CN1739359A - 一种植物质无公害杀虫渔药 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种植物质无公害杀虫渔药，其技术关键在于：该渔药是由牵牛子和牛心朴子经提取加工而成；渔药加工方法为：粉碎的牵牛子果实、牛心朴子全草分别在60～70℃温度下用甲醇提取，浓缩提取液并分别蒸干甲醇呈流浸膏，分别用乙醇萃取，浓缩萃取液，使至牵牛子果实干重的15％－25％，使至牛心朴子全草干重的20％－25％。上述植物质无公害杀虫渔药可杀灭寄生在鱼类体表或鳃上的指环虫、三代虫、拟指环虫、车轮虫等，其使用方法是用1000倍水稀释后直接泼洒于鱼塘中，使用剂量为0.5mL/m³。经试验证实，这种制剂形态的水产动物寄生虫防治剂均有很高的防效，且对环境及水产动物安全。

Description

一种植物质无公害杀虫渔药

所属领域

本发明属于水产养殖业中的一种杀虫剂、防治剂，特别涉及一种杀灭鱼类体外寄生单殖吸虫的植物质渔药及其制备方法。

背景技术

水产动物寄生虫防治，是水产养殖业经济效益的重要保障措施。水产动物寄生虫病发生率高、流行广泛，其中危害性最大的体外寄生虫有原虫类如车轮虫，蠕虫类如指环虫、三代虫等。当前，国内外防治水产动物寄生虫病多采用化学药剂，如敌百虫、敌敌畏、乙酰甲胺磷、拟除虫菊酯、染料亚甲基蓝、氧化剂高锰酸钾和重金属盐等物质。从使用角度，这些物质一般均有强烈的刺激性或腐蚀性，使用后对水产动物的进食、生长有很大的影响。此外，这些物质在环境中不易降解，容易造成水源污染，其中一些物质还会造成生物富集，直接危及人类的食品安全和身体健康。随着水产养殖业的发展，养殖集约化程度越来越高，水产养殖中的病虫害发生日趋严重，并且对常用的药剂已产生了很高的抗药性，有些药剂由于安全原因被禁用，所以开发高效、无污染的无公害水产动物寄生虫防治剂就迫在眉睫。

我国有利用中草药的悠久历史，利用牛心朴子杀灭昆虫纲的昆虫也有研究报道，但是，作为兽药，在杀灭原生动物如车轮虫、扁形动物寄生虫如指环虫、三代虫等方面研究尚属空白。利用植物质渔药防治水产动物病虫害与化学药剂相比，有不影响水产品质量、无残留、无污染、对其不易产生抗药性、不影响水产动物的进食和生长、对水产动物安全等优点。本发明在筛选大量植物的基础上，研制出纯植物源的无公害杀虫渔药，试验表明，该防治剂对寄生虫高效、对水产动物及环境安全，可以替代化学药剂用于水产动物寄生虫防治。

发明内容

本发明旨在提供一种植物源水产动物寄生虫防治剂及其制造方法。

在大量筛选的基础上，筛选出牵牛子(Pharbitis nid)果实提取物、牛心朴子(Cynanchum komarovii)全草提取物对鱼类寄生虫如车轮虫、指环虫、三代虫等有很高的杀灭效果，两者联合具有增效作用。试验研究，牛心朴子全草分别在60～70℃温度下用甲醇提取，浓缩提取液并分别蒸干甲醇呈流浸膏，分别用乙醇萃取，浓缩萃取液，使至牵牛子果实干重的15％-25％，用来进行杀灭指环虫试验，有效杀灭剂量为8mL/m³；牛心朴子同样的制备方法，获得乙醇萃取液占全草干重的20％-25％，进行杀灭指环虫试验，有效杀灭剂量为4.2mL/m³。而两者组方在有效含量20％，杀灭指环虫的有效剂量仅仅为0.5mL/m³。

