CN1763106A - 一种抗病毒的融合蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

一种抗病毒的融合蛋白及其编码基因与应用 Download PDF

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CN1763106A CN 200510114233 CN200510114233A CN1763106A CN 1763106 A CN1763106 A CN 1763106A CN 200510114233 CN200510114233 CN 200510114233 CN 200510114233 A CN200510114233 A CN 200510114233A CN 1763106 A CN1763106 A CN 1763106A
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Abstract

本发明公开了一种抗病毒的融合蛋白及其编码基因与应用。本发明的抗病毒融合蛋白，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：1)序列表中的SEQ ID №：1；2)将序列表中SEQ ID №：1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且可降解HIV病毒RNA的蛋白质。该融合蛋白对HIV病毒感染具有明显的抑制作用，可用于制备预防和/或治疗艾滋病的药物。

Description

一种抗病毒的融合蛋白及其编码基因与应用
技术领域
本发明涉及一种抗病毒的融合蛋白及其编码基因与应用。
背景技术
核糖核酸(RNA)是生命活动中不可缺少的重要分子，具有传递遗传信息、编码蛋白质等许多功能。有害RNA的产生导致多种疾病的发生。
HIV病毒是一种RNA病毒，其基因组RNA是病毒遗传信息的携带者，病毒RNA也是翻译病毒蛋白的模板。HIV所引起的艾滋病是当今世界上对人类健康威胁最大的流行性传染病。在过去的十几年中，各国投入了巨大的努力和巨额资金致力于研制开发抗艾滋病的药物，目前世界上批准用于临床的抗艾滋病药物已有近二十种。但是，已有的任何一种药物都不能完全清除人体内的HIV病毒，几种药物组合使用的效果会优于单一药物治疗，但也不能完全清除HIV病毒。HIV在复制过程中有很高的突变率，病人体内的病毒呈异源性，其中一些病毒具有抗药性，当治疗进行到一定阶段时，这些抗药病毒的数量会逐渐占据优势，使得现有的治疗无效。而且这些抗病毒药物的长期毒性已在临床上显示出来。开发一种无副作用而且不会产生抗药性的抗艾滋病药物是本领域每一个科学家的梦想。抗艾滋病药物的副作用来源于药物作用的不专一性；抗药性的产生则是因为HIV病毒具有非常高的突变率，使作为药物靶点的病毒蛋白可以通过少至一个氨基酸的改变而逃避药物的抑制作用，但不影响病毒蛋白自身的功能。因此，理想的抗艾滋病药物应对HIV病毒具有极高的特异性，对作用靶点的突变又有一定的包容性。
HIV是一种逆转录病毒，在感染过程中首先通过病毒表面包膜蛋白(envelope)与其受体的相互作用吸附到细胞表面，然后病毒质膜与细胞质膜融合，裸露的病毒颗粒进入到细胞中。在细胞质中病毒的RNA被逆转录成双链DNA，这段DNA存在于由病毒蛋白及宿主蛋白组成的整合前复合体(Pre-Integration Complex，简称PIC)中。
PIC由细胞质膜附近迁移到核膜附近并进入细胞核。在细胞核中病毒DNA由病毒的整合酶整合到宿主细胞的染色体中。上述过程度被称为逆转录病毒生命周期的前期。整合的病毒DNA被转录成RNA，其中大部分经过剪切后作为模板翻译产生病毒蛋白，小部分全长RNA作为病毒遗传物质被病毒蛋白包装成病毒颗粒出芽到细胞外成为未成熟病毒。在未成熟病毒中一些病毒蛋白以融合蛋白形式存在，经过病毒蛋白酶剪切后病毒颗粒结构重组成为有感染性的成熟病毒，此过程称为逆转录病毒生命周期的后期。
在HIV复制过程中，病毒自身编码的Tat蛋白发挥着重要作用。Tat是一种RNA结合蛋白，能够特异性结合到HIV病毒RNA上的TAR序列：gggtctctctggttagaccagatctgagcctgggagctctctggctaactagggaacccactgcttaagcctcaataaagct(ROBERT A.MARCINIAK，MARIANO A.GARCIA-BLANCO，AND PHILLIP A.SHARP.(1990)Identification and characterization of a HeLa nuclear protein thatspecifically binds to the trans-activation-response(TAR)element of humanimmunodeficiency virus.PNAS，Vol.87，pp.3624-3628.)。Tat通过结合TAR序列实现HIV基因组的持续转录，是HIV生命周期中不可缺少的一环。
ZAP是一个抗病毒因子，通过在胞质中特异性降解病毒RNA从而抑制某些病毒的复制，如鼠白血病病毒(MLV)、辛德比斯病毒(SIN)。但是ZAP对HIV病毒作用并不明显。ZAP作用机理的研究结果表明，ZAP本身不具有RNA酶的活性，但是能特异性结合到病毒RNA的特定序列上，并招募细胞内具有降解RNA功能的蛋白复合物Exosome而特异性地降解所结合的RNA。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗病毒的融合蛋白及其编码基因与应用。
本发明所提供的抗病毒的融合蛋白，名称为ZAP-Tat，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：
1)序列表中的SEQ ID №：1；
2)将序列表中SEQ ID №：1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且可特异性降解HIV病毒RNA的蛋白质。
所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。
序列表中的SEQ ID №：1由904个氨基酸残基组成。自氨基端的第1位至776位氨基酸残基为ZAP，自氨基端的第777位至805位氨基酸残基为linker，自氨基端的第806位至881位氨基酸残基为Tat，自氨基端的第884位至893位氨基酸残基为myc，自氨基端的第899位至904位氨基酸残基为6×HIS。
上述抗病毒的融合蛋白(ZAP-Tat)的编码基因也属于本发明的保护范围。
抗病毒的融合蛋白(ZAP-Tat)的编码基因，可具有下述核苷酸序列之一：
1)序列表中SEQ ID №：2的核苷酸序列；
2)编码序列表中SEQ ID №：1蛋白质序列的DNA；
3)在高严谨条件下可与序列表中的SEQ ID №：2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
序列表中的SEQ ID №：2由2712个核苷酸组成。自5′端的第1位至2328位核苷酸为ZAP编码序列，自5′端的第2329位至2415位核苷酸为linker的编码序列，自5′端的第2416位至2643位核苷酸为Tat的编码序列，自5′端的第2650位至2679位核苷酸为myc的编码序列，自5′端的第2695位至2712位核苷酸为myc的编码序列。
所述高严谨条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在65℃下杂交并洗膜。
含有本发明基因的表达载体、细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。
本发明的融合蛋白包括可与病毒TAR序列特异结合的RNA结合蛋白亚基(Tat)和具有降解RNA功能的蛋白亚基(ZAP)，该融合蛋白通过RNA结合蛋白亚基结合到特定的靶RNA上，RNA降解亚基招募细胞内的RNA酶，降解融合蛋白所结合的特定RNA。本发明的融合蛋白对HIV病毒具有明显的抑制效果可用于制备抗病毒的药物，如制备预防和/或治疗艾滋病的药物。
附图说明
图1为ZAP-Tat等质粒酶切电泳图。
图2为利用Western免疫杂交方法检测ZAP-Tat等在细胞内的表达。
图3为分析ZAP-Tat对HIV载体表达的抑制效果。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例1、融合蛋白ZAP-Tat的表达
本实施例中，首先在ZAP的C-端接上联接肽序列(命名为ZAP-linker)，并证明了该联接肽序列不影响ZAP的功能。然后，将Tat通过联接肽序列(linker)融合到ZAP的C-端，成为ZAP-Tat。使用联接肽序列的目的是将ZAP和Tat两个结构域分开，使之不互相干扰彼此的活性。作为对照，还构建了N-端含有69个来自ZAP的氨基酸残基的Tat(命名为dTat)。
1、linker的制备
利用化学合成方法合成5′→3′链具有以下序列的一段双链DNA：5’-GGT GGAGGC TCT GGG GGA GGT ACA GGA GGT GGC TCA GGT GGG GGC ACT GGT GGA GGC AGT GGAGGT GGC-3’。该序列编码一段联接肽序列。然后对其用如下的引物进行PCR扩增，所用引物引入克隆所需的酶切位点：
上游引物：linker sp：
5’-ATATAG GCGGCCG
Figure A20051011423300061
TGGTGGAGGCTCTGG-3’(下划线部分核苷酸为Not I酶切识别位点，方框内的核苷酸序列为Xho I酶切识别位点)
下游引物：linker ap：
5’-ATATAG GGGCCCTTGGCGCC GCCACCTCCACTGCCTC-3’(下划线部分核苷酸为Apa I酶切识别位点，方框内的核苷酸序列为EcoR V酶切识别位点，GGCGCC为Kas I酶切识别位点)
PCR的反应体系为：
1μl模板DNA(5pM/μl)，1μl上游引物(50μM)，1μl下游引物(50μM)，1μl Tag酶，4μl dNTP混合物(2.5mM)，5μl PCR反应缓冲液(10×)，37μl dH2O。
PCR的反应程序为：94℃退火2min，然后94℃，30sec；55℃，30sec；72℃，30sec共25个循环。
得到的PCR产物进行凝胶电泳，结果表明得到124bp的条带，结果如图1中的泳道2所示，回收该条带的DNA，对其测序表明所获得的PCR片段即包含Not I-Xho I—联接序列-Eco RV-Kas I-Apa I的DNA片段。把该DNA片段命名为linker。
图1中，泳道1和9是DL2000 plus的marker；泳道2是linker的PCR产物；泳道3是Tat的PCR产物；泳道4是pNZAP-Tat用Xba I和Nhe I双酶切的片段；泳道5是pZAP-Tat用Nhe I和Not I双酶切的片段；泳道6是pNZAP linker用EcoR I和Not I双酶切的片段；泳道7是pZAPlinker用Nhe I和Not I双酶切的片段；泳道8是pdTat用Xho I和EcoR I双酶切的片段。
2、在质粒pcDNA4/TO/myc-His B中插入linker：
pcDNA4/TO/myc-His B(从Invitrogen购买)，用Not I和Apa I双酶切pcDNA4/TO/myc-His B，切胶回收得到5133bp的大片段，将步骤1所获得的PCR片段也用Not I和Apa I双酶切，切胶回收得到109bp片段，二者连接，转化大肠杆菌TOP10，在含有50μg/ml氨苄青霉素的LB固体培养基上培养12小时，挑取单克隆进行培养。提取质粒，用引物linker sp和linker ap进行PCR验证，得到124bp片段，结果如图1所示。对质粒进行测序，结果表明该质粒含有该段linker序列，将该质粒命名为pcDNA4/TO/linker/myc-His B。
3、在质粒pcDNA4/TO/linker/myc-His B中插入NZAP序列：
将pcDNA4/TO/linker/myc-His B用EcoRI和Not I双酶切，切胶回收得到5215bp的大片段。质粒pNZAP-myc(pNZAP-myc的构建方法见：Guangxia Gao，Xuemin Guo，Stephen P.Goff1.(2002)Inhibition of Retroviral RNA Production by ZAP，aCCCH-Type Zinc Finger Protein.SCIENCE VOL 297，1703-1706)，含有序列表中序列14(编码序列表中序列13的NZAPmyc)的NZAPmyc编码基因，也用EcoRI和NotI双酶切，切胶回收得到1088的片段，二者连接，转化大肠杆菌TOP10，在含有50μg/ml氨苄青霉素的LB固体培养基上培养12小时，挑取单克隆进行培养。提取质粒，用EcoRI和NotI双酶切得到了5215bp的pcDNA4/TO/linker/myc-His B片段和1088bp的NZAP片段，结果如图1中泳道6所示。对质粒进行测序，结果表明该质粒含有序列表中序列6的核苷酸序列，编码序列表中序列5的NZAP-linker-myc，将该质粒命名为pNZAPlinker。
4、在载体pNZAPlinker上插入Tat蛋白编码序列
以质粒pCMVTat(pCMVTat的构建方法见文献：NARASIMHACHAR SRINIVASAKUMAR，NATHALIE CHAZAL，C.HELGA-MARIA，SUSAN PRASAD，MARIE-LOUISE HAMMARSKJOLD，ANDDAVID REKOSH.(1997)The Effect of Viral Regulatory Protein Expression on GeneDelivery bv Human Immunodeficiency Virus Type 1 Vectors Produced in StablePackaging Cell Lines.JVI，Vol.71，No.8，5841-5848)作为模板，然后对其用如下的引物进行PCR扩增，所用引物引入克隆所需的酶切位点：
