CN1748794A - 氮杂癸间五烯基酮类化合物的用途 - Google Patents

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Abstract

公开了氮杂癸间五烯基酮类化合物的用途，用于制备治疗5－羟色胺和去甲肾上腺素神经递质降低所导致的疾病的药物。

Description

氮杂癸间五烯基酮类化合物的用途
技术领域
本发明涉及氮杂癸间五烯基酮类化合物在制备药物中的用途，具体地说，涉及它作为五羟色胺和去甲肾上腺素双重转运蛋白再摄取抑制剂在制备治疗哺乳动物各种与5-羟色胺和去甲肾上腺素神经递质降低有关的疾病(包括肥胖、酒精中毒、疼痛、尿失禁、丧失记忆、焦虑、吸烟等)的药物中的应用。
背景技术
在过去四十年中，对脑内神经单胺类递质与各种疾病和状态的关系进行了评价和研究。研究发现，单胺类神经递质尤其是5-羟色胺和去甲肾上腺素在控制及治疗肥胖、抑郁、酒精中毒、疼痛、尿失禁、丧失记忆、焦虑、吸烟等方面有重要作用(美国专利5026707)。而选择性单胺类转运蛋白再摄取抑制剂的发现为治疗上述生理和心理上的疾病提供了新的工具。单胺类转运蛋白再摄取抑制剂通过抑制单胺类转运蛋白而不干扰神经突触后受体的功能，使突触间隙中内源的单胺类递质恢复至正常范围内，从而达到治疗上述疾病的效果。例如盐酸氟西汀是选择性和特异性的5-羟色胺转运蛋白再摄取抑制剂(SSRIs)，于1987年作为第一个SSRIs的抗抑郁药被美国FDA批准上市，随后几年氟西汀新增适应症用于焦虑症的治疗，目前对食欲不振以及其它失调的治疗正在进行临床评价。与此相似托莫西汀是选择性和特异性的去甲肾上腺素转运蛋白再摄取抑制剂，也已用于治疗抑郁症，正在对其治疗尿失禁进行临床观察。在美国专利4018895，4194009，4314081和5026707等号中公开的许多化合物是作为5-羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺转运蛋白有效的再摄取抑制剂。
目前科学研究发现，同时抑制5-羟色胺、去甲肾上腺素转运蛋白再摄取的药物，可能会有更好的疗效，更广的适应症以及更少的毒副作用。例如，美国家用产品公司于97年推出了第一个同时能抑制5-羟色胺、去甲肾上腺素转运蛋白双重摄取的抗抑郁药(SNRI)：文拉法辛(venlafaxine)，该药的最突出的特点是起效迅速，而现代抗抑郁药面临的一个主要难题是如何解决其快速起效的问题，文拉法辛对重症抑郁症、难治性抑郁症、焦虑症均有明显疗效。与此类似，西布曲明(sibutramine)是Knoll公司于1997年上市的5-羟色胺和去甲肾上腺素转运蛋白双重摄取的抗抑郁药，临床上用于抑郁症和肥胖症的治疗，并于2000年成功在中国上市销售，该药显示了良好疗效。最为欣慰的是美国礼来制药公司生产的对5-羟色胺和去甲肾上腺素转运蛋白双重抑制的化合物度罗西汀(duloxetine)，现有研究资料表明，该药对紧张性尿失禁、抑郁症、肥胖症、疼痛等均有良好的疗效，并在2002年9月由美国FDA批准用于重症抑郁症，在2004年初度罗西汀(duloxetine)用于治疗紧张性尿失禁的申请已获批准。与SSRI相比，目前对SNRI类化合物的探索较少。一系列该类药物的上市促使科学家们更大力度开发作用于5-HT和去甲肾上腺素转运蛋白系统双重途径的新型药物。
因此，本领域迫切需要能针对5-HT和去甲肾上腺素转运蛋白系统双重途径的新型药物。
发明内容
因此，本发明提供氮杂癸间五烯基酮类化合物的一种制备治疗5-羟色胺和去甲肾上腺素神经递质降低所导致的疾病的药物，优选是治疗肥胖、酒精中毒、疼痛、尿失禁、丧失记忆、焦虑或吸烟的药物。
在本发明的一个方面，该药物是五羟色胺和去甲肾上腺素转运蛋白双重再摄取抑制剂。
在本发明的一个优选实施方案中，该药物是片剂、颗粒剂、针剂、粉剂或胶囊。
在该方面的一个优选例中，化合物选自：
普罗托品、紫堇胺、紫堇维定、紫堇文碱、4，6，7，14-四氢-12-甲氧基-5-甲基双[1，3]-苯二氧合桥[4，5-c：5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-13(5H)-酮、克利多平、崖椒碱I、崖椒碱II、红乃马草碱、4，6，7，13-四氢-9-羟基-10-甲氧基-5-甲苯基[e]-1，3-二氧合桥[4，5-1][2]苯氮杂癸间五烯基-12(5H)-酮、5，7，8，14-四氢-3，4，10，11-四甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮、N-氧代普罗托品、5，7，8，14-四氢-4-羟基-3，10，11-三甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮、5，7，8，15-四氢-6-甲基双[1，3]-苯二氧合桥[5，6-c，5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮、5，7，8，15-四氢-3-羟基-4-甲氧基-6-甲苯基[e]-1，3-二氧合桥[4，5-k][3]苯氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮、5，7，8，14-四氢-10，11-二羟基-3，4-二甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮、二氢普罗托品、崖椒碱III、1-甲氧基-13氧代别克利多平、13-氧代克利多平、13-氧代-5，7，8，14-四氢-3，4，10，11-四甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮、13-氧代普罗托品。
在该方面的一个具体实施方案中，这些氮杂癸间五烯基酮类化合物以药物学上可接受的盐形式配制，优选盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、三氟醋酸盐或甲磺酸盐。更优选盐选自盐酸盐和氢溴酸盐。在另一个优选实施方案中，上述盐含0.5-3分子的结晶水。
附图说明
图1显示了单克隆细胞[3H]标记的去甲肾上腺素摄取量。通过同位素流量的鉴定，挑选了四个单克隆细胞，其中4号克隆为高表达细胞株。
图2显示了不同浓度的各种5-HT抑制剂对同位素标记的5-HT摄取的效果。普罗托品对高表达五羟色胺转运蛋白细胞株的活性作用在10ug/ml浓度抑制活性同1ug/ml氟西汀有相同药效。而同不加药组(S6)比较显示较强的抑制作用***P＜0.001。
图3显示了普罗托品对高表达去甲肾上腺素转运蛋白细胞株的活性作用的抑制作用。在10ug/ml浓度抑制活性同不加药组(N1)比较显示较强的抑制作用***P＜0.001。
图4显示了普罗托品对不同细胞的选择性。高表达多巴胺转运蛋白细胞株的活性同不加药组D8相比无显著性差异，无抑制活性。
图5显示了普罗托品对高表达γ-氨基丁酸转运蛋白细胞株的活性同不加药组G1相比无显著性差异，无抑制活性，说明普罗托品对不同细胞系有选择性。图中NO-711为GABA转运蛋白抑制剂。
图6显示了普罗托品的安全性。无论在10ug/ml还是在1ug/ml的浓度，细胞存活率在96％以上，同不加药组无显著性差异。说明对细胞无毒性。
图7显示了小鼠甩头综合征的抑制。氟西汀为阳性对照药。普罗托品在三个浓度组里同盐水组均有显著性差异***P＜0.001。
具体实施方式
本发明提供了氮杂癸间五烯基酮类化合物的新用途，它们作为5-HT和去甲肾上腺素转运蛋白为靶标的双重抑制剂，对5-HT和去甲肾上腺素转运蛋白的摄取具有明显的抑制作用。
本发明提供了氮杂癸间五烯基酮类化合物，及它们可用作药物的盐，盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、三氟醋酸盐或甲磺酸盐等，优选的盐为盐酸盐、氢溴酸盐。
这些化合物的化学式、分子式和分子量如下：
1.普罗托品：4，6，7，14-四氢-5-甲基双[1，3]-苯二氧合桥[4，5-c：5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-13(5H)-酮，分子式为C20H19NO5，分子量353.374。
2.紫堇胺：4，6，7，14-四氢-5，14-二甲基双[1，3]-苯二氧合桥[4，5-c：5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-13(5H)-酮(+)-形式；分子式：C21H21NO5；分子量：367.401。
3.紫堇维定：5，7，8，15-四氢-3，4-二甲氧基-6，15-二甲苯基[e][1，3]二氧合桥[4，5-k][3]苯氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮(+)-形式；分子式：C22H25NO5；分子量：383.443
4.紫堇文碱：4，6，7，14-四氢-5，14-二甲基双[1，3]-苯二氧合桥[4，5-c：5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-13(5H)-酮(±)-形式；分子式：C21H21NO5；分子量：367.401
