CN1695055A - 使用激光烧蚀技术的蛋白质分析方法 - Google Patents

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Abstract

一种使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，是为了用单一的激光源同时实现构成蛋白质的构成原子的原子化和离子化，通过向分析对象蛋白质照射激光，烧蚀该蛋白质，将蛋白质原子化成为构成元素，将原子化的构成元素离子化，分析离子化的构成元素的方法，向分析对象蛋白质照射从而烧蚀该蛋白质的激光是超短脉冲激光，通过对固定了蛋白质的芯片照射该超短脉冲激光，用超短脉冲激光烧蚀固定在该芯片上的蛋白质，将该蛋白质原子化成为构成元素的同时进行离子化，分析离子化的构成元素。

Description

使用激光烧蚀技术的蛋白质分析方法
技术领域
本发明涉及使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，更详细讲，涉及过去比较能够显著提高分析效率的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，涉及例如用于从生物体采集的标本中含有的蛋白质的质谱分析并且很合适的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法。
背景技术
近年来，质谱分析法的应用范围从物理和化学的领域向医学和生物化学等的生命科学领域快速地扩展着。特别是面向蛋白质的分子量的确定解析和氨基酸序列的确定解析等的发展显著。
这样的质谱分析法的原理是：用各种各样的方法将试样离子化，按照质量/电荷分离通过离子化而得到的离子，测定分离的各离子的强度。
过去的蛋白质质谱分析是对蛋白质本身附加电子进行离子化，解析其质量、或将高分子量的分子细分成低分子量的分子离子进行质谱分析，比较构成分子。
在此，作为过去的蛋白质质谱分析中的离子生成方法，例如知道的有对蛋白质冲击高能原子离子从而离子化的2次离子质谱分析(SIMS)法、通过电子冲击细分成低分子量的分子离子从而进行质谱分析的电子离子化(ED)法、基质支援激光离子化(MALDI)法等。
可是，在上述的任何方法中都存在下述的问题：为了质谱分析高分子离子，需要高分解能力的质谱分析装置；在中途分解生成的碎裂离子的存在使质谱的解析困难等等。
另一方面，历来在化学分析时，作为用同位素标记的试样的质谱分析方法，已知有例如利用毫微秒激光器进行原子化及离子化的激光原子化共振离子化(LARIMP)法。
可是，根据该LARIMP法，作为激光器，由于需要将标记元素进行原子化的原子化激光器和将原子化了的标记元素原子进行离子化的共振离子化激光器这2台激光源，因此存在系统构成变得复杂的问题。
而且，在LARIMP法中，如上述，由于需要将标记元素的原子共振离子化，因此需要对于各标记元素的原子照射固有波长的激光，在多种类的标记同位素混入的状况下进行高效率地分析是极为困难的，存在这一问题。
本发明是鉴于上述的现有技术具有的种种问题而完成的，其目的是提供使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，该方法是制备构成从生物体采集的标本所含的蛋白质等的各种蛋白质的构成原子的原子离子，分析所生成的原子离子的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，该方法是不需要使用高分解能力的分析装置的、使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法。更详细讲，提供如下所述使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，即在进行从生物体采集的标本所含的蛋白质等的各种蛋白质的质谱分析的情况下，排除质谱的解析变得困难的可能的同时，质谱分析装置不需要高分解能力。
另外，本发明的目的是提供使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，该方法能够用1台激光源同时实现构成从生物体采集的标本所含的蛋白质等的各种蛋白质的构成原子的原子化和离子化，能够大幅度简化激光器的照射控制。
而且，本发明的目的是提供在多种类的标记同位素混入的状况下也能够进行高效率地分析的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法。
发明内容
为了达到上述目的，本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，是通过超短脉冲激光烧蚀从生物体采集的标本所含的蛋白质等的各种蛋白质，将那些蛋白质进行原子离子化从而生成原子离子，分析生成的原子离子的方法。据此能够进行各种蛋白质的化学分析。
即，根据本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，通过用超短脉冲激光烧蚀从生物体采集的标本所含的蛋白质等的各种蛋白质，在将蛋白质分解成片段，并对构成该蛋白质的每个原子进行原子化的同时，将原子化的原子离子化成1价的离子，通过分析由该离子化而生成的原子离子来进行定量分析。
因此，在本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法中，在进行质谱分析的场合，质谱分析低质量的原子离子，不仅能够排除质谱解析变得困难的可能，而且不需要使用具备高分解能力的质谱分析装置。
