，2′，3，3′5，6，6′ | 6/7 | 21.91 | 24.14 | 18.94 |
| 141 | 2，2′，3，4，5，5′ | 6 | 31.12 | 28.78 | 33.53 |
| 176+105 | 2，2′，3，3′，4，6，6′/2，3，3′，4，4′ | 7/5 | 51.64 | 46.32 | 53.21 |
| 137 | 2，2′，3，4，4′，5 | 6 | 32.43 | 28.03 | 36.01 |
| 130 | 2，2′，3，3′，4，5′ | 6 | 34.87 | 30.23 | 36.75 |
| 138+163+164 | 2，2′，3，4，4′，5′/2，3，3′，4′，5，6/2，3，3′，4′，5′，6 | 6 | 27.15 | 29.01 | 24.97 |
| 187 | 2，2′，3，4′，5，5′，6 | 7 | 18.78 | 15.98 | 20.34 |
| 174 | 2，2′，3，3′，4，5，6′ | 7 | 24.63 | 22.73 | 26.82 |
| 177 | 2，2′，3，3′，4′，5，6 | 7 | 17.25 | 16.32 | 18.95 |
| 171 | 2，2′，3，3′，4，4′，6 | 7 | 20.91 | 18.04 | 26.86 |
| 157 | 2，3，3′，4，4′，5′ | 6 | 37.13 | 35.40 | 40.83 |
表2 Raoultella terrigena LY402在土壤相中对Aroclor 1260各组分的降解率
| PCB国际标准序列号 | 氯取代数 | 氯取代位置 | 降解率％ | |||
| 2天 | 4天 | 6天 | 8天 | |||
| 206 | 9 | 2，2′，3，3′，4，4′，5，5′， | 26.30 | 55.99 | 98.32 | 99.55 |
| 194 | 8 | 2，2′，3，3′，4，4′，5，5′ | 17.52 | 51.60 | 97.97 | 99.62 |
| 195 | 8 | 2，2′，3，3′，4，4′，5，6 | 19.20 | 51.39 | 96.47 | 99.68 |
| 196+203 | 8/8 | 2，2′，3，3′，4，4′，5′，6/2，2′，3，4，4′，5，5，6 | 17.66 | 50.03 | 97.80 | 99.84 |
| 170+190 | 7 | 2，2′，3，3′，4，4′，5/2，3，3′，4，4′，5，6 | 16.84 | 51.35 | 97.86 | 99.48 |
| 199 | 8 | 2，2′，3，3′，4，5，6，6′ | 23.88 | 45.86 | 90.16 | 93.36 |
| 198 | 8 | 2，2′，3，3′，4，5，5′，6 | 29.95 | 62.33 | 98.02 | 96.76 |
| 191 | 7 | 2，3，3′，4，4′，5′，6 | 21.10 | 51.79 | 98.61 | 98.93 |
| 200 | 8 | 2，2′，3，3′，4，5′，6，6′ | 20.24 | 48.69 | 98.41 | 99.10 |
| 193 | 7 | 2，3，3′，4′，5，5′，6 | 20.30 | 50.84 | 99.48 | 99.65 |
| 180+197+157 | 7/8/7 | 2，2′，3，4，4′，5，5′/2，2′，3，3′，4，4′，6，6′/2，3，3′，4，4′，5′ | 17.06 | 53.61 | 97.04 | 99.36 |
| 172 | 7 | 2，2′，3，3′，4，5，5′ | 19.46 | 50.38 | 97.36 | 99.09 |
| 156 | 6 | 2，3，3′，4，4′，5 | 23.99 | 52.41 | 98.04 | 99.69 |
| 173 | 7 | 2，2′，3，3′，4，5，6 | 43.68 | 68.50 | 97.15 | 98.87 |
| 171 | 7 | 2，2′，3，3′，4，4′，6 | 23.77 | 52.22 | 97.32 | 99.34 |
| 177 | 7 | 2，2′，3，3′，4′，5，6 | 20.58 | 49.33 | 97.05 | 99.22 |
续表2首页
| 128 | 6 | 2，2′，3，3′，4，4′ | 19.61 | 49.85 | 97.29 | 99.41 |
| 174 | 7 | 2，2′，3，3′，4，5，6′ | 19.60 | 49.79 | 99.87 | 99.88 |
| 129+183 | 6/7 | 2，2′，3，3′，4，5/2，2′，3，4，4′，5′，6 | 18.35 | 49.23 | 97.58 | 99.44 |
| 187 | 7 | 2，2′，3，4′，5，5′，6 | 19.89 | 50.47 | 97.01 | 99.19 |
| 164 | 6 | 2，3，3′，4′，5′，6 | 20.85 | 51.46 | 99.23 | 99.26 |
| 138+163 | 6/6 | 2，2′，3，4，4′，5′/2，3，3′，4′，5，6 | 19.18 | 50.63 | 97.26 | 99.41 |
| 130 | 6 | 2，2′，3，3′，4，5′ | 20.45 | 49.74 | 97.04 | 98.80 |
