CN1748743A - 杠柳脂溶性成分提取物无公害渔药及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了以杠柳脂溶性成分提取物为主要成分的渔药，其技术关键在于：将杠柳(Periploca sepium)根皮、茎皮干燥粉碎，在60℃～70℃用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇至流浸膏状，用乙醇萃取，浓缩萃取液至杠柳根皮、茎皮干重的10％－15％，得杠柳脂溶性成分提取物；以杠柳脂溶性成分提取物为主要成分的渔药的组分及重量百分含量为，杠柳脂溶性成分提取物20％～75％，表面活性剂3％～10％，溶剂余量。以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药与化学药剂相比，不影响水产品质量、无残留、无污染、对其不易产生抗药性、不影响水产动物的进食和生长、对水产动物安全等优点。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖业中的一种杀虫剂、防治剂，特别涉及一种以杠柳(Periploca sepium)提取物为主要成份的鱼类寄生单殖吸虫防治剂。
背景技术
鱼类体外寄生单殖吸虫病是危害水产养殖最为严重的病害之一，特别是寄生在鱼类鳃部的指环虫和拟指环虫，大量寄生导致鱼类大批毁灭性死亡，常常给养殖业造成巨大的经济损失。关于该类寄生虫病的防治，长期以来，仅有的少数种类药物的反复使用，使得用药量逐年加大，寄生虫的耐药性也随之增强。当前，国内外还没有一个很好的替代药物。国内外当前防治指环虫和拟指环虫病仍然是一些常规药物，主要是一些化学性农药如敌百虫、敌敌畏、乙酰甲胺磷等有机磷类、溴氰菊酯等拟除虫菊酯类，人医与兽药如甲苯咪唑、吡喹酮等.而这些化学体外杀虫农药，无论从环境、安全性还是对所养水产动物生活、摄食、生长以及生产性能等方面都有诸多弊端：如不易降解、污染水环境、易产生耐药性、在鱼体残留、蓄积、使鱼类致畸、致癌、致突变，从而危害人类的身体健康；同时，有些药物价格高，对水产养殖生产没有意义。所以，有些毒性较大的有机磷农药、化学染料和汞盐，各国农业部门已被在水产上禁止使用。但是，随着养殖集约化程度的提高，寄生虫病害日益加剧，大多数药物已经产生抗药性，加之今天人们也更加关注对自然环境、以及人类健康的影响，因此，无公害、环保型的天然植物性杀虫药源的研究与生产，完全符合今后绿色水产品生产的要求。
抗寄生虫药作为渔药的先驱，最早应用的是食盐、福尔马林、孔雀石绿、硫酸铜等化学试剂，随后，外用杀虫药物也出现了很多，但是既有杀虫效果，又对养殖对象毒性小的药物并不多，而获得政府批准的则更少。据1974年美国学者综合近500篇文献发现，只有20种可供考虑的杀虫驱虫药，但大部分研究没有很大进展，多数药物也未获批准。近年来，美国、加拿大、日本、以色列、英国等学者研究发现硝酸银、林丹、马拉硫磷、敌百虫、敌敌畏、二溴磷等杀虫效果明显。但是，这些药物或因价格高，或因有潜在性毒害，大多被禁止在渔业中应用。目前，国际上常用的抗外寄生虫药仍然局限为福尔马林、丫啶黄、氯胺-B、硫酸铜、高锰酸钾、敌百虫、敌敌畏、孔雀石绿、二溴磷、利凡诺、酒石酸氧锑钾等，日本则批准使用硫双二氯酚、过氧化磷酸二钠、碳酸氢钠为原料的渔药杀灭鱼类单殖吸虫。目前，随着人药、兽药的发展，国外用以防治单殖吸虫的药物有吡喹酮、甲苯咪唑、2-甲基喹啉等。目前我国允许使用的主要为福尔马林、过氧化氢、高锰酸钾、敌百虫、利凡诺、甲苯咪唑等，作为地方标准，已经进入市场的主要是盐酸左旋咪唑、丙硫咪唑、阿维菌素、四聚乙醛、辛硫磷等。从使用效果上看，目前还没有一种完全杀灭寄生虫的药物，各地区往往将几种药物搭配使用来解决抗药性问题，对提高杀灭单殖吸虫有一定的作用。
利用天然植物进行水产动物病害防治与化学药剂相比，不影响水产品质量、无残留、无污染、对其不易产生抗药性，不影响水产动物的进食和生长、对水产动物安全等优点。
发明内容
本发明的发明目的是提供一种对寄生在鱼类体外寄生单殖吸虫具有显著杀灭作用的以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药，该渔药不影响水产动物的进食和生长、对水产动物安全，克服现有技术的不足。
