CN1749271A - 人类新蛋白Hunsp18及其编码序列 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新的人类蛋白多肽Hunsp18、该蛋白多肽的编码序列、含有该编码序列的载体及宿主细胞。本发明还公开了一种利用重组技术生产上述的新的人Hunsp18蛋白和核酸序列的方法。

Description

人类新蛋白Hunsp18及其编码序列

技术领域

本发明涉及分子生物学、细胞生物学、基因工程等领域。具体地，本发明涉及一个预测的新蛋白Hunsp18及其编码序列。

背景技术

人类基因组计划(human genome project HGP)是由美国科学家在1985年首先提出的。它是一项希望解开人类生老病死的奥秘，并彻底破解控制各种疾病基因密码的国际科学研究工程，是人类生命科学史上最伟大的工程。

1988年，美国全国卫生协会和能源部开始组织和实施这项计划，1990年10月正式启动，耗资30亿美元。人类只有一个基因组，大约有5万～10万个基因，30亿个碱基对。

人类基因组工程的目标是：(1)建立一高分辨力的人体基因组图谱。(2)建立某些选择性模型机体(如大肠杆菌、线虫等)的DNA和人体染色体的基因物质图谱。(3)测定这些人体和选择性机体的DNA序列，以便更好了解正常基因调控、基因遗传性疾病及其演化过程。(4)建立软件和数据库以提高应用和判断这些基因信息的效能。(5)发明有关的创新技术。(6)建立HGP的伦理学、法律和社会参与的程序。

通过国际合作，用15年时间构建详细的人类基因组遗传图和物理图，并期望通过分析每个人类基因的功能和基因在染色体上的位置，使医学专家们了解所有疾病的分子结构，从而在根本上获得治疗的方法，进而破译人类全部遗传信息，使人类第一次在分子水平上全面地认识自我，最终解开人类生命的奥秘。

现代遗传学家认为，基因是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传效应的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。基因位于染色体上，呈线性排列。基因不仅可以通过复制把遗传信息传递给下一代，还可以使遗传信息得到表达，也就是使遗传信息以一定的方式反映到蛋白质的分子结构上，从而使后代表现出与亲代相似的性状。

研究结果表明，每一条染色体都含有一个DNA分子，每个DNA分子又含有很多个基因，一个基因就是DNA分子的一部分。一个基因要有正常的生理机能，它的几个正常组成部分一定要位于相继邻近的位置上，也就是说核苷酸要排成一定的次序，才能决定一种蛋白质的分子结构。假使一个基因的几个正常组成部分分处于两条染色体上，理论上就是核苷酸的种类和排列改变了，这样就会失去正常的生理机能。所以，基因不仅是一个遗传物质在上下代之间传递的基本单位，也是一个功能上独立的单位。

几乎每个人一生下来就带着各种病，这可能就是人体内的有缺陷基因造成的。这些基因在人生长的特定时期才会反应，接下来就会表现出各种症状。科学家估计，在人体内5万～10万个基因中，大约有30％～40％与人类疾患有关，其中有上千个基因又与肿瘤有关。因此，能破解这些基因就成为现代生物学的重要任务。人类基因组工程正由此产生。

所谓基因组是指：一个细胞或病毒所携带的全部遗传信息或整套基因，也就是说是细胞内全部DNA分子的总和。人类基因组由23条染色体(人类染色体的总数是23对)上，约含30亿对核苷酸的DNA分子构成。它包括大量的重复序列、以及非编码序列和可以编码序列。而基因的概念是DNA分子中可以当作模板转录为成熟的mRNA(也包括其它RNA)并可翻译为具有生理功能分子的序列。我们可以这样理解：人体细胞内的遗传信息是基本一致的，都包含有相同的基因组DNA，其中约含有4万个基因。但是人体每一组织、每一细胞，在不同的发育、分化阶段，不同的生理条件和病理状态下，其表达的基因种类以及每一基因的表达丰度都是各不相同的。这种基因表达的差别受到精密调控。生物体在不同的时空条件下，随时调整不同的基因表达状态，以便更好地适应环境、维持生长和发育的需要。

在本发明公布之前，未有人对Hunsp18做公开的报道；更未有人对该蛋白的功能进行阐述。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种新的人类蛋白多肽Hunsp18、该蛋白多肽的编码序列、含有该编码序列的载体及宿主细胞，以及该蛋白的抗体。

