CN103789209B - 一种多氯联苯降解菌的筛选方法及一株多氯联苯降解菌 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多氯联苯降解菌的筛选方法及一株多氯联苯降解菌。该方法适用于从多氯联苯污染土壤中分离多氯联苯好氧降解菌。本发明中所提供的多氯联苯降解菌鉴定为Sphingobium fuliginis HC3。该菌在好氧条件下能有效降解一氯、二氯和三氯联苯，还能降解苯甲酸、3-氯苯甲酸和4-氯苯甲酸。将菌株HC3接种于多氯联苯污染土壤后，能明显促进土壤中一氯至四氯联苯的降解，10天内多氯联苯总降解率达44.91%，比对照组高约一倍。菌株HC3能在有氧条件下降解低氯代多氯联苯及低氯代苯甲酸，因此可被应用于多氯联苯污染土壤的生物修复工程中，以促进多氯联苯的彻底降解、提高修复效率。

Description

一种多氯联苯降解菌的筛选方法及一株多氯联苯降解菌

技术领域

本发明涉及一种多氯联苯降解菌的筛选方法和一株多氯联苯降解菌Sphingobium fuliginisHC3，具体涉及从多氯联苯污染土壤中富集、分离并纯化出多氯联苯降解菌株的方法，以及运用此方法获得的能在好氧条件下降解低氯代多氯联苯及低氯代苯甲酸的菌株Sphingobiumfuliginis HC3，属于环境微生物工程领域。

背景技术

多氯联苯（polychlorinated biphenyls,PCBs）是联苯中的氢原子被氯原子不同程度取代所形成的一大类化合物，共有209种[曹先仲,陈花果,申松梅等.多氯联苯的性质及其对环境的危害.中国科技论文在线,2008,3(5):375-381]。多氯联苯结构稳定，在自然环境中的半衰期长达几年到几十年[Aronstein B N,Paterek J R.Effect of nonionic surfactant on degradation ofglass-sorbed PCB congeners by integrated chemical-biological treatment.EnvironmentalToxicology and Chemistry,1995,14(5):1572-1583]。由于其亲脂性强，故进入环境后极易通过食物链富集在人类和动物体内，并对生殖、遗传、免疫、神经等系统造成严重危害，甚至诱发机体癌变[孙红斌,刘亚云,陈桂株.微生物降解多氯联苯的研究进展.生态学杂质,2006,25(12):1564-1569]。因此被《斯德哥尔摩公约》列为首批受控的持久性有机污染物之一。据统计，世界上多氯联苯总量约120万t[Robertson L W,Hansen L G.PCBs:recent advance inenvironmental toxiology and health effects.Lexington:University Press of Kentucky,2001:17-26]，其中约有31%流失到环境中。由于多氯联苯的疏水性强，因此极易吸附在土壤颗粒上并长期蓄积土壤中。我国许多地区的土壤中均可检测出多氯联苯。浙江台州市某电子垃圾拆解区附近农田土壤中类二噁英多氯联苯的平均含量达167.7μg/kg[Shen C F,Huang S B,Wang Z J,etal.Identification of Ah receptor agonists in soil of e-waste recycling sites from Taizhou area inChina.Environmental Science&Technology,2008,42(1):49-55]。广东贵屿某电子垃圾处置处理区附近河流沉积物中多氯联苯含量达743μg/kg[孙朋,于云江,李定龙等.电子垃圾对环境与健康的影响研究进展.环境与健康杂志,2008,25(5):452-455]，而瑞典规定的多氯联苯污染土壤指导值仅为20μg/kg。我国珠江三角洲地区的河流表层沉积物中多氯联苯的含量为11.54～485.45μg/kg，属于中等至严重程度污染[康跃惠,麦碧娴,盛国英等.珠江三角洲河口及邻近海区沉积物中含氯有机污染物的分布特征.中国环境科学,2000,20(3):245-249]。因此，亟需开发实用性强的修复技术解决多氯联苯带来的环境问题。

