CN1703425A - Igf－1的结晶 - Google Patents
Igf－1的结晶 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1703425A CN1703425A CNA028047079A CN02804707A CN1703425A CN 1703425 A CN1703425 A CN 1703425A CN A028047079 A CNA028047079 A CN A028047079A CN 02804707 A CN02804707 A CN 02804707A CN 1703425 A CN1703425 A CN 1703425A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- igf
- atom
- antagonist
- crystal
- igfbp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 title claims abstract description 79
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 title claims abstract description 73
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 title claims description 53
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 title claims description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 155
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 62
- 102000004375 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 108090000957 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Proteins 0.000 claims abstract description 44
- 102000004374 Insulin-like growth factor binding protein 3 Human genes 0.000 claims abstract description 42
- 108090000965 Insulin-like growth factor binding protein 3 Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 41
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 31
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 13
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 claims description 481
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 claims description 473
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 114
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 104
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 91
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 74
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 65
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 58
- 102000028416 insulin-like growth factor binding Human genes 0.000 claims description 55
- 108091022911 insulin-like growth factor binding Proteins 0.000 claims description 55
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 49
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 46
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 claims description 45
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 41
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 31
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 27
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 25
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 24
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 24
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 23
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 21
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 19
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 19
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 19
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 19
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 17
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 17
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 16
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 14
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- XRYDUYNABAEJDD-UHFFFAOYSA-N [Na].C[AsH](O)=O Chemical compound [Na].C[AsH](O)=O XRYDUYNABAEJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 12
- 102100038796 E3 ubiquitin-protein ligase TRIM13 Human genes 0.000 claims description 11
- 101000664589 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase TRIM13 Proteins 0.000 claims description 11
- 238000002288 cocrystallisation Methods 0.000 claims description 11
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 11
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 11
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 claims description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 10
- 102000038455 IGF Type 1 Receptor Human genes 0.000 claims description 9
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 claims description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 8
- SAMYCKUDTNLASP-UHFFFAOYSA-N hexane-2,2-diol Chemical compound CCCCC(C)(O)O SAMYCKUDTNLASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 8
- 238000004088 simulation Methods 0.000 claims description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 7
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 6
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 5
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 claims description 4
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 4
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 3
- 238000013500 data storage Methods 0.000 claims description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 3
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 3
- 150000001721 carbon Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 2
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000001640 fractional crystallisation Methods 0.000 claims 1
- 230000004217 heart function Effects 0.000 claims 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000556 agonist Substances 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 abstract 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 abstract 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 abstract 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 556
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 58
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 51
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 42
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 38
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 37
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 37
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 32
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 32
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 29
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 25
- 238000011160 research Methods 0.000 description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 20
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 19
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 19
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 17
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 15
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
- 101000701051 Legionella pneumophila Zinc metalloproteinase Proteins 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 14
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 13
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 12
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 9
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 7
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 7
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 7
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 6
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 102000044162 human IGF1 Human genes 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 5
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 102000004372 Insulin-like growth factor binding protein 2 Human genes 0.000 description 4
- 108090000964 Insulin-like growth factor binding protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002447 crystallographic data Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 4
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 4
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- AOFUBOWZWQFQJU-SNOJBQEQSA-N (2r,3s,4s,5r)-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolane-2,3,4-triol;(2s,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O.OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AOFUBOWZWQFQJU-SNOJBQEQSA-N 0.000 description 3
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 3
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 101000840577 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 7 Proteins 0.000 description 3
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 3
- 102100029228 Insulin-like growth factor-binding protein 7 Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 3
- 208000037906 ischaemic injury Diseases 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-M propane-1-sulfonate Chemical compound CCCS([O-])(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 101710125089 Bindin Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101100228210 Caenorhabditis elegans gly-7 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 description 2
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 description 2
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 2
- 102000004371 Insulin-like growth factor binding protein 5 Human genes 0.000 description 2
- 108090000961 Insulin-like growth factor binding protein 5 Proteins 0.000 description 2
- 102000004883 Insulin-like growth factor-binding protein 6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001014 Insulin-like growth factor-binding protein 6 Proteins 0.000 description 2
- 101710190529 Insulin-like peptide Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000000516 activation analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002547 anomalous effect Effects 0.000 description 2
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 2
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 2
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 2
- 108700001680 des-(1-3)- insulin-like growth factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 2
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 2
- 230000005986 heart dysfunction Effects 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 2
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 2
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 2
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- RYVMUASDIZQXAA-UHFFFAOYSA-N pyranoside Natural products O1C2(OCC(C)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)CC5O)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC(C(C1O)O)OC(CO)C1OC(C1OC2C(C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(O)C(CO)O2)O)OC(CO)C(O)C1OC1OCC(O)C(O)C1O RYVMUASDIZQXAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N (2E,4E)-2,4-hexadien-1-ol Chemical compound C\C=C\C=C\CO MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N 0.000 description 1
- DXOFMKNITCKTIS-QXMHVHEDSA-N (z)-2-ethyloctadec-9-enoic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCC(CC)C(O)=O DXOFMKNITCKTIS-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004834 15N NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-UHFFFAOYSA-N 2-(1,2-dihydroxyethyl)-3,4-dihydroxy-2h-furan-5-one Chemical compound OCC(O)C1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022579 ATP dependent 26S protease Proteins 0.000 description 1
- 208000021959 Abnormal metabolism Diseases 0.000 description 1
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- FTYCMTCYBUDHNL-UHFFFAOYSA-N CC(N(C)C)C(=O)O.C(C)(=O)O Chemical compound CC(N(C)C)C(=O)O.C(C)(=O)O FTYCMTCYBUDHNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- 241001559589 Cullen Species 0.000 description 1
- 102100025698 Cytosolic carboxypeptidase 4 Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 241001269238 Data Species 0.000 description 1
- 208000027219 Deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 201000005948 Donohue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010017711 Gangrene Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018473 Glycosuria Diseases 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 101000932590 Homo sapiens Cytosolic carboxypeptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 1
- 101001081567 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100025947 Insulin-like growth factor II Human genes 0.000 description 1
- 102000004369 Insulin-like growth factor-binding protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000969 Insulin-like growth factor-binding protein 4 Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000006302 Laron syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 244000147568 Laurus nobilis Species 0.000 description 1
- 235000017858 Laurus nobilis Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 1
- 206010027336 Menstruation delayed Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 101001033003 Mus musculus Granzyme F Proteins 0.000 description 1
- 206010068871 Myotonic dystrophy Diseases 0.000 description 1
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPNNXHVGOKRBEF-UHFFFAOYSA-N N-hydroxy-7-(2-naphthalenylthio)heptanamide Chemical compound C1=CC=CC2=CC(SCCCCCCC(=O)NO)=CC=C21 KPNNXHVGOKRBEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012565 NMR experiment Methods 0.000 description 1
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000229231 Phage E Species 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 101710150114 Protein rep Proteins 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 101710088839 Replication initiation protein Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 235000005212 Terminalia tomentosa Nutrition 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 208000026928 Turner syndrome Diseases 0.000 description 1
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 201000011032 Werner Syndrome Diseases 0.000 description 1
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-mannose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000002298 blastodisc Anatomy 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 150000003842 bromide salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- ITMIAZBRRZANGB-UHFFFAOYSA-N but-3-ene-1,2-diol Chemical compound OCC(O)C=C ITMIAZBRRZANGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229960000629 domiphen Drugs 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001076 estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000000887 face Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 206010061989 glomerulosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000006377 glucose transport Effects 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 1
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000047065 human IGFBP1 Human genes 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229940097275 indigo Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 201000006334 interstitial nephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- HWSZZLVAJGOAAY-UHFFFAOYSA-L lead(II) chloride Chemical compound Cl[Pb]Cl HWSZZLVAJGOAAY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000020997 lean meat Nutrition 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 208000018773 low birth weight Diseases 0.000 description 1