| 137 | 6 | 2，2′，3，4，4′，5 | 20.48 | 51.22 | 94.80 | 96.42 |
| 141+176+105 | 6/7/5 | 2，2′，3，4，5，5′/2，2′，3，3′，4，6，6′/2，3，3′，4，4′ | 19.47 | 49.34 | 96.86 | 98.88 |
| 132+179 | 6/7 | 2，2′，3，3′，4，6′/2，2′，3，3′5，6，6′ | 19.76 | 47.76 | 96.91 | 99.46 |
| 153+122 | 6/5 | 2，2′，4，4′，5，5′/2′，3，3′，4，5 | 19.65 | 50.40 | 96.93 | 99.24 |
| 114+146 | 5/6 | 2，3，4，4′，5/2，2′，3，4′，5，5′ | 22.33 | 47.90 | 95.62 | 98.56 |
| 134 | 6 | 2，2′，3，3′，5，6 | 25.64 | 48.47 | 84.27 | 86.91 |
| 131 | 6 | 2，2′，3，3′，4，6 | 23.35 | 52.38 | 99.04 | 99.08 |
| 118+123 | 5/5 | 2，3′，4，4′，5/2′，3，4，4′，5 | 24.79 | 46.91 | 93.47 | 96.10 |
| 124+149+107 | 5/6/5 | 2′，3，4，5，5′/2，2′，3，4′，5′，6/2，3，3′，4′，5 | 18.95 | 48.61 | 96.15 | 99.16 |
| 77+147+144 | 4/6/6 | 3，3′，4，4′/2，2′，3，4′，5，6/2，2′，3，4，5′，6 | 22.47 | 49.97 | 95.90 | 98.64 |
| 135 | 6 | 2，2′，3，3′，5，6 | 20.71 | 48.60 | 96.48 | 99.24 |
| 151 | 6 | 2，2′，3，5，5′，6 | 20.23 | 46.96 | 96.53 | 99.42 |
| 110 | 5 | 2，3，3′，4′，6 | 20.21 | 47.13 | 94.81 | 97.19 |
| 85+136 | 5/6 | 2，2′，3，4，4′/2，2′，3，3′，6，6′ | 22.61 | 38.61 | 84.20 | 88.02 |
| 87 | 5 | 2，2′，3，4，5′ | 21.51 | 47.39 | 92.44 | 95.15 |
| 97 | 5 | 2，2′，3′，4，5 | 22.31 | 42.08 | 75.85 | 86.49 |
| 119 | 5 | 2，3′，4，4′，6 | 42.73 | 36.67 | 0.83 | 50.31 |
| 84 | 5 | 2，2′，3，3′，6 | 26.80 | 47.35 | 86.90 | 89.05 |
| 56 | 4 | 2，3，3′，4′ | 34.25 | 29.47 | 51.79 | 64.39 |
| 60+99 | 4/5 | 2，3，4，4′/2，2′，4，4′，5 | 26.73 | 38.48 | 73.53 | 76.97 |
| 101 | 5 | 2，2′，4，5，5′ | 19.00 | 45.30 | 95.43 | 98.35 |
| 90 | 5 | 2，2′，3，4′，5 | 31.16 | 72.96 | 75.77 | 99.20 |
| 55+92 | 4/5 | 2，3，3′，4/2，2′，3，5，5′ | 23.67 | 45.89 | 94.21 | 96.85 |
| 91 | 5 | 2，2′，3，4′，6 | 41.26 | 46.61 | 82.80 | 85.38 |
| 66+95 | 4/5 | 2，3′，4，4′/2，2′，3，5′，6 | 21.63 | 39.27 | 91.76 | 94.33 |
| 70 | 4 | 2，3′，4′，5 | 34.49 | 39.38 | 70.97 | 74.34 |
| 67 | 4 | 2，3′，4，5 | 44.27 | -23.84 | 25.39 | 22.14 |
续表2次页
| 37+41 | 3/4 | 3，4，4′/2，2′，3，4 | 83.83 | -34.49 | -19.04 | -2.10 |
| 64+71 | 4/4 | 2，3，4′，6/2，3′，4′，6 | 26.14 | -41.64 | -17.80 | -13.65 |
| 42 | 4 | 2，2′，3，4′ | 38.15 | 13.14 | 37.06 | 38.16 |
| 44+59 | 4/4 | 2，2′，3，5′/2，3，3′，6 | 34.12 | 38.31 | 68.40 | 70.56 |
| 48 | 4 | 2，2′，4，5 | 31.62 | 56.91 | 55.63 | 52.60 |
| 46+49+47 | 4/4/4 | 2，2′，3，6′/2，2′，4，5′/2，2′，4，4′ | 36.29 | 52.42 | 72.18 | 74.18 |
| 52 | 4 | 2，2′，5，5′ | 24.26 | 42.21 | 80.79 | 82.10 |
| 45 | 4 | 2，2′，3，6 | 67.48 | 54.02 | 51.27 | 23.42 |