上游引物：TAT SP：
5’-GGCCGCGCTGCTGAGCC-3’
下游引物：TAT AP：
5’-ATATAG TTCGAACCGCGGCTGCTTTGATAGA-3’(下划线部分核苷酸为BstBI酶切识别位点)
PCR的反应体系为：
1μl模板(0.1μg/μl)，1μl上游引物(50μM)，1μl下游引物(50μM)，0.25μl Taq酶，4μl dNTP混合物(2.5mM)，5μl PCR buffer(10×)，37.75μl dH20。
PCR的反应程序为：
94℃退火2min，然后94℃，30sec；55℃，30sec；72℃，30sec共25个循环。
得到的PCR产物进行凝胶电泳，结果表明得到243bp的条带，结果如图1中的泳道3所示，回收该条带的DNA，用BstB I酶切，切胶回收含有Tat基因的小片段233bp；载体pNZAPlinker用EcoR V和BstB I酶切，切胶回收含有NZAP和linker编码基因的大片段6271bp，二者连接，转化大肠杆菌TOP10，在含有50μg/ml氨苄青霉素的LB固体培养基上培养12小时，挑取单克隆进行培养，提取质粒，用Xba I和Nhe I双酶切，得到6027bp和477bp的片段，结果如图1中泳道4所示。该质粒命名为pNZAP-Tat，含有序列表中SEQ ID №：10的核苷酸序列，编码序列表中序列9的NZAP-Tat/myc。
5、ZAP-Tat的表达载体pZAP-Tat的构建
将pNZAP-Tat用Afl II和Not I双酶切，凝胶电泳回收5372bp大片段作为载体，pZAP-myc(pZAP-myc的构建方法见：Guangxia Gao，Xuemin Guo，Stephen P.Goff1.(2002)Inhibition of Retroviral RNA Production by ZAP，a CCCH-Type ZincFinger Protein.SCIENCE VOL 297，1703-1706)用Afl II和Not I双酶切，回收2701bp的ZAP片段，与上面制备的载体连接，转化大肠杆菌TOP10，在含有50μg/ml氨苄青霉素的LB固体培养基上培养12小时，挑取单克隆进行培养，提取质粒用NheI和Not I双酶切，得到6141bp的载体片段和1932bp片段，结果如图1中泳道5所示，该质粒命名为pZAP-Tat，含有序列表中序列2的融合蛋白ZAP-Tat的编码基因。
6、ZAP、ZAP-linker、dTat的表达质粒的构建
含有序列表中序列4(编码序列表中序列3的ZAP-myc)的ZAP-myc编码基因的质粒pZAP-myc的构建方法见文献：Guangxia Gao，Xuemin Guo，Stephen P.Goff1.(2002)Inhibition of Retroviral RNA Production by ZAP，a CCCH-Type Zinc FingerProtein.SCIENCE VOL 297.1703-1706。
将质粒pNZAP linker用Afl II和Not I双酶切，凝胶电泳回收5162bp大片段作为载体，质粒pZAP-myc也用Afl II和Not I双酶切，回收2701bp的ZAP片段，二者连接，转化大肠杆菌TOP10，在含有50μg/ml氨苄青霉素的LB固体培养基上培养12小时，挑取单克隆进行培养，提取质粒用Nhe I和Not I双酶切，得到5931bp的载体片段和1932bp的片段，结果如图1中泳道7所示。该质粒命名为pZAPlinker，含有序列表中序列8的核苷酸序列，编码序列表中序列7的ZAPlinker-myc。将质粒pZAP-Tat用Xho I单酶切，回收5651bp的片段，用Klenow(New EnglandBiolab)补平，自身连接，转化大肠杆菌TOP10，在含有50μg/ml氨苄青霉素的LB固体培养基上培养12小时，挑取单克隆进行培养，提取质粒，用Xho I和Not I双酶切验证，结果如图1中泳道8所示。对用Xho I和EcoR I双酶切为单一片段的质粒测序，结果表明该质粒含有该段dTat-myc序列，将该质粒命名为pdTat，含有序列表中序列12的核苷酸序列，编码序列表中序列11的dTat-myc。
7、ZAP、ZAP-linker、dTat、ZAP-Tat的表达
将pZAP-myc、pZAP linker、pdTat、pZAP-Tat分别用磷酸钙法转染入293T细胞(购自ATCC)，质粒用量为5μg/3.5cm培养皿，8小时后换液，用PBS缓冲液洗一次，加入新鲜培养基(DMEM∶FBS(胎牛血清)∶PS(青霉素和链霉素)＝100∶10∶1(体积比))，48小时后收集细胞，裂解后进行SDS-PAGE电泳，然后将蛋白转到PVDF膜上，用myc抗体(9E10)(购自Sant Cruz)进行Western免疫检测，检测到ZAP、ZAP-linker、dTat、ZAP-Tat的蛋白表达，结果如图2所示。
实施例2、抗HIV功能检测
实施例1中，利用Western免疫杂交方法，首先证明了ZAP、ZAP-linker、dTat、ZAP-Tat在细胞内的表达，本实施例分析了上述蛋白对HIV RNA的抑制情况，方法如下：
将表达ZAP、ZAP linker、dTat、ZAP-Tat的质粒与携带荧光素酶报告基因的HIV载体pHR’-CMV-luc共表达(pHR’-CMV-luc含有HIV的大部分骨架序列，包括5’和3’LTR，5’剪切位点，包装信号，部分的gag基因编码序列，3’剪切位点等，pHR’-CMV-luc的构建方法见David Derse，Shawn A.Hill，Patricia A.Lloyd，Hye-kyung Chung，and Barry A.Morse.Examining Human T-Lymphotropic VirusType 1 Infection and Replication by Cell-Free Infection with RecombinantVirus Vectors.J Virol.2001 September；75(18)：8461-8468)，分析上述蛋白对HIV载体表达的抑制情况。为了检测转染效率，使用了表达海肾(Renilla)萤光素酶的质粒pRL-TK(购自Promega)作为转染效率的内参。pHR’-CMV-luc和pRL-TK分别与下述四种质粒中的一种用磷酸钙法共转染293A细胞(购自ATCC)：
pcDNA4/TO/myc-His B，pZAP-myc，pZAP linker和pZAP-Tat。所用质粒的质量比为：pcDNA4/TO/myc-His B或pZAP-myc或pZAP-linker或pZAP-Tat∶pHR’-CMV-luc∶pRL-TK＝100∶10∶1。先用胰蛋白酶消化以便收获生长到对数期的293A细胞，以5×105个细胞/3.5cm培养皿的数量重新种入3.5cm培养皿，加入新鲜DMEM培养基于37℃、5％CO2的培养箱中培养16-24小时。然后用质粒pcDNA4/TO/myc-His B或pZAP或pZAP-linker或pZAP-Tat：5μg，pHR’-CMV-luc：0.5μg，pRL-TK：0.05μg的量，磷酸钙法分别转染细胞。转染后8小时，吸出培养皿中的培养基，用PBS缓冲液洗一次，重新加入新鲜培养基，培养48小时后，用Promega公司的Dual-luciferase试剂盒检测荧光素酶活性，分别得到萤火虫荧光素酶和海肾萤光素酶的荧光值。海肾萤光素酶的数值用来作为内参，表明转染效率的高低，萤火虫荧光素酶的数值作为报告参数，表明在某一转染效率下报告基因表达量的高低。萤火虫荧光素酶和海肾(Renilla)萤光素酶的荧光值比值是将每组数值做归一化处理，便于与某一标准值比较。以空质粒pcDNA4/TO/myc-His B共转染组的萤火虫荧光素酶和海肾萤光素酶的荧光值的比值作为对照，其它组的比值去除该值，所得比值即为抑制倍数，即：抑制倍数＝空质粒共转染组比值/功能蛋白共转染组比值。结果如图3所示，表明pZAP-Tat表达的ZAP-Tat对HIV的抑制作用达到16倍以上，其它质粒表达的蛋白对HIV的抑制作用不足4倍。图3中，pcDNA4表示pcDNA4/TO/myc-HisB和pHR’-CMV-luc和pRL-TK共转染组；ZAP表示pZAP-myc和pHR’-CMV-luc和pRL-TK共转染组；ZAPlinker表示pZAPlinker和pHR’-CMV-luc和pRL-TK共转染组；ZAP-Tat表示pZAP-Tat和pHR’-CMV-luc和pRL-TK共转染组。
                           序列表
<160>14
<210>1
<211>904
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>1
Met Ala Asp Pro Gly Val Cys Cys Phe Ile Thr Lys Ile Leu Cys Ala
                5                   10                  15
His Gly Gly Arg Met Thr Leu Glu Glu Leu Leu Gly Glu Ile Arg Leu
            20                  25                  30
Pro Glu Ala Gln Leu Tyr Glu Leu Leu Glu Thr Ala Gly Pro Asp Arg
        35                  40                  45
Phe Val Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gln Ala Gly Ile Thr Arg Ser Val
    50                  55                  60
Val Ala Thr Thr Arg Ala Arg Val Cys Arg Arg Lys Tyr Cys Gln Arg
65                  70                  75                  80
Pro Cys Asp Ser Leu His Leu Cys Lys Leu Asn Leu Leu Gly Arg Cys
                85                  90                  95
His Tyr Ala Gln Ser Gln Arg Asn Leu Cys Lys Tyr Ser His Asp Val
            100                 105                 110
Leu Ser Glu Gln Asn Phe Gln Ile Leu Lys Asn His Glu Leu Ser Gly
        115                 120                 125
Leu Asn Gln Glu Glu Leu Ala Cys Leu Leu Val Gln Ser Asp Pro Phe
  130                   135                 140
Phe Leu Pro Glu Ile Cys Lys Ser Tyr Lys Gly Glu Gly Arg Lys Gln
145                 150                 155                 160
Thr Cys Gly Gln Pro Gln Pro Cys Glu Arg Leu His Ile Cys Glu His
                165                 170                 175
Phe Thr Arg Gly Asn Cys Ser Tyr Leu Asn Cys Leu Arg Ser His Asn
            180                 185                 190
Leu Met Asp Arg Lys Val Leu Thr Ile Met Arg Glu His Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Pro Asp Val Val Gln Asn Ile Gln Asp Ile Cys Asn Asn Lys His Ala
    210                 215                 220
Arg Arg Asn Pro Pro Gly Thr Arg Ala Ala His Pro His Arg Arg Gly
225                 230                 235                 240
Gly Ala His Arg Asp Arg Ser Lys Ser Arg Asp Arg Phe Leu His Asn
                245                 250                 255
Ser Leu Glu Phe Leu Ser Pro Val Val Ser Pro Leu Gly Ser Gly Pro
            260                 265                 270
Pro Ser Pro Asp Val Thr Ser Cys Lys Asp Ser Leu Glu Asp Val Ser
        275                 280                 285
Val Asp Val Thr Gln Lys Phe Lys Tyr Leu Gly Thr His Asp Arg Ala
    290                 295                 300
Gln Leu Ser Pro Val Ser Ser Lys Ala Ala Gly Val Gln Gly Pro Ser
