CN1671741A - 浓缩抗体的缓冲剂制剂及其使用方法 - Google Patents

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M·J·巴希卡
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Abstract

本发明提供了制备浓缩的抗体制剂的方法，其包括以下步骤：(a)获得初始抗体制剂，其为抗体和组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液，其浓度约为2mM－48mM；和(b)使抗体制剂进行滤膜过滤以除去抗体制剂中的水和缓冲剂，而不除去抗体，从而制备与初始抗体制剂相比具有更高抗体浓度的抗体制剂。与其它制剂相比，由该方法制备的浓缩的抗体制剂粘度低且更稳定。本发明还包括用该方法制备的浓缩抗体制剂、使用这些制剂制备的药物组合物，以及给予这些药物组合物治疗疾病的治疗方法。

Description

浓缩抗体的缓冲剂制剂及其使用方法
相关申请
本申请与已于2002年6月21日提交的美国临时申请No.60/390,191，名称为″浓缩抗体的缓冲剂配方″相关且要求优先权，此处引入其全部内容作为参考。
发明领域
本发明涉及缓冲的抗体制剂，其可以经滤膜过滤方法有效浓缩；涉及使这种制剂经滤膜过滤方法处理以浓缩抗体的方法；涉及由此方法制备的浓缩的抗体制剂；涉及由该方法制备的浓缩的抗体用于制备可用于人类治疗的药物抗体制剂的方法。
背景
从二十世纪四十年代，就已纯化了免疫球蛋白G(IgG)制备物供人类治疗使用。  目前，市售人类治疗用免疫球蛋白产品，用于肌注给药的为16％(w/v)(160mg/ml)的溶液，例如甲肝(hepatitis A)的预防；用于静脉注射给药的为5％(w/v)(50mg/ml)的溶液，例如用于原发性免疫缺陷、感染和自身免疫疾病的治疗。见美国专利号6,252,055栏1，此处引用其全部内容作为参考。
九十年代末，以引发疾病的抗原为靶标的治疗用单克隆抗体(MAbs)的开发研究获得成功。1997年，美国食品与药物管理局(FDA)批准了RITUXAN(也称rituximab)，来自IDEC制药公司和Genentech公司的抗CD20嵌合抗体，用于治疗非-何杰金(Hodgkin′s)淋巴瘤。这是FDA批准的首个单克隆抗体。其它多种适应症的治疗用抗体也已获FDA批准，例如Herceptin(Genentech公司)用于治疗乳腺癌，Synagis(Medimmune公司)用于治疗儿童呼吸道合胞病毒感染(Respiratory SyncytialVirus)，以及Remicade(Centocor公司)用于治疗Crohn′s病(见H.Iyer等，BioPharm，January，2002，page14)。
为获得FDA的批准，目前许多治疗用单克隆抗体正进行临床试验。一个实例是IDEC-114，用于治疗自身免疫疾病并预防器官移植排斥反应的抗CD8 0单克隆抗体，见U.S.专利号6,113,898，此处引用其全部内容作为参考。另一个实例是IDEC-131，用于治疗自身免疫疾病的抗gp39单克隆抗体，如U.S.专利号6,001,358所描述，此处引用其全部内容作为参考。第三个实例是IDEC-151，用于T细胞减少治疗的抗CD4单克隆抗体，如U.S.专利号6,136,310所述，此处引用其全部内容作为参考。另一个正进行治疗使用评价的治疗用单克隆抗体是IDEC-152，一种抑制IL-4诱导B细胞产生IgE的抗CD23抗体，用于治疗IgE介导的疾病如特应性皮炎、过敏性鼻炎和哮喘，如U.S.专利号6,011,138所述，此处引用其全部内容作为参考。
采用治疗用单克隆抗体有效治疗，一般需要重复给予多剂量的浓缩至100mg/ml或更高浓度的治疗用单克隆抗体制剂。治疗用单克隆抗体通常采取非肠道、通过静脉肠内、肌内，或腹膜内给药。因为必须给予大量的单克隆抗体溶液，患者在给药期间要频繁地入院，以便观察患者对治疗的反应。为减少含有必需剂量的溶液的体积，进而减少给药需要的输注时间，开发经济而有效的用于制备高浓度治疗用单克隆抗体制剂的方法，具有重要意义。
高浓度治疗用单克隆抗体制剂适于皮下给药，具有可自行给药的优点，开发经济而有效的用于其制备的方法也具有重要意义。由于皮下途径给药一个剂量的体积相对较小(大约1毫升)，通过皮下途径有效给药的治疗用单克隆抗体制剂中的单克隆抗体的浓度应为100-200mg/ml。通常，治疗用单克隆抗体制剂中的单克隆抗体浓度最好为100-300mg/ml(见U.S.专利号6,252,055中栏4)。
高浓度的单克隆抗体溶液可以通过冻干抗体，再使其溶解于水中至需要浓度而制备。见美国专利号5,608,038，此处引用其全部内容作为参考。作为选择，高浓度的单克隆抗体溶液可以通过超滤方法制备，该技术通过在压力下使抗体溶液通过微孔滤膜进行过滤，保留单克隆抗体而允许溶剂和小的溶质分子穿透，从而使单克隆抗体溶液得到浓缩。常用的超滤方法将在下文论述。
在制备用于药物制剂的高浓度抗体制剂时，希望降低抗体制剂的粘度，以增加过滤速度，并使回收率达到最大(通过降低吸附于管、塑料器皿上的原料等等)，并提高处理的简易性和浓度测定的精确性。低粘度的药物制剂也是理想的，因为其可以更快地给予那些静脉狭窄的人，例如儿童。见U.S.专利号5,608,038(栏2)。还希望在制备和浓缩治疗用抗体期间防止抗体聚集体的形成，并除去用于制备药物制剂的溶液中已形成的任何聚集的抗体，因为抗体聚集体会降低具有生物活性的抗体的产量，而且如果它们存在于要给予患者的药物制剂中，可能会导致许多不利的副作用。
通过超滤制备高浓度的单克隆抗体溶液时，为防止聚集和损失生物活性，通常向含有抗体的组合物中加入稳定添加剂例如多元醇，和/或粘度减低剂例如盐或表面活性剂(见U.S.专利号6,171,586和U.S.专利申请号2002/0045571，在此引用其全部内容作为参考)。例如：U.S.专利申请号2002/0045571描述了加入至少50mM的盐和/或缓冲剂，以使过滤时抗体溶液的粘度减低。U.S.专利号5,608,038(此处引用其全部内容作为参考)，其描述了在抗体制剂中加入糖类例如葡萄糖或蔗糖，浓度为30-50mg/ml，以达到需要的渗透性并稳定抗体(见栏2)。甘氨酸和/或麦芽糖也常用于稳定高浓度抗体溶液中的抗体(见U.S.专利号6,252,055，此处引用其全部内容作为参考)。
通过微过滤可从浓缩的抗体溶液中除去聚集体，其同时还可为抗体溶液灭菌。通过这种方法获得的高浓缩抗体制剂可配制成适于给予患者的药物制剂。
虽然过去已经有所描述，仍然有必要改进方法，以制备适用于药物制剂的、相对不含添加剂的低粘度和低聚集度的高浓缩抗体制剂。
发明简述和目的
本发明涉及一种缓冲的抗体制剂，其特别适于经膜过滤方法进一步浓缩抗体；涉及用于浓缩抗体的方法，其包括使这种制剂通过膜过滤；涉及通过这种膜过滤方法获得的浓缩抗体制剂；涉及使用通过该方法获得的浓缩抗体制剂制备可用于治疗的药物抗体制剂。