5.考特罗平(coulteropine)：4，6，7，14-四氢-12-甲氧基-5-甲基双[1，3]-苯二氧合桥[4，5-c：5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-13(5H)-酮；分子式：C21H21NO6；分子量：383.400
6.克利多平：4，6，7，13-四氢-9，10-二甲氧基-5-甲苯基[e][1，3]二氧合桥[4，5-1][2]苯氮杂癸间五烯基-12(5H)-酮；分子式：C21H23NO5；分子量：369.416
7.崖椒碱I：5，7，8，15-四氢-3，4-二甲氧基-6-甲苯基[e][1，3]二氧合桥[4，5-k][3]苯氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮；分子式：C21H23NO5；分子量：369.416；
8.崖椒碱II：5，7，8，15-四氢-2，3-二甲氧基-6-甲苯基[e][1，3]二氧合桥[4，5-k][3]苯氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮；分子式：C21H23NO5；分子量：369.416；
9.红乃马草碱：5，7，8，15-四氢-4-羟基-3-甲氧基-6-甲苯基[e][1，3]二氧合桥[4，5-k][3]苯氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮；分子式：C20H21NO5；分子量：355.390；
10.依兹灭灵(izmirine)：4，6，7，13-四氢-9-羟基-10-甲氧基-5-甲苯基[e]-1，3-二氧合桥[4，5-1][2]苯氮杂癸间五烯基-12(5H)-酮；分子式：C20H21NO5；分子量：355.39；
11.木拉敏(muramine)：5，7，8，14-四氢-3，4，10，11-四甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮；分子式：C22H27NO5；分子量：385.459；
12.N-氧代普罗托品：4，6，7，14-四氢-5-甲基-5-氧-双[1，3]-苯二氧合桥[4，5-c：5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-13(5H)-酮；分子式：C20H19NO6；分子量：369.373；
13.普沙利平(protothalipine)：5，7，8，14-四氢-4-羟基-3，10，11-三甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮；分子式：C21H25NO5；分子量：371.432；
14.假普罗托品(pseudoprotopine)：5，7，8，15-四氢-6-甲基双[1，3]-苯二氧合桥[5，6-c，5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮；分子式：C20H19NO5；分子量：353.374；
15.腾松草宁碱(thalictrisine)：5，7，8，15-四氢-3-羟基-4-甲氧基-6-甲苯基[e]-1，3-二氧合桥[4，5-k][3]苯氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮；分子式：C20H21NO5；分子量：355.39；
16.韦兰汀(vaillantine)：5，7，8，14-四氢-10，11-二羟基-3，4-二甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮；分子式：C20H23NO5；分子量：357.405。
17.二氢普罗托品；分子式：C20H21NO5；分子量355.390。
18.崖椒碱III；结构未知；分子式C22H26NO4；分子量368.452。
19.奥利酮(oreonone)；1-甲氧基-13氧代别克利多平；分子式：C22H25NO6；分子量399.443。
20.13-氧代克利多平；分子式：C21H21NO6；分子量：383.400。
21.13-氧代木拉敏(muramine)：13-氧代-5，7，8，14-四氢-3，4，10，11-四甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮；分子式：C22H25NO6；分子量：399.443。
22.13-氧代普罗托品；分子式：C20H17NO6；分子量367.357。
本发明还进一步提供了应用本发明化合物有选择地抑制5-HT和去甲肾上腺素转运蛋白摄取的方法以及治疗哺乳动物各种与5-羟色胺和去甲肾上腺素神经递质降低有关的疾病(包括肥胖、抑郁、酒精中毒、疼痛、尿失禁、丧失记忆、焦虑、吸烟等)药物中的用途及方法。