本发明的再一目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人Hunsp18蛋白和核酸序列的方法。

本发明的上述目的是通过如下技术方案来实现的：

在本发明的一方面，提供了一种分离的人Hunsp18蛋白多肽，所述多肽具有与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列。优选的，所述多肽是具有SEQ ID NO.2序列的多肽。

在本发明的另一个方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包括：编码具有人Hunsp18蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述多核苷酸具有与SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列有至少70％同源性的序列；或者所述的多核苷酸具有能在中度严紧条件下与SEQ IDNO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列杂交的序列。优选的，所述的多核苷酸编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.2所示的序列。更优的，所述的多核苷酸具有SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列。

在本发明的再一方面，还提供了一种载体，所述载体含有上述分离的多核苷酸。

在本发明的又一方面，还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞是用上述载体转化的宿主细胞。在一个实施例中，该宿主细胞是大肠杆菌；在另一个实施例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的又一方面，还提供了一种产生具有Hunsp18蛋白活性的多肽的方法，该方法包括如下步骤：

(a)将编码具有Hunsp18蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成Hunsp18蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列有至少70％同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成Hunsp18蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达Hunsp18蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有Hunsp18蛋白活性的多肽。

优选的，步骤(a)中所述的核苷酸序列为SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列。

在本发明的又一方面，还提供了一种抗体，所述抗体能与上述Hunsp18蛋白的部分肽段特异性结合。

本发明还提供了一种探针分子，所述的探针分子含有上述多核苷酸中约8-100个连续的核苷酸。

本发明的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA，或人工化学合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。单链的DNA可以是编码链或非编码链。

在本发明中，“分离的”多核苷酸是指，该多核苷酸或片断已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该多核苷酸或片断已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。

本发明中，术语“Hunsp18蛋白(或多肽)编码序列”是指编码具有Hunsp18蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1中397-870位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO.1序列的编码框397-870位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO.1中397-870位核苷酸序列同源性低至约70％的简并序列也能编码出SEQ ID NO.2所述的序列。该术语还包括在中度严紧条件下，更佳地在高度严紧条件下，与SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。此外，该术语还包括与SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列的同源性至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列。

该术语还包括能编码具有与人Hunsp18相同功能的蛋白的、SEQ ID NO.1中开放阅读框序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：若干个(通常位1-90个，较佳地1-60个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个(通常位60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。

在本发明中，术语“Hunsp18蛋白多肽”是指具有HUNSP18蛋白活性的SEQ ID NO.2序列的多肽。该术语还包括具有与人Hunsp18蛋白相同功能的、SEQ ID NO.2序列的变异形式。这些变异形式包括(但不限于)：若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括Hunsp18蛋白的活性片断和活性衍生物。

该多肽的变异形式包括：同源序列、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧度条件下能与Hunsp18 DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗Hunsp18多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本发明还提供了其他多肽，如包含Hunsp18多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本发明还提供了Hunsp18多肽的可溶性片段。通常，该片段具有Hunsp18多肽序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较佳地至少约50个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氨基酸，最佳地至少约100个连续氨基酸。

发明还提供Hunsp18蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然Hunsp18多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还可以包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。

修饰(通常不改变一级结构)形式包括：体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。

在本发明中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体。

在本发明中，术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞和哺乳动物细胞。

另一方面，本发明还包括对Hunsp18 DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的抗体，尤其是单克隆抗体。这里“特异性”是指抗体能结合于Hunsp18基因产物或片段。较佳地，指那些能与Hunsp18基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制Hunsp18蛋白的分子，也包括那些并不影响Hunsp18蛋白功能的抗体。本发明还包括那些能与修饰或未经修饰形式的Hunsp18基因产物结合的抗体。

本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab′或(Fab)₂片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子(Ladner等人，美国专利NO.4,946,778)；或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。

本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的Hunsp18基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达Hunsp18或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人，Nature 256；495，1975；Kohler等人， Eur.J.Immunol.6：511，1976；Kohler等人， Eur.J.Immunol.6：292，1976；Hammerling等人， In Monoclonal Antibodies and T Cell Hvbridomas，Elsevier，N.Y.，1981)。本发明的抗体包括能阻断Hunsp18功能的抗体以及不影响Hunsp18功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用Hunsp18基因产物的片段或功能区，通过免疫技术获得，这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与Hunsp18基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。