另外，如上述，根据本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，通过用一种超短脉冲激光烧蚀蛋白质，在蛋白质原子化的同时，能够效率好地进行原子化的原子向一价离子的离子化。因此，激光器的照射控制变得简便的同时，例如在化学分析时可以同时使用多种类的标记元素，因此能够显著提高解析效率。
也就是说，在本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法中，由于能够用一种超短脉冲激光同时进行标记元素的原子化和离子化，因此能够大幅度简化分析作业，与过去比较，能够显著提高分析的效率。
而且，由于上述的离子化是利用超短脉冲激光的高的峰值强度通过非共振过程进行的离子化(非共振离子化)，因此即使在多种类的标记同位素混入的状况下也能够分别离子化各标记原子，易于应用于对多标记系，能够进行高精度且高效率的高分子分析。
即，本发明是通过向分析对象蛋白质照射激光以烧蚀该蛋白质，从而将蛋白质原子化成为构成元素，将原子化的构成元素离子化，分析离子化的构成元素的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，向分析对象蛋白质照射激光从而烧蚀该蛋白质的激光是超短脉冲激光，通过对固定了蛋白质的芯片照射该超短脉冲激光，用超短脉冲激光烧蚀固定在该芯片上的蛋白质，在将该蛋白质原子化成构成元素的同时，进行离子化，分析离子化了的构成元素。
另外，本发明是使固定了上述蛋白质芯片，通过特定的蛋白质与对固定在该芯片上的该特定的蛋白质进行特异结合的物质反应、结合从而在该芯片上固定该特定的蛋白质的发明。
另外，本发明是对上述特定的蛋白质进行特异的结合的物质为与蛋白质有特异结合性的分子的发明。
另外，本发明是上述与蛋白质有特异结合性的分子为与蛋白质进行特异结合的核酸的发明。
另外，本发明是上述对特定的蛋白质进行特异结合的物质为发挥蛋白质彼此的特异结合作用的蛋白质的发明。
另外，本发明是上述发挥使蛋白质彼此特异结合的作用的蛋白质为抗体的发明。
另外，本发明中，固定了上述蛋白质芯片是对固定了上述抗体的芯片施加含有与上述抗体反应的蛋白质的溶液，使与上述抗体反应的蛋白质与上述抗体反应，使与上述抗体反应的蛋白质与上述抗体结合而制备的。
另外，本发明是对固定在上述芯片上的蛋白质附带元素标记的发明。
另外，本发明是使上述元素标记为稳定同位素标记的发明。
另外，本发明是使用嘌呤霉素衍生物标记上述元素标记的。
另外，本发明是采用夹层法标记上述元素标记的。
另外，本发明是上述元素标记直接标记在样品中的蛋白质上的。
另外，本发明是使上述芯片为多通道化的芯片的发明。
另外，本发明是将含有分析对象蛋白质的样品和在该分析对象蛋白质上附带标记的标记蛋白质溶液混合，加在固定有特定蛋白质的上述芯片上，进行使对上述固定的特定蛋白质特异结合的物质、上述分析对象蛋白质、和上述标记蛋白质竞争结合的竞争性分析(competitive assay)。
另外，本发明是向分析对象蛋白质照射从而烧蚀该蛋白质的超短脉冲激光的脉冲时间宽为10微微秒或以下、峰值输出为10兆瓦或以上的发明。
另外，本发明是向分析对象蛋白质照射超短脉冲激光从而烧蚀该蛋白质，所述脉冲激光的脉冲时间宽为1毫微微秒或以上1微微秒或以下、峰值输出为1千兆瓦或以上10千兆瓦或以下的发明。
另外，本发明是通过移动烧蚀蛋白质的短脉冲激光和分析对象蛋白质中的至少一方，利用该烧蚀蛋白质的短脉冲激光无遗漏、无重复地烧蚀该分析对象蛋白质从而进行分析的。
另外，本发明是、上述离子化的构成元素的分析为采用飞行时间法(飞行时间)进行的质谱分析的发明。
另外，本发明是、将固定在上述芯片侧的物质以混合物形式固定，使带有按想要测定的每个物质而不同的标记的溶液与该混合物反应，从该混合物检测出多个种类的物质的发明。
另外，本发明是在上述芯片上固定样品，施加以多个种类标记了针对测定对象的抗体的物质，测定多个物质的发明。
在此，在本发明中，在采用超短脉冲激光烧蚀蛋白质时，对蛋白质照射1节(1脉冲)超短脉冲激光即可。可是，也可以向蛋白质照射多节(多个脉冲)超短脉冲激光，向蛋白质照射的超短脉冲激光的节数(脉冲数)适宜选择即可。
另外，超短脉冲激光优选脉冲时间宽为10微微秒或以下，例如使用从脉冲时间宽为1毫微微秒或以上1微微秒或以下的通常被称为毫微微秒激光器的激光器照射的毫微微秒激光是适当的。
另外，作为超短脉冲激光的峰值输出优选为10兆瓦或以上，更详细讲，优选1千兆瓦或以上10千兆瓦或以下。
其理由是因为，当超短脉冲激光的峰值输出大至10千兆瓦或以上时，生成多价离子，质谱的解析有可能变得困难，当超短脉冲激光的峰值输出为10兆瓦或以下时，原子化·离子化的效率降低，观察原子离子信号有可能变得困难。
根据后述的本申请发明人的实验，例如在脉冲时间宽为110毫微微秒、峰值输出为2千兆瓦的场合，能够得到极良好的结果。
另外，根据本发明，使能够在原子化的同时效率好地进行离子化的毫微微秒激光等的超短脉冲激光照射在用同位素等标记的蛋白质试样上。因此，不需要选择性地离子化标记元素，可使用各种各样的标记元素。而且，能够将激光器照射的反复速率提高到几kHz，因此适合于高速解析。
另外，在本发明中，通过移动烧蚀从生物体采集的标本所含的蛋白质等的分析对象的各种蛋白质的短脉冲激光和该分析对象蛋白质中的至少一方，利用该短脉冲激光无遗漏、无重复地烧蚀该分析对象蛋白质从而进行分析。即，在本发明中，例如通过短脉冲激光的斑点和固定了作为试样的分析对象蛋白质芯片的移动，能够在宽阔的面积上没有遗漏·重复地烧蚀所固定的多个蛋白质试样。其中固定了针对想要分析的对象蛋白质的抗体的芯片可利用通过抗原抗体反应固定了蛋白质的芯片等，特别有效。
根据本发明，从这些特征看，解析速度与过去比较格外快。