本发明的目的是提供抗体组合物，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成。本发明还提供抗体组合物，其基本上由抗体和组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，缓冲剂的浓度约为3mM-48mM，或约4mM-45mM，或约5mM-40mM。本发明还提供抗体组合物，其基本上由抗体和浓度为20mM-25mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成。本发明提供的抗体组合物可以是适于经膜过滤进一步浓缩的抗体组合物。本发明提供的抗体组合物也可以是含有已通过膜过滤浓缩的抗体制剂的抗体组合物。本发明提供的两种组合物基本上由抗体和组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，其浓度与上述的浓度范围相同。
本发明的另一个目的是提供上述的抗体组合物，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，其中组合物pH约为4.0-7.5；在本申请中，术语″大约″对于pH而言指标明的pH±0.2pH单位。例如：由本发明提供的抗体组合物pH可以为4.5-7.0，或为5.0-6.5，或为5.5-6.0。
本发明的目的还在于提供上述抗体组合物，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，其中抗体为单克隆抗体。本发明的抗体组合物可以包含嵌合单克隆抗体，其含有非人类的可变区和人类的恒定区，例如PRIMATIZED抗体，其含有旧大陆猴(OldWorldmonkey)的可变区和人类的恒定区。本发明的抗体组合物还可包含人源化的单克隆抗体，其含有非人类的高变区和人类的恒定区。
本发明的另一个目的是提供上述的抗体组合物，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，其中抗体为一种或多种选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的同种型。例如：组合物可以包含IgG抗体，例如IgG1或IgG4抗体。
本发明目的还在于提供上述的抗体组合物，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，其中抗体浓度至少为50mg/ml，或至少为100mg/ml。
本发明目的还在于提供上述的抗体组合物，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，其含有选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。
本发明目的还在于提供上述的抗体组合物，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，其中抗体含有选自抗CD80抗体IDEC-114、抗gp39抗体IDEC-131、抗CD4抗体IDEC-151、抗CD23抗体IDEC-152和抗CD20抗体RITUXAN(rituximab)至少之一的单克隆抗体。
本发明目的还在于提供用于生成浓缩的抗体制剂的方法，其包括步骤(a)提供初始抗体制剂，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成；和(b)使初始抗体制剂进行膜过滤，从抗体制剂中除去水和缓冲剂而保留抗体，从而制备与初始抗体制剂相比具有浓度更高的抗体的抗体制剂。
本发明目的还在于提供改进的用于制备浓缩的抗体制剂的方法，其包括步骤(a)提供初始抗体制剂，其基本上由抗体和缓冲剂的水溶液组成；和(b)使初始抗体制剂进行膜过滤，从抗体制剂中除去水和缓冲剂而保留抗体，从而制备与初始抗体制剂相比具有浓度更高的抗体的抗体制剂；改进包括使用选自浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂。
根据本发明通过膜过滤浓缩抗体的优选方法采用切向流过滤的超滤法。通过使抗体制剂经膜过滤，除去其中的溶剂和小分子水而保留抗体，已开发出多种用于浓缩抗体制剂中的抗体的方法。这些方法既可利用径向流过滤也可利用切向流过滤完成。本发明提供前述的通过膜过滤浓缩抗体缓冲溶液的方法的改进，其改进在于经膜过滤的抗体制剂基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成。
本发明目的还在于提供用于制备含有抗体作为活性成分的药物组合物的方法，其包括步骤(a)提供初始抗体制剂，其基本上由抗体和组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，浓度约为2mM-48mM；和(b)使初始抗体制剂经膜过滤，从抗体制剂中除去水和缓冲剂而保留抗体，从而制备与初始抗体制剂相比具有浓度更高的抗体的抗体制剂；和(c)将步骤b)中的浓缩抗体制剂中的抗体与一种或多种药物可接受的载体组合制备药物组合物。
本发明目的还在于提供一种改进的治疗方法，其包括给予含有抗体的药物组合物，改进包括给予药物组合物，其为通过使(a)抗体制剂，其基本上由含有至少一种治疗有效剂量的抗体和浓度大约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，已通过膜过滤浓缩，与(b)一种或多种药物可接受的载体组合制备药物组合物。
本发明目的还在于提供一种试剂盒，其可用于治疗患有或倾向患有某种病症的哺乳动物，试剂盒包含至少一个含有药物组合物的容器，药物组合物为将(a)抗体制剂，其基本上由含有至少一种治疗有效剂量的抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，已通过滤膜过滤法浓缩，与(b)一种或多种药物可接受的载体组合的产品；该试剂盒还包含指明上述药物组合物可能用来治疗的病症的标签或插页。
对于本发明的每一前述方法和试剂盒，浓缩的抗体制剂基本上由抗体和组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，缓冲剂的浓度约为2mM-48mM，例如3mM-48mM，或4mM-45mM、5mM-40mM，或20mM-25mM。对于通过膜过滤进一步浓缩的抗体组合物同样如此。抗体制剂也可基本上由抗体和组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，缓冲剂的浓度约为2mM-48mM，组合物的pH约为4.0-7.5。例如：抗体组合物的pH或者为4.5-7.0，或为5.0-6.5，或为5.5-6.0。上述的每一方法和试剂盒中的抗体可以是嵌合的单克隆抗体，其含有非人类的可变区和人类的恒定区，例如PRIMATIZED抗体，含有旧大陆猴的可变区和人类的恒定区。抗体组合物还可包含人源化的单克隆抗体，其含有非人类的高变区和人类的恒定区。另外，上述每一方法和试剂盒中的抗体，可以是一种或多种选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的同种型。例如：它们可以是IgG抗体例如IgG1或IgG4抗体。上述每一方法和试剂盒中的浓缩抗体制剂中的抗体浓度至少为50mg/ml或至少为100mg/ml。抗体组合物可以包含选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。例如：抗体组合物可以包含至少一种单克隆抗体，该单克隆抗体选自抗CD80抗体IDEC-114、抗gp39抗体IDEC-131、抗CD4抗体IDEC 151、抗CD23抗体IDEC-152，和抗CD20抗体RITUXAN(rituximab)。上述方法和试剂盒中的抗体组合物可用作改进的治疗方法，其包含给予患有选自癌症、变态反应性疾病、自身免疫疾病和淋巴瘤的疾病的患者治疗有效剂量的治疗用抗体。