| 22 | 3 | 2，3，4′ | 64.29 | 51.15 | 49.99 | 53.64 |
| 51+20 | 4/3 | 2，2′，4，6′/2，3，3′ | 57.56 | 40.83 | 48.65 | 51.12 |
| 53+33 | 4/3 | 2，2′，5，6′/2′，3，4 | 43.03 | -47.74 | -18.81 | -17.97 |
| 31+28 | 3/3 | 2，4′，5/2，4，4′ | 46.73 | 41.29 | 63.46 | 59.88 |
| 26+25 | 3/3 | 2，3′，5/2，3′，4 | 43.43 | 59.30 | 69.46 | 52.62 |
| 16 | 3 | 2，2′，3 | 55.25 | 72.07 | 82.45 | 69.41 |
| 32+34 | 3/3 | 2，4′，6/2′，3，5 | 56.99 | 59.50 | 60.15 | 54.23 |
| 18+17 | 3/3 | 2，2′，5/2，2′，4 | 43.38 | 56.52 | 81.10 | 78.99 |
| 19 | 3 | 2，2′，6 | 55.60 | 41.40 | 67.16 | 7.74 |
| 8 | 2 | 2，4′ | 61.53 | 55.08 | 86.50 | 17.17 |
| 6 | 2 | 2，3′ | 32.00 | 84.25 | 91.43 | 92.59 |
| 10+4 | 2/2 | 2，6/2，2′ | 56.39 | -5.26 | 26.24 | 15.39 |
Claims (3)
1.一株降解多氯联苯的兼性厌氧菌及获得方法，包括：从多氯联苯的污染点取样，经过初筛、分离、纯化菌株，再经筛选及强化驯化PCBs降解菌株的步骤，获得了一株降解PCBs的新菌株，其特征在于：
a)经中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC鉴定，该菌株的种属为Raoultella terrigena，别名为Klebsiella terrigena，命名为LY402，保藏中心编号为1420，该菌株是兼性厌氧菌，能够在温度-20℃～60℃、pH值为3.0～12.0的环境中存活，适宜生长的温度为20℃～40℃，pH值为5.0～10.0；
b)该菌株Raoultella terrigena LY402的获得方法，是第一步采用1～3g/L联苯为碳源的培养基进行初筛，利用第二步稀释及平板划线法分离纯化菌株，通过第三步检测不同菌株对2mg/L的2，3′，4，4′-四氯联苯的降解能力进一步筛选，得到该PCBs降解菌株，该菌株对2mg/L的2，3′，4，4′-四氯联苯的3～5天降解率为59.26％～64.69％；为了进一步提高该菌株对PCBs的降解能力，第四步采用了2g/L联苯及PCBs混合物为碳源进行强化驯化，其中，PCBs是商用Aroclor 1242与Aroclor 1260的等量混合物，含量为10-50mg/L，驯化时间为2-3个月，2mg/L的2，3′，4，4′-四氯联苯的3天降解率提高到86.7％，提高了25％以上。
2.根据权利要求1所述的一株降解多氯联苯的兼性厌氧菌及获得方法，其特征在于：筛选出能够取代联苯、促进PCBs降解的其它碳源，菌株Raoultellaterrigena LY402分别采用联苯、葡萄糖、甘油、非离子表面活性剂OP-10、Tween-20、Tween-80、Triton-100以及生物表面活性剂蔗糖脂为碳源，3天～5天，对2，3′，4，4′-四氯联苯的降解率分别为79.21～85.43％、20.50～28.13％、18.32～25.46％、38.61～46.71％、46.52～57.63％、48.45～63.78％、43.54～55.69％和85.24～86.73％，其中，每种碳源的用量均为2g/L，2，3′，4，4′-四氯联苯的用量为2mg/L，通过筛选证实该菌株利用联苯以外的其它碳源也能降解PCB，并获得了可以取代联苯的高效碳源—蔗糖脂。
3.应用权利要求1或2所述的一株降解多氯联苯的兼性厌氧菌及获得方法，其特征在于：
a)在好氧的水相体系中，针对2mg/L的Arolor1242，在30℃，经过70小时的降解，Aroclor 1242的总降解率为98.02～99.15％，其中不同氯取代PCBs的降解速率为：2氯99.21～99.92％，3氯82.71～99.91％，4氯68.77～99.93％，5氯43.32～86.42％，6氯18.94～77.92％，7氯16.32～51.64％，对2-5氯取代的PCBs降解效率明显高于6-7氯取代物；
b)在兼性厌氧条件下即100％水含量的土壤泥浆体系中，针对2.8mg/Kg土壤的Aroclor 1260，在30℃，经过8天降解，Aroclor 1260的总降解率为96.55％，其中，不同氯取代PCBs的降解速率为：2氯15.39～92.59％、3氯7.74～78.99％、4氯-13.65～96.85％、5氯50.31～99.20％、6氯86.91～99.46％、7氯98.87～99.88％、8氯93.36～99.84％，9氯99.55％，对5-9氯PCBs降解效率明显高于2-4氯取代物；
c)在好氧及兼性厌氧的条件下，该菌株能够降解2-9氯不同氯取代位点的PCBs。
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