CN1641027A - 小麦ver2基因启动子 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种小麦VER2基因启动子。本发明所提供的小麦VER2基因启动子是下列核苷酸序列之一：1)序列表中SEQ ID №：1的DNA序列；2)与序列表中SEQID №：1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA序列。本发明的启动子说明内源VER2在小麦中表达与春化过程中染色质结构的改变无直接关系，而可能受春化处理所诱导或修饰的其它转录因子调控，将在VER2基因的表达调控机制研究中起到重要作用。

Description

小麦VER2基因启动子

技术领域

本发明涉及一种启动子，特别涉及一种小麦VER2基因启动子。

背景技术

冬性及两年生植物，在种子萌发或营养生长初期，给予一定时期的低温处理(0-10℃)可以促进开花，这种经低温诱导而促进开花的效应称为春化作用(雍纬东，种康，许智宏，等.高等植物开花时间的基因调控研究.科学通报，2000，45(5)：455-466；Michaels S D.Amasino，R M，Loss of FLOWERING LOCUS C activityeliminates the late-flowering phenotype of FRIGIDA and autonomous pathwaymutations but not responsiveness to vernalization.Plant Cell，2001，13：935-941)。在春化处理的过程中，植物茎尖生长点形态结构发生变化以前，就已经进行了许多的代谢过程，并且各种代谢方式具有严格的顺序性和多步骤性(ChouardP.Vernalization and its relation to dormancy，Annu Rev Plant Physiol，1960，11：191-238；谭克辉.低温诱导植物开花的机理.植物生理生化进展，1983，2：90-107；谭克辉.春化过程中特异蛋白质的合成.植物学集刊，1992，6：13-16；YongW D，Xu Y Y，Xu W Z，et al.Vernalization-induced flowering in wheat ismediated by a lectin-like gene VER2.Planta，2003，217：261-270)。

近年来，有关春化作用的分子机理研究取得了一定的进展。一些晚花生态型拟南芥可以被春化作用所逆转而使开花提前，其晚花的特性受到2个显性等位基因FRIGIDA(FRI)和FLOWERING LOCUS C(FLC)的控制(Clark J H，Dean C.Mapping FRI，a locus controlling flowering time and vernalization response inArabidopsis thaliana.Mol Gen Genet，1994，242：81-89；Sanda S，John M，AmasinoR.Analysis of flowering time in ecotypes of Arabidopsis thaliana，J.Hered，1997，88：69-72)。FRI通过促进FLC的转录导致植株晚花，而编码1个含有MADS-box转录因子的FLC可能是拟南芥早花的主要阻抑物，但FLC功能完全丧失突变体开花仍受春化处理促进，因此春化作用可能存在独立于FLC以外的其他途径(Sheldon CC，Burn J E，Perez P P，et al，The FLF MADS box gene：Repressor of floweringin Arabidopsis regulated by vernalization and methylation，Plant Cell，1999，11：445；Sheldon C C，Rouse D T，Finnegan E J，et al.The molecular basisof vernalization：The central role FLOWERING LOCUS C(FLC).Proc Nalt AcadSci USA，2000，97：3753-3758)。FLC较高丰度的转录和表达量经春化处理逐渐降低，并且维持在低水平的含量，从而使得春化敏感的生态型拟南芥开花提前(Michaels S D，Amasino R M.FLOWERING LOCUS C encodes a novel MADS domainprotein that acts as a repressor of flowering.Plant Cell，1999，1：949-956；Sheldon C C，Burn J E，Perez P P，et al，The FLF MADS box gene：Repressorof flowering in Arabidopsis regulated by vernalization.and methylation，Plant Cell，1999，11：445)。然而，在vrn突变体vrn1和vrn2中，低温处理可以使突变体中FLC的mRNA含量减少，但当低温消除后，FLC的mRNA含量又上升并恢复到原有的水平，表明VRN可能编码一些FLC的调控因子(Gendall A R，Levy YY，Wilson A，et al.The VERNALIZATION 2 gene mediates the epigeneticregulation of vernalization in Arabidopsis.Cell，2001，107：525-535；LevyY Y，Mesnage S，Mylne J S，et al.Multiple roles of Arabidopsis VRN1 invernalization and flowering time control.Science，2002，297：243-297)。VRN2，VRN1相继被克隆，其中VRN2编码1种类似于动植物中Polycomb group(PcG)结构的锌指蛋白，VRN1编码一种非特异性的DNA结合蛋白，在整个发育过程中都表达，常常以蛋白复合体的形式作用于染色质的结构上，沉默某些基因的表达。它们在春化过程中起到稳定FLC经低温处理后的低水平表达的作用，使茎尖分生组织的细胞对春化作用存在记忆功效(Gendall A R，Levy Y Y，Wilson A，et al.TheVERNALIZATION 2 gene mediates the epigenetic regulation of vernalizationin Arabidopsis.Cell，2001，107：525-535；Levy Y Y，Mesnage S，Mylne J S，et al.Multiple roles of Arabidopsis VRN1 in vernalization and floweringtime control.Science，2002，297：243-297)。