305                 310                 315                 320
Gln Met Arg Ala Ser Gln Glu Phe Ser Glu Asp Gly Asn Leu Asp Asp
                325                 330                 335
Ile Phe Ser Arg Asn Arg Ser Asp Ser Ser Ser Ser Arg Ala Ser Ala
            340                 345                 350
Ala Lys Val Ala Gln Arg Asn Glu Ala Val Ala Met Lys Met Gly Met
        355                 360                 365
Glu Val Lys Gly Lys Lys Glu Ala Pro Asp Ile Asp Arg Val Pro Phe
    370                 375                 380
Leu Asn Ser Tyr Ile Asp Gly Val Thr Met Glu Lys Ala Ser Val Ser
385                 390                 395                 400
Gly Ile Pro Gly Lys Lys Phe Thr Ala Asn Asp Leu Glu Asn Leu Leu
                405                 410                 415
Leu Leu Asn Asp Thr Trp Lys Asn Val Ala Lys Pro Gln Asp Leu Gln
            420                 425                 430
Thr Thr Gly Arg Ile Thr Asp Ser Gly Gln Asp Lys Ala Phe Leu Gln
        435                 440                 445
Asn Lys Tyr Gly Gly Asn Pro Val Trp Ala Ser Ala Ser Thr His Asn
    450                 455                 460
Ala Pro Asn Gly Ser Ser Gln Ile Met Asp Glu Thr Pro Asn Val Ser
465                 470                 475                 480
Lys Ser Ser Thr Ser Gly Phe Ala Ile Lys Pro Ala Ile Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Lys Glu Ala Val Tyr Ser Gly Val Gln Ser Pro Arg Ser Gln Val Leu
            500                 505                 510
Ala Val Pro Gly Glu Ala Thr Thr Pro Val Gln Ser Asn Arg Leu Pro
        515                 520                 525
Gln Ser Pro Leu Ser Ser Ser Ser His Arg Ala Ala Ala Ser Gly Ser
    530                 535                 540
Pro Gly Lys Asn Ser Thr His Thr Ser Val Ser Pro Ala Ile Glu Ser
545                 550                 555                 560
Ser Arg Met Thr Ser Asp Pro Asp Glu Tyr Leu Leu Arg Tyr Ile Leu
                565                 570                 575
Asn Pro Leu Phe Arg Met Asp Asn His Gly Pro Lys Glu Ile Cys Gln
            580                 585                  590
Asp His Leu Tyr Lys Gly Cys Gln Gln Ser His Cys Asp Arg Ser His
        595                 600                 605
Phe His Leu Pro Tyr Arg Trp Gln Met Phe Val Tyr Thr Thr Trp Arg
    610                 615                 620
Asp Phe Gln Asp Met Glu Ser Ile Glu Gln Ala Tyr Cys Asp Pro His
625                 630                 635                 640
Val Glu Leu Ile Leu Ile Glu Asn His Gln Ile Asn Phe Gln Lys Met
                645                 650                 655
Thr Cys Asp Ser Tyr Pro Ile Arg Arg Leu Ser Thr Pro Ser Tyr Glu
            660                 665                 670
Glu Lys Pro Leu Ser Ala Val Phe Ala Thr Lys Trp Ile Trp Tyr Trp
        675                 680                 685
Lys Asn Glu Phe Asn Glu Tyr Ile Gln Tyr Gly Asn Glu Ser Pro Gly
    690                 695                 700
His Thr Ser Ser Asp Ile Asn Ser Ala Tyr Leu Glu Ser Phe Phe Gln
705                 710                 715                 720
Ser Cys Pro Arg Gly Val Leu Pro Phe Gln Ala Gly Ser Gln Lys Tyr
                725                 730                 735
Glu Leu Ser Phe Gln Gly Met Ile Gln Thr Asn Ile Ala Ser Lys Thr
            740                 745                 750
Gln Arg His Val Val Arg Arg Pro Val Phe Val Ser Ser Asn Asp Val
        755                 760                 765
Glu Gln Lys Arg Arg Gly Pro Glu Gly Gly Arg Ser Ser Gly Gly Gly
    770                 775                 780
Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly
785                 790                 795                 800
Ser Gly Gly Gly Asp Gly Arg Ala Ala Glu Pro Val Asp Pro Ser Leu
                805                 810                 815
Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Ser Gln Pro Arg Thr Ala Cys Asn Asn
            820                 825                 830
Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys Phe His Cys Tyr Ala Cys Phe Thr Arg
        835                 840                 845
Lys Gly Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg
    850                 855                 860
Arg Ala His Gln Asn Ser Gln Thr His Gln Ala Ser Leu Ser Lys Gln
865                  870                875                 880
Pro Arg Phe Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Met His
                885                 890                 895
Thr Gly His His His His His His
            900
<210>2
<211>2712
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>2
atggcagatc ccggggtatg ctgtttcatc accaagatcc tgtgcgccca cgggggccgt    60
atgaccctgg aggaactgct gggtgagatc aggctccccg aggcgcagct ctacgagctg   120
ctggagacgg cggggcccga tcgcttcgtg ctattggaga ctggaggcca ggccgggatc   180
actcggtctg tagtggctac tactcgagcc cgcgtctgcc gtcggaagta ctgccagaga   240
ccctgcgaca gcctgcacct ctgcaagctt aatctgctcg gccggtgcca ctatgcacag   300
tctcagcgga acctctgcaa atattctcac gatgttctct cggaacagaa cttccagatc   360
ctgaagaatc atgagctctc tgggcttaac caagaggagc tagcttgcct cctggtccaa   420
agcgaccctt ttttcctgcc cgagatatgc aagagttaca aaggagaggg ccgaaaacag   480
acctgtgggc agccacagcc atgcgagaga ctccacatct gtgagcactt cacccggggc   540
aactgcagtt acctcaactg tctcaggtct cacaacctga tggacagaaa ggtgttgacc   600
atcatgaggg agcacgggct gagtcctgat gtggtccaga acatccagga catctgcaac   660
aacaaacacg ccaggaggaa cccgcctggc acgagagctg cccatccaca ccgcagaggc   720
ggcgcacaca gagacagaag caaaagcaga gaccgcttcc ttcacaacag tctagaattt   780
ctctcacctg ttgtctcacc tctgggatct ggtccgccta gcccagatgt caccagctgt   840
aaagattccc tggaggatgt gtctgtggat gtcacccaga agttcaagta cttggggacg   900
catgaccgtg cgcagctctc cccagtctca tctaaggctg ctggtgttca aggacccagt   960
caaatgagag caagccaaga gttttcagag gatgggaatc tagatgacat attttctagg  1020
aatcgttctg attcatcatc aagtcgagcc tccgctgcca aggtggcaca aagaaatgaa  1080
gctgtggcca tgaaaatggg catggaggtc aagggcaaga aggaggctcc agacatcgat  1140
cgggtcccat ttttaaatag ttatattgat ggggtgacca tggaaaaagc atcggtctca  1200
ggaattccag gcaaaaagtt cacagccaat gatctggaaa atttgctatt acttaacgac  1260
acttggaaga atgtggctaa gccccaggat ctgcagacca caggcagaat cactgacagt  1320
ggccaagaca aggcattcct gcagaataaa tatggaggaa acccagtgtg ggcaagtgca  1380
