JP2023526727A - 最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】 本開示により、薬剤師等が調剤を行う過程で、必要な情報を効率よく収集し、調剤過誤や医薬品の品質の確保がなされ、調剤された医薬品及び提供する医薬品情報の質を向上させることができる調剤支援処理装置および調剤支援システムを提供することである。【解決手段】 最近生存している歯科用細胞片のための生体内試験のシステム及び方法が、本明細書に開示される。本発明は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）のような細胞片の存在を試験することによって、歯内腔および歯の他の領域からの細胞片の存在について検出するための方法および装置を開示する。試料は歯や歯内腔から採取され、化学指示薬と組み合わせて、ルミネセンスリーダーで感知される指示薬の検出可能な変化を引き起こします。サンプル中のＡＴＰのレベルは、歯や歯内腔にまだ存在する汚染のレベルに対応し、歯を洗浄・消毒するために必要な追加の手順があれば、それを決定するために使用することができる。歯や歯内腔のサンプルを採取するこの方法は、迅速で、患者の傍らで、手頃な価格で、簡単に細胞の汚染レベルを決定する方法を可能にします。【選択図】図１
Description
本発明は、一般に、歯科治療方法に関し、より具体的には、最近生存している歯科用細胞破片の生体内試験のシステムおよび方法に関するものである。
本特許出願の開示内容の一部は、著作権保護の対象となる資料を含んでいる可能性がある。所有者は、特許商標庁の特許ファイルまたは記録に記載されている特許文書または特許開示の何人によるファクシミリ複製にも異議を唱えないが、それ以外はすべての著作権を留保する。
本書で言及されている特定のマークは、出願人または譲受人と提携または無関係な第三者のコモンロー商標または登録商標である場合がある。これらのマークの使用は例示であり、説明的なものとして解釈されるべきではなく、また、本発明の範囲をこれらのマークのみに関連する材料に限定するものとして解釈されるべきではない。
歯髄は歯の中にあり、物理的外傷、微生物汚染、化学的外傷など様々な理由で損傷を受け、その結果、歯は炎症を起こし、しばしば感染性のプロセスを経て、歯とその支持構造に損傷を与える。根管治療とは、歯の内部の炎症や感染プロセスを抑え、理想的には除去し、歯の周囲の構造物の治癒を可能にする方法ある。すなわち、根管治療とは、歯髄組織を除去し、根管内部の微生物を除去する治療法である。その後、根管内に残存する微生物や歯髄組織を封鎖するために様々な材料を充填し、根管腔の再感染を防ぐとともに、根管内から炎症シグナルが漏れないようにする。根管治療が完了すると、歯の機能を回復し、根管の再感染を防ぐために、根管は充填材で封鎖されるか、クラウンで覆われる。
根管治療では、歯髄にアクセスするために、歯科医師は歯冠から歯科用ドリルを使って歯を開くことが一般的である。その後、歯科医師は各種金属製のファイルを使って根管を拡大し、歯髄や微生物を機械的に除去する。歯と歯内腔の消毒により、機械的器具では除去できない付加的な歯髄組織や微生物を除去する様々なリンス、溶液、その他の方法によって化学的に補助することもできる。また、歯科医師は、根管内に存在する可能性のある重要な微生物の数をさらに減らすために、追加の診察日程を組むこともある。
根管治療終了後に根管内に残った組織片、微生物片、生菌は、根管治療の失敗となり、患者の歯の周囲にＸ線写真による画像で骨量の減少が続き、痛みや腫れなどの症状が出る可能性があります。歯の中にある細胞片のレベルを簡単に調べる方法がないため、歯科医師は再感染を防ぐために必要以上に根管構造を除去してしまう可能性がある。機械的な処置で根管を拡大しても、歯内腔には細胞片が多く残っていることがある。
根管治療の成功に対するさまざまな要因の影響について、多くの研究が行われている。ある研究では、根管ロータリーファイルが触れる根管壁は５８．８％に過ぎず、４１．２％の根管壁は触れずに歯の洗浄と消毒を行うために薬液潅注に頼っていることが実証された。機械的な器具、化学的な消毒剤、そしてそれらの消毒剤を活性化する様々な方法を用いても、根管治療の約１５～２５％は失敗する。
また、他の研究により、細胞汚染が歯内療法の成功率に大きな影響を与えることが分かっている。ある研究では、根管治療の成功率は、根管治療の直前に細菌を陰性化した場合は９４％、根管治療の直前に細菌を陽性化した場合は６８％にとどまることが示されている。