低温处理促进植物开花，在一定程度上可以解析为春化过程对染色质结构的改变(如FLC的转录)或翻译后修饰(VRN2和VRN1蛋白结构的变化或蛋白复合体的形成)(Gendall A R，Levy Y Y，Wilson A，et al.The VERNALIZATION 2 gene mediatesthe epigenetic regulation of vernalization in Arabidopsis.Cell，2001，107：525-535；Levy Y Y，Mesnage S，Mylne J S，et al.Multiple roles of ArabidopsisVRN1 in vernalization and flowering time control.Science，2002，297：243-297)。低温诱导染色质结构的改变可激活或抑制一些基因的表达，如DNA的去甲基化作用，利用药物或转基因减少胞嘧啶甲基化可以部分取代春化处理促进晚花植物开花(Dennis E S，Bilodeau P，Burn J，et al.Methylation controls thelow temperature introduction of flowering in Arabidopsis.In：Greenland A.J，Meyerowitz E M，Steer M，(ed.Control of Plant Development：Genes andSignals，Symposia of the Society for Experimental Biology Vol.51，Companyof Biologists，Cambridge，MD，1997，97-103；Finnegan E J，Genger R K，KovacK，et al.DNA methylation and the promotion of flowering by vernalization，Proc Natl Acad Sci USA，1998，95：5824-5829)。本发明人所在实验室通过建立差异筛选富集低温诱导冬小麦(Triticum aestivum L)cDNA文库及差异显示(differential display)技术，克隆到一系列与春化相关的基因(雍纬东，种康，许智宏等.高等植物开花时间的基因调控研究.科学通报，2000，45(5)：455-466；种康，谭克辉，黄华樑等.冬小麦春化作用相关基因的cDNA分子克隆研究.中国科学，B辑，1994，24(9)：964-970；Chong K，Wang L P，Tan K H，et al.Molecularcloning and characterization of vernalization-related(ver)genes in winterwheat.Physiol Plant，1994，92：511-515；Chong K，Bao S L，Xu T，et al.Functional analysis of the VER gene using antisense transgenic wheat.Physiol Plant，1998，102：87-92；赵大中，陈民，种康等.运用差异显示法分离冬小麦春化作用相关cDNA克隆.科学通报，1998，43(10)：965-969)。应用RACE(rapid amplification cDNA ends)和筛选小麦cDNA文库，克隆到基因VER2(AF420243)。RNA原位杂交实验证明，基因VER2的表达主要出现在经春化处理的幼叶中(雍纬东，种康，许智宏等.高等植物开花时间的基因调控研究.科学通报，2000，45(5)：455-466)。

发明创造内容

本发明的目的是提供一种小麦VER2基因启动子。

本发明所提供的小麦VER2基因启动子，来源于小麦属小麦(Triticum aestivumL)，是下列核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ ID №：1的DNA序列；