在此，作为本发明的具体的应用例，例如固定了上述抗体的芯片为用抗原抗体反应固定了蛋白质的芯片的蛋白质的解析，其将解析高速化变得可能。
此时，根据本发明，作为标记可使用元素标记。更详细讲，作为元素标记可使用多种同位素，作为元素标记例如如果使用稳定同位素，则标记的种类可增加至多种类的稳定同位素的数量(270种)。这意味着与过去的标记法荧光法(2-6种)和放射性同位素(约10种)比较，能够飞跃地增加信息量。
更详细讲，作为在固定了抗体的芯片为用抗原抗体反应固定了蛋白质的芯片的蛋白质解析实验中使用的标记，例如可采用周期表中1族的稳定同位素39K、41K等、周期表中16族的稳定同位素32S、35S等、周期表中17族的稳定同位素35Cl、37Cl等、周期表中过渡金属的稳定同位素118Sn、120Sn等的稳定同位素标记蛋白质。
使蛋白质与上述芯片上的成为靶的蛋白质结合后，用超短脉冲激光器烧蚀，进行分子的原子离子化，在那以后例如如果用质谱分析器检测出质量则能够定量结合的蛋白质内所含的同位素的量。因此，通过计算标记分子的量比，能够分析成为靶的蛋白质。
在此，与目前所利用的标记相比，例如如果使用稳定同位素则能将标记的种类增加到270种。
而且，当混合用不同的元素标记的3种以上的多个蛋白质，同时使用与靶结合反应的多通道化的芯片时，能够比较多个试样间的数据。
这样，根据本发明，能够确立多种稳定同位素标记的高灵敏度·高速质谱分析法，因此，本发明能够应用在用荧光色素或放射性同位素进行标记的全部的研究领域。
另外，根据本发明，标记元素不使用放射性同位素而能够使用稳定同位素，因此在此情况下，所使用的设施不受限制，因此也能够面向医疗设施或民用企业设置。
另外，在本发明中，关于一次地使用多个标记的多通道化，将固定在芯片侧的物质不象显微阵列那样按每个种类点化，而是作为混合物固定，在那里使带有按每个想要测定的物质而不同的标记的溶液反应，则能够从一个点检测出多个种类的物质。
这样，能够大幅度节省制作显微阵列的手续，能够简单地制作调整含有使用者要测定的物质的溶液的定做的基片。
另外，相反地也能够将样品放置在基片上，例如如果施加以各种各样的种类标记了针对想要测定的对象的抗体的物质，则能够测定多个物质。
附图的简单说明
图1是实施本发明的使用激光烧蚀技术的蛋白质分析方法时能够使用的分析系统的一例、即分析蛋白质的质量的质谱分析系统的构成的一例的概念构成说明图。
图2是表示本发明的使用激光烧蚀技术的蛋白质分析方法的一例的说明图。
图3是用抗体作为标记要测定的蛋白质的手段的夹层法的说明图。
图4是本申请发明人的实验1中使用的成为靶的芯片的说明图。
图5是表示本申请发明人的实验1的实验结果，表示采用四极质谱分析器测定的点1以及点2的采用烧蚀技术得到的质谱的曲线图。
图6是只抽取显示图5所示的点2的采用烧蚀测定的质谱的曲线图。
图7是本申请发明人的实验2中使用的成为靶的芯片的说明图。
图8是表示在实验2中使用的芯片1及芯片2与显示测定结果的图的对应关系的说明图。
图9是芯片1中的点1的采用烧蚀测定的TOF光谱的曲线图。
图10是芯片1中的点2的采用烧蚀测定的TOF光谱的曲线图。
图11是芯片2中的点1的采用烧蚀测定的TOF光谱的曲线图。
图12是芯片2中的点2的采用烧蚀测定的TOF光谱的曲线图。
图13是实验3的样品浓度为0.2mg/ml的场合的采用烧蚀测定的TOF光谱的曲线图。
图14是表示从TOF光谱算出的钐(Sm)的检出量的图表。
图15是表示样品浓度和检测出的Sm量的关系的曲线图。
符号说明
10质谱分析系统
12真空槽
14靶
16四极质谱分析器
18旋转导入端子
20超短脉冲激光器
22聚焦透镜
100芯片
102抗体
104标记蛋白质
106样品
108样品中所含的目标蛋白质
200芯片
202抗体
206样品
208样品中所含的目标蛋白质
210标记元素
212抗体(标记抗体)
1000基片
2000基片
实施发明的最佳方案
以下一边参照附图一边详细说明本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法的一例实施方案。
根据本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，能够分析从生物体采集的样本中所含的蛋白质等的各种蛋白质。
图1中作为实施本发明的使用激光烧蚀技术的蛋白质分析方法时能够使用的分析系统的一例，显示出分析蛋白质的质量的质谱分析系统的构成的一例的概念构成说明图。
该质谱分析系统10具有可设定成例如10-8-10-6Torr的真空度的真空槽12、配置在该真空槽12内的靶14、配置在真空槽12内的作为质谱分析器的四极质谱分析器16、旋转靶14的旋转导入端子18、射出例如毫微微秒激光等的超短脉冲激光向靶14照射的超短脉冲激光器20、和将由超短脉冲激光器20照射的超短脉冲激光聚光到靶14上的聚焦透镜22。
在此，作为超短脉冲激光器20，例如能够使用可照射脉冲时间宽为1毫微微秒或以上1微微秒或以下、峰值输出为1千兆瓦或以上10千兆瓦或以下的超短脉冲激光的激光器。
更详细讲，这样的超短脉冲激光器20，例如能够使用采用钛蓝宝石激光器构成、具备以下所示的参数的激光器。即：
峰宽(脉冲时间宽)：～110fs(毫微微秒)
输出：50-480μJ(微焦耳)
(峰值输出：0.5-4GW(千兆瓦特))
波长：～800nm(纳米)
反复：1kHz(千赫兹)
另外，四极质谱分析器16，相对于由超短脉冲激光器20射出并照射到靶14上的超短脉冲激光的照射方向，在90度垂直的方向设置着。
作为质谱分析器，代替上述的四极质谱分析器16，自然也可以使用飞行时间型质谱分析器(TOF MASS)。
另外，将由超短脉冲激光器20射出的超短脉冲激光聚光的聚焦透镜22的焦点距离例如设定在25cm。
