CN1711360A

CN1711360A - 标记基因

Info

Publication number: CN1711360A
Application number: CNA2003801034452A
Authority: CN
Inventors: M·克莱里奇; 宫泽正显
Original assignee: ImmunoClin Ltd; Osaka Industrial Promotion Organization
Current assignee: ImmunoClin Ltd; Osaka Industrial Promotion Organization
Priority date: 2002-10-16
Filing date: 2003-10-16
Publication date: 2005-12-21
Also published as: AU2003301319A1; WO2004035825A3; US20060134607A1; JP2006502728A; GB0223982D0; PL376510A1; EP1552000A2; CA2502723A1; RU2005114525A; BR0315382A; AU2009201107A1; WO2004035825A2

Abstract

描述了确定感染特别是HIV感染的易感性以及治疗所述感染的方法。

Description

标记基因

本发明涉及标记基因和它的应用。更特别地，本发明涉及对感染显现出易感性的标记基因。

已知在本领域使用标记基因诊断对某种疾病的易感性是可能的。例如，致癌基因或肿瘤抑制基因被广泛地认为是对某种癌症易感性的标志，特别是考虑到突变的致癌基因和删除的肿瘤抑制基因与某种癌症之间的联系。另外，可用来预测较高风险发生癌症(例如乳腺癌)的基因例如BRCA基因已经被鉴定出来。还知道某些个体对感染特别是病毒感染有高的敏感性或抗性。预测疾病的易感性对那些拥有易感性基因的人避免和已知的病原学因子(aetiological agents)、化学药品或病毒不必要的接触并且采取已知的和正在开发的预防性的措施是有益的。这对设计抗病毒性疾病的疫苗和基因治疗也是有用的。

此外，发展抗主要病毒性疾病，例如抗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的有效疫苗是一个具有全球性社会经济后果的紧迫问题。HIV是获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的致病因子。开发这样的疫苗的一个关键是弄清楚针对HIV感染的天然抗性机制。已知几个宿主基因与可能的针对HIV感染的抗性以及在血清转化[1]后延迟或者加速AIDS进程相关。这些宿主基因包括编码趋化因子受体和细胞因子、充当天然杀伤细胞受体配体的杀伤免疫球蛋白类受体(KIRs)和那些属于主要的组织相容性复合物(MHC)[1-11]的基因。

作为天然抗HIV感染的例子，已经知道有一些个体尽管持续地暴露于HIV也不会变成HIV阳性。一些天然抗性的个体拥有称作CCRΔ32的突变的HIV共同受体(co-receptor)基因[1-5]。然而，这个突变是隐性的并且通过阻止HIV进入细胞而赋予抗性的纯合体是非常罕见的。于是，上述突变不能解释显示自发的针对HIV感染具有抗性的大多数个体。在已存在的显示针对HIV感染具有天然抗性的人群中，存在多次和反复暴露于HIV但仍然不具有针对HIV起反应的血清IgG抗体的被称为HIV暴露血清阴性(ESNs)或HIV-1暴露但未感染个体(EUIs)的独特人群[12，13]。对来自这些ESNs/EUIs的尿道内或阴道分泌物中的HIV抗原特异性T淋巴细胞反应和HIV反应性IgA抗体的检测显示，他们已暴露于HIV但这种暴露仍没有造成感染[10-17]。将这种ESN/EUI状况与以前报导的遗传多样性联系起来的努力讫今仍未获成功。

此外，当考虑对HIV感染发展预防性和治疗性手段时，在一些HIV-1感染个体中缺少临床进展以及在一些明显抗性的人群中(尽管多次和反复地暴露于这种病毒)缺少可检测的HIV-1基因组是两个值得注意的现象[18-20]。在表型上，有一些尽管在外周血单核细胞(PBMCs)中缺少可检测的血浆HIV-1 RNA和HIV-1 cDNA但显示有强HIV-1抗原特异性T细胞反应和HIV-1反应性粘膜IgA产物的个体[21-23]。他们通常被称作HIV-1暴露但未感染个体(EUIs)。由此类EUIs中分离的粘膜IgA产生的HIV-1中和活性的证据暗示HIV-1中和抗体的快速产生和类型转换可能赋予假定的抗HIV-1感染的免疫抗性。通过在非人类灵长类[27-30]中的被动转移和疫苗诱导的活性免疫实验已经证明了抗HIV-1相关猿免疫缺陷病毒(SIV)或致病嵌合体(HIV和SIV间的)的中和抗体的保护作用。然而，目前还不知道影响可能的保护性粘膜抗HIV-1抗体有效产生的遗传因子。

然而，在他们的同意下，通过研究从这些个体获得的DNA样品，本发明者已经发现ESNs在第22号染体上的某区域内微卫星座位上拥有独特稀有的等位基因，所述区域与小鼠第15号染色体上包含逆转录病毒抗性基因Rfv-3的染色体区域同线(syntenic)。于是，本发明者已鉴定了似乎与HIV感染抗性相关的特殊基因型或多态性。这第一次证明了：被称为ESN或EUI状态的抗HIV感染的天然获得的免疫抗性可能受遗传影响。

因此，本发明者已鉴定了对感染特别是病毒感染和更特别是HIV感染具有易感性指示的标记基因和它的多态物(polymorphism)。

因而，本发明提供了一个确定对感染的易感性的方法，所述方法包括从受试者获取DNA携带样品，并且分析样品以鉴定微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272中至少一个座位上存在的等位基因，其中存在于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272上的特定等位基因是对感染具有抗性的指示。

本发明也包含了与这些座位互补的核酸(包括互补RNA)以及由其编码的氨基酸序列，和其同源物、拼接变体或功能等同物。

优选地，该方法用来确定个体对病毒感染的易感性。优选地对病毒感染的易感性是指对逆转录病毒这类的病毒，例如致癌病毒(oncovirus)、慢病毒或泡沫病毒(spumavirus)。HTLV和BLV(牛白血病病毒)是引起白血病的致癌病毒的例子。HIV和SIV是引起炎症和消瘦疾病的慢病毒的例子。人类泡沫病毒是泡沫病毒的例子。最优选的是确定HIV感染的易感性。

逆转录病毒可能是一种内源逆转录病毒，那就是在细胞内对某种生理刺激作出反应时产生的病毒。内源性病毒不会通过感染传播但能遗传。例如，由一个HIV阳性母亲生出的孩子通常是HIV阳性，尽管在出生后会发生血清转化，特别是如果婴儿不由母乳喂养。

于是，术语“感染”，如此处使用的，倾向于包括内源逆转录病毒和它们的行为以及传统意义上通过暴露于感染因子引发的感染。人类内源逆转录病毒(HERV)是内源逆转录病毒的例子。

可以侵入性地或非侵入性地获得样品。优选的样品包括血、尿、精液、口腔拭抹物(mouth swabs)、皮肤细胞、剪下的指甲、毛发或子宫颈涂抹样品(cervical smear samples)。

优选地，从样品中分离的DNA通过使用核酸扩增技术例如PCR或滚环复制或其他传统的核酸扩增技术进行扩增。在本发明中任何核酸扩增技术可能被同等地使用，并且无意将本发明限制在以上描述的方法中。

因而，本发明也提供了方法，其中通过使用DNA片段长度分析、DNA杂交技术、DNA序列鉴定、单链长度多态性分析(SSLP)或参考链构象分析(reference strand conformation，RSC)检测样品以确定特定基因型在微卫星座位存在或缺少。

更特别地，本发明提供了使用单链长度多态性(SSLP)分析的检测方法，并且用于PCR扩增微卫星标记的侧翼引物组选自：

D22S277左，TTCTTGTGTGGTAGTCTGGG；(SEQ ID No：1)

D22S277右，TACCNACTCCCCAAACTATG；(SEQ ID No：2)

D22S272左，GAGTTTTGTTTGCCTGGCAC；(SEQ ID No：3)

D22S272右，AATGCACGACCCACCTAAAG；(SEQ ID No：4)

D22S276左，CATTCTGCCAAGCAATTTAT；(SEQ ID No：5)

D22S276右，GCTGCTCTTTAAGTTTCTTGACC；(SEQ ID No：6)

D22S929左，GGAGCTGCATGTACTAGCTGG；(SEQ ID No：7)

D22S929右，GCATTTATGGAGTATCCACAG；(SEQ ID No：8)

D22S1169左，GCACACACATGCACATAATC；(SEQ ID No：9)和

D22S1169右，AACAACTTCCAGCAGACG.(SEQ ID No：10)，

其互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物。

优选使用本领域熟知的DNA片段长度分析，DNA杂交技术、DNA序列鉴定、单链长度多态性分析(SSLP)或参考链构象分析(RSC)检测样品中特定基因型是否存在于所述的微卫星座位。

下面的例子给出用于扩增微卫星标记的侧翼引物组的序列。这些序列的片段、多态物或同源物也都包括在本发明的范围内。

第二个方面，本发明也提供了一个用于诊断对感染的易感性的试剂盒，所述试剂盒包含用于确定微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272中至少一个座位上的基因型的试剂。

在优选的实施方案中，该试剂是用于扩增SSLP标记的PCR引物。诊断试剂盒可用来将人分成各种遗传群体，在这些群体中进行对感染的预防性和治疗性手段效果的比较和估计。因此，可以避免对拥有天然抗性的人使用不必要的治疗方法，并且减少治疗药物的剂量，而预防性手段和疫苗的使用可以集中在那些具有极度敏感性的人身上，可以期望在他们身上作出的努力会更成功。