- 231100000533 low birth weight Toxicity 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006241 metabolic reaction Methods 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N methyl undecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012821 model calculation Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 238000012900 molecular simulation Methods 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 230000021332 multicellular organism growth Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N nitrogen oxide Inorganic materials O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 235000003715 nutritional status Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002902 organometallic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229940119528 pork insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000009596 postnatal growth Effects 0.000 description 1
- 238000005381 potential energy Methods 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001915 proofreading effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000064 prostate epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 230000003161 proteinsynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 208000032253 retinal ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 210000003786 sclera Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000003019 stabilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000005987 sulfurization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002483 superagonistic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 230000005469 synchrotron radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 230000004862 vasculogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 238000012982 x-ray structure analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/65—Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2299/00—Coordinates from 3D structures of peptides, e.g. proteins or enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Virology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cardiology (AREA)
Abstract
通过一种能得到IGF－1结晶物的方法而获得IGF－1晶体。结晶IGF－1所包括的步骤是把含有IGF－1的水溶液与含有沉淀剂的储蓄液混合形成混合液；并结晶混合液，还任选地再结晶和分离IGF－1晶体。此外，提供了一种鉴定IGF－1的间接拮抗剂的方法，该方法使用一种去污剂作为IGFBP－1和IGFBP－3与IGF－1结合抑制水平的标准，和/或使用与候选间接拮抗剂结合的IGF－1结合结合口袋的类似物用于以结构为基础的药物设计。
Description
发明背景
发明领域
本发明涉及人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的结晶形式，更具体的涉及人类IGF-1晶体，一种关于其结晶的方法和用x射线衍射所得到的结构。此外，本发明还涉及基于生理和生化数据的识别新IGF-1拮抗剂分子的方法，该方法表明与已知对IGF-1结合蛋白(IGFBP)相互作用重要的残基接触的单去污剂分子与IGF-1特异性结合，并阻止IGFBP-1和IGFBP-3的结合。
相关公开的描述
有大量文献报道了IGFs(IGF-1，IGF-2和IGF变体)的活性和反应。人类IGF-1是一种有70个氨基酸的血清蛋白且分子量为7649D，等电点pI是8.4(Rinderknecht和Humbel，
Proc.Natl.Acad.Sci.USA，73：2365(1976)；Rinderknecht和Humbel，
J.Biol.Chem.，
253：2769(1978))并属于具有胰岛素样和促有丝分裂生物活性的，调节生长激素(GH)作用的促生长因子家族。(Van Wyk等，
Recent Prog.Horm.Res.，
30：259(1974)；Binoux，
Ann.Endocrinol.，
41：157(1980)；Clemmons和Van Wyk，
Handbook Exp.Pharmacol.，
57：161(1981)；Baxter，Adv.Clin.Chem.，
25：49(1986)；美国专利号4,988,675；WO 91/03253；WO 93/23071)。IGFs与胰岛素有高度序列相似性，大约有49％的相似性。然而，与作为含有被称作c-肽的33个氨基酸片段的前体蛋白合成的胰岛素不同(它被切除后产生一个由剩下的A链和B链共价连接形成二聚体)，IGFs是单链多肽(见图1)。
在正在发育的胚胎中，IGF-1的缺失将导致严重的生长推迟并延续到出后以后(Baker等，
Cell，
75：73-82(1993)；Powell-Braxton等，
Genes&Development，
7：2609-2617(1993)；Liu等，
Cell，
75：59-72(1993)；Liu等，
Molecular Endocrinol.，12：1452-1462(1998))。然而大部分的血清IGF-1(超过75％)是由肝脏应答生长激素而产生的，现已证明由肝脏产生的IGF-1对于老鼠出生后的生长不是必需的(Sjogren等，
Proc.Natl.Acad.Sci.USA，
96：7088-7092(1999))。然而，局部产生的以旁分泌和自分泌的方式发挥作用的非肚IGF-1似乎承担了出生后大部分的IGF-1促进生长的作用(Schlechter等，
Proc.Natl.Acad.Sci.USA，
83：7932-7934(1986)；Isaksson等，
Science，
216：1237-1239(1982))。与它的生长促进作用相一致，IGF-1是一个很强的有丝分裂原，它调节各种细胞功能如细胞周期进程，凋亡和细胞分化(LeRoith，
Endocrinology，
141：1287-1288(2000))。
IGFs涉及各种不同的细胞功能和疾病进程，包括细胞周期进程，增殖，细胞分化和在胰岛素抗性糖尿病中有类似胰岛素的作用。因此，建议IGF在各种疾病和损伤中IGF用作一种治疗工具(关于综述，见Lowe，Scientific American(3月/4月1996)，p.62)。由于有这些活性范围，已经在哺乳动物中检测了IGF-1广泛的完全不同的用途，肾紊乱治疗，糖尿病治疗，全身异常代谢状态的恢复如与艾滋病有关的身体消耗，心脏病治疗如心肌缺血，以及神经紊乱的治疗(Guler等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，
85：4889-4893(1998)；Schalch等，
J.Clin.Metab.，
77：1563-1568(1993)；Froesch等，
Horm.Res.，42：66-71(1994)；Vlachopapadopoulou等，
J.Clin.Endo.Metab.，12：3715-3723(1995)；Saad等，
Diabetologia，37：Abstract 40(1994)；Schoenle等，
Diahetologia，34：675-679(1991)；Morrow等，Diabetes，42(Suppl.)：
269(1993)(摘要)；Kuzuya等，
Diabetes，42：696-705(1993)；Schalch等，“重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-I)在II型糖尿病中的短期代谢作用“Short-term metabolic effects of recombinant human insulin-like growthfactor I(rhIGF-I)in type II diabetes mellitus”，in：Spencer EM编，胰岛素样生长因子的现代概念(New York：Elsevier：1991)pp.705-715；Zenobi等，
J.Clin. Invest.，
90：2234-2241(1993)；Elahi等，“人体中对人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的血液动力学的和代谢反应”in：Modern Concepts of Insulin-Like GrowthFactors，Spencer，EM编(Elsevier：New York，1991)，pp.219-224；Quinn等，
New Engl.J.Med.，323：1425-1426(1990)；Schalch等，“Short-term metabolic effectsof recombinanat human insulin-like growth factorl(rhIGF-I)in type IIdiabetes mellitus”in：Spencer EM，所编的Modern Concepts of Insulin-likegrowth factors(New York：Elsevier：1991)pp.705-714；Schoenle等，
Diabetologia， 34：675-679(1991)；Usala等，
N.Eng.J.Med.，327：853-857(1992)；Lieberman等，
J.Clin.Endo.Metab.，
75：30-36(1992)；Zenobi等，
J.Clin.Invest.，90：2234-2241(1992)；Zenobi等，
J.Clin.Invest.，
89：1908-1913(1992)；Kerr等，
J.Clin. Invest.，
91：141-147(1993)；Jabri等，
Diabetes，43：369-374(1994)；Duerr等，J.Clin.Invest.，
95：619-627(1995)；Bondy，Ann Intern.Med.，120：593-601(1994)；Hammerman和Miller，
Am.J.Physiol.，265：F1-F14(1993)；Hammerman和Miller，J.Am.Soc.Nephrol.，
5：1-11(1994)；和Barinaga等，
Science，264：772-774(1994))。
也有大量的专利文献公开了IGF-1或能增加IGF-1活性浓度的化合物的各种不同用途以治疗哺乳动物，具体是人类患者，例如，美国专利号5,714,460；5,273,961；5,466,670；5,126,324；5,187,151；5,202,119；5,374,620；5,106,832；4,988,675；5,106,832；5,068,224；5,093,317；5,569,648和4,876,242；WO 92/11865；WO 96/01124；WO 91/03253；WO 93/25219；WO 93/08826和WO 94/16722。
IGF系统还包括IGF-1，IGF-2和胰岛素的膜结合受体。I型IGF受体(IGF-1R)与胰岛素受体在结构上紧密相关且共享一些信号通路(Jones和Clemmons，Endocr.Rev.，16：3-34(1995))。IGF-2受体是一种似乎不能转运细胞内信号的清除受体(Jones和Clemmons，同上)。因为IGF-1和IGF-2与IGF-1R以比胰岛素受体更高的亲和性结合，因此很有可能IGF-1和IGF-2的大部分效用是通过IGF-1R介导而实现的(Humbel，
Eur.J Biochem.190：445-462(1990)；Ballad等，“是否IGF-1曾经通过胰岛素受体起作用”，in Baxter等(编)，胰岛素样生长因子和它们的调节蛋白，
The Insul in-Like Growth Factors and Their Regulatory Proteins，(Amsterdam：Elsevier，1994)，pp.131-138)。
IGF-1R是一种由二硫键连接α和β亚基的α2β2的异源四聚体。αβ二聚体本身是由二硫键连接在细胞表面已形成共价异源四聚体。在胰岛素/胰岛素受体复合物中，IGF-1与IGF-1R以化学计量比1∶2结合(De Meyts，
Diabetologia，
37：S135-S148(1994))，并有一个高亲和性位点(Kd大约是0.4nM)和一个低亲和性位点(Kd大约是0.6nM)(Tollefsen和Thompson，
J.Biol.Chem.，
263：16267-16273(1998))。测定了IGF-1R的最初三个结构域的x射线晶体结构(Garrett等，Nature，
394，395-399(1998))。它包括三个不同的结构域(L1，半胱氨酸富集区，L2)。影响IGF-1结合的突变将改变受体表面的结合凹槽。
突变影响IGF-1对受体凹面的结合图谱。
IGF-1R在正常细胞生长和发育中是个关键因子(Isaksson等，
Endocrine Reviews，
8：426-438(1987)；Daughaday和Rotwein，
Endocrine Rev.，
10：68-91(1989))。然而，有越来越多的证据表明IGF-1R的信号也在癌细胞生长、细胞转化和肿瘤形成中起关键作用(Baserga，
Cancer Res.，
55：249-252(1995))。关键的例子包括通过用IGF-1R的反义RNA治疗的鼠癌细胞的转移的损失表型(Long等，Cancer Res.，55：1006-1009(1995))和体外人类黑素瘤细胞移动性受到抑制(Stracke等，
J Biol.Chem.，264：21554-21559(1989))以及通过添加IGF-1R抗体使人类乳房癌细胞的生长受到抑制(Rohlik等，
Biochem.Biochem.Biophys.Res. Commun.，149：276-281(1987))。
基于IGF-1能在体外促进乳房癌细胞增殖的观察得出IGFs是潜在的乳房癌细胞有丝分裂素(Cullen等，
Cancer Res.，50：48-53(1990))。乳房癌表达IGF-2和IGF-1R，并能给所有必需的效应物提供一种自分泌环基础的增殖的范例(Quinn等，
J Biol.Chem.，271：11477-11483(1996)；Steller等，
Cancer Res.，56：1761-1765(1996))。因为乳房癌是一种常见的恶性肿瘤影响了大约八分之一的女性并且是北美女性癌症患者中首要的致死因素(LeRoith等，
Ann.Int.Med.，122：54-59(1995))，新的合理治疗手段需要介入治疗。IGF-1能抑制凋亡，并因此使缺乏IGF-1Rs或含有IGF-1R信号通路的细胞可能引起肿瘤细胞选择性的通过凋亡而死去(Long等，
Cancer Res.，55：1006-1009(1995))。而且，最近有证据表明在其他疾病的情况下，如糖尿病中的IGF信号的改变可能是使视网膜疾病(Smith等，Science，
276：1706-1709(1997))和肾病(Horney等，
Am.J Phvsiol.274：F1045-F1053(1998))并发症加剧的主要原因。
体内的IGF-1通常是可以在混有一个至少有六种血清蛋白，认为是能调节IGFs进入到IGF-1R中的IGFBPs家族的复合物中发现的(Jones和Clemmons，同上；Bach和Rechler，
Diabetes Reviews，3：38-61(1995))。它们还在循环中和组织IGF-1R水平上调节IGF-1和IGF-2的浓度(Clemmons等，
Anal.NY Acad.Sci.USA，692：10-21(1993))。IGFBPs以变化的亲和力和特异性与IGF-1和IGF-2结合(Jones和Clemmons，同上；Bach和Rechler，同上)。例如，IGFBP-3用相似的亲和性与IGF-1和IGF-2结合，然而IGFBP-2和IGFBP-6则用比它们结合IGF-1更高的亲和力与IGF-2结合(Bach和Rechler，同上；Oh等，
Endocrinology，132，1337-1344(1993))。主要的载体蛋白是IGFBP-3。现在还不知道在这些IGF-I及其IGFBP的和物中结合的化学剂量，这是因为由于糖基化而导致复合物的不均一的大小。
IGF-1是在人体液中自然产生的，例如，在血和人脑脊液中。尽管IGF-1可以在许多组织中产生，据信，最具流动性的IGF-1是在肝脏中合成的。据信，IGFBPs用认为作为糖代谢过程中主要的结合蛋白的IGFBP-I调节IGF-1的生物学活性(Jones和Clemmons，同上)，(Baxter，“IGF结合蛋白的生理角色”，“Physiologicalroles of IGF binding proteins”，in Spencer所编的，胰岛素样生长因子的现代概念(Modern Concepts of Insulin-like Growth Factors(Elsevier，New York，1991))，pp.371-380)。由肝脏产生的IGFBP-1受到营养状况的调节，而胰岛素直接抑制它的产量(Suikkari等，
J.Clin.Endocrinol.Metab.，66：266-272(1998))。
体内IGFBP-1的功能则有很少的了解。给老鼠服用已纯化的人类IGFBP-1证明会导致急性、但很小的血糖升高(Lewitt等，
Endocrinology，
129：2254-2256(1991))。对IGFBP-1的调节多少有更好的理解。有人提出当血糖升高并且胰岛素开始分泌时，则IGFBP-1受到抑制，如果允许“游离”IGF-1水平缓慢升高，则有助于胰岛素作用于葡萄糖运输。这个提议认为IGFBP-1的作用是直接调节血糖。
在大部分情况下，添加外源IGFBP会降低IGF-1的作用。例如，雌二醇对MCF-7人乳房癌细胞的生长刺激效果是与IGFBP-3mRNA以及蛋白的积累的减少有关，然而雌激素的拮抗剂ICI 182780则导致生长抑制和IGFBP-3mRNA以及蛋白水平的上升(Huynh等，
J Biol.Chem.，
271：1016-1021(1996)；Oh等，
Prog.Growth FactorRes.， 6：503-512(1995))。有报道用视黄酸抑制体外乳房癌细胞的增殖可能包括改变肿瘤细胞IGFBP的分泌或减少体内IGF-1的循环水平(LeRoith等，
Ann.Int.Med.，122：54-59(1995)；Oh等，(1995)，同上)。与此发现相反的是，用抗雌激素三苯氧胺处理MCF-7细胞会减少IGF-1R的信号通路但这种行为又与IGFBP的产量减少无关(Lee等，
J Endocrinol.，152：39(1997))。其它支持IGFBP的通常的抗细胞增殖作用是人们惊奇的发现IGFBP-3是一种肿瘤抑制因子p53的靶基因(Buckbinder等，
Nature，377：646-649(1995))。这表明p53的抑制活性部分地通过IGFBP-3的生产和随后IGF作用的阻抑介导。(Buckbinder等，同上)。这些结果表明IGFBPs通过调节由IGF-1/IGF-2调控的旁分泌/自分泌过程而阻抑细胞增殖。这些观察的必然结果是发现前列腺特定抗原(PSA)是一个IGFBP-3蛋白酶，它一旦激活，则会增加肿瘤细胞对由于蛋白酶解使IGFBP-3失活的IGF-1/IGF-2反应的敏感程度(Cohen等，
J.Endocr.，
142：407-415(1994))。IGFBP与IGF-1/IGF-2复合并干扰IGF-1/IGF-2进入IGF-1Rs(Clemmons等，
Anal.NY Acad.Sci.USA，692：10-21(1993))。IGFBP-1，-2和3在体外依次加入细胞中以抑制细胞生长。(Lee等，
J Endocrinol.，152：39(1997)；Feyen等，
JBiol.Chem.，266：19469-19474(1991))。进而，都已证明了IGFBP-1(McGuire等，
J Natl.Cancer Inst.，84：1335-1341(1992)；Figueroa等，
J Cell Physiol.，157：229-236(1993))，IGFBP-3(Oh等(1995)，同上；Pratt和Pollak，
Biophys.Res.Commun.，198：292-297(1994))和IGFBP-2有抑制IGF-1或体外在纳摩尔浓度水平上由雌激素诱导的乳房癌细胞增殖。这些发现支持一种意见即IGFBPs是潜在的IGF反应的拮抗剂。还有证据表明独立于与IGF的相互作用，IGFBP-3通过其自身的细胞体面受体对细胞的直接作用(Oh等，
J Biol.Chem.，
268：14964-14971(1993)；Valentinis等，
Mol.Endocrinol.，9：361-367(1995))。综合考虑，这些发现强调了IGF和IGF-1R用于治疗用途的靶蛋白的重要性。
IGFs对于正常的和已转化的前列腺上皮细胞有促有丝分裂和抗凋亡的作用(Hsing等，
Cancer Research，56：5146(1996)；Culig等，
Cancer Research， 54：5474(1994)；Cohen等，
Hormone and Metabolic Research，26：81(1994)；Iwamura等，
Prostate，22：243(1993)；Cohen等，
J.Clin.Endocrin.&Metabol.，73：401(1991)；Rajah等，
J.Biol.Chem.，272：12181(1997))。大部分循环中的IGF-1起源于肝脏，但是IGF在组织中的生物活性不仅涉及循环中的IGF-1和IGFBPs的水平，还涉及IGFs，IGFBPs和IGFBP蛋白酶的局部产量(Jones和Clemmons，
Endocrine Reviews，16：3(1995))。循环中的IGF-1和IGFBP-3(主要的循环中的IGFBPs(Jones和Clemmons，同上))的水平人与人之间的差异是巨大的(Juul等，
J.Clin. Endocrinol&Metabol.，78：744(1994)；Juul等，
J.Clin.Endocrinol.&Metabol.，80：2534(1995))，并且血清中IGF-1水平的不均一性似乎反映了组织中IGF生物活性的不均一性。与IGF-轴组分有关的标记可作为前列腺癌的危险指标，正如PSA有相似的用途(WO 99/38011)。
与大部分其它生长因子不同，IGFs在循环中是有很高浓度的，但是仅有很小一部分的IGFs不与蛋白结合。例如，通常知道在人类和老鼠中，血液中不足1％的IGF是游离的或未结合的形式存在的(Juul等
，Clin.Endocrinol.，44：515-523(1996)；Hizuka等，
生长调节，1：51-55(1991)；Hasegawa等，
J.Clin. Endocrinol.Metab.，80：3284-3286(1995))。血液中占压倒多数的IGF作为非共价结合的三元复合物的部分循环，该三元复合物由IGF-1或IGF-2，IGFBP-3和称为酸-不稳定亚基(ALS)的大蛋白组成。IGF，IGFBP-3和ALS的三元复合物的分子量大约是150,000d，并暗示此复合物在循环中的功能可能是作为IGF-1和IGF-2的一个蓄水池和缓冲液，以避免在游离的IGF-1或IGF-2中发生快速变化。
已经有很多工作鉴定IGF-1和IGF-2中与IGFBPs结合的区域(Bayne等，
J.Biol.Chem.，265：15648-15652(1990)；Dubaquie和Lowman，
Biochemistry，38：6386-6396(1999)；和美国专利号5,077,276；5,164,370；5,470,828)。已经发现IGF-1和IGF-2的N端区域对于结合IGFBPs是至关重要的(美国专利号5,077,276；5,164,370和5,470,828)。因此，被称作des(1-3)IGF-1，自然的IGF-1的能难与IGFBPs结合。
相似的大量的研究致力于鉴定结合IGF-1R的IGF-1和IGF-2区域(Bayne等，同上；Oh等，Endocrinology(1993)，同上)。还发现IGF-1中的在24，31和60位的酪氨酸残基对于IGF-1结合IGF-1R是至关重要的(Bayne等，同上)。其中一个或多个这些气酪氨酸残基被置换的突变体IGF-1分子显示与IGF-1R的结合逐渐减少。Bayne等，同上，还研究了IGF-1的这些突变体是否还能与IGF-1R和IGFBPs结合。他们发现用于结合到IGFBP的IGF-1和IGF-2上的残基与那些用于结合到IGF-1R的残基很不相同。因此有可能产生与IGFBPs的结合减少的IGF变体，但是，因为他们能很好地与IGF-1R结合，通过体外的活性分析表明他们仍维持活性。
还报道了与IGFBPs结合但是不与IGF受体结合的IGF变体并因此在体外的活性分析中表明其活性下降(Bar等，
Endocrinology，127：3243-3245(1990))。在这个被称作(1-27，gly4，38-70)-hIGF-1的变体中，人IGF-1的C区中残基28-37由四-残基甘氨酸桥所替代。
公开了其他的已截短的IGF变体。例如，在专利文献WO 96/33216中描述了含有真正的IGF-1的残基1-69的已截短的IGF变体。EP 742,228公开了双链IGF-1超拮抗剂，它们是天然发生的含有缩短C区的单链IGF-1的衍生物。IGF-1类似物的通用式：BCn，A，此处B是IGF-1的B区或是其功能类似物，C是IGF-1的c-区或是其功能上的类似物，n是在C区中的氨基酸数目，大约是6到12，A是IGF-1的A区或是其功能类似物。
此外，Cascieri等，
Biochemistry，27：3229-3233(1998)中公开了IGF-1的四个突变体，其中的三个具有对IGF-1R降低的的亲和力。这些突变体是：(Phe23，Phe24，Tyr25)IGF-1(它和人IGF-1对1和2型IGF和胰岛素受体的亲和力是相等的)，(Leu24)IGF-1和(Ser24)IGF-1(它们与人胎盘IGF-1R，胎盘胰岛素受体和大鼠以及小鼠细胞的IGF-1R的亲和性比IGF-1低)和desoctapeptide(Leu24)IGF-1(其中在24位上芳香性的损失与hIGF-1的羧基未端D-区缺失结合，对于IGF-1R它具有比(Leu24)IGF-1低的亲和性，但对于胰岛素类受体它具有较高的亲和性。这四种突变体对人类血清结合蛋白有正常的亲和性。
Bayne等，
J.Biol.Chem.，263：6233-6239(1988)公开了种人IGF-1的4种结构同等物：一种B-链突变体，其中IGF-1的最初16个氨基酸为胰岛素B-链的最初17个氨基酸所取代，(Gln3，Ala4)IGF-1，(Tyr15、Len16)IGF-1和(Gln3，Ala4，Tyr15Len16)IGF-1。这些研究鉴别了负责保持与血清结合蛋白和I型IGF受体结合的高亲和性的一些IGF-1的区域。
在另一次研究中，Bayne等，
J.Biol.Chem.，264：11004-11008(1988)公开了IGF-1的三种结构同等物：(1-62)IGF-1，它缺少IGF-1的羧基末端8个氨基酸的D-区；(1-27，Gly4，38-70)IGF-1，其中IGF-1的C-区的残基28-37由一个四残基的甘氨酸桥所替代；(1-27，Gly4，38-62)IGF-1，具有一个C区的甘氨酸取代和一个D-区缺失。Peterkofsky等，
Endocrinology，128：1769-1779(1991)公开了使用Bayne等，同上(vol.264)的Gly4突变体的数据。
Cascieri等，
J.Biol.Chem.，264：2199-2202(1989)公开了三个IGF-1类似物，其中IGF-1的A区中特异性残基由胰岛素A链的相应残基替代。该(Ile41，Glu45，Gln46，Thr49，Ser50，Ile51，Ser53，Tyr55，Gln56)IGF-1，A链突变体，adw第41位残基由苏氨酸变为异亮氨酸并且A区的第42-56位的残基也被替代；(Thr49，Ser50，Ile51)IGF-1；和(Tyr55，Gln56)IGF-1.
Clemmons等，
J.Biol.Chem.，265：12210-12216(1990)公开了运用或是与IGF-1R的亲和力降低或是与结合蛋白的亲和力降低的IGF-1类似物来研究IGFBP-1的配体特异性和IGFBP-1在调节IGF-1生物活性中的作用。
除了天然IGFBP，WO94/04569公开了特异性结合分子，该分子它能结合IGF-1并能增强IGF-1的生物活性。
与IGFBP-1结合的多肽，阻抑IGF-1与此结合蛋白结合，并因此从最近描述的IGF-1和IGFBP-1的混合物中释放出“游离的IGF”活性，(Lowman等，Biochmeistry，37：8870-8878(1998)；WO 98/454271998年10月15日出版；Lowman等，国际儿科肾病联合会，第五次关于患有慢性肾衰竭的儿童的发育和生长的讨论会(纽约，1999年3月13日))。还有描述的是天然分子，des(1-3)IGF-1，它显示选择性地降低一些对IGF结合蛋白的亲和性，但仍然维持对IGF受体的亲和性(美国专利号5,077,276；5,164,370；5,470,828)。
然而，由于缺乏特异性拮抗剂，使得IGF与IGFBP的相互作用在筛选、预防或治疗疾病中的利用受到限制。迄今，只知只有一篇文献描述了IGF-1/IGF-2拮抗剂作为癌症治疗中潜在的制疗添加剂的应用，(Pietrzkowski等，
Cancer Res.，52：6447-6451(1992))。在那篇报道中，对应于IGF-1的D区的肽是作为IGF-1/2的拮4抗剂而合成的。此肽展示出可疑的抑制IGF-1的活性。所观察到的抑制作用的基础并不清楚，因为在与IGF-1R结合的过程中D区并不扮演一个非常重要的角色，而宁可说是，在IGF-1结合胰岛素受体的过程中不起重要作用(Cooke等，
Biochem.，30：5484-5491(1991)；Bayne等，同上(Vol.264)；Yee等，
Cell Growth and Different.，5：73-77(1994))。
WO 00/23469公开了解释IGF-IGFBP结合的部分IGFBP和IGF肽，如一段分离的IGFBP的IGF结合区域或其变体它们结合IGF的亲和性至少与全长的IGFBP相同。该专利申请还公开了减少IGF与其受体结合和/或与IGFBP的结合区域结合的IGF拮抗剂。
此外，EP 639981公开了含有作为IGF-1受体拮抗剂的短肽的药物组合物。在药物组合物中使用的这些肽少于25个氨基酸组成，并至少含有IGF-1的c或D区中的一部分，并能抑制由IGF-1诱导的IGF-1受体自磷酸化。