在以上的构成中，关于使用上述的质谱分析系统10等，利用本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法进行质谱分析的手段进行说明。
在此，本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，是采用由毫微微秒激光器等的超短脉冲激光器20射出的超短脉冲激光的烧蚀、和四极质谱分析器16或飞行时间型质谱分析器等的质谱分析器的分析，进行检测、分析从生物体采集的标本中含有的蛋白质等的各种蛋白质的试样。
即，本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，是通过向分析对象蛋白质照射激光以烧蚀该蛋白质，将蛋白质原子化成构成元素，将原子化的构成元素离子化，分析离子化的构成元素的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，向分析对象蛋白质照射从而烧蚀该蛋白质的激光是超短脉冲激光，通过对固定了蛋白质的芯片照射该超短脉冲激光，用超短脉冲激光烧蚀固定在该芯片上的蛋白质，将该蛋白质原子化成为构成元素的同时进行离子化，分析离子化的构成元素。
具体讲，将固定了蛋白质的芯片作为靶14配置在真空槽12内，向作为靶14的芯片照射由超短脉冲激光器20射出的毫微微秒激光等的超短脉冲激光，进行烧蚀，采用四极质谱分析器16或飞行时间型质谱分析器等的质谱分析器分析。
此时，当采用元素标记等使成为分析对象的蛋白质带有标记时，将固定了带有标记的蛋白质芯片作为靶14配置在真空槽12内，向作为靶14的芯片照射由超短脉冲激光器20射出的毫微微秒激光等的超短脉冲激光，进行烧蚀，采用四极质谱分析器16或飞行时间型质谱分析器等的质谱分析器测定标记元素，由此能够检测出、分析成为对象的蛋白质。
在此，作为固定了蛋白质的芯片，例如能够使用固定了蛋白质的芯片，其中所述蛋白质和与固定在芯片上的与特定蛋白质特异结合的物质(例如抗体)反应并结合，使所述蛋白固定。具体讲，固定了蛋白质的芯片，例如能够使用经抗原抗体反应固定了蛋白质的芯片，其中固定了针对分析对象蛋白质的抗体。
因此，固定了标记了的蛋白质芯片例如能够如以下那样制备。
即，在固定了对特定的蛋白质特异结合的物质(抗体等)的芯片上，施加作为样品的标记了的蛋白质的溶液等，使标记了的蛋白质和上述进行特异结合的物质反应，将标记了的蛋白质之中的特定的蛋白质固定在芯片上。而且，通过进行固定了标记了的蛋白质之中的特定的蛋白质芯片的洗涤，得到固定了标记了的蛋白质芯片。
在此，使用与DNA芯片同样地在一片芯片上固定了好几种分别与特定的蛋白质进行特异的结合的物质(抗体等)的芯片，通过使用固定了与该好几种的进行特异的结合的物质(抗体等)分别结合的蛋白质芯片，可同时地测定多种类的蛋白质。
另外，作为对固定在芯片上的特定蛋白质进行特异的结合的物质，能够使用与蛋白质有特异结合性的分子、以及象抗原抗体等那样发挥蛋白质彼此的特异的结合作用的蛋白质。
作为与蛋白质有特异结合性的分子，例如能够使用与抗体相同的进行特异结合的被称为适体的核酸。适体能够使用下述被称为SELEX的手段制备：从无规合成的低核苷酸的组中选择与蛋白质等的称为靶的物质结合性高的物质。
另外，作为象抗原抗体等那样发挥蛋白质彼此的特异的结合作用的蛋白质，除了抗原抗体之外，还能够使用形成配基和受体、或复合体的蛋白质等已知在生物体内特异地结合的蛋白质等。
在此，参照图2更详细地说明上述的本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法的一例。
即，在上述的本发明的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法中，首先制备固定了针对想要检测出的蛋白质的抗体102的芯片100。
其次，将想要检测出的蛋白质采用体外翻译等合成，用该蛋白质中不含有的元素(例如Se、Eu、Sm、Tb、Fe等的稳定同位素)标记，制备标记蛋白质104。
在此，作为标记方法，例如可使用selemethionine法、使用了嘌呤霉素衍生物的体外病毒法等。
在体外病毒法中，一般是采用荧光色素的标记等，但合成元素标记体，能够用与采用荧光色素的场合同样的方法进行元素标记。
其次，测定几种改变了合成的标记蛋白质104的浓度的溶液，取得校正曲线。
接下来，混合从生物体采集的样品106(例如血清等)和作了浓度调整的标记蛋白质溶液，将混合的混合物加在芯片100上，进行竞争性分析，通过抗原抗体反应，进行使抗体102和标记蛋白质104以及样品106中所含的目标蛋白质108竞争性结合的竞争性分析，在将结合、固定了抗体102和标记蛋白质104以及样品106中所含的目标蛋白质108的芯片100洗涤并干燥后，将固定了该目标蛋白质108的芯片100作为靶14照射来自超短脉冲激光器20的毫微微秒激光进行烧蚀，利用四极质谱分析器16或飞行时间型质谱分析器测定标记元素，由此测定标记蛋白质104与抗体102反应的量，检测出、分析样品106中所含的目标蛋白质108的浓度。
在此，根据芯片的状态校正曲线有产生差异的可能性，因此为了防止这个，希望在相同芯片上同时进行校正曲线的制备和样品的测定。
即，为了解决这样的问题，将结合了抗体和标记蛋白质以及样品中所含的目标蛋白质芯片进行多通道化即可，通过该多通道化，能够进一步提高上述的本发明手段的精度。
该多通道化例如能够采用以下说明的手段实现。
也就是说，根据芯片的状态校正曲线有产生差异的可能性，因此为了防止这个，希望在相同芯片上同时进行校正曲线的制备和样品的测定，为此，要进行A蛋白质的测定时，制备按浓度而不同的标记(例如用Fe的几种同位素标记)的标记蛋白质的溶液，将它与样品混合，在固定了抗体的芯片上使之反应，则可以同时进行校正曲线制备和样品测定。