2)与序列表中SEQ ID №：1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA序列。

序列表中SEQ ID №：1的DNA序列由5968个碱基组成。

含有所述小麦VER2基因启动子的表达盒、表达载体和细胞系也属于本发明的保护范围。

实验证明，在春化作用下，本发明的启动子驱动GFP基因转录表达，表明春化作用是VER2启动子在冬小麦幼叶中驱动基因转录所必需的。进而说明内源VER2在小麦中表达与春化过程中染色质结构的改变无直接关系，而可能受春化处理所诱导或修饰的其它转录因子调控。可对本发明的启动子进行缺失实验以寻找VER2启动子序列上参与春化过程的转录元件。本发明的启动子将在VER2基因的表达调控机制研究中起到重要作用。

附图说明

图1为筛选小麦TAC文库获取基因VER2阳性TAC克隆示意图

图2a为阳性TAC质粒酶切分析电泳图谱

图2b为用[α-³²P]dCTP标记VER2基因探针Southern杂交酶切电泳产物结果

图3a为阳性TAC克隆插入片段(41，788bp)基因预测示意图

图3b为VER2基因组序列结构示意图

图4为VER2动子结构及VER2上游-2769～+73核苷酸序列

图5为VER2启动子的结构及瞬间表达载体pVER2::GFP构建示意图

图6a为春化处理的小麦幼叶表皮薄壁细胞的pVER2::GFP瞬间表达结果

图6b为未经春化处理的小麦幼叶表皮薄壁细胞的pVER2::GFP瞬间表达结果

图6c为春化处理的小麦幼叶表皮薄壁细胞的p35S::GFP瞬间表达结果

图6d为未经春化处理的小麦幼叶表皮薄壁细胞的p35S::GFP瞬间表达结果

具体实施方式

实施例1、小麦VER2基因启动子的获得

1、TAC基因组文库的筛选

(1)池式PCR(pool-PCR)筛选基因VER2阳性克隆池

参照文献(Liu Y G，Shirano Y，Fukaki H，et al.Complementation of plantmutants with large DNA fragments by a transformation-competent artificialchromosome vector accelerates positional cloning.Proc Natl Acad Sci USA，1999，96：6535-6540；方玉达，刘耀光，吴豪等.小麦簇毛麦6VS//6AL易位系可转化人工染色体(TAC)文库的构建.生物工程学报，2000，6(4)：433-436)，利用TAC载体构建小麦-簇毛麦6VS/6AL(Triticum aestivum-Haynaldia villosa)基因组文库，包括2.1×10⁶个克隆，插入片段大小平均35kb左右，库容相当于小麦基因组(1.6×10¹⁰bp)的4.9倍，以约1000个克隆组成混合池的形式保存在22块99孔板中。参照文献(LiuY G，Shirano Y，Fukaki H，et al.Complementation of plant mutants with largeDNA fragments by a transformation-competent artificial chromosome vectoraccelerates posit ional cloning.Proc Natl Acad Sci USA，1999，96：6535-6540)采用池式PCR方法筛选含VER2基因组序列的TAC克隆池。参照文献(Sambrook J，Fritsch E F，Maniatis T.Molecular Cloning(2nd ed).Cold Spring Harbor：ColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)将保存于22块96孔板中的文库混合菌分别接种在3mL含25μg/mL卡那霉素的LB培养基培养内37℃过夜培养，利用碱裂解法提取质粒，获得22块96孔板的质粒文库(1，…，22)，即原始质粒池。分别从1-6块板(1-6)、7-12块板(7-12)、13-17块板(13-17)、18-22块板(18-22)中吸取5μL质粒溶液到4块(I-IV)96孔板相应的孔(A1→A1)中，加入160μL 1/2 TE(10mmol/L Tris-HCl，pH7.5，1mmol/L Na₂EDTA)稀释，成为次级筛选池；进一步从以上4块96孔板中(A1，A2，…，A12)各取10μL混合成32个EP管(IA-IH，IIA-IIH，IIIA-IIIH，IVA-IVH)构成初级筛选池(上述质粒混合过程如图1中图片(a)所示)。如图1中图片(b)所示，设计了两对引物，采用nest-PCR的方法，进行pool-PCR筛选，具体过程如下：以32个初级筛选池的DNA为模板，用外部引物对(5′-TTG TCAACT GGC AAA TAT ATG ATG G-3′和5′-ACG CCC AAA GAA CCC GAC GAT GCT-3′)进行第1轮PCR扩增(图1中图片(b))，扩增程序为：94℃，2min；94℃，30s，64℃，40s，72℃，90s，30循环；72℃，10min。将第1轮PCR产物稀释1000倍取1μL为模板，用内部引物对(5′-GGT CTA TCG TTG GCG GGA CAG GTG A-3′和5′-CCT CTT GCCAGA TAG GTC AAC GTA A-3′)进行第2轮PCR(nest-PCR)扩增，扩增程序为：94℃，40s，72℃，90s，5循环；94℃，30s，68℃，90s，28循环；72℃，10min。电泳分析nest-PCR产物，结果如图1中图片(c)所示，得到3条阳性泳道IIID，IVD，IVE。确定上一级(次级筛选池)的阳性克隆池，进而对原始平板上的克隆池进行筛选，获得对应的原始TAC文库克隆菌的平板上的阳性克隆池(菌克隆池)。阳性克隆池IIID的进一步筛选过程如图1中图片(d)和(e)所示。从阳性菌克隆池(原始平板#4中的D7)取出1μL稀释并进行涂抹平板(25μg·mL¹Km/LB/agar)，37℃培养16h。