包括IGF分子的多肽具有由一级氨基酸序列和多肽的周围环境决定的三维结构。此三维结构建立了多肽的活性、稳定性、结合亲和力、结合特异性和其他生化特征。因此，一个蛋白质的三维结构的知识能在设计以可溶解或膜结合的形式来模拟、抑制或改进其生物活性的试剂中提供很多指导。
多肽的三维结构可许多方法测定。许多最精确的方法使用X射线晶体分析法(Van Holde，Physical Biochemistry(Prentice Hall：N.J.，1971)，pp.221-239)。这项技术依赖于晶格对于X射线或其他射线形式衍射的能力。典型地，适合确定大分子三维结构的衍射实验需要高质量的晶体。不幸的是，对于IGF-1以及许多其它感兴趣的蛋白质还没有得到这种晶体。例如，已描述了用于M-CSF(EP668,914B1)，CD40配体(WO 97/00895)和BC2Fab片段(WO 99/01476)的晶体。
胰岛素的结晶是一项研究透彻的领域，无论是致力于结构分析(Adams等，
Nature，224：491(196))还是在药物应用方面。用于治疗的胰岛素晶体悬浮液的例子包括在中性pH下0.8-25％的锌存在的条件下(基于胰岛素的重量)稳定并显示延迟作用的菱形锌-胰岛素晶体悬浮液，以及以小杆状的形式用于延迟作用产物的同型胰岛素鱼精蛋白晶体。还知道胰岛素的一些其它晶体修饰，但是迄今为止，这些只用于X-射线结构分析。因此，在酸性pH条件下已得到没有锌的正交晶体和单斜晶体(Einstein和Low，
Acta Crystallogr.，15：32-34(1962))。分类于立体空间类群的更小的正交十二面体也在没有锌的情况下已在等电点处获得。最后，胰岛素的单斜体晶体在锌和酚及酚的衍生物存在的情况下，在高于等电点处得到晶体的。这些晶体在几天之内便长成很大的体积(可达3mm)并有锋利的边。有趣的是，这些晶体只能在玻璃表面中发现而不能在溶液的自由表面中发现。晶体悬浮液和其他胰岛素制剂的结晶形式以及胰岛素的类似物，描述于这些有代表性的专利中，如美国专利号4,959,351；5,840,680；5,834,422；6,127,334；5,952,297；5,650,486；5,898,028；5,898,067；5,948,751；5,747,642；5,597,893；5,547,930；5,534,488；5,504,188；5,461,031和5,028,587。
制备晶体蛋白和多肽的各种不同方法是本领域已知的(McPherson等，“蛋白晶体的制备与分析”“McPherson(Robert E.Krieger Publishing Company，Malabar，FL，1989)；Weber，蛋白质化学进展，
41：1-36(1991)；美国专利号4,672,108和4,833,233)。尽管有多种方法能结晶多肽，但是没有单一的一组条件能提供成功的合理预期，尤其是当晶体必须适合X衍射研究时。为了提供关于结构的精确的信息，需要付出很大的努力以获得具有足够大小和分辨率的晶体。例如，一旦获得足够纯的蛋白，它必须结晶成一定大小和透明度的晶体，这样有用于X衍射分析和随后的结构分解。进而，尽管可能知道目标蛋白的氨基酸序列，但是此序列信息并不能精确预测蛋白的结晶结构。而且该序列信息也不能有助于更好地理解配体如IGFBP和它的靶蛋白之间的结构、构象和化学作用。因此，在药物设计和发明领域中尽管晶体结构能提供大量有价值的信息，但是那些在本领域中技术精通的专业人士不能容易地得到一些生物上相关的化合物如IGF-1的晶体。IGF-1的高质量衍射晶体将有助于确定其三维结构。
特异IGF-1拮抗剂的产生至少部分地受到限制，因为研究IGF和IGFBP的结构是困难的。由于不能得到适用于衍射研究的IGF-1晶体，例如，基于猪胰岛素晶体结构的对IGF-1结构的预测是最重要的获得IGF-1结构图的方法(Blundell等，
Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75：180-184(1978))。还可见Blundell等，
Fed.Proc.， 42：2592-2597(1983)，它公开了IGFs的三级结构，受体结合和抗原性。基于IGF-1的化学修饰和突变的研究，鉴别出IGF-1和胰岛素之间有许多共有残基，是作为部分胰岛素受体的连接位点，具体是，在23-25位的芳香性残基。
通过使用NMR和抑制分子动态等方法，最近报道了IGF-1的溶液结构(Cooke等，同上)。证明所得到的最小化的结构更适合对修饰的IGF-1的实验发现，以及从胰岛素的结构活性研究所得出的推断。而且，De Wolf等，
Protein Sci.，5：2193-2202(1996)公开了迷你IGF-1的溶液结构。Sato等，
Int.J.Pept.Protein Res.，41：433-440(1993)公开了由1H-NMR和远距离几何学所确定的IGF-1三维结构。Laajoki等，
J.Biol.Chem.，275：10009-10015(2000)公开了长-[Arg(3)]IGF-1的溶液结构和主链动力学。还可见Laajoki等，
FEBS Lett.，420：97-102(1997))。适用于IGF-1的少数NMR模型没有很好的确定下来，因为在螺旋片段的主链原子之间有大RMSDs.最好的NMR模型是显示了三个α螺旋的IGF-2模型。见Torres等，
J.Mol.Biol.，248：385-401(1995)，它公开了人IGF-2的溶液结构和它与受体的关系和结合蛋白的相互作用。在所有的结构中，C-和D-区是非常难确定的。
除了能提供结构信息外，多肽晶体还具备其他优势。例如，结晶过程本身进一步纯化多肽并满足均一化的一种经典标准。事实上，结晶化经常能提供独一无二的纯化质量，能去除用其它纯化方法如HPLC，透析，传统的柱层析等所不能去除的杂质。而且，多肽晶体通常在环境温度下是稳定的且没有蛋白酶污染和其它与溶液储存有关的降解。多肽晶体还可用于药物制备。最后，通常结晶化技术很大程度上没有诸如与其它稳定方法(如冻干法)有关的变性等问题。因此，就很需要以结晶化形式制备IGF-1组合物并确定它们的三维结构。本发明满足了这个和其他需要。一旦结晶完成，晶体学数据提供有用的结构信息，这有助于设计出作为拮抗剂或拮抗物的肽。此外，晶体结构提供对于测定受体结合区域，这可以用作为拮抗剂或拮抗物的小的非肽分子模拟。而且，关于IGFBP与IGF-1结合的去污剂的抑制作用的发现可用于鉴定新的IGF-1的拮抗剂。
发明概述
因此，本发明正如权利要求所述。IGF-1已经结晶并通过使用IGF-1一个单独的溴离子和7个硫原子中的6个的反常规散射，结晶IGF-1在1.8埃分辨率上使用多波长异常衍射(MAD)以确定其结构。在晶体结构中有序排列的IGF-1C区形成II型β转角并介导晶体堆积反应越过晶体二分体。通过超速离心分析确定IGF-1的溶液特征，结果表明IGF-1在中性pH的条件下主要以单体形式存在的，只有很少的一部分以毫摩尔浓度趋向于二聚化。去垢剂中的一种分子，N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺(deoxy big CHAPS)，调节对称相关的分子之间的晶体堆积接触。溶液试验确认IGF-1：N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺复合物在溶液中形成并且以可测定的量结合的去垢剂阻抑IGFBP的结合。
因此，在一个方面，本发明提供了一种通过衍射X-射线辐射的IGF-1形成的晶体，产生一个代表IGF-1三维结构的衍射模式。优选地，该晶体大致具有下列细胞常数a＝31.831，b＝71.055，c＝65.995和一个C22的空间群。还有优选的是，IGF-1包括一个A-，B-，C-区并在晶体中形成一个二聚体，更为优选的是，该晶体在二聚体界面处含有一个受体结合位点。
本发明还提供了一个包括以上晶体的组合物。优选的，当分解时，在该组合物中IGF-1是具有生物活性的。本发明还提供一种治疗患有拮抗剂紊乱的哺乳动物，较佳的是人患者特别是人主动肌紊乱的方法，所述方法包括给所述哺乳动物服用有效量的上述已分解的组合物。
本发明还提供一种IGF-1结晶化方法，所包括的步骤是：
(a)混合含有IGF-1的水溶液和含有一种沉淀剂的储蓄液以形成混合体积；
(b)结晶混合体积。
本发明还提供由上述方法产生的结晶的IGF-1。
此外，本发明提供一种测定IGF-1三维结构的方法，包括：
(a)结晶IGF-1；
(b)辐射结晶的IGF-1以获得IGF-1的衍射模工特征；
(c)把衍射模式转化成IGF-1的三维结构。
而且，本发明提供了一个机器可读的数据存储介质，该介质包括由机器可读的数据编码的数据存储物质，当用恰当的机器读数据时，则可显示含有IGF-1的分子的晶体的三维表现度。
更进一方面，本发明提供一种在附录1中显示的具有同步IGF-1晶体。
此外，本发明提供了一种使用由IGF-1晶体衍生的IGF-1的三维的方法，其中IGF-1的三维结构包括一个IGF-1受体结合区域，本方法包括鉴定含有与IGF-1三维结构的受体结合区域相互作用的结构的化合物和作为IGF-1拮抗剂或拮抗物的功能。优先的是，在这个方法中，IGF-1三维结构包括α与在附录1中描述的结构信息的那些大致相同碳同等物。
另一方面，本发明提供了一种鉴定IGF-1拮抗剂或拮抗物的方法，包括的步骤是：
(a)结晶IGF-1以形成IGF-1晶体，IGF-1晶体包含一组限定IGF-1受体结合域的氨基酸残基；
(b)辐射从步骤(a)获得的晶体，以获得IGF-1晶体的衍射模型；
(c)从衍射模型中确定IGF-1的三维结构，该结构包括IGF-1受体结合区域
(d)鉴别一种有三维结构的IGF-1拮抗剂或拮抗物，它在功能上复制必需的IGF受体结合、溶剂可及的残基，该残基显示出IGF-1受体结合区域的三维结构，与IGF-1相比，所述IGF-1拮抗剂或拮抗物改变了对IGF-1应答细胞的信号转导能力。
优选的是，本方法中溶剂可及的残基不参加IGF-1界面的形成。
根据某些其他方面，本发明包括设计一种化合物的方法，如一种模拟肽，它模拟IGF-1的三维表面结构，所包括的步骤：
(a)测定IGF-1的三维结构；和
(b)设计一种模拟IGF-1三维空间表面结构的化合物。
按照另一个实施例，本发明提供一种鉴别能结合IGF-1并阻止IGFBP或受体与IGF-1结合的模拟肽，包括的步骤：
(a)搜寻具有附录1中提供的结构参数或结构同等物的分子结构数据库；；
(b)从数据库中选出模拟IGF-1的结构参数或结构同等物的分子；
本发明还提供一种测定分子复合物的至少一部分的三维结构的方法，所述复合物包括IGF-1且所述方法包括的步骤：
(a)确定IGF-1晶体的结构同等物；
(b)计算结构同等物的相位；
(c)从步骤(b)所得的相位计算电子密度图；
(d)基于所述的电子密度图测定化合物的至少一部分的结构。
优选地，在步骤(a)中所用的结构同等物与附录1所描述的那些大致相同或所描述的晶体与附录1所描述的类似物大致相同。
本发明还提供评估一种化学物质与IGF-1或其复合物缔合的能力的方法，方法步骤包括：
(a)采用计算或实验手段在化学物质和IGF-1或它的复合物之间进行一次合适的操作，因此获得与缔合相关的数据；
(b)分析由步骤(a)所得到的数据以确定在化学物质和IGF-1或它的复合物之间缔合的特征。
本发明还提供一种化学物质，该化学物质是通过上述干扰IGF-1和其受体之间或IGF-1和至少一个其结合蛋白之间体内或体外缔合，或与IGF-1的结合位点缔合的方法鉴别的。
还提供了GIF-1结晶形式的重原子衍生物。
本发明还包括一种用计算或实验手段评估一种化学物质的方法，以通过使用具有附录1中描述的结构同等物的IGF-1晶体获得该化学物质与IGF-1的一个或多个结合位点缔合的信息。
使用本发明上述方法鉴定的任何肽类似物和其它化学物质用于本文所描述的治疗方法中并作为药物组合物。
本发明还提供一种鉴定IGF-1的间接拮抗剂的方法，包括的步骤：
(a)把N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺抑制IGFBP-1或IGFBP-3结合到IGF-1的性能与IGF-1的候选间接拮抗剂的抑制性能作比较；
(b)确定候选拮抗剂是否至少与N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺一样抑制这种结合。
在一个较佳实施例中，这种比较是在N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺与参与的间接拮抗剂之间进行竞争性分析而完成的。一个更佳的实施例中，结合的抑制是通过预培养N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺或具有在噬菌体颗粒上表达的IGF-1的候选拮抗剂并在基于平板的ELISA分析中测定IGF-1与IGFBP-I或IGFBP-3的残基结合而测定。
本发明还提供一种鉴定IGF-1的间接拮抗剂的方法，包括把IGF-1和IGF-1的候选间接拮抗剂共结晶以形成共结晶结构并测定候选拮抗剂是结合IGF-1的一个片段或两个片段都结合，其中一个片段有氨基酸残基Glu3、Thr4、Leu5、Asp12、Ala13、Phe16、Val17、Cys47、Ser51、Cys52、Asp53、Leu54和Leu57，第二个片段有氨基酸残基Val11、Gln15、Phe23、Phe25，、Asn26、Val44、Phe49和Arg55，其中如果在已给定的一个片段中所列的每一个氨基酸残基与在共结晶体中小于或等于6的候选拮抗剂之间至少有一个接点，那么结合就会产生。在一个优选实施例中，候选拮抗剂抑制IGFBP-1或-3与IGF-1结合的程度至少与N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的抑制程度一样。更优选的是，本方法中的结合抑制是通过在N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺和候选拮抗剂之间的竞争性分析而测得的。最为优选的是，本方法中的结合抑制是通过预培养N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺或具有在噬菌体颗粒上表达的IGF-1的候选拮抗剂，并测定在以平板为基础的ELISA分析中测定IGF-1与IGFBP-1或IGFBP-3的残基的结合来测定的。
本民明还提供了一种治疗哺乳动物的IGF-1拮抗剂紊乱症的方法，该方法包括给哺乳动物服用有效量的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺。
此处还提供了一种IGF-1和N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的共结晶复合物。
附图简述
图1列出了IGF-1(SEQ ID NO：1)，IGF-2(SEQ ID NO：1)和胰岛素(SEQ ID NO：3)的序列。胰岛素的A-，B-，C-链(和IGF-1和IGF-2的相应序列)分别用粗体，下划线和斜体文本表示。这三个芳香性残基在文本略述中显示。标有(！)的残基被证明对于结合IGF-1受体是重要的。标有“*”的残基认为对结合IGFBP-1和IGFBP-3来说是重要的。含有IGF-1和IGF-2的D区的C端残基用常规方式描述。
图2是显示IGF-1的支链折叠的带状图。在Ramachandran图中，97.7％是最优选的且2.3％是允许的。
图3是IGF-1(左边结构)和胰岛素(右边结构)的带状图。
图4是IGF-1的带状图显示在储蓄液中所用的去垢剂，N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺，在B螺旋的底端结合进入一小段亲水缝隙中。去垢剂是用比IGF-1结构浅灰色结构所代表。
图5是作为二聚体的IGF-1带状图，去垢剂用更浅灰色来表示。
图6是一个作为二聚体的IGF-1带状图，显示了在二聚体界面上对受体结合簇重要的残基(由图中心部分的环形结构表示)。去垢剂则在图的外围部分用较浅的灰色表示。
图7A和7B是IGF-1的带状图，和图4一样，证明了在储蓄液中所用的去垢剂(N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺)，以条状形式显示，在B螺旋的底端结合进入一小段亲水缝隙中。在图7A中，去垢剂的头部基团通过残基Leu5，Phe16，Val17，Leu54和Leu57插入有条纹的裂隙中。各种灰色阴影是按照Dubaquie和Lowman，同上的丙胺扫描诱变结果而添加的，Phe16，Val17，Leu15的区域显示对IGFBP-1的亲和力有5-10倍的下降，Glu3区域则显示有10-100倍的下降以及Pro63和Pro63’区域有大于100倍的下降。在极右端的黑色部分对应形成结晶二聚体的对称相关的IGF-1分子。在Leu54附近的环表明是去垢剂的C10原子，这种去垢剂通过在这一位置上具有一个羟锘而与另一个去垢剂(3-((3-胆胺酰丙基(？))二甲铵)-1-丙烷磺酸盐；或CHAPS)不同。图7B显示去垢剂相反表面的示意图并描述了去垢剂分子与对称相关的IGF-1分子的相互作用。如图7A中所显示的，各种灰色阴影是按照Dubaquie和Lowman，同上的丙胺扫描诱变结果而添加的，在Gln15附近的基团表明其结合IGFBP-1的亲和力有5-10倍的下降，极左侧中等灰色分子，Leu10区域分子和极右侧中等灰色区域表明有10-100倍的下降，在Phe49和Gly7的黑色区域表明有大于100倍的下降。去垢剂分子右端的黑色区域对应于形成晶体二聚体的对称相关的IGF-1分子。在Gln15附近的环表明是去垢剂的C10碳原子，正如上述图7A所指出的。此图用INSIGHT(MSI，San Diego，CA)所绘制。
图8显示从去垢剂/IGFBP竞争结合研究获得的曲线图。在这个实验中，N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺是当作IGF-1结合固定的IGFBP-1(封闭的正方形)或IGFBP-3(开放的圆形)的竞争性抑制剂来使用的。在正对照，可溶性IGFBP-1是当作IGF-1结合固定的IGFBP-1(封闭的三角形)的竞争性抑制剂来使用的。每一个数据点代表了两个独立试验的平均值。
图9A是一组溶液中IGF-1的沉降平衡数据的非线性最小二乘方分析。在转子转速为30,000rpm(开放三角形)和35,000rpm(开放正方形)下所收集的数据作为一个理想的单体-二聚体自缔合模型是合适的。实线是这些数据的配合。图9B显示了在通过合适的实验解释了数据后的两种转速下的氨基酸残基图。它们在零附近随即分布，表明该单体-二聚体模型对于这种相互作用是恰当的。
图10A显示了由IGF-1和N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺复合物的NMR所确定的带状图，以及图10B显示了由IGF-1结合被环作IGF-F1-1的由噬菌体产生的IGF-1拮抗剂肽的复合物的NMR所确定的带状图。
优选实施例的描述
A.定义
在此处所用的，除非另外指出，“IGF-1”涉及人类胰岛素样生长因子-1包含一个没有N-端甲硫氨酸的人类天然成熟IGF-1序列，例如，如公开于1987.8.5的EP230,869；公开于1984.12.19的EP 128,733；或公开于1988.10.26的EP 288,451所述。
“IGFBP”或“IGF结合蛋白”涉及通常与IGF-1缔合，或结合或复合的蛋白或多肽，而不论它是否是环形的(如，在血清或组织中)。该定义包括IGFBP-1，IGFBP-2，IGFBP-3，IGFBP-4，IGFBP-5，IGFBP-6，Mac25(IGFBP-7)和环前列腺素刺激因子(PSF)或内皮细胞特异分子(ESM-1)，以及其它与IGFBPs有高度同源性的蛋白。例如，在Swisshelm等，
Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92：4472-4476(1995)和Oh等，
J.Biol. Chem.，271：30322-30325(1996)中所描述的Mac 25.PSF在Yamauchi等，
Biochemical Journal，303：591-598(1994)中有所描述。ESM-1在Lassalle等，
J.Biol.Chem.，271：20458-20464(1996)中有所描述。对于其他已鉴定的IGFBPs，见，如在1990.6.27公开的EP 375,438；在1990.5.23公开的EP 369,943；美国专利号5,258,287；在1989.10.5公开的WO 89/09268；Wood等，
分子内分泌学Endocrinology，2：1176-1185(1988)；Brinkman等，
The EMBO J.，7：2417-2423(1988)；Lee等，
Mol. Endocrinol.，2：404-411(1988)；Brewer等，
BBRC，152：1289-1297(1988)；公开在1988.12.7的EP 294,021；Baxter等，
BBRC，147：408-415(1987)；Leung等，
Nature， 330：537-543(1987)；Martin等，
J.Biol.Chem.，261：8754-8760(1986)；Baxter等，
Comp.Biochem.Physiol.，91B：229-235(1988)；在1989.9.21公开的WO89/08667；在1989.10.19公开的WO 89/09792；Binkert等，
EMBO J.，8：2497-2502(1989)。IGFBP-1和IGFBP-3分别与IGF-1的不同残基结合。
在此处所用的，“人IGF-1受体”或只是“IGF-1受体”涉及在人体内发现的IGF-1的任一受体而且包括人体中与人IGF-1结合的1型和2型IGF受体例如胚盘IGF-1R等。
“IGF-1的间接拮抗剂”是一种从IGFBP-3或IGFBP-1原位释放IGF-1因此释放的IGF-1的分子，处于活性状态并与其受体相互作用。
“肽”是至少有两个氨基酸的分子并且包括至少约有60个氨基酸的多肽。较佳地，肽约有10-60个氨基酸，更佳地是约有10-25个氨基酸，最佳地，约有12-25个氨基酸。此定义包括线性和环、肽衍生物、它们的盐类或光学异构体。
在此处所用的，用于治疗的“哺乳动物”涉及分类为哺乳动物的任何动物包括人、家禽和家畜和动物园中的动物，参加比赛的动物或宠物，如狗、马、猫、羊、猪、母牛等。此处优选的哺乳动物是人。术语“未成年”涉及从刚出生的年龄(如低出生体重的婴儿)到青春期年龄的哺乳动物，后者是那些还没有达到完全生长势的哺乳动物。
在此处所用的，术语“处理”涉及治疗处理和预防疾病或预防手段。那些需要处理的包括那些已经有紊乱症的和那些倾向于患紊乱症的或诊断为紊乱症的或那些需要预防紊乱症的。
“紊乱”是指在任何能从IGF-1的激动(“激动紊乱”)或拮抗剂(“阻抗紊乱”)的处理过程中受益的任何情形。这包括慢性和急性紊乱或包括那些使哺乳动物易感染可怀疑的紊乱的病理状态。处理的紊乱症可能是下面所列的两种或更多的拮抗或阻抗紊乱的混合。
阻抗紊乱的非限制性的例子包括良性和恶性肿瘤，白血病和淋巴瘤，神经元、胶质细胞、星形胶质细胞、下丘脑和其他腺体、巨噬细胞、上皮细胞、基质细胞和囊胚细胞紊乱，以及发炎、血管生成和免疫紊乱，糖尿病并发症如糖尿病引起的视网膜病或神经病，与年龄相关的斑点恶化，眼科手术如白内障去除、角膜移植、青光眼过滤手术和角膜成形术、屈光度矫正手术，如角膜切除术，还有在巩膜斑点洞及其恶化、视网膜流泪、视网膜玻璃体病、综合紊乱症、角膜的白内障紊乱如角膜切除术的后遗症，干眼病，结膜病毒感染，结膜溃烂，损伤如角膜上皮细胞损伤，Sjogren综合症，视网膜紊乱如斑点和视网膜肿胀，视力受限疤，视网膜缺血和增殖性玻璃质的视网膜病。
更为优选的是，这些拮抗剂紊乱包括由IGF-1加剧的糖尿病并发症，缺血损伤和与不良细胞增殖相关的疾病如癌、再狭窄和哮喘。如果紊乱是一种由IGF-1加剧的糖尿病并发症，这种并发症包括糖尿病引发的视网膜病或糖尿病引发的肾病。处理的效果可以通过临床表现或症状的减轻来证明，例如，包括增强肾清除能力、改善视力或结合到IGF-1受体的IGF-1的量的减少。如果紊乱是一种缺血损伤，它可包括中风、心肌缺血和肾的缺血损伤。
用于本发明目的的拮抗剂紊乱的例子包括任何能用IGF-1处理后受益的情形，包括但不仅限于此，例如，肺病、正如下面要阐明的高血糖症，肾病，如慢性和急性肾机能不全，晚期慢性肾衰竭、血管球性肾炎、间质性肾炎、肾盂肾炎，肾小球硬化症，如在糖尿病患者中的Kimmelstiel-Wilson症状和肾移植后的肾衰竭，肥胖、GH-不足，Turner氏综合症、Laron氏综合症、短小身材、与年龄有关的不良症状如肥胖和增加的脂肪的质量与瘦肉的比，免疫紊乱如免疫缺陷包括CD4指数的下降和免疫耐受性下降或化疗诱发的组织破坏，骨髓移植，心脏结构或功能疾病或不足如心脏功能障碍和充血性心脏衰竭，神经元，神经或神经肌肉的紊乱，如外周神经病、多发性硬化、肌肉营养失调或肌强直性营养不良和在任何条件下引起的与消费有关的代谢异常，所包括的条件如外伤或创伤，或受到如细菌或人类病毒如HIV的感染，受伤，皮肤紊乱，需要恢复的肠的结构和功能等等。此处优选的作为处理目标的激动紊乱是糖尿病和肥胖症，心脏功能障碍，由艾滋病引起的消瘦，肾紊乱，神经紊乱，全身生长紊乱和免疫紊乱。
此处所用的术语“高血糖紊乱”涉及产生自胰岛素抵抗力的所有类型的糖尿病及其紊乱，I型和II型糖尿病，以及重度胰岛素抵抗力，高胰岛素血症和高脂血症，如肥胖患者和对胰岛素有抗性的糖尿病，如Mendenhall氏综合症，Werner综合症，妖精综合征，脂类营养缺乏糖尿病和其他脂类营养缺乏症。较佳的高血糖症是糖尿病，具体是I型和II型糖尿病。“糖尿病”本身是一种碳水化合物代谢进行性疾病包括胰岛素产量不足或利用不够且其特征表现为高血糖和糖尿。
“生物活性”IGF-1涉及显示出通常与IGF-1拮抗剂或拮抗物相关的生物特性的IGF-1，例如允许治疗一种或多种上文所列紊乱的特性。
术语“有效量”涉及一定量的IGF-1或模拟肽或其他化合物，包括能有效治疗哺乳动物的疾病或紊乱的化学体。例如，在癌症中，有效量的肽可以减少癌细胞的数目；减小肿瘤的体积；抑制(在某种程度上减缓最好是停止)癌细胞渗透进入周围器官；抑制(至少在某种程度上减缓最好是停止)肿瘤转移；在某种程度上，抑制肿瘤生长；促进凋亡；且/或在某种程度上减轻与疾病相关的一种或多种症状。
“沉淀剂”是一种在储蓄液中的试剂，当它与IGF-1的水溶液混合后，便沉淀IGF-1并达到饱和以形成IGF-1晶体。例子包括离液剂如硫酸铵、聚乙二醇(其分子量在很大的范围内，例如，在约2000到20000之间)、柠檬酸钠、甲次砷酸钠或它们的混合物。
“储蓄液”是一种沉淀剂和其他IGF-1结晶所需要的组分溶液，例如，去垢剂如C12E9(九乙烯基乙二醇十二烷基醚，九乙烯基乙二醇十二醇醚，聚氧乙烯9))，C12E8(八乙烯基乙二醇十二烷基醚，八乙烯基乙二醇十二醇醚，聚氧乙烯月桂醚(8))，十二烷基-β-D-麦芽吡喃糖苷、月桂酸蔗糖酯、环己基-戊基-β-D-麦芽糖、九乙烯基乙二醇八苯酚酯、十六烷基三甲基色氨酸溴化铵、癸基-β-D-麦芽吡喃糖苷、十二烷醇二甲胺的氧化物、环己基-戊基-β-D-麦芽糖、正-十二烷基磺酸甜菜碱，3-(十二烷基二甲胺)丙烷-1-磺酸盐、壬基-β-D-葡萄糖苷、辛基-β-D-硫化葡萄糖苷、OSG、N，N-二甲基癸基胺-β-氧化物、甲基-6-O-(N-庚氨甲酰)-α-D-葡萄糖苷、蔗糖辛基酸盐、庚-β-D-硫化葡萄糖苷、辛基-β-D-葡萄糖苷、环己基-丙基-β-D-麦芽糖、环己基丁烷-N-羟基乙烷葡糖胺、正-硫乙酸甜菜碱、3-(乙酸二甲胺)丙烷-1-磺酸盐、辛基-N-甲基葡糖胺、环己基-β-D-葡萄糖苷和N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺。优选地，去垢剂是N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺。
“重结晶”涉及在初始结晶长成并确定它不是很大或很有研究价值后，向晶体添加物质的过程。此物质如甲基戊二醇有溶解晶体的效果，但不稀释晶体混合物中的其他成分。然后在随后的几天中，晶体小滴在储蓄液中再一次达到平衡，晶体再一次生长，但此时会长的更大更有序。
术语“连接”涉及IGF-1和化学物质或它们的一部分之间的接近的条件。这种连接可以是非共价的，其中并列是用氢键范德华力或静电作用高能地连接，或可以是共价连接。
术语“结合位点”涉及化学物质与IGF-1结合或连接的任意或所有位点。
术语“结构同等物”是指从与在晶体形式中由一个分子的原子(散射中心)的X-射自线的单色光束的衍射获得的模式相关的数学议程得到的同等物。衍射数据可用于计算晶体重复单位的电子密度图。本领域熟练的技术人员将理解获得的数据取决于具体使用的系统，因此，如果这种同等物详细说明与本文描述的那些基本相同的亲缘关系，那么事实上不同的同等物可描述相同的晶体。电子密度图可用于在晶体的单位细胞中确定单个原子的位置。
那些在本领域中的技术精通人员能理解那些用X衍射晶体学所确定的一组结构同等物并不是不存在标准误差的。附录1显示了IGF-1的原子同等物。本发明的目的是，当用主链原子叠加到附录1的结构同等物时，任何一组其蛋白骨架原子的均方差小于2的IGF-1结构同等物都认为是相同的。优选的是，误差小于1，更优选的是，误差小于0.5。
术语“重原子衍生化”涉及一种生产结晶的IGF-1的化学修饰的形式方法。实际上，晶体浸泡在含有重金属离子盐或有机金属化合物的溶液中，例如氯化铅、硫化苹果酸金或乙酸双氧铀，这些物质可通过晶体扩散并结合于蛋白质表面。结合重金属原子的位置可以通过对已浸没的晶体的X衍射分析而确定。此信息可用于产生用于构建分子的三维结构的相位信息。
术语“晶胞”涉及一种基本形状块。晶体的整个体积可以通过对这些块的常规组装而获得。每一个晶胞包括模式单位的完整描绘，这些其重复便组成了晶体。
术语“空间群”涉及一种晶体的对称元素的排列。
术语“分子替代”涉及一种包括产生一种其结构同等物是未知的初始晶体结构模式，通过定向和定位一个其结构同等物是已知的分子，如附录1中的IGF-1类似物，包括在未知晶体单位小室中，以至于能最好地为观察到的未知晶体的衍射模式做出解释。然后可以通过此模型计算出相位，并与所观察到的振幅混合以用近似傅里叶方法合成其未知类似物的结构。然后依次通过几种形式的改进便提供此未知晶体的最后精确结构。(例如参见Lattman，E.，“旋转与翻译的功能运用”(Use of theRotation and Translation Function)
Methods in Enzymology，115：55-7(1985)；Rossman编，“The Molecular Replacement Method，”
Int.Sci.Rev.Ser.No.13(Gordon和Breach：New York，1972))。利用用本发明所提供的IGF-1的结构同等物，分子替代可用于确定晶体共复合物、未知配体、突变体或同系物或IGF-1不同结晶体的结构同等物。此外，如权利要求所述的晶体和它的类似物可用于确定与IGF-1连接的化学物质的结构同等物。
在此处所用的术语“化学物质”或“化合物”意思是任何分子、分子复合物、化合物、模拟肽或其不是IGF-1的片段。首选它是一个高度生物利用率的分子，如有机化学分子或多肽。
B.进行本发明的几种模式
下面对本发明的详细描述包含了IGF-1的晶体结构，制备IGF-1的晶体结构的方法，和使用IGF-1晶体和其结构同等物的方法。
a.IGF-1晶体结构
本发明提供IGF-1晶体以及从其确定的IGF-1的结构。特别是，本发明提供大约具有下列三维构象：a＝31.831，b＝71.055，c＝65.995，α＝β＝γ＝90.000°的IG-1晶体。它有一个对称或C2221的空间群。在图2中显示的是它们的带状结构，他们有三个螺旋，具有对应于残基3-28的N末端B区，从残基29-34的C区，从残基35-40的一段无序排列的残基，以及从残基42-62的A区。D区(残基63-70)基本上是无序排列的。图4和7显示结晶过程中所使用的去垢剂结合进入结构的B螺旋底部的一个小疏水缝隙中。IGF-1在晶体中能形成二聚体，如图5所示，其中两个尾巴是在二聚体临界面位置。内表面积是一个6892/单体，总面积是13782。对于在二聚体界面上IGF-1R结合簇重要的残基，如图6所示。
如权利要求所述的IGF-1晶体的特征在此处的实施例中有进一步的描述且它们的结构同等物在附录1中。
b.制备IGF-1晶体的方法
在各种实施例，如权利要求所述的本发明涉及通过首先提供含有IGF-1的水溶液来制备IGF-1的结晶体形式的方法。然后把含有沉淀剂的储蓄液与一定体积的IGF-1溶液混合并结晶终混合液。优选的步骤是晶体需要再次溶解并再结晶。可用于再结晶的试剂如优选甲基戊二醇。典型地晶体溶解于少量此试剂中以最小程度的降低其它试剂的稀释效果然后使之再生长一段时间。可选择的步骤是晶体IGF-1可从混合液中分离出来。优选的是，IGF-1从原核细胞中获得，更为优选的是从细菌细胞中获得，最为优选的是大肠杆菌。优选地它分泌进入外周胞质并如美国专利号5,723,310所描述的方法制备。
水溶液中的IGF-1浓度可以有变化，但首选是约1到50mg/ml，更为优选的约5到15mg/ml。类似的，本发明中使用的沉淀剂可以有变化，并可选自本领域中所知的任何一种沉淀剂。优选的是，沉淀剂选自柠檬酸钠、硫酸铵、聚乙二醇、甲次砷酸钠或它们的混合物。更为优选的沉淀剂是用柠檬酸钠或甲次砷酸钠缓冲的聚乙二醇。任何浓度的沉淀剂都可用于储蓄液中；然而，如果是聚乙二醇，则优选的浓度约20到25％；如果是柠檬酸钠、硫酸铵或甲次砷酸钠，则优选的浓度是1到10M。优选的是，储蓄液还可包括一种去垢剂。优选的是，去垢剂的量大约从10到50mM。还有优选的去垢剂是N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺。储蓄液的pH值也可以有变化，优选的是在约4到10之间，最好的是约6.5。