其次，作为标记想要测定的蛋白质的手段，除了上述的在与样品混合前预先合成标记蛋白质的方法之外，还可以使用使用了抗体的夹层法。关于该夹层法，参照图3说明。
在该夹层法中，首先在固定了针对想要检测出的目标蛋白质的抗体202的芯片200上使样品206反应，使样品206中含有的目标蛋白质208和抗体202结合。
其次，从与抗体202结合的样品206中所含的目标蛋白质208之上加上利用标记元素210标记的抗体(标记抗体)212，使样品206中所含的目标蛋白质208和标记抗体212反应而结合。
其次，在将结合了抗体202和蛋白质208和采用标记元素210标记的标记抗体212的芯片200洗涤、干燥之后，将该芯片200作为靶14照射来自超短脉冲激光器20的毫微微秒激光进行烧蚀，利用四极质谱分析器16或飞行时间型质谱分析器测定标记元素210，由此检测出、分析样品206中所含的目标蛋白质208的浓度。
另外，作为夹层法，不限于上述，例如也可以将想要检测出的目标蛋白质夹住，将夹入时的上侧的抗体的产出物选择与固定在芯片上的抗体不同的物质再从上面加标记的第二抗体检测出。
另外，作为标记想要测定的蛋白质的手段，也可以使用直接标记样品中的蛋白质的手段。
具体讲，例如也可以用碘标记样品中含有的蛋白质。作为用碘标记该蛋白质的手段，例如可使用Iodo-Bead法(Pieree公司的商标)进行。
在使用直接标记了样品中的蛋白质的样品的场合，将该样品加在固定了针对想要检测出的目标蛋白质的抗体的芯片上，使样品中含有的想要检测出的目标蛋白质和抗体反应，利用抗原抗体反应，结合样品中含有的想要检测出的目标蛋白质和抗体。
其次，将结合了样品中含有的想要检测出的目标蛋白质和抗体的芯片洗涤、干燥后，将该芯片作为靶14照射来自超短脉冲激光器20的毫微微秒激光进行烧蚀，利用四极质谱分析器16或飞行时间型质谱分析器测定标记元素，由此检测出、分析样品中所含的想要检测出的目标蛋白质的浓度。
以下使用上述的质谱分析系统10，关于本发明人进行的质谱分析的实验结果进行说明。
(1)实验1
(1-1)芯片的制备
首先关于成为靶14的芯片的制备参照图4说明。该芯片的制备如以下那样进行。
即，使用聚L-赖氨酸包被载玻片作为基片1000。该聚L-赖氨酸包被载玻片是通过如下方式形成的，将载玻片用NaOH处理后，浸渍在3％聚L-篦麻蛋白溶液中1小时，用水洗涤后，在80℃干燥。其次，分别以0.2mg/ml的浓度在PBS中分解兔抗人血红蛋白抗体(Sigma公司制)、兔抗人IgG抗体，在如上述那样地制备的聚L-赖氨酸包被载玻片上分别涂点(参照图4：点1是兔抗人IgG抗体，点2是兔抗人血红蛋白抗体)。用含有3％去脂乳，0.1％Tween-20的PBS溶液去除多余的抗体之后，浸渍在含有3％去脂乳，0.02％叠氮化钠的封闭性溶液中，在4℃静静放置一夜。再以10,000xg离心10分钟后，用PBS洗涤，去除封闭性溶液，制备固定了抗体的芯片。
在此，基片的材质可以是玻璃，也可以是金属或绝缘体。在使用了超短脉冲激光的激光烧蚀中，导热度高的基片给予更高的离子检测效率。作为基片是使用固体的基片，作为该基片使用的固体的热导率优选是0.1W·m-1K-1或以上。
(1-2)蛋白质溶液的制备和反应
其次，进行蛋白质溶液的制备和与固定在芯片上的抗体的反应。该蛋白质溶液的制备和反应如以下那样进行。
将人血红蛋白(和光纯药工业制)以2mg/ml的浓度溶解在PBS中，制备了蛋白质的溶液。从固定了抗体的芯片振落多余的PBS，马上将蛋白质溶液加到固定了抗体的芯片表面，从上面静静地覆盖盖玻片，在4℃静静放置2小时。其后，将该芯片浸渍在PBS中，除掉盖玻片和蛋白质溶液，在0.005M Tris-HCl，0.005％Tween20、pH7.8下处理，接着用PBS处理后，干燥，得到成为靶14的芯片。
(1-3)测定
将如上述那样制备的靶14安装到真空槽12内，将真空槽12内抽吸成真空，进行设定使真空槽12内的真空度达到10-6Torr或以下。
其次，使用聚焦透镜22将由超短脉冲激光器20射出的超短脉冲激光聚光到靶14上，烧蚀在靶14上形成的点1或点2。
由超短脉冲激光器20射出的超短脉冲激光的脉冲宽是110毫微微秒，输出是230μJ。
采用四极质谱分析器16测定由于超短脉冲激光向靶14照射而产生的一价的离子的质量。
图5表示出采用上述手段由四极质谱分析器16测定的点1及点2的由烧蚀得到的质谱。另外，图6是只抽取显示图5所示的点2的采用烧蚀测定的质谱的曲线图。
由这些图5及图6所示的实验结果明确知道，从点2检测出Fe，利用本发明的手段能够检测出血红蛋白。
在上述的实验1中，要检测的蛋白质未带元素标记，但如实验2及实验3所示，自然带有元素标记的蛋白质也能够解析。以下说明实验2及实验3。
(2)实验2
(2-1)芯片的制备
首先关于成为靶14的芯片的制备参照图7说明。该芯片的制备如以下那样进行。
即，使用聚L-赖氨酸包被载玻片作为基片2000。该聚L-赖氨酸包被载玻片，将载玻片用NaOH处理后，浸渍在3％聚L-篦麻蛋白溶液中1小时，用水洗涤15分钟后使之干燥而制备。其次，分别以0.1mg/ml的浓度在PBS溶液中溶解抗链霉抗生物素蛋白抗体(Cortex Biochem公司制)及抗鼠IgG抗体(Southern Bitechnology Associates公司制)，将所得的溶解物以3μl/点在如上述那样地制备的聚L-赖氨酸包被载玻片上分别如图7所示那样地涂点，自然干燥(在图7中，点1是抗链霉抗生物素蛋白抗体，点2是抗鼠IgG抗体)。然后，将干燥的聚L-赖氨酸包被载玻片在含有1.5％BSA、0.1％叠氮化钠、0.05％Tween40的Tris-HCl溶液(pH7.8)中浸渍15分钟，洗涤，接着浸渍在含有1.5％BSA、0.1％叠氮化钠的Tris-HCl溶液(pH7.8)中，在4℃静静放置一夜。再以10,000xg离心10分钟后，用PBS洗涤，去除封闭性溶液。
