CN1687787A - 一种目视检测尿液中无机磷的方法及其试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种目视检测尿液中无机磷的方法及其试剂盒，该方法使用镱离子、以邻苯二酚紫为显色剂在pH为6.5－7.5的HEPES缓冲溶液中直接滴加一定体积的尿液，然后与色阶对照，得出尿液中的无机磷含量的范围，此方法适合于大、中、小型医院，诊所及家庭中使用。

Description

一种目视检测尿液中无机磷的方法及其试剂盒
技术领域：
本发明涉及一种无机磷的检测方法，具体属于一种临床上目视检测尿液中无机磷的方法及其试剂盒。
背景技术：
无机磷参与各种重要的生物矿化过程，诸如骨骼的形成以及肾结石的起源等病理过程。因此，生物液体中无机磷的检测是很重要的。我们知道尿液在临床事件中有很重要的诊断价值，所以检测人体尿液中无机磷是很有必要的。尿液中无机磷过多或过少会引起结石病、前列腺疾病、甲状旁腺机能减退或亢进、晚期慢性肾炎、多发性骨髓瘤、佝偻病或软骨病等，如果不及时治愈，甚至引起更大的其它疾病。因此维持尿液中一定浓度的无机磷很关键。由此看来定期的监测尿液中的无机磷是必不可少的。我们可以通过定期监测尿液中的无机磷的含量，了解生物体的代谢状况及有关病变状态。目前，大型医院基本普及用各种类型的半自动、全自动临床生化分析仪，并使用无机磷试剂盒(钼试剂)通过直接紫外法去测定尿液中无机磷的含量。我们也发明了使用邻苯二酚紫-HEPES-Yb3+这个体系，并通过紫外可见仪去检测尿液中无机磷的方法(专利申请号200410012448.1)。需要指出，以上临床检验包括我们发明的方法都是基于试剂盒与紫外可见光谱仪配套使用，无法实现试剂盒的目视使用。小型医院及诊所由于缺乏大型设备，而无法把测定病人尿液中无机磷作为临床上的一个常规检验。因此，以上的临床检验法缺乏方便和普及性。
发明内容：
本发明的目的在于克服试剂盒和大型仪器配套测定尿液中的无机磷的昂贵和不方便，使得小型医院和小诊所无法实现对尿液中无机磷的测定的现实，发明一种在任何医院及家庭中可以随时目视检测尿液中无机磷的方法，这种方法廉价、简单、快速、而且装置可以随身携带，可以普及使用。
本发明提供一种目视检测尿液中无机磷的方法，该方法基于镱离子、以邻苯二酚紫为显色剂在pH为6.5-7.5的HEPES缓冲溶液中直接滴加一定体积的尿液，然后与标准色阶对照，得出尿液中的无机磷含量的范围，此方法适合于大、中、小型医院，诊所及家庭中使用。
标准色阶的制定：在含有50μM的邻苯二酚紫、100μM的YbCl3、pH＝7.0且浓度为10mM的HEPES缓冲溶液中，从左起第二个比色管到第六个比色管中分别加入HPO4 2-溶液，使得HPO4 2-的浓度分别为20、40、60、80、100μM，得到标准的色阶图(见图1)，即：从左到右的颜色依次为，兰色、淡兰、兰绿、黄绿、淡黄、深黄，代表相应的尿样浓度范围为：＜5mM、5～12mM、12～20mM，20～30mM、30～42mM、42～50mM。具体检测步骤如下：
(1)、称取HEPES，用蒸馏水溶解，再用NaOH溶液调pH6.5-7.5，最后定容，得到10mM的HEPES缓冲溶液，标记为R1；称取邻苯二酚紫，用蒸馏水溶解，得到2mM的邻苯二酚紫溶液，标记为R2；称取YbCl3，用蒸馏水溶解，得到2mM的Yb3+溶液，标记为R3；
(2)、按照R1、R2、R3体积比为40∶1∶2，加入比色管中，此时溶液为蓝色；
(3)、取体积为R3体积1/25的尿样，用进样器加到上述比色管中，摇振20-30s后，与标准色阶进行对照，得出尿样中无机磷浓度范围。
所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
按照上述方法可进一步制成目视检测尿液中无机磷的试剂盒。该试剂盒的组成包括：
试剂R1：浓度为10mM，pH＝7.0的HEPES缓冲溶液；
试剂R2：浓度为2mM的邻苯二酚紫溶液；
试剂R3：浓度为2mM的YbCl3溶液；
一张标准的色阶图纸；还有包装。
试剂盒的使用方法：
1.按照R1、R2、R3试剂体积比为40∶1∶2，加入比色管中，此时溶液为蓝色；
2.取体积为R3试剂体积1/25的尿样，用进样器加到上述比色管中，摇振20-30s后，与色阶图纸进行对照，得出尿样中无机磷浓度范围。