(2)高密度膜的制备及阳性单克隆的筛选

高密度膜的制备参照文献(Liu Y G，Liu H，Chen L，et al.Development ofnew transformation-competent artificial chromosome vectors and ricegenomic libraries for efficient gene cloning.Gene，2002，9：282(1-2)：247-255)。挑取步骤(1)得到的单克隆于9块384孔板中(LB培养基，36mmol·L¹K₂HPO₄，13.2mmol·L¹KH₂PO₄，17mmol·L¹柠檬酸盐，4.4％甘油，0.4mmol·L¹MgSO₄，6.8mmol·L¹(NH₄)₂SO₄，25μg·mL¹卡那霉素)，37℃培养过夜。用384针的复制器(V&P Scienfic USA)和制膜设备把9块384孔平板上的3456个TAC克隆复制到8cm×12cm(Amerhsam公司)尼龙膜上，并重复点膜(图1中图片(f))。将接种面朝上置于含25μg·mL¹Km/0.5mmol·L¹IPTG/LB/agar平板，37℃培养过夜。培养好的膜置于溶液(5％SDS，0.2×SSC)饱和浸泡的滤纸上5min，用微波炉高温烘干模使DNA变性并固定在尼龙膜上；将膜转移至90℃的溶液(0.5％SDS，0.2×SSC)中洗净，烘干膜，保存于4℃备用。

(3)Southern杂交

以[α-³²P]dCTP随机标记(BcaBEST DNA聚合物，TaKaRa公司)的基因VER2的cDNA片段为探针，对步骤(2)中的备用高密度膜进行Southern杂交，结果如图1中的图片(f)所示，筛选获得2个阳性克隆(黑色斑点所示为Southern杂交具有阳性信号的单克隆)。繁殖并提取阳性单克隆TAC质粒DNA，用限制性内切酶(HindIII，Sph I，Nco I，Hpa I，EcoR I，EcoR v，Spe I，BamH I，Pst I)酶切TAC质粒，酶切产物1％琼脂糖电泳，结果如图2a所示，表明含有HindIII单酶切位点TAC空载体质粒大小为22.5kb，插入片段大小约在35-43kb之间。图2a中，泳道1-9为Hind III，SphI，Nco I，Hpa I，EcoR I，EcoR V，Spe I，BamH I，Pst I酶切阳性TAC质粒，泳道10为Hind III酶切TAC空载体，M为λ-DNA Hind III DNA ladder。将以上酶切产物电泳转膜，用基因VER2的cDNA片段进行杂交，作Southern分析。Southern分析参照文献(Liu Y G，Liu H，Chen L，et al.Development of new transformation-competentartificial chromosome vectors and rice genomic libraries for efficient gene cloning.Gene，2002，9：282(1-2)：247-255)。结果如图2b所示，表明所有阳性信号均来自插入片段，所克隆到的TAC克隆应含有VER2基因组序列。