物理修复技术（如热处理技术、热解吸技术、土壤淋洗技术和溶剂萃取技术等）以及化学修复技术（如化学氧化技术、化学还原技术等）仍是目前多氯联苯污染土壤修复工程中的常用技术。但易造成二次污染、破坏土壤生物学功能以及运行成本高等缺点限制了这些技术的推广应用。因此，上述技术适合处理高浓度多氯联苯污染土壤，而对于面积更大的中低浓度多氯联苯污染土壤而言，这些技术明显难以适用。生物强化法则是通过添加特定的污染物降解菌或酶来提高污染物的降解速率。例如通过添加多氯联苯降解菌，促进土壤中多氯联苯转化与降解，最终使其彻底分解或无害化[Federici E,Giubilei M,Santi G,et al.Bioaugmentationof a historically contaminated soil by polychlorinated biphenyls with Lentinus tigrinus.MicrobialCell Factories,2012,11(1):1-14;Master E R,Lai V W M,Kuipers Bianca,et al.Sequentialanaerobic-aerobic treatment of soil contaminated with weathered Aroclor1260.EnvironmentalScience&Technology,2002,36(1):100-103]。该技术具有对环境扰动小、不产生二次污染、运行成本低等特点。而从环境中获得优良的多氯联苯降解菌则是开发这一技术的关键。

目前研究工作者已经从环境中分离出了一些能够在好氧条件下降解多氯联苯的微生物，主要分布在Rhodococcus、Alcaligenes、Pseudomonas、Sphingomonas及Burkholderia等属。但是，迄今为止应用此类微生物修复多氯联苯污染场地的工程案例仍然较少。其根本原因是多氯联苯降解菌资源不够丰富。微生物所能降解的多氯联苯的种类是有限的，而且降解效率也有高低之分。环境中常见的多氯联苯有60～90种，依靠一两株降解菌是无法将其全部降解的。因此，必须从环境中筛选出更多的多氯联苯降解菌，并以这些降解菌为基础构建出多氯联苯降解谱较宽的微生物菌群，才有可能提高生物强化法修复多氯联苯污染场地的效果。

多氯联苯在好氧条件下完全降解需要经历两个阶段：1）多氯联苯开环分解成相应的氯代苯甲酸和脂肪酸；2）氯代苯甲酸和脂肪酸继续分解并最终矿化。而许多微生物在降解多氯联苯的过程中会积累氯代苯甲酸[Pieper D H,Seeger M.Bacterial metabolism of polychlorinatedbiphenyls.Journal of Molecular Microbiology and Biotechnology,2008,15:121-138]。氯代苯甲酸不仅能抑制微生物生长、影响多氯联苯降解效率，还能对环境构成潜在的危害[Keshavarz M H,Gharagheizi F,Shokrolahi A,et al.Accurate prediction of the toxicity of benzoic acid compoundsin mice via oral without using any computer codes.Journal of Hazardous Materials,2012,237-238:78-101]。目前所报道的多氯联苯降解微生物中，仅有极少数的微生物能同时降解多氯联苯及其中间产物氯代苯甲酸，如Rhodocuccus sp.RHA1、Burkholderia xenovorans LB400和Dyellaginsengisoli LA-4[Seto M,Kimbara K,Shimura M,et al.A novel transformation ofpolychlorinated biphenyls by Rhodococcus sp.strain RHA1.Applied and EnvironmentalMicrobiology,1995,61(9):3353-3358;Denef V J,Park J,Tsoi T V,et al.Biphenyl and benzoatemetabolism in a genomic context:outlining genome-wide metabolic networks in Burkholderiaxenovorans LB400.Applied and Environmental Microbiology,2004,70(8):4961-4970;Li A,Qu YY,Zhou J T,et al.Isolation and characteristics of a novel biphenyl-degrading bacterial strain,Dyella ginsengisoli LA-4.Journal of Environmental Sciences,2009,21(2):211-217]。因此，今后仍需从环境中不断筛选多氯联苯降解菌，以积累更多优良的降解菌（多氯联苯降解谱较宽、能降解氯代苯甲酸），从而为生物强化技术提供充足的微生物资源，同时也能为高效工程菌的构建提供基因资源。