本发明的Hunsp18核苷酸序列全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按已知方法制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列，这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。当然，也可通过先合成多个小片段，然后再进行连接而获得序列很长的片段。

附图说明

图1是本发明实施例1的Hunsp18编码序列电泳图谱；

图2是本发明实施例2的Hunsp18信号肽软件预测结果图；

图3是本发明实施例3的Hunsp18 Western blot结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。

实施例1

获得Hunsp18蛋白的全长编码序列

根据NCBI公共数据库的序列信息设计5’和3’端引物，以包括成人脾、心脏、脑、小肠、胸腺、肌肉、肺、睾丸、肾、肝十种cDNA的混合cDNA库为模板，采用RT-PCR的方法获得Hunsp18蛋白的全长编码序列。

1.引物设计：

F-5’GTGAATTCATTAAGGGTAACACCA(SEQ ID NO.3)

R-5’CTGGATCCAGTCTACAGTTGATCA(SEQ ID NO.4)

2.RT-PCR

成分	体积
		混合cDNA库10×Pfu BufferF-primer(10pmol/ul)R-primer(10pmol/ul)dNTP Mix(10mM of each dNTP)Pfu酶(5U/ul)dd H2O	1.0ul1.0ul0.5ul0.5ul0.2ul0.1ul6.7ul
总体积	10ul

PCR条件：94℃ 1min，58℃ 1min，72℃ 1min；35 cycles；电泳检测PCR扩增产物，获得大小为637bp的DNA片段(见图1)。

3. BamH I与EcoR I双酶切Hunsp18的PCR产物和质粒pcDNA3.1A

成分	体积
		纯化PCR产物/质粒10×Buffer KBamH I(10U/ul)EcoR I(10U/ul)dd H2O	5.0ul2.0ul1.0ul1.0ul11ul
总体积	20ul

37℃酶切2hr

4.连接

成分	体积
		PCR酶切产物10×T4 ligase BufferpcDNA3.1A酶切产物T4 DNA Ligase(6U/ul)	6.0ul1.0ul2.0ul1.0ul
总体积	10ul

16℃连接16hr

5.转化

取5ul连接产物加入感受态细胞DH5α中，置于冰上1h，42℃热激90s后立即放在冰上，加入1ml不含抗生素的LB培养基，37℃摇床培养1h，将转化的菌液涂于LB(Amp)板上，37℃培养过夜。在平板上分别挑取多个菌落作PCR鉴定。

6.质粒提取

用VIOGENE公司的质粒抽提试剂盒提取PCR鉴定为阳性的克隆质粒，经核酸测序获得Hunsp18蛋白编码基因的核酸序列。

实施例2

Hunsp18蛋白的生物信息学分析

1. Hunsp18的mRNA的长度为2218bp，其中预测蛋白编码区域位于397-870位核苷酸，它编码157个氨基酸残基，分子量为17883Da。核酸及蛋白序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.根据SOURCE：http：//genome-www5.stanford.edu/cgi-bin/source/source Search预测，Hunsp18组织分布较特异，大部分表达在骨髓中。

组织(Tissue)	标准化后的表达(Normalized Expression)(％)	聚类克隆(Cluster Clones)∶组织克隆(Tissue clones)
			骨髓(Bone_Marrow)	77.08	5∶29358
其余	5.99	6∶453262
			前列腺(Prostate)	4.69	1∶96490
淋巴节(Lymph_Node)	3.98	1∶113845
			肾(Kidney)	3.97	1∶113953
混合(mixed)	2.88	2∶314221
			脑(Brain)	1.42	1∶319386

3.根据SignalP2.0 http：//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP-2.0/和SMARThttp：//smart.embl-heidelberg.de/预测，Hunsp18为一分泌蛋白(见图2)。

4.根据SOSUI分析，Hunsp18蛋白含有一个转膜螺旋区域。

No.	N端(N terminal)	跨膜区(transmembrane region)	C端(C terminal)	类型	长度
						1	8	NLAAISVGISLLLLLVVCGIGCV	30	PRIMARY	23