本领域中的技术精通人员会理解并不是由于不恰当的实验而引起这些参数中的每一个发生了变化而仍然可以得到合格的晶体。在实践中，一旦对任何已给定的生长方法确定恰当的沉淀剂、缓冲液或其他试验变量，那么这些方法中的任何一种或任何其他方法都能用于结晶出如权利要求所述的晶体。本领域中的技术精通人员可根据它的特定需要来确定变量。
结晶的各种方法可用于如权利要求所述的本发明中，包括蒸汽扩散、分批结晶、液桥或透析结晶法。优选蒸汽扩散结晶。见如McPherson等，Preparation andAnalysis of Protein Crystals，Glick编(John Wiley&Co.，1982)，pp.82-159；Jancarik等，
J.Appl.Crystallogr.，24：409-411(1991)。
在蒸汽扩散结晶法中，少量体积的蛋白溶液(如几毫升)与含有沉淀剂的溶液混合。此混合体积挂在一个含有少量沉淀剂(如1ml)的小孔上面。从液滴到小孔的蒸汽扩散将导致液滴中的晶体形成。
结晶的透析法利用半透膜保留蛋白但允许小分子(如缓冲液和沉淀剂)扩散进出半透膜。在透析时，并不是通过蒸发来浓缩蛋白和沉淀剂，而且允许沉淀剂通过膜缓慢扩散并减少蛋白的溶解而保护蛋白质浓度固定不变。
分批方法通常包括缓慢添加沉淀剂至蛋白水溶液直至溶液刚刚浑浊；此时可封闭容器并静止一段时间直至结晶开始。
因此，申请者想要如权利要求所述的本发明包括任何和所有的结晶化方法。本领域中的技术精通人员能选择这些方法的任何一个并改变参数使所选的方法能得到所要的晶体。
最优选的结晶化方法包括这种方法，其特征在于在例如美国专利号5,681,814和WO 99/51272中所描述的在醋酸盐、柠檬酸盐或琥珀酸盐中IGF-1从细胞和配方中分离后，如果需要任选地脱盐使pH约为4-5，较佳地约4.5，以形成水溶液。然后一滴该水溶液与约24％聚乙二醇混合，该聚乙二醇用或者约0.1M的柠檬酸钠或者0.1M的甲次砷酸钠缓冲至pH6.5，并具有约1μl的约1.4mM的作为去垢剂的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺。然后此溶液用1mL24％的pH6.5的加有0.1M柠檬酸钠或加有约0.1M的甲次砷酸钠的聚乙二醇缓冲液通过蒸汽扩散结晶法达到平衡直到晶体小滴形成，此过程通常需要4-5天。然后将2μl的100％甲基戊二醇加入结晶滴中使其过夜溶解晶体并因此形成新的晶体，此过程通常在一星期之内。
晶体结构使用如下面实施例中详细描述的结合内在硫和偶然出现的溴离子的不规则散射而确定。
c.利用IGF-1晶体和其类似物的方法
本发明的结晶IGF-1可用于各种目的。例如，结晶化过程本身还能进一步纯化IGF-1以达到均一性。因此，一个目的是提供高度纯化的IGF-1，在论断分析中，它可用作标准或对照，例如作为分子重量标记或作为ELISA、放射性分析或放射性受体分析的对照物。而且结晶IGF-1晶体在室温下是稳定的，可以很容易地冻干并且比低纯度的晶体更难降解。
在本发明的另一个用处中，允许进行X-射线衍射研究的具有一定大小和质量的IGF-1的晶体使本领域熟练的技术人员能够进行涉及IGF-1的结合特征，以及IGFBPs、IGF-1受体和与IGF-1连接的ALS结合特征的研究。
而且，从肽晶体结构得到的结构信息可用于鉴定化学物质，例如，有机小分子、生物有机小分子如模拟肽和能结合IGF-1的合成有机分子，优选阻抑或阻止IGF-1介导的或连接的过程或事件，或是作为IGF-1激动剂。一个达到基于此结构的化合物设计的例子在结构基础药物设计，Pandi Veerapandian编(Marcell Dekker：NewYork 1997)中有所描述。
例如，已确定的IGF-1的三维结构技术精通人员的实施例，构建了如图2和5所描绘的通过IGF-1的模型。因为肽和多肽中的每一个原子可被描述为具有适当的范德华半径的球体，所以便可以构建折叠的IGF-1具体表面图。得到的表面被称作范德华表面。“溶剂可进入的表面”是一个能让化学探针、水分子进入的表面，并且通过在保持与范德华表面接触的肽的外部的滚动适当半径的水分子构建而成。那些与水分子表面接触的部分范德华表面部分定义为一个连续表面称之为“溶剂可进入的表面”(Creighton，Thomas E.，蛋白质：结构和分子特性，第2版(W.H.Freemanand Company，1984)，pp227-229)。
呈递模拟IGF-1的溶剂可进入的表面的溶剂可进入的表面的这种化学物质可由本领域熟练的技术人员构建。例如，技术精通人员能通过搜索化合物的三维结构的数据库以鉴定那些在相似的三维结构排列中决定适当的功能团的位置的化合物，然后在这些化学物质周围构建组合的化学文库以鉴定出那些有高亲和性的化学物质。
本发明所能达到的一个方法是利用IGF-1的结构同等物设计出能结合或连接IGF-1的化学物质并用不同的方式改变化学物质的物理特性。这些特性如溶解度、亲和性、特异性、势能、开关频率或其他结合特性都有可能改变或是最大限度的提高。
可通过探测具有不同个体的文库的GIF-1晶体设计所需的化学物质，以确定在候选化学介体和IGF-1间相互作用的理想位点。例如，从饱和溶液晶体所采集的高分辨率的X衍射数据可以确定每一种溶剂分子黏附的位置。然后可以设计并合成与那些位点紧密结合的小分子，并测试所需的活性。一旦获得所必需的活性，还可以进一步使分子的所需特征最大化。
本发明还试图用电脑从小分子数据库中筛选或设计出能完全结合或部分结合IGF-1的化学物质。它们还可用于解决的突变体、共复合物或其他至少能部分地结合IGF-1的同源分子的结晶形式的晶体结构。
一种可用于此目的的方法是分子替代。一种未知的晶体结构，它可能是任何未知的结构，如其他IGF-1的结晶形式、IGF-1的突变体或肽、IGF-1的共复合物，和任何其它与IGF-1连接的化学物质的未知晶体，可通过利用以上在附录1中提到的结构同等物来确定。IGF-1的共复合物包括，但不限于IGF-1-IGFBP-3、IGF-1-IGFBP-ALS、IGF-1-受体、IGF-1-肽或IGF-1-小分子。此方法将会比没有用本发明的方法而要试图确定未知晶体的精确结构形式要更快更有效。
因此，所获得的信息可有助于获得最有效的IGF-1的抑制剂或拮抗剂。抑制或阻抗IGF-1的化学物质的设计通常至少要考虑两个因素。第一，化学物质必须能在物理上或结构上与IGF-1连接。这种连接可以是物理上的、结构上的或化学上的连接，如共价或非共价连接，或范德华、疏水性或静电连接。
第二，化学物质必须有与IGF-1连接的构象。尽管并非化学物质的所有部分都必须参与连接IGF-1，但是那些非参与部分仍可能影响分子的所有构象。这反过来对化学物质的要求产生巨大的影响。这些构象要求包括整个三维结构和与所有或部分结合位点相关的化学物质的方向。
化学物质对IGF-1的潜在抑制或结合效果可以在它真正合成之前进行分析并利用电脑模型技术进行检测。如果给定化学物质的理论结构认为它和IGF-1不能很充分的结合和相互作用，则不需要再合成和测试此化学物质。然而，如果电脑模型表明有强烈的相互作用，那么可以合成此分子并测试它与IGF-1的结合能力。因此，这样就可避免无用化合物的昂贵且费时的合成。
IGF-1的抑制剂或其他结合化合物可用电脑评估和用一系列步骤进行设计，其步骤是筛选化学物质或片段并选择他们与IGF-1各个结合位点结合能力。
因此，本领域中的技术精通人员可利用这些方法中的一个筛选化学物质或片断的结合IGF-1的能力。此过程可从利用视觉检查基于附录1中的IGF-1类似物的电脑所筛选的结合位点开始。然后，所选的片段或化学物质可在IGF-1的各个结合口袋中不同方向或“船坞”中定位。停泊可利用如按照Quanta和Sybyl软件，随后是能量最小化和具有标准分子动力场的分子动力学，例如CHARMM和AMBER来完成。
特殊计算机程序可用于选择出感兴趣的片段或化学物质。这些程序包括，如GRID，可从英国牛津的牛津大学获得；MCSS或CATALYST，可从MolecularSimulations，Burlington，MA获得；AUTODOCK，可从Scripps Research Institute，LaJolla，CA获得；DOCK，可从加州大学，旧金山，CA获得和XSITE，可从UniversityCollege of London，UK中获得。
一旦选择了合适的化学物质或片段，则他们可组装成抑制剂或拮抗剂。组装可通过观察在电脑上所显示的每一个片段的三维结构之间的关系和与在此所公开的结构同等物的关系来完成。
另一方面，在实验上可以利用或者是空结合位点或者是一个包括了分子中有必须活性的部分的随意位点来从头设计所需的化学物质。因此，例如可利用固相筛选技术把待评估的IGF-1或它的片段或候选化学物质黏附到固相中，因而能为以后的研究鉴定出潜在的结合物。
基本上，可根据本发明使用任何分子模型技术；这些技术为本领域中的技术精通人士所知且很容易掌握。可以理解本发明公开的方法和组合物不仅能用于鉴定、设计或表征与IGF-1结合的化学物质，另一方面还可鉴定、设计或表征IGF-1的类似物与受体结合，因而破坏IGF-1-受体的相互作用的化学物质。如权利要求所述的本发明特意广泛地包括这些方法和组合物。
一旦用上述方法设计出或选择了某种化合物，那么化合物与IGF-1的结合效率可利用电脑或实验评估的手段测定并修改以获得最大程度的所需的特征。各种不同的参数可依赖所需的结果而达到最大值。这些包括，但不仅限于特异性、亲和性、开闭频率、疏水性、溶解度和其它为熟练的技术人员容易鉴定的特征。
此外，本发明有利于生产小分子药物候补物质。因此，如权利要求所述的晶体结构还可用于得到IGF-1和小分子抑制剂的复合物晶体结构的信息。例如，如果小分子抑制剂与IGF-1共结晶，则复合物的晶体结构通过使用用于相位计算的已知的IGF-1类似物进行分子替代而得到解答。这些信息是有用的，例如，可以确定IGF-1和小分子抑制剂相互作用的特性并因此可提出能增强结合特征如亲和性、特异性和动力学的修改建议。
d.其他方法
此处本发明还有助于提供一种鉴定基于与IGFBPs有关的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的抑制特性的IGF-1间接拮抗剂的方法。此方法包括比较N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺和候选的IGF-1间接拮抗剂抑制IGFBP-1或-3与IGF-1结合的能力；并确定候选的IGF-1间接拮抗剂是否至少不低于N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的抑制结合能力。
优选的比较是通过利用IC50检测抑制IGFBP结合能力而在N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺和候选的IGF-1间接拮抗剂之间作竞争性分析来完成的。在更优选的具体实施方案中，抑制结合的能力是通过把N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺或候选间接拮抗剂和在噬菌体颗粒上表达的IGF-1一起预先培养而测定的并检测在基于平板分析如ELISA的基础上IGF-1与IGFBP-1或IGFBP-3的所结合残基。
本发明还提供一种鉴定包含有共结晶的候选拮抗剂与IGF-1以形成共结晶结构的IGF-1间接拮抗剂的方法并确定候选间接拮抗剂分子是结合IGF-1中的一段还是两段都结合。第一段包括的氨基酸残基有Glu3、Thr4、Leu5、Asp12、Ala13、Phe16、Val17、Cys47、Ser51、Cys52、Len54和Len57，第二段包括氨基酸残基Val11、Ghn15、Phe23、Phe25、Asp53、Asn26、Val44、Phe49和Arg55.此处的目的是，结合意味着至少有一个连接是在给定的一组中所列的每一个氨基酸残基与共结晶结构中小于或等于6的候选间接拮抗剂之间。这样一种候选拮抗剂分子将有抑制IGF-1结合到IGFBP-1或IGFBP-3的特性。优选的这种候选拮抗剂分子的抑制IGF-1更为优选的方法是结合抑制是使用N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-胱氧阻胺与候选拮抗剂分子的竞争分析测定的。最为优选的方法是抑制结合的能力是通过把N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺或候选间接拮抗剂和在噬菌体颗粒上表达的IGF-1一起预培养而测定的并能检测在基于平板分析如ELISA的基础上IGF-1与IGFBP-1或IGFBP-3的所结合残基。
此处N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺去垢剂可当作模板以设计出与去垢剂有同样效果的小分子药物(与IGF-1竞争结合IGFBP并随后破坏IGF-1与IGFBP的相互作用使在原位上释放出自由的IGF-1，使IGF-1成为有活性的并和它的受体结合)。与在下面实施例中所检测的其他去垢剂相比，N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺缺少在C10位的氧原子.去垢剂的此区域与IGF-1的残基Leu5，Leu54和Leu57的侧链原子有紧密联系。有相同类型构象的分子将作为IGF-1的间接拮抗剂。
这样鉴定的间接拮抗剂可用于一种治疗拮抗剂紊乱的手段，其特征在于给患有这种病的哺乳动物服用有效量的IGF-1间接拮抗剂。因此，这种拮抗剂可在治疗上用于药物的制备，例如用于此处所定义的拮抗剂紊乱进行临床试验或商业化。因此，此处间接拮抗剂的处方可用于治疗可从IGF-1治疗中受益的任何情况可在任何用IGF-1治疗中受益的条件下治疗，包括例如糖尿病、慢性和急性肾病，如慢性肾机能不全、坏疽等、肥胖症、高胰岛素血症、GH-不足、唐纳氏综合症、身材矮小、与衰老有关的不良症状如瘦肉-脂肪比增加、免疫缺陷症包括CD4指数的增加和免疫耐受性的增加，与消耗有关的分解代谢异常，如Laron矮小综合征，胰岛素阻抗等等。
为了治疗上的使用，此处间接拮抗剂组合物可通过任何合适的技术包括口服、肠道外注射、鼻腔滴入或肺部吸入等给哺乳动物直接服用并可局部地或全身性地给与。特异性服用方法将依赖于如患者的医疗史，包括任何服用IGF-1后可感知的或可预期的副作用或效用的下降以及所要治疗的病症。肠道外注射的例子包括皮下注射、肌肉注射、静脉注射、动脉给予和腹膜内注射。最为优选的是，服用可持续注入(利用微型真空泵如渗透泵)，或通过注射(利用皮下注射或静脉注射手段)。还可以单个大丸药或缓释储存剂型用药。最为优选的是，直接拮抗剂口服给与或以一定频率，优选地一天二分之一次、一次、两次或三次，最好是每天输注或注射。
用于治疗的拮抗剂组合物要以与好的医疗实践相一致的方式配制和给与，考虑到患者个人的临床条件(特别是用拮抗剂治疗的副作用)，拮抗剂组合物的传送位点，服用的方法，服用的时间表和其它临床医师所知的因素。因而用于本发明目的的拮抗剂的“有效量”是通过这些考虑而确定的且必须是治疗被怀疑疾病的一定量。
作为总的建议，肠胃外给予的每剂拮抗剂总药物有效量的范围约从1μg/kg/天到100mg/kg/天，优选的是10μg/kg/天到10mg/kg/天。如果是持续服用，则通常拮抗剂的服用剂量从1μg/kg/小时到100μg/kg/小时，或者是每天注射1-4次或通过持续的皮下输入例如用微型真空泵或便携式输液泵。还可以使用静脉袋溶液。选择恰当剂量的关键因素是使用医师们认为恰当的操作标准测量所获得的结果。如果拮抗剂与胰岛素混合使用，那么后者比单独使用时的量要少，下降至其本身对于血糖几乎没有什么影响的量，如其量在0.1IU/kg/24小时到0.5IU/kg/24小时之间。
在一项具体实施方案中，为了肠胃外给予，通常拮抗剂是通过在一定所需纯度的情况下，以单位剂量可注射的形式(溶液、悬浮液或乳状液)，与药物可接受的载体混和配制的，该药物可接受的载体，即在使用的剂量和浓度下是不会对患者产生毒性的并和配方的其它组分相容。例如，优选的配方不能包括氧化剂和其它已知的对多肽是有害的化合物。
通常，配方是通过使拮抗剂均一地和密切地与液体载体或精细划分的固体载体或其二者接触制备的。优选的载体是一种非肠道载体，更为优选的是与患者的血液等渗的溶液。这些载体装置的例子包括水、盐水、Ringer氏溶液和葡萄糖溶液。非水溶液载体如固定油和乙基油酸在此处也都是有用的，以及脂质体。
合适的载体含有少量添加剂如那些能促进等渗性和化学稳定性的物质。这些物质在所用的剂量和浓度内对患者是没有毒性的并包括缓冲液如磷酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、醋酸盐和其他有机酸或它们的盐类；抗氧化剂如抗坏血酸维生素C；低分子量多肽(少于10个残基)，如多聚精氨酸或三肽；蛋白质如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性多聚物如多聚乙烯吡咯烷酮；甘氨酸；氨基酸如谷氨酸，天冬氨酸或精氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物包括纤维素或它的衍生物，葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露醇或山梨醇；平衡离子如钠；非离子表面活性剂如聚山梨醇酯、poloxamer或PEG，和中性盐如NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2等。
拮抗剂典型是在这种赋表剂中以浓度为0.1mg/ml到100mg/ml，优选的是1-10mg/ml，pH是从4.5-8中单独形成的。最后的成品，如果是液体，最好能在2-8℃下储藏4个星期。另一方面，该制剂可以冻干并以粉末的形式与水重新合成用于注射，并如上面所描述的液体制剂的储存方式储存。
用于治疗给予的拮抗剂必须是无菌的。可用无菌过滤膜过滤便可很容易地获得无菌的拮抗剂(0.2μm的膜)。医疗上的拮抗剂组合物通常放入一个具有无菌入口的容器中，例如静脉内溶液袋或具有可由皮下注射的针头刺透的塞子的小瓶。
拮抗剂通常是存储在单位或多剂量容器中，例如，以水溶液或重组的冻干剂型储存在密封的安瓿或小瓶中。
通过参考下列实例将会对本发明有一个更好的理解。然而，他们不应该限制本发明的范围。所公开的所有文献和专利在此全文引入，以供参考。
实施例1
IGF-1晶体的结晶及其特征
IGF-1的结晶和数据采集
重组人类IGF-1(rhIGF-1)可如美国专利号5,723,310的实施例中所描述的利用用于相位一形成种类的聚合物/盐组合而得到，并如美国专利号5,681,814的实施例中所描述的配制(乙酸、氯化钠、聚山梨醇酯20和苄基醇)，放入含有7ml的浓度为10mg/ml的rhIGF-1的小瓶中。它被除去盐分形成0.15M NaCl，20mM NaOAc，pH4.5，并稀释到最终浓度为10mg/ml。一滴4μl的IGF-1溶液与5μl的储蓄液(24％聚乙二醇3350用0.1M甲次砷酸钠缓冲到pH6.5)和1μl的浓度为14mM的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺混和，它是从用于结晶筛选的CRYSTAL SCREENTM试剂盒中获得的并可从Hampton Research，Laguna Nigel，CA中得到。此溶液与1mL的储蓄液通过蒸汽扩散(Jancarik等，同上)而达到平衡。因此，一滴混合液悬浮在储蓄液上方的塑料盖上下。一个细细的，平板状的小晶体便在4-5天之内出现了。此时，向结晶液滴中加入2μl的100％甲基戊二醇(MPD)(终浓度为20％)，并使晶体溶解过夜。在1星期之内，晶体再次出现且最终长成有明显锋利边缘的0.2mm×0.1mm×0.05mm形状。这些晶体可用于所有的后续分析。
本领域中那些精通技术的人员将会认为上述的结晶条件可以发生变化。通过改变结晶条件，可以获得其它IGF-1的结晶形式。这些变化可单独使用也可混合使用，例如，包括改变最终蛋白质浓度在约5到35mg/ml之间；改变IGF-1与沉淀剂的比率，改变沉淀剂聚乙二醇的浓度在20-30％之间，改变pH范围在5.5-7.5之间，改变去垢剂的类型或浓度，改变温度在约-5℃-30℃之间并利用上述的条件及其变化通过分批、液桥或透析方法结晶IGF-1。见McPherson等(1982)，同上。
IGF-1晶体的表征
从母液中把一单晶转移至含有25％(w/v)聚乙二醇3350，30％MPD，0.2MpH6.5的甲次砷酸钠，2.8mM的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺和1M的溴化钠的冰冷的防护剂溶液中。衍射波长是1.8。放入此溶液后30秒，晶体通过把溶液放入液氮中而快速冷却。冷冻晶体的技术对于永久的保存是必需的并能得到一组高质量的数据。所有的后续操作和X衍射数据采集都是在100K的温度下进行的。
一个4波长MAD数据组在Stanford Synchrotron Radiation Laboratory中以光线为9-2下收集，数据组的顺序如下：溴峰值(λ1)，低能量偏移(λ2)，溴变形(λ3)和高能量偏移(λ4)。溴峰值和回折点是对晶体荧光扫描的评估结果，且低能量偏移选择1.54，当吸收效果最小时，则在此波长下使硫反常小信号最大化。没有使用过倒转光线几何学。运用Denzo和Scalepack(Otwinoski和Minor，
Methods in Enzymology，276：307-326(1997))进行数据缩减。为了有可能确定最精确的尺度和B-因子，所有的四种波长数据起初是在一起测量的，并认为没有反常信号。然后，通过此测量方法所确定的尺度和B-因子应用于四组数据中的每一组。
属于空间组C2221的晶体其晶胞常数为a＝31.83，b＝71.06，c＝66.00，α＝β＝γ＝90.000°。含有IGF-1单位的晶体的不对称单位和单一去垢剂分子结合，得到一种Matthew氏系数为2.43/Da或48.1％溶剂。晶体的溶剂含量为55％。
结构测定
最初利用或者可获得的IGF-1的NMR模型或利用胰岛素的晶体结构通过分子替代来确定IGF-1的结构的尝试没有成功。由于此，通过溴多波长异常色散(MAD)(Dauter等，
Acta Crystallogr.，D56：232-237(2000))的方法来从头确定结构。
单键溴化物类似物是通过异常和离散差异Patterson图的手工检验而确定的。手工操作的分歧可通过利用程序SHARP(De La Fortelle and Bricogne，
酶学方 法，276：472-494(1997))购自from Global Phasing Limited，43Newton Road，Cambridge CB22AL，ENGLAND的而对相位作精细修改而得到解决，随后是利用λ2Bijvoet差异计算的异常差异傅立叶图的检测。一组溴类似物的一方面中的6个峰值与胰岛素的二硫结构相一致(PDB编码：1ZNI)。这六个峰值相应于IGF-1的六个半胱氨酸γ硫原子；第7个硫原子(甲硫氨酸59δ原子)在反常差异傅立叶图中没有检测到，推断的原因是因为它有更高的温度因子(36.72)。在此处，六个半胱氨酸γ硫原子的位置包括在项位精修中，并有一组λ1数据作为参考。贯穿整个相位精修，溴f”是对λ1数据组的改进，f’和f”是对λ3的改进，二者相对于数据组λ2和λ4都保持固定；对于每一个波长硫的f”和f’的值在理论值保持固定不变。硫原子的反常小信号对于相统计数据有很小的作用，但是最终的电子密度图显示了改进的连接性，特别是在IGF-1的比较无序的区域中。
密度修改(溶剂平均化和柱状图谱)是使用DM进行的(CollaborativeComputational Project Number 4，
Acta Crystallogr.，D50：760-763(1994)；Cowtan，Joint CCP4和ESF-EACBM
Newsletter on Protein Crystallography，31：34-38(1994))且终电子密度图谱是高质量的。对应于IGF-1的三个螺旋区域的大约50％的结构获得的利用程序O(Jones等，
Acta Crystallogr.，A47：110-119(1991))和QUANTA(97.0版，MSI，San Diego，CA)在实验上直接建立了电子密度图谱。利用Sigma(Collaborative Computational Project Number 4，同上；
Read，Acta Crystallogr.， A42：140-149(1986))几轮的相位混合在一起以允许剩余分子建立模型。原子位置和受限制的B-因子的改进利用了CNX的最大可能目标功能(Brunger等，
Acta Crystallogr.，D54：905-921(1998)and MSI，San Diego，CA)，并与“面具”型的大量溶剂校正和重折光的全B-因子定标相偶联。
最终的模型包括IGF-1的3-34和41-64残基，一个N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺分子，一个溴原子和50个水分子。此模型对λ3数据组进行了改进，因为数据统计结果显示此数据组比其它数据组有更高质量。从20-到1.8-分辨率的所有数据都包括在此改进中而不需要应用σ截止。二级结构排布是用程序PROMOTIF(Hutchinson和Thornton，
Protein Science，5：212-220(1996))制成的。
当利用两组相位得出IGF-1的有序位置是必需相同的，分子中比较灵活的区域显示相位中硫原子的连接程度得到显著改进。显示紧接着第一螺旋的IGF-1转角区域(残基19，20和21)实验电子密度的表明利用混合溴和硫的相位要比单独利用溴的相位更能得到更好连接的图谱。此时，利用溴+硫的相位，大约50％的分子能直接在实验图谱上得到追踪。
结构描述
通过几轮的模型构建和相位混合，最后的模型，在图2中显示，包括IGF-1的残基3-34和41-64，一个单一结合的去垢剂分子和46个水分子。到达1.8的R因子是23.7％，而自由R因子是26.9％，且有很好的立体化学结构。N端的B区对应的残基从3-28，C区从29-34，一组无序的残基从35-40且A区是从42-62。D区(63-70)基本是无序的。
IGF-1的结构与胰岛素相似(见图3)，具有在两个分子之间保守的主链原子上3的均方根差(RMSD)。大部分这些偏差发生在灵活的区域，并当只考虑到螺旋区域时，在α碳原子的RMSD值约0.47。其主要区别在于远离分子主体的C区的延伸程度，且对于它在成熟胰岛素中没有配对物。此环包含许多残基，已知这些残基对于受体结合来说是重要的。
一个对IGF-1的丙氨酸-扫描诱变的广泛研究显示了那些残基对于结合IGFBP-1和IGFBP-3是重要的。(Dubaquie和Lowman，同上)。这些结合IGFBP-3的残基与那些结合IGFBP-1的相似，尽管IGFBP-3被认为是更依赖于主链之间的相互作用且受丙氨酸突变的影响更小。没有一个鲜明的点在那里对于IGFBP-1和IGBP-3结合重要的残基聚集成簇，以及使破坏结合的突变分散在整个分子中。似乎在N端有一小簇的点聚集，这些点中的大部分具有内在的疏水性。
如图4和7所示，去垢剂分子结合在B-螺旋底部的一小疏水缝隙中。几个直接的副链与去垢剂的5，7和10残基接触。尽管去垢剂的结合位点与部分IGFBP-1/IGFBP-3的结合表位有重叠，但初始的结果表明，不限于任何一种理论，去垢剂并不能抑制这些蛋白与IGF-1结合。去垢剂相反面与IGF-1的反面有一个对称的结合。
如图5所示，只有一个大晶体包连接在对称相关的两个IGF-1分子之间，产生对称的同型二聚体。包埋面的面积是13782，它是在两个生理上相关的蛋白分界面范围之内的。
图6显示了在二聚体表面已知对于受体结合簇重要的残基。所显示的是Tyr24，Thr29，Tyr31和Tyr60。这些残基的突变导致对于个体突变的受体亲和性大概6-20倍的损失，或对于双重突变亲和性240-200倍的损失。还显示的是Phe23和Phe25，它们与胰岛素的Phe24和Tyr26相互交换，但亲和性没有降低。
结构的进一步描述
IGF-1主要由分别对应胰岛素的B-螺旋(IGF-1残基7-18)和两个A-螺旋(IGF-1残基43-47和54-58)三个螺旋结构片段的所组成。疏水核心必须和IGF-1的NMR结构所描述的相同，包括在Cys6和Cys48之间，在Cys18和Cys61之间的三个二硫键，在Cys47和Cys52之间，如上面参考文献所提及的。残基3到6并不形成常规的二级结构，因而在此处所描述的结构归类为最类似于T形胰岛素(Derewenda等，
Nature，338：594-596(1989))；实际上，当IGF-1和T形胰岛素重叠在各自的螺旋片段(IGF-1残基8-19，42-49和54-61；胰岛素残基B9-B20，A1-A8和A13-A20，其RMSD只有0.93)的Cα位置之上。当在胰岛素中，在B螺旋末端的残基18-21形成类型II’β转角，再指导主链从B螺旋进入一个延伸的区域。残基24-27形成类型VIIIβ转角以适应C区，它能延伸出IGF-1的核心区域并与对称相关的分子相互作用。残基30-33形成一个已很好定义过的类型IIβ转角，在i+1位置显著地表现为Tyr31。残基35-40并没有建立模型，因为此区域的电子密度很微弱且不是相关联的。D区中只有头两个残基(63和64)在结构中是有序的。
IGF-1的C区介导跨越晶胞的α轴的双重对徇晶体的相互作用。此相互作用从IGF-1的各个分子包埋了6892的溶剂可进入的面积或者是整个13782，并且是晶体中的最大界面。全部28个分子间的在3.6或更少距离的连接是通过此临界面而形成的，而随后的最广泛的晶体包之间的相互作用只形成九个连接。临界面的核心是由每一个单体的Tyr24和Pro28所控制的，它分别包埋了面积为392和572的溶剂可进入的表面。在IGF-1核心的最深处的环的顶端处的Tyr31的芳香环包围对称分子的Phe23和Phe25的酚环。除了这些疏水性相互作用外，两条主链的氢键(Tyr31 N-Phe23 0；Ser 34 N-Asp 20 0)也存在于二聚体的临界面中。D区的残基(62-64)还部分地被二聚体结构所隐藏。因为有这些相互作用，晶体中C区的大部分是非常有序的，便可提供有重要生物活性的环的构造的第一高分辨率图。
尽管72种去垢剂化合物，包括类似3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-1-丙烷磺酸盐(CHAPS)和3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-2-羟基丙烷磺酸(CHAPS)去垢剂，都是在结晶实验中筛选出来的，但只有N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺能产生晶体。单分子的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺与残基相互作用，在IGF-1的一个表面上(Leu5，Phe16，Val17，Leu54和Leu57)(图7A)形成一小的疏水性缝隙。N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的优选性已经通过在去垢剂分子中C10位置的氧原子缺少而得到解释，但它不限于任何一种理论。去垢剂的此区域与IGF-1残基Leu5、Leu54和Leu57的侧链原子有紧密联系。去垢剂的反面介导与对称相关的IGF-1分子的残基Val11、Leu14和Gln15的对称接触。令人感兴趣的是，N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的这一面还与二聚体临界面边缘有联系，且与同一个IGF-1分子中的Phe23和Phe25以及二聚体配偶体Tyr31和Gly32有紧密联系(图7B)。一个更为细致地分析表明去垢剂与IGF-1的两组结合口袋结合。一组有残基Glu3、Thr4、Leu5、Asp12、Ala13、Phe16、Val17、Cys47、Ser51、Cys52、Asp53、Leu54和Leu57，第二组氨基酸残基是Val11、Gln15、Phe23、Phe25、Asn26、Val44、Phe49和Arg55。结合是通过在所列各氨基酸残基和候选拮抗剂之间具有至少一个连接，并该连接小于或等于6来定义的。
讨论
IGF-1晶体结构的C区延伸至分子核心外，且残基30-33形成一个规则的II类型的β转角，且剩余的C区形成一个对称相关分子的结晶二聚体。有暗示表明Tyr31是作为IGF-1R结合的关键决定性因素，并且它在此范围的顶端位置使之处于一个与受体分子相互作用的理想位置。当IGF-1的这个区域没有被NMR数据所确定时，晶体中C区的构象很可能反映出溶液的构象。有证据表明存在环的顶端反转和在IGF-2的环末端有一个铰链弯曲(Torres等，同上)。因此，当晶体堆积力会毫无疑问的帮助稳定此环的方向时，它的构象与IGF-2紧密相关的溶液结构相一致。
由结晶二聚体形成的临界面的大小是很好地在已知的有生物活性的复合物
中被包埋的表面区域的范围之内(Janin和Chothia，