因而，本发明也包括使用微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272中至少一个座位以确定对病毒疾病特别是逆转录病毒疾病和更特别地是HIV感染的易感性。也可以使用座位组合。

要注意的是，特定等位基因的存在表示具有对感染的抗性，并且因此在发明中该特定等位基因的缺少表示对感染的敏感性或易感性。在本发明最优选的实施方案中，被考虑的感染是AIDS的致病因子即HIV病毒。在这个方面，本发明提供了判断个体是否对HIV感染有抗性或是否对它敏感并因此有很高的风险传染上(contracting)这种疾病的方法。

于是，本发明也提供了判断对感染的抗性的方法，所述方法包括步骤：从受试者获得DNA携带样品，并分析样品以确定存在于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423& D22S418或D22S272中至少一个座位上的等位基因，其中存在于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423 & D22S418或D22S272上的特定等位基因表示对感染的抗性。

在另一方面本发明提供了一个对HIV感染易感性的诊断方法，所述方法包括对DNA样品中是否存在微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272中的一个、多个或每一个进行检测。

更进一方面，本发明还提供了基因治疗之类的治疗方法：通过利用携带包含微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272中至少一个座位的染色体片段的载体治疗对感染有易感性的受试者。如下所描述，影响与病毒感染抗性有关的免疫细胞功能的基因很可能位于与上述微卫星座位相邻的人类染色体片段上。不希望被理论束缚，这个基因(假定被称为小鼠Rfv-3的人类同源物)将感染抗性赋予了受感染个体，并且因此在处理、预防或治疗感染方面使用这个基因、它的转录物、表达的肽、多肽或蛋白、所述蛋白的糖基化、磺化、乙酰化或其它翻译后衍生物、功能衍生物、等同物或片段是本发明的另一方面。

微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272都编码肽、多肽或蛋白质片段。这些肽、多肽或蛋白质片段和它们的二级或三级衍生物都与病毒抗性相关，并且将它们应用于已被证实对病毒感染有易感性的人对防止或预防感染可能是有益的。

此外，糖基化物、磺化物、磷酸化物、乙酰化物或其它添加或替换产物、同源物、拼接变体、转录变体或由所述微卫星座位上的核酸序列衍生而来的产物可以用作此目的，并且因此被认为是本发明的组成部分。

因此，本发明也提供了包含一个或多个微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272编码的肽、多肽或蛋白片段的组合物。本发明也提供了用于治疗或预防感染的包含由一个或多个微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272编码的肽、多肽或蛋白片段的药物组合物。

所述组合物可以是杀微生物剂、药物组合物或饮食增补剂或食物添加物。药物组合物可以包括通常在制剂化学领域熟知的添加剂例如载体、溶剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、抗结块剂、防腐剂、缓冲剂、稳定剂或保湿剂。制剂可以以片剂、乳液、乳膏、悬浮液、可注射悬浮液、糖浆、栓剂、阴道栓剂、贴剂、浸渍植入物(impregnated implant)或其他传统递送方法的形式存在。

当组合物是杀微生物剂时，优选地以粘膜可施用的制剂形式提供组合物，用于例如口、鼻、直肠或阴道施用。用于直肠或阴道时，杀微生物剂组合物可以是凝胶、乳膏、栓剂、阴道栓剂的形式或其它用于直肠或阴道的传统方式。

杀微生物剂还可以用于抗病毒疾病的粘膜疫苗接种，特别是当本发明组合物以例如引起免疫学反应的方式使用时。

理想情况下，当预防的病毒感染是通过性接触传递的HIV时，组合物可以和避孕物结合。在这种情况下，避孕物可以是隔膜(diaphragm)、宫颈帽(cervical cap)、避孕套、海绵或其它阴道内用具或屏障设施、包被的IUD用具、口服避孕药丸、避孕植入物或注射物或杀精子的凝胶、阴道栓剂(pessary)、泡沫、膜剂或乳膏。

因此，本发明更进一方面提供了进一步包含由一个或多个微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272编码的肽、多肽或蛋白质片段的避孕物。

本发明的避孕物也可以进一步包含二级或三级衍生物、糖基化物、磺化物、磷酸化物或其它添加或取代产物、同源物、转录变体或由微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272的核酸序列衍生的产物。

在更进一步方面，本发明还提供了微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272编码的肽、多肽或蛋白质片段在制备治疗感染的药物中的用途。

此外，本发明扩大到二级或三级衍生物、糖基化物、磺化物、磷酸化物或其它添加或取代产物、同源物、转录变体或由D22S929，D22S277，D22S264，D22S1166，D22S423，D22S1169，D22S418或D22S272微卫星座位上的核酸序列衍生而来的产物在制备用于治疗感染的药物中的用途。

优选地，所述感染是病毒感染并且更优选地是逆转录病毒感染。在最优选的实施方案中，所述病毒是HIV或HTLV病毒。

本发明也提供了确定针对感染的抗性的方法，所述方法包括步骤：从受试者获得DNA携带样品，并且分析样品以鉴定存在于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423& D22S418或D22S272中至少一个座位上的等位基因，其中特定等位基因在微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423 &D22S418或D22S272上的存在表示针对感染的抗性。

通过使用包含相关微卫星标记的试剂盒实施本发明方法。因此，本发明还提供了用于诊断对感染的易感性的试剂盒，所述试剂盒包括用于确定位于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272中至少一个座位上的基因型的试剂。更优选地，所述试剂盒包含用于确定位于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423& D22S418或D22S272中至少一个座位上的基因型或与其互补的核酸、其片段、多态物、拼接变体或同源物的试剂。

在本发明另一方面中，微卫星座位DNA可以被整合到载体上。为了研究目的，该载体可用来转染细胞。所述载体也可用来制备药物，例如用于感染治疗或用于DNA疫苗的制剂或成形，或用于基因治疗。

因此，在另一方面，本发明还提供了携带包含微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423& D22S418或D22S272中至少一个座位或其互补核酸，或片段、多态物、拼接变体或同源物的染色体片段的载体。

在药物中使用这样的载体在预防或治疗感染特别是病毒感染并且尤其是HIV病毒感染将是有益的。

这些微卫星座位DNA特别可应用于生产DNA疫苗。本发明DNA疫苗可以包括裸露的、佐剂化(adjuvantised)的或包囊化的DNA。该座位上的DNA序列可用于疫苗的制备，所述疫苗使用与所述座位上的DNA序列互补的核酸，或其片段、多态物、拼接变体或同源物。

这样的疫苗可以是口服的或肠胃外可施用的。肠胃外施用的例子包括通过注射，无论是皮下、静脉内的或肌肉内的注射，通过吸入和粘膜施用。然而，这并不意味着这些肠胃外施用的例子是有限的或已穷尽。

本发明疫苗优选地是免疫原性的。

为了制备疫苗或其它药物，确定能结合、或者识别、和/或修饰或调节编码这些座位的DNA、以及它们的片段、多态物、拼接变体、互补核酸或同源物的化合物是有用的。以芯片或检测板的形式提供这些化合物(尤其是当许多化合物被筛选时)是非常有用的。因此，本发明还提供了编码微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272，或所述基因的片段、多态物、拼接变体、互补核酸或同源物的DNA在芯片或检测板上筛选能够结合或者识别所述DNA的化合物中的用途。

在这个方面，本发明也提供了包含编码微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423& D22S418或D22S272的DNA，或所述基因的片段、多态物、拼接变体、互补核酸或同源物的芯片或检测板。

所述芯片或检测板可以用于医疗诊断或研究。

由于所述DNA编码也可能被使用的氨基酸序列，因此本发明也提供了芯片或检测板，所述芯片或检测板包含肽、多肽、蛋白质或所述蛋白的糖基化、磺化、乙酰化，或其他翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段，它们由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423 &D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物编码。

此外，本发明包括这样的芯片或检测板在筛选化合物中的用途，所述化合物能够结合或者识别、修饰或模拟所述的由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物编码的肽、多肽、蛋白质或所述蛋白质的糖基化、磺化、乙酰化，或其他翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段。

本发明者预测本发明的肽、多肽或蛋白和核酸序列刺激产生能提高针对感染的抗性的免疫球蛋白A(IgA)。特别地，这种化合物能用来刺激粘膜产生IgA，尤其是病毒反应性粘膜IgA。

于是本发明也提供了由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423 &D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物编码的肽、多肽、蛋白质或所述蛋白质的糖基化、磺化、乙酰化，或其他翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段在生产能提供感染抗性或拥有抗病毒活力的免疫球蛋白A中的用途。

此外，本发明提供了微卫星座位D22S929、D22S277、D22S264、D22S423 &D22S418或D22S272、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物在触发能提供感染抗性或拥有抗病毒活力的免疫球蛋白A的生产中的用途。