实施例3

Western bloting

1)铺细胞

CHO细胞接种密度是1-1.5×105/35mm培养皿；

37℃，5％CO₂培养5-24小时，使细胞贴壁；

2)转染

A：质粒用量12ug，+100ul DMEM(无血清，无抗生素)，混匀；

B：脂质体Lipofectamine(GibcoBRL公司)3ul-5ul，+100ul DMEM(无血清，无抗生素)，混匀；

A+B，混匀，室温静置15-45min，一般30min；

培养细胞去上清，用DMEM(无血清，无抗生素)洗一次，加800ul DMEM(无血清，无抗生素)，滴入转染混合液，摇匀；37℃，5％CO₂培养5-24小时，换液为DMEM(10％FCS)，继续培养至总转染时间为48-72小时。

3)样品处理

上清：收集细胞培养盘中的上清，13000rpm，8min。收集离心上清，取200ul纯化。

细胞：用PBS(pH7.4)2ml洗盘中细胞两次，加200ul裂解缓冲液，冰上20分钟裂解。然后刮下细胞，将裂解液于4℃离心12000rpm，8min，回收上清，进行纯化。

TALON树脂预处理：将1体积的TALON树脂贮存液于5000rpm离心5分钟，去上清，用1×E/W缓冲液洗两次，然后加等体积的1×E/W缓冲液得到50％的树脂混合液。

样品纯化：在样品中加入适量的预处理过的50％Slurry，加入800ul1×E/W缓冲液，4℃结合2小时。8000rpm离心5分钟去上清，用1×E/W缓冲液洗3-4次，去除非特异结合的蛋白。

4)蛋白电泳及转膜

常规蛋白电泳分离样品；15％分离胶，60V 30min，160V 1hr20min。

湿法转膜1hr，电压110V。

5)膜的封闭

3％脱脂牛奶/2％BSA/PBST 50ml，水平摇床，室温封闭4小时

6)一抗(鼠抗人C-Myc 9E10)

用封闭液稀释一抗，鼠抗人C-myc 9E10(200ng/ul)稀释倍数：1000倍；将膜完全没于一抗稀释液中。

水平摇床，室温2小时，也可过夜。

PBST室温洗3*10分钟

7)二抗(HRP-羊抗鼠IgG)

用封闭液稀释二抗，10000倍稀释；

水平摇床，室温2小时；

PBST室温洗3*10分钟

8)检测

将检测试剂(ECL plus)A液与B液以40∶1的比例混合，用量为0.1ml/cm²；

膜置于吸水纸上干燥，蛋白面朝上，检测试剂加在膜上，覆盖整个膜表面，室温放置2分钟；

用镊子夹起PVDF膜，使膜的下边角搭在纸巾上，吸干多余的检测试剂；膜用保鲜膜封起，暗室曝光(见图3)。

由Western bloting图可以看到：Hunsp18-pcDNA3.1质粒瞬转宿主CHO细胞，其蛋白仅表达细胞裂解液中，在培养基中却不表达。至于该蛋白是否为分泌蛋白，有待于稳定柱建立后进一步验证。

实施例4

Hunsp18蛋白CHO稳定表达细胞株的构建

1.2μg真核表达质粒用脂质体转染到CHO细胞(35mm培养皿)，培养12小时；

2.消化至100mm培养皿，加G418至终浓度1000μg/ml(CHO)，培养2-3星期直至有克隆形成；

3.吸去培养皿内的培液，PBS洗两次，胰酶浸泡过的无菌滤纸片覆盖于克隆上，消化数分钟后转移至24孔培养皿，继续培养获得稳定细胞株。

实施例5

Hunsp18蛋白肽段的表达

1.原核表达载体的构建

1)引物设计

F-5’GTGAATTCATGTCGAAAAGCTGTG(SEQ ID NO.5)

R-5’TTCTCGAGCTAATATGAATCTGGA(SEQ ID NO.6)

2)如常规方法酶切，连接，转化，抽质粒，酶切鉴定。

2. Hunsp18蛋白的原核表达

将质粒转化了大肠杆菌BL21菌株；

挑单克隆接种于5mlLB(Amp)培养基中，37℃摇床300rpm过夜；

取500ul菌液接种于50mlLB(Amp)中，37℃摇床300rpm培养2hr；

加入0.5mMIPTG诱导，28℃摇床200rpm培养2hr，4hr，6hr；

8000rpm，4℃离心10min，去上清，加入预冷的PBS重悬；

冰浴超声裂解细胞成匀浆；

SDS-PAGE电泳检测。

                          序列表

<110>上海人类基因组研究中心

<120>人类新蛋白Hunsp18及其编码序列

<130>NP-1414

<160>6

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>2218

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>CDS

<222>(397)..(870)