根管治療の目的は、細胞片を含む残存部分を充填材で封鎖することですが、充填材や封鎖材はこれまで臨床的に、特に難しい解剖学的構造や側枝管が存在する場合、歯を完全に封鎖することはできなかった。米国では毎年多くの根管治療が行われており、根管治療の結果における細胞汚染の重要性や、根管充填時の困難さを考えると、根管内の細胞汚染レベルを迅速かつ定量的に検査する方法が必要である。
歯内細菌の汚染と画像化の分野に関連する特許や調査研究がいくつかある。
米国特許第９，６１１，５００号は、生細胞の存在下で活性化されて蛍光を発する不活性形態の蛍光色素で根管のサンプルを培養することによって、根管内の生細胞組織の存在を検査する方法を記載している。しかし、この装置では、細胞片の存在を検査するために細胞が生存している必要があり、蛍光色素を生成するために特定の生存細胞基質を使用している不活性細胞、休眠細胞、非生存細胞が検出されないため、装置の感度が制限される。また、この装置では、細胞を一定期間培養する必要があるため、歯科医師や患者が生存率検査の結果を待つ間、さらに時間がかかる。
米国特許９，４２７，３８４号は、患者のアンケートを通じて患者のう蝕のリスクを決定し、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）生物発光サンプルを使用して、歯の外側表面のＡＴＰの存在を検査する方法を記載している。問診とＡＴＰ検査の結果に応じて、患者には、う蝕のリスクを減らすために様々な口腔洗浄液を勧めている。しかし、この方法では、歯や根管内の汚染について歯科医師は知ることができない。これらの特許で推奨されている口腔洗浄治療方針は、患者の歯の表面と外側の生体膜と細菌レベルを下げることを目的としているが、歯や根管システムの内部の微生物を減らすことは意図していない。
米国特許９，５６２，２５３号には、試薬を用いて細菌の細胞を溶解し、次にＡＴＰ比色剤を用いて、試料中に所定の濃度を超えて細菌が存在する場合に、色の変化を肉眼で観察する方法が記載されている。細菌性ＡＴＰの有無を判断することで、ウイルス感染や他の炎症状態とは異なり、患者が細菌性感染症にかかっているかどうかを判断することができる。しかし、感染した根管のほぼすべてに何らかの細菌が存在するため、感染原因を特定するための歯内療法における細菌検査はほとんど意味がない。また、試料中の細菌の有無を判定するこの方法は、検査色の変化を主観的に解釈する必要があり、歯内療法の現場で使用するには、客観的な定量性や感度が十分ではない。
他の研究でも根管内の細菌汚染を定量化する試みがなされていますが、提案された治療方法は複雑で、歯科医師の間で普及することはなかった。９６細胞培養プレートの使用、連続希釈、遠心分離機、試薬測定用ピペット、既知濃度の細菌培養物など、歯科医師が通常使用しない材料や技術を必要とする治療方法であった。また、結果を得るまでに５分程度を要し、特に複数の検査が必要な場合には、患者と歯科医師を長時間待たせてしまう。複雑な手順、追加の検査機器の必要性、結果を得るのに必要な時間のため、即日細菌検査という方法は使われていない。
したがって、根管処置中または根管処置を完了する前に、根管内の細菌負荷の正確かつ信頼できる測定値を歯科医師に提供する、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法に対するニーズが、当技術分野には存在する。本発明は、このような目的のために開発されたものである。
先行技術における制限を最小化するために、また、本明細書を読み、理解することによって明らかになるであろう他の制限を最小化するために、本発明は、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法について説明するものである。
本発明の目的は、歯内腔に存在する細胞片のレベルを決定するための、迅速、簡単、かつコスト効率のよい試験を構成し得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法を提供することである。