本发明的另一发明目的是提供上述以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药的制备方法。
本发明采取的技术方案是：
以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药：
(1)将杠柳(Periploca sepium)根皮、茎皮干燥粉碎，在60℃～70℃用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇至流浸膏状，用乙醇萃取，浓缩萃取液至杠柳根皮、茎皮干重的10％-15％，得杠柳脂溶性成分提取物；
(2)以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药的组分及重量百分含量为：
杠柳脂溶性成分提取物 20％～75％
表面活性剂 3％～10％
溶剂 余量。
所述的表面活性剂是由透皮剂氮酮或二甲基亚砜与乳化剂1702-4或OP-10或EL-10组成，其重量比为3∶2-5∶1。
所述的溶剂为乙醇。
以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药的制备方法：
A.将杠柳(Periploca sepium)根皮、茎皮干燥粉碎，在60℃～70℃用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇至流浸膏状，用乙醇萃取，浓缩萃取液至杠柳根皮、茎皮干重的10％-15％，得杠柳脂溶性成分提取物；
B.将表面活性剂、杠柳根皮、茎皮脂溶性成分提取物、溶剂在50℃～60℃混合均匀即得杠柳提取物渔药。
本发明的使用方法与用量：直接泼洒于池塘中，使用剂量为：5mL/m3。
本发明使用杠柳脂溶性成分提取物作为杀虫活性部位，不含有水溶性成份，用水提取的溶性成份对鱼类体外寄生单殖吸虫如指环虫、拟指环虫、三代虫等无杀灭效果。
本发明的优点：(1)以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药与化学药剂相比，不影响水产品质量、无残留、无污染、对其不易产生抗药性、不影响水产动物的进食和生长、对水产动物安全等优点。(2)以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药作为鱼类寄生单殖吸虫(Monogenoidea)防治剂，试验表明，该药物对寄生在鱼类体外寄生单殖吸虫特别是指环虫、拟指环虫、三代虫等蠕虫具有显著的杀灭作用，对水产动物及环境都非常安全，并且还有使用剂量低、成本小、使用方便等特点，在生产上完全可以替代化学杀虫剂，对环境无污染的无公害植物质水产动物寄生虫防治剂，广泛适用于对鳜鱼、鲈鱼、鲤、草鱼、鳗鱼、鲷、鲆等多种淡水、海水鱼类的体外寄生虫(原虫、蠕虫)的防治剂。
具体实施方式
为了更清楚的理解本发明以及本发明药剂的药效，以下通过发明人给出的依本发明技术方案所完成的具体的实施例对本发明作进一步的详细描述，这些仅是本发明较好的实施例，但不限于这些实施例。
以下实施例使用的乳化剂1702-4选自陕西石油化工设计研究院，乳化剂OP-10、EL-10选自邢台市助剂厂。
实施例1
称取干燥粉碎的50公斤杠柳根皮、茎皮，在60℃用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇至流浸膏状，用无水工业酒精萃取，浓缩萃取液至5公斤；
将透皮剂氮酮和乳化剂1702-4按照3∶1的重量比混合均匀配制成为表面活性剂备用。
将上述表面活性剂1公斤、5公斤杠柳根皮、茎皮脂溶性成分提取物、19公斤乙醇加入匀质机中混合，在50℃混合均匀即得杠柳提取物渔药。
实施例2
称取干燥粉碎的50公斤杠柳根皮、茎皮，在65℃用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇至流浸膏状，用无水工业酒精萃取，浓缩萃取液至7公斤；
将二甲基亚砜和乳化剂OP-10按照3∶2的重量比混合均匀配制成为表面活性剂备用。
将上述表面活性剂1公斤、7公斤杠柳根皮、茎皮脂溶性成分提取物、5公斤乙醇加入匀质机中混合，在55℃混合均匀即得杠柳提取物渔药。
实施例3
称取干燥粉碎的50公斤杠柳根皮、茎皮，在70℃用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇至流浸膏状，用无水工业酒精萃取，浓缩萃取液至6公斤；