由于多氯联苯的生物可利用性低，并且对微生物有毒害作用，因此常规的微生物富集分离方法较难获得多氯联苯降解菌。而目前尚缺乏从环境中筛选多氯联苯降解菌的可靠方法。有鉴于多氯联苯降解菌的重要性，故开发一种简单、可靠的方法从多氯联苯污染源分离多氯联苯降解菌意义重大。

发明内容

针对多氯联苯降解菌较难分离的特点及当前优良多氯联苯降解菌缺乏的现状，本发明提供一种简单、可靠的多氯联苯好氧降解菌的筛选方法及一株多氯联苯降解菌Sphingobiumfuliginis HC3。菌株HC3是依据本发明所述筛选方法获得的多氯联苯降解菌之一，该菌能降解低氯代多氯联苯，尤其还能降解低氯代苯甲酸。

本发明采用的技术方案是：

多氯联苯降解菌的筛选方法：

1）从受多氯联苯长期污染的区域采集污染土样；

2）取土样接种到以200～300mg/L联苯为唯一碳源的无机盐培养基中，180r/min、30℃恒温振荡培养，并进行连续传代富集，以联苯颗粒完全消失作为传代转接的依据；当无机盐培养基中的联苯颗粒能在24h内消失、培养基颜色呈现无色到亮黄色再到浅黄色的变化过程时，表明培养基中联苯降解菌的丰度较高，将该培养基稀释涂布于琼脂平板并喷洒联苯；挑取能导致琼脂平板上出现透明圈或黄色晕圈的菌落划线纯化，得到初筛菌株；所述的无机盐培养基含KH₂PO₄1.00g/L，K₂HPO₄·3H₂O3.00g/L，MgSO₄0.15g/L，FeSO₄0.01g/L，CaCl₂0.005g/L，NaCl1.00g/L，(NH₄)₂SO₄0.50g/L，微量元素溶液0.1%(v/v)，pH7.2；所述的微量元素溶液含Na₂Mo₄·H₂O6.70g/L，ZnSO₄·5H₂O28.00g/L，CuSO₄·5H₂O2.00g/L，H₃BO₄4.00g/L，MnSO₄·5H₂O4.00g/L，CoSO₄·7H₂O4.70g/L，pH7.2；

3）考察初筛菌株的多氯联苯降解能力，即将初筛菌株挑接于LB培养基（NaCl10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，pH7.2）中，然后添加10mg/L联苯，30℃、180r/min培养24h；离心收集菌体并用0.05mol/L的磷酸盐缓冲液漂洗，将菌体重悬于无机盐培养基中，调节OD₆₀₀为1.0作为种子液，4℃保存备用；在无机盐培养基中添加不同的多氯联苯，使每种多氯联苯单体浓度为10mg/L左右；分别接种不同的种子液，接种量40%（v/v），180r/min、30℃恒温培养3天后，采用液液萃取法提取多氯联苯并采用气相色谱法测定多氯联苯含量；根据多氯联苯的降解率判断菌株性能的优劣，得到多氯联苯降解效果较好的菌株。