tccacccata atgccccaaa tggctctagt caaattatgg atgaaactcc taatgtctct  1440
aaaagtagta ccagtggttt tgccataaaa ccagcaattg ctggaggaaa agaagcagtc  1500
tattctggag ttcagagtcc gagaagccag gtcctagctg tgcctgggga ggctactacc  1560
cctgtacaga gcaacaggct gcctcagtcg cctctgtctt cctcaagcca cagagctgca   1620
gcctctggga gccctggcaa gaactccacc catacctctg tgagcccagc catcgagtct   1680
tcaaggatga catcagaccc cgatgagtat ctcctacgct acatcctaaa tcctttattt   1740
aggatggata atcatggccc gaaggaaatc tgtcaggacc atctgtacaa gggctgtcaa   1800
cagagccact gcgacaggag tcacttccat ctgccctacc ggtggcagat gttcgtatat   1860
accacttgga gggacttcca ggacatggag tctatcgaac aggcctattg tgatccccac   1920
gttgaactca ttttgataga aaaccatcag atcaatttcc agaaaatgac ctgtgactcc   1980
taccccatcc gacgcctctc cactccctca tatgaggaaa agccacttag tgctgtcttc   2040
gccaccaagt ggatttggta ttggaagaat gaatttaatg aatatatcca gtatgggaat   2100
gagagcccag gccacaccag ctctgacatc aactctgcgt acctggagtc tttcttccag   2160
tcttgtccca ggggagtttt gccattccag gctggttcac agaagtacga gttaagcttc   2220
caagggatga ttcagacaaa tatagcttcc aagactcaaa ggcatgttgt cagaaggcca   2280
gtatttgttt cttcgaacga tgtggagcag aagagaagag gtccagaggg cggccgctcg   2340
agtggtggag gctctggggg aggtacagga ggtggctcag gtgggggcac tggtggaggc   2400
agtggaggtg gcgatggccg cgctgctgag ccagtagatc ctagtctaga gccctggaag   2460
catccaggaa gtcagcctag gactgcttgt aacaattgct attgtaaaaa gtgttgcttt   2520
cattgctacg cgtgtttcac aagaaaaggc ttaggcatct cctatggcag gaagaagcgg   2580
agacagcgac gaagagctca tcagaacagt cagactcatc aagcttctct atcaaagcag   2640
ccgcggttcg aacaaaaact catctcagaa gaggatctga atatgcatac cggtcatcat   2700
caccatcacc at                                                       2712
<210>3
<211>808
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>3
Met Ala Asp Pro Gly Val Cys Cys Phe Ile Thr Lys Ile Leu Cys Ala
                5                   10                  15
His Gly Gly Arg Met Thr Leu Glu Glu Leu Leu Gly Glu Ile Arg Leu
            20                  25                  30
Pro Glu Ala Gln Leu Tyr Glu Leu Leu Glu Thr Ala Gly Pro Asp Arg
        35                  40                  45
Phe Val Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gln Ala Gly Ile Thr Arg Ser Val
    50                  55                  60
Val Ala Thr Thr Arg Ala Arg Val Cys Arg Arg Lys Tyr Cys Gln Arg
65                  70                  75                  80
Pro Cys Asp Ser Leu His Leu Cys Lys Leu Asn Leu Leu Gly Arg Cys
                85                  90                  95
His Tyr Ala Gln Ser Gln Arg Asn Leu Cys Lys Tyr Ser His Asp Val
            100                 105                 110
Leu Ser Glu Gln Asn Phe Gln Ile Leu Lys Asn His Glu Leu Ser Gly
        115                 120                 125
Leu Asn Gln Glu Glu Leu Ala Cys Leu Leu Val Gln Ser Asp Pro Phe
    130                 135                 140
Phe Leu Pro Glu Ile Cys Lys Ser Tyr Lys Gly Glu Gly Arg Lys Gln
145                 150                 155                 160
Thr Cys Gly Gln Pro Gln Pro Cys Glu Arg Leu His Ile Cys Glu His
                165                 170                 175
Phe Thr Arg Gly Asn Cys Ser Tyr Leu Asn Cys Leu Arg Ser His Asn
            180                 185                 190
Leu Met Asp Arg Lys Val Leu Thr Ile Met Arg Glu His Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Pro Asp Val Val Gln Asn Ile Gln Asp Ile Cys Asn Asn Lys His Ala
    210                 215                 220
Arg Arg Asn Pro Pro Gly Thr Arg Ala Ala His Pro His Arg Arg Gly
225                 230                 235                 240
Gly Ala His Arg Asp Arg Ser Lys Ser Arg Asp Arg Phe Leu His Asn
                245                 250                 255
Ser Leu Glu Phe Leu Ser Pro Val Val Ser Pro Leu Gly Ser Gly Pro
            260                 265                 270
Pro Ser Pro Asp Val Thr Ser Cys Lys Asp Ser Leu Glu Asp Val Ser
        275                 280                 285
Val Asp Val Thr Gln Lys Phe Lys Tyr Leu Gly Thr His Asp Arg Ala
    290                 295                 300
Gln Leu Ser Pro Val Ser Ser Lys Ala Ala Gly Val Gln Gly Pro Ser
305                 310                 315                 320
Gln Met Arg Ala Ser Gln Glu Phe Ser Glu Asp Gly Asn Leu Asp Asp
                325                 330                 335
Ile Phe Ser Arg Asn Arg Ser Asp Ser Ser Ser Ser Arg Ala Ser Ala
            340                 345                 350
Ala Lys Val Ala Gln Arg Asn Glu Ala Val Ala Met Lys Met Gly Met
        355                 360                 365
Glu Val Lys Gly Lys Lys Glu Ala Pro Asp Ile Asp Arg Val Pro Phe
    370                 375                 380
Leu Asn Ser Tyr Ile Asp Gly Val Thr Met Glu Lys Ala Ser Val Ser
385                 390                 395                 400
Gly Ile Pro Gly Lys Lys Phe Thr Ala Asn Asp Leu Glu Asn Leu Leu
                405                 410                 415
Leu Leu Asn Asp Thr Trp Lys Asn Val Ala Lys Pro Gln Asp Leu Gln
            420                 425                 430
Thr Thr Gly Arg Ile Thr Asp Ser Gly Gln Asp Lys Ala Phe Leu Gln
        435                 440                 445
Asn Lys Tyr Gly Gly Asn Pro Val Trp Ala Ser Ala Ser Thr His Asn
    450                 455                 460
Ala Pro Asn Gly Ser Ser Gln Ile Met Asp Glu Thr Pro Asn Val Ser
465                 470                 475                 480
Lys Ser Ser Thr Ser Gly Phe Ala Ile Lys Pro Ala Ile Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Lys Glu Ala Val Tyr Ser Gly Val Gln Ser Pro Arg Ser Gln Val Leu
            500                 505                 510
Ala Val Pro Gly Glu Ala Thr Thr Pro Val Gln Ser Asn Arg Leu Pro
        515                 520                 525
Gln Ser Pro Leu Ser Ser Ser Ser His Arg Ala Ala Ala Ser Gly Ser
    530                 535                 540
Pro Gly Lys Asn Ser Thr His Thr Ser Val Ser Pro Ala Ile Glu Ser
545                 550                 555                 560
Ser Arg Met Thr Ser Asp Pro Asp Glu Tyr Leu Leu Arg Tyr Ile Leu
                565                 570                 575
Asn Pro Leu Phe Arg Met Asp Asn His Gly Pro Lys Glu Ile Cys Gln