将透皮剂氮酮和乳化剂EL-10按照5∶1的重量比混合均匀配制成为表面活性剂备用。
将上述表面活性剂1公斤、6公斤杠柳根皮、茎皮脂溶性成分提取物、3公斤乙醇加入匀质机中混合，在60℃混合均匀即得杠柳提取物渔药。
上述实施例可以列举很多，再此不一一列举，从申请人所做的大量实验得到的数据证明，只要是在本发明的技术方案的参数范围内选择，即可制备出达到本发明目的的水产动物寄生虫防治剂。
上述防治剂可直接泼洒于池塘中，使用剂量为：5mL/m3，以下是本发明的药效的具体试验实例。
试验实施例1：
杠柳脂溶性成分提取物无公害渔药药效与急性毒性试验
1.1材料
预试验健康金鱼苗购于陕西水产研究所渔场，体重在1.5～2.5g/尾，试验用杠柳脂溶性成分提取物杀虫制剂依据实施例1制备。
1.2方法
1.2.1指环虫的感染
由渔场运回的鱼苗，首先用2mg/L盐酸环丙沙星进行细菌性疾病预防，通过3～5d养殖正常后，在水族箱中，采用特殊的方法将保存在鱼鳃上的指环虫感染到健康鱼鳃上，并控制水温25℃左右，每天加一定量的新水，大约经过4～6d培养，对感染鱼随机抽样捞取镜检，如果感染率为100％、在10×4倍下每个视野内有6条以上指环虫时开始进行药效试验。
1.2.2药效试验
采用直径36cm、高11cm的白色搪瓷盆，试验用水为充分暴气的自来水5000ml、pH值为7.0-7.5，试验期水温变化为25±2℃。养鱼后，含氧需在5mg/L以上。
试验药物浓度的确定和试验分组：首先通过梯度递增法进行预试验，再在最小有效浓度、完全杀灭寄生虫有效浓度和最高有效剂量浓度范围附近按梯度递增的原则设立试验组，并设对照组。每个水族箱内，放养随机捞取感染的鱼20尾，在加药后24、48、72、96h时抽样解剖，取鳃制片，镜下观察寄生虫消失情况，并记录。各试验组重复3次。鱼中毒死亡率＝该时间段鱼死亡总数÷10尾×100％。
1.2.3急性毒性试验
试验鱼的准备：试验用健康金鱼，体重在1.5～2.5g/尾，首先在试验条件下养殖7d左右，每天投喂1-2次，投入的饲料在10min内吃完为限。待适应实验室环境条件后再进行毒性试验。
试验条件：试验所用为静水式条件，水族箱内盛1L充分暴气的自来水，控制水温为25±1℃，pH值为7.3，硬度65.6mg/L，碱度41.5mg/L，溶氧量为8.67mg/L，放养鱼后，要求保持水中溶氧在5mg/L以上。为了保持恒定的药物浓度，每隔24h换药液一次。
试验药物浓度的设定：首先，进行预备试验，确定试验液浓度的大致范围，然后，再根据梯度递增稀释法设立不同浓度的试验组，在以上试验的基础上，在致死浓度范围内按对数等差值(0.01)插入三个浓度试验组再次试验，以更准确的确定其致死浓度范围和毒性大小。试验中用随机的方法捞取培养鱼10尾按低浓度向高浓度递增的顺序放入，并设对照组。试验期间连续观察并记录各组96h内试验鱼的死亡时间。
最低致死浓度范围、半数致死浓度(TLm)及安全浓度：计算2、4、8、24～96h内，金鱼致死的最低浓度和下一个浓度为最低致死浓度范围，并计算致死率。利用概率单位目测法，求出半数致死浓度TLm，并根据Turbell公式计算安全浓度：
安全浓度＝(48h TLm×0.3)/(24h TLn/48h TLm)2
2.结果
2.1药效试验
在多个白色搪瓷盆中，分别设立2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0mg/L不同制剂浓度，在24h时，制剂浓度在2.0mg/L时，无杀灭寄生虫的作用；在4.0mg/L时，鱼全部鳃上寄生虫存活1～3条；在7.0mg/L以上时，寄生虫全部消失。在48h时，制剂浓度在2.0mg/L时，有10～30％寄生虫消失；在3.0mg/L时，鱼全部鳃上寄生虫存活1～3条；在4.0mg/L时，寄生虫存活0～3条；在5.0mg/L是，寄生虫全部死亡。在72h时，制剂浓度在2.0mg/L时，鱼全部鳃上寄生虫存活0～3条；在3.0mg/L以上时，寄生虫全部死亡；在96小时，制剂浓度在2.0mg/L时，鱼全部鳃上寄生虫存活0～3条；在3.0mg/L以上时，寄生虫全部死亡。对照组杀虫无效，并且金鱼坏鳃指环虫数量有所增加。(结果见表1)
表1.杠柳脂溶性成分提取物杀虫制剂杀虫试验
| 药物作用时间(h) | 药物剂量(mg/L) |
| 0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 | |