本项发明的氮杂癸间五烯基酮类化合物作为治疗哺乳动物各种与5-羟色胺和去甲肾上腺素神经递质降低有关的疾病(包括肥胖、抑郁、酒精中毒、疼痛、尿失禁、丧失记忆、焦虑、吸烟等)药物用途，现以普罗托品为例阐述该发明，着重阐述其在抑郁、焦虑、肥胖方面的用途。普罗托品的化学名称为4，6，7，14-四氢-5-甲基双[1，3]-苯二氧合桥[4，5-c：5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-13(5H)-酮，分子式为C20H19NO5，分子量353.374。本发明的普罗托品化合物是从天然产物中分离纯化得到的。为实现本发明目的，选用从中国云南省产的药用植物紫金龙(Dactylicapnosscandens huth)用现有技术提取的纯天然产物普罗托品。它是通过转基因细胞系的活性筛选，然后反复进行分离和活性评价跟踪得到单体化合物。
本发明人从天然产物中利用活性追踪分离纯化得到该类抑制剂，通过体外的抑制结合实验，以及动物体内实验的研究证明，该类化合物具有明显的抗抑郁、抗焦虑和减肥作用，并且该类化合物未发现有成瘾、耐药性和过敏现象。它们作为药物是安全的。
剂量
在本发明中，对该类抑制剂的剂量没有特别限制，可用任何合适的剂量。在使用五羟色胺和去甲肾上腺素双重再摄取抑制剂治疗哺乳动物各种与5-羟色胺和去甲肾上腺素神经递质降低有关的疾病，药物的用量取决于疾病的性质、病程、轻重、药物反应情况以及病人接受治疗的情况等，最终由处方医生决定给予病人多少剂量。
一般，合适的含量是五羟色胺和去甲肾上腺素双重再摄取抑制剂占药物组合物总重量的0.01％～99％，较佳地0.1-90％。
剂量单元包括一种五羟色胺和去甲肾上腺素双重再摄取抑制剂化合物，剂量单元还可含有稀释剂、填充剂、载体等。剂量单位是固体或凝胶形式，如丸剂、片剂、胶囊等，或者是液体形式，它们适合口服给药、直肠给药、局部给药或肠胃外给药、或者静脉内给药。
剂型
本发明的经口给药的固体组合物可来用片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、滴剂等形式。这些固体组合物中混合了1种或1种以上的活性物质和至少1种惰性稀释剂，例如，乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羟丙基纤维素、微晶纤维素、淀粉、聚乙烯毗咯烷酮、琼脂、果胶、硅铝酸镁、铝酸镁。还可按照常用方法使组合物中含有除了惰性稀释剂之外的添加剂，例如，硬脂酸镁等润滑剂、纤维素乙醇酸钙等崩解剂、乳糖等稳定剂、谷氨酸或天一氨酸等助溶剂。如是片剂或丸剂，还可根据需要，在其外部包裹上蔗糖、明胶、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸酯等糖衣或胃溶性、肠溶性薄膜。
经口给药的液体组合物包括药剂上允许的乳浊剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆剂、酏剂等，通常使用的惰性稀释剂包括精制水、乙醇。该组合物中除了惰性稀释剂之外，还可包含湿润剂、悬浮剂等助剂，甜味剂、矫味剂、芳香剂和防腐剂。
非经口给药的注射剂包括无菌水性或非水性溶液剂、悬浮剂和乳浊剂。水性溶液剂和悬浮剂中包含注射剂用蒸馏水及生理盐水。非水溶性溶液剂和悬浮剂中包含两二醇，聚乙二醇，可可脂、橄揽油、蓖麻油等植物油，乙醇等醇类，阿拉伯胶、吐温80(商品名)等。这些组合物中还可包含等渗剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂、分散剂、稳定剂(例如，乳糖)、助溶剂(例如，谷氨酸、天冬氨酸)。用德菌膜过滤上述组合物，再配合使用灭菌剂就可达到无菌的目的。然后，利用上述组合物制得无菌的固体组合物，在使用前用水或无菌庄射用溶剂溶解就可加以利用。
可用于配制本友明口服剂型的、具体的药学上可接受的载体和赋形剂例子，在美国专利No 3,903,297(1975年9月2日授予Robert)中有描述。用于制造本发明的有用剂型的技术和组合物，在下列文献中有描述：7种现代制剂(7ModernPharmaceutics)第9和10章(Banker & Rhodes编辑，1979)：Lieberman等人，药物剂型：片剂(Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets)(1981)；和Ansel，药物剂型导论(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)2版(1976)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1天然产物中活性化合物普罗托品的分离纯化