本発明の別の目的は、歯内滲出液中に存在する細胞片のレベルを決定するための迅速で簡単な試験を構成し得る、最近生存している歯科用細胞破片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、歯に存在する細胞片のレベルを決定するための迅速で簡単な試験を構成し得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、歯科修復物サンプル中に存在する細胞片のレベルを決定するための迅速で簡単な試験を構成し得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、サンプル内に残る細胞片のレベルを決定するために使用されるルミネセンスサンプラー及びルミノメータを含み得る、最近生存した歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、不必要な治療及び健康な歯構造の不必要な除去を最小限に抑えながら、歯を消毒するために必要な治療のレベルを決定するために使用され得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の他の目的は、サンプル中のルミネセンスの存在について検出するための半透明の貯蔵井を含み得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、試料中に存在する遊離細胞片の濃度を増加させるための溶解溶液を含み得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、試料中に微量に含まれる可能性のある歯の消毒液から溶液を緩衝するための緩衝液を含み得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、通常、相対光単位（ＲＬＵ）として結果を報告するルミノメータを含み得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、細胞汚染を検査するための発光化学指示薬を含み得る、最近生存している歯科用細胞片を生体内試験のシステムおよび方法を提供することである。
本発明の別の目的は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の存在に関する試験を含み得る、最近生存している歯科用細胞片を生体内試験のシステムおよび方法を提供することである。
本発明の別の目的は、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）の存在に関する試験を含み得る、最近生存している歯科用細胞破片の生体内試験のシステム及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）の存在に関する試験を含み得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法を提供することである。
本発明の別の目的は、ルシフェラーゼ酵素を含み得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法を提供することである。
本発明の別の目的は、組換えルシフェラーゼ酵素を含み得る、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法を提供することである。
本発明のこれらおよび他の利点および特徴は、本発明を実施する方法および本発明の製造方法の両方に関して、当業者に理解できるように、本明細書に具体的に記載されている。
図中の要素は、その明瞭性を高め、これらの様々な要素および本発明の実施形態の理解を向上させるために、必ずしも縮尺通りに描かれていない。さらに、当業者にとって一般的でよく理解されている要素は、本発明の様々な実施形態を明確に示すために、描かれていない。
FIG. 1は、歯内療法を受ける歯の縦断面図であり、歯牙修復物、歯牙亀裂、および垂直歯根破折を有する。
FIG. 2は、過去に根管治療を受け、口腔内の環境にさらされた歯の縦断面図である
FIG. 3は、歯または歯内空間からルミネセンスサンプルに試料を移送するいくつかの方法を示す正面図である。
FIG. 4は、例示的なルミネセンスサンプルの全体図である。
FIG. 5は、例示的なルミノメータ単管式リーダーの側面図である。
FIG. 6は、例示的なルミノメータマイクロプレートリーダーの正面図である。
FIG. 7は、徐々に大きな器具で洗浄された複数の抜去歯からの様々なサンプルのＲＬＵ結果をグラフにしたものである。
FIG. 8は、ルミノメータのＲＬＵ結果を、様々な発光サンプルおよびルミノメータのＡＴＰレベルと比較してグラフ化したものである