这样生产出来的IgA可用于用来治疗或预防感染特别是病毒感染并且最特别地是HIV感染的组合物。

所述IgA可单独使用或与上面提到的任一种药物组合物组合使用。

通过使用小鼠模型[31-34]，已经对影响病毒进入和复制和抗逆转录病毒感染的免疫反应的宿主遗传因素进行了细致研究。弗罗德小鼠白血病(Friend mouse leukaemia)病毒复合物(FV)由复制型弗罗德小鼠辅助病毒(F-MuLV)和缺陷型脾转化灶形成病毒组成。通过接种到免疫活性敏感株成年小鼠内，FV诱导感染的红细胞类祖先细胞(erythroid progenitor cells)快速增殖。免疫抑制反应和FV的持续感染最终将由于细胞转录因子的插入激活或肿瘤抑制基因的破坏引起白血病细胞的单克隆或寡克隆扩增。在目标细胞中直接控制病毒进入和复制的宿主基因座位Fv-1-Fv-4已经被确定[35-38]。然而，甚至当宿主动物在以上座位拥有相同的基因型时，疾病发展和进展的速度仍然有很大的变化，这取决于宿主在几个影响对FV抗原免疫反应的位点上的宿主基因型[33]。两个主要的组织相容性复合物(MHC)II类座位直接限定T辅助细胞识别病毒的衣壳抗原[39，40]，而I类座位影响来自病毒抗原特异性T细胞的细胞因子的产生[41]。定位在MHC 1b区域的另一个座位可能影响天然杀伤细胞的功能[42，43]。还有另一个已定位在第15号染色体上的宿主座位(并因此与MHC无关)对FV感染[33，44-46]后病毒血症的持续有很强的影响。在相同非MHC座位上的基因型也影响能调节感染细胞表面[47]病毒抗原表达的细胞毒性抗体的产生。然而，还没有直接地检查到病毒血症的持续和病毒中和抗体的产生之间的可能联系。这里，我们已经对小鼠中FV感染后影响病毒中和抗体产生的座位进行连锁分析。

这个小鼠研究的扩展意外地导致本发明者证实：在HIV未感染个体中与存在针对HIV-1有强烈免疫反应相关的人类染色体标记。

基因Rfv-3原先被定义为决定感染了弗罗德白血病逆转录病毒的小鼠能否在感染后30到60天内从病毒血症中恢复[49，50]的单个常染色体基因。尽管还不知道它的分子本质，这个基因已经被定位在小鼠第15号染色体上[51，52]。小鼠主要组织相容性复合物(MHC)的基因即H2也影响针对弗罗德逆转录病毒感染的免疫抗性，所述H2控制T淋巴细胞对病毒衣壳抗原的反应[20，53，54]。当在同类系的株系中检测时，在Rfv-3座位上拥有抗性等位基因(Rfv-3^r)或在小鼠MHC[图1]上具有效应器单元型(H2^b)的小鼠中观察到早期病毒中和抗体的产生，暗示着Rfv-3基因和H2可能通过共同的途径影响免疫系统。此外，与缺少Rfv-3^r的H2^a/b小鼠[图1]相比，同时拥有Rfv-3^r等位基因和H2^b单元型的小鼠甚至显示有更高的病毒中和抗体和更高的由IgM到IgG的转换频率，进一步表示在与H2合作时，Rfv-3可能调节T辅助细胞的功能。这与为什么在明显缺少IgG的情况下，能在ESNs(参看表1例子)中检测到HIV特异性IgA产物潜在相关，尤其是因为ESN和HIV感染个体之间的HIV-1抗原特异性T辅助细胞反应和T细胞的细胞因子产生的模式可能不同[14，16，48]。

通过使用(B10.AXA)XA回交小鼠，所述小鼠具有分离出来的根据转染后(PID)15天病毒中和抗体的滴度定义的Rfv-3关联表型，本发明者进行了细致的连锁分析并将这个基因定位在小鼠第15号染色体的D15Mit1和D15Mit18之间的3-Mb片段内(图2、4、5、8)。为了对小鼠标记进行物理定位，使用了在Ensemble GenomeBrower (http：//www.ensembl.org/)上搜寻到的与小鼠第15号染色体这个区域同线的人类第22号染色体片段的信息，并且用已知的简单序列长度多态性(SSLP)标记将这两个物种之间同源的基因连线(lineup)。结果，几个同时具有多态性并且与Rfv-3连锁基因的人类同源物相邻的SSLP座位被鉴定[图2，4，5，8]。外周血单核细胞由前述给予书面允诺的ESN和HIV感染个体提供。所有招募的ESNs都进行血清HIV-1反应性IgG、血浆HIV RNA和精液或阴道分泌物细胞的HIVcDNA检测，并且显示没有一个人存在有HIV-1，而HIV感染个体在这些实验中全部显示阳性。使用上述PBMCs中分离的基因组DNA作模板，通过确定PCR扩增片段的大小来鉴定位于第22号染色体内的SSLP座位上的等位基因[图3和表1]。结果，ESN和HIV感染群体之间位于D22S277座位的等位基因频率分布显著不同(对于2×11表，χ²＝20.2，Fisher’s exact test确定的p＝0.020)。不同地观察到，18个ESNs测试者中有10个拥有位于D22S277座位的三个不同等位基因中的至少一个基因，所述三个等位基因分别产生154，156或158bp片段，而在18个HIV感染者中只在2个人里发现有这些基因中的一个(χ²＝8.0，p＝0.012，通过Fisher’s exact test测定)。这三个等位基因在The Genome Database(http：//gdbwww.gdb.org/)里属于稀有基因，所报到的频率分别为7、5和9％。另一方面，在高加索人中产生160或162bp片段的等位基因很普遍，拥有的报导频率分别为29和14％，并且这些后述的等位基因(表1)在两组人群中都观察到有相似的频率。因此，应该强调的是：对于产生158bp片段的等位基因来说，18个ESNs中有2个是纯合的，并且有3个人是来自上述3个稀有等位基因中的2个基因间的杂合子。相反地，在HIV感染个体中没有发现这样的稀有等位基因的杂合子(18个中有5个vs18个中有0个，产生p＝0.045，由Fisher′s exact test测定)

上述ESNs中位于D22S277座位的不同等位基因的积累似乎是不一致的，因为在周围的染色体座位中也观察到(表1)不同稀有等位基因分布的较不明显但相似的相位差。事实上，在D22S929座位上18个ESNs中有5个发现产生144或146bp片段的等位基因，并且对于两个等位基因中的其中一个甚至有一个个体是纯合的，而在17个HIV感染测试者中只有一个拥有这样的等位基因。在D22S272座位上18个ESNs中有5个发现产生132、142或148bp片段中的任一片段的稀有等位基因，但在测试的18个HIV感染者中只有一个拥有这样的等位基因。然而，在这个区域之外的座位上例如D22S1169的座位上，在ESN和HIV感染群体间无论是等位基因频率的分布(图2、4、5、8)还是拥有稀有等位基因的个体的频率(表1)都没有显著的差异。

表1，HIV暴露血清反应阴性和HIV感染个体的人类第22号染色体上位于SSLP座位的基因型

个体	尿道或阴道拭抹物中的HIV-1反应性抗体(ELISA吸收)		SSLP座位
个体	尿道或阴道拭抹物中的HIV-1反应性抗体(ELISA吸收)		SSLP座位					ESN1-1ESN1-2ESN1-3ESN1-4ESN1-5	IgA0.7840.8110.2170.5570.911	IgG0.002NDND0.0210.006	D22S929132/142140(homo)138/ 144 144 (homo)138(homo)	D22S277166(homo)156/160164/170162/166158/162	D22S272134/140134(homo)134(homo)132/148 132/142	D22S276243/251245(homo)245(homo)243/249243/251	D22S1169126/128120/126120/126126/130126(homo)

ESN1-6ESN1-7ESN1-8ESN2-1ESN2-2ESN2-3ESN2-4ESN2-5ESN2-6ESN2-7ESN2-8ESN2-9ESN2-10HIV1-1HIV1-2HIV1-3HIV1-4HIV1-5

0.2170.2480.8521.0120.4780.2630.1710.2790.2460.2040.2000.2060.1010.1140.3000.2010.3080.121

0.0060.0010.004NDND0.0080.0080.0070.0080.0080.0080.0060.0081.1121.0800.754ND0.587

138/140138/ 146138/140134/ 144134/142134/136138/ 146138/140(homo)140/142138(homo)138(homo)132/140138(homo)138/140134/138132/138134/138

162/164160/162158/164154/160156/164158 (homo)160/164160/164158 (homo) 154/158160(homo)156/158 154/158162/172160/166168/170160/162160/168

134/ 142134/136132/140140/150134/140134/ 148134/140134/136134/140134(homo)134(homo)140(homo)134(homo)140(homo)134(homo)134/136134/140134(homo)

245/251243/251243/245241/253243(homo)241/243243/245243/245NDNDND243(homo)241(homo)243/251243/245243(homo)243/245243/245

128/130126/128126/128120/126118/126120/128126/130118/126120(homo)120/130126/128118/128120/126126/130120/126126(homo)126(homo)ND

HIV1-6HIV1-7HIV1-8HIV2-1HIV2-2HIV2-3HIV2-4HIV2-5HIV2-6HIV2-7HIV2-8HIV2-9HIV2-10

0.1140.2010.4120.4080.301ND0.3030.2510.5130.514ND0.2040.228

1.1200.8800.9510.7410.983ND0.3600.4490.3380.107NDNDND

132/136136/140136/138138/ 144138(homo)140/142136(homo)138/140ND132/138138/142138/142138(homo)

158/160158/160162/164160/172164/166160/164150/166162/168166(homo)164/172160/170162(homo)162/170