准备2片上述那样制备的芯片(参照图8：芯片1及芯片2)。
(2-2)蛋白质溶液的制备和反应
将用铕(Eu)标记的链霉抗生物素蛋白(Perkin Elmer公司制)以0.2mg/ml溶解在Tris-HCl溶液(pH7.8)中，在芯片1的点1及点2上滴加3μl，在室温静静放置2小时。其后，利用含有0.1％Tween20的Tris-HCl溶液(pH7.8)在室温将芯片1洗涤30分钟，自然干燥(参照图8)。
另外，将用铕(Eu)标记的鼠IgG抗体(Perkin Elmer公司制)以0.2mg/ml溶解在Tris-HCl溶液(pH7.8)中，在芯片2的点1及点2上滴加3μl，在室温静静放置2小时。其后，利用含有0.1％Tween20的Tris-HCl溶液(pH7.8)在室温将芯片2洗涤30分钟，自然干燥(参照图8)。
(2-3)测定
测定方法与实验1的情况相同，但使由超短脉冲激光器20射出的超短脉冲激光的输出为120μJ，并使用飞行时间型质谱朴分析器进行质量测定，在该点上与实验1的测定方法不同。该实验2的实验结果示于图9-图12中。在此，图9表示出芯片1中的点1的测定结果，图10表示出芯片1中的点2的测定结果，图11表示出芯片2中的点1的测定结果，图12表示出芯片2中的点2的测定结果。
由这些图9-图12所示的实验结果知道，使用在其上附加的标记能够检测出样品溶液中所含的蛋白质。
(3)实验3
用与实验2同样的方法制备芯片，使改变了浓度的测定蛋白质溶液反应，进行定量性的研究。
在此，蛋白质溶液的制备如以下进行。即，制备分别含有0.002mg/ml、0.02mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml的用钐(Sm)标记了的链霉抗生物素蛋白(Perkin Elmer公司制)的Tris-HCl溶液(pH7.8)，在与实验2同样的条件下使抗链霉抗生物素蛋白抗体与涂点的芯片反应进行测定。
图13表示出样品浓度为0.2mg/ml的情况的测定结果，图14表示出从质谱算出的Sm的检出量。由该结果，按照图15所示的一样，判明：通过使用本发明的手段，能够定量地测定样品溶液中所含的测定蛋白质的量。
根据本发明，通过利用超短脉冲激光器烧蚀用单个或多个的同位素标记的蛋白质，将构成元素完全地原子离子化，通过质谱分析离子化了的标记元素，能够进行蛋白质的定量测定。据此，能够将多种的同位素作为标记使用。因此，能够飞跃性地扩展能够质谱分析的蛋白质的对象范围。
也就是说，根据本发明，将用同位素标记的蛋白质本身在原子水平下离子化，检测出标记元素变得可能，因此能够飞跃性地扩展能够质谱分析的对象范围。例如，由于可以使用同位素作为标记，能够将标记的种类增加至例如作为稳定同位素的数量的270种。这与过去的标记法荧光法(2种)或放射性同位素(约10种)比较，能够飞跃性地增加信息量。
在上述的实施方案中，作为质谱分析器使用了四极质谱分析器，但并不限于此，如上述，能够使用通过测定原子的飞行时间来进行质谱分析的飞行时间质谱分析器，在此种情况下，经一次的激光器照射就能够同时进行多个的原子的质谱分析。另外，作为质谱分析器使用离子回旋加速器型傅立叶变换质谱分析器的场合也能够同时进行多个的原子的质谱分析。
另外，在上述的实施方案中，作为蛋白质分析方法说明了质谱分析，但并不限于此，关于质谱分析以外的分析，自然也可以使用本发明。
另外，在上述的实施方案中，作为移动靶14的移动装置，使用了转动靶14的旋转导入端子18，但并不限于此，也可以使用可放置靶14的移动自如的工作台等的适宜的移动装置。
另外，在上述的实施方案中，通过使用旋转导入端子18旋转靶14，从而没有遗漏·重复地烧蚀靶14，但并不限于此，设置移动超短脉冲激光对靶的照射位置的移动装置，也可以没有遗漏·重复地烧蚀靶14。
另外，在上述的实施方案中，关于一次地使用多个标记的多通道化，将固定在芯片侧的物质不象显微阵列那样按每个种类点化，而是以混合物形式固定，在那里使带有按每个想要测定的物质而不同的标记的溶液反应，则能够从一个点检测出多个种类的物质。
这样，能够大幅度节省制作显微阵列的手续，能够简单地制作制备含有使用者要测定的物质的溶液的定做的基片。
另外，相反地也能够将样品放置在基片上，例如如果洒上以不同的种类标记了针对想要测定的对象的抗体的物质，则能够测定多个物质。
工业实用性
本发明如以上说明的那样构成，能够提供不需要高分解能力的分析装置的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，该方法是生成构成蛋白质的构成原子的原子离子，分析生成的原子离子的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，获得了这种优异的效果。在此，更详细讲，例如在进行质谱分析的场合，能够排除质谱的解析变得困难的可能，同时不需要高分解能力的质谱分析装置，得到这一优异效果。
另外，本发明如以上说明的那样构成，因此获得了能够大幅度简化系统构成的优异效果。
而且，本发明如以上说明的那样构成，因此获得了在多种的标记同位素混入的状况下也能够进行高效率地分析的优异效果。

Claims (20)

1.一种使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，是通过向分析对象蛋白质照射激光，烧蚀该蛋白质，从而将蛋白质原子化成为构成元素，将原子化的构成元素离子化，分析离子化的构成元素的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，其中向分析对象蛋白质照射从而烧蚀该蛋白质的激光是超短脉冲激光，通过对固定了蛋白质的芯片照射该超短脉冲激光，用超短脉冲激光烧蚀固定在该芯片上的蛋白质，将该蛋白质原子化成为构成元素的同时进行离子化，分析离子化的构成元素。