FIG. 9は、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法の決定プロセスのフローチャートを概略的に示す。
以下の説明では、特定の用語が参考のために使用されており、限定するものではない。「前」、「後」、「前方」、「後方」、「横」、「内側」、「上」、「下」、「外」、「内」、及び「内側」という語は、それぞれ、本開示に従って本発明の幾何学的中心、及びその指定部分に向かう方向と離れる方向を指す。本明細書で特に規定しない限り、用語 "a"、"an"、および "the"は、1つの要素に限定されず、代わりに"at least one"を意味すると読み取られるべきである。用語は、上述した単語、その派生語、および類似の重要性を有する単語を含む。
最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステムおよび方法は、歯内腔、歯内滲出液、歯、または他の歯科修復物サンプルに存在する細胞片のレベルを決定するための迅速かつ簡単なテストを可能にする。発光サンプルとルミノメータを用いたサンプルのテストは、サンプル内に残っている細胞片のレベルを決定するために用いられ、不必要な治療や健康な歯質の不必要な除去を最小限に抑えながら、歯を消毒するために必要な治療のレベルを決定するために使用することができる。ルミネセントサンプルとルミノメータの使用は、試料中の細胞片を簡単、迅速、低コスト、正確、かつ定量的に検査する方法です。
サンプル中の発光の有無を検出する場合は、半透明の保存用培養液を使用します。溶解液は、試料中の遊離細胞残屑の濃度を高めるために使用されることがある。また、試料中に微量に含まれる歯の消毒液の緩衝液として、緩衝液を使用することもある。試料中の発光レベルをより定量的に測定するために、ルミノメータが使用されることがあり、結果は通常、相対発光単位（ＲＬＵ）として示される。
いくつかの発光化学指示薬が、細胞汚染を試験するために使用され得るが、最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法の一実施形態は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）、及びアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）などのヌクレオチド又はリン酸化ヌクレオチドの存在を試験することである。ヌクレオチドやリン酸化ヌクレオチドの存在を検査することにより、歯科医師は、細胞片にこれらの化合物が偏在しているため、試料中の細胞汚染のレベルについて良い考えを持つことができる。
最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法の別の実施形態では、ＡＴＰの存在は、試料中の生存している細胞片及び最近生存している細胞片の存在を示すので、試料はＡＴＰの存在について試験することができる。ＡＴＰの存在を試験する1つの方法は、ルシフェラーゼ又は組換えルシフェラーゼ酵素を使用するが、細胞片の存在下でルミネセンスを受ける他の酵素を使用することができる。一般的に使用されるルシフェラーゼ酵素は、グロー酵素と呼ばれることもあるが、半減期が約３０から６０分である。フラッシュ酵素と呼ばれる速効性のルシフェラーゼ酵素を用いれば、５分以内に発光の変化を観察することができるだろう。ルミネセンスサンプルは、テストに必要な溶液がすでにサンプルに含まれているため、サンプル中の細胞の残骸をテストするのに便利な方法である。
最近生存している歯科用細胞片の生体内試験のシステム及び方法の理想的な実施形態は、発光サンプルを使用して、ＡＴＰなどの細胞片の存在について直ちに試料を試験することであるが、歯科医は、試料中の生存細胞の存在を決定したいと思う場合がある。歯科医師が、試料中の生存細胞の存在または量を決定したい場合、歯科医師は、歯内治療または歯科試料を、特定の有機元素を欠く特定の成長培地に所定の期間入れ、次いで、培養期間後に特定の有機元素の存在または量を試験することができる。これらの特定の有機元素の増加は、生細胞が存在することを意味し、元のサンプル中の生細胞の推定濃度を提供します。