本发明采取的技术方案是：

一种植物质无公害杀虫渔药，特征在于：

(1)该渔药是由牵牛子Pharbitis nid和牛心朴子Cynanchum komarovii经提取加工而成；

(2)渔药加工方法为：粉碎的牵牛子果实、牛心朴子全草分别在60～70℃温度下用甲醇提取，浓缩提取液并分别蒸干甲醇呈流浸膏，分别用乙醇萃取，浓缩萃取液，使至牵牛子果实干重的15％-25％，使至牛心朴子全草干重的20％-25％。

上述渔药的组成及其含量为：

牵牛子果实提取物的浓缩萃取液      30～50份

牛心朴子全草提取物的浓缩萃取液    20～40份

乙醇                              35～55份

透皮吸收促进剂                    1～3份

乳化剂                            3～5份。

透皮吸收促进剂选自二甲亚砜或氮酮；乳化剂可选用OP-10或EL-10或1702-4乳化剂。

植物质无公害杀虫渔药的制备方法，依次按照下述步骤进行：

a、粉碎的牵牛子果实、牛心朴子全草分别在60～70℃温度下用甲醇提取，浓缩提取液并分别蒸干甲醇呈流浸膏，分别用乙醇萃取，浓缩萃取液，使至牵牛子果实干重的15％-25％，使至牛心朴子全草干重的20％-25％。

b、将透皮吸收促进剂、乳化剂、牵牛子果实提取物浓缩萃取液、牛心朴子全草提取物浓缩萃取液、溶剂按所述处方规定的质量份数在30～50℃下混合搅拌，冷却至常温，即得植物质无公害杀虫渔药。

上述植物质无公害杀虫渔药可杀灭寄生在鱼类体表或鳃上的指环虫、三代虫、拟指环虫、车轮虫等，其使用方法与用量为：用1000倍水稀释后直接泼洒于鱼塘中，使用剂量为：0.5mL/m³。

本发明使用牵牛子(Pharbitis nid)果实提取物、牛心朴子(Cynanchumkomarovii)全草提取物杀虫活性部位主要是脂溶性成分，不含有水溶性成份如牛心朴子的生物碱，生物碱对鱼类体外寄生单殖吸虫如指环虫、拟指环虫、三代虫等无明显的杀灭效果，是杀灭农业昆虫的主要活性成份。

使用时将其用水稀释，泼洒于水面即可。经试验证实，这种制剂形态的水产动物寄生虫防治剂均有很高的防效，且对环境及水产动物安全。

具体实施方式

为了更清楚的理解本发明以及本发明药剂的药效，以下通过发明人给出的依本发明技术方案所完成的具体的实施例对本发明作进一步的详细描述，这些仅是本发明较好的实施例，但不限于这些实施例。

实施例1：称取粉碎的牵牛子果实100公斤，在65℃下，用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇呈流浸膏，用无水工业酒精萃取，浓缩萃取液至15公斤；称取粉碎的牛心朴子全草100公斤，同样的工艺获得牛心朴子全草提取液25公斤。

称量透皮吸收促进剂氮酮2公厅、1702-4乳化剂3公斤、95％乙醇溶剂35公斤于匀质机中混合，在30℃下，搅拌加入牵牛子果实提取物浓缩萃取液30公斤、牛心朴子全草提取物浓缩萃取液35公斤，再搅拌30分钟，冷却至常温，即得植物质无公害杀虫渔药。

实施例2：称取粉碎的牵牛子果实50公斤，在65℃温度下，用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇呈流浸膏，用无水工业酒精萃取，浓缩萃取液至12公斤；称取粉碎的牛心朴子全草150公斤，同样的工艺获得牛心朴子全草提取液32公斤。

称量透皮吸收促进剂氮酮3公斤、1702-4乳化剂3.5公斤、95％乙醇溶剂40公斤于匀质机中混合，在40℃下，搅拌加入牵牛子果实提取物浓缩萃取液45公斤、牛心朴子全草提取物浓缩萃取液22.5公斤，再搅拌30分钟，冷却至常温，即得植物质无公害杀虫渔药。