2、含VER2基因组序列的TAC质粒测序及序列分析

利用鸟枪(shotgun)方法对阳性TAC质粒进行序列测定。经过梯度氯化铯纯化TACDNAs后，用适当的内切酶剪切成3kb大小片段，亚克隆在pBluescript载体上，转入E.coli DH5α中，提取质粒采用Dyenamic ET Dye Terminator kit(MegaBACE；Amersham Pharmacia公司)进行终端双脱氧的方法，在MegaBACE 1000毛细管测序仪(Amersham Pharmacia公司)完成测序反应。亚克隆的测序产物以8-10倍大小覆盖原TAC质粒，用PHRED(Ewing B，Green P.Base-calling of automated sequencer tracesusing phred II.Error probabilities.Genome Res，1998，8：186-194)和PHRAP26(http://www.phrap.org)程序进行序列的拼接与组合，gap区通过染料终端标记或引物步移和PCR方法完成。基因组序列的分析与预测采用互联网上的序列分析软件FGENESH 1.0(http://genomic.sanger.ac.uk/gf/gf.shtml)等。结果如图3a和图3b所示，图3a表明全长64455 bp TAC质粒含有基因组插入片段为41788bp，软件预测插入片段含有11个基因，其中gene3的外显子与VER2基因的cDNA序列完全同源。同时通过对转录起始点和转录终止点的分析，在转录起始点上游-30存在完整的TATA框区域，而转录终止点存在典型的终止信号，poly(A)_n的信号位点(AATAAA)，进一步证明从cDNA文库筛选得到的VER2基因为全长序列。图3b表明所克隆的VER2基因组序列含有3个内含子，即+361～+652，+843～+991和+1197～+1317。图3b)中，□为非编码区，■为外显子，ATG示起始密码子，TGA示终止密码子，(A)n示poly(A)位点。

在真核生物中，基因的上游启动子常常存在调控基因转录的元件，如TATA框是所有基因正常转录所必需的一般性上游调控元件，而另一类则是调控基因时空特异性表达。对基因VER2的上游进行序列分析，结果如图4所示，表明得到VER2启动子的全序列(-5895～+73)，其中，存在3个482bp较小的重复序列(small-fragment repeatsequence，S-repeat)，同时被2个2161bp的较大重复序列(large-fragment repeatsequence，L-repeat)所分隔，第1个S-repeat片段止于VER2基因转录起始点上游-126位。图4中含下划线的大写斜体区段为基因的5’非编码区，-608～-126为S-repeat，-2769～-608为L-repeat。