ＦＩＧ．１の図解は、本開示によって企図される、最近生存している歯科用細胞片のための生体内試験のシステム及び方法の様々な態様を示すものである。本発明は、歯の内部の細胞汚染の試験を扱い、これは、歯または歯内腔から試料を得、試料を、細胞破片の存在下で測定可能な変化を有する発光化学指示薬と組み合わせ、そして試料によって生じる発光の存在および量を測定することによって達成される。理想的には、ルミノメータのような装置を用いて、溶液からの発光の存在と強度をより正確に決定する。
本発明の可能な応用例としては、歯内空間が十分に清浄であるかどうかを判断する定量的方法、歯科修復物の周囲の微生物汚染を検査する方法、歯面にう蝕が存在するかどうかを検査する定量的方法、歯の修復縁における細胞汚染を評価する定量的方法、修復物の漏れを検査する方法、ミスカナルおよびその他の未洗浄解剖を検出する方法、亀裂の検出方法または根元破壊を検出する方法等があるが、それだけにとどまらない。
ＦＩＧ．１の図解は、開口され歯内療法を必要とする歯を描写している。歯は、本発明が汚染について試験するために使用され得る、歯科部位とみなされ得るいずれかの可能な位置のいくつかを描写している。このような試料は、生体内破片試料として知られてもよく、生存可能な、最近生存した、または非生存可能な細胞片を含んでもよいし、含まなくてもよい。本発明によって企図されるように、生体内デブリサンプルは、例えば、アデノシン三リン酸、アデノシン二リン酸、アデノシン一リン酸、デオキシリボ核酸、又は他の同様のヌクレオチドを含んでもよく、これらは、発光性細胞デブリ指標と組み合わせると発光変化を誘発し得る。このようなヌクレオチドの濃度に基づく発光変化の程度を測定して、歯科部位における細菌、ウイルス、または他の感染性物質の存在を示す細胞性濃度を示すことができる。
歯の歯髄室２の汚染を検査することによって、歯科医は、歯に存在する細胞汚染のレベルについての考えを得ることができる。根管治療の前または間に歯髄室２のサンプルを取ることによって、歯科医は、治療を完了するために歯を消毒するために必要な追加の手順がある場合、それを知ることができる。
歯髄室２のサンプリングはまた、根管治療後に、充填物４クラウン、または他の修復材料などの歯内腔の上にあり得る修復材料の漏れを試験して、それらの充填物４またはクラウンがまだ機能しているかどうか、またはそれらが交換される必要があるかどうかを決定するために行われてもよい。齲蝕病巣５のサンプリングは、歯の汚染レベルを知ることが、感染した歯の構造の除去をいつ止めるべきかを知るために歯科医師を援助することができるので、歯科医師にとっても有用である。歯質のサンプリングは、感染歯が歯髄に近い場合に特に重要であり、歯科医師は、歯質をさらに除去して歯髄に入るリスクを冒すべきか、感染歯質が十分に清浄で修復材を配置できるかを判断する必要がある。細胞片の存在は、歯または歯科材料が追加の歯科治療を必要とするか、または歯または構造を交換する必要があることを意味するので、細胞片のサンプリングは、歯の表面または歯科材料を交換する歯にも有用である。
細胞片の検査は、歯に形成される可能性のある亀裂６の範囲を決定する場合にも有用である。亀裂６を有する歯に存在する細胞性汚染を検査することによって、歯科医師が歯の長期予後を決定するのを助けることができる。細胞汚染検査は、根管８が十分に清潔であるか、または根管を十分に消毒するために機械的拡大、機械的洗浄、化学薬品、薬用物質、追加の灌漑、または追加の訪問などの他の治療が必要であるかどうかを決定するために根管８の内部にも有用である。根管の細胞サンプリングは、これらの領域が、さもなければ洗浄された根管の内部に、より高いレベルの細胞片をもたらす可能性があるため、見逃された根管１０、側方根管１２、及び垂直根管破砕１４を試験するためにも使用され得る。歯科医はまた、滲出液１６中の細胞片のレベルを試験して、歯を治療するために追加の治療、訪問、または手術が必要であるかどうかを決定するのに役立てることができる。
ＦＩＧ．２の図解は、根充材料１８で充填されているが、口腔環境にさらされ、現在、根管および歯の内部表面２０を覆う生体膜を有する以前の根治療法を受けた歯の縦断面図である。充填材料１８の上面部分２２を試験することにより、歯科医師は、充填物が汚染であるかどうか、及び細胞片を除去するために必要であればどのような追加治療が必要であるかをより良く判断することができる。根管の頂部２４、中間根、および冠状領域における細胞汚染のレベルを比較することによって、歯科医師は、冠状漏出、頂部漏出、垂直根破折、感染側根管、余根管感染、および他の病態などの病理をより良く診断することが可能である。歯内腔２６のテストは、根管を十分に汚染除去するためにどのような追加のステップ、または追加の訪問が必要であるかを歯科医師が決定するのを助けることができるので、再治療の場合にも有用である。