            580                 585                 590
Asp His Leu Tyr Lys Gly Cys Gln Gln Ser His Cys Asp Arg Ser His
        595                 600                 605
Phe His Leu Pro Tyr Arg Trp Gln Met Phe Val Tyr Thr Thr Trp Arg
    610                 615                 620
Asp Phe Gln Asp Met Glu Ser Ile Glu Gln Ala Tyr Cys Asp Pro His
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Val Glu Leu Ile Leu Ile Glu Asn His Gln Ile Asn Phe Gln Lys Met
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Glu Lys Pro Leu Ser Ala Val Phe Ala Thr Lys Trp Ile Trp Tyr Trp
        675                 680                 685
Lys Asn Glu Phe Asn Glu Tyr Ile Gln Tyr Gly Asn Glu Ser Pro Gly
    690                 695                 700
His Thr Ser Ser Asp Ile Asn Ser Ala Tyr Leu Glu Ser Phe Phe Gln
705                 710                 715                 720
Ser Cys Pro Arg Gly Val Leu Pro Phe Gln Ala Gly Ser Gln Lys Tyr
                725                 730                 735
Glu Leu Ser Phe Gln Gly Met Ile Gln Thr Asn Ile Ala Ser Lys Thr
            740                 745                 750
Gln Arg His Val Val Arg Arg Pro Val Phe Val Ser Ser Asn Asp Val
        755                 760             765
Glu Gln Lys Arg Arg Gly Pro Glu Gly Gly Arg Ser Ser Leu Glu Gly
    770                 775                 780
Pro Arg Phe Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Met His
785                 790                 795                 800
Thr Gly His His His His His His
                805
<210>4
<211>2424
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>4
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gcctctggga gccctggcaa gaactccacc catacctctg tgagcccagc catcgagtct  1680
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accacttgga gggacttcca ggacatggag tctatcgaac aggcctattg tgatccccac  1920
gttgaactca ttttgataga aaaccatcag atcaatttcc agaaaatgac ctgtgactcc  1980
taccccatcc gacgcctctc cactccctca tatgaggaaa agccacttag tgctgtcttc  2040
gccaccaagt ggatttggta ttggaagaat gaatttaatg aatatatcca gtatgggaat  2100
gagagcccag gccacaccag ctctgacatc aactctgcgt acctggagtc tttcttccag  2160
tcttgtccca ggggagtttt gccattccag gctggttcac agaagtacga gttaagcttc  2220
caagggatga ttcagacaaa tatagcttcc aagactcaaa ggcatgttgt cagaaggcca  2280
gtatttgttt cttcgaacga tgtggagcag aagagaagag gtccagaggg cggccgctcg  2340
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accggtcatc atcaccatca ccat                                         2424
<210>5
<211>311
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>5
Met Ala Asp Pro Gly Val Cys Cys Phe Ile Thr Lys Ile Leu Cys Ala
1               5                   10                  15
His Gly Gly Arg Met Thr Leu Glu Glu Leu Leu Gly Glu Ile Arg Leu
            20                  25                  30
Pro Glu Ala Gln Leu Tyr Glu Leu Leu Glu Thr Ala Gly Pro Asp Arg
        35                  40                  45
Phe Val Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gln Ala Gly Ile Thr Arg Ser Val
    50                  55                  60
Val Ala Thr Thr Arg Ala Arg Val Cys Arg Arg Lys Tyr Cys Gln Arg
65                  70                  75                  80
Pro Cys Asp Ser Leu His Leu Cys Lys Leu Asn Leu Leu Gly Arg Cys
                85                  90                  95
His Tyr Ala Gln Ser Gln Arg Asn Leu Cys Lys Tyr Ser His Asp Val
            100                 105                 110
Leu Ser Glu Gln Asn Phe Gln Ile Leu Lys Asn His Glu Leu Ser Gly
        115                 120                 125
Leu Asn Gln Glu Glu Leu Ala Cys Leu Leu Val Gln Ser Asp Pro Phe
    130                 135                 140
Phe Leu Pro Glu Ile Cys Lys Ser Tyr Lys Gly Glu Gly Arg Lys Gln
145                 150                 155                 160
Thr Cys Gly Gln Pro Gln Pro Cys Glu Arg Leu His Ile Cys Glu His
                165                 170                 175
Phe Thr Arg Gly Asn Cys Ser Tyr Leu Asn Cys Leu Arg Ser His Asn
            180                 185                 190
Leu Met Asp Arg Lys Val Leu Thr Ile Met Arg Glu His Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Pro Asp Val Val Gln Asn Ile Gln Asp Ile Cys Asn Asn Lys His Ala
    210                 215                 220
Arg Arg Asn Pro Pro Gly Thr Arg Ala Ala His Pro His Arg Arg Gly
225                 230                 235                 240
Gly Ala His Arg Asp Arg Ser Lys Ser Arg Asp Arg Ser Cys Gly Arg
                245                 250                 255
Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gly Ala Lys Gly Pro
        275                 280                 285
Arg Phe Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Met His Thr
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Gly His His His His His His
305                 310
<210>6
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>6
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<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>7
Met Ala Asp Pro Gly Val Cys Cys Phe Ile Thr Lys Ile Leu Cys Ala
1               5                   10                  15
His Gly Gly Arg Met Thr Leu Glu Glu Leu Leu Gly Glu Ile Arg Leu
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Pro Glu Ala Gln Leu Tyr Glu Leu Leu Glu Thr Ala Gly Pro Asp Arg
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Phe Val Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gln Ala Gly Ile Thr Arg Ser Val
    50                  55                  60
Val Ala Thr Thr Arg Ala Arg Val Cys Arg Arg Lys Tyr Cys Gln Arg
65                  70                  75                  80
Pro Cys Asp Ser Leu His Leu Cys Lys Leu Asn Leu Leu Gly Arg Cys
                85                  90                  95
His Tyr Ala Gln Ser Gln Arg Asn Leu Cys Lys Tyr Ser His Asp Val
            100                 105                 110
Leu Ser Glu Gln Asn Phe Gln Ile Leu Lys Asn His Glu Leu Ser Gly
        115                 120                 125
Leu Asn Gln Glu Glu Leu Ala Cys Leu Leu Val Gln Ser Asp Pro Phe
    130                 135                 140
Phe Leu Pro Glu Ile Cys Lys Ser Tyr Lys Gly Glu Gly Arg Lys Gln