2.根据权利要求1所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述固定了蛋白质的芯片是固定了特定蛋白质的芯片，其中所述的特定蛋白质与下述物质反应并结合，所述物质与该固定到上述芯片上的特定蛋白质特异结合。
3.根据权利要求2所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，与上述特定的蛋白质特异结合的物质是与蛋白质有特异结合性的分子。
4.根据权利要求3所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述与蛋白质有特异结合性的分子是与蛋白质特异结合的核酸。
5.根据权利要求2所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述与特定的蛋白质特异结合的物质是发挥使蛋白质彼此特异结合的作用的蛋白质。
6.根据权利要求5所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述发挥使蛋白质彼此特异结合的作用的蛋白质是抗体。
7.根据权利要求6所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，其中上述固定了蛋白质的芯片是通过如下方法制备的，即向上述固定了上述抗体的芯片施加含有与上述抗体反应的蛋白质的溶液，使与上述抗体反应的蛋白质和上述抗体反应，使与上述抗体反应的蛋白质和上述抗体结合而制备的。
8.根据权利要求1-7的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述固定到芯片上的蛋白质是带有元素标记的。
9.根据权利要求8所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述元素标记为稳定同位素标记。
10.根据权利要求8-9的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述元素标记是使用嘌呤霉素衍生物标记的。
11.根据权利要求8-9的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述元素标记是采用夹层法标记的。
12.根据权利要求8-9的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述元素标记是直接标记在样品中的蛋白质上的。
13.根据权利要求8-12的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述芯片为多通道化的芯片。
14.根据权利要求1-10或13的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，其中混合含有分析对象蛋白质的样品和在该分析对象蛋白质上带有标记的标记蛋白质溶液，加在上述芯片上进行竞争性分析，其中对固定到所述芯片上的特定蛋白质特异结合的物质、上述分析对象蛋白质和上述标记蛋白质竞争性地结合，所述特定蛋白质固定到所述芯片上。
15.根据权利要求1-14的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，向分析对象蛋白质照射从而烧蚀该蛋白质的超短脉冲激光，其脉冲时间宽为10微微秒或以下，峰值输出为10兆瓦或以上。
16.根据权利要求15所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，向分析对象蛋白质照射从而烧蚀该蛋白质的超短脉冲激光，其脉冲时间宽为1毫微微秒或以上1微微秒或以下，峰值输出为1千兆瓦或以上10千兆瓦或以下。
-17.根据权利要求1-16的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，通过移动烧蚀蛋白质的短脉冲激光和分析对象蛋白质中至少一方，利用该烧蚀蛋白质的短脉冲激光无遗漏、无重复地烧蚀该分析对象蛋白质从而进行分析。
18.根据权利要求1-17的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，上述离子化的构成元素的分析是采用飞行时间法进行的质谱分析。
19.根据权利要求1-6的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，将待固定在上述芯片侧的物质以混合物形式固定，使带有按想要测定的每个物质而不同的标记的溶液与该混合物反应，从该混合物检测出多个种类的物质。
20.根据权利要求1-6的任1项所述的使用了激光烧蚀技术的蛋白质分析方法，在上述芯片上固定样品，施加以多个种类标记了的针对测定对象的抗体，测定多个物质。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120085903A1 (en) * 2009-06-03 2012-04-12 Wayne State University Mass spectometry using laserspray ionization
CN109541012A (zh) * 2018-11-23 2019-03-29 杭州汇健科技有限公司 一种用于质谱分析的通用型纳米芯片及其制备方法与应用