附图简述
图1径向流过滤示意图(DFF)。进料，即被过滤的溶液，被直接压向滤膜，如图1所示。小分子作为滤过物穿过微孔，而大的抗体被膜截留下来。比微孔大的分子聚集在膜表面并形成凝胶。
图2为表明随着过滤进行DFF通量率迅速地降低的图解，因为抗体聚集在膜表面并形成凝胶，阻碍了小分子穿过微孔的流动。
图3为切向流过滤示意图(TFF)。一旦进料被引入系统，溶液开始循环从而样品流经膜表面，溶液的压力使溶液中的小分子作为滤过物穿过滤膜的微孔。溶液和抗体分子留在膜之间形成截留物。
图4为表明随着过滤进行TFF通量率逐渐降低的图解。
图5为表明在pH5.5和pH6.0的含有三种不同缓冲剂的溶液中，过滤流速与抗体浓度相关性的图解。根据图解中标绘的数据，可见较大范围的抗体浓度内组氨酸和醋酸盐缓冲剂的过滤流速显著大于柠檬酸盐缓冲剂的过滤流速。流速在pH5.5和pH6.0两者之间似乎没有显著差别。
图6为表明在TFF过程中，衡量浊度的OD320，在pH5.5和pH6.0的含有三种不同缓冲剂的溶液中，随抗体浓度增加而变化的图解。从图中可见含柠檬酸盐缓冲剂的制剂浊度最高，含醋酸盐的制剂浊度居中，含组氨酸的制剂浊度最低。
图7为条形图，说明用不同缓冲剂在pH5.5和6.0配制的135mg/ml的IDEC-114溶液动力粘度。含柠檬酸盐的制剂粘度显著高于其它制剂。在pH6.0制剂粘度也都高于在pH5.5的制剂粘度。
发明详述
抗体疗法可成功地用于治疗许多肿瘤和免疫系统相关的适应症；然而，经常需要大剂量的抗体药物才能使其治疗有效。为通过静脉内或皮下途径给予患者治疗有效剂量的抗体，通常抗体制剂的浓度必须很高，这一要求常常造成药物制备以及维持其稳定形态的困难。
本发明旨在提供可获得高度浓缩的、稳定的抗体制剂的方法，其粘度较低而基本上无聚集体，适于在药物制剂中使用。
在一个实施方案中，本发明提供了制备浓缩的抗体制剂的方法。其步骤包括(a)提供初始抗体制剂，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成；和(b)使初始抗体制剂经滤膜过滤，从抗体制剂中除去水和缓冲剂而保留抗体，从而制备与初始抗体制剂相比含有浓度更高的抗体的抗体制剂。
用于本申请中的术语″大约″，在指组氨酸或醋酸盐的浓度时意味在指示浓度±3％的浓度。本发明的抗体组合物基本上由抗体和浓度为2mM-48mM之间的任一浓度的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成。例如，组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度可约为3mM-48mM，或约为4mM-45mM，或约为5mM-40mM。抗体组合物中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度还可为20mM-25mM。
本发明的抗体组合物包括初始抗体制剂，其适于经膜过滤进一步浓缩，也包括已经通过膜过滤浓缩的任一抗体制剂。无论它们是初始抗体制剂还是经膜过滤浓缩的抗体制剂，本发明提供的抗体组合物基本上均由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成。
本发明提供并包括通过实行上述方法制备的浓缩的抗体组合物，以及含有浓缩的抗体制剂的药物制剂，其使用通过发明方法制备的浓缩的抗体制成。
本发明起源于意外地观察到低浓度的醋酸盐或组氨酸缓冲剂(浓度约2mM-48mM)在通过膜过滤浓缩时能够稳定抗体制剂、降低抗体溶液的粘度，并抑制聚集作用，在一定程度上相当或超过本领域所述其它更复杂的制剂所能达到的稳定效应。本发明由此提供用于制备高浓缩、稳定的抗体制剂的超滤方法，制剂中含较低水平的聚集体。由此产生的浓缩抗体制剂基本上由抗体和其浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，并且不含目前本领域用来稳定浓缩抗体制剂和降低其粘度的添加剂，例如多元醇、糖类、甘油、盐和高缓冲剂浓度(超过50mM)。
此处所用″稳定的″抗体制剂指在保存时，其中的蛋白质基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性。本领域中有多种可用于衡量蛋白质稳定性的分析技术，其综述可见例如Peptide and ProteinDrug Delivery，247-301，Vincent Lee Ed.，Marcel Dekker，Inc.NewYork，N.Y.，Pubs.(1991)和Jones，A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993)。稳定性可在选定温度测量选定的时间。相当稳定的抗体制剂是指制剂在室温下(约30℃)或在40℃至少稳定1个月，和/或在大约2-8℃至少稳定1年，并且伴有制剂的冻结(例如至-70℃)和解冻。如果以肉眼观察其颜色和/或清澈度、或通过紫外分光或分子筛层析法测定，其无聚集、沉淀和/或变性迹象，则药物制剂中的蛋白质″保持其物理稳定性″。如果在给定时间内化学稳定性至可认为其仍保持以下定义的生物活性，则药物制剂中的蛋白质″保持其化学稳定性″。化学稳定性可通过检测并定量蛋白质的化学变化形式来评价。化学变化可涉及大小改变(例如剪裁)，其可利用例如分子筛层析法、SDS-PAGE和/或基质-辅助激光解吸电离/时间飞行质谱法(MALDI/TOF MS)鉴定。其它类型的化学变化包括电荷变化(例如脱酰胺基时发生的电荷变化)，其可通过例如离子交换层析鉴定。如果具有药物制剂制备时抗体所呈现的生物活性的大部分(例如大约90％)，则药物制剂中的抗体″保持其生物活性″。例如，生物活性可以通过抗原结合试验测定。见U.S.专利号6,171,586。对应于任一特定抗体的″生物活性″试验类型取决于抗体特异性靶分子的生物学功能、以及抗体与靶分子结合的生物学效应。本领域技术人员通常通晓许多这类试验。
抗体制剂基本上由抗体和浓度大约3mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，其通过本发明方法制备，通常pH大约为4.0-7.5。例如，抗体制剂的pH可以为4.5-7.0；或为5.0-6.5；或为5.5-6.0。这些溶液可用本领域已知的常见方法制备。优选地，醋酸盐缓冲剂为醋酸钠，组氨酸缓冲剂为盐酸组氨酸；但当使用任何可用的缓冲剂，其pH调整到上述pH值时，缓冲剂中组氨酸或醋酸盐与平衡离子/酸-碱组分而非Na+和Cl-结合，本发明也可以成功地施行。
本发明的抗体可以是任何的同种型。例如，它们可以是主要同种型类别IgM、IgG、IgA、IgE和IgD中的任何一种。根据本发明每一同种型的多个亚类的抗体都可有效地浓缩。例如：可以依据本发明制备I gG同种型的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚类的活性、非聚集的抗体的高浓缩制剂。使用本发明可成功浓缩的抗体制剂可包含单一类型的抗体，或包含两种或多种不同类型的抗体。
用于此处的术语″抗体″意谓包括具有特异目的结合活性的抗体片段。本发明可用于浓缩任一抗体同种型的片段，包括抗体片段例如Fab、F(ab’)2、Fv、以及Fc，或pFc’片段。抗体可以是片段化的，使用本领域已知的传统方法筛选的片段具有相同的特异目的结合活性。例如，F(ab’)2片段通过用胃蛋白酶处理抗体产生，F(ab’)2片段二硫键还原生成Fab片段。