中国药用植物紫金龙作为民间传统药物使用产自中国云南省西部云龙的植物。其干燥植物根部粗粉在室温下用10％氨水浸润，加苯提取3次每次3天，合并三次苯提液，用2％盐酸中和至出现白色混浊，过滤去掉沉淀物，稀盐酸液用0.5MNaOH碱化，调pH至8，用氯仿萃取其中生物碱，直至无生物碱显色反应。所得氯仿液在50℃减压蒸馏除去氯仿，得抽提物用甲醇和少许丙酮溶解，放置过夜后析出块状结晶。此生物碱经核磁共振等鉴定，证明其为化合物普罗托品。
实施例2以五羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺、Y-氨基丁酸四种神经转运蛋白(5-HTT、NET、DAT、GAT-1)为靶标的活性筛选细胞系的建立。(以DAT为例)
通过将5-HTT、NET、DAT、GAT-1全长编码序列克隆于pCDNA3载体(美国invitrogen公司)适合位置的酶切位点上，用电穿孔方法转染导入细胞，48小时后用含G418的1640培养基培养。10天后对照组细胞全部死亡，而实验组形成许多细胞克隆。挑取克隆培养一周后，待细胞铺满孔底，吸去培养基，同上用胰酶消化。每孔中的细胞分别接种于两块96孔平板的相应的孔中.待细胞长满孔底后，其中一块板用于同位素流量测定。将对应的另一块板中转运活性高的孔中的细胞逐级扩大培养，每一级都进行同位素流量测定后选取转运活力较高细胞株培养，最后选取转运活力最高的细胞克隆(起名D8)保种。对于建立永久表达(5-HTT、NET、DAT、GAT-1)的CHO细胞系，用类似以上的方法就能获得一株高效表达5-HTT、NET及GAT-1的CHO细胞，分别取名为S6，N1，G1。
结果：通过同位素流量的测定，获得了高表达5-HTT、NET、DAT、GAT-1转运蛋白的细胞系。建立了针对5-HTT、NET为靶标的抗抑郁药物筛选的细胞筛选平台。
图1显示了结果。以NET为例作图，挑选了4个细胞克隆，CHO为阴性对照，根据NET的表达量，4号克隆表达量最高。最后我们选取4号克隆作为高效表达细胞株(N1)。
实施例3普罗托品化合物的体外活性及选择专一性的测定。
培养S6、N1、D8细胞于48孔板(Costar)至平板铺满(大约每孔6万细胞)。弃培液。用PBS洗涤一次，吸去PBS溶液，每孔加入90ul HBS(10mM Hepes，100mM NaCl，PH8.0)，25℃温育10分钟，每孔加入10ul HBS反应液。实验组及阳性对照药加入80ul HBS，10ul不同浓度的实验用药及阳性对照药，及10ul 3H标记的同位素。25℃温育20分钟，用冰浴的PBS溶液洗涤三遍，用裂解液裂解30分钟，吸取各孔的裂解液加入到1.6ml的闪烁液中，放入液闪计数仪(Beckman LS5000TA)中检测同位素的含量，以此来衡量普罗托品对五羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺转运蛋白的活性。对于GABA转运检测，方法类似于多巴胺转运蛋白，50nM3H GABA(Amersham Pharmacia Biotech)取代了反应体系中的3H DA或NE或5-HT和维生素C及帕吉林。
结果：显示了普罗托品只对5-HTT及NET转基因高表达细胞系显示了较好的药效，而对多巴胺及γ-氨基丁酸转运蛋白高表达细胞系没有活性，由此说明普罗托品具有一定的选择性和较强的活性。
图2-5显示了结果。
图2显示了普罗托品对高表达去甲肾上腺素转运蛋白细胞株的活性作用的抑制作用。在10ug/ml浓度抑制活性同不加药组(N1)比较显示较强的抑制作用***P＜0.001。
图3显示了普罗托品对高表达多巴胺转运蛋白细胞株的活性同不加药组D8相比无显著性差异，无抑制活性。图4显示了普罗托品对高表达γ-氨基丁酸转运蛋白细胞株的活性同不加药组G1相比无显著性差异，无抑制活性，说明普罗托品对不同细胞系有选择性。
图5显示了普罗托品的安全性。无论在10ug/ml还是在1ug/ml的浓度，细胞存活率在96％以上，同不加药组无显著性差异。说明对细胞无毒性。
实施例4 MTT法检测细胞存活率
MTT检测方法按已有报道进行并略有改进(J.Biol.Chem.1999，274：26217-24)。在96孔平板中接种细胞至每孔2000至3000细胞，培养体积200ul，37℃培养24小时，每孔加入相应浓度的药物，不加药物和不加细胞的孔作为对照，继续培养24小时。换新的已预热的培液，加MTT至终浓度为0.5mg/ml。37℃培养4小时后弃上清，每孔加入200ulDMSO，37℃温浴10分钟，使沉淀溶解。在酶标仪上测570nm下的O.D.值。细胞存活率计算公式为：