实施例2、瞬间表达分析VER2启动子

1、瞬间表达载体pVER2::GFP的构建

表达载体的构建如图5所示，将经位点F64L和S65T突变修饰(如Clontech pEGFPP)的GFP基因(Haseloff J，Amos B.GFP in plants，Trends Genet，1995，11(8)：328-329)连同3′NOS转录终止区序列亚克隆到pUC19质粒上，构建成pUC19-GFP(图5)。由于存在重复序列，利用PCR分3段(-5895～-5413，-5406～-2770，-2764～+73)扩增VER2启动子的全序列(-5895～+73)，将其中PCR产物BamH I-Kpn I片段(-2764～+73)(引物对为5′-AA G GAT CCA CGA ACA CAA GGC ACT TTT TAT TAA ACA-3′和5′-GT G GTA CCC GGG GAG AAT ACT AAT GCT CAA GTT-3′，下画线处分别为BamHI和Kpn I限制性酶切位点)和Sal I Nco I-BamH I片段(-5413～-2770)(引物对为5′-TG G TCG ACC ATG GAC GAA CAC AAG GCA CTT TTT ATT AAA CA-3′和5′-GT G GAT CCTTTC ACA CTT GGC AAA CAT GAA AGA-3′，下画线处分别为Sal I，Nco I和BamH I)限制性酶切并亚克隆到pUC19-GFP载体的Sal I和Kpn I位点之间，进一步通过Sal I和Nco I位点亚克隆第3个片段(-5895～-5414)(引物对为5′-CAG  GTC GAC ACT ATA AGCCAA TAT CAT GTC A-3′和5′-GT C CAT GGT TTC ACA CTT GGC AAA CAT GAA AGA-3′，下画线处分别为Sal I和Nco I)，即构建成VER2启动子的瞬间表达载体p VER2::GFP。利用Xba I和Sac I位点将GFP基因取代pBI221载体上GUS基因构建成阳性对照载体p35S::GFP。

2、瞬间表达分析VER2启动子

剥取春化处理(4℃暗处理28d)和未经春化处理(25℃室温暗培养3d)的小麦((Triticum aestivum L，京冬1号)幼叶，置于含有40g/L甘露醇的MS高渗培养基平板上22℃暗处理4h。利用基因枪(PDS-1000/He，Bio Rad)将步骤1中携带质粒DNAs的金粉(1μm)轰击准备好的小麦幼叶中。轰击压力选用1100psi爆裂膜控制，轰击式基因枪内抽真空至26-30英寸汞柱。爆裂膜距微载体膜3cm，轰击距离为6cm。轰击结束后的材料，MS高渗培养基上22℃保持暗培养24h，在激光共聚焦荧光显微镜(Leica)下490nm用40倍物镜观察GFP的表达。结果如图6a、图6b、图6c和图6d所示，表明由VER2启动子调控的GFP基因(pVER2::GFP)仅在经春化处理的幼叶中出现表达，而在未经春化处理的幼叶中没发现表达，而由CaMV 35S启动的GFP在经春化处理和未经春化处理的两种幼叶材料中均有表达，结果说明VER2基因的启动子驱动基因转录受春化处理调控，也就是说春化处理对冬小麦中VER2启动子的活性所必需的。

                              序列表

<160>1

<210>1

<211>5968

<212>DNA

<213>小麦属小麦(Triticum aestivum L)