145                 150                 155                 160
Thr Cys Gly Gln Pro Gln Pro Cys Glu Arg Leu His Ile Cys Glu His
                165                 170                 175
Phe Thr Arg Gly Asn Cys Ser Tyr Leu Asn Cys Leu Arg Ser His Asn
            180                 185                 190
Leu Met Asp Arg Lys Val Leu Thr Ile Met Arg Glu His Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Pro Asp Val Val Gln Asn Ile Gln Asp Ile Cys Asn Asn Lys His Ala
    210                 215                 220
Arg Arg Asn Pro Pro Gly Thr Arg Ala Ala His Pro His Arg Arg Gly
225                 230                 235                 240
Gly Ala His Arg Asp Arg Ser Lys Ser Arg Asp Arg Phe Leu His Asn
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Ser Leu Glu Phe Leu Ser Pro Val Val Ser Pro Leu Gly Ser Gly Pro
            260                 265                 270
Pro Ser Pro Asp Val Thr Ser Cys Lys Asp Ser Leu Glu Asp Val Ser
        275                 280                 285
Val Asp Val Thr Gln Lys Phe Lys Tyr Leu Gly Thr His Asp Arg Ala
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Gln Met Arg Ala Ser Gln Glu Phe Ser Glu Asp Gly Asn Leu Asp Asp
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Ala Lys Val Ala Gln Arg Asn Glu Ala Val Ala Met Lys Met Gly Met
        355                 360                 365
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Leu Asn Ser Tyr Ile Asp Gly Val Thr Met Glu Lys Ala Ser Val Ser
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Gly Ile Pro Gly Lys Lys Phe Thr Ala Asn Asp Leu Glu Asn Leu Leu
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    450                 455                 460
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Ser Arg Met Thr Ser Asp Pro Asp Glu Tyr Leu Leu Arg Tyr Ile Leu
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Val Glu Leu Ile Leu Ile Glu Asn His Gln Ile Asn Phe Gln Lys Met
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His Thr Ser Ser Asp Ile Asn Ser Ala Tyr Leu Glu Ser Phe Phe Gln
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Ser Cys Pro Arg Gly Val Leu Pro Phe Gln Ala Gly Ser Gln Lys Tyr
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Glu Leu Ser Phe Gln Gly Met Ile Gln Thr Asn Ile Ala Ser Lys Thr
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Gln Arg His Val Val Arg Arg Pro Val Phe Val Ser Ser Asn Asp Val
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Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly
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Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gly Ala Lys Gly Pro Arg Phe Glu Gln Lys
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Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Met His Thr Gly His His His His
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His His
<210>8
<211>2502
<212>DNA
<213>人工序列
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<223>
<400>8
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ggcgcacaca gagacagaag caaaagcaga gaccgcttcc ttcacaacag tctagaattt   780
ctctcacctg ttgtctcacc tctgggatct ggtccgccta gcccagatgt caccagctgt   840
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<210>9
<211>381
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<220>
<223>
<400>9
Met Ala Asp Pro Gly Val Cys Cys Phe Ile Thr Lys Ile Leu Cys Ala
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Pro Cys Asp Ser Leu His Leu Cys Lys Leu Asn Leu Leu Gly Arg Cys
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Leu Asn Gln Glu Glu Leu Ala Cys Leu Leu Val Gln Ser Asp Pro Phe
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Leu Met Asp Arg Lys Val Leu Thr Ile Met Arg Glu His Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Pro Asp Val Val Gln Asn Ile Gln Asp Ile Cys Asn Asn Lys His Ala
    210                 215                 220
Arg Arg Asn Pro Pro Gly Thr Arg Ala Ala His Pro His Arg Arg Gly
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            260                 265                 270
Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Gly Arg Ala Ala Glu Pro
        275                 280                 285
Val Asp Pro Ser Leu Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Ser Gln Pro Arg
    290                 295                 300
Thr Ala Cys Asn Asn Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys Phe His Cys Tyr
305                 310                 315                 320
Ala Cys Phe Thr Arg Lys Gly Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys
                325                 330                 335
Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala Pro Gln Asp Ser Gln Thr His Gln Ala
            340                 345                 350
Ser Leu Ser Lys Gln Pro Arg Phe Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu
        355                 360                 365
Asp Leu Asn Met His Thr Gly His His His His His His
    370                 375                 380
<210>10
<211>1143
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>10
atggcagatc ccggggtatg ctgtttcatc accaagatcc tgtgcgccca cgggggccgt    60
atgaccctgg aggaactgct gggtgagatc aggctccccg aggcgcagct ctacgagctg   120
ctggagacgg cggggcccga tcgcttcgtg ctattggaga ctggaggcca ggccgggatc   180
actcggtctg tagtggctac tactcgagcc cgcgtctgcc gtcggaagta ctgccagaga   240
ccctgcgaca gcctgcacct ctgcaagctt aatctgctcg gccggtgcca ctatgcacag   300
tctcagcgga acctctgcaa atattctcac gatgttctct cggaacagaa cttccagatc   360
ctgaagaatc atgagctctc tgggcttaac caagaggagc tagcttgcct cctggtccaa   420
agcgaccctt ttttcctgcc cgagatatgc aagagttaca aaggagaggg ccgaaaacag   480
acctgtgggc agccacagcc atgcgagaga ctccacatct gtgagcactt cacccggggc   540
aactgcagtt acctcaactg tctcaggtct cacaacctga tggacagaaa ggtgttgacc   600
atcatgaggg agcacgggct gagtcctgat gtggtccaga acatccagga catctgcaac   660
aacaaacacg ccaggaggaa cccgcctggc acgagagctg cccatccaca ccgcagaggc   720
ggcgcacaca gagacagaag caaaagcaga gaccgttcct gcggccgctc gagtggtgga   780
ggctctgggg gaggtacagg aggtggctca ggtgggggca ctggtggagg cagtggaggt   840
ggcgatggcc gcgctgctga gccagtagat cctagtctag agccctggaa gcatccagga   900