J.Biol.Chem.，264：16027-16030(1990))。此外，此相互作用部分地排除了溶剂中一些已知对于结合IGF-1R重要的残基，包括Phe23(包埋度69％)、Tyr24(64％)、Phe25(29％)和Tyr31(38％)。其他研究小组还报道了IGF-1与IGF-2的同型二聚体相互作用。Laajoki等，(2000)，同上，报道了在浓度为1mM，IGF-1的人工形式(Long-[Arg3]IGF-1)划分为20％的二聚体/80％的单体，此比率是与评估的3.6mM Kd能很好的一致。在他们的IGF-2的NMR研究中，Torres等，见上文，报道了C-区中残基的酰胺质子缓慢地与溶剂交换，暗示了IGF-2在溶液中形成同源二聚体。然而，尽管大量表面区域埋在在晶体中的二聚体内，但是IGF-1本身的亲和力是非常弱的。此外，已知的与每个受体二聚体结合的一个IGF-1分子化学计算法(De Meyts，同上)使其很难合理地进行有重要生物活性的IGF-1二聚化。结论是，在此晶体形式中的IGF-1二聚体是由在结晶实验中高浓度的IGF-1所制得的且不能代表生理上相关的分子构型。
在接近中性pH的条件下所获得的IGF-1非常低质量NMR光镜数据是因为自缔合和导致共振谱线宽度很大变化的内部移动的结合(Cooke等，同上)。结果是，从IGF-1中获得的NOESY光谱包括许多宽大的，重叠的顶点和几乎不锋利的很好分辨的关联。在过量的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺存在的情况下为IGF-1采取集的NOESY光谱有一个相似的表形。因此，去垢剂的结合并不足以消除IGF-1的聚集或一贯的灵活性且不能促进蛋白质溶液构象的表征。这与所观察到的结晶状态形成对比，添加去垢剂导致形成一个很有序的晶体二聚体其衍射分辨率达到很高。Jansson等，
J.Biol.Chem.，273：24701-24707(1998)指出在紧挨着Cys6周围的区域中缺少NMR的排布，它包括Leu5和Gly7，指出Cys6-Cys48的二硫化物在顺式和反式构象之间相互转换。去垢剂结合B-螺旋中的一面正对着二硫化物这个事实暗示了，不限于任何一个理论，它可能通过对疏水缝隙更完整的包装以稳定分子的此区域。事实上，在此处的晶体结构中，Cys6-Cys48明显地处于反式构象中且没有证据表明存在多种构象。
结论
IGF-1的晶体结构通过对内在硫原子和结合在不规则的卤化物结合位点上的溴离子的的异常散射确定。此结构与胰岛素非常相似，其唯一的主要区别是C区，它在蛋白体中突出并介导同源二聚体的相互作用。所埋入的表面区域量与在中性pH下IGF-1以依赖浓度的方式进行自缔合的事实一致。此外，在该二聚体表面发现几个对于受体结合重要的残基，意味着，不限于任何一个理论，这些残基的突变对于与受体结合的影响可能是由于二聚体的破坏，而不是直接与受体表面相互作用。
实施例2
基于扩散的对去垢剂结合能力的测量
由NMR所得到的扩散方法适用于评估在IGF-1和N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺之间的Kd值。样品的制备是在50mM的D20的磷酸缓冲液中，pH6.5(未校正反表读数)并包括：1.0mM N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺+0.5mM IGF-1；0.5mM N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺+0.25mM IGF-1；0.25mMN，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺+0.125mM IGF-1；或仅N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺(1.0，0.5或0.25mM)。所有的光谱是在40℃下用配备有一个5mm的三联梯度，三联共振探针Bruker AVANCE 500TM的分光光度计(BrukerAnalytik GmbH)测量的。扩散测量是用二极脉冲对方法在δ＝5ms，τ＝2ms，Δ＝25或40ms分别对应于单独使用N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺或N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺+IGF-1的条件下测量(Wu等，
J.Magn.Reson.，Ser.A 115：260-264(1995))。当Z-梯度的强度在18次等量增加中从0.009Tm-1增至0.45Tm-1时，光谱在128到1024瞬间中采集；每种样品至少测量两次。FELIX(v98.0，MSI，San Diego)处理光谱和获取峰高。扩散常数、去垢剂结合比率和Kd的结果值由Fejzo等，
Chemistry& Biology，6：755-769(1999)中所描述的方法获得。光谱也可在含有1.0mM 3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-1-丙烷磺酸盐，一种用于膜溶解的两性离子去垢剂和1.0mM 3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-1-丙烷磺酸盐+0.5mM IGF-1的样品中采集到。二维NOESY光谱(Jeener等，J.Chem.Phys.，71：4546-4553(1979))是在0.5mM的混有或缺少1.0mM N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺且其混合时间为100ms的IGF-1样品中采集到的。
IGF-1噬菌体ELISA
用在Dubaquie和Lowman，同上中描述的展示人类IGF-1的噬菌体载体pIGF-g3新鲜转化的大肠杆菌细胞(XL1-蓝，策略基因)，在5ml的2YT培养基中过夜培养(Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Handbook(Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989))。针对IGFBP-1和IGFBP-3滴定显示IGF-1的噬菌体颗粒以获得预培养的稀释倍数在500-1000倍之间的去垢剂并且结合标准蛋白35分钟。有MAXISORPTM表面(Nunc，Denmark)的有干净微孔聚苯乙烯免疫平板铺用IGFBP-1或IGFBP-3蛋白覆盖并在4℃下过夜(3μg/ml的50μl，在50mM的碳酸缓冲液中，pH9.6)，并用0.5％的TWEEN20的聚氧乙烷山梨聚糖单月桂酸(Atlas Chemical Co.)和PBS阻抑，并用PBS和0.05％的TWEEN20的聚氧乙烷山梨聚糖单月桂酸洗八次。然后把样品加入平板30分钟。用PBS和0.05％的TWEEN20聚氧乙烷山梨聚糖单月桂酸洗平板八次，并用含有50μl的1∶10,000山葵过氧化酶/抗-M13抗体结合剂的PBS(Amersham Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)和0.5％BSA培养30分钟，然后用PBS，0.05％的TWEEN20的聚氧乙烷山梨聚糖单月桂酸洗八次，再用PBS洗两次。用四甲基对二氨基联苯培养基(Kirkegaard和Perry，Gaithersburg，MD)培养平板，用1.0H3PO4停止反应，在450nm的波长下读取分光光度值。
沉降平衡分析
IGF-1的自缔合是通过沉降平衡分析而确定的。实验是在20℃下OPTIMATMXL-A/XL-I超速离心分析仪(Beckman Coulter，Inc)进行的。样品是在0.1M柠檬酸缓冲液中制备的，其pH6.5，75mM NaCl，其加载浓度是从1mM到0.01mM.浓度梯度的测量是用扫描吸收光学系统在280nm或285nm的波长下转速为25000和30000rpm下进行的。平衡状态的获得是在大约16小时后通过比较连续扫描而确认的。这个部分的IGF-1特定体积可以从它的氨基酸组成中计算。利用非线性最小平方配合程序NONLIN(Johnson等，
Biophys.J.，36：578-588(1981))装配数据得到单个理想的种类或理想的二聚体自缔合模型。缔合常数是由此模型的最佳值所确定的，并通过非线性最小平方回归而回归。
结果：
N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺在溶液中结合IGF-1
利用溶液NMR方法可确认N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺和3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-1-丙烷磺酸盐与IGF-1的亲和力。在把N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺滴入0.5mM的IGF-1溶液中使所观察到的化学位移变化暗示了亲和性是亚毫摩尔且从这些数据中不能很容易地得出测量结果。相反，对这些样品在不同的IGF-1浓度且含有2摩尔的去垢剂平衡液中使用扩散测量方法而且也对一些只含有去垢剂(去垢剂的浓度总是比1.4mM的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺和14mM的3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-1-丙烷磺酸盐的临界微团的浓度要低)的样品使用扩散测量方法。蛋白质存在时去垢剂的扩散常数的降低可用于评估去垢剂结合蛋白质的比例(Fejzo等，同上)。因为去垢剂和蛋白质的总浓度是已知的，则可确定解离常数的值。在所研究的三种蛋白浓度(0.5mM，0.25mM，0.125mM)中，可分别获得Kd值220，440，430μM。此技术常规地应用在小分子(几百道尔顿分子量或更少)与大蛋白的结合上。在此特殊应用中，配体相对大一些(862Da)而蛋白质则相对小一些(7648Da)；因此，结合的扩散常数的差别减少是微小的。这种不确定性的增加可以测量解离常数。基于此，上面所描述的数据表明了N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺和IGF-1之间相互作用的Kd值是300±150μM。3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-1-丙烷磺酸盐的扩散数据的相似分析表明在这种情况下的Kd值大于3mM.
N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺阻抑IGFBP-1和IGFBP-3的结合
为了检测N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺结合IGF-1的抗原决定基，去垢剂用在噬菌体颗粒上表达的IGF-1预培养，结合IGFBP-1和IGFBP-3的残基水平用基于平板分析(ELISA)技术来测量。作为对照，3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-1-丙烷磺酸盐也同样这样测量。如图8所示，N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺完全抑制噬菌体上的IGF-1结合到其IC50值分别是740±260μM和231±29μM的IGFBP-1和IGFBP-3上。然而，这些数值可以做保守的解释，因为N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的临界微团浓度(1.4mM)代表了图8曲线的上限。与N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的效果相比，紧密相关的3-((3-丙基胆胺)二甲胺)-1-丙烷磺酸盐在浓度一直达到1mM中并没有表现出任何的结合抑制。尽管受到试验的限制，所得到的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺IC50值与上面所估计的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺-IGF-1相互作用的Kd值有很好的一致性。
IGF-1的自缔合
沉降平衡数据表明IGF-1在溶液中发生自缔合。平均分子量随着蛋白质浓度从0.01mM增加到1mM而增加。在最高浓度研究的硬度的平均分子量约比单体分子量高37％(1mM是10.4KD相对于7.6KD的单体分子量)。在低于0.05mM的浓度中，没有观察到自缔合，并且IGF-1在中性pH的溶液中只以单体形式存在。如果认为高分子量的物质就是IGF-1的二聚物，则沉降数据可以适合Kd值是3.6+1.0mM(图9)的单体-二聚体模型。
一些研究鉴定出对于结合IGFBP是重要的IGF-1残基(Clemmons等，Endocrinology，131：890-895(1992)；Dubaquie和Lewman，同上；Jansson等，同上；Oh等，(1993)同上；Lowman等(1998)同上，和Dubaquie等，
Endocrinology，142：165-173(2001))。Dubaquie和Lowman，同上，鉴定了与IGFBP-1和IGFBP-3相互作用的IGF-1中不同的两组。组I包括Glu7、Leu10、Val11、Leu14、Phe25、Ile43和Val44，而组II包括Glu3、Thr4、Leu5、Phe16、Val17和Leu54。在IGF-1的晶体结构中，这两组都涉及由去垢剂介导的晶体包装接触。(具体的是，IGF-1的晶体结构中的组I包括的氨基酸残基有Glu3、Thr4、Leu5、Asp12、Ala13、Phe16、Val17、Cys47、Ser51、Cys52、Asp53、Leu54和Leu57，IGF-1的晶体结构中的组2包括的氨基酸残基有Val11、Gln15、Phe23、Phe25、Asn26、Val44、Phe49和Arg55，其中如果在每一个所列的氨基酸残基和候选拮抗剂分子之间存在至少一个小于或等于6的接触那么结合就会发生)。
去垢剂的结合位点与IGFBP相互作用表面的重叠完全与在此处所观察到的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺阻抑IGFBP-1和IGFBP-3的结合相一致。与此相反，N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺并不抑制在细胞基础的受体活化分析中IGF-1R介导的信号通路。这些结果与最初证明IGF-1上对于受体和IGFBP相互作用的不同结合表位的研究是一致的。(Bayne等，同上，(264卷)；Bayne等，同上，(265卷)；Cascieri等，同上)。N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺作为IGFBP相互作用的抑制剂的鉴定使得有能够开发小分子药物或能在体内破坏IGF-1/IGFBP复合物的模拟肽，因此从系统的非活性的库中释放受体激活的IGF-1。这些药物包括用于对代谢疾病如糖尿病的口服疗法。
最近，Zeslawski等，
EMBO J.，20：3638-3644(2001)发表了与IGFBP-5的N末端区域的复合的IGF-1的晶体结构。复合物的结构完全与此处所表述的去垢剂抑制IGFBP结合的模型相一致，也在Vajdos等，
Biochemistry，40：11022-11029(2001)有所公开。与噬菌体得到的IGF-1拮抗肽IGF-F1-1(RNCFESVAALRRCMYG(SEQ IDNO：4))结合的IGF-1复合物NMR测定结果与其它IGF-1晶体结构相比表明，不限于任何一种理论，A链(螺旋III)的一部分在溶液中是移动的并当结合不同的配体(去垢剂，肽，结合蛋白)时采用有轻微差别的构象。
肽IGF-F1-1和IGF-1间的复合物是由在600和800MHZ下采集的NMR光谱数据测定的。用13C和15N统一标记的IGF-1利用Reilly和Fairbrother，
J.Biomol.NMR， 4：459-462(1994)中所述的方案制备的，并按照Vajodos等，同上的操作步骤进行纯化。少量摩尔的过量未标记的IGF-F1-1与1.5mM的13C/15N IGF-1溶液混合而且从二重和三重共振NMR实验中赋值1H，13C和15N NMR共振，如Cavanagh等，蛋白质NMR光谱学，理论与实践(Academic Press：New York，1996)中所描述的。IGF-1中的距离限制从13C编辑的NOESY HSQC光谱和15N编辑的NOESY HSQC光谱鉴定(Cavanagh等，同上)。
在IGF-1和肽之间的分子间限制是从ω1-过滤，ω2-编辑的13C HSQC-NOESY光谱(Lee等，
FEBS Lett.，350：87-90(1994))中获得。内肽的距离限制是从2-D 13C-过滤NOESY光谱中获得。此外，Φ两面角限制是从HNHA光谱(Cavanagh等，同上)中获得并且χ1限制是从HNHB和短混合时间TOCSY光谱(Clore等，
J.Biomolec.NMR， 1：13-22(1991))中获得。此外，Φ，ψ限制是运用TALOS程序对Hα、N、Cα、Cβ和C0化学位移的分析而得出的(Cornilescu等，
J.Biomol.NMR，13：289-302(1999))。
总体上，899个距离限制(799个IGF-1内部；33个肽内部；87个分子之间)，16个螺旋I中的氢键限制和138个二面角限制(71φ；44ψ；23χ1)用于通过计算机程序CNX(Accelrys Inc.，San Diego)使用扭转角动力以产生结构的总和。对于B区域(2-25残基)和A区域(41-63残基)IGF-1的结构是很好地界定的，并具有从0.32±0.06骨架重原子的平均结构中得到一个平均的RMSD值。C区域(26-40)和D区域(62-70)则不能从获得的数据很好地定义。最低限制侵害能量的20种结构有好的骨架立体化学构象(80％的残基位于φ/ψ空间的最优选的区域，没有一个位于不被允许的区域)并且几乎不包含实验上的波动限制(平均最大距离限制的破坏是0.09+0.02)。IGF-F1-1采用了与溶液中肽本身所确定的构象非常相似的构象。IGF-1构象包括三个螺旋(残基7-18，43-49和54-60)并且它和在前面的NMR研究未复合的IGF-1中低分率条件下见到的IGF-1相似(见Cooke等，同上；Sato等，同上；和Laajoki等，同上)。
图10显示了去垢剂与噬菌体肽复合物的比较。具体的，图10A显示了IGF-1与N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺复合物的带状图，图10B显示了IGF-1与噬菌体产生的肽IGF-F1-1的结合复合物。B区域(螺旋I)采用了在两个复合物都非常相似的构象。C环在去垢剂复合物中只有部分有序，且在多肽复合物中不能很好地确定。由配体诱导的差异可在IGF-1的A区(螺旋III)中，在主链(残基52-60)和侧链(亮氨酸54和57)的水平上可观察到。不限于任何一种理论，A区域的可塑性相信可以使IGF-1与那么多的蛋白结合(6个IGFBP和三个受体)。
本发明有必要在此处通过参与一些特异性方法和材料进行讨论。可以理解这些特定方法和材料的讨论决不限制本发明的应用范围，本发明可延伸至任何或所有可供选择的适用于完成本发明目的的材料和方法。
附录1
注释3使用MAD溶解的IGF-1晶体结构
注释3精炼
注释3程序：X-PLOR(online)98.1
注释3作者：BRUNGER
注释3
注释3精炼中使用的数据
注释3分辨率上限()：1.80
注释3分辨率下限()：20.00
注释3数据截止(SIGMA(F))：0.2
注释3数据截止上限(ABS(F))：10000000.00
注释3数据截止下限(ABS(F))：0.001000
注释3完全性(工作+测试)(％)：94.8
注释3反射数字：6870
注释3
注释3适用于精炼的数据
注释3互相证实方法：自始至终
注释3游离R值试验组选择：随机
注释3R值(工作组)：0.237
注释3游离R值：0.269
注释3游离R值试验组大小(％)：5.6
注释3游离R值试验组计数：382
注释3游离R值的估计误差：0.014
注释3
注释3最高分辨率储存器中的配合
注释3所用储存器的总数：6
注释3储存器分辨率范围的上限(A)：1.80
注释3储存器分辨率范围的下限(A)：1.91
注释3储存器完全性(工作+试验)(％)：74.4
注释3储存器中的反射(工作组)：826
注释3储存器R值(工作组)：0.343
注释3储存器游离R值：0.439
注释3储存器游离R值试验组大小(％)：5.5
注释3储存器游离R值试验组计数：48
注释3储存器游离R值的估计误差：0.063
注释3
注释3精炼中使用的非氢原子数目
注释3蛋白质微粒：475
注释3核酸微粒：0
注释3异基因：62
注释3溶剂原子：102
注释3
注释3B值
注释3来自WILSON PLOT(A**2)：25.1
注释3平均B值(所有，A**2)：33.8
注释3总的各向异性B值
注释3B11(A**2)：0.00
注释3B22(A**2)：0.00
注释3B33(A**2)：0.00
注释3B12(A**2)：0.00
注释3B13(A**2)：0.00
注释3B23(A**2)：0.00
注释3
注释3估计同等误差
注释3来自LUZZATI PLOT的ESD(A)：0.23
注释3来自SIGMAA的ESD(A)：0.16
注释3低分辨率截止(A)：20.00
注释3
注释3互相证实的估计同等误差
注释3来自C-V LUZZATI PLOT的ESD(A)：0.28
注释3来自C-V SIGMAA的ESD(A)：0.18
注释3
注释3理想值的RMS偏差
注释3结合长度(A)：0.020
注释3结合角(度)：2.0
注释3二面角(度)：23.2
注释3不适当的角(度)：1.09
注释3
注释3各向同性热模型：限制的
注释3
注释3各向同性热因子抑制.RMS SIGMA
注释3主链键(A**2)：4.33；4.00
注释3主链角(A**2)：6.46；4.00
注释3侧链键(A**2)：5.41；8.50
注释3侧链角(A**2)：8.14；9.00
注释3
注释3NCS模型：无
注释3
注释3NCS抑制RMS SIGMA/重
注释3组1的位置(A)：NULL；NULL
注释3组1的B因子(A**2)：NULL；NULL
注释3
注释3参数文件1：MSI_XPLOR_TOPPAR/protein_rep.param
注释3参数文件2：../perameter.element
注释3参数文件3：../cyc.par
注释3参数文件4：../../../g2mz/param19.sol
注释3拓扑文件1：/usr/prop/msi/980/data/xplor/toppar/tophscdx.pro
注释3拓扑文件2：../topology.element
注释3拓扑文件3：../cyc.top
注释3拓扑文件4：../../../g2mz/param19.sol
注释3
注释3其它精炼注释：使用的大量溶剂模型
SEQRES 1A 100 GLU THR LEU CYS GLY ALA GLU LEU VAL ASP ALA LEU GLN
SEQRES 2A 100 PHE VAL CYS GLY ASP ARG GLY PHE TYR PHE ASN LYS PRO
SEQRES 3A 100 THR GLY TYR GLY SER SER THR GLY ILE VAL ASP GLU CYS
SEQRES 4A 100 CYS PHE ARG SER CYS ASP LEU ARG ARG LEU GLU MET TYR
SEQRES 5A 100 CYS ALA PRO LEU HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH EOH HOH
SEQRES 6A 100 HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH
SEQRES 7A 100 HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH
SEQRES 8A 100 HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH HOH
SEQRES 1 B 3 CYC BR HOH
SSBOND 1 CYS A 6 CYS A 48
SSBOND 2 CYS A 18 CYS A 61
SSBOND 3 CYS A 47 CYS A 52
CRYST1 31.830 71.074 66.014 90.00 90.00 90.00 C 2221 16
ORIGX1 1.000000 0.000000 0.000000 0.00000
ORIGX2 0.000000 1.000000 0.000000 0.00000
ORIGX3 0.000000 0.000000 1.000000 0.00000
SCALE1 0.031417 0.000000 0.000000 0.00000
SCALE2 0.000000 0.014070 0.000000 0.00000
SCALE3 0.000000 0.000000 0.015148 0.00000
注释文件名＝＂final.pdb＂
注释 r＝0.237371 free_r＝0.26887
注释 DATE：Jan-30-01 14:51:37 由使用者：mhu生成
原子 1 CB GLU A 3 20.808 24.058 21.698 1.00 46.92
原子 2 CG GLU A 3 19.515 23.283 21.499 1.00 61.66
原子 3 CD GLU A 3 18.281 24.029 22.025 1.00 70.74
原子 4 OE1 GLU A 3 18.254 24.408 23.221 1.00 74.11
原子 5 OE2 GLU A 3 17.332 24.237 21.238 1.00 75.50
原子 6 C GLU A 3 22.417 22.169 21.324 1.00 36.23
原子 7 O GLU A 3 21.616 21.223 21.375 1.00 38.90
原子 8 N GLU A 3 21.623 23.389 19.405 1.00 38.88
原子 9 CA GUU A 3 21.994 23.550 20.854 1.00 40.66
原子 10 N THR A 4 23.696 22.040 21.647 1.00 31.38
原子 11 CA THR A 4 24.213 20.754 22.059 1.00 24.88
原子 12 CB THR A 4 25.301 20.217 21.051 1.00 23.86
原子 13 OG1 THR A 4 26.426 21.106 21.070 1.00 30.08
原子 14 CG2 THR A 4 24.786 20.115 19.645 1.00 25.92
原子 15 C THR A 4 24.825 20.983 23.441 1.00 20.71
原子 16 O THR A 4 24.715 22.065 24.036 1.00 19.97
原子 17 N LEU A 5 25.435 19.949 23.986 1.00 19.32
原子 18 CA LEU A 5 25.976 20.054 25.319 1.00 15.87
原子 19 CB LEU A 5 25.300 19.036 26.254 1.00 22.19
原子 20 CG LEU A 5 23.859 19.367 26.714 1.00 28.27
原子 21 CD1 LEU A 5 23.229 18.123 27.479 1.00 23.45
原子 22 CD2 LEU A 5 23.916 20.612 27.594 1.00 25.44
原子 23 C LEU A 5 27.472 19.662 25.252 1.00 19.16
原子 24 O LEU A 5 27.742 18.527 24.980 1.00 20.58
原子 25 N CYS A 6 28.352 20.591 25.572 1.00 19.74
原子 26 CA CYS A 6 29.809 20.320 25.520 1.00 21.84
原子 27 C CYS A 6 30.485 20.754 26.790 1.00 16.04
原子 28 O CYS A 6 29.990 21.602 27.535 1.00 18.05
原子 29 CB CYS A 6 30.448 21.077 24.361 1.00 22.37
原子 30 SG CYS A 6 29.753 20.589 22.733 1.00 32.91
原子 31 N GLY A 7 31.685 20.185 27.039 1.00 19.09
原子 32 CA GLY A 7 32.397 20.613 28.217 1.00 17.15
原子 33 C GLY A 7 31.698 20.668 29.536 1.00 18.61
原子 34 O GLY A 7 31.069 19.683 29.965 1.00 15.50
原子 35 N ALA A 8 31.835 21.779 30.240 1.00 13.90
原子 36 CA ALA A 8 31.276 21.897 31.553 1.00 15.72
原子 37 CB ALA A 8 31.630 23.239 32.150 1.00 21.73
原子 38 C ALA A 8 29.715 21.774 31.498 1.00 14.12
原子 39 O ALA A 8 29.116 21.316 32.469 1.00 14.45
原子 40 N GLU A 9 29.145 22.263 30.412 1.00 15.00
原子 41 CA GLU A 9 27.653 22.198 30.355 1.00 21.86
原子 42 CB GLU A 9 27.118 22.975 29.140 1.00 23.00
原子 43 CG GLU A 9 27.116 24.481 29.346 1.00 33.94
原子 44 CD GLU A 9 26.424 25.279 28.204 1.00 53.09
原子 45 OE1 GLU A 9 25.790 24.700 27.260 1.00 50.65
原子 46 OE2 GLU A 9 26.521 26.528 28.270 1.00 63.42
原子 47 C GLU A 9 27.200 20.732 30.278 1.00 19.13
原子 48 O GLU A 9 26.180 20.376 30.831 1.00 15.61
原子 49 N LEU A 10 27.974 19.902 29.589 1.00 16.50
原子 50 CA LEU A 10 27.688 18.488 29.435 1.00 19.32
原子 51 CB LEU A 10 28.637 17.845 28.384 1.00 16.05
原子 52 CG LEU A 10 28.552 16.296 28.272 1.00 18.02
原子 53 CD1 LEU A 10 27.080 15.875 27.864 1.00 17.22
原子 54 CD2 LEU A 10 29.459 15.858 27.153 1.00 17.33
原子 55 C LEU A 10 27.850 17.812 30.788 1.00 20.39
原子 56 O LEU A 10 27.030 16.968 31.173 1.00 13.49
原子 57 N VAL A 11 28.924 18.126 31.531 1.00 16.73
原子 58 CA VAL A 11 29.089 17.550 32.838 1.00 13.49
原子 59 CB VAL A 11 30.518 17.917 33.453 1.00 16.29
原子 60 CG1 VAL A 11 30.636 17.370 34.882 1.00 19.22
原子 61 CG2 VAL A 11 31.603 17.350 32.528 1.00 17.93
原子 62 C VAL A 11 28.006 18.025 33.824 1.00 13.78
原子 63 O VAL A 11 27.532 17.272 34.668 1.00 11.61
原子 64 N ASP A 12 27.599 19.280 33.717 1.00 14.34
原子 65 CA ASP A 12 26.573 19.795 34.651 1.00 15.14
原子 66 CB ASP A 12 26.166 21.243 34.290 1.00 14.66
原子 67 CG ASP A 12 26.960 22.337 34.970 1.00 27.52
原子 68 OD1 ASP A 12 27.448 22.152 36.103 1.00 29.53
原子 69 OD2 ASP A 12 27.031 23.422 34.314 1.00 31.00
原子 70 C ASP A 12 25.275 18.941 34.366 1.00 11.41