利用本发明还可以生成高度浓缩的活性、非聚集的双特异性或多特异性抗体。双特异性和多特异性抗体具有至少两种不同表位的结合专一性，其中表位通常来自不同的抗原。这种分子通常仅结合两种不同的表位(即双特异性抗体)，但本发明也可应用于有额外专一性的抗体例如三特异性抗体。适用于本发明的治疗用多特异性抗体的实例例如U.S.专利号6,171,586所述。
本发明有效地制备活性、非聚集的单克隆抗体的浓缩制剂，其抗体浓度为25-350mg/ml。例如，单克隆抗体的浓缩制剂，抗体浓度为50-150mg/ml，例如，抗体浓度为50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、或150mg/ml，根据本发明均可有效制备。单克隆抗体的浓缩制剂，其抗体浓度为50-250mg/ml，例如，抗体浓度为50、75、100、125、150、175、200、225、或250mg/ml，根据本发明也可有效制备。
本发明也可用于制备高度浓缩的重组抗体制剂，特别是嵌合抗体和人源化抗体，后者是一种特殊的嵌合抗体。通常，嵌合抗体是指抗体的轻链和重链可变区来自某种动物，而恒定区来自其它不同种类的动物。例如，通过用非人类的灵长类动物例如旧大陆猴的轻、重链可变区，替换人类抗体的轻、重链可变区，可获得对人类几乎没有免疫原性的嵌合抗体。这种抗体称为“PRIMATI ZED”抗体，其在U.S.专利号6,136,310和U.S.专利号5,658,570描述，此处引用其全部内容作为参考。
非人类抗体的″人源化″形式指嵌合抗体含有最少的来源于非人类免疫球蛋白的多肽序列。保持抗原专一性所需的最少的非人类免疫球蛋白多肽序列通常为高变区(即互补决定区CDRs 1-3)，通过将受者人类免疫球蛋白的三个高变区的残基替换为来自非人类哺乳动物，例如小鼠、大鼠、家兔或非人类的灵长类动物的抗体(供者)的，具有目的专一性、亲合性和能力的高变区的残基，可制备出人源化抗体。在某些情况下，一个或多个人类免疫球蛋白骨架中的某些或所有残基被相应的非人类的残基所替代。人源化抗体还可能包括受者抗体或供者抗体中都没有的残基；这种修饰通常用来进一步改进或优化抗体的性能。人源化抗体可基本包括至少一个，一般为两个可变区的全部，其中全部或基本全部高变区对应非人类免疫球蛋白，全部或基本全部骨架区为人类免疫球蛋白序列。见琼斯等，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等，Nature332：323-329(1988)；和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992)，此处引用其全部内容作为参考。
本发明的一个有效实施方案中，通过膜过滤浓缩的单克隆抗体组合物，其含有选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。这种抗体在科学文献中有所描述且可用常规方法制备。例如，通过膜过滤浓缩的单克隆抗体组合物，可以含有至少一种治疗有效剂量的一种或多种治疗用单克隆抗体，其选自为RITUXAN、IDEC-114、IDEC-131、1DEC-151，和IDEC-152抗体。
RITUXAN(也称为″rituximab″)，是IDEC药物公司和Genentech，Inc.的抗CD20嵌合抗体，用于治疗非何杰金淋巴瘤，在U.S.专利号6,399,061中描述，此处引用其全部内容作为参考。
IDEC-114为抗CD80单克隆抗体，用于治疗自身免疫疾病和预防器官移植排斥反应，其在U.S.专利号6,113,898中描述。IDEC-131是抗gp39单克隆抗体，也可用于治疗自身免疫疾病，如U.S.专利号6,001,358所述。
IDEC-151是抗CD4单克隆抗体，可用于T细胞缺失的治疗，如U.S.专利号6,136,310所述。
IDEC-152为抗CD23抗体，其抑制IL-4诱导的B细胞产生IgE，用于治疗IgE介导的疾病如特应性皮炎、过敏性鼻炎和哮喘，如U.S.专利号6,011,138所述。此外引用描述这些治疗用单克隆抗体的制备和使用的U.S.专利的全部内容作为参考。
采用膜超滤法浓缩
本发明基于发现采用膜超滤法浓缩的抗体制剂的稳定性和粘度对制剂中存在的缓冲剂的类型敏感，与用其它缓冲剂获得的制剂相比，某些缓冲剂，特别是组氨酸和醋酸盐，意外地降低抗体制剂的粘度、降低抗体聚集，并增加通过膜过滤抗体制剂浓缩的速率。结果，发现基本上由抗体和浓度约为3mM-48mM的组氨酸或醋酸盐组成的制剂，可通过超滤有效地浓缩到较高浓度，保留其生物活性且较少聚集，即便没有例如高缓冲浓度(超过50mM)的表面活性剂、多元醇、糖类、盐作为稳定或降低粘度的添加剂的存在。本发明对于预先冻干的抗体和没有冻干的抗体均可有效地应用。
尽管已开发出多种用于制备和纯化治疗用单克隆抗体的方法，但在制成最终产品一一将给予的药物制剂之前，通常都采用超滤进行最后一步浓缩。超滤单克隆抗体通常在压力下，使抗体溶液通过截留50-200kD多肽而允许小分子穿透的微孔滤膜进行过滤。截留30-50kD多肽的微孔滤膜，用于通过超滤浓缩单克隆抗体可取得很好的结果；截留小至10kD多肽的微孔滤膜也可使用，特别是浓缩抗体片段时。超滤操作的效率可能受到溶液的粘度、可溶性和蛋白质的聚集数量的影响。
渗滤属分级分离方法，其中洗涤小分子穿过膜，而留下较大的目的分子在保留物中(保留在膜的另一侧的溶液)。
超滤通常采用两种滤膜过滤方法。径向流过滤法(DFF)中进料(要过滤的溶液)被直接压向滤膜，如图1所示。结果，比微孔大的分子聚集在膜表面并形成凝胶，阻碍了小分子流动穿过微孔，以致随着过滤进行通量率迅速降低，如图2所示。DFF也被称为″垂直流过滤″，因为流体流动的方向与膜表面垂直。在DFF过程中，为避免截留蛋白质聚集并阻塞膜的微孔，经常要搅拌蛋白质溶液。令人吃惊地，依条件(例如压力和流速)不同，在保留物循环通过TFF系统(如下所述)时，引起的剪切力可能会导致更多的聚集和沉淀，其在DFF过程中由于搅拌蛋白质溶液而产生(见U.S.专利No.6,252,055，实施方案3，栏10-11)。
另一种主要的超滤方法为切向流过滤(TFF)，其中样品流经膜表面，对溶液的压力使溶液中的小分子向外穿过滤膜的微孔，如图3所示。在TFF过程中，经过膜的溶液流动帮助阻止聚集的分子在膜表面形成凝胶，凝胶会阻塞微孔并阻碍小分子通过。结果随着过滤的进行，TFF的通量率比在DFF中的下降缓慢得多，如图4所示。
本发明对于用任一膜超滤方法制备高度浓缩的抗体溶液都适用。例如，本发明有效适用于联合使用TFF制备用于配制药物单克隆抗体制剂的高度浓缩的单克隆抗体。进行单克隆抗体溶液超滤的TFF系统已商品化，例如，Millipore Corp.(Bedford，MA)，Pall Corp.(East Hills，NY)，或Marcon Wines and Filters(Oakville，Ontario)。使用TFF制备浓缩的抗体溶液在U.S.专利号6,252,055中也有描述，此处引用其全部内容作为参考。
除了浓缩，TFF系统还可用于更换缓冲剂或降低非目的物的浓度，例如降低制剂中的盐浓度。这可通过在压力下过滤时引入新的缓冲剂，除去不被滤器截留的初始溶剂和其它小分子来实现。通过浓缩溶液至其体积的一半，加入新的缓冲剂4次，可去除制剂中96％的盐。通过在渗滤过程中连续加入至7倍体积的新缓冲剂，溶液中99％以上的原始缓冲剂可被替换。