试验实施例1：

牵牛子与牛心朴子提取物杀虫渔药对鳗鱼拟指环虫病、车轮虫病的治疗效果

一、时间与试验场状况

2003年6月～2004年7月，在福建省福清市6个养鳗场，为水泥池精养养殖方式，发病情况见表1。

                表1.6个养鳗场鳗拟指环虫病治疗试验场状况

场名	试验面积(亩)	规格及数量	发病种类	养殖方式
					ABCDEF	305250.021020	鳗种幼鳗成鳗黑仔鳗鳗种鳗种	拟指环虫病车轮虫病拟指环虫病车轮虫病拟指环虫病拟指环虫病	流水池塘精养流水池塘精养流水池塘精养流水池塘精养流水池塘精养流水池塘精养

二、发病临床症状

发生拟指环虫病和车轮虫病，表现症状是相似的。发病严重的鱼，出现摄食迟钝，摄食量减少，鳃丝粘液增多，呼吸困难，在池塘中出现狂游等症状。随即抽样检查，在4×10倍低倍镜检查，拟指环虫存活10～15个，为该病发病严重时期，时为用药治疗标准；在4×40倍低倍镜检查，视野中车轮虫数量达20～30个，为该病发病严重时期，时为用药治疗标准。

三、材料与方法

在6个渔场分别进行杀灭拟指环虫、车轮虫试验，使用药物前，需镜检确诊发病。试验药物采用实施例1方法制备得到的渔药(以下相同)，规格1000mL/瓶，有效含量20％，用量为0.5mL/m³，使用时用100倍的水稀释全池均匀泼洒。

1.药效评定：用药前镜检，观察鱼鳃部的拟指环虫或车轮虫寄生数量。然后按每立方米水计算用药量，量取药物后，用水进行稀释，泼洒于水面即可。在用药后48h，流水养殖池采用初步换水的方式换完池水，发病时用药1次即可。于用药后48h，在每个养殖池塘随机取样10尾鱼，取全鳃制片，镜检观察在鳃上拟指环虫或车轮虫死亡情况，统计存活数量。计算脱落消失百分比。并与未用药池塘的鱼进行对照。在生产养殖阶段，可用药物治疗2-4次。

2.安全性评定：按使用说明，在用药后48h，观察鳗鱼精神状态、摄食等有无异常。

四、结果

1.安全性评定：在用药后48h，鳗鱼精神状态正常，摄食量略有减少，无其它异常发生。说明该药物对鳗鱼是安全的。

2.药效评定：在投药后48h，每个养殖池随机捞取治疗过的各种规格的鳗鱼10尾，取鱼鳃制片用显微镜镜检观察，观察的鳗拟指环虫或车轮虫杀灭效果见表2所示。

五、讨论

“牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药”是一种对鳗鱼拟指环虫病、车轮虫病非常安全有效的药物，在试验过程中，每次用药，基本上能够完全杀灭鳗鱼拟指环虫或车轮虫，因药物使用过程中，由于水体量计算有差异，用药量时有不足，出现极少数鱼体有极个别寄生虫存活，但不影响总治疗效果。由于水源为河流，养殖水体必定受到外来拟指环虫的感染，所以，一般每间隔40～50d，用药1次，以确保养殖成功。

        表2.投药后48h，6个养鳗场鳗拟指环虫病和车轮虫治疗试验结果

场名	试验面积(亩)	规格	数量(尾)	治疗用药次数	杀灭寄生虫种类	杀灭率％
							ABCDEF	305250.021020	鳗种幼鳗成鳗黑仔鳗鳗种鳗种	10×10尾10×10尾18×10尾5×10尾14×10尾10×10尾	2次4次4次2次4次3次	拟指环虫病车轮虫病拟指环虫病车轮虫病拟指环虫病拟指环虫病	98.996998598.296.797.5

试验实施例2：

“牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药”临床试验总结

将“牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药”在陕西、江苏、宁夏、广东等省的部分渔场进行的杀灭鲤鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼、团头鲂、桂花鱼、罗非鱼等车轮虫、指环虫、三代虫等寄生虫治疗试验，现将治疗与安全结果总结如下：

