CN1656899A - 一种雷公藤提取物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明是一种雷公藤提取物的制备方法。现有方法的原料都用根皮，与医用产生了原料上的冲突，且得到的雷公藤提取物中的活性成分含量少，收率低，生产成本高。本发明的制备步骤如下：将雷公藤叶浸泡在有机溶剂中，所述的雷公藤叶与有机溶剂的质量体积比为1∶10～45，回流提取浸泡物，提取时间为5～48小时，提取温度在50～110℃；对上步所得的提取物作进一步的后处理，得到膏状物。本发明用以前被大量废弃的雷公藤叶制备雷公藤提取物，变废为宝，避免了与医用产生原料上的冲突，大大降低了生产成本；利用本发明制得的生物农药制剂，其生物话性更高，杀虫效果好，杀虫谱广泛。

Description

一种雷公藤提取物的制备方法
技术领域
本发明属于农药原料的加工领域，具体地说是一种作为生物农药配方中的重要成分雷公藤提取物的制备方法。
背景技术
目前，我国使用的杀虫剂多数是化学合成品，许多农药中含有氯、磷有机物，虽然能有效杀灭害虫，但残留在粮食、蔬菜、水果上对人的健康也构成了极大的威胁。近年来，农药中毒的人数多达10万余人。同时，长期使用化学农药也造成了害虫的抗药性，并且化学农药中所含有的氯、铜、砷、铅等重金属元素，严重地污染了环境和农产品，不利于发展绿色企业、绿色食品。
通过对雷公藤属植物的研究证实，其化学成分有生物碱13个，二萜13个，倍半萜12个，此外还有甙类、糖类、醇类、微量元素等，而且这些成分中有17个具有多种生物活性，包括抗炎、免疫抑制、抗菌、杀虫、抗肿瘤、抗生育等作用，有效成分中以二萜类最多，依次为生物碱、三萜类、微量元素等。雷公藤浸提物对众多害虫和园林树木害虫较好的防治效果。在民间，其常作为农药用以杀虫、灭孑孓、灭螺、灭鼠等，有“菜虫药”之称。利用雷公藤浸提物加工成合适的剂型用于蔬菜、桑叶、茶叶以及其它农作物上，是一种植物源农药，来源于自然界，与环境相容性好，并符合环保要求，具有良好的市场前景，目前也出现了几篇这方面的专利。
CN1289540公开了一种雷公藤杀虫剂及其制法，是将雷公藤根皮经过一定的加工过程，制成可湿性粉剂、乳油、水乳剂及微乳剂等剂型的雷公藤杀虫剂，对菜青虫、小菜蛾、斜纹夜蛾等害虫有显著疗效。
CN1317248公开了一种绿色杀虫灵，其主要成分包括雷公藤生药提取物TWI、TWII和TWIII，TWI∶TWII∶TWIII的重量比为1∶(0.8～1.2)∶(0.8～1.2)。或者主要成分包含雷公藤生药提取物TWI、TWII或TWIII。所述的制备方法为采用雷公藤生药，渗漉提取、上硅胶柱层析洗脱，得提取物TWI。或雷公藤生药渗漉提取，上硅胶柱层析，不同洗脱液洗脱，收集成分TWII和TWIII。
CN1337157公开了涉及雷公藤非水提取物在农药制备方面的用途。将雷公藤提取物与农药助剂混合制成的农药制剂能够迅速杀灭棉花、蔬菜、水稻、菜叶、花卉等植物上的害虫，如菜青虫、棉铃虫、小菜蛾、菜蚜、桃蚜、稻粉虱等。雷公藤提取物与阿维菌素、苏云金芽孢杆菌等生物农药或高效氯氰菊酯、灭多威等化学农药复配具有明显的相互增效作用。
以上公开的三份发明专利申请，都存在着如下不足：(1)现有雷公藤提取物的制备都用根皮而没用叶，与制备治疗类风湿性关节炎的雷公藤浸膏产生了原料上的冲突，且得到的雷公藤提取物中的活性成分含量少；(2)工艺繁琐，操作较为复杂，收率低，生产成本高；(3)要和化学农药混配使用，没有真正体现出生物农药的价值。
经研究认为雷公藤中主要活性成分为雷公藤内酯醇，同时雷公藤内酯醇也是其主要的毒性成分。而且发现雷公藤不同部位的内酯醇含量，以叶最高，花次之，其次为根，叶中含量是根的2.2倍。但国内各厂家在利用雷公藤植物根部浸提用于治疗类风湿性关节炎的雷公藤浸膏的同时，往往将其毒性较大的叶丢弃。而雷公藤根部一般要在雷公藤种植了3～5年后才有使用价值，时间越长其药用价值越大。在这期间，为减少营养消耗，每年夏秋两季都要对雷公藤叶进行修剪，冬季其则自行脱叶，而这些雷公藤叶没有得到充分利用，造成了极大的材料浪费。