本发明非常适于通过TFF进行超滤而进行。初始抗体制剂，或″进料″，可以是抗体组合物，其基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成。除抗体和组氨酸或醋酸盐缓冲剂外，″进料″还可以包含盐或其它小分子溶质，不妨碍本发明的有效操作，因为这些小分子组分会穿过膜并由渗滤除去。因此，即使进料中没有这种组合物，最终制备的浓缩抗体制剂也将基本上由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成。
药物制剂
此处的术语″药物制剂″和″药物组合物″，指以容许其活性组分的生物活性确切有效的形式存在的制剂，且治疗效果胜过其毒性效应。″药物可接受的″载体(载体、添加剂)指可合理地给予受者哺乳动物的载体，用以提供有效剂量的使用的活性组分。
根据本发明制备的浓缩抗体制剂可用来制备药物制剂，通过将根据本发明内容制备的基本由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成的浓缩抗体制剂与一种或多种药物可接受的载体组合来制备药物组合物。
制备这种药物组合物可选择性地包含一种或多种其他治疗用成分。载体必须是″可接受的″指与制剂的其它组分相容且对受者无害。
本发明的抗体和药物组合物对于肠胃外给药，即皮下、肌内或静脉内给药特别有用。
用于肠胃外给药的组合物，通常包含本发明的抗体或其片段的溶液或它们的混合物，溶于可接受的载体中，优选水性载体。可使用多种水性载体，例如水、缓冲水、0.4％的盐水、0.3％甘氨酸、乙醇等等。这些溶液是无菌的且通常无颗粒物质。这些溶液可采用传统的、已知的灭菌方法灭菌，例如微孔过滤。根据需要组合物可以含有药物可接受的辅助物质以接近生理条件，例如pH调整物质和缓冲物质，等等。这种药物制剂中的本发明抗体或其片段的浓度变化可能很大，即按重量计可低至约0.5％，通常为或至少约为1％，高至15％或20％，并根据选择特定的给药方式，主要基于流体的体积、粘度等等进行选择。
因此，用于肌内注射的本发明药物组合物可制备为含有1毫升无菌缓冲剂水，和50毫克的发明抗体或其片段。同样地，用于静脉内输注的本发明药物组合物可制备为含有250毫升无菌Ringer′s溶液和150毫克的发明抗体或其片段。
用于制备肠胃外给药的组合物的有效方法为本领域技术人员熟知或显而易见，且更详细地描述于例如Remington′s的《药物学》，第15版，Mack出版社，Easton，Pa.，此处引入其内容作为参考。
治疗用途
本发明提供包括给予含有抗体的药物组合物的治疗方法的改进。改进包含给予药物组合物，其如下制备：通过将(a)抗体制剂，其基本至少一种治疗有效量的由抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，并已经膜过滤浓缩，和(b)一种或多种药物可接受的载体组合而成。根据本发明，此处公开的包含组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓缩抗体制剂的粘度和稳定性适于用作药物组合物，并且其粘度和稳定性通常优于其它制剂。如上所述，浓缩的抗体制剂的pH通常为4.5-7.0。
用于改进的治疗方法中的浓缩抗体制剂，可以含有治疗有效剂量的治疗用嵌合单克隆抗体，包括PRIMATIZED或人源化的抗体。公开的药物组合物含有浓缩抗体制剂，其含有组氨酸或醋酸盐缓冲剂，浓度为5mM-40mM，采用与现有含治疗有效剂量的治疗用抗体的药物组合物相同的方式给药。
通过给予选自RITUXAN(rituximab)、IDEC-114、IDEC-131、IDEC-151和IDEC-152的治疗用单克隆抗体来治疗疾病也是有用的。
上述改进的治疗方法包括，例如给予患有选自癌症、变应性疾病和自身免疫疾病的患者以治疗有效剂量的治疗用抗体。例如，已知给予选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体，可为需要这种给药的患者提供治疗益处。
有用的本发明实施方案包括，给予患有选自癌症、变应性疾病、自身免疫疾病和淋巴瘤疾病的患者含有治疗有效剂量的治疗用抗体的药物组合物，以治疗所述疾病，即通过抑制或预防疾病、或缓解疾病的病理症状来提供治疗益处。
含有治疗用抗体浓缩制剂的″试剂盒″
本发明进一步提供试剂盒，其可用于治疗患有或易感染某种疾病的哺乳动物。″治疗″用于此处既指为患有进行性疾病提供治疗益处，也指预防或防护措施。试剂盒中为含有药物组合物的至少一个容器，药物组合物为将(a)抗体制剂，其基本上由含有至少一种治疗有效剂量的抗体和浓度约为2mM-48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成并已通过滤膜过滤法浓缩，与(b)一种或多种药物可接受的载体组合的产品。该试剂盒还包含指明上述药物组合物可能用来治疗的病症的标签或插页。试剂盒可能含有治疗有效剂量的治疗用单克隆或多克隆抗体。在一个有效的实施方案中，治疗用抗体为IgG抗体。在另一个有效的实施方案中，治疗用抗体为单克隆抗体；例如灵长类化的单克隆抗体。
在一个特别优选的实施方案中，试剂盒含有治疗有效剂量的治疗用抗体，用于治疗选自癌症、变应性疾病、自身免疫性疾病和淋巴瘤的病症。在一个优选实施方案中，治疗用抗体为选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20的抗体。在一个特别的优选实施方案中，治疗用抗体选自Rituxan、IDEC-114，IDEC-131，IDEC-151和IDEC-152抗体。
实施例
在浓缩蛋白质和渗滤该物质制备最终制剂的加工过程中，切向流过滤是最常用的方法之一。操作的成功性可显著影响产品的产量和稳定性。因此研究可以提高操作效率的因素很重要。为此，本研究中，我们研究了缓冲剂种类和pH对切向流过滤性能的影响及其对产品稳定性的影响。本实施例表明用较低浓度醋酸盐或组氨酸缓冲剂(5-40mM)配制的单克隆抗体制剂，较之由用其它不同的缓冲剂(例如柠檬酸盐)配制得到的同样单克隆抗体的制剂，有较低的粘度和较少的聚集。
通常在制备适于用作药物制剂的高浓缩单克隆抗体水溶液的最后一步，使用切向流过滤(TFF)来渗滤和浓缩单克隆抗体制剂。TFF的效率可能会受溶液的粘度、蛋白质的可溶性和溶液中蛋白质形成聚集体的程度的影响。
材料知方法
配制IDEC-114单克隆抗体的贮存液，浓度为10mg/ml，在10mM的柠檬酸盐(pH6.5)和150mM的NaCl中或在25mM醋酸钠(pH6.0)和220mM甘氨酸中，无菌保存于2-8℃。IDEC-114单克隆抗体为灵长类化的抗体，为具有人类恒定区和猕猴结合CD80的可变区的嵌合重组IgG1单克隆抗体。IDEC-114单克隆抗体贮存溶液在室温下渗滤浓缩至25mg/ml，使用实验室规模的装有Pellicon XL(PLCTK 30)膜片(Millipore Corp.，Bedford，MA)的切向流过滤(TFF)系统。六种水溶液，其基本上由浓度为25mg/ml的IDEC-114单克隆抗体和选定的目的pH的缓冲剂组成，采用室温渗滤通过用8体积的下列实验缓冲剂的每一种替换一体积的抗体缓冲剂制备：20mM醋酸钠，pH5.5和6.0；20mM柠檬酸钠，pH5.5和6.0；和20mM组氨酸/HCl，pH5.5和6.0。用于制备缓冲溶液的化学试剂为：醋酸钠(Sigma，S-1304)；柠檬酸钠(Fisher，S279-500)和组氨酸(JT Baker，product#2080.06)。