agtcagccta ggactgcttg taacaattgc tattgtaaaa agtgttgctt tcattgctac   960
gcgtgtttca caagaaaagg cttaggcatc tcctatggca ggaagaagcg gagacagcga  1020
cgaagagctc ctcaggacag tcagactcat caagcttctc tatcaaagca gccgcggttc  1080
gaacaaaaac tcatctcaga agaggatctg aatatgcata ccggtcatca tcaccatcac  1140
cat                                                                1143
<210>11
<211>194
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>11
Met Ala Asp Pro Gly Val Cys Cys Phe Ile Thr Lys Ile Leu Cys Ala
1               5                   10                  15
His Gly Gly Arg Met Thr Leu Glu Glu Leu Leu Gly Glu Ile Arg Leu
            20                  25                  30
Pro Glu Ala Gln Leu Tyr Glu Leu Leu Glu Thr Ala Gly Pro Asp Arg
        35                  40                  45
Phe Val Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gln Ala Gly Ile Thr Arg Ser Val
     50                 55                  60
Val Ala Thr Thr Arg Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr Gly
65                  70                  75                  80
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Gly
                85                  90                  95
Arg Ala Ala Glu Pro Val Asp Pro Ser Leu Glu Pro Trp Lys His Pro
            100                 105                 110
Gly Ser Gln Pro Arg Thr Ala Cys Asn Asn Cys Tyr Cys Lys Lys Cys
        115                 120                  125
Cys Phe His Cys Tyr Ala Cys Phe Thr Arg Lys Gly Leu Gly Ile Ser
    130                 135                 140
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala Pro Gln Asp Ser
145                 150                 155                 160
Gln Thr His Gln Ala Ser Leu Ser Lys Gln Pro Arg Phe Glu Gln Lys
                165                 170                 175
Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Met His Thr Gly His His His His
            180                 185                 190
His His
<210>12
<211>582
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>12
atggcagatc ccggggtatg ctgtttcatc accaagatcc tgtgcgccca cgggggccgt    60
atgaccctgg aggaactgct gggtgagatc aggctccccg aggcgcagct ctacgagctg   120
ctggagacgg cggggcccga tcgcttcgtg ctattggaga ctggaggcca ggccgggatc   180
actcggtctg tagtggctac tactcgatcg agtggtggag gctctggggg aggtacagga   240
ggtggctcag gtgggggcac tggtggaggc agtggaggtg gcgatggccg cgctgctgag   300
ccagtagatc ctagtctaga gccctggaag catccaggaa gtcagcctag gactgcttgt   360
aacaattgct attgtaaaaa gtgttgcttt cattgctacg cgtgtttcac aagaaaaggc   420
ttaggcatct cctatggcag gaagaagcgg agacagcgac gaagagctcc tcaggacagt   480
cagactcatc aagcttctct atcaaagcag ccgcggttcg aacaaaaact catctcagaa   540
gaggatctga atatgcatac cggtcatcat caccatcacc at                      582
<210>13
<211>285
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>13
Met Ala Asp Pro Gly Val Cys Cys Phe Ile Thr Lys Ile Leu Cys Ala
1               5                   10                  15
His Gly Gly Arg Met Thr Leu Glu Glu Leu Leu Gly Glu Ile Arg Leu
            20                  25                  30
Pro Glu Ala Gln Leu Tyr Glu Leu Leu Glu Thr Ala Gly Pro Asp Arg
        35                  40                  45
Phe Val Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gln Ala Gly Ile Thr Arg Ser Val
     50                 55                  60
Val Ala Thr Thr Arg Ala Arg Val Cys Arg Arg Lys Tyr Cys Gln Arg
65                  70                  75                  80
Pro Cys Asp Ser Leu His Leu Cys Lys Leu Asn Leu Leu Gly Arg Cys
                85                  90                  95
His Tyr Ala Gln Ser Gln Arg Asn Leu Cys Lys Tyr Ser His Asp Val
            100                 105                 110
Leu Ser Glu Gln Asn Phe Gln Ile Leu Lys Asn His Glu Leu Ser Gly
        115                 120                 125
Leu Asn Gln Glu Glu Leu Ala Cys Leu Leu Val Gln Ser Asp Pro Phe
    130                 135                 140
Phe Leu Pro Glu Ile Cys Lys Ser Tyr Lys Gly Glu Gly Arg Lys Gln
145                 150                 155                 160
Thr Cys Gly Gln Pro Gln Pro Cys Glu Arg Leu His Ile Cys Glu His
                165                 170                 175
Phe Thr Arg Gly Asn Cys Ser Tyr Leu Asn Cys Leu Arg Ser His Asn
            180                 185                 190
Leu Met Asp Arg Lys Val Leu Thr Ile Met Arg Glu His Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Pro Asp ValVal Gln Asn Ile Gln Asp Ile Cys Asn Asn Lys His Ala
    210                215                 220
Arg Arg Asn Pro Pro Gly Thr Arg Ala Ala His Pro His Arg Arg Gly
225                 230                 235                 240
Gly Ala His Arg Asp Arg Ser Lys Ser Arg Asp Arg Ser Cys Gly Arg
                245                 250                 255
Ser Ser Leu Glu Gly Pro Arg Phe Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu
            260                 265                 270
Asp Leu Asn Met His Thr Gly His His His His His His
        275                 280                 285
<210>14
<211>855
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>14
atggcagatc ccggggtatg ctgtttcatc accaagatcc tgtgcgccca cgggggccgt    60
atgaccctgg aggaactgct gggtgagatc aggctccccg aggcgcagct ctacgagctg    120
ctggagacgg cggggcccga tcgcttcgtg ctattggaga ctggaggcca ggccgggatc    180
actcggtctg tagtggctac tactcgagcc cgcgtctgcc gtcggaagta ctgccagaga    240
ccctgcgaca gcctgcacct ctgcaagctt aatctgctcg gccggtgcca ctatgcacag    300
tctcagcgga acctctgcaa atattctcac gatgttctct cggaacagaa cttccagatc    360
ctgaagaatc atgagctctc tgggcttaac caagaggagc tagcttgcct cctggtccaa    420
agcgaccctt ttttcctgcc cgagatatgc aagagttaca aaggagaggg ccgaaaacag    480
acctgtgggc agccacagcc atgcgagaga ctccacatct gtgagcactt cacccggggc    540
aactgcagtt acctcaactg tctcaggtct cacaacctga tggacagaaa ggtgttgacc    600
atcatgaggg agcacgggct gagtcctgat gtggtccaga acatccagga catctgcaac    660
aacaaacacg ccaggaggaa cccgcctggc acgagagctg cccatccaca ccgcagaggc    720
ggcgcacaca gagacagaag caaaagcaga gaccgttcct gcggccgctc gagtctagag    780
ggcccgcggt tcgaacaaaa actcatctca gaagaggatc tgaatatgca taccggtcat    840
catcaccatc accat                                                     855