多氯联苯降解菌HC3：

所述的多氯联苯降解菌HC3拉丁名称为Sphingobium fuliginis，中文名称为飞鱼鞘氨醇菌；菌株HC3分离于浙江省台州市路桥区某多氯联苯污染土壤；菌株HC3为革兰氏阴性菌，菌体呈杆状，在LB平板上其菌落为淡黄色、呈圆形、表面湿润；当2-氯联苯、3-氯联苯、2,4′-二氯联苯、3,3′-二氯联苯、2,4,4′-三氯联苯和2,4′,5-三氯联苯初始浓度为5～10mg/L时，3天内降解率依次为100.00%、100.00%、97.19%、42.01%、32.34%和29.32%；当苯甲酸、3-氯苯甲酸和4-氯苯甲酸初始浓度为20～30mg/L时，3天内降解率依次为100.29%、99.35%和100.56%；污染土壤中多氯联苯初始浓度为18.60mg/L时，接种菌株HC3能明显促进一氯至四氯联苯的降解，10天内的总降解率达44.91%。菌株HC3已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮政编码：100101，保藏日期：2013年12月31日，保藏编号：CGMCC No.8669。

本发明的有益效果是：本发明提供了一种适用于从多氯联苯污染土壤中分离多氯联苯好氧降解菌的方法，该方法简单、可靠，有助于研究工作者从环境中筛选出多氯联苯降解菌。本发明还提供了一株多氯联苯降解菌Sphingobium fuliginis HC3，该菌能有效降解一氯、二氯及三氯联苯；将菌株HC3接种于多氯联苯污染土壤后，能明显促进土壤中一氯至四氯联苯的降解，10天内多氯联苯总降解率达44.91%，比对照组高约一倍；菌株HC3的另一个特点是能降解苯甲酸、3-氯苯甲酸和4-氯苯甲酸，而许多多氯联苯降解菌却不具备这一能力。因此，在避免多氯联苯降解过程中积累氯代苯甲酸、促进多氯联苯完全降解方面，菌株HC3具有更大优势。故该菌有望被应用于多氯联苯污染土壤的生物修复工程中，以提高多氯联苯降解率。

附图说明

图1是本发明所获得的菌株HC3的菌体形态；

图2是本发明所获得的菌株HC3在LB平板上的菌落形态。

具体实施方式

实施例1：多氯联苯降解菌的筛选

本发明通过富集驯化、分离纯化和多氯联苯降解实验从环境中筛选出多氯联苯降解菌，具体方法如下：

（1）富集与驯化。用于分离微生物的土样取自浙江台州市路桥区某多氯联苯污染区域。无机盐培养基包括KH₂PO₄1.00g/L，K₂HPO₄·3H₂O3.00g/L，MgSO₄0.15g/L，FeSO₄0.01g/L，CaCl₂0.005g/L，NaCl1.00g/L，(NH₄)₂SO₄0.50g/L，微量元素溶液0.1%(v/v)，pH7.2；微量元素溶液配方为Na₂Mo₄·H₂O6.70g/L，ZnSO₄·5H₂O28.00g/L，CuSO₄·5H₂O2.00g/L，H₃BO₄4.00g/L，MnSO₄·5H₂O4.00g/L，CoSO₄·7H₂O4.70g/L，pH7.2。在容积为300mL的三角瓶中装入100mL上述培养基，121℃灭菌20min后备用。使用前添加联苯作为微生物生长所需的碳源，添加量为200～300mg/L（多氯联苯是联苯的氯代衍生物，降解联苯的微生物普遍能解降解多氯联苯，而且联苯毒性相对较小，因此选择联苯作为富集多氯联苯降解菌的底物）。取5g土样添加到100mL无机盐培养基中，180r/min、30℃恒温培养3～6天左右（以联苯颗粒完全消失为传代依据），取该培养基10mL添加到90mL新鲜的富集培养基中，在相同条件下培养，并连续传代数次。转接数代后，无机盐培养基中出现黄色产物生成与消失的现象（联苯降解过程中产生2-羟基-6-酮基-6-苯基-2,4-己二烯酸，该化合物呈黄色，导致培养基由无色变为逐渐变为亮黄色；伴随着该产物的进一步降解，培养基颜色又会从亮黄色逐渐变淡）。当无机盐培养基中的联苯颗粒能在24h内完全消失、培养基颜色呈现无色到亮黄色再到浅黄色的变化过程时，表明培养基中的联苯降解菌丰度较高，可选择此培养基进行菌株分离。