原子 71 O ASP A 12 24.564 18.555 35.313 1.00 14.02
原子 72 N ALA A 13 25.006 18.744 33.115 1.00 16.37
原子 73 CA ALA A 13 23.761 18.002 32.720 1.00 18.28
原子 74 CB ALA A 13 23.558 18.014 31.189 1.00 15.65
原子 75 C ALA A 13 23.803 16.590 33.235 1.00 17.95
原子 76 O ALA A 13 22.833 16.073 33.788 1.00 15.70
原子 77 N LEU A 14 24.954 15.920 33.065 1.00 11.92
原子 78 CA LEU A 14 25.077 14.560 33.611 1.00 15.01
原子 79 CB LEU A 14 26.443 13.965 33.164 1.00 13.58
原子 80 CG LEU A 14 26.457 13.638 31.695 1.00 15.59
原子 81 CD1 LEU A 14 27.939 13.345 31.250 1.00 17.99
原子 82 CD2 LEU A 14 25.601 12.370 31.414 1.00 22.05
原子 83 C LEU A 14 24.944 14.495 35.098 1.00 15.56
原子 84 O LEU A 14 24.341 13.550 35.626 1.00 18.96
原子 85 N GLN A 15 25.591 15.431 35.831 1.00 12.18
原子 86 CA GLN A 15 25.494 15.426 37.273 1.00 14.03
原子 87 CB GLN A 15 26.379 16.526 37.916 1.00 17.47
原子 88 CG GLN A 15 27.917 16.185 37.673 1.00 23.70
原子 89 CD GLN A 15 28.863 16.851 38.656 1.00 32.76
原子 90 OE1 GLN A 15 29.187 18.020 38.510 1.00 28.85
原子 91 NE2 GLN A 15 29.314 16.095 39.658 1.00 29.69
原子 92 C GLN A 15 24.061 15.631 37.745 1.00 18.29
原子 93 O GLN A 15 23.684 15.090 38.729 1.00 18.76
原子 94 N PHE A 16 23.297 16.400 37.012 1.00 18.23
原子 95 CA PHE A 16 21.916 16.692 37.438 1.00 17.04
原子 96 CB PHE A 16 21.438 17.935 36.706 1.00 18.66
原子 97 CG PHE A 16 20.060 18.334 37.110 1.00 18.49
原子 98 CD1 PHE A 16 19.874 18.960 38.310 1.00 23.45
原子 99 CD2 PHE A 16 18.959 17.947 36.339 1.00 21.34
原子 100 CE1 PHE A 16 18.558 19.216 38.788 1.00 27.25
原子 101 CE2 PHE A 16 17.646 18.190 36.789 1.00 21.50
原子 102 CZ PHE A 16 17.457 18.829 38.020 1.00 24.95
原子 103 C PHE A 16 21.018 15.479 37.110 1.00 15.52
原子 104 O PHE A 16 20.248 15.013 37.971 1.00 20.37
原子 105 N VAL A 17 21.160 14.923 35.916 1.00 16.12
原子 106 CA VAL A 17 20.338 13.761 35.490 1.00 17.94
原子 107 CB VAL A 17 20.392 13.598 33.932 1.00 21.28
原子 108 CG1 VAL A 17 19.831 12.219 33.456 1.00 25.51
原子 109 CG2 VAL A 17 19.619 14.737 33.295 1.00 22.15
原子 110 C VAL A 17 20.720 12.454 36.182 1.00 21.98
原子 111 O VAL A 17 19.843 11.655 36.556 1.00 24.05
原子 112 N CYS A 18 22.015 12.222 36.411 1.00 17.42
原子 113 CA CYS A 18 22.430 10.964 37.039 1.00 20.54
原子 114 C CYS A 18 22.420 10.998 38.579 1.00 26.67
原子 115 O CYS A 18 22.386 9.967 39.239 1.00 24.96
原子 116 CB CYS A 18 23.841 10.565 36.505 1.00 16.00
原子 117 SG CYS A 18 23.947 10.463 34.717 1.00 29.49
原子 118 N GLY A 19 22.462 12.198 39.147 1.00 32.94
原子 119 CA GLY A 19 22.464 12.366 40.595 1.00 31.76
原子 120 C GLY A 19 23.563 11.580 41.263 1.00 37.69
原子 121 O GLY A 19 24.730 11.631 40.869 1.00 40.61
原子 122 N ASP A 20 23.186 10.815 42.276 1.00 39.20
原子 123 CA ASP A 20 24.150 10.009 42.989 1.00 47.44
原子 124 CB ASP A 20 23.471 9.355 44.187 1.00 60.22
原子 125 CG ASP A 20 23.633 10.169 45.437 1.00 73.16
原子 126 OD1 ASP A 20 24.132 11.311 45.326 1.00 79.05
原子 127 OD2 ASP A 20 23.275 9.675 46.524 1.00 78.87
原子 128 C ASP A 20 24.843 8.946 42.149 1.00 37.42
原子 129 O ASP A 20 25.954 8.521 42.472 1.00 38.02
原子 130 N ARG A 21 24.213 8.484 41.084 1.00 26.27
原子 131 CA ARG A 21 24.883 7.495 40.267 1.00 33.90
原子 132 CB ARG A 21 23.930 6.931 39.223 1.00 36.79
原子 133 CG ARG A 21 22.513 7.382 39.490 1.00 50.60
原子 134 CD ARG A 21 21.547 6.260 39.495 1.00 46.09
原子 135 NE ARG A 21 21.068 5.971 38.157 1.00 44.95
原子 136 CZ ARG A 21 20.533 6.865 37.329 1.00 42.44
原子 137 NH1 ARG A 21 20.397 8.132 37.692 1.00 49.97
原子 138 NH2 ARG A 21 20.103 6.474 36.138 1.00 34.61
原子 139 C ARG A 21 25.951 8.301 39.565 1.00 36.17
原子 140 O ARG A 21 25.786 9.474 39.374 1.00 37.51
原子 141 N GLY A 22 27.056 7.707 39.184 1.00 35.48
原子 142 CA GLY A 22 27.983 8.551 38.437 1.00 28.95
原子 143 C GLY A 22 27.566 8.445 36.983 1.00 24.58
原子 144 O GLY A 22 26.409 8.046 36.674 1.00 22.09
原子 145 N PHE A 23 28.465 8.786 36.065 1.00 15.51
原子 146 CA PHE A 23 28.157 8.704 34.664 1.00 15.18
原子 147 CB PHE A 23 27.665 10.080 34.127 1.00 20.92
原子 148 CG PHE A 23 28.539 11.242 34.571 1.00 20.47
原子 149 CD1 PHE A 23 28.271 11.908 35.762 1.00 24.30
原子 150 CD2 PHE A 23 29.644 11.596 33.815 1.00 20.21
原子 151 CE1 PHE A 23 29.126 12.965 36.237 1.00 25.52
原子 152 CE2 PHE A 23 30.520 12.636 34.261 1.00 20.52
原子 153 CZ PHE A 23 30.259 13.307 35.458 1.00 22.56
原子 154 C PHE A 23 29.397 8.332 33.920 1.00 20.77
原子 155 O PHE A 23 30.484 8.463 34.494 1.00 24.08
原子 156 N TYR A 24 29.242 7.891 32.673 1.00 20.54
原子 157 CA TYR A 24 30.396 7.562 31.821 1.00 25.88
原子 158 CB TYR A 24 30.393 6.126 31.295 1.00 33.47
原子 159 CG TYR A 24 29.706 5.125 32.115 1.00 31.26
原子 160 CD1 TYR A 24 30.356 4.551 33.204 1.00 43.74
原子 161 CE1 TYR A 24 29.763 3.573 33.939 1.00 47.84
原子 162 CD2 TYR A 24 28.422 4.680 31.785 1.00 41.08
原子 163 CE2 TYR A 24 27.818 3.692 32.524 1.00 39.08
原子 164 CZ TYR A 24 28.492 3.151 33.589 1.00 44.15
原子 165 OH TYR A 24 27.949 2.164 34.357 1.00 56.07
原子 166 C TYR A 24 30.332 8.362 30.588 1.00 24.71
原子 167 O TYR A 24 29.264 8.859 30.221 1.00 31.49
原子 168 N PHE A 25 31.473 8.437 29.901 1.00 21.41
原子 169 CA PHE A 25 31.546 9.091 28.625 1.00 18.28
原子 170 CB PHE A 25 32.885 9.831 28.479 1.00 22.56
原子 171 CG PHE A 25 32.945 11.076 29.294 1.00 22.04
原子 172 CD1 PHE A 25 33.336 11.040 30.625 1.00 22.70
原子 173 CD2 PHE A 25 32.496 12.281 28.757 1.00 29.30
原子 174 CE1 PHE A 25 33.264 12.190 31.432 1.00 25.64
原子 175 CE2 PHE A 25 32.415 13.440 29.557 1.00 28.31
原子 176 CZ PHE A 25 32.794 13.394 30.888 1.00 27.30
原子 177 C PHE A 25 31.385 8.046 27.534 1.00 20.94
原子 178 O PHE A 25 30.992 8.341 26.411 1.00 21.90
原子 179 N ASN A 26 31.708 6.793 27.868 1.00 25.83
原子 180 CA ASN A 26 31.598 5.697 26.899 1.00 27.61
原子 181 CB ASN A 26 33.020 5.296 26.396 1.00 28.31
原子 182 CG ASN A 26 33.737 6.469 25.737 1.00 29.50
原子 183 OD1 ASN A 26 34.438 7.267 26.395 1.00 38.35
原子 184 ND2 ASN A 26 33.508 6.626 24.462 1.00 32.35
原子 185 C ASN A 26 30.924 4.534 27.633 1.00 23.53
原子 186 O ASN A 26 31.274 4.214 28.753 1.00 23.60
原子 187 N LYS A 27 29.958 3.879 27.025 1.00 26.93
原子 188 CA LYS A 27 29.325 2.795 27.791 1.00 33.05
原子 189 CB LYS A 27 28.018 2.384 27.113 1.00 34.53
原子 190 CG LYS A 27 27.014 3.521 27.084 1.00 37.05
原子 191 CD LYS A 27 26.126 3.416 25.878 1.00 39.60
原子 192 CE LYS A 27 24.768 4.078 26.139 1.00 42.35
原子 193 NZ LYS A 27 24.244 4.674 24.865 1.00 39.82
原子 194 C LYS A 27 30.242 1.603 27.870 1.00 31.68
原子 195 O LYS A 27 30.732 1.173 26.848 1.00 31.77
原子 196 N PRO A 28 30.494 1.065 29.073 1.00 35.47
原子 197 CD PRO A 28 30.001 1.491 30.392 1.00 34.96
原子 198 CA PRO A 28 31.388 -0.110 29.148 1.00 36.66
原子 199 CB PRO A 28 31.468 -0.435 30.637 1.00 40.26
原子 200 CG PRO A 28 30.367 0.359 31.287 1.00 40.80
原子 201 C PRO A 28 30.784 -1.252 28.322 1.00 36.18
原子 202 O PRO A 28 29.558 -1.344 28.152 1.00 36.79
原子 203 N THR A 29 31.614 -2.107 27.763 1.00 34.63
原子 204 CA THR A 29 31.026 -3.155 26.945 1.00 41.92
原子 205 CB THR A 29 31.824 -3.391 25.661 1.00 51.94
原子 206 OG1 THR A 29 32.938 -4.249 25.947 1.00 52.79
原子 207 CG2 THR A 29 32.313 -2.071 25.086 1.00 55.75
原子 208 C THR A 29 30.897 -4.498 27.635 1.00 35.36
原子 209 O THR A 29 30.068 -5.322 27.238 1.00 34.58
原子 210 N GLY A 30 31.721 -4.720 28.643 1.00 33.36
原子 211 CA GLY A 30 31.659 -5.997 29.323 1.00 33.97
原子 212 C GLY A 30 32.109 -7.243 28.536 1.00 31.86
原子 213 O GLY A 30 32.227 -7.275 27.305 1.00 34.94
原子 214 N TYR A 31 32.265 -8.325 29.275 1.00 23.05
原子 215 CA TYR A 31 32.723 -9.576 28.690 1.00 25.72
原子 216 CB TYR A 31 33.144 -10.505 29.813 1.00 21.15
原子 217 CG TYR A 31 34274 -9.992 30.633 1.00 24.03
原子 218 CD1 TYR A 31 34.066 -9.497 31.892 1.00 17.01
原子 219 CE1 TYR A 31 35.106 -8.997 32.644 1.00 26.09
原子 220 CD2 TYR A 31 35.579 -9.983 30.121 1.00 29.13
原子 221 CE2 TYR A 31 36.616 -9.502 30.870 1.00 25.81
原子 222 CZ TYR A 31 36.383 -9.009 32.115 1.00 25.77
原子 223 OH TYR A 31 37.419 -8.560 32.875 1.00 34.26
原子 224 C TRR A 31 31.678 -10.274 27.840 1.00 29.45
原子 225 O TYR A 31 30.468 -10.172 28.112 1.00 30.08
原子 226 N GLY A 32 32.141 -10.990 26.808 1.00 29.62
原子 227 CA GLY A 32 31.228 -11.746 25.972 1.00 33.28
原子 228 C GLY A 32 30.235 -10.912 25.198 1.00 36.13
原子 229 O GLY A 32 29.161 -11.380 24.832 1.00 32.23
原子 230 N SER A 33 30.606 -9.668 24.937 1.00 41.08
原子 231 CA SER A 33 29.722 -8.787 24.217 1.00 47.10
原子 232 CB SER A 33 30.130 -7.331 24.386 1.00 46.73
原子 233 OG SER A 33 29.397 -6.557 23.463 1.00 52.64
原子 234 C SER A 33 29.816 -9.142 22.764 1.00 57.93
原子 235 O SER A 33 30.807 -9.735 22.317 1.00 57.01
原子 236 N SER A 34 28.772 -8.755 22.039 1.00 65.04
原子 237 CA SER A 34 28.657 -8.989 20.613 1.00 70.41
原子 238 CB SER A 34 28.414 -7.659 19.899 1.00 72.65
原子 239 OG SER A 34 27.049 -7.299 19.995 1.00 72.85
原子 240 C SER A 34 29.885 -9.671 20.028 1.00 71.58
原子 241 O SER A 34 30.642 -9.053 19.289 1.00 69.77
原子 242 CB THR A 41 30.810 6.812 19.043 1.00 59.11
原子 243 OG1 THR A 41 29.666 5.952 18.975 1.00 64.04
原子 244 CG2 THR A 41 31.511 6.892 17.700 1.00 59.18
原子 245 C THR A 41 31.044 6.416 21.449 1.00 51.54
原子 246 O THR A 41 30.689 5.415 22.079 1.00 55.44
原子 247 N THR A 41 32.206 4.887 19.817 1.00 58.60
原子 248 CA THR A 41 31.763 6.289 20.105 1.00 57.60
原子 249 N GLY A 42 30.804 7.654 21.870 1.00 35.08
原子 250 CA GLY A 42 30.159 7.853 23.151 1.00 21.75
原子 251 C GLY A 42 29.409 9.184 23.225 1.00 18.36
原子 252 O GLY A 42 29.011 9.724 22.200 1.00 21.32
原子 253 N ILE A 43 29.298 9.708 24.431 1.00 21.07
原子 254 CA ILE A 43 28.475 10.899 24.619 1.00 22.17
原子 255 CB ILE A 43 28.247 11.113 26.148 1.00 18.01
原子 256 CG2 ILE A 43 29.474 11.764 26.819 1.00 20.05
原子 257 CG1 ILE A 43 27.124 12.102 26.413 1.00 20.02
原子 258 CD1 ILE A 43 26.793 12.170 27.882 1.00 22.13
原子 259 C ILE A 43 28.947 12.145 23.921 1.00 25.61
原子 260 O ILE A 43 28.118 12.955 23.466 1.00 18.04
原子 261 N VAL A 44 30.260 12.336 23.748 1.00 19.35
原子 262 CA VAL A 44 30.629 13.560 23.090 1.00 19.83
原子 263 CB VAL A 44 32.187 13.809 23.157 1.00 22.51
原子 264 CG1 VAL A 44 32.587 14.916 22.238 1.00 29.90
原子 265 CG2 VAL A 44 32.568 14.056 24.605 1.00 22.31
原子 266 C VAL A 44 30.137 13.492 21.655 1.00 18.37
原子 267 O VAL A 44 29.664 14.477 21.127 1.00 20.08
原子 268 N ASP A 45 30.257 12.308 21.027 1.00 19.78
原子 269 CA ASP A 45 29.821 12.142 19.657 1.00 22.36
原子 270 CB ASP A 45 30.132 10.738 19.207 1.00 29.90
原子 271 CG ASP A 45 31.588 10.395 19.435 1.00 38.30
原子 272 OD1 ASP A 45 32.374 10.700 18.516 1.00 34.84
原子 273 OD2 ASP A 45 31.929 9.881 20.546 1.00 39.04
原子 274 C ASP A 45 28.304 12.345 19.531 1.00 23.03
原子 275 O ASP A 45 27.830 13.023 18.613 1.00 22.16
原子 276 N GLU A 46 27.610 11.772 20.489 1.00 21.13
原子 277 CA GLU A 46 26.139 11.784 20.505 1.00 24.96
原子 278 CB GLU A 46 25.676 10.660 21.418 1.00 32.84
原子 279 CG GLU A 46 24.220 10.314 21.307 1.00 38.09
原子 280 CD GLU A 46 23.877 8.973 21.913 1.00 41.51
原子 281 OE1 GLU A 46 24.713 8.378 22.621 1.00 41.76
原子 282 OE2 GLU A 46 22.739 8.505 21.689 1.00 45.60
原子 283 C GLU A 46 25.472 13.084 20.952 1.00 24.92
原子 284 O GLU A 46 24.450 13.450 20.376 1.00 23.35
原子 285 N CYS A 47 26.045 13.747 21.970 1.00 20.20
原子 286 CA CYS A 47 25.477 14.961 22.590 1.00 19.56
原子 287 C CYS A 47 26.174 16.282 22.474 1.00 28.23
原子 288 O CYS A 47 25.563 17.328 22.769 1.00 21.99
原子 289 CB CYS A 47 25.240 14.687 24.091 1.00 21.60
原子 290 SG CYS A 47 24.245 13.186 24.373 1.00 26.79
原子 291 N CYS A 48 27.452 16.263 22.074 1.00 18.45
原子 292 CA CYS A 48 28.181 17.537 21.940 1.00 17.21
原子 293 C CYS A 48 28.382 17.818 20.473 1.00 19.88
原子 294 O CYS A 48 28.082 18.890 20.040 1.00 23.54
原子 295 CB CYS A 48 29.521 17.456 22.686 1.00 22.56
原子 296 SG CYS A 48 30.678 18.814 22.279 1.00 25.89
原子 297 N PHE A 49 28.854 16.830 19.706 1.00 19.44
原子 298 CA PHE A 49 29.044 17.010 18.279 1.00 26.47
原子 299 CB PHE A 49 29.939 15.912 17.710 1.00 27.72
原子 300 CG PHE A 49 31.343 15.940 18.268 1.00 32.07
原子 301 CD1 PHE A 49 32.098 14.764 18.363 1.00 31.76
原子 302 CD2 PHE A 49 31.902 17.133 18.703 1.00 29.85
原子 303 CE1 PHE A 49 33.396 14.798 18.889 1.00 32.64
原子 304 CE2 PHE A 49 33.203 17.153 19.230 1.00 29.98
原子 305 CZ PHE A 49 33.938 15.987 19.320 1.00 24.87
原子 306 C PHE A 49 27.706 17.000 17.573 1.00 27.42
原子 307 O PHE A 49 27.561 17.598 16.517 1.00 31.83
原子 308 N ARG A 50 26.744 16.298 18.167 1.00 29.59
原子 309 CA ARG A 50 25.381 16.219 17.640 1.00 26.05
原子 310 CB ARG A 50 25.106 14.832 17.157 1.00 23.82
原子 311 CG ARG A 50 25.916 14.488 15.899 1.00 26.06
原子 312 CD ARG A 50 25.953 13.031 15.742 1.00 29.51
原子 313 NE ARG A 50 26.583 12.750 14.479 1.00 39.53
原子 314 CZ ARG A 50 27.849 12.386 14.370 1.00 41.06
原子 315 NH1 ARG A 50 28.603 12.260 15.466 1.00 40.37
原子 316 NH2 ARG A 50 28.354 12.198 13.163 1.00 40.98
原子 317 C ARG A 50 24.434 16.539 18.794 1.00 25.89
原子 318 O ARG A 50 24.864 16.563 19.966 1.00 19.42
原子 319 N SER A 51 23.161 16.811 18.501 1.00 25.83
原子 320 CA SER A 51 22.229 17.080 19.633 1.00 28.49
原子 321 CB SER A 51 21.122 18.082 19.248 1.00 29.44
原子 322 OG SER A 51 20.679 17.787 17.954 1.00 42.62
原子 323 C SER A 51 21.569 15.761 20.025 1.00 22.34
原子 324 O SER A 51 21.229 14.963 19.164 1.00 28.05
原子 325 N CYS A 52 21.385 15.517 21.325 1.00 21.96
原子 326 CA CYS A 52 20.771 14.278 21.762 1.00 24.73
原子 327 C CYS A 52 19.637 14.683 22.708 1.00 25.51
原子 328 O CYS A 52 19.616 15.780 23.240 1.00 23.80
原子 329 CB CYS A 52 21.791 13.373 22.494 1.00 24.55
原子 330 SG CYS A 52 22.331 13.922 24.151 1.00 28.05
原子 331 N ASP A 53 18.671 13.815 22.896 1.00 27.35
原子 332 CA ASP A 53 17.622 14.228 23.789 1.00 28.62
原子 333 CB ASP A 53 16.248 13.872 23.201 1.00 34.84
原子 334 CG ASP A 53 16.078 12.408 22.968 1.00 39.80
原子 335 OD1 ASP A 53 16.598 11.616 23.782 1.00 44.65
原子 336 OD2 ASP A 53 15.413 12.052 21.965 1.00 46.35
原子 337 C ASP A 53 17.848 13.616 25.147 1.00 23.60
原子 338 O ASP A 53 18.735 12.762 25.324 1.00 21.40
原子 339 N LEU A 54 17.012 14.005 26.099 1.00 20.38
原子 340 CA LEU A 54 17.163 13.558 27.477 1.00 14.25
原子 341 CB LEU A 54 16.015 14.169 28.329 1.00 21.53
原子 342 CG LEU A 54 16.024 13.807 29.805 1.00 22.22
原子 343 CD1 LEU A 54 17.283 14.383 30.476 1.00 21.85
原子 344 CD2 LEU A 54 14.733 14.336 30.497 1.00 20.36
原子 345 C LEU A 54 17.276 12.046 27.683 1.00 23.79
原子 346 O LEU A 54 18.075 11.598 28.496 1.00 23.74
原子 347 N ARG A 55 16.449 11.253 26.978 1.00 23.24
原子 348 CA ARG A 55 16.489 9.795 27.104 1.00 26.67
原子 349 CB ARG A 55 15.469 9.140 26.140 1.00 33.74
原子 350 CG ARG A 55 14.013 9.234 26.618 1.00 47.08
原子 351 CD ARG A 55 13.838 8.500 27.974 1.00 59.43
原子 352 NE ARG A 55 13.580 9.398 29.104 1.00 68.64
原子 353 CZ ARG A 55 14.359 9.527 30.182 1.00 73.73
原子 354 NH1 ARG A 55 15.485 8.813 30.302 1.00 74.93
原子 355 NH2 ARG A 55 14.028 10.401 31.134 1.00 72.23
原子 356 C ARG A 55 17.876 9.229 26.774 1.00 25.72
原子 357 O ARG A 55 18.365 8.348 27.470 1.00 28.77
原子 358 N ARG A 56 18.482 9.765 25.726 1.00 21.19
原子 359 CA ARG A 56 19.785 9.285 25.276 1.00 27.70