发明内容
本发明所要解决的技术问题和提出的技术任务是克服上述现有技术的缺陷，提供一种利用雷公藤叶来制备雷公藤提取物的方法，以降低生产成本，提高雷公藤提取物中活性成分的含量，达到雷公藤原料的充分利用，避免与医用产生雷公藤原料上的冲突。
本发明的技术方案是这样的：一种雷公藤提取物的制备方法，其特征是步骤如下：将雷公藤叶(干重)浸泡在有机溶剂中，所述的雷公藤叶与有机溶剂的质量体积比为1∶10～45，回流提取浸泡物，提取时间为5～48小时，提取温度在50～110℃；对上步得到的提取物作进一步的后处理。通过此种简单工艺的制备方法，将雷公藤叶变废为宝，大大降低了生产成本，达到了雷公藤原料的充分利用，避免了与医用产生原料上的冲突；由于雷公藤叶中的内酯醇含量是根的2.2倍，较大地提高了雷公藤提取物中内酯醇的含量，用此雷公藤提取物制备得到的生物农药制剂，其生物活性高，杀虫效果好，杀虫谱广泛。
所述的雷公藤提取物的制备方法，对提取物的后处理有以下三种处理方法：①直接将提取物浓缩至膏状物；②用氯仿萃取后浓缩至膏状物；③先用中性氧化铝吸附，接着用氯仿洗脱，再后浓缩至膏状物，上述三种处理方法中的浓缩温度在30～70℃。
所述的雷公藤提取物的制备方法，第二种处理方法的具体步骤如下：先将提取液浓缩至其原来体积的1/5～1/2，再加入浓缩后提取液体积5～20倍量的氯仿(优选8～12倍)，充分搅拌，静置分层，对氯仿层进行浓缩至膏状物即可。
所述的雷公藤提取物的制备方法，第三种处理方法的具体步骤如下：先将提取物浓缩至其原有体积的1/8～1/3，接着在浓缩液中加入25％～35％的中性氧化铝，充分搅拌，吸附完成后过滤，用8～10倍过滤物体积的氯仿浸泡中性氧化铝，浓缩氯仿至膏状物。
所述的雷公藤提取物的制备方法，有机溶剂为乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、丁酮、甲苯、二甲苯中的任一种或至少两种的组合。
所述的雷公藤提取物的制备方法，雷公藤叶与有机溶剂的质量体积比优选为1∶20～25，提取时间优选为10～20小时，浓缩温度优选在45～60℃，浓缩真空度控制在-0.08～0.09Mpa。
本发明工艺简单，利用以前被大量废弃的雷公藤叶制备一种高效生物农药的原料(即雷公藤提取物)，将雷公藤叶变废为宝，大大降低了生产成本，达到了雷公藤原料的充分利用，避免了与医用产生原料上的冲突；本发明较大地提高了雷公藤提取物中内酯醇的含量，用本发明雷公藤提取物制得的生物农药制剂，其生物活性更高，杀虫效果好，杀虫谱广泛。
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
具体实施方式
通过常规的制剂方法就可将本发明制得的雷公藤提取物制成生物农药制剂，无需再添加化学助剂，所述的生物农药制剂中雷公藤提取物含量(w/w)控制在0.5～60％之间，其剂型包括：乳剂(EC)、微胶囊剂(MC)、浓乳剂(EW)微乳剂(ME)、可湿性粉剂(WP)等。将各种剂型作用于各种害虫进行杀虫试验，就可以得到杀虫谱，针对不同害虫采用不同剂型。
实施例1：称取雷公藤碎叶(干重)30g，加入750ml无水乙醇，78℃回流15hr后过滤，再将其提取液浓缩至膏状物，得产品4.3g，用25ml无水乙醇转移至锥形瓶内。该浓缩物制成乳油剂型，浓度为2.0％，进行杀虫活性试验，具体杀虫效果见表2。
实施例2：称取雷公藤碎叶30g，加入750ml无水乙醇，82℃、回流5hr、过滤，滤渣中再加入750ml无水乙醇，回流5hr、过滤，合并滤液减压浓缩至原来体积的一半，再用18倍量氯仿萃取后浓缩至膏状物，得膏状物3.9g，收率为13.0％，将此膏状物制成微乳液，浓度为20％。进行杀虫活性试验。发现其可有效防治蚜虫、小菜蛾、斜纹夜蛾的三龄幼虫等害虫，防效可达90％以上，具体杀虫效果见表2。