134/140134/136134/150134/140134/140134/ 142134/140134/140134(homo)134(homo)140/144134/136134/140

243/251241/243245(homo)NDNDNDND245(homo)NDNDNDND245/251

118/130126/130118/126128/130126(homo)118/126128/130124/126120(homo)126/130120(homo)118/126128/130

每个座位上的稀有等位基因(那些拥有报道的频率小于10％的)用粗体和下划线显示。ND，没有确定；homo，纯合的。在ESNs中没有检测到针对HIV-1具有反应性的血清IgG。

以上数据与这样的假说一致：在HIV暴露后早期赋予产生抗逆转录病毒抗体和类型转换能力、可能与小鼠Rfv-3^r同源的显性效应器等位基因存在并位于D22S277座位附近，于是ESN状态与产生154，156或158bp片段的D22S277等位基因共同分离。以前没有报导过影响抗HIV感染抗性和/或AIDS进展过程的人类基因位于人类染色体的这个区域，如CCR5和CCR2位于3p21，SDF1位于10q11.1，HLA位于6p21.3，KIRs位于19q13.4，和IL10位于1q31-132。

抗HIV感染抗性的已经确立的遗传基础是导致细胞表面缺乏HIV共同受体[1-5]表达的HIV共同受体基因CCR5的突变体形式的纯合性。然而，由于突变体CCR5 Δ32是稀有的并且只有1％的高加索人[1，3]发现有所述纯合性，因此不能用它来解释ESN状况的更普便现象。事实上，在前述的ESNs[10，14，48]中没有发现CCR5 Δ32突变。另一方面，当用来自HIV衣壳的抗原性肽[14]刺激时，与HIV血清反应成阳性者相比，绝大部分ESNs的PBMCs显示有较高的IL-2和较低的IL-10产物。因此，一些调节T细胞功能的基因在ESNs和HIV血清呈阳性者之间可能有所不同。由于Rfv-3似乎在小鼠中调节一些T辅助细胞的功能(图1)，鉴定它的分子本质以及分析它的人类同源物将可能为我们提供预防和治疗HIV感染方法的全新方向。

仅以例子的方式，参考下列附图图解的例子对本发明实施方案进行描述：

图1显示在PID 16-20时小鼠的同系株系中检测到的弗罗德病毒中和抗体的滴度；

图2是一个关于位于小鼠第15号染色体和人类第22号染色体同线区域内的SSLP标记和同源基因之间的顺序和距离的图表说明。

图3显示D22S277座位的基因型确定；

图4显示了位于小鼠第15号染色体和人类第22号染色体同线区域内的SSLP标记的顺序和之间的距离；控制抗HIV IgA产物的座位恰巧与控制抗逆转录病毒抗体产物的小鼠基因同线(syntenic)。

图5显示赋予弗罗德病毒抗性的小鼠基因和人类病毒抗性基因之间的完美一致。

图6的图表显示：只在HIV暴露但未感染的人中观察到横跨第22号染色体的连锁不均衡的中断，这展示了发生在HIV暴露但不被感染的个体的祖先中的过去的突变或重组事件的证据；和

图7显示HIV-1抗性等位基因的频率和位点定位以及位于小鼠第15号染色体和人类第22号染色体的同线区域的小鼠抗体控制座位的图表说明，也展示了只在HIV-1暴露但未感染的人中观察到的横跨第22号染色体的连锁不均衡中断和发生在HIV暴露但未感染个体的祖先中的过去的突变或重组事件的证据。

实施例

实施例1

从图1中可以看到，如[54，56，57]中描述的，对于H2^a/a群体用150个脾转化灶形成单位(SFFU)，或对于H2^a/b群体用1,500SFFU的弗罗德逆转录病毒复合物接种小鼠。在PID 16-20时，在乙醚麻醉下，将它在眶后窦(retro-orbital sinus)处放血并通过聚焦免疫酶检测法[54，56，57]检测每一份血清中和弗罗德白血病辅助病毒感染性的能力。显示了从每个个体小鼠中获得的整个血清的中和滴度。如[54，56，57]中的描述，也通过用50mM 2-巯基乙醇处理来自H2^a/b小鼠的血清以检测IgG类中和抗体的存在，并且用闭符号(closed symbols)表示那些包含病毒中和IgG的血清。根据它们的通过实验鉴定的D15Mit71等位基因，H2^a/a(B10.A×A)×A回交小鼠被分成Rfv-3^s/s或Rfv-3^r/s组群。根据定义，(B10.A×A)F₁代中是H2^a/a和Rfv-3^r/s小鼠的抗体滴度用方形符号(square symbols)表示。用Student’st检验比较两个遗传群体间的平均滴度，并且星号表示统计学上的显著差异(p＜0.0001)。在Rfv-3^r/s，H2^a/b小鼠中拥有中和IgG的个体频率(6/11)显著比Rfv-3^s/s，H2^a/b小鼠中的(1/14)高(p＝0.02，通过Fisher′s exact test测定)。

在图2，4和5的图表说明中，着丝粒(O)放在左边。通过使用185个(B10.A×A)×A回交小鼠进行连锁分析以确定Rfv-3座位的位置。在D15Mit71座位观察到SLLP基因型和病毒中和抗体滴度(在PID15时)之间有最强连锁(χ²＝62.2)。通过将SSLP基因型和8个关键(critical)动物的抗体滴度联系起来，Rfv-3座位的位置进一步被缩窄到所显示的区域，在所述8个关键动物中D15Mit105和D15Mit107座位之间的染色体重组已被鉴定。通过对2X(等位基因数目)表进行χ2分析以对ESN和HIV感染群体之间每个人类座位上等位基因频率分布的差异进行分析。上面确定的χ²值显示在每个微卫星座位名称的下方。

图3显示D22S277座位的基因型确定，在所述座位对每个样品至少进行3次PCR和片段分析，并且此处显示来自2次单独实验的代表性结果。

ESN和HIV-血清反应呈阳性的个体

18对HIV血清状况不一致的异性爱夫妻被招募加入研究。在11对夫妻中女性伴侣是HIV感染者，然而男性伴侣HIV血清反应呈阴性，尽管具有长期的不带避孕套插入性交的历史。在剩下的7对夫妻中男性伴侣是HIV感染的，而女性伴侣是HIV血清反应呈阴性。对于ESN，将其纳入研究的标准是至少有4年多次无保护性交事件的历史并且本研究之前4个月内至少有一次冒风险的性交事件。所述夫妻报告在4年内每年平均有8次无保护性交事件(从5次到大于40次)。阴道性交较多，很少进行口交。没有一对夫妻报告过有肛交。根据前面[14，16]所描述的对HIV-1病毒血症进行检测，并且在所有ESNs中没有检测到HIV-1病毒血症。为了排除在ESNs中存在粘膜限制的HIV-1的可能性，根据[14，16]中的描述将精液或阴道流体的cDNA进行分析。在所有的HIV感染个体中检测到HIV-1 cDNA但在ESNs中没有检测到。根据[14-17，48，55]中的描述，对血清和尿道或阴道拭抹物中的HIV-1特异性抗体进行滴定。在ESNs血清中不含有可检测的HIV反应性IgG，而在所有HIV感染个体中HIV-1反应性血清IgG都呈阳性。所有的分析都以盲试方式(blinded fashion)进行。Luigi Sacco Hospital，Milano和the Santa Maria Annunziata Hospital，Florence的研究道德规范委员会已经批准这个方法。在病人加入研究前获得了所有病人书面提供的允诺。

Rfv-3基因的染色体定位

饲养(B10.A×A)×A回交小鼠，用150个脾转化灶形成单位的弗罗德病毒复合物感染小鼠并且根据[56，57]中的描述在PID 15时从眶后窦处放血。根据[54，56，57]中的描述确定弗罗德病毒中和抗体的血清滴度。切下尾尖用于制备基因组DNA，并且通过使用特异性PCR引物对[51，52]对位于SSLP座位D15Mit22，D15Mit28，D15Mit71，D15Mit171，和D15Mit42的等位基因进行鉴定。对在D15Mit28和D15Mit171之间拥有重组的个体进一步分析它们在另外的SSLP座位上的基因型(图2、4、5)。

人类SSLP标记的分析

以从每个ESN和HIV感染个体的PBMCs中提取的基因组DNA(0.5μg)作为模板，使用下列侧翼引物对进行40个循环的PCR扩增[58]：

D22S277左侧，TTCTTGTGTGGTAGTCTGGG；(SEQ ID No：1)

D22S277右侧，TACCNACTCCCCAAACTATG；(SEQ ID No：2)

D22S272左侧，GAGTTTTGTTTGCCTGGCAC；(SEQ ID No：3)

D22S272右侧，AATGCACGACCCACCTAAAG；(SEQ ID No：4)

D22S276左侧，CATTCTGCCAAGCAATTTAT；(SEQ ID No：5)

D22S276右侧，GCTGCTCTTTAAGTTTCTTGACC；(SEQ ID No：6)

D22S929左侧，GGAGCTGCATGTACTAGCTGG；(SEQ ID No：7)

D22S929右侧，GCATTTATGGAGTATCCACAG；(SEQ ID No：8)

D22S1169左侧，GCACACACATGCACATAATC；(SEQ ID No：9)和

D22S1169右侧，AACAACTTCCAGCAGACG.(SEQ ID No：10)