（2）分离与纯化。取含联苯降解菌丰度较高的培养基，并用无菌生理盐水（0.9%）将其梯度稀释，然后将稀释液涂布于琼脂平板。在平板表面喷洒1mL联苯溶液（联苯溶解于丙酮，浓度10g/L），丙酮挥发后，联苯吸附在平板表面，作为微生物生长所需的碳源。30℃恒温培养，每天观察菌落的生长情况。如果菌落周围出现透明圈或黄色晕圈，则挑取此类菌落并划线于含联苯的琼脂平板上。连续划线纯化3次，观察菌落形态是否一致，并于显微镜下镜检，观察菌体形态是否一致，以判断菌株是否为纯种。

（3）复筛。将纯化的菌株挑接于LB培养基（NaCl10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，pH7.2；灭菌条件121℃，20min）中，然后添加10mg/L联苯，30℃、180r/min培养24h。8000r/min离心5min，收集菌体，用0.05mol/L的磷酸盐缓冲液漂洗。重复离心一次后，将菌体重悬于无机盐培养基中，调节OD₆₀₀为1.0作为种子液，4℃保存备用。将配制好的多氯联苯标准液（含2-氯联苯、3-氯联苯、2,4′-二氯联苯、3,3′-二氯联苯、2,4,4′-三氯联苯、2,4′,5-三氯联苯、2,2′,3,3′-四氯联苯、2,2′,4,5′-四氯联苯、2,3′,4′,5-四氯联苯、2,2′,4,4′,5,5′-六氯联苯共十种单体）加入到50mL的玻璃管中，使每种多氯联苯单体的终浓度为5～10mg/L。待正己烷挥干后，加入3mL无机盐培养基和2mL种子液。对照组中加入的种子液需经121℃、30min高温加热两次进行杀菌处理。180r/min、30℃恒温避光培养3天后，每管中加入2g破乳剂（硫酸铵）和10mL正己烷。然后密封管口，涡旋振荡10min，静置1h，取上层有机相并用无水硫酸钠干燥，最后转移至进样瓶进行GC分析。气相色谱仪为Agilent7890A，石英毛细管柱为DB-5（30m×0.25mm，0.25μm），检测器放射源为⁶³Ni。进样口温度：300℃；检测器温度：325℃；载气：高纯氮气，恒流1.0mL/min；无分流进样1μL。升温程序为：始温150C，10℃/min升至175℃保持3.5min，再以1.3℃/min升至250℃，保持3min，总运行时间64.19min。

复筛菌株中，HC3的多氯联苯降解效果较好（表1）。菌株HC3在好氧条件下对一氯、二氯和三氯联苯有明显的降解效果，对四氯、六氯联苯的降解效果不明显，而且多氯联苯的降解率随着氯原子数的增多而逐渐下降，表明菌株HC3是一株较好的低氯代多氯联苯降解菌。

表1菌株HC3对十种多氯联苯单体的降解效果

（5）鉴定。将菌株HC3送交至中国普通微生物菌种保藏管理中心进行鉴定。根据16S rDNA序列结果和生理生化指标将菌株HC3鉴定为Sphingobium fuliginis，中文名称为飞鱼鞘氨醇菌（2013微检字第049号）。其生理生化指标采用Biolog GEN III系统鉴定，16S rDNA采用细菌通用引物27f(5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3′)和1492r(5′-TAC CTT GTT ACGACT T-3′)扩增，序列长度为1391bp，该段序列已经公布于Genbank数据库中，登录号为KC747727。菌株HC3为革兰氏阴性菌，菌体呈杆状，长约10.4～14.6μm，宽约4.2～6.2μm（见图1）。在LB平板上，其菌落呈圆形，淡黄色，表面湿润（见图2）。