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080020474A1 (en) * 2004-03-30 2008-01-24 Riken Method of Analyzing Biosample by Laser Ablation and Apparatus Therefor
DE102007043456B4 (de) * 2007-07-31 2012-02-09 Bruker Daltonik Gmbh Matrixunterstützte Laserdesorption hoher Ionisierungsausbeute
US8207494B2 (en) * 2008-05-01 2012-06-26 Indiana University Research And Technology Corporation Laser ablation flowing atmospheric-pressure afterglow for ambient mass spectrometry
DE102009018021B4 (de) 2009-04-18 2013-09-05 Helmholtz-Zentrum Berlin Für Materialien Und Energie Gmbh Mikrodosiersystem mit einem gepulsten Laser
US8742334B2 (en) * 2012-07-09 2014-06-03 The United States of America, as represented by the Secretary of Commerce, The National Institute of Standards and Technology Spinning cell device for fast standardization in laser ablation inductively coupled plasma spectrometry
CN112868086A (zh) * 2018-10-18 2021-05-28 Dh科技发展私人贸易有限公司 使与质谱系统一起应用的取样元件官能化的方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2301451A1 (en) * 2000-03-20 2001-09-21 Thang T. Pham Method for analysis of analytes by mass spectrometry
US7229500B2 (en) * 2000-11-20 2007-06-12 Parallel Synthesis Technologies, Inc. Methods and devices for high throughput crystallization
JP3640387B2 (ja) * 2001-02-27 2005-04-20 独立行政法人理化学研究所 レーザーアブレーションを用いた高分子の分析方法およびそのシステム
US20030232450A1 (en) * 2002-06-13 2003-12-18 Yoshikazu Yoshida Microfluidic device and method for producing the same
US20060214104A1 (en) * 2004-10-26 2006-09-28 Invitrogen Corporation Compositions and methods for analyzing biomolecules using mass spectroscopy
US20070116607A1 (en) * 2005-11-23 2007-05-24 Pharmacom Microlelectronics, Inc. Microsystems that integrate three-dimensional microarray and multi-layer microfluidics for combinatorial detection of bioagent at single molecule level

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120085903A1 (en) * 2009-06-03 2012-04-12 Wayne State University Mass spectometry using laserspray ionization
CN102741965A (zh) * 2009-06-03 2012-10-17 韦恩州立大学 使用激光喷雾电离的质谱法
US9202680B2 (en) 2009-06-03 2015-12-01 Wayne State University Mass spectometry using laserspray ionization
US20180012745A1 (en) * 2009-06-03 2018-01-11 Wayne State University Mass spectrometry using laserspray ionization
CN109541012A (zh) * 2018-11-23 2019-03-29 杭州汇健科技有限公司 一种用于质谱分析的通用型纳米芯片及其制备方法与应用

Also Published As

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