ＦＩＧ．３の図解は、歯科医師が、細胞汚染について試験されるべき歯科および歯内療法サンプルを収集するために使用することができる方法のいくつかを描いている。歯内腔からの試料を吸収するために、紙製のポイント２８を歯内腔の内部に配置することができる。歯または歯内腔からの試料は、保持培養またはシリンジ３０に吸引することができる。歯に埋め込まれた、又は対象の領域の表面を擦った綿ペレット又は他の吸収性材料３２は、歯又は歯内腔から試料を抽出するために使用され得る。歯内洗浄器具３４または歯科ドリルおよび歯擦過装置３６からの破片も、細胞汚染のためにサンプリングすることができる。以前の歯内治療用充填材も、加熱されたプラッガー３８などの器具を使用して以前の充填材を除去することにより、細胞汚染について試験することができる。
ＦＩＧ．４の図解は、ルミネッセンス・サンプルの一実施形態を示す。ルミネッセンス・サンプルは、溶液のための半透明の貯蔵培養４０を有していてもよい。試料中に存在し得る化学物質又はｐＨ変化から溶液を緩衝するために、緩衝剤４２も存在してもよい。細胞溶解剤４２や有機物除去液も、試料からさらに有機化合物を除去するために存在することがある。
また、ＦＩＧ．４の図解は、シリンジ４８からウェルに注入される液体サンプル４６に加えて、貯蔵井４４の底にあるペーパーポイントも描いている。ここで、ルミネッセンス・サンプルは、細胞汚染について表面を試験するために使用することができるいずれかの綿棒を含むが、ＦＩＧ．４では、綿棒は、代わりに、試験サンプルを透明な貯蔵井４９の底部に押し込むために使用されている。この発光サンプルは綿棒を描いているが、他のサンプルでは、他の形態をとるか、あるいは完全に欠落している場合もある。予め測定された量の化学指示薬５０もルミネセンスサンプル内に存在し、この装置では、装置５２の上部を曲げて絞り、化学指示薬を貯蔵井内に放出することができる。
このような貯蔵井４４は、移動式試験容器を構成してもよく、発光性細胞片指標、ルシフェラーゼ酵素、抽出剤、溶解剤、緩衝剤、および他の適切な化合物の調製された組み合わせをさらに含んでもよい。他の装置では、化学指示薬を貯蔵井４４に放出するために、捻る、絞る、テーピング、または他の方法を必要とする場合がある。その後、ルミノメータで試験する前に、緩やかな攪拌５３を用いて試料を混合する。いくつかの実施形態では、貯蔵井４４は、使い捨てであってもよい。
ＦＩＧ．５の図解は、発光サンプル５４を挿入する領域と、背景光がルミノメータに入るのを防ぐために閉じることができるカバー５６とを有するルミノメータの一実施形態を示している。ルミノメータは、典型的には、試験の結果を表示するためのスクリーン５８と、設定６０を調整する方法とを有する。このルミノメータは、ルミネセンスサンプル６２がＦＩＧ．４のルミノメータのように曲げられるのではなく、ねじられる試験サンプルに化学指示薬を放出する異なる方法を実証している。
ＦＩＧ．６の図解は、化学指示薬がマイクロプレート６４または試験管のような半透明の貯蔵井に添加されているルミノメータの代替実施形態である。ルミノメータはまた、設定６６を調整する方法、結果６８を読み取る方法を有し、さらにそのデータ７０をインポートする方法を有することができる。
ＦＩＧ．７の図解は、抜歯した歯から採取した歯内療法用サンプルのＲＬＵをグラフにしたものである。最初に小さなステンレス鋼のハンドファイルを使用して根管に入り、次に歯内回転ファイルを使用して根管をさらに洗浄した。サンプルは、歯から発光サンプルに１～３個のペーパーポイントを使って移されました。この試験では、ウルトラスナップ生物発光サンプルとＨｙｇｉｅｎａＳｙｓｔｅｍＳｕｒｅ Ｐｌｕｓ ＡＴＰルミノメータを使用して、サンプルに含まれるＡＴＰのレベルを決定したが、他のルミノメータやルミネセンスサンプルを使用することも可能であった。歯が徐々に大きな器具で洗浄されるにつれて、ＲＬＵの減少傾向が見られ、これは歯の内部の細胞片が少ないことと相関する。このテストから、歯科治療中にＲＬＵを測定することで、歯科医師は歯の汚染レベルに合わせて治療を行うことができることが分かった。