为了在片段分析时使用Long Read Tower DNA sequencer(AmershamPharmacia Biotech UK，Ltd.，Buckinghamshire，UK)进行检测，用Cy5标记上述每一套引物的左侧引物的5’末端。在下列条件下，使用重组Taq聚合酶(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，California，U.S.A.)进行PCR扩增：94℃初始变性2分钟，每个扩增循环包括：94℃时进行30秒，55℃时进行30秒和74℃时进行90秒，加上最后在72℃延伸10分钟。为确定基因型，应用上述DNA序列仪以及合适大小的标记对每个PCR扩增片段(50-100fmol)进行分析，并且按照厂商说明用ALFexpress Sizer程序来确定片段大小。

实施例2

方法

小鼠和病毒。成对饲养的B10.A/Slc和A/WySnJ小鼠分别从Japan SLC，Inc.，Hamamatsu，Japan和The Jackson Laboratory，Bar Harbor，Maine购得。将这些亲本系和(B10.A×A)F₁和(B10.A×A)×A回交小鼠在特殊的无病原体的环境中繁殖并供养在Rakuno Gakuen University and Kinki University School ofMedicine动物实验室里。下面的实验方法经实验动物委员会批准并且在各大学相关指导下进行。根据之前[42，43，64，65]中的描述进行FV制备和静脉内接种。

检测病毒中和抗体

用150个脾转化灶形成单位的FV感染小鼠，并在感染后指定的天数内在乙醚的麻醉下从眶后窦处放血。收集血清并冰冻贮存备用。根据之前[43，64，65]中描述的方法确定F-MuLV中和抗体的血清滴度。简而言之，将每一份系列2倍稀释的血清与从FB29(具有感染性的F-MuLV分子克隆)慢性感染的Mus dunni细胞克隆培养物中收集的上清液混合物的标准稀释液混合、孵育并接种到培养在24孔组织培养板上未感染的Mus dunni培养细胞。两天后，使用对F-MuLV env基因产物[74]有特异性的单克隆抗体通过聚焦免疫酶测试法观察F-MuLV感染的细胞的转化灶。对每一份血清稀释物的所有分析都在两个孔里进行。当感染细胞病灶的平均数与对照孔里(其中只用稀释剂与病毒混合)的细胞病灶平均数相比较减少到小于1/4时，则判断中和性为显著的。用产生显著中和性的最高血清稀释度来定义抗体滴度。

小鼠的简单序列长度多样性分析

根据厂商说明书使用DNeasy Tissue试剂盒(QIAGEN GmbH，Hilden，Germany)从每只小鼠的尾尖制备基因组DNA。基于列于theGenetic and Physical Maps of the Mouse Genome site(http：//www-genome.wi.mit.edu/cgi-bin/mouse/，The WhiteheadInstitute/MIT Center for Genome Research，Massachusetts)内的数据库中的序列信息，对每一个微卫星座位制备一对寡聚核苷酸引物，并通过聚合酶链式反应(PCR)应用于扩增基因组DNA片段。根据厂商说明使用重组Taq聚合酶(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，California)，利用Quick Thermo Personal PCR Systems(NipponGenetics，Tokyo，Japan)对50ng的每一种模板DNA进行35个循环的扩增。用4％的琼脂糖凝胶对PCR产物进行电泳分离，并通过溴化乙锭染色在UV光下进行观察。

连锁分析

拥有显著滴度(2^1.5≤)的F-MuLV中和抗体的回交小鼠被称为生产者，而那些抗体滴度低于检测极限(＜2^1.3)的称为非生产者。根据16只A/WySn小鼠(所有抗体滴度都低于检测极限)的F-MuLV中和抗体滴度以确定截点(cut-off point)并且在一组15只(B10.A×A/WySn)F₁小鼠(2^1.5)中在PID15时观察到最低中和滴度。通过对2X2相依表使用Pearson’s χ²检验分析每一个被检查的染色体座位的基因型与病毒中和抗体存在或缺少之间的联系。通过使用3.0版本的MAPMAKER/EXP软件(The Whitehead Institute/MIT Center for GenomeResearch)进行多点分析以确定染色体座位的图谱顺序和Lod分值。

D15Mit1座位的物理定位

从RPCI-23雌性C57BL/6小鼠BAC文库(Children’s HospitalOakland Research Institute，Oakland，California)中选择和获取覆盖小鼠第15号染色体D15Mit68和D15Mit118座位之间片段的38个交叠的细菌人工染色体(BAC)克隆。根据上面描述的PCR检测方法，使用分离的BAC克隆作为模板检测了每个微卫星座位的存在。通过使用为D15Mit1设立的引物和以RP23-290M7 DNA为模板可以获得预期大小的PCR产物，并且通过数据库报导的这个BAC克隆(目录号AL591746)的序列可确定侧翼引物和与这个微卫星座位已知结构匹配的重复序列的存在。在交叠BAC克隆RP23-305P10中没有检测到这个微卫星序列的存在。

EUI和HIV-1感染的个体

本研究招募了42对HIV-1血清状况不一致的异性爱夫妻。尽管具有长期的不带避孕套插入性交的历史，32对夫妻中女性伴侣是HIV-1感染的而男性伴侣是HIV血清反应呈阴性。在剩下的10对夫妻中男性伴侣为HIV-1感染而女性伴侣为HIV血清反应呈阴性。对于EUI群体，将其纳入研究的标准是至少有4年多次无保护性交事件的历史并且在本研究阶段之前4个月内至少有一次冒风险的性交事件。所述夫妻在四年内平均每年有8次(从5次到大于40次)无保护的性交事件。另外49个年龄和性别相配的HIV-1感染个体被the InfectiousDiseases Unit of the Ospedale Santa Maria Annnunziata(Florence，Italy)招募。最后，以自愿者身份从Milano的Luigi Sacco Hospital和Florence的Santa Maria Annunziata Hospital招募47个未受感染的年龄和性相配的健康对照个体。Milano的Luigi Sacco Hospital和Florence的Santa Maria Annunziata Hospital的研究道德规范委员会批准了这个方法，并且招募人员的基因型认定分析经过Kinki大学医学院的道德规范委员会批准。招募前获得了所有招募人员的书面提供的允诺并且对样品进行匿名和盲试方式分析。

表型定义

通过使用前面[21，23]中描述的AMPLICOR HIV Monitor检测法(Roche Diagnostic Systems，Nutley，New Jersey)对血浆HIV-1负荷进行定量，并且在所有EUIs和健康对照中没有检测到血浆HIV-1。为了排除EUIs中的粘膜限制性存在的HIV，通过使用[21，23]中描述的逆转录和PCR方法对精液和阴道流体中可能存在的HIV-1 cDNA进行分析。在EUIs中没有检测到HIV-1 cDNA的存在。根据[21-26]的描述，应用HIV EIA检测法(Calypte Biomedical Corp.，Berkeley，California)通过酶联免疫检测对血清和尿道或阴道拭抹物(swabs)中HIV-1特异性抗体进行滴定。所述EUIs在他们的血清中不含有可检测的HIV反应性IgG，而所有的HIV感染个体的HIV-1反应性血清IgG都呈阳性。为了检测和列举外周血中的HIV-1反应性记忆T细胞，根据前面[23]中的描述进行酶联免疫印迹(immunospot)(ELISPOT)分析。简而言之，用5种代表经鉴定存在于HIV-1衣壳糖蛋白gp160中的混杂免疫优势表位的合成肽组成的混合物刺激PBMCs并且培养在涂有抗干扰素(IFN)-γ抗体的96孔板上。通过使用生物素连接的抗-IFN-γ抗体(Mabtech，Nacka，Sweden)、链霉抗生物素连接的碱性磷酸酶(Mabtech)和磷酸酶底物试剂盒(Bio-Rad Laboratories，Hercules，California)对分泌的IFN-γ的斑点进行观察和计数。人类SSLP标记的分析

通过使用基于Ensembl Genome Browser中描述的序列数据合成的侧翼引物组，以500ng从每个检测个体的PBMCs中提取的基因组DNA作为模板进行40个循环的PCR扩增。每个左侧引物用荧光染料标记以便使用ABI 3100 DNA测序仪(Applied Biosystems，Foster City，California)进行片段分析时检测。在下列条件下使用重组Taq聚合酶(Invitrogen Life Technologies)进行PCR扩增：94℃时初始变性2分钟，每一个扩增循环包括94℃进行30秒，55℃时进行30秒和74℃时进行90秒，加上最后在74℃延伸10分钟。为了鉴定基因型，应用上述DNA测序仪以及合适大小的标记对每个PCR扩增片段(50-100fmol)进行分析。使用GeneScan软件(Applied Biosystems)进行峰鉴定和大小测量。为了确定片段的绝对大小，对每个检测座位，将从至少两个纯合个体所获取的PCR产物克隆入pCR2.1-TOPO载体(Invitrogen Life Technologies)并且用M13正向引物进行测序。重复测序直至对每个等位基因观察到至少6个一致的克隆。