实施例3：称取雷公藤碎叶30g，加入750ml无水乙醇，82℃下回流5hr、过滤，再将其提取液浓缩得4.5g膏状物，加入400ml氯仿萃取，有褐色沉淀，去沉淀再将氯仿溶解液浓缩至干，用25ml无水乙醇转移至锥形瓶内。该制剂稀释至2400ml时，经过48hr后观察，其对斜纹夜蛾的三龄幼虫的致死率可达80％以上，见下表1，具体杀虫效果见表2。
        表1  实施例3作用于一些害虫的生物活性
防治对象        试虫数    死亡数        死亡率
CK                50         0          0
蚜虫              48         40         83.3％
小菜蛾            49         41         83.4％
斜纹夜蛾          50         48         90.0％
棉铃虫            48         41         85.4％
实施例4：称取20g雷公藤粉碎叶于索氏抽提器中，85℃回流14hr，开始时用400ml乙酸乙酯回流，将提取液中加入80g中性Al2O3进行浓缩，浓缩至干后，将吸附后的Al2O3装入索氏抽提器中用400ml氯仿回流共28hr，再将得到的提取液浓缩至干，用25ml无水乙醇转移至锥形瓶内。该制剂稀释2000～2400倍，可防治粘虫、斜纹夜蛾、玉米螟等害虫，但效果相对差一些。具体杀虫效果见表2。
实施例5：称取雷公藤碎叶30g，加入750ml75％乙醇，70℃回流5hr，将提取液浓缩至一半时，加入120g中性氧化铝，继续浓缩至干后，加入500ml氯仿，充分搅拌0.5hr，过滤掉氧化铝，滤液浓缩至干，用25ml无水乙醇转移至锥形瓶内。该制剂稀释至2000mg/L，可防治斜纹夜蛾、二化螟、灰飞虱、高粱蚜、桃蚜等害虫，效果较好，具体杀虫效果见表2。
实施例6：称取雷公藤碎叶30g，加入750ml乙酸乙酯，80℃下回流5hr，将提取液浓缩至一半时，加入120g中性氧化铝，继续浓缩至干后，加入500ml氯仿，充分搅拌0.5hr，过滤掉氧化铝，滤液浓缩至干，用25ml无水乙醇转移至锥形瓶内。该制剂稀释至2000mg/L，也可防治实施例5中所述的害虫。但经比较，其效果优于实施例5，具体杀虫效果见表2。
上述的实施例用于杀虫试验的生物有：
(1)防治水稻害虫：二化螟、灰飞虱、褐飞虱、黑尾叶蝉、稻苞虫等；
(2)防治麦类害虫：麦二叉蚜、麦长管蚜、麦红吸浆虫等；
(3)防治杂粮害虫：粘虫、玉米螟、高粱蚜、甘薯麦蛾等；
(4)防治棉花害虫：棉铃虫、棉蚜、棉叶蝉、棉盲蝽等；
(5)防治蔬菜害虫：菜青虫、小菜蛾、蚜虫、温室粉虱等；
(6)防治果树害虫：柑橘长卷蛾、柑橘凤蝶、吸果夜蛾、桃蛀螟、桃蚜等；对害虫的作用方式有：胃毒作用、触杀作用、拒食作用、熏蒸作用等。
杀虫试验的方法：浸渍法，浸渍时间为5s，浸渍后放于透明玻璃盒中，50头/盒，并于28℃，RH＝80％，光照14h/天的恒温箱中培养。24h、48h时检查其死亡情况；点滴法，点滴量0.5μL/头，和浸渍法相同的条件下观察其24hr、48hr时的死亡情况。
下表列出了雷公藤不同制剂作用于不同害虫的生物活性情况，可以看出其生物活性较高，杀虫谱比较广泛。提取物制成制剂前用氯仿萃取后杀虫效果最好，而将提取物用Al2O3吸附后再用氯仿洗脱浓缩液的杀虫效果相对来说差一些。
            表2.雷公藤制剂作用于不同害虫的生物活性
    处理方法     剂型   作用对象   生测方法   毒力方程(24hr)   相关系数   LC50(mg/l)或LD50(μg/头)(24hr) 对应的实施例