1第一期临床试验

小范围防治试验主要在陕西的宝鸡、咸阳、西安的渔场进行，试验面积达9.27hm²，有夏花鱼苗、鱼种和成鱼，另外还有甲鱼、美国青蛙等。试验从2003.4～2004.11，主要防治了车轮虫、指环虫、三代虫等鱼类体外寄生虫，初步得出该制剂在使用剂量范围内是安全的，其预防保护率在98％以上，对寄生虫的杀灭率在93～98.6％。试验结果如下：

试验实例1：

1.地点：宝鸡市柔谷渔场。

2.试验面积：养殖池塘4个，为2.7hm²。

3.试验鱼种类：鲤、草、鳊、鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼。

4.技术人员：蒋科省，场长，工程师。

5.方法：在鱼塘养殖鱼类凭经验判断发生寄生虫病时，通过镜检确诊后，将“牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药”用水稀释100倍直接泼洒于池塘中，用量为0.5mL/m³，48小时每个池塘再随即捕捞20尾，镜检寄生虫存活情况。

6.发生病种类：车轮虫、指环虫、三代虫。

7.试验结果：

1)全性评定：在用药后48h，鲤、草、鳊、鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼精神状态、摄食正常，无其它异常发生，说明该制剂对以上鱼类是安全的。

2)药效评定：在投药后24h、48h，每个养殖池随机捞取10尾鱼镜检观察，车轮虫杀灭率平均在93％以上；指环虫、三代虫杀灭率平均在96.5％以上。

试验实例2：

1.地点：西安长安县东大渔场。

2.试验面积：养殖池塘8个，为0.8hm²。

3.试验鱼种类：罗非鱼。

4.技术人员：李积社工程师。

5.方法：在发生寄生虫病时，通过镜检确诊后，将“牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药”用水稀释100倍直接泼洒于池塘中，用量为0.5mL/m³，48小时每个池塘再随即捕捞20尾，镜检寄生虫存活情况。

6.发生病种类：指环虫。

7.试验结果：

1)全性评定：在用药后24h、48h，罗非鱼精神状态、摄食正常，无其它异常发生，说明该制剂对以上罗非鱼是安全的。

2)药效评定：在投药后24h、48h，每个养殖池随机捞取20尾鱼镜检观察，24h杀灭率平均在75.3％以上，48h指环虫杀灭率平均在96.0％以上。

2第二期临床疗效评价试验

该试验主要在陕西、江苏、宁夏、广东等地的部分渔场进行。试验从2004.2～2005.10，主要防治了车轮虫、指环虫、三代虫等鱼类体外寄生虫，初步得出该制剂在使用剂量范围内是安全的，其预防保护率在95％以上，对寄生虫的杀灭率在95～97％。试验结果如下：

1.陕西试验点：

1)陕西水产总站合阳渔场技术员李海建助理工程师

养殖面积：以鲤鱼为主的鱼种池为2hm²，成鱼池4hm²

试验效果：用量为0.5mL/m³，用药后48h，鱼精神状态、摄食正常，养殖池随机捞取20尾鱼镜检观察，车轮虫、指环虫、三代虫杀灭率平均在96％以上。

2)宝鸡市眉县槐芽渔场  技术员  高军

养殖面积：以鲤鱼为主的鱼种池为1.5hm²，成鱼池10.1hm²

试验效果：用量为0.5mL/m³，鱼种、成鱼用药后48h，鱼精神状态、摄食正常，养殖池随机捞取20尾鱼镜检观察，车轮虫杀灭率平均在92.4％以上；指环虫、三代虫杀灭率平均在97.6％以上。

2.江苏试验点：

中国水产科学研究院淡水渔业研究中心西郊苗种实验基地  场长  陆仁俊工程师

养殖面积：以鳊鱼为主的鱼种池为0.5hm²，成鱼池6.6hm²

试验效果：用量为0.5mL/m³，鱼种、成鱼用药后48h，鱼精神状态、摄食正常，养殖池随机捞取20尾鱼镜检观察，车轮虫杀灭率平均在95.3％以上；指环虫、三代虫杀灭率平均在96.5％以上。