<400>1

gtaaaagaac aaaagagaga gcttgacaca ccaatcttga ggtgttgtgc cattctctgg     60

gaacatacag atgaaatgac ctgaaccctg cccaccattt aaccaaaaaa ggaagtggaa    120

tggaataaaa tcccccaata cagtacaatt atacattaat ggctgtaatg tgaagagcat    180

cacacacgaa gagagccatc ttccagaaat aagtttatac actctctcct ctaattgcat    240

caggacttta ccagataatg ttcttccaga tctgaaaagg aaaatgctta aaagagcttc    300

caaactcatt tttgaataat actaggctac aaagaattac actgtgaatt cattaagggt    360

aacaccaaac cactaaacag cactgtttgt acagaa atg tcg aaa agc tgt gga      414

                                        Met Ser Lys Ser Cys Gly

                                        1               5

aat aat tta gcg gcc att tct gta gga att tcg ctt ctt tta ctc tta      462

Asn Asn Leu Ala Ala Ile Ser Val Gly Ile Ser Leu Leu Leu Leu Leu

            10                  15                  20

gtg gtt tgt gga att ggg tgt gtt tgg cac tgg aaa cac cgt gtt gcc      510

Val Val Cys Gly Ile Gly Cys Val Trp His Trp Lys His Arg Val Ala

        25                  30                  35

aca cga ttt acc tta ccg agg ttt tta caa agg aga agc agc agg aga      558

Thr Arg Phe Thr Leu Pro Arg Phe Leu Gln Arg Arg Ser Ser Arg Arg

    40                  45                  50

aaa gtc tgt act aaa aca ttc ttg ggc ccc cgc atc att ggc tta agg      606

Lys Val Cys Thr Lys Thr Phe Leu Gly Pro Arg Ile Ile Gly Leu Arg

55                  60                  65                  70

cat gaa atc tca gtt gaa acc caa gac cac aaa tct gct gtc agg gga      654

His Glu Ile Ser Val Glu Thr Gln Asp His Lys Ser Ala Val Arg Gly

                75                  80                  85

aat aac aca cac gac aac tat gaa aat gtg gaa gca ggt cct ccc aaa      702

Asn Asn Thr His Asp Asn Tyr Glu Asn Val Glu Ala Gly Pro Pro Lys

            90                  95                  100

gct aaa gga aaa acc gat aag gaa cta tat gaa aac aca ggg cag tct      750

Ala Lys Gly Lys Thr Asp Lys Glu Leu Tyr Glu Asn Thr Gly Gln Ser

        105                 110                 115

aat ttc gag gag cat atc tat gga aat gag aca tct tct gac tat tat      798

Asn Phe Glu Glu His Ile Tyr Gly Asn Glu Thr Ser Ser Asp Tyr Tyr

    120                 125                 130

aac ttc cag aag cct cgt cct tct gaa gtt cct caa gat gaa gat ata      846

Asn Phe Gln Lys Pro Arg Pro Ser Glu Val Pro Gln Asp Glu Asp Ile

135                 140                 145                 150

tac att ctt cca gat tca tat tag cttttcaaaa tattgacttt tgttattggg     900

Tyr Ile Leu Pro Asp Ser Tyr

                155

tgataaatat tcactgtaat ttttcaacag caaagacaag gaatcaaact aaatgttgat    960

caactgtaga ctggataaag aaaatgtggt acacatacac catagaatat tatgcagccg   1020

taaaaaaaga acaaaactaa catgggaaca gaaaatcaaa taccacatat tctcacttaa   1080

aagtgggagc taaataataa gaacacatgg agagaaggag aggaacaaca gacactgggg   1140

cctacttgag ggaggacagt ggaaggaggg agaggttcag ggaaaaaaaa aatatcaggt   1200

actatgctta gtacacacat gatgaaataa tctgtacacc aaacccccaa gtcacaagtg   1260

ttcctacata acaaacctga acatgtaccc ctgaacataa aattataatt aaaatattaa   1320

aaataattca ctgtgatttt tatggtactg atgccattct taatcaagtt ctgataagtg    1380

gatggtctct gcctatctcc acctttctga atcctatgtg tatcactgtg gattaattct    1440

agatatcttc tccaccctcc ttgcaccaga ctaaatctgt attatgtgat attgattctt    1500

ccttctaaat attacccgtt atctctttcc tttatttcta ccattatctt tatctggctc    1560

agaattattg tcataggctc ctaactgttc ctcctgcttc tagtttctac ccactcaatc    1620

aattaccgat ggtgttgcca gatttatctt cagaaaatat tcctaacagc cacattattt    1680

ctttcactta aaatgtttta atgccccctc tttgcaaaag acataatacc cataatttga    1740

actccaaaat ttatggtttt ccacaattgg ttccaattca cttttccagt gacttctctt    1800

actatctctc atttctttgc cttcagcaga atcatcttaa aacctgccaa acttatcctt    1860