ＦＩＧ．８の図解は、様々なルミノメータのＲＬＵを様々な濃度のＡＴＰと比較するグラフである。ＡＴＰのような細胞片について歯内療法または歯のサンプルを試験することによって、歯科医は、サンプル中の細胞片の量を決定し、細胞片のレベルを既知の濃度の生存細菌からの既知のＲＬＵと比較することが可能である。
ＦＩＧ．９の図解は、汚染レベルを許容レベルまで減少させるためにどのような追加の洗浄および消毒ステップが必要かを決定するために、歯内試料のＲＬＵと共に歯科医師によって使用され得る決定木の図である。この決定木は、主に歯の活力と測定された対応するＲＬＵ表示に依存する。歯科部位における細菌、ウイルス、または他の感染性物質の中濃度または高濃度を示唆する中または高ＲＬＵ表示は、歯科処置を効果的に完了し、フォローアップ治療の必要性を減らすために歯科部位をさらに処置する必要性を示す場合があります。
本発明は、現在最も実用的で好ましい実施形態と考えられるものに関連して説明されてきたが、本発明は開示された実施形態に限定されるものではなく、逆に、添付の請求項の精神および範囲内に含まれる種々の変更および同等の配置を対象とすることが意図されている。
Claims (20)
- 最近生存している歯科用細胞片の生体内試験方法であって、
歯科部位をサンプリングして、生体内片サンプルを取得するステップと、
前記生体内片サンプルと発光性細胞片指示薬とを組み合わせるステップと、
前記生体内片サンプルと前記発光性細胞片指示薬とを組み合わせた発光変化表示を観察するステップと
前記発光変化表示を測定して、前記歯科用細胞片の濃度を決定するステップと、
前記発光性細胞片指示薬が、前記歯科用細胞片の存在下で発光を変化させる、および、前記発光性細胞片指示薬が、前記歯科用細胞片の非存在下で発光を変化させないステップと、
を含む方法。 - 請求項１に記載の方法であって、
前記細胞片の濃度を用いて、感染負荷を決定することをさらに含む請求項１に記載の方法。 - 前記感染負荷が、前記歯科部位を治療するための治療方針を決定するために使用されること、および、前記治療方針に従って前記歯科部位を治療すること、
をさらに含む請求項２に記載の方法。 - 前記発光性細胞片指示薬の前記測定が前記ルミノメータによって行われ、前記細胞破片濃度の前記決定が、前記ルミノメータによって行われ、および、前記ルミノメータが前記細胞片の濃度をユーザに表示することをさらに含む請求項３に記載の方法。
- 前記発光性細胞片指示薬が、前記歯科用細胞片内のヌクレオチド含有物の存在下で発光を変化させることをさらに含む請求項４に記載の方法。
- 前記ヌクレオチド含有物が、アデノシン三リン酸を含む請求項５に記載の方法
- 前記ヌクレオチド含有物が、アデノシン二リン酸を含む請求項５に記載の方法。
- 前記ヌクレオチド含有物が、アデノシン一リン酸を含む請求項５に記載の方法。
- 前記ヌクレオチド含有物が、リン酸化されたヌクレオチドを含む請求項５に記載の方法。
- 前記発光変化表示が、ルシフェラーゼ酵素を用いることにより促進されるルシフェリン-ルシフェラーゼ反応によるものであることを特徴とする請求項４記載の方法。
- 前記ルシフェリン-ルシフェラーゼ反応が完了し、前記細胞片の濃度が５分未満で決定される請求項１０に記載の方法。
- 前記生体内片サンプルと前記発光性細胞片指示薬との組み合わせが、移動式試験容器内で行われ、および、前記移動式試験容器が半透明である請求項３に記載の方法。
- 前記生体内残渣サンプルと前記発光性細胞残渣指示薬との組み合わせが、抽出剤をさらに含み、および、前記抽出剤が、前記ヌクレオチド含有物を前記生体内片サンプルから分離することを含む請求項１２に記載の方法。
- 前記生体内残渣サンプルと前記発光性細胞残渣指示薬との組み合わせが、緩衝溶液をさらに含む、および、前記緩衝液が、前記ルシフェリン-ルシフェラーゼ反応を維持することをさらに含む請求項１２に記載の方法。
- 前記歯科部位が歯内腔を含む請求項３に記載の方法。
- 前記歯科部位が歯科外表面を構成する請求項３に記載の方法。
- 前記歯科部位が内部の歯の表面を含む請求項３に記載の方法。
- 前記歯科部位が歯牙占有材料からなる請求項３に記載の方法。
- 前記移動式試験容器が前記感染負荷について試験するために予め測定された複数の溶液を含む使い捨ての発光サンプルであることを含む請求項１２に記載の方法。
- 前記移動式試験容器が単一井容器である、請求項１９に記載の方法。
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