原子 360 CB ARG A 56 20.049 9.798 23.892 1.00 35.27
原子 361 CG ARG A 56 19.140 9.134 22.892 1.00 42.72
原子 362 CD ARG A 56 19.352 7.624 22.897 1.00 52.32
原子 363 NE ARG A 56 20.565 7.280 22.150 1.00 59.61
原子 364 CZ ARG A 56 21.142 6.075 22.108 1.00 61.66
原子 365 NH1 ARG A 56 20.646 5.046 22.789 1.00 64.42
原子 366 NH2 ARG A 56 22.244 5.906 21.389 1.00 62.77
原子 367 C ARG A 56 20.850 9.724 26.246 1.00 25.14
原子 368 O ARG A 56 21.755 8.952 26.618 1.00 25.99
原子 369 N LEU A 57 20.743 10.967 26.689 1.00 21.87
原子 370 CA LEU A 57 21.684 11.448 27.701 1.00 22.79
原子 371 CB LEU A 57 21.367 12.923 28.059 1.00 22.01
原子 372 CG LEU A 57 22.188 13.715 29.089 1.00 22.86
原子 373 CD1 LEU A 57 21.537 15.099 29.190 1.00 27.83
原子 374 CD2 LEU A 57 22.115 13.120 30.453 1.00 32.64
原子 375 C LEU A 57 21.665 10.578 28.970 1.00 20.53
原子 376 O LEU A 57 22.720 10.208 29.525 1.00 19.79
原子 377 N GLU A 58 20.486 10.199 29.479 1.00 18.07
原子 378 CA GLU A 58 20.425 9.390 30.682 1.00 17.97
原子 379 CB GLU A 58 18.951 9.351 31.198 1.00 24.34
原子 380 CG GLU A 58 18.883 8.941 32.660 1.00 36.31
原子 381 CD GLU A 58 17.473 9.016 33.227 1.00 41.86
原子 382 OE1 GLU A 58 17.316 8.902 34.474 1.00 39.29
原子 383 OE2 GLU A 58 16.549 9.198 32.406 1.00 36.76
原子 384 C GLU A 58 21.005 7.942 30.537 1.00 14.19
原子 385 O GLU A 58 21.331 7.279 31.508 1.00 26.60
原子 386 N MET A 59 21.172 7.487 29.307 1.00 15.83
原子 387 CA MET A 59 21.767 6.166 29.115 1.00 21.59
原子 388 CB MET A 59 21.626 5.746 27.672 1.00 23.71
原子 389 CG MET A 59 20.195 5.145 27.372 1.00 27.46
原子 390 SD MET A 59 19.916 5.067 25.648 1.00 38.20
原子 391 CE MET A 59 18.000 5.126 25.597 1.00 38.66
原子 392 C MET A 59 23.261 6.169 29.521 1.00 23.34
原子 393 O MET A 59 23.859 5.124 29.663 1.00 25.38
原子 394 N TYR A 60 23.847 7.353 29.726 1.00 19.16
原子 395 CA TYR A 60 25.266 7.386 30.144 1.00 18.17
原子 396 CB TYR A 60 25.982 8.549 29.452 1.00 18.20
原子 397 CG TYR A 60 26.144 8.364 27.992 1.00 20.05
原子 398 CD1 TYR A 60 25.193 8.855 27.086 1.00 20.40
原子 399 CE1 TYR A 60 25.339 8.675 25.713 1.00 22.99
原子 400 CD2 TYR A 60 27.245 7.686 27.482 1.00 23.58
原子 401 CE2 TYR A 60 27.398 7.501 26.131 1.00 24.88
原子 402 CZ TYR A 60 26.475 7.980 25.258 1.00 25.27
原子 403 OH TYR A 60 26.676 7.780 23.940 1.00 24.52
原子 404 C TYR A 60 25.406 7.424 31.634 1.00 22.93
原子 405 O TYR A 60 26.519 7.507 32.199 1.00 22.51
原子 406 N CYS A 61 24.290 7.385 32.352 1.00 18.42
原子 407 CA CYS A 61 24.402 7.303 33.809 1.00 15.63
原子 408 C CYS A 61 24.808 5.872 34.207 1.00 19.70
原子 409 O CYS A 61 24.394 4.908 33.563 1.00 25.04
原子 410 CB CYS A 61 23.065 7.562 34.511 1.00 22.45
原子 411 SG CYS A 61 22.415 9.181 34.212 1.00 24.27
原子 412 N ALA A 62 25.543 5.738 35.298 1.00 24.74
原子 413 CA ALA A 62 26.004 4.424 35.756 1.00 31.14
原子 414 CB ALA A 62 27.273 4.588 36.641 1.00 24.85
原子 415 C ALA A 62 24.902 3.747 36.563 1.00 36.05
原子 416 O ALA A 62 23.920 4.394 36.962 1.00 33.02
原子 417 N PRO A 63 25.014 2.427 36.780 1.00 44.06
原子 418 CD PRO A 63 26.021 1.447 36.310 1.00 47.05
原子 419 CA PRO A 63 23.942 1.803 37.576 1.00 46.88
原子 420 CB PRO A 63 24.182 0.296 37.393 1.00 47.68
原子 421 CG PRO A 63 25.651 0.166 37.068 1.00 49.88
原子 422 C PRO A 63 24.111 2.253 39.027 1.00 48.13
原子 423 O PRO A 63 23.135 2.412 39.773 1.00 54.36
原子 424 N LEU A 64 25.379 2.467 39.379 1.00 51.56
原子 425 CA LEU A 64 25.835 2.896 40.693 1.00 61.37
原子 426 CB LEU A 64 26.997 1.994 41.170 1.00 63.79
原子 427 CG LEU A 64 26.761 0.984 42.312 1.00 60.23
原子 428 CD1 LEU A 64 26.872 -0.435 41.767 1.00 61.06
原子 429 CD2 LEU A 64 27.781 1.210 43.447 1.00 58.43
原子 430 C LEU A 64 26.327 4.343 40.607 1.00 67.33
原子 431 O LEU A 64 27.441 4.612 40.132 1.00 71.54
原子 432 C1 CYC B 1 19.808 21.082 25.297 1.00 29.47
原子 433 C6 CYC B 1 19.974 19.730 24.564 1.00 31.45
原子 434 O21 CYC B 1 21.316 19.561 24.000 1.00 30.05
原子 435 C5 CYC B 1 19.707 18.570 25.545 1.00 24.70
原子 436 C4 CYC B 1 18.349 18.647 26.185 1.00 28.97
原子 437 C11 CYC B 1 18.069 17.503 27.203 1.00 25.55
原子 438 C10 CYC B 1 18.915 17.625 28.449 1.00 26.59
原子 439 C9 CYC B 1 18.774 19.062 29.167 1.00 22.28
原子 440 C15 CYC B 1 19.668 19.202 30.407 1.00 18.50
原子 441 C18 CYC B 1 19.488 18.173 31.529 1.00 17.96
原子 442 C17 CYC B 1 20.033 18.861 32.738 1.00 20.63
原子 443 C16 CYC B 1 20.478 20.370 32.210 1.00 19.19
原子 444 C43 CYC B 1 20.408 21.271 33.357 1.00 17.91
原子 445 C55 CYC B 1 21.476 20.723 34.438 1.00 26.47
原子 446 C56 CYC B 1 21.498 21.442 35.738 1.00 31.90
原子 447 C57 CYC B 1 22.417 22.653 36.015 1.00 39.26
原子 448 N59 CYC B 1 22.473 23.332 37.133 1.00 46.97
原子 449 C74 CYC B 1 23.443 24.507 37.216 1.00 56.76
原子 450 C75 CYC B 1 22.897 25.835 36.400 1.00 62.01
原子 451 C76 CYC B 1 23.920 27.038 36.528 1.00 66.74
原子 452 N77 CYC B 1 23.715 27.349 37.968 1.00 68.00
原子 453 C78 CYC B 1 24.623 27.135 39.017 1.00 72.42
原子 454 C80 CYC B 1 24.134 27.596 40.383 1.00 76.46
原子 455 O86 CYC B 1 22.731 28.037 40.272 1.00 73.03
原子 456 C81 CYC B 1 25.194 28.755 40.862 1.00 85.35
原子 457 O87 CYC B 1 25.451 29.858 39.876 1.00 86.03
原子 458 C82 CYC B 1 24.767 29.384 42.284 1.00 92.20
原子 459 O88 CYC B 1 23.400 29.939 42.115 1.00 92.22
原子 460 C83 CYC B 1 25.777 30.529 42.728 1.00 96.59
原子 461 O89 CYC B 1 27.124 29.924 42.873 1.00 99.38
原子 462 C84 CYC B 1 25.395 31.205 44.130 1.00 97.03
原子 463 O85 CYC B 1 26.318 32.274 44.541 1.00 95.57
原子 464 O79 CYC B 1 25.765 26.665 38.880 1.00 74.76
原子 465 C68 CYC B 1 21.737 23.120 38.324 1.00 39.41
原子 466 C69 CYC B 1 20.223 23.496 38.137 1.00 38.89
原子 467 C70 CYC B 1 19.523 23.355 39.421 1.00 38.22
原子 468 N71 CYC B 1 20.564 22.987 40.353 1.00 50.02
原子 469 C72 CYC B 1 20.399 22.763 41.607 1.00 55.62
原子 470 C90 CYC B 1 21.157 21.536 42.121 1.00 57.83
原子 471 O96 CYC B 1 20.407 20.319 41.993 1.00 56.55
原子 472 C91 CYC B 1 21.664 21.940 43.578 1.00 63.18
原子 473 O97 CYC B 1 21.600 20.757 44.471 1.00 63.88
原子 474 C92 CYC B 1 23.186 22.499 43.622 1.00 66.58
原子 475 O98 CYC B 1 23.971 21.462 44.307 1.00 68.12
原子 476 C93 CYC B 1 23.135 23.867 44.446 1.00 67.49
原子 477 O99 CYC B 1 22.357 24.774 43.597 1.00 66.74
原子 478 C94 CYC B 1 24.493 24.656 44.683 1.00 74.63
原子 479 O95 CYC B 1 24.178 25.865 45.490 1.00 80.12
原子 480 O73 CYC B 1 19.735 23.526 42.349 1.00 63.35
原子 481 O58 CYC B 1 23.106 22.977 35.125 1.00 40.42
原子 482 C54 CYC B 1 20.742 22.893 32.977 1.00 18.54
原子 483 C14 CYC B 1 19.521 20.648 31.087 1.00 23.61
原子 484 C19 CYC B 1 17.911 20.963 31.644 1.00 16.19
原子 485 C13 CYC B 1 19.810 21.781 30.035 1.00 19.97
原子 486 O20 CYC B 1 21.223 21.655 29.535 1.00 19.41
原子 487 C12 CYC B 1 18.975 21.668 28.869 1.00 17.80
原子 488 C8 CYC B 1 19.095 20.197 28.184 1.00 20.86
原子 489 C3 CYC B 1 18.129 20.072 26.867 1.00 26.70
原子 490 C7 CYC B 1 16.492 20.310 27.375 1.00 27.90
原子 491 C2 CYC B 1 18.448 21.212 25.824 1.00 28.19
原子 492 BR BR C 1 34.062 6.612 30.395 0.50 33.08
原子 493 O HOH W 1 19.167 24.790 26.224 1.00 26.47
原子 494 O HOH W 2 23.897 21.958 31.132 1.00 22.60
原子 495 O HOH W 3 21.553 23.642 27.485 1.00 29.42
原子 496 O HOH W 4 24.680 19.970 37.794 1.00 27.43
原子 497 O HOH W 5 30.918 19.401 40.676 1.00 23.25
原子 498 O HOH W 6 16.708 17.200 40.896 1.00 28.59
原子 499 O HOH W 7 16.516 25.080 41.353 1.00 25.88
原子 500 O HOH W 8 18.741 11.412 20.841 1.00 29.70
原子 501 O HOH W 9 27.307 23.459 25.693 1.00 22.59
原子 502 O HOH W 10 29.313 -4.298 41.568 1.00 37.18
原子 503 O HOH W 11 24.485 23.989 32.854 1.00 35.58
原子 504 O HOH W 12 17.430 11.457 36.970 1.00 26.36
原子 505 O HOH W 13 22.518 16.744 15.421 1.00 37.65
原子 506 O HOH W 14 22.764 17.648 22.807 1.00 29.54
原子 507 O HOH W 15 22.916 12.486 18.554 1.00 30.85
原子 508 O HOH W 16 21.127 13.160 16.233 1.00 67.05
原子 509 O HOH W 18 33.941 3.332 34.867 1.00 47.13
原子 510 O HOH W 19 28.659 24.132 37.361 1.00 34.15
原子 511 O HOH W 20 26.049 12.100 38.687 1.00 43.38
原子 512 O HOH W 22 22.998 5.484 43.119 1.00 56.07
原子 513 O HOH W 23 21.091 10.590 19.804 1.00 37.65
原子 514 O HOH W 24 27.553 20.681 37.920 1.00 40.51
原子 515 O HOH W 25 21.539 4.646 32.538 1.00 35.17
原子 516 O HOH W 35 36.200 4.986 34.099 1.00 55.94
原子 517 O HOH W 36 25.301 25.430 41.805 1.00 45.43
原子 518 O HOH W 37 28.063 14.145 40.069 1.00 39.11
原子 519 O HOH W 38 20.561 25.768 50.428 1.00 38.92
原子 520 O HOH W 39 22.841 23.744 25.080 1.00 40.88
原子 521 O HOH W 40 16.781 11.726 39.998 1.00 65.62
原子 522 O HOH W 41 29.705 23.094 40.234 1.00 40.48
原子 523 O HOH W 42 18.375 14.116 41.324 1.00 58.97
原子 524 O HOH W 43 15.538 9.778 20.639 1.00 61.25
原子 525 O HOH W 44 34.144 2.745 20.168 1.00 48.45
原子 526 O HOH W 45 20.621 8.952 42.429 1.00 33.04
原子 527 O HOH W 46 17.087 6.329 28.850 1.00 32.70
原子 528 O HOH W 47 25.800 23.668 39.622 1.00 46.80
原子 529 O HOH W 48 16.978 27.199 25.066 1.00 44.77
原子 530 O HOH W 49 22.764 7.118 24.736 1.00 38.06
原子 531 O HOH W 50 24.770 22.332 46.924 1.00 48.70
原子 532 O HOH W 51 21.688 25.678 41.327 1.00 52.53
原子 533 O HOH W 52 19.396 17.922 42.396 1.00 53.49
原子 534 O HOH W 53 21.375 18.431 46.997 1.00 57.91
原子 535 O HOH W 54 19.736 20.961 17.193 1.00 46.33
原子 536 O HOH W 55 30.374 4.915 45.161 1.00 52.15
原子 537 O HOH W 56 18.588 26.408 48.436 1.00 44.58
原子 538 O HOH W 57 23.722 24.504 28.990 1.00 38.53
Claims (50)
1.一种由IGF-1形成的晶体，其特征在于，所述晶体衍射x-射线辐射以产生代表IGF-1三维结构的衍射模式。
2.如权利要求1所述的晶体，其特征在于，所述晶体大致遵循下列晶胞常数a＝31.831，b＝71.055，c＝65.995和C2221的空间组。
3.如权利要求1所述的晶体，其特征在于，所述IGF-1包括A-，B-，C-和D-区域并在晶体中形成二聚体，其中所述晶体在二聚体的临界面处有一个受体结合位点。
4.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求1所述的晶体和载体。
5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述IGF-1再溶解时是有生物活性的。
6.一种治疗患有拮抗剂紊乱的哺乳动物的方法，其特征在于，所述方法包括给所述哺乳动物服用有效量的如权利要求5所述的组合物。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物是人。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述紊乱症是糖尿病、肥胖症、心脏功能紊乱、与艾滋病相关的消耗、肾紊乱、神经紊乱、整个身体的生长紊乱或免疫紊乱。
9.一种结晶IGF-1的方法，其特征在于，所述方法包括下列步骤：
(a)把含有IGF-1的水溶液与含有沉淀剂的储蓄液混合形成一定的混合体积；
(b)结晶所述混合体积。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述IGF-1是从原核细胞中获得的。
11.如权利要求9所述的方法，其特征在于步骤(a)中的水溶液含有1-50mg/ml的IGF-1。
12.如权利要求9所述的方法，其特征在于步骤(a)中的水溶液含有5-15mg/ml的IGF-1。
13.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述沉淀剂是聚乙二醇、柠檬酸钠、硫酸铵、甲次砷酸钠或它们的混合物。
14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述沉淀剂是用柠檬酸钠或甲次砷酸钠缓冲的聚乙二醇。
15.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述沉淀剂存在于储蓄液中，如果是聚乙二醇则其量为20-25％，如果是柠檬酸钠、硫酸铵或甲次砷酸钠则为1-10M。
16.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述储蓄液还包括去垢剂。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述去垢剂的量从10到50mM。
18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述去垢剂是N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺。
19.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述储蓄液的pH是从4到10。
20.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述pH值为6.5
21.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)通过蒸气扩散结晶法、分批结晶法、液桥结晶法或透析结晶法来进行。
22.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)通过蒸气扩散结晶法来进行。
23.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤(b)后IGF-1的再结晶。
24.如权利要求23所述的方法，其特征在于，所述再结晶利用甲基戊二醇进行。
25.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法还包括分离结晶的IGF-1。
26.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述水溶液是用以0.1M柠檬酸钠或0.1M甲次砷酸钠缓冲至pH6.5的24％的聚乙醇和1μl 1.4mM的N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺去垢剂混合而成的，此溶液用1ml以0.1M的柠檬酸钠或0.1M的甲次砷酸钠缓冲至pH6.5的1ML的24％的聚乙二醇通过蒸气扩散结晶饱和平衡直至形成晶体小滴，并向晶体小滴中加入2μl 100％的甲基戊二醇使晶体溶解过夜，由此形成新的晶体。
27.用如权利要求9所述方法制造的结晶IGF-1。
28.一种鉴定IGF-1间接拮抗剂的方法，其特征在于，所述方法包括下列步骤：
(a)比较N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺抑制IGF-1结合IGFBP-1或-3的能力与候选的IGF-1的间接拮抗剂抑制相同结合的能力；
(b)确定候选间接拮抗剂是否至少有与N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺相同的抑制效果。
29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述比较是通过N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺和候选间接拮抗剂之间竞争性分析而完成的。
30.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述结合抑制是通过预培养N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺或候选拮抗剂与在噬菌体颗粒上表达的IGF-1并用基于平板的ELISA分析来确定IGF-1与IGFBP-1或IGFBP-3结合的残基来测定的。
31.一种鉴定IGF-1的间接拮抗剂的方法，其特征在于，所述方法包括IGF-1与IGF-1的候选间接拮抗剂共结晶以形成共结晶结构并确定候选间接拮抗剂是结合IGF-1中的一组还是两组都结合，其特点是一组包括的氨基酸残基有Glu3、Thr4、Leu5、Asp12、Ala13、Phe16、Val17、Cys47、Ser51、Cys52、Asp53、Leu54和Leu57；第二组所包括的氨基酸残基有Val11、Gln15、Phe23、Phe25、Asn26、Val44、Phe49和Arg55，其中如果在共结晶结构中给定的一组的各个所列的氨基酸残基与候选拮抗剂有至少一个接触小于或等于6那么结合就会产生。
32.如权利要求31所述的方法，其特征在于，所述候选拮抗剂抑制IGF-1与IGFBP-1或-3之间发生结合的能力至少和N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺一样。
33.如权利要求32所述的方法，其特征在于，所述结合抑制使用N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺与候选拮抗剂之间的竞争性分析来测定。
34.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述结合抑制通过预培养N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺或候选拮抗剂与在噬菌体颗粒上的表达IGF-1并用基于平板的ELISA分析来确定IGF-1与IGFBP-1或IGFBP-3结合的残基而测定的。
35.IGF-1与N，N-双(3-D-葡糖氨基丙烷)-脱氧胆胺的共结晶复合物。
36.一种确定IGF-1三维结构的方法，其特征在于，所述方法包括：
(a)结晶IGF-1；
(b)照射结晶的IGF-1以获得具有结晶IGF-1的衍射模型的特征
(c)把衍射模型转化为IGF-1的三维结构。
37.一种机器可读数据储存介质，其特征在于，所述介质包括用机器可读数据编码的数据储存材料，当用适当的机器读取时，该储存介质显示含有IGF-1的分子的晶体的三维代表。
38.一种IGF-1晶体，其特征在于，所述晶体具有附录1中所示的结构同等物。
39.一种利用从IGF-1晶体中得到的IGF-1三维结构的方法，其特征在于，所述IGF-1的三维结构包括IGF-1受体结合区域，此方法包括鉴定含有与IGF-1三维结构的受体结合区域相互作用的结构和作为IGF-1拮抗剂或拮抗物的行驶功能的化合物。
40.如权利要求39所述的方法，其特征在于，所述IGF-1的三维结构包括与附录1中所列结构信息大致相同的α碳类似物。
41.一种鉴定IGF-1拮抗剂或拮抗物的方法，其特征在于，所述方法包括的步骤是：
(a)结晶IGF-1以形成IGF-1晶体，所述IGF-1晶体包括一组限定IGF-1受体结合区域的氨基酸残基；
(b)照射从步骤(a)中获得的IGF-1晶体以获得IGF-1晶体的衍射模型；
(c)从衍射模型中确定IGF-1三维结构，该结构包括IGF-1受体结合区域；
(d)鉴定具有三维结构的IGF-1拮抗剂或拮抗物，该拮抗剂或拮抗物在功能上复制必需的IGF受体结合、溶剂可进入的残基，该残基代表IGF-1受体结合区域的三维结构，所述IGF-1拮抗剂或拮抗物与IGF-1相比对IGF-1效应细胞具有改变的信号转导能力。
42.如权利要求41所述的方法，其特征在于，所述溶剂可进入的残基并不参与IGF-1临界面的形成。
43.一种设计能模拟IGF-1三维空间表面结构的化合物的方法，其步骤包括：
(a)确定IGF-1的三维结构；
(b)设计能模拟IGF-1三维空间表面结构的化合物。
44.一种鉴定结合IGF-1并阻抑IGFBP或受体与IGF-1结合的模拟肽的方法，其特征在于，所述方法包括的步骤是：
(a)用附录1中所提供的结构参数或结构同等物寻找分子结构数据库；
(b)从数据库中选择出能模拟IGF-1的结构参数或结构同等物的分子。
45.一种确定分子复合物的至少部分三维结构的方法，其特征在于，所述的复合物包括IGF-1且所述的方法包括的步骤有：
(a)确定IGF-1晶体的结构同等物；
(b)从结构同等物计算相位；
(c)由步骤(b)所得的相位的计算电子密度图谱；
(d)基于所述的电子密度图谱确定至少一部分复合物的结构。
46.如权利要求45所述的方法，其特征在于，在步骤(a)所用的结构同等物大致上与附录1所描述的那些相同或描述与附录1中的类似物基本相同的晶体。
47.一种评估化学物质与IGF-1或它的复合物相连的能力的方法，其特征在于，所述方法包括的步骤如下：
(a)利用计算或实验手段在化学物质和IGF-1或它的复合物之间进行适当的操作，因而获得与连接相关的数据；
(b)分析由步骤(a)获得的数据以确定化学物质和IGF-1或它的复合物之间的连接特征。
48.由权利要求47所述的方法鉴定的化学物质，其特征在于，所述个体在体内或体外妨碍IGF-1和它的受体或IGF-1和至少一种其结合蛋白之间的连接，或与IGF-1的结合位点的连接。
49.一种IGF-1结晶形式的重原子衍生物。
50.一种计算或实验评估化学物质以获得它与IGF-1的结合位点，缔合的信息的方法，其特征在于，所述方法使用具有附录中描述的结构同等物的IGF-1晶体。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US26797701P | 2001-02-09 | 2001-02-09 | |
| US28707201P | 2001-04-27 | 2001-04-27 | |
| PCT/US2002/003156 WO2002064627A2 (en) | 2001-02-09 | 2002-02-01 | Crystallization of igf-1 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1703425A true CN1703425A (zh) | 2005-11-30 |
| CN100439397C CN100439397C (zh) | 2008-12-03 |
Family
ID=26952796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB028047079A Expired - Fee Related CN100439397C (zh) | 2001-02-09 | 2002-02-01 | Igf-1的结晶 |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (8) | US7084240B2 (zh) |