本发明具有如下优点：1、我们的检测对象是未稀释的尿样，省去预处理程序，在临床上带来很大的方便；2、相对钼试剂测定的取样体积20μl，反应时间是2min，我们的取样体积更少(4μl)，反应时间更短(20-30s)；3、我们的测定是通过肉眼比色确定其浓度范围，能脱离大型一起单独使用，检测过程简单、效果明显；4、我们的装置和试剂廉价、简单、便于携带，适合与任何大、小型医院，诊所及家庭中使用，有很广泛的普及性和社会价值性。
附图说明：
图1是本发明标准色阶图。
图2至图10是相应实施例1至实施例9的检测尿液中无机磷浓度的颜色图。
具体实施方式：
实施例1：
称取HEPES(C8H18N2O4S，FW＝238.30)0.238g，用蒸馏水95ml溶解，再用0.1M的NaOH调pH7.0，最后定容为100ml，得到10mM的HEPES缓冲溶液，标记为R1；称取邻苯二酚紫(C19H14O7S，FW＝386.30)0.0386g，用蒸馏水溶解并定容为25ml，得到2mM的邻苯二酚紫溶液，标记为R2；称取YbCl3(FW＝279.5)，用蒸馏水溶解并定容为25ml，得到2mM的Yb3+溶液，标记为R3。把2ml的R1溶液加到干净的比色管中，用微量进样器吸取R250μl和R3100μl，加到此比色管中，此时溶液蓝色。在上述的比色管中，取成人尿样4μl，用微量进样器加到此比色管中，摇振后，颜色为兰绿色，与标准的色阶对照，发现此尿样无机磷浓度在12-20mM之间。结果见图2。
按实施例1测10个健康成人尿样，得尿液中无机磷含量范围为12-30mM。与医学上统计的尿中无机磷的正常排出浓度(12～42mM)稳合。
实施例2：
配制pH6.5的HEPES(10mM)缓冲溶液，其余同实施例1，得尿液中无机磷含量范围为12-20mM。结果见图3。
实施例3：
取一周岁健康小孩尿液，其余同实施例1，但得到的颜色为淡黄色，与标准色阶对照，发现小孩尿样中无机磷的含量范围为42-50mM。结果见图4。从上述实施例中，我们看出小孩尿液中的无机磷含量偏高，这是因为小孩与大人相比而言，由于小孩处于成骨旺盛期，碱性磷酸酶活性较高以及代谢速度相当快等原因所造成。
实施例4：用Yb(ClO4)3的溶液，取另一成人的尿液，其余同实施例1，此尿样无机磷浓度在12-20mM之间。结果见图5。
实施例5：用ErCl3的溶液，其余其余同实施例1，此尿样无机磷浓度在12-20mM之间，结果见图6。
实施例6：用Nd(ClO4)3的溶液，其余同实施例1，此尿样无机磷浓度在12-20mM之间，结果见图7。
实施例7：用Sm(ClO4)3的溶液，其余同实施例1，此尿样无机磷浓度在12-20mM之间，结果见图8。
实施例8：用GdCl3的溶液，其余同实施例1，此尿样无机磷浓度在12-20mM之间，结果见图9。
实施例9：用HoCl3的溶液，其余同实施例1，此尿样无机磷浓度在12-20mM之间，结果见图10。

Claims (4)

1、一种目视检测尿液中无机磷的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
(1)、称取HEPES，用蒸馏水溶解，再用NaOH溶液调pH6.5-7.5，最后定容，得到10mM的HEPES缓冲溶液，标记为R1；称取邻苯二酚紫，用蒸馏水溶解，得到2mM的邻苯二酚紫溶液，标记为R2；称取YbCl3，用蒸馏水溶解，得到2mM的Yb3+溶液，标记为R3；
(2)、按照R1、R2、R3体积比为40∶1∶2，加入比色管中，此时溶液为蓝色；
(3)、取体积为R3体积1/25的尿样，用进样器加到上述比色管中，摇振20-30s后，与色阶进行对照，得出尿样中无机磷浓度范围。
2、按权利要求1所述的一种检测尿液中无机磷的方法，其特征在于所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
3、按权利要求1或2所述的一种检测尿液中磷酸根的方法，其特征在于所述的Yb3+用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
4、一种目视检测尿液中无机磷方法的试剂盒，该试剂盒包括：浓度为10mM，pH＝7.0的HEPES缓冲溶液；浓度为2mM的邻苯二酚紫溶液；浓度为2mM的YbCl3溶液和标准色阶图。
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