统计分析

用于等位基因频率分布和免疫学检测结果比较的标准统计学在相应的文本和列表注释部分有详细说明。为了检测在三个表型群体间可能存在拥有不同频率的显性等位基因，如下进行数学分析。定义x_ij为EUI群体中拥有基因型i/j(i≤j)的个体数目，此处n＝∑_i≤jx_ij是属于这个群体的个体总数。假设x＝(x_ij)_i≤j拥有参数a＝(a_ij)_i≤j的多项分布，此处∑_i≤ja_ij＝1。为了方便，设a_ji＝a_ij。类似地分别对于HIV-1感染的和健康对照群体，我们定义符号y，b和z，c。对于EUI群体，具有等位基因i的个体的频率表示为a_i＝∑_ka_ik类似地定义b_i和c_i。对于EUI和HIV群体中拥有等位基因j的个体具有相同频率的假设表示为H_i∶a_i＝b_i。类似地也考虑假设a_i＝c_i以比较EUI和健康对照群体。

在本研究中，我们检测多个假设H_i’s并获得相应的统计学P值。应当指出的是即使对每个H_i的判断是在一个预先给定的显著水平得出的，整个判断实际上可能要在一个更大的显著水平得出，因为误差率在超过一次检测后会积累。通过使用下列[77]闭合检验方法(closedtesting procedure)可以克服上述对零假设(null hypothesis)的错误拒绝。设#为假设H_i’s的所有交集构成的闭集。假设我们能够用共同显著水平α为任何一个假设H∈#设置拒绝区间。所述闭合检验方法是说通过使用相应的拒绝区间，我们只有在拒绝包括H的所有假设后才能拒绝H∈#。于是剩下的问题就成为设置拒绝区间(reject region)。

对于假设H_i，设t_i为标准检测统计量。相应的拒绝区间变为W_i＝{|t_i|＞e_i}。考虑共同的假设H。例如，设H为H₁，...，H_I的交集。相应的拒绝区间可由W＝{max_i＝1，...，I|t_i|＞e}来确定。我们使用下列变量稳定类型(variance stabilizing type)作为标准检验统计量。

t_{i} = (\sin^{- 1} \sqrt{x_{i} / n_{x}} - \sin^{- 1} \sqrt{y_{i} / n_{y})} / \sqrt{1 / 4 n_{x} + 1 / {4 n}_{y}}

此处n_x＝∑_i≤jx_ij并且n_y＝∑_i≤jy_ij。作为相对于常用的似然比(likelihood ratio)和Pearson’s X²检验的优点，上面的类型使我们能解释越小的P值意味着越强地拒绝相应的零假设，因为反正弦的变化是不依赖于样品的常量。上面的方法还有另一个优点：如果最大的交集假设H∈#被拒绝，根据闭合检验方法，对应于最小P值的单个假设会自动地被拒绝。此外，如果在单个假设中只有对应于最小P值的假设被拒绝，根据闭合检验方法它就是唯一被拒绝的假设。如果等位基因的数目是I，就有I个假设H_i’s。为简化考虑，H_i’s相应的P值为P₁＜…＜p_I。最大的交集假设是H_i’的交集。如果这个假设被拒绝，换句话说，如果相应的P值小于共同显著水平α，根据闭合检验方法对应于最小P值的假设H₁将被拒绝。此外，如果p₁＜α＜p₂＜…，则拒绝的假设只有H₁一个。

t_i’s的联合分布通常可由零假设下的多变量正态分布来近似估算，因此能够容易地计算出单个假设的相应近似P值。通过应用中心极限定理和parametric bootstrap[78]可以计算出共同假设的近似P值。需指出这个方法比简单的Bonferroni修正法(Bonferronicorrection)更强大。为了避免由于小频率等位基因存在引起的不必要干扰，当考虑共同假设时，我们只检验估算频率大于0.1的假设，因为频率小于0.1的等位基因不能解释整个群体的表型。通过从近似多变量的分布抽取100,000随机样品进行计算。本研究中，我们已经证明：在感染15天后，FV感染的(B10.A×A)×A回交小鼠的可检测病毒中和抗体的存在或缺少与它们在第15号染色体座位上的基因型有密切关系。连锁图谱数据表示控制病毒中和抗体生产的单基因位于D15Mit71座位附近，与前面定位的Rfv-3座位[45，46]共定位。由于Rfv-3相关的表型通过在FV感染后35到40天清除病毒血症来定义[44-46]，并且在第15号染色体上拥有来自B10的显性等位基因(图4)的小鼠感染后第15天产生可检测的中和抗体，因此较早地产生病毒中和抗体很可能与较早地清除病毒血症是相关联的。从图1可以看出：a.感染后在不同时间点(B10.A×A)F₁(●)和A(○)小鼠体内的中和抗体平均滴度(n＝11-16)的变化。S.E.M.用条线(bar)表示。虚线表示检测的极限。b.在PID 15时每只检测小鼠体内中和抗体的滴度。D15Mit71座位上的基因型是来自A等位基因的纯合子(○)或者是来自B10.A和来自A等位基因组成的杂合子(●)。

最吸引人的是：与小鼠第15号染色体同线的位于人类第22号染色体片段上的微卫星座位上的基因型与HIV-1未感染个体中粘膜抗HIV IgA的存在相关。在D22S423座位上观察到最高的相关性，即使进行多次比较的修正后，在此位点EUI群体中拥有等位基因221的个体频率显著高于HIV-1感染者。这个标记座位位于对应于小鼠第15号染色体某区域的染色体某区域的中间，所述片段包含控制病毒中和抗体产生的基因座位(图4)。图4中，物理定位和同线性数据都是基于Ensembl Genome Browser汇集的数据。着丝粒(o)放于左边。通过使用143只(B10.A×A)×A回交小鼠进行连锁分析对控制FV中和抗体产生的小鼠座位进行定位，并通过将SSLP基因型和8只关键小鼠的抗体滴度相联系进一步定位到显示的区域，经鉴定在所述关键小鼠中染色体重组发生在D15Mit105和D15Mit107座位之间。也显示了人类SSLP座位，在EUI和HIV感染群体间对位于所述座位上的基因型进行了比较。值得注意的还有：观察到在数据库报导的高加索人CEPH人群中[59，60]稀有的位于D22S277座位上的等位基因156和158(分别为每个染色体5.6和9.3％)在EUI群体中有更高的频率(分别为9.5和17.9％)。这些在HIV-1感染者和健康对照个体组成的群体中观察到的等位基因的频率和那些来自CEPH群体报导的频率是可比的，并且当把HIV-1感染者和健康对照群体结合起来并与EUI群体相比较时就会发现等位基因156(P＝0.035，通过two-tailedFisher′s exact test确定)和158(P＝0.0061，通过同样的检测法检验)的频率有显著的不同。由于微卫星突变率比编码基因[61]的点突变率高得多，并且最普遍的分步突变对大于20个重复[62]的微卫星倾向于减少重复数目，因此假设位于D22S277座位上的等位基因156和158(分别为25和26双核苷酸重复)都与相同的假定的等位基因连接是合理的，所述相同的假定等位基因与未感染个体中增强的针对HIV-1的免疫反应相关。在这个方面，通过假设等位基因156和158都与单个显性遗传因子相连来进行变量稳定分析(variancestabilizing analyses)，导致证明EUI和HIV-1感染者之间以及EUI和健康对照群体之间有显著的差异，P值分别为0.0066和0.0079，并且在使用闭合检验方法进行多次比较的修正后，在P分别为0.0378和0.0448时也可以拒绝(显著差异生效)这两个单独的零假设。进一步，当对HIV-1感染者和健康对照个体的组合群体与EUI群体进行相同的比较时，拥有等位基因156或158的个体频率在EUIs(P＝0.0019)中显著较高，并且甚至在进行多次比较的修正(P＝0.0121)后仍然具有强显著性。于是，在与小鼠第15号染色体同线的人类第22号染色体片段上的多个座位的基因型与未感染HIV的意大利人体内存在的抗HIV-1的强粘膜和T细胞免疫反应显著相关。

FV感染的小鼠病毒中和抗体的产生依赖于CD4⁺T辅助细胞的功能[63]，并且T细胞对病毒衣壳表位的识别强烈地影响病毒中和抗体类型转换[64，65]的动力学。同样地，与HIV感染个体相比(表2)，招募到本研究中的HIV-1暴露但未感染者拥有显著更高的粘膜抗HIV-1 IgA量和在外周血里拥有更多数目的HIV-1衣壳反应性T细胞。

表2.本研究中进行遗传分析的三个群体的HIV-1相关表型。

类群	年龄	血浆HIV负荷(拷贝/ml)	尿道/阴道抗HIV-1 IgA(光密度)	血清抗-HIV-1 IgG(光密度)	HIV-1衣壳反应性IFN-γELISPOT(/10⁶细胞)
类群	年龄	血浆HIV负荷(拷贝/ml)	尿道/阴道抗HIV-1 IgA(光密度)	血清抗-HIV-1 IgG(光密度)	HIV-1衣壳反应性IFN-γELISPOT(/10⁶细胞)	HIV-1-暴露但未感染	40.1±1.4	不可检测的(所有)^a	0.556±0.047^b	0.004±0.0006	131.2±11.3^c
HIV-1-感染	40.8±1.9	5.0±3.4×10⁵	0.360±0.039	0.793±0.069	63.4±9.2	HIV-1-暴露但未感染	40.1±1.4	不可检测的(所有)^a	0.556±0.047^b	0.004±0.0006	131.2±11.3^c
HIV-1-感染	40.8±1.9	5.0±3.4×10⁵	0.360±0.039	0.793±0.069	63.4±9.2	健康对照	37.8±3.6	不可检测的(所有)^a	0.002±0.0006	0.002±0.0001	＜5