存活率＝(加药组O.D.-不加细胞组O.D.)×100％/(不加药对照组O.D.-不加细胞组O.D.)。
结果：普罗托品在10ug/ml、1ug/ml对细胞的存活率都达到了96％以上，说明普罗托品不会影响细胞的存活率，从另一方面也说明了普罗托品对细胞无毒性。图6显示了结果。普罗托品在三个浓度组里同盐水组均有显著性差异***P＜0.001。
实施例5普罗托品对5-HTP诱导的甩头行为的影响。
1概述该模型最早由Corne等在1963年提出(J Pharmacol Exp Ther.247(3)：1032-8)。5-HT受体兴奋引起的甩头综合征可能通过5-HT2受体介导。小鼠中由5-HTP诱导的甩头行为对于具有不同作用机制的抗抑郁及抗焦虑的药均比较敏感如西酞普兰(Citalopram)、氟伏沙明(fluvoxamine)等5-HT重摄取抑制剂，去甲丙咪嗪(desipramine)、麦普替林(maprotiline)、诺米芬辛(nomifensine)等NA重摄取抑制剂及混合作用于5-HT和NA系统的丙咪嗪(imipramine)。
2方法步骤及指标选用20-24g雄性balbc/fj小鼠(中科院上海实验动物中心)。首先在测试前3小时腹腔注射100mg/kg帕吉林。之后腹腔注射受试药或生理盐水，30分钟后再注射5-HTP(5mg/kg，腹膜内)，10分钟后开始观察，记录6分钟内小鼠甩头次数。比较实验组和生理盐水对照组甩头次数的差异。
阴性对照物：生理盐水，阳性对照物：氟西汀，剂量为：1mg/kg、5mg/kg，
试验用药：本发明的药物普罗托品给药剂量分别是：5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg
3.结果：在5-HTP诱导的甩头行为中，普罗托品能显著增强小鼠的甩头次数，显示出剂量效应关系，并与生理盐水组比有显著性差异(P＜0.01)，10mg/kg的普罗托品产生的药效与1mg/kg的氟西汀相比有显著性差异。
图7显示了实验结果。
实施例6普罗托品对行为绝望模型动物的作用效果
1.概述  尽管70年代已出现了一些较好的抑郁动物模型，如获得性无助模型、分离模型，但由于花费或可行性问题，这些模型尚未用于常规的药物初筛。药物筛选迫切需要一些。简单、快速、敏感的动物模型。在此背景下，Pormlt等1977年分别发展了大鼠、小鼠强迫游泳模型。在强迫游泳模型中，大鼠和小鼠被迫在一局限的空间游泳，它们首先挣扎试图逃跑。随后处于一种不动的状态，这种状态被称为行为绝望。除了一些5-HT重摄取抑制剂之外，多数抗抑郁药在此模型中均能减少动物的不动时间，且其药效与临床上药效显著相关。而在亚活性剂量理盐辅助下，5-HT重摄取抑制剂类抗抑郁药在此模型中也往往有效。继强迫游泳模型之后，陆续衍生出了其它一些模型，在这些进展中最突出的是小鼠悬尾模型。悬尾小鼠为克服不正常的体位而挣扎活动。但活动一定时间后出现间断性不动，显示”失望”状态。有效药物包括三环抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂及非典型抗抑郁药(包括5-HT重摄抑制剂)。
2小鼠悬尾实验选体重20-24克雄性balbc/fj小鼠，将其尾端2cm的部位贴在一水平木棍上，使动物成倒挂状态，其头部离台面约5cm。悬挂两侧用板隔开动物视线。比较给药组及对照组在6分钟内的不动时间。
阴性对照物：生理盐水，阳性对照物：地昔帕明，剂量为：10mg/kg
试验用药：本发明的药物普罗托品给药剂量分别是：3.75mg/kg，7.5mg/kg，30mg/kg
3.结果：在小鼠悬挂实验中，普罗托品能明显缩短小鼠因绝望而不动的时间。其降低绝对不动时间的作用呈明显的量效关系且有明显的剂量效应关系，其中以高剂量(30mg/kg)为最好。结果见表1。
表1  普罗托品对小鼠悬尾实验绝对不动时间的影响
  组别   剂量(mg/kg)   绝对不动时间(s)
  盐水地西帕明普罗托品普罗托品普罗托品   -10.030.07.53.75   89.2±41.7952.56±25.18*35.33±14.62**54.28±25.0271.83±22.43
结果由均值±标准偏差表示，样本数为10，与盐水对照比较*P＜0.05，**P＜0.01。
实施例7普罗托品对大鼠营养性肥胖的治疗预防作用
1.实验方法：断乳SD大鼠体重50-55g，雌雄各半，每日早晨灌胃给药，给药组分大剂量(20mg/kg)小剂量组(8mg/kg)，空白对照组为生理盐水，每组10只大鼠。饲料为高脂饲料。第一、第二星期每只每日13g，第三星期14g，第四星期16g，第五星期18g，第六星期20g，每日饲料分两次供给，吃完不再添加。连续饲养6星期后观察各项指标。