3.宁夏试验点

宁夏回族自治区农业学校试验渔场  技术员  陈国平  副教授

养殖面积：以黄河鲤鱼为主的鱼种池为0.54hm²，成鱼池2.5hm²

试验效果：用量为0.5mL/m³，鱼种、成鱼用药后48h，鱼精神状态、摄食正常，养殖池随机捞取20尾鱼镜检观察，车轮虫杀灭率平均在92.3％以上；指环虫、三代虫杀灭率平均在95.0％以上。

4.广东试验点

广东肇庆学院生物系试验渔场  场长  陈学年  副教授

养殖面积：桂花鱼的鱼种池为0.5hm²，成鱼池12.0hm²

试验效果：用量为0.5mL/m³，用药后48h，鱼精神状态、摄食正常，养殖池随机捞取20尾鱼镜检观察，车轮虫、指环虫、三代虫杀灭率平均在95％以上。

试验实施例3：

“牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药”对鱼类急性毒性试验

1材料

由于鲢鱼对药物比较敏感，试验采用健康鲢鱼鱼苗进行，体重在2.0-2.5g，由西安市草滩农场一渔场提供。试验药品为含量20％牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药制剂。

2方法

首先将鲢鱼苗在试验水族箱和控温条件下暂养殖7d左右，每天投喂天然饵料1-2次。采用为静水式条件，水族箱内盛1L充分瀑气的自来水，控制水温为25±1℃，PH值为7.3，硬度65.6mg/L，碱度41.5mg/L，溶氧量为8.67mg/L，放养鱼后，要求保持水中溶氧在5mg/L以上。为了保持恒定的药物浓度，每隔24h换药液1次。

试验药物浓度的设定：首先，进行预备试验，确定试验药物浓度的大致范围，确定在12h内全部中毒死亡的药物浓度和96h不发生死亡的药物浓度后(7.00mg/L和5.00mg/L)，然后在96h内全部中毒死亡的药物浓度和12h不发生死亡的药物浓度之间按等对数间距设计5个药物浓度进行正式试验(5.00、5.46、5.96、6.49、7.00mg/L)，先将试验药物稀释至要求浓度后，每组随机捞取试验动物10尾或10只，按低浓度向高浓度递增的顺序放入，并设空白对照。试验中每隔1h观察1次，每24h全部换水，重新加药，以维持恒定药物浓度，并记录12h、24h、48h、96h各组试验动物的状况及死亡数。试验重复3次，取平均值。以更准确的确定其致死浓度范围和毒性大小。试验中用随机的方法捞取鲢鱼10尾按低浓度向高浓度递增的顺序放入，并设对照组。试验期间连续观察并记录各组96h内试验鱼的死亡时间。

3计算方法

根据各个试验组各时间段的死亡情况，采用直线回归法，用直线回归方程：

Y＝a+bX(X-药物浓度的浓度对数；Y-死亡率转换成的概率单位；a与b分别为直线的截距与斜率)，分别求出24h、48h、96h的LC₅₀，并计算该时间段LC₅₀的95％可信限。

a与b的计算公式为：

$a=\frac{\mathrm{\Σ}{x}^2\mathrm{\Σy}-\mathrm{\Σx\Σ}\left(\mathrm{xy}\right)}{\mathrm{k\Σ}{x}^2-{\left(\mathrm{\Σx}\right)}^2}$

$b=\frac{\mathrm{k\Σ}\left(\mathrm{xy}\right)-\mathrm{\Σx\Σy}}{\mathrm{k\Σ}{x}^2-{\left(\mathrm{\Σx}\right)}^2}$

k-药物浓度的组数(死亡率为0和100％的浓度不计算在内)。

根据a、b便确定出回归方程，然后再将50％死亡率的概率单位Y＝5.0带入回归方程，求出X，取其反对数，便得出该时间内的LC₅₀。

 LC₅₀ 95％的可信限计算公式为：

式中： N-供试的动物总数(死亡率为0和100％的浓度不计算在内)，X-LC₅₀值的对数。

该药物对各试验动物的安全浓度根据Turbell公式计算。

4结果

4.1鲢鱼中毒反应

在高浓度(7.00mg/L)试药物中鲢鱼中毒反应非常明显，用药后2h左右出现异常表现，鲢鱼将头窜出水面，或侧身在水底狂游，不久后开始出现麻痹，继而失去平衡，腹部朝上而死。低浓度试验液中(如5.00mg/L等浓度)，鲢鱼安静，无应激反应，活动正常。