样品随后进一步用实验室规模的TFF系统浓缩直至穿透流速达到1ml/min，此时抗体溶液浓缩至150mg/ml以上。记录达到150mg/ml的浓度所需时间。为保持整个过程中所有操作的统一，在最适截留压力下，系统的流速固定为80ml/min。
TFF浓缩期间，定期取出小的等分部分的单克隆抗体溶液用于蛋白质浓度测定以及粘度和浊度的测量，并记录当时的穿透流速。经TFF后，样品从系统中移去，并通过Acrodisc PF针筒式滤器0.8/0.2μm的Supor膜(Gelman Laboratory)除去可溶聚集体。
缓冲剂种类和pH对TFF操作效率的影响
TFF过程中通过紫外线分光光度扫描测定蛋白质的浓度。根据浓度将样品精确地稀释于100X或200X的水中，以水作为空白，用ShimadzuMultispec-1501光电二极管阵列分光光度计读取样品的280nm吸光度值。图5显示TFF过程中，不同浓度下抗体的透过流速，从其中可清楚地看到透过流速遵循趋向：组氨酸＞醋酸盐＞柠檬酸盐。pH对流速的影响没有趋向关系。浓度超过80mg/ml时，透过流速降低，在组氨酸和醋酸盐配制的样品之间我们未见到流速存在显著差异；但在两个测试的pH值，这两者的透过流速均显著高于柠檬酸盐材料配制的样品。浓缩240毫升25mg/ml的IDEC-114至150mg/ml所需的时间列于表I中。平均地，用柠檬酸盐配制的抗体溶液比用醋酸盐配制的多用约30％的时间，比用组氨酸配制的多用约50％的时间。
表I
    配方     时间(min)
    20mM组氨酸/HCl，pH5.5     19.0
    20mM组氨酸/HCl，pH6.0     20.4
    20mM醋酸钠，pH5.5     23.4
    20mM醋酸钠，pH6.0     20.5
    20mM柠檬酸钠，pH5.5     27.7
    20mM柠檬酸钠，pH6.0     30.4
浊度
在TFF操作过程中，抗体分子被连续地泵入系统进行多个循环，因此受到很强的剪切力，可能导致聚集并使溶液浊度增加。图6描述在浓缩过程中，以OD320测量的配制抗体的浊度特征。显然在两个pH值下，柠檬酸盐配制的单克隆抗体溶液比醋酸盐和组氨酸配制的溶液的浊度都高很多。除pH6.0的醋酸盐制剂外，后两个缓冲剂具有非常相似的特征。这一结果表明，组氨酸和醋酸盐缓冲剂较之柠檬酸盐缓冲剂能明显更好的防止抗体分子的聚集。
搅拌试验
为进一步测量浓缩的单克隆抗体的稳定性，进行了加速的聚集研究。取来自TFF过程的各种过滤的制剂3毫升，放入无菌的5cc I型玻璃瓶中，用灰色的特氟隆面的丁基橡胶塞子塞住，并用卷曲封口封盖。然后将玻璃瓶放入震荡器中，以700rpm室温下搅拌72小时。每种浓缩抗体制剂通过0.2μ的膜过滤，其浓度调整为150mg/ml。在搅拌前后的OD320和OD580读数列于表II中。虽然初始的OD320读数均较低，且彼此很相近，但经搅拌后柠檬酸盐配制抗体浊度最高，然后依次是组氨酸和醋酸盐。OD580测量反映了相似的趋向性。我们没有发现任何pH对于浊度的特异趋向性，但在同一缓冲剂内，不同的pH值会导致不同水平的聚集。
表II
    制剂            OD320            OD580
    前     后     前     后
    20mM组氨酸，pH5.5     0.292     0.868     0.007     0.135
    20mM组氨酸，pH6.0     0.306     1.010     0.007     0.168
    20mM醋酸盐，pH5.5     0.291     0.868     0.011     0.148
    20mM醋酸盐，pH6.0     0.282     0.610     0.012     0.082
    20mM柠檬酸盐，pH5.5     0.375     ＞2.0     0.017     0.470
    20mM柠檬酸盐，pH6.0     0.371     1.219     0.013     0.210
不同的IDEC-114制剂的粘度
浓缩至150mg/ml的样品的动力学粘度用标准化的2号Cross ArmViscometer(VWR)进行测定。所有测定均用3毫升的溶液在室温下(23±3℃)进行。图7为表示测定6种不同的IDEC-114制剂的动力学粘度的条图。正如所预期的，柠檬酸盐配制的溶液粘度最高，随后是醋酸盐溶液，组氨酸缓冲溶液粘度最低。同样，在同种缓冲剂内，pH似乎对粘度有影响，但在不同的缓冲剂间没有发现pH的特异趋向性。

Claims (121)

1.一种浓缩的抗体组合物，其基本由抗体和浓度为约2mM-约48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成。
2.权利要求1的组合物，其中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约3mM-约48mM。
3.权利要求1的组合物，其中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约4mM-约45mM。
4.权利要求1的组合物，其中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约5mM-约40mM。
5.权利要求1的组合物，其中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为20mM-25mM。
6.权利要求1的组合物，其中pH为约4.0-约7.5。
7.权利要求1的组合物，其中pH为4.5-7.0。
8.权利要求1的组合物，其中pH为5.0-6.5。
9.权利要求1的组合物，其中pH为5.5-6.0。
10.权利要求1的组合物，其中抗体为单克隆抗体。
11.权利要求10的组合物，其中抗体为含有一个物种的可变区和不同物种的恒定区的嵌合抗体。
12.权利要求11的组合物，其中抗体是含有非人类物种可变区和人类恒定区的嵌合抗体。
13.权利要求12的组合物，其中抗体是含有旧大陆猴可变区和人类恒定区的嵌合抗体。
14.权利要求10的组合物，其中抗体是人源化的抗体，含有非人类物种的高变区和人类的恒定区。
15.权利要求1的组合物，其中抗体为选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的同种型中的一种或多种。
16.权利要求15的组合物，其中抗体为IgG抗体。
17.权利要求16的组合物，其中抗体为IgG1或IgG4抗体。
18.权利要求1的组合物，其中抗体的浓度至少为50mg/ml。
19.权利要求1的组合物，其中抗体的浓度至少为100mg/ml。
20.权利要求1的组合物，其中抗体包括选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。
21.权利要求20的组合物，其中抗体包括至少一种选自抗CD80抗体IDEC-114、抗gp39抗体IDEC-131、抗CD4抗体IDEC151、抗CD23抗体IDEC-152，和抗CD20抗体RITUXAN的单克隆抗体。
22.一种用于制备浓缩抗体制剂的方法，包括步骤：