| EP (3) | EP1358209B1 (zh) |
| JP (2) | JP4489352B2 (zh) |
| KR (1) | KR100872613B1 (zh) |
| CN (1) | CN100439397C (zh) |
| AT (2) | ATE439378T1 (zh) |
| AU (1) | AU2002255508B2 (zh) |
| BR (1) | BR0207422A (zh) |
| CA (1) | CA2431033A1 (zh) |
| DE (3) | DE60217066D1 (zh) |
| DK (2) | DK1358209T3 (zh) |
| ES (2) | ES2278020T3 (zh) |
| HK (1) | HK1060138A1 (zh) |
| HU (1) | HUP0500733A3 (zh) |
| IL (2) | IL156435A0 (zh) |
| MX (1) | MXPA03007042A (zh) |
| NZ (3) | NZ526672A (zh) |
| PL (1) | PL374181A1 (zh) |
| WO (1) | WO2002064627A2 (zh) |
| ZA (1) | ZA200304900B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101139391B (zh) * | 2007-08-21 | 2012-07-25 | 陈志南 | Cd147胞外区晶体结构及应用 |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1401476A4 (en) * | 2001-03-14 | 2006-03-08 | Genentech Inc | IGF ANTAGONIST PEPTIDES |
| US6914049B2 (en) * | 2001-09-18 | 2005-07-05 | Bioexpertise, Llc | IGF-binding protein-derived peptide or small molecule |
| CA2460719A1 (en) * | 2001-09-18 | 2003-03-27 | Bioexpertise, Llc | Igf-binding protein-derived peptide or small molecule |
| US20070219767A1 (en) * | 2003-05-06 | 2007-09-20 | Carter Daniel C | Atomic coordinates of albumin drug complexes and method of use of pharmaceutical development |
| WO2005041895A2 (en) * | 2003-11-03 | 2005-05-12 | New Century Pharmaceuticals, Inc. | Albumin binding sites for evaluating drug interactions and methods of evaluating or designing drugs based on their albumin binding properties |
| ES2348303T3 (es) | 2003-12-08 | 2010-12-02 | Cpex Pharmaceuticals, Inc. | Composiciones farmacauticas y procedimientos de tratamiento con insulina. |
| WO2006001911A2 (en) * | 2004-05-06 | 2006-01-05 | Genentech, Inc. | Crystal structure of the hepatocyte growth factor beta chain and methods of use |
| WO2005108424A1 (en) * | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Genentech, Inc. | Crystal structure of the complex of hepatocyte growth factor bata chain with met receptor and methods of use |
| EP2626368B1 (en) * | 2004-07-19 | 2016-12-21 | Biocon Limited | Insulin-oligomer conjugates, formulations and uses thereof |
| WO2006039622A2 (en) * | 2004-10-01 | 2006-04-13 | Invitrogen Corporation | Feeding buffers, systems, and methods for in vitro synthesis of biomolecules |
| US7556776B2 (en) * | 2005-09-08 | 2009-07-07 | President And Fellows Of Harvard College | Microfluidic manipulation of fluids and reactions |
| AU2008262387A1 (en) * | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Massachusetts Institute Of Technology | IGF for the treatment of Rett Syndrome and synaptic disorders |
| WO2009026172A2 (en) * | 2007-08-17 | 2009-02-26 | The Regents Of The University Of California | New approach for designing diabetes drugs |
| WO2009134395A2 (en) | 2008-04-28 | 2009-11-05 | President And Fellows Of Harvard College | Microfluidic device for storage and well-defined arrangement of droplets |
| JP5571186B2 (ja) * | 2009-07-22 | 2014-08-13 | イプセン ファルマ ソシエテ パール アクシオン サンプリフィエ | ５９位にアミノ酸置換を有するインスリン様増殖因子−１（ｉｇｆ−１）の類似体 |
| WO2011011071A2 (en) * | 2009-07-22 | 2011-01-27 | Ipsen Pharma S.A.S. | Analogues of insulin-like growth factor-1 (igf-1) |
| WO2011047204A1 (en) * | 2009-10-14 | 2011-04-21 | Mount Sinai School Of Medicine | Method of treating memory disorders and enhancing memory using igf-ii compounds |
| EP2830625A1 (en) * | 2012-03-28 | 2015-02-04 | Merck Sharp & Dohme Corporation | Insulin-like growth factor-1 receptor inhibitors |
| KR101711584B1 (ko) * | 2012-12-18 | 2017-03-02 | 재단법인 의약바이오컨버젼스연구단 | 변형된 eprs 단백질의 결정 구조 및 이의 결정화 방법 |
| KR102313381B1 (ko) | 2013-12-19 | 2021-10-14 | 퓨어테인 바이오사이언스, 엘엘씨. | 동물을 치료하기 위한 방법 |
| US20240050455A1 (en) * | 2020-06-01 | 2024-02-15 | Loma Linda University Health | Methods of treatment of a cytokine storm |
Family Cites Families (55)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US589867A (en) * | 1897-09-14 | Clothes-line hanger | ||
| US577276A (en) * | 1897-02-16 | Quarter-saver iv | ||
| US4672108A (en) * | 1981-12-07 | 1987-06-09 | Hoffmann-La Roche Inc. | Crystalline human leukocyte interferon |
| DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| WO1987001038A1 (en) * | 1985-08-22 | 1987-02-26 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Or | Peptide analogues of mammalian insulin-like growth factor-1 |
| DE3717370A1 (de) * | 1987-05-22 | 1988-12-01 | Hoechst Ag | Mischkristalle aus insulin und insulinderivaten, verfahren zur herstellung dieser mischkristalle, diese mischkristalle enthaltende pharmazeutische mittel und ihre verwendung zur behandlung von diabetes mellitus |
| US4833233A (en) * | 1987-08-20 | 1989-05-23 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Human serum albumin crystals and method of preparation |
| SE8703625D0 (sv) | 1987-09-18 | 1987-09-18 | Kabivitrum Ab | New medical use |
| US4876242A (en) * | 1987-09-21 | 1989-10-24 | Merck & Co., Inc. | Human insulin-like growth factor analoges with reduced binding to serum carrier proteins and their production in yeast |
| US5470828A (en) * | 1987-12-24 | 1995-11-28 | Gropep Pty. Ltd. | Peptide analogs of insulin-like growth factor II |
| DE3852636T2 (de) * | 1987-12-24 | 1995-05-04 | Gropep Pty Ltd | Peptid-analoge vom insulinähnlichen wachstums-faktor 1 (igf-1) oder faktor 2 (igf-2). |
| US4988675A (en) * | 1988-02-05 | 1991-01-29 | Ciba-Geigy Corporation | Method for preventing secondary effects |
| EP0327503B1 (en) * | 1988-02-05 | 1993-03-10 | Ciba-Geigy Ag | Use of igf i in the manufacture of a medicament for the treatment of renal diseases |
| US5093317A (en) * | 1989-06-05 | 1992-03-03 | Cephalon, Inc. | Treating disorders by application of insulin-like growth factor |
| GB8920381D0 (en) | 1989-09-08 | 1989-10-25 | Greater Glasgow Health Board | Treatment of insulin-resistant diabetes |
| US5028224A (en) * | 1990-01-09 | 1991-07-02 | Kimberly-Clark Corporation | Apparatus for intermittently depositing particulate material in a substrate |
| US5374620A (en) * | 1990-06-07 | 1994-12-20 | Genentech, Inc. | Growth-promoting composition and its use |
| US5126324A (en) * | 1990-06-07 | 1992-06-30 | Genentech, Inc. | Method of enhancing growth in patients using combination therapy |
| US5681814A (en) | 1990-06-07 | 1997-10-28 | Genentech, Inc. | Formulated IGF-I Composition |
| SE9100099D0 (sv) | 1991-01-11 | 1991-01-11 | Kabi Pharmacia Ab | Use of growth factor |
| US5187151A (en) * | 1991-02-12 | 1993-02-16 | Genentech, Inc. | Use of binding protein with igf-i as an anabolic growth promoting agent |
| US5202119A (en) * | 1991-06-28 | 1993-04-13 | Genentech, Inc. | Method of stimulating immune response |
| DK0597033T3 (da) * | 1991-08-01 | 1997-06-02 | Genentech Inc | IGF-1 til forbedring af den neurale tilstand |
| US5126314A (en) * | 1991-09-06 | 1992-06-30 | Eastman Kodak Company | Mixture of dyes for black dye donor for thermal color proofing |
| US6310040B1 (en) | 1991-11-08 | 2001-10-30 | Cephalon, Inc. | Treating retinal neuronal disorders by the application of insulin-like growth factors and analogs |
| EP0639981A4 (en) | 1992-05-08 | 1995-06-28 | Univ Jefferson | ANALOGS OF THE IGF FACTOR (01/18/94). |
| SE9201573D0 (sv) * | 1992-05-19 | 1992-05-19 | Kabi Pharmacia Ab | Use of igf-1 |
| JPH08507916A (ja) | 1992-06-09 | 1996-08-27 | カイロン コーポレイション | Ｍ−ｃｓｆの結晶化 |
| CA2136969C (en) * | 1992-06-12 | 2009-03-24 | Michael E. Lewis | Prevention and treatment of peripheral neuropathy |
| GB9217696D0 (en) | 1992-08-20 | 1992-09-30 | Agricultural & Food Res | Use of specific binding molecules |
| US5273961A (en) * | 1992-09-22 | 1993-12-28 | Genentech, Inc. | Method of prophylaxis of acute renal failure |
| EP0642350A4 (en) | 1993-01-25 | 1995-06-28 | Beth Israel Hospital | PROCESS FOR MODIFICATION, DIAGNOSIS AND SCREENING OF IGF-I SENSITIVE CELL BARRIER CHARACTERISTICS. |
| DK72793D0 (da) | 1993-06-21 | 1993-06-21 | Novo Nordisk As | Nyt produkt |
| US5534488A (en) * | 1993-08-13 | 1996-07-09 | Eli Lilly And Company | Insulin formulation |
| US5407810A (en) | 1993-08-20 | 1995-04-18 | Genentech, Inc. | Aqueous multiple-phase isolation of polypeptide |
| US5461031A (en) * | 1994-06-16 | 1995-10-24 | Eli Lilly And Company | Monomeric insulin analog formulations |
| US5504188A (en) * | 1994-06-16 | 1996-04-02 | Eli Lilly And Company | Preparation of stable zinc insulin analog crystals |
| SE9402370D0 (sv) | 1994-07-04 | 1994-07-04 | Pharmacia Ab | Use of IGF-I |
| US5597893A (en) * | 1994-10-31 | 1997-01-28 | Eli Lilly And Company | Preparation of stable insulin analog crystals |
| YU18596A (sh) * | 1995-03-31 | 1998-07-10 | Eli Lilly And Company | Analogne formulacije monomernog insulina |
| SE9501472D0 (sv) | 1995-04-21 | 1995-04-21 | Pharmacia Ab | Truncated IGF-I |
| WO1997000895A1 (en) | 1995-06-22 | 1997-01-09 | Biogen, Inc. | Crystals of fragments of cd40 ligand and their use |
| US5948751A (en) * | 1996-06-20 | 1999-09-07 | Novo Nordisk A/S | X14-mannitol |
| JP3417230B2 (ja) * | 1996-09-25 | 2003-06-16 | 信越化学工業株式会社 | 型取り母型用光硬化性液状シリコーンゴム組成物 |
| US5898067A (en) * | 1997-02-07 | 1999-04-27 | Novo Nordisk A/S | Crystallization of proteins |
| US5898028A (en) * | 1997-03-20 | 1999-04-27 | Novo Nordisk A/S | Method for producing powder formulation comprising an insulin |
| US6121416A (en) * | 1997-04-04 | 2000-09-19 | Genentech, Inc. | Insulin-like growth factor agonist molecules |
| JP2002510321A (ja) | 1997-07-03 | 2002-04-02 | スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション | 抗−第ＩＸ因子 Ｆａｂフラグメントの結晶構造およびペプチド模倣物デザインのための使用方法 |
| US5876242A (en) * | 1997-07-21 | 1999-03-02 | Williams; Hugh D. | Remote battery extension apparatus |
| CA2319252C (en) | 1998-01-21 | 2004-11-30 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Circulating insulin-like growth factor-i and prostate cancer risk |
| AU6515499A (en) | 1998-10-16 | 2000-05-08 | Musc Foundation For Research Development | Fragments of insulin-like growth factor binding protein and insulin-like growth factor, and uses thereof |
| EP2368902A3 (en) | 2000-03-29 | 2011-12-21 | DGI Bio Technologies LLC | Insulin and IGF-1 receptor agonists and antagonists |
| AU2002302640A1 (en) | 2001-06-07 | 2002-12-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Mutants of igf binding proteins and methods of production of antagonists thereof |
| US20040137518A1 (en) * | 2002-01-31 | 2004-07-15 | Lambert Millard Hurst | CRYSTALLIZED PPARa LIGAND BINDING DOMAIN POLYPEPTIDE AND SCREENING METHODS EMPLOYING SAME |
| JP3680801B2 (ja) * | 2002-02-27 | 2005-08-10 | 株式会社デンソー | 回転電機の巻線接合方法 |
-
2002
- 2002-02-01 DK DK02724908T patent/DK1358209T3/da active
- 2002-02-01 NZ NZ526672A patent/NZ526672A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-02-01 CN CNB028047079A patent/CN100439397C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-01 IL IL15643502A patent/IL156435A0/xx unknown
- 2002-02-01 NZ NZ548358A patent/NZ548358A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-02-01 PL PL02374181A patent/PL374181A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-02-01 JP JP2002564956A patent/JP4489352B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-01 DE DE60217066A patent/DE60217066D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-01 BR BR0207422-2A patent/BR0207422A/pt not_active Application Discontinuation
- 2002-02-01 EP EP02724908A patent/EP1358209B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-01 EP EP06026833A patent/EP1801120A1/en not_active Withdrawn
- 2002-02-01 CA CA002431033A patent/CA2431033A1/en not_active Abandoned
- 2002-02-01 HU HU0500733A patent/HUP0500733A3/hu unknown
- 2002-02-01 ES ES02724908T patent/ES2278020T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-01 MX MXPA03007042A patent/MXPA03007042A/es active IP Right Grant
- 2002-02-01 EP EP06026832A patent/EP1772464B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-01 KR KR1020037010465A patent/KR100872613B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-02-01 US US10/066,009 patent/US7084240B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-01 DE DE60233359T patent/DE60233359D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-01 ES ES06026832T patent/ES2331150T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-01 DK DK06026832T patent/DK1772464T3/da active
- 2002-02-01 DE DE60217066T patent/DE60217066T4/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-01 WO PCT/US2002/003156 patent/WO2002064627A2/en active IP Right Grant
- 2002-02-01 NZ NZ548359A patent/NZ548359A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-02-01 AT AT06026832T patent/ATE439378T1/de active
- 2002-02-01 AU AU2002255508A patent/AU2002255508B2/en not_active Ceased
- 2002-02-01 AT AT02724908T patent/ATE349469T1/de active
-
2003
- 2003-06-12 IL IL156435A patent/IL156435A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-06-24 ZA ZA2003/04900A patent/ZA200304900B/en unknown
-
2004
- 2004-05-03 HK HK04103092A patent/HK1060138A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-04-14 US US11/107,672 patent/US7238658B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-06-20 US US11/471,895 patent/US20060276397A1/en not_active Abandoned
- 2006-06-20 US US11/472,121 patent/US7354769B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-20 US US11/471,912 patent/US7297763B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-20 US US11/471,897 patent/US7433788B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-20 US US11/472,122 patent/US20060270839A1/en not_active Abandoned
- 2006-06-20 US US11/471,896 patent/US7596455B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-04-06 JP JP2009092074A patent/JP2009215299A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101139391B (zh) * | 2007-08-21 | 2012-07-25 | 陈志南 | Cd147胞外区晶体结构及应用 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1703425A (zh) | Igf－1的结晶 | |
| AU2002255508A1 (en) | Crystallization of IGF-1 | |
| AU2017298565B2 (en) | Insulin analogs | |
| CA2569095A1 (en) | Crystal structure of dipeptidyl peptidase iv (dpp-iv) and uses thereof | |
| EP3487876A1 (en) | Insulin analogs | |
| US6864080B2 (en) | Crystallization and structure of Staphylococcus aureus peptide deformylase | |
| US20100323427A1 (en) | Insulin degrading enzyme crystals | |
| US20040202644A1 (en) | Crystallization and structure of Staphylococcus aureus peptide deformylase | |
| WO2002002758A2 (en) | Crystallization and structure of staphylococcus aureus peptide deformylase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20081203 Termination date: 20130201 |