| 24h寄生虫消失情况鱼中毒死亡率％ | - - +++ +++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++0 0 0 0 0 0 0 0 0 |
| 48h寄生虫消失情况鱼中毒死亡率％ | - ++ +++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++0 0 0 0 0 0 0 0 0 |
| 72h寄生虫消失情况鱼中毒死亡率％ | - +++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++0 0 0 0 0 0 0 0 0 |
| 96h寄生虫消失情况鱼中毒死亡率％ | - +++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++0 0 0 0 0 0 0 0 0 |
注：-表示无效果；+表示鱼鳃有10～30％寄生虫减少；++表示寄生虫消失了50～70％；
+++表示鱼全部鳃上寄生虫存活1～3条；++++寄生虫全部消失死亡。
2.2急性毒性试验
2.2.1鱼中毒反应
在55mg/L浓度时，金鱼中毒反应非常明显，用药后1h左右出现异常表现，金鱼将头窜出水面，或侧身在水底狂游，不久后开始出现麻痹，继而失去平衡，腹部朝上而死。杀虫使用浓度5mg/L，金鱼安静，无应激反应，
2.2.2对金鱼急性毒性试验结果
表2杠柳脂溶性成分提取物杀虫制剂急性毒性试验结果
| 试验浓度(mg/L) | 金鱼死亡数(尾) | |||||
| 12h | 24h | 48h | 96h | |||
| 040.0044.6750.1256.2360.00 | 0001210 | 0012410 | 0012510 | 0013810 | ||
| 回归方程LC5095％可信限(mg/L) | Y＝-13.29+10.29X59.903753.4934～67.0965 | Y＝-17.51+12.83X56.817451.8920～62.2222 | Y＝-31.45+21.25X50.802148.095～53.668 | |||
由试验结果可知，杠柳脂溶性成分提取物杀虫制剂对金鱼的毒性很弱，当药物剂量为44.67mg/L时才出现死亡，其96h的LC50为50.8021mg/L，比药物使用剂量5mg/L高出10多倍。所以该制剂对水产动物非常安全。
发明人按照实施例2和3方法制备得到的渔药进行杠柳脂溶性成分提取物无公害渔药药效与急性毒性试验，得到与上述实施例类似的结果。说明在本发明的技术方案的参数范围内选择，均可制备出达到本发明目的的水产动物寄生虫防治剂，并且具有对鱼类体外寄生单殖吸虫具有显著杀灭作用。
Claims (4)
1.杠柳脂溶性成分提取物无公害渔药，其特征在于：
(1)将杠柳Periploca sepium根皮、茎皮干燥粉碎，在60℃～70℃用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇至流浸膏状，用乙醇萃取，浓缩萃取液至杠柳根皮、茎皮干重的10％-15％，得杠柳脂溶性成分提取物；
(2)以杠柳脂溶性成分提取物为主要成份的渔药的组分及重量百分含量为：
杠柳脂溶性成分提取物 20％～75％
表面活性剂 3％～10％
溶剂 余量。
2、根据权利要求1所述的杠柳脂溶性成分提取物无公害渔药，其特征在于：所述的表面活性剂是由透皮剂氮酮或二甲基亚砜与乳化剂1702-4或OP-10或EL-10组成，其重量比为3∶2-5∶1。
3.根据权利要求1所述的杠柳脂溶性成分提取物无公害渔药，其特征在于，所述的溶剂为乙醇。
4.根据权利要求1所述的杠柳脂溶性成分提取物无公害渔药的制备方法，其特征在于：
A.将杠柳根皮、茎皮干燥粉碎，在60℃～70℃用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇至流浸膏状，用乙醇萃取，浓缩萃取液至杠柳根皮、茎皮干重的10％-15％，得杠柳脂溶性成分提取物；
B.将表面活性剂、杠柳根皮、茎皮脂溶性成分提取物、溶剂在50℃～60℃混合均匀即得杠柳提取物渔药。
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