ccttcacagc tttgcttttc tgcctcttct ctcaagcctg cttcagatca taagttcttc    1920

cacacatctc ctgaatcact ccaaacccgc atttaccttt ttattttctg atataagctt    1980

tgatgcctct tcaattctta ggacatttaa acatatgaat gttgccacag cattttatta    2040

cctagcttca tatgaaaatg tcttaaattc ccacctaaat gaaaagaaac tgcccaaatg    2100

cctagaacat cacataaggc actaaatgcc tcatgtttta ctgacgggaa ttgaattgta    2160

cattttgctg agtagttttg agaaaaaaat ctaataaatt catctgttat tcatccat      2218

<210>2

<211>157

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>2

Met Ser Lys Ser Cys Gly Asn Asn Leu Ala Ala Ile Ser Val Gly Ile

1               5                   10                  15

Ser Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Cys Gly Ile Gly Cys Val Trp His

            20                  25                   30

Trp Lys His Arg Val Ala Thr Arg Phe Thr Leu Pro Arg Phe Leu Gln

        35                  40                  45

Arg Arg Ser Ser Arg Arg Lys Val Cys Thr Lys Thr Phe Leu Gly Pro

    50                  55                  60

Arg Ile Ile Gly Leu Arg His Glu Ile Ser Val Glu Thr Gln Asp His

65                  70                  75                  80

Lys Ser Ala Val Arg Gly Asn Asn Thr His Asp Asn Tyr Glu Asn Val

                85                  90                  95

Glu Ala Gly Pro Pro Lys Ala Lys Gly Lys Thr Asp Lys Glu Leu Tyr

            100                 105                 110

Glu Asn Thr Gly Gln Ser Asn Phe Glu Glu His Ile Tyr Gly Asn Glu

        115                 120                 125

Thr Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Phe Gln Lys Pro Arg Pro Ser Glu Val

    130                 135                 140

Pro Gln Asp Glu Asp Ile Tyr Ile Leu Pro Asp Ser Tyr

145                 150                 155

<210>3

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>3

gtgaattcat taagggtaac acca                                                 24

<210>4

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>4

ctggatccag tctacagttg atca                                                   24

<210>5

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>5

gtgaattcat gtcgaaaagc tgtg                                                   24

<210>6

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>6

ttctcgagct aatatgaatc tgga                                                   24

Claims (10)

1.一种分离的人Hunspl8蛋白多肽，其特征在于，所述多肽具有与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列。

2.如权利要求1所述的一种分离的人Hunspl8蛋白多肽，其特征在于，所述多肽是具有SEQ ID NO.2序列的多肽。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包括：编码具有人Hunspl8蛋白活性的多肽的核苷酸序列，

所述多核苷酸具有与SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列有至少70％同源性的序列；或者

所述的多核苷酸具有能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列杂交的序列。

4.如权利要求3所述的一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.2所示的序列。

5.如权利要求3所述的一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸具有SEQ IDNO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列。

6.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求3所述的分离的多核苷酸。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是用权利要求6所述载体转化的宿主细胞。

8.一种产生具有Hunspl8蛋白活性的多肽的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(a)将编码具有Hunspl8蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成Hunspl8蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸397-870位的核苷酸序列有至少70％同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成Hunspl8蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达Hunspl8蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有Hunspl8蛋白活性的多肽。

9.一种抗体，其特征在于，所述抗体是能与权利要求1所述的Hunspl8蛋白多肽特异性结合的抗体。

10.一种探针分子，其特征在于，所述的探针分子含有权利要求1所述的多核苷酸中约8-100个连续的核苷酸。

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