a)提供初始的抗体制剂，其基本上由抗体和浓度为约2mM-约48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成；和
(b)使该初始抗体制剂经膜过滤，从抗体制剂中除去水和缓冲剂而保留抗体，
从而制备与初始抗体制剂相比具有更高抗体浓度的抗体制剂。
23.权利要求22的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约3mM-约48mM。
24.权利要求22的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约4mM-约45mM。
25.权利要求22的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约5mM-约40mM。
26.权利要求22的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为20mM-25mM。
27.权利要求22的方法，其中初始抗体制剂的pH为约4.0-7.5。
28.权利要求22的方法，其中初始抗体制剂的pH为4.5-7.0。
29.权利要求22的方法，其中初始抗体制剂的pH为5.0-6.5。
30.权利要求22的方法，其中初始抗体制剂的pH为5.5-6.0。
31.权利要求22的方法，其中抗体为单克隆抗体。
32.权利要求31的方法，其中抗体为含有非人类物种可变区和人类恒定区的嵌合抗体。
33.权利要求32的方法，其中抗体为含有旧大陆猴可变区和人类恒定区的嵌合抗体。
34.权利要求31的方法，其中抗体为含有非人类物种高变区、至少一种人构架区和人类恒定区的人源化抗体。
35.权利要求22的方法，其中抗体为选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的一种或多种同种型。
36.权利要求35的方法，其中抗体为IgG抗体。
37.权利要求36的方法，其中抗体为IgG1或IgG4抗体。
38.权利要求22的方法，其中由步骤b)制备的抗体制剂中抗体的浓度至少为50mg/ml。
39.权利要求22的方法，其中由步骤b)制备的抗体制剂中抗体的浓度至少为100mg/ml。
40.权利要求22的方法，其中抗体包括选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。
41.权利要求22的方法，其中抗体包括至少一种选自抗CD80抗体IDEC-114、抗gp39抗体IDEC-131、抗CD4抗体IDEC151、抗CD23抗体IDEC-152，和抗CD20抗体rituximab的单克隆抗体。
42.一种用于制备浓缩的抗体制剂的改进的方法，包括步骤：
(a)提供初始抗体制剂，其基本上由抗体和缓冲剂水溶液组成；和
(b)使初始抗体制剂经膜过滤，从抗体制剂中除去水和缓冲剂而保留抗体，
从而制备与初始抗体制剂相比具有更高浓度抗体的抗体制剂；
改进包括使用选自浓度为约2mM-约48mM的组氨酸或醋酸盐的缓冲剂。
43.权利要求42的改进的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约3mM-约48mM。
44.权利要求42的改进的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约4mM-约45mM。
45.权利要求42的改进的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约5mM-约40mM。
46.权利要求42的改进的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为20-25mM。
47.权利要求42的改进的方法，其中初始抗体制剂的pH为约4.0-7.5。
48.权利要求42的改进的方法，其中初始抗体制剂的pH为4.5-7.0。
49.权利要求42的改进的方法，其中初始抗体制剂的pH为5.0-6.5。
50.权利要求42的改进的方法，其中初始抗体制剂的pH为5.5-6.0。
51.权利要求42的改进的方法，其中抗体为单克隆抗体。
52.权利要求51的改进的方法，其中抗体为含有非人类物种可变区和人类恒定区的嵌合抗体。
53.权利要求52的改进的方法，其中抗体为含有旧大陆猴可变区和人类恒定区的嵌合抗体。
54.权利要求51的改进的方法，其中抗体为含有非人类物种高变区、至少一种人类构架区和人类恒定区的人源化抗体。
55.权利要求42的改进的方法，其中抗体为选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的一种或多种同种型。
56.权利要求55的改进的方法，其中抗体为IgG抗体。
57.权利要求56的改进的方法，其中抗体为IgG1或IgG4抗体。
58.权利要求42的改进的方法，其中由步骤b)制备的抗体制剂中抗体的浓度至少为50mg/ml。
59.权利要求42的改进的方法，其中由步骤b)制备的抗体制剂中抗体的浓度至少为100mg/ml。
60.权利要求42的改进的方法，其中抗体包括选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。
61.权利要求42的改进的方法，其中抗体包括至少一种选自抗CD80抗体IDEC-114、抗gp39抗体IDEC-131、抗CD4抗体IDEC151、抗CD23抗体IDEC-152，和抗CD20抗体rituximab的单克隆抗体。
62.一种用于制备含有抗体作为活性组分的药物组合物的方法，包含步骤：
(a)提供初始抗体制剂，其基本上由抗体和浓度约为2mM-约48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成；和
(b)使初始抗体制剂经膜过滤，从抗体制剂中除去水和缓冲剂而保留抗体，从而制备与初始抗体制剂相比具有更高抗体浓度的抗体制剂；和
(c)将步骤b)中浓缩的抗体制剂与一种或多种药物可接受的载体组合制备药物组合物。
63.权利要求62的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约3mM-约48mM。
64.权利要求62的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约4mM-约45mM。
65.权利要求62的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约5mM-40mM。
66.权利要求62的方法，其中初始抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为20mM-25mM。
67.权利要求62的方法，其中初始抗体制剂的pH为约4.0-7.5。
68.权利要求62的方法，其中初始抗体制剂的pH为4.5-7.0。
69.权利要求62的方法，其中初始抗体制剂的pH为5.0-6.5。
70.权利要求62的方法，其中初始抗体制剂的pH为5.5-6.0。
71.权利要求62的方法，其中抗体为单克隆抗体。
72.权利要求71的方法，其中抗体为含有非人类物种可变区和人类恒定区的嵌合抗体。
73.权利要求72的方法，其中抗体为含有旧大陆猴可变区和人类恒定区的嵌合抗体。
74.权利要求71改进的方法，其中抗体为含有非人类物种高变区、至少一个人类构架区和人类恒定区的人源化抗体。