实施例2：菌株HC3对苯甲酸及氯代苯甲酸的降解

苯甲酸及氯代苯甲酸的降解。降解体系与实施例1（4）相同，降解底物为苯甲酸、2-氯苯甲酸、3-氯苯甲酸和4-氯苯甲酸，每种底物的浓度为20～30mg/L。180r/min、30℃恒温避光培养3天后，每管中加入3mol/L的HCl将pH调为2.5，然后加入15mL乙酸乙酯并密封管口。涡旋振荡5min，超声15min，2500r/min离心5min，取上层有机相并用氮气吹干，以甲醇将样品重新溶解，最后转移至进样瓶进行HPLC分析。高效液相色谱仪为Agilent1100，选用DAD检测器，色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）。流动相甲醇与0.25%乙酸的比例为58:42（v/v），检测波长235nm，流速1mL/min，柱温25℃，进样量20μL。

表2菌株HC3对苯甲酸及氯代苯甲酸的降解效果

许多多氯联苯降解菌由于缺乏氯代苯甲酸降解途径，导致多氯联苯降过程中积累氯代苯甲酸，进而影响多氯联苯降解效率、造成潜在环境危害。而菌株HC3对苯甲酸、3-氯苯甲酸和4-氯苯甲酸的降解率几乎均达100%（表2），表明该菌不仅能降解低氯代多氯联苯，而且还能进一步降解其代谢产物氯代苯甲酸。因此菌株HC3具有完全矿化低氯代多氯联苯的潜能。

实施例3：菌株HC3对土壤中多氯联苯的降解

将取自浙江省台州市某多氯联苯污染场地的土壤（多氯联苯含量为18.60mg/kg）自然风干，研磨细碎后过20目筛，混合均匀，每个烧杯中分装200g。然后接种菌株HC3（菌液制备方法与实施例1中描述的方法相同）使土壤中菌浓度达1.0×10⁸cfu/g（对照组中加入等量的热杀菌），补充适量水分使土壤含水率达40%。将试验组放置于人工气候室内、避光培养，试验期间土壤温度一直维持在22～23℃。于试验的第五天和第十天，采用五点法从各个试验组中取出土样，用于多氯联苯的测定。土壤中多氯联苯的提取与分析方法见崔静岚（2013）[崔静岚.多氯联苯降解菌的筛选、降解特性研究及其应用.杭州：浙江大学,2013]。多氯联苯的降解效果见表3。当土壤中添加菌株HC3后，10天内多氯联苯的总降解率为44.91%，而对照组中其降解率仅为24.03%。试验组中二氯、三氯和四氯联苯的降解率明显高于对照组，但五氯和六氯联苯降解率的差异不明显，进一步表明菌株HC3是一株能降解低氯代多氯联苯的菌株。在国内外多氯联苯污染土壤修复研究中，微生物修复法通常要持续数月才能取得一定的修复效果。本发明中10天内菌株HC3对土壤中多氯联苯的降解率就达到了44.91%，表明菌株HC3是一株能在多氯联苯污染土壤上有效发挥降解作用的菌株。

表3菌株HC3对土壤中多氯联苯的降解效果

多氯联苯在好氧条件下完全降解需要经历两个阶段：1）多氯联苯开环分解成相应的氯代苯甲酸和脂肪酸；2）氯代苯甲酸和脂肪酸继续分解并最终矿化。氯代苯甲酸是多氯联苯降解过程中极易积累的中间产物，而本发明中实例2表明菌株HC3能降解低氯代苯甲酸，实施例1和3表明菌株HC3降解一氯至四氯联苯。故菌株HC3具备了完全矿化低氯代多氯联苯的潜能，有望被应用于多氯联苯污染土壤的生物修复工程中，以提高修复效率。

                         SEQUENCE LISTING

 

<110>  浙江大学

 

<120>  一种多氯联苯降解菌的筛选方法及一株多氯联苯降解菌

 