    IIIIIIIIIIIIIIIIIIIII     乳油A微乳剂B乳油微乳剂微乳剂乳油微乳剂微乳剂微乳剂微乳剂微乳剂乳油   二化螟灰飞虱麦二叉蚜粘虫粘虫甘薯麦蛾玉米螟菜青虫菜青虫菜青虫小菜蛾斜纹夜蛾   浸渍法点滴法浸渍法浸渍法点滴法浸渍法浸渍法浸渍法浸渍法浸渍法浸渍法浸渍法   Y＝2.1820x+1.0204Y＝2.0735x-0.1728Y＝1.8790x+2.6054Y＝1.5412x+2.3045Y＝1.4786x+2.4152Y＝1.9500x+2.5431Y＝1.7832x+1.6415Y＝1.9475x+1.9131Y＝2.0354x+2.0753Y＝1.8643x+1.9430Y＝1.8715x+2.0347Y＝1.9276x+0.7802   0.99510.98370.99910.99150.99710.98120.99160.96790.98580.98480.98980.9679   19.54mg/L18.75μg/头37.47mg/L21.45μg/头58.45mg/L71.21μg/头53.71mg/L24.51mg/L20.01mg/L56.36mg/L37.45mg/L43.18mg/L     216213212511
    IIIIIIIII 乳油乳油乳油乳油   斜纹夜蛾斜纹夜蛾棉铃虫桃蛀螟   浸渍法浸渍法点滴法点滴法  Y＝2.0748x+2.4123Y＝2.1356x+3.0014Y＝1.4725x+2.1817Y＝1.7231x+2.2135  0.99560.98790.98980.9914  30.46mg/L57.91mg/L23.01μg/头82.17μg/头     2433
A乳油浓度为2.0％
B微乳液浓度为20％
I直接将提取物浓缩至膏状物，再用一定的无水乙醇转移稀释
II将提取物用氯仿萃取后浓缩至膏状物
III将提取物用中性氧化铝吸附后用氯仿洗脱后再浓缩至膏状物

Claims (7)

1、一种雷公藤提取物的制备方法，其特征是步骤如下：将雷公藤叶浸泡在有机溶剂中，所述的雷公藤叶与有机溶剂的质量体积比为1∶10～45，回流提取浸泡物，提取时间为5～48小时，提取温度在50～110℃；对上步所得的提取物作进一步的后处理。
2、根据权利要求1所述的雷公藤提取物的制备方法，其特征是对提取物的后处理有以下三种处理方法：①直接将提取物浓缩至膏状物；②用氯仿萃取后浓缩至膏状物；③先用中性氧化铝吸附，接着用氯仿洗脱，再后浓缩至膏状物，上述三种处理方法中的浓缩温度在30～70℃。
3、根据权利要求2所述的雷公藤提取物的制备方法，其特征是所述第二种处理方法的具体步骤如下：先将提取液浓缩至其原来体积的1/5～1/2，再加入浓缩后提取液体积5～20倍量的氯仿，充分搅拌，静置分层，对氯仿层进行浓缩至膏状物即可。
4、根据权利要求3所述的雷公藤提取物的制备方法，其特征是所述氯仿加入的倍数优选8～12。
5、根据权利要求2所述的雷公藤提取物的制备方法，其特征是所述第三种处理方法的具体步骤如下：先将提取物浓缩至其原有体积的1/8～1/3，接着在浓缩液中加入25％～35％的中性氧化铝，充分搅拌，吸附完成后过滤，用8～10倍过滤物体积的氯仿浸泡中性氧化铝，浓缩氯仿至膏状物。
6、根据权利要求1所述的雷公藤提取物的制备方法，其特征是所述的有机溶剂为乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、丁酮、甲苯、二甲苯中的任一种或至少两种的组合。
7、根据权利要求1所述的雷公藤提取物的制备方法，其特征是所述的雷公藤叶与有机溶剂的质量体积比优选为1∶20～25，提取时间优选为10～20小时，浓缩温度优选在45～60℃，浓缩真空度控制在-0.08～0.09Mpa。
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