75.权利要求62的方法，其中抗体为选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的一种或多种同种型。
76.权利要求75的方法，其中抗体为IgG抗体。
77.权利要求76的方法，其中抗体为IgG1或IgG4抗体。
78.权利要求62的方法，其中用步骤b)制备的抗体制剂中抗体的浓度至少为50mg/ml。
79.权利要求62的方法，其中用步骤b)制备的抗体制剂中抗体的浓度至少为100mg/ml。
80.权利要求62的方法，其中抗体包括选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。
81.权利要求62的方法，其中抗体包括至少一种选自抗CD80抗体IDEC-114、抗gp39抗体IDEC-131、抗CD4抗体IDEC151、抗CD23抗体IDEC-152，和抗CD20抗体rituximab的单克隆抗体。
82.一种改进的治疗方法，其包括给予含有抗体的药物组合物，改进包括给予药物组合物，其为通过使(a)抗体制剂，其基本上由含有至少一种治疗有效剂量的抗体和浓度为大约2mM-约48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，并已通过滤膜过滤法浓缩，与(b)一种或多种药物可接受的载体组合而制备药物组合物。
83.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约3mM-约48mM。
84.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约4mM-约45mM。
85.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约5mM-约40mM。
86.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为20mM-25mM。
87.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂的pH为约4.0-7.5。
88.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂的pH为4.5-7.0。
89.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂的pH为5.0-6.5。
90.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂的pH为5.5-6.0。
91.权利要求82的改进的方法，其中抗体为单克隆抗体。
92.权利要求91的改进的方法，其中抗体为嵌合的抗体。
93.权利要求91的改进的方法，其中抗体为人源化的抗体。
94.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂包括选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的一种或多种同种型的抗体。
95.权利要求94的改进的方法，其中抗体为IgG抗体。
96.权利要求95的改进的方法，其中抗体为IgG1或IgG4抗体。
97.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂的抗体浓度至少为50mg/ml。
98.权利要求82的改进的方法，其中a)的抗体制剂的抗体浓度至少为100mg/ml。
99.权利要求82的改进的方法，其中抗体包括选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。
100.权利要求82的改进的方法，其中抗体包括至少一种选自抗CD80抗体IDEC-114、抗gp39抗体IDEC-131、抗CD4抗体IDEC151、抗CD23抗体IDEC-152，和抗CD20抗体rituximab的单克隆抗体。
101.权利要求82的改进的方法，包括给予患有选自癌症、变应性疾病、自身免疫疾病和淋巴瘤的疾病的患者以治疗有效剂量的治疗性抗体。
102.一种可用于治疗患有或倾向患有某种病症的哺乳动物的试剂盒，其包含至少一个含有药物组合物的容器，所述的药物组合物为将(a)抗体制剂，其基本上由含有至少一种治疗有效剂量的抗体和浓度约为2mM-约48mM的组氨酸或醋酸盐缓冲剂的水溶液组成，并已通过膜过滤浓缩，与(b)一种或多种药物可接受的载体组合的产品；
该试剂盒还包含指明上述药物组合物可用来治疗所述病症的标签或插页。
103.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约3mM-约48mM。
104.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约4mM-约45mM。
105.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为约5mM-约40mM。
106.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂中组氨酸或醋酸盐缓冲剂的浓度为20mM-25mM。
107.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂的pH为约4.0-7.5。
108.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂的pH为4.5-7.0。
109.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂的pH为5.0-6.5。
110.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂的pH为5.5-6.0。
111.权利要求102的试剂盒，其中抗体为单克隆抗体。
112.权利要求111的试剂盒，其中抗体为嵌合的抗体。
113.权利要求111的试剂盒，其中抗体为人源化的抗体。
114.权利要求102的试剂盒，其中a)的抗体制剂包括选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的一种或多种同种型的抗体。
115.权利要求114的试剂盒，其中抗体为IgG抗体。
116.权利要求115的试剂盒，其中抗体为IgG1或IgG4抗体。
117.权利要求102的试剂盒，其中a)的浓缩抗体制剂中的抗体浓度至少为50mg/ml。
118.权利要求102的试剂盒，其中a)的浓缩抗体制剂中的抗体浓度至少为100mg/ml。
119.权利要求102的试剂盒，其中抗体包括选自抗CD80、抗gp39、抗CD4、抗CD23和抗CD20抗体的单克隆抗体。
120.权利要求102中的试剂盒，其中抗体包括至少一种选自抗CD80抗体IDEC-114、抗gp39抗体IDEC-131、抗CD4抗体IDEC151、抗CD23抗体IDEC-152，和抗CD20抗体rituximab的单克隆抗体。
121.权利要求102的试剂盒，其可用于治疗选自癌症、变应性疾病、自身免疫性疾病和淋巴瘤的病症。
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