数目表示为平均数±S.E.M。^a对所有招募者通过测量血浆中的HIV RNA和检测来自PBMCs总RNA的HIV cDNA来检测HIV基因组的存在。在暴露而未感染个体的情况下，也用粘膜活检组织的PCR来检测可能存在的HIV cDNA。在所有这些检测中，所有的暴露但未感染的个体和健康对照组都呈阴性。^b当P＝0.0022时通过Welch’s t test，显著高于HIV-1感染个体的平均值。^c当P＝0.015时通过Welch’s t test，显著高于HIV-1感染个体的平均值。

于是，所有这些数据与下面的假设一致：可能与在FV感染早期赋予小鼠产生逆转录病毒中和抗体能力的等位基因同源的显性效应器等位基因存在于第22号染色体上，并位于22q13.1片段附近。以前报导的影响抗HIV感染和/或获得性免疫缺陷综合症进程的人类基因没有位于人类染色体的这个区域，如CCR5和CCR2位于3p21，SDF1位于10q11.1，HLA位于6p21.3，KIRs位于19q13.4和IL10位于1q31-32(ref.3，38-47)。此外，在本研究(数据没有显示)的招募者中没有发现在纯合体中导致在细胞表面表达的HIV共同受体缺乏的CCR5 Δ32突变[20，66-69]，但是有3/42的EUIs显示有杂合的CCR5-Δ32删除存在。这个突变在意大利和泰国的HIV-1暴露但未感染个体[21，26，74]中是稀有的。总的说来，本发明者的结果显示存在能赋予针对HIV-1感染免疫抗性的新遗传因子。

控制中和抗体的小鼠座位的连锁图谱。为了排除影响FV进入和复制的宿主基因的效应和影响宿主T细胞对病毒抗原反应的宿主基因的效应，通过使用共同享有Fv敏感的Fv-1^b/b，Fv-2s(Fv-2^r/s或Fv-2^s/s)和H2^a/a基因型的A系和B10.A小鼠的杂交种进行遗传分析。对(B10.A×A)F₁和A小鼠在FV感染后不同的时间段对它们的病毒中和抗体产量进行比较时，在感染后的第10天这些小鼠中没有一只拥有可检测水平的中和抗体。在亲本A系小鼠中，感染后第15天和20天仍不能检测到中和抗体。相反地，所有受感染的(B10.A×A)F₁小鼠个体在PID 15时拥有显著的中和滴度，并且在PID 20时检测的滴度与PID15时滴度相比有显著增长(图1)。因此，通过在PIDs 15，17和21时对小鼠进行放血以检测(B10.A×A)×A回交小鼠中和抗体滴度的可能分离。在PID 15时，143个(B10.A×A)×A回交小鼠中有63只(63％)没有检测到病毒中和抗体，暗示着单个座位参与产生或缺乏产生中和抗体。对于连锁分析，基因型的确定集中在第15号染色体上，因为影响病毒血症持续的Rfv-3座位已经被定位在这条染色体上，并且通过使用43只单独的回交个体进行的初步分析显示，在PID 17时的病毒中和滴度与第15号染色体上D15Mit22，D15Mit28，D15Mit42和D15Mit161(数据没有显示)四个座位的基因型显著相关。使用143个回交小鼠进行连锁分析的结果显示第15号染色体标记座位上的基因型与PID15时病毒中和抗体滴度有很强的相关性，并且在D15Mit71座位上观察到最强的相关性(χ²＝74.0，P＝1.17×10^-7)(表3)。

表3.在PID15时控制FV中和抗体产生的假定座位的定位

遗传座位	Lod分值	X²值
遗传座位	Lod分值	X²值	D15Mit22D15Mit28D15Mit71D15Mit171D15Mit42	4.3713.6016.3811.157.09	22.362.874.050.731.7
D1Mit48D2Mit184D14Mit115	1.79不连锁不连锁	7.71.42.7	D15Mit22D15Mit28D15Mit71D15Mit171D15Mit42	4.3713.6016.3811.157.09	22.362.874.050.731.7

利用MAPMAKER/EXP连锁作图定位了一个在D15Mit71和D15Mit171座位之间决定在PID 15时病毒中和抗体存在与否的座位，这与前面定位的与早期病毒血症清除有关的Rfv-3座位一致。通过确定在D15Mit28和D15Mit171座位之间拥有关键重组(critical recombination)的回交小鼠基因型对影响FV中和抗体产生的座位进行进一步定位。为了这个目的，第15号染色体上围绕D15Mit71座位的将近12Mbp的区被18个多态性微卫星标记覆盖，并且确定了每只单独的回交小鼠在这些标记上的基因型。结果，8只在这个区域内拥有相互重组的回交小鼠得以鉴定(图4)。需要注意，尽管D15Mit1目前不包括在EnsemblGenome Browser(http：//www.ensembl.org/)的小鼠基因组物理图谱中，我们在包含有小鼠第15号染色体片段(碱基号47915-48097)的人造细菌染色体克隆RP23-290M7内确定了这个微卫星标记的侧翼引物和重复序列。因此，图4包括了D15Mit1座位的物理图谱。由于在这些相互重组的动物中观察到在D15Mit71，D15Mit2，D15Mit214，D15Mit69，和D15Mit70座位上的基因型与PID15时产生病毒中和抗体具有显著的相关(P＝0.029，通过two-tailed Fisher′s exact test确定)，因此控制FV中和抗体产生的座位可能在宽度上位于靠近D15Mit1座位的端部和靠近D15Mit118座位的中部的区域。HIV-1暴露但未感染的意大利人的遗传分析

本研究接着探索上述小鼠座位假定的直向同源物影响人类逆转录病毒感染中抗体产生的可能性。因为HIV-1传播的途径(rout)从而结果很少有多例HIV感染的家庭，因此通过比较感染和未感染的同胞进行标准的连锁分析是不可能的，于是，本发明者通过比较暴露但未感染的个体与HIV-1感染群体的个体之间的基因型进行了简单的相关研究，假设假定的保护性抗HIV-1免疫反应与未感染个体的显性遗传因子的存在相关，并且在感染个体中缺少这个因子。此外，本发明者还假设上述假定的遗传因子可能是赋予小鼠在FV感染早期产生病毒中和抗体能力的小鼠座位的直向同源物。于是，本发明者专注于与小鼠第15号染色体[图4]同线的人类第22号染色体片段上的多态性遗传标记。从意大利的Milan和Florence地区招募了42个HIV-1感染个体的未感染伴侣(其中尽管没有检测到血液和细胞内HIV基因组，但拥有粘膜抗HIV-1 IgA和显示HIV-1肽特异性T细胞细胞因子产物)、49个包括上述EUIs的感染伴侣在内的HIV-1感染个体和47个未感染健康对照，并且带有书面提供的允诺，并且对他们在图4中显示的座位进行基因型鉴定。表2概括了三个表型群体的病毒学和免疫学参数。通过两个方法比较了三个群体之间可能的遗传差异。第一个方法，通过对2X(等位基因数目)二联表使用Pearson’s χ²分析来比较三个表型群体中每两个群体之间在检测座位上的等位基因的频率分布。为了人种学上的兴趣，也将作为组合群体的招募者的等位基因频率分布与The Genome Database(GDB ver.6.4)报导的CEPH家族高加索人的进行对比。第二个方法，通过使用方法部分描述的变量稳定统计方法对三个表型群体之间在给定座位上拥有被研究的等位基因的个体频率进行算术比较。于是在招募的意大利人和CEPH家族群体之间，除了在D22S423和D22S1166座位(P分别等于0.0061和0.0087)上外，在所考查的座位上等位基因频率的分布没有什么不同。当三个表型群体之间的等位基因频率进行比较时，在EUI和健康对照群体之间，它们在22S277座位上的分布不同，P＝0.039。在其它座位没有观察到显著差异。

当通过采用显性模型对三个表型群体之间在给定座位上拥有特定等位基因的个体的频率进行比较时，目标数学分析(objectivemathematical analyses)揭示多个位点具有显著差异(表4)。

表4.染色体22q相关分析

细胞遗传学定位	座位	等位基因大小(bp)	EUI群体中的频率^a	相比于^b	P值
					P值		单个假设	共同假设^c
					22q11.2122q12.222q13.122q13.122q13.222q13.32	D22S264D22S277D22S272D22S423D22S1166D22S418D22S1169	单个假设	共同假设^c	188198158162134221134145126	0.4050.2380.3100.2620.6670.3330.5710.6050.643	HIVHCHIVHCHCHIVHCHCHC	0.01420.01280.01520.03710.02430.00870.02660.04750.0313	nsnsnsns0.04660.0317nsnsns

^a在至少一条染色体上拥有所示等位基因的个体的频率。^bHIV，HIV-1感染个体；HC，健康对照。^cns，在P＜0.05水平时不显著。

因为使用闭合检验方法进行多次比较可能会造成错误地拒绝单个零(相同频率)假设，因此对这些个体差异作进一步检查。结果，EUI和健康对照群体间在D22S272座位拥有等位基因134的个体频率有显著差异，并且EUI和HIV感染的个体间在D22S423座位拥有等位基因221的个体频率也有显著差异。