 

<160>  1    

 

<170>  PatentIn version 3.5

 

<210>  1

<211>  1391

<212>  DNA

<213>  Sphingobium  fuliginis

 

<400>  1

tataatgcag tcgaacgagc ccttcggggt tagtggcgca cgggtgcgta acgcgtggga       60

 

atctgccctt gggttcggaa taacgtctgg aaacggacgc taataccgga tgacgacgaa      120

 

agtccaaaga tttatcgccc agggatgagc ccgcgtagga ttagctagtt ggtgaggtaa      180

 

aggctcacca aggcgacgat ccttagctgg tctgagagga tgatcagcca cactgggact      240

 

gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtaggga atattggaca atgggggcaa      300

 

ccctgatcca gcaatgccgc gtgagtgatg aaggccttag ggttgtaaag ctcttttacc      360

 

cgggatgata atgacagtac cgggagaata agccccggct aactccgtgc cagcagccgc      420

 

ggtaatacgg agggggctag cgttgttcgg aattactggg cgtaaagcgc acgtaggcgg      480

 

cgatttaagt cagaggtgaa agcccggggc tcaaccccgg aatagccttt gagactggat      540

 

tgcttgaaca tcggagaggt gagtggaatt ccgagtgtag aggtgaaatt cgtagatatt      600

 

cggaagaaca ccagtggcga aggcggctca ctggacgatt gttgacgctg aggtgcgaaa      660

 

gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgataacta      720

 

gctgctgggg ctcatggagt ttcggtggcg cagctaacgc attaagttat ccgcctgggg      780

 

agtacggtcg caagattaaa actcaaagga attgacgggg gcctgcacaa gcggtggagc      840

 

atgtggttta attcgaagca acgcgcagaa ccttaccaac gtttgacatc ctcatcgcga      900

 

tttccagaga tggatttctt cagttcggct ggatgagtga caggtgctgc atggctgtcg      960

 

tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc tcgcctttag     1020

 

ttgccatcat ttagttgggt actctaaagg aaccgccggt gataagccgg aggaaggtgg     1080

 

ggatgacgtc aagtcctcat ggcccttacg cgttgggcta cacacgtgct acaatggcga     1140

 

ctacagtggg cagcgaccat gcgagtggaa gctaatctcc aaaagtcgtc tcagttcgga     1200

 

ttgttctctg caactcgaga gcatgaaggc ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc     1260

 

cgcggtgaat acgttcccag gccttgtaca caccgcccgt cacaccatgg gagttggttt     1320

 

cacccgaagg cagtgcgcta accgcaagga ggcagctgac cacggtggga tcagcgactg     1380

 

gggtgaagtc g                                                   1391

 

 

Claims (1)

1.一株多氯联苯降解菌，其特征是：菌株HC3拉丁名称为Sphingobium fuliginis，中文名称为飞鱼鞘氨醇菌；菌株HC3分离于浙江省台州市路桥区某多氯联苯污染土壤；菌株HC3为革兰氏阴性菌，菌体呈杆状，在LB平板上其菌落为淡黄色、呈圆形、表面湿润；当2-氯联苯、3-氯联苯、2,4′-二氯联苯、3,3′-二氯联苯、2,4,4′-三氯联苯和2,4′,5-三氯联苯初始浓度为5～10 mg/L时，3天内降解率依次为100.00%、100.00%、97.19%、42.01%、32.34%和29.32%；当苯甲酸、3-氯苯甲酸和4-氯苯甲酸初始浓度为20-30 mg/L时，3天内降解率依次为100.29%、99.35%和100.56%；污染土壤中多氯联苯初始浓度为18.60 mg/L时，接种菌株HC3能明显促进一氯至四氯联苯的降解，10天内总降解率达44.91%；菌株HC3已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮政编码：100101，保藏日期：2013年12月31日，保藏编号：CGMCC No.8669。