4.2最低致死浓度范围和致死率

鲢鱼在第12h最低致死浓度范围5.96～7.00mg/L，从第24h后为5.46～7.00mg/L，致死率分别为10％、20％、40％、100％，在48h到第96h最低致死浓度范围与第24h小时相同(见表1)。

表1  牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药对鲢鱼急性毒性试验结果

试验浓度(mg/L)	鲢鱼死亡数
					12h	24h	48h	96h
	05.005.465.966.497.00	0001210	0012410	0023510					0023710
回归方程LC5095％可信限(mg/L)					Y＝-6.39+13.68X  Y＝-4.13+11.19X  Y＝-9.34+18.14X6.8015           6.5450          6.19026.2460～7.4062   5.8979～7.2627  5.8911～6.6988

4.3药物安全浓度

该药物对鲢鱼的安全浓度根据Turbell公式计算。

$=\frac{6.5450\×0.3}{{(6.8015/6.5450)}^2}$

$=1.8182\mathrm{mg}/L$

牵牛子与牛心朴子提取物无公害植物质杀虫渔药可以用来杀灭寄生在鱼类体表、鳃部的指环虫、车轮虫，有效使用浓度为0.5mL/m³对，而安全浓度是＝1.8182mg/L，远远高于有效浓度接近4倍，所以该制剂对水生动物安全性高。

Claims (7)

1、一种植物质无公害杀虫渔药，其特征在于：

(1)该渔药是由牵牛子Pharbitis nid和牛心朴子Cynanchum komarovii经提取加工而成；

(2)渔药加工方法为：粉碎的牵牛子果实、牛心朴子全草分别用甲醇提取，浓缩提取液并分别蒸干甲醇呈流浸膏，分别用乙醇萃取，浓缩萃取液，使至牵牛子果实干重的15％-25％，使至牛心朴子全草干重的20％-25％。

2、根据权利要求1所述的植物质无公害杀虫渔药，其特征在于，该渔药的组成及其含量为：

牵牛子果实提取物的浓缩萃取液        30～50份

牛心朴子全草提取物的浓缩萃取液      20～40份

乙醇                                35～55份

透皮吸收促进剂                      1～3份

乳化剂                              3～5份。

3、根据权利要求2所述的植物质无公害杀虫渔药，其特征在于透皮吸收促进剂为二甲亚砜或氮酮。

4、根据权利要求2所述的植物质无公害杀虫渔药，其特征在于乳化剂可选用OP-10或EL-10或1702-4乳化剂。

5、根据权利要求1或2所述的植物质无公害杀虫渔药的制备方法，其特征在于依次按照下述步骤进行：

a、粉碎的牵牛子果实、牛心朴子全草分别用甲醇提取，浓缩提取液并分别蒸干甲醇呈流浸膏，分别用乙醇萃取，浓缩萃取液，使至牵牛子果实干重的15％-25％，使至牛心朴子全草干重的20％-25％。

b、将透皮吸收促进剂、乳化剂、牵牛子果实提取物浓缩萃取液、牛心朴子全草提取物浓缩萃取液、溶剂按所述处方规定的质量份数在30～50℃下混合搅拌，冷却至常温，即得植物质无公害杀虫渔药。

6、权利要求1或2所述的植物质无公害杀虫渔药在杀灭寄生在鱼类体表或鳃上的指环虫、三代虫、拟指环虫、车轮虫等的应用。

7、根据权利要求1或2所述的植物质无公害杀虫渔药，其使用方法与用量为：用1000倍水稀释后直接泼洒于鱼塘中，使用剂量为：0.5mL/m³。