本发明者已发现在未感染的HIV暴露病人中等位基因D22S929，D22S272，D22S284和D22S1166有较高的频率，如下表用

和

表示，同时发现等位基因D22S299的频率较低，如下表用表示。

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Claims

1.确定对感染的易感性的方法，所述方法包括步骤：从受试者获取DNA携带样品，并且检测样品以鉴定位于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272中至少一个座位上的等位基因，其中于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272上存在特定等位基因表示对感染的抗性。

2.确定对感染的抗性的方法，所述方法包括步骤：从受试者获取DNA携带样品，并且检测样品以鉴定位于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272中至少一个座位上的等位基因，其中于微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272上存在特定等位基因表示对感染的抗性。

3.权利要求1或2的方法，其中检测所述样品以确定微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272的同源物、拼接变体或衍生物或其互补核酸的存在。

4.权利要求1到3中任一项的方法，其中所述方法用于确定对病毒感染的易感性。

5.权利要求4的方法，其中所述病毒选自致癌病毒、逆转录病毒、慢病毒和泡沫病毒。

6.权利要求4或5的方法，其中所述病毒是内源性逆转录病毒。

7.权利要求3到6中任一项的方法，其中所述病毒是HIV病毒。

8.前面任意一项权利要求的方法，其中所述样品是非侵入性获得的。

9.权利要求1到8中任一项的方法，其中所述样品是血液、尿、精液、口腔拭抹物、皮肤细胞、剪下的指甲、头发、上阴道的拭抹物或子宫颈涂抹物。

10.前面任意一项权利要求的方法，其中所述样品通过使用核酸扩增技术进行扩增。

11.权利要求10的方法，其中所述核酸扩增技术是PCR或滚环复制。

12.前面任意一项权利要求的方法，其中使用DNA片段长度分析法、DNA杂交技术、DNA序列鉴定、单链长度多态性(SSLP)分析法或参考链构象(RSC)分析法对所述样品进行检测以确定在所述微卫星座位上存在或缺少特定的基因型。

13.权利要求12的方法，其中使用单链长度多态性(SSLP)分析法进行所述检测，并且用于PCR扩增所述微卫星标记的侧翼引物组选自：

D22S277左，TTCTTGTGTGGTAGTCTGGG；(SEQ ID No：1)

D22S277右，TACCNACTCCCCAAACTATG；(SEQ ID No：2)

D22S272左，GAGTTTTGTTTGCCTGGCAC；(SEQ ID No：3)

D22S272右，AATGCACGACCCACCTAAAG；(SEQ ID No：4)

D22S276左，CATTCTGCCAAGCAATTTAT；(SEQ ID No：5)

D22S276右，GCTGCTCTTTAAGTTTCTTGACC；(SEQ ID No：6)

D22S929左，GGAGCTGCATGTACTAGCTGG；(SEQ ID No：7)

D22S929右，GCATTTATGGAGTATCCACAG；(SEQ ID No：8)

D22S1169左，GCACACACATGCACATAATC；(SEQ ID No：9)和

D22S1169右，AACAACTTCCAGCAGACG.(SEQ ID No：10)，

其互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物。

14.用于诊断对感染的易感性的试剂盒，所述试剂盒包含用于确定微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272中至少一个座位上的基因型的试剂。

15.用于诊断对感染的易感性的试剂盒，所述试剂盒包含用于确定微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272中至少一个座位的基因型或其互补核酸、片段、多态物、拼接变异体或同源物的试剂。

16.携带染色体片段的载体，所述染色体片段包含微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272中至少一个座位或其互补核酸、或片段、多态物、拼接变异体或同源物。

17.权利要求16的载体在治疗对感染具有易感性的受试者的基因疗法中的用途。

18.权利要求16的载体在制备用于治疗感染的药物中的用途。

19.权利要求16的载体或权利要求18的药物在处理或预防或治疗感染中的用途。

20.权利要求17的用途，其中所述感染是病毒感染。

21.权利17到20中任一项的用途，其中所述感染是HIV病毒感染。

22.组合物，包含由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体、互补核酸或同源物编码的肽、多肽、蛋白质或所述氨基酸序列的糖基化、磺化、乙酰化或其它翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段。

23.权利要求22的组合物在治疗或预防感染中的用途。

24.权利要求22的组合物在治疗或预防病毒感染中的用途。

25.权利要求22的组合物在HIV的治疗、预防或其它治疗中的用途。

26.权利要求22的组合物，其中组合物是药物组合物。

27.权利要求22的组合物，其中组合物是疫苗。

28.权利要求22的组合物在避孕物中的用途。

29.避孕物，包含由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物编码的蛋白或所述蛋白的糖基化、磺化、乙酰化或其它翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段。

30.权利要求28的避孕物，以隔膜、宫颈帽、避孕套、海绵或其它阴道内用具或屏障设施、包被的IUD用具、口服避孕药丸、避孕植入物或注射物或杀精子的凝胶、阴道栓剂、泡沫、薄膜或乳膏的形式存在。

31.权利要求22的组合物在杀微生物剂中的用途。

32.权利要求31的杀微生物剂的用途，所述杀微生物剂为粘膜可施用的形式。

33.权利要求31的杀微生物剂的用途，其为在抗病毒疾病的粘膜接种中的用途。

34.权利要求33的杀微生物剂的用途，其为在抗HIV病毒的粘膜接种中的用途。

35.由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因或所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物编码的肽、多肽、蛋白或该蛋白的糖基化、磺化、乙酰化或其它翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段用于制备治疗或预防感染的药物的用途。

36.权利要求35的用途，其中所述感染是病毒感染。

37.权利要求35或36的用途，其中所述感染是HIV。

38.包含至少一种根据SEQ ID No：1到10中任一个序列的裸露DNA序列的疫苗。

39.包含DNA序列的疫苗，所述DNA序列包含微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272或所述基因的片段、多态物、拼接变体、互补核酸或同源物。

40.包含裸露的DNA的疫苗，所述DNA编码微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272、或所述基因的片段、多态物、拼接变体、互补核酸或同源物。

41.权利要求38到40中任一项的疫苗，进一步包含佐剂。

42.权利要求27、33或权利要求38到41中任一项的疫苗，其为肠胃外或口腔可施用的。

43.权利要求38到41中任一项的疫苗，其中该疫苗是免疫原性的。

44.编码微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272的DNA、或所述基因的片段、多态物、拼接变体、互补核酸或同源物在芯片或检测板上用于筛选能结合或识别所述DNA的化合物的用途。

45.芯片或检测板，其包含编码微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272的DNA或所述基因的片段、多态物、拼接变体、互补核酸或同源物。

46.权利要求44的芯片或检测板在药物中的用途。

47.芯片或检测板，其包含由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物编码的肽、多肽、蛋白质或所述蛋白质的糖基化、磺化、乙酰化、或其它翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段。

48.权利要求47的芯片或检测板在筛选化合物中的用途，所述化合物能够结合或识别、修饰或模拟由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物编码的所述肽、多肽、蛋白质或所述蛋白质的糖基化、磺化、乙酰化、或其它翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段。

49.权利要求45到48中任一项的芯片或检测板在高通量筛选方法中的用途。

50.由位于与微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272相邻的染色体片段上的基因、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物编码的肽、多肽、蛋白质或所述蛋白质的糖基化、磺化、乙酰化、或其它翻译后衍生物、功能衍生物、同源物或片段在生产提供感染抗性或拥有抗病毒活性的免疫球蛋白A中的用途。

51.微卫星座位D22S929，D22S277，D22S264，D22S423&D22S418或D22S272、所述基因的互补核酸或片段、多态物、拼接变体或同源物在生产提供感染抗性或拥有抗病毒活性的免疫球物白A中的用途。

52.根据权利要求50或51生产的提供针对感染的抗性或拥有抗病毒活性的免疫球蛋白A。

53.权利要求52的免疫球蛋白A在药物组合物中的用途。

54.权利要求52的免疫球蛋白A在制备用于治疗感染的药物中的用途。

55.权利要求54的用途，用于治疗病毒感染。

56.权利要求55的用途，其中所述病毒是HIV病毒。

57.权利要求51或54的用途，用于在接受治疗的病人体内产生粘膜反应以在所述病人体内产生保护性的免疫。

58.包含权利要求52的免疫球蛋白A的粘膜疫苗。

59.权利要求58的疫苗用于产生抗原或病原体特异性免疫的用途。

60.权利要求58的疫苗和权利要求31的杀微生物剂在进行针对HIV病毒的粘膜接种中的用途。

61.编码控制针对HIV的中和抗体产生的座位的核酸。

62.权利要求61的核酸，其中核酸是DNA。

63.权利要求61或62的核酸，其中所述座位与小鼠的D15Mit71同线。

64.权利要求61到63中任一项的核酸，其中所述座位选自人类的D22S272，D22S423，D22S284，D22S299。

65.权利要求61到64中任一项的核酸，其中所述座位是D22S272或D22S423。

66.权利要求61到65中任一项的核酸在药物中的用途。

67.权利要求66的用途，用于制备治疗或预防HIV感染的药物。

68.由权利要求61到65中任一项的核酸编码的肽、多肽或蛋白质。

69.权利要求68的肽、多肽或蛋白质在药物中的用途。

70.权利要求68的肽、多肽或蛋白质在制备用于治疗或预防HIV感染的药物中的用途。