Claims (10)

1、一种抗病毒的融合蛋白，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：
1)序列表中的SEQ ID №：1；
2)将序列表中SEQ ID №：1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且可特异性降解HIV病毒RNA的蛋白质。
2、根据权利要求1所述的抗病毒的融合蛋白，其特征在于：所述病毒为HIV病毒。
3、权利要求1或2所述的抗病毒的融合蛋白的编码基因。
4、根据权利要求3所述基因，其特征在于：所述抗病毒的融合蛋白的编码基因具有下述核苷酸序列之一：
1)序列表中SEQ ID №：2的核苷酸序列；
2)编码序列表中SEQ ID №：1蛋白质序列的DNA；
3)在高严谨条件下可与序列表中的SEQ ID №：2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
5、含有权利要求3或4所述抗病毒的融合蛋白的编码基因的表达载体。
6、含有权利要求3或4所述抗病毒的融合蛋白的编码基因的细胞系。
7、含有权利要求3或4所述抗病毒的融合蛋白的编码基因的宿主菌。
8、权利要求1、2所述的抗病毒的融合蛋白及其编码基因在制备抗病毒药物中的应用。
9、根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述病毒为HIV病毒。
10、根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述抗病毒药物为预防和/或治疗艾滋病的药物。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2015002956A1 (en) * 2013-07-01 2015-01-08 Ohio State Innovation Foundation Exosome delivery system

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CN101525388B (zh) * 2009-02-20 2012-02-01 中国人民解放军第四军医大学 特异性双链rna结合蛋白嵌合体及其在病毒感染性疾病中的应用
WO2015002956A1 (en) * 2013-07-01 2015-01-08 Ohio State Innovation Foundation Exosome delivery system

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Contract record no.: 2009990000630

Denomination of invention: Antiviral fusion protein and its coding gene and uses

Granted publication date: 20080423

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Free format text: EXCLUSIVE LICENSE; TIME LIMIT OF IMPLEMENTING CONTACT: 2009.3.26 TO 2014.3.25; CHANGE OF CONTRACT

Name of requester: BEIJING BAICHUANFEIHONG BIOLOGY SCIENCE CO., LTD.

Effective date: 20090608

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