2.实验结果见表2，表3。
           表2 普罗托品对营养性肥胖大鼠生长指标的影响
  组别   实验初体重(g)   实验后体重(g)   体长(cm)
  生理盐水小剂量大剂量   55.1±1.050.4±1.154.8±1.2   193.8±1.2140.3±1.3*149.2±1.3*   19.4±1.117.4±1.218.2±1.1
N＝10，与对照组生理盐水比较*P＜0.05
                  表3 普罗托品对营养性肥胖大鼠脂类的影响
  组别   血胆固醇(mmol/L)   血三酰甘油(mmol/L)   脂肪细胞数(个/HPF)
  生理盐水小剂量大剂量   2.11±0.052.24±0.021.9±0.03   0.17±0.020.15±0.030.12±0.03   82±1.5123±1.5*150.3±1.2*
N＝10，与对照组生理盐水比较*P＜0.01
从以上结果表明大鼠服用普罗托品后，它能显著降低血胆固醇和血三酰甘油的含量，并且大鼠相应体重减少20％左右，达到了减脂的目的。可见，五羟色胺和去甲肾上腺素转运蛋白双重抑制剂普罗托品具有减肥、调节血脂的功效。

Claims (9)

1.氮杂癸间五烯基酮类化合物的用途，其特征在于，用于制备治疗5-羟色胺和去甲肾上腺素神经递质降低所导致的疾病的药物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，该疾病选自：肥胖、酒精中毒、疼痛、尿失禁、丧失记忆、焦虑或吸烟。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，该药物是五羟色胺和去甲肾上腺素转运蛋白双重再摄取抑制剂。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，该药物是片剂、颗粒剂、针剂、粉剂或胶囊。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述化合物选自：普罗托品、紫堇胺、紫堇维定、紫堇文碱、4，6，7，14-四氢-12-甲氧基-5-甲基双[1，3]-苯二氧合桥[4，5-c：5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-13(5H)-酮、克利多平、崖椒碱I、崖椒碱II、红乃马草碱、4，6，7，13-四氢-9-羟基-10-甲氧基-5-甲苯基[e]-1，3-二氧合桥[4，5-1][2]苯氮杂癸间五烯基-12(5H)-酮、5，7，8，14-四氢-3，4，10，11-四甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮、N-氧代普罗托品、5，7，8，14-四氢-4-羟基-3，10，11-三甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮、5，7，8，15-四氢-6-甲基双[1，3]-苯二氧合桥[5，6-c，5’，6’-g]氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮、5，7，8，15-四氢-3-羟基-4-甲氧基-6-甲苯基[e]-1，3-二氧合桥[4，5-k][3]苯氮杂癸间五烯基-14(6H)-酮、5，7，8，14-四氢-10，11-二羟基-3，4-二甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮、二氢普罗托品、崖椒碱III、1-甲氧基-13-氧代别克利多平、13-氧代克利多平、13-氧代-5，7，8，14-四氢-3，4，10，11-四甲氧基-6-甲基二苯基[c，g]氮杂癸间五烯基-13(6H)-酮、13-氧代普罗托品。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述氮杂癸间五烯基酮类化合物以药物学上可接受的盐形式配制。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、三氟醋酸盐或甲磺酸盐。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的盐选自盐酸盐和氢溴酸盐。
9.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的盐含0.5-3分子的结晶水。
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