<400>1

agtgtactat ttttttatta tatgacccat ctttcattct cacaaagtgt ctaggagcac      60

gtgctagagc tggctcttca cgaagagccc gcttaccttc tctctcctct tctctttcct     120

tcaactaagc aaaaatatac tagtttattc cttatagccc gctgactcag ctctattgta     180

cttgatctaa gtgttatcac ttgtgggttg tcgtgttcaa atagatgacg tggaccgagg     240

aggaagggtc cttgaatgct tattatggtt agagtgtgtg atttcttttc tcccgttgca     300

acgcacggac atttgtgcta gtagtttata aaaacagaat gcgaggataa gacagaggtg     360

accccacagc tagccggtga actcggctac atgtgaatcg cacggttgag ctcgttctct     420

tctctccacg gcttggctac actatagaaa tctacactct ttcatgtttg ccaagtgtga     480

aagactcaac gaacacaagg cactttttat taaacaatat tctcctcccc aagttataca     540

tgcacaccaa tacaccatta gcattcagag gatatattaa tggaacttgg ggacgtctgc     600

ctgttcgcag agtctggaac ggtgatgtgt tggagattct aactctggcg tgtatatctt     660

gttttggcaa actctcgcgt gtatatccat caatgcaaaa tttattaaat atgggccatg     720

catgcctccc ctcgatctac tccggcgagc ccgttgattc gcctccattc agtctgcagc     780

tctggcggtc agtggcgggg aggggaatcc tggtgcctcg gctccggcta gtatataggt     840

tcaggtttta gtcctcgcag gagtgtagct cggacggatg gcgccgcttc ttcttcgagt     900

cagtctttcg gactccgatc ctcacaaagt tcgtacgtcg ggacggatta gacggagctt     960

cgttgtagat tccagctagc tccttggggc ggcgaggttt gggttgcgag atttggtgtc    1020

tggttcttcg gatcgattca aaggttcaac agtgagggtt gcggctctgg ggcactggtc    1080

cttaggggca catccatgaa gacttctcag ctgtcatcga caaggttcgg ctagctctgg    1140

tatgggagcg gcgatagcgg cgtgtcggct gctcgttctg gcagcggcag tggtcattcg    1200

atggtccagg gattttgatg tagtttttgt tacagttggg gtgctttgta cttctggtga    1260

acctttatag tagatctgag tccttttcga aaaaaataca aagggagaca ggaggcagga    1320

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ccgttccacc tcttttcgtc aagctcctat gatcgatgat cgatcagtcc tctctcgcga    1560

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ttcccacgat catctctcct ctcccaatga ctcaaaccca cttacacacg tctccaaagc    1680

aaggaagcta atgcggcctc tcctttttcc tccgatcgag ccctagatgc tttgatccga    1740

tggctctttt tcttcaacct ccttgacctc ttcagatcca gagtatggaa gaaagacgac    1800

gcgcgtggag gacgcatccc tagctagcac ggtcaccacg aggacgatgc aagaaggacg    1860

acgcgacaca gatgacgcag cgctagctag cacgggcacc acggcgacac ggacgacgcg    1920

gaggacacag ccctagctag ccgggtacga cggggacgac gcaagaagga cggcgcgaca    1980

cggcgctagc acatattttt aaactctata atatttataa ataacatact ctatacaatg    2040

tttaccaaaa ggaggtttcc ttacatctga ttatatcact ttgatatgag atgggttgta    2100

aatagttgtc tctaaatttt accactgttg taatttacct tctgtaagct agaccatgta    2160

gtgtgcattt gcagagacaa aataactaat tattatgcat acatttttac accatagtgt    2220

ggtgtggagg aggcatgccg ggacatgtgt aggaccttcc ctctctccat aaaataagtc    2280

catattcaaa agcgaggggc aatatgagga atggtgtatg gaccatatgc aggggacatg    2340

tattgtgtgt gcagagggac tcaggaaggg tggccctcat gtccagcccg atagtttaat    2400

tcagatattt tcttttgcgg atgtagttca agaacgggtt tgccaagagg tgattgacct    2460

tatcacctcg ggattaacca tatctagaca tgttgtgctt agctggacac tgtgaccatc    2520

atcggcgagg ctgggtcgga ggataagagc atggttaata gtaaagccag ctgctgacta    2580

taagccaata tcatgtcata tacagcccat cttatagtta agatgtacaa taatagatta    2640

aaagagtgta ctattttttt attatatgac ccatctttca ttctcacaaa gtgtctagga    2700

gcacgtgcta gagctggctc ttcacgaaga gcccgcttac cttctctctc ctcttctctt    2760

tccttcaact aagcaaaaat atactagttt attccttata gcccgctgac tcagctctat    2820

tgtacttgat ctaagtgtta tcacttgtgg gttgtcgtgt tcaaatagat gacgtggacc    2880

gaggaggaag ggtccttgaa tgcttattat ggttagagtg tgtgatttct tttctcccgt    2940

tgcaacgcac ggacatttgt gctagtagtt tataaaaaca gaatgcgagg ataagacaga    3000

ggtgacccca cagctagccg gtgaactcgg ctacatgtga atcgcacggt tgagctcgtt    3060

ctcttctctc cacggcttgg ctacactata gaaatctaca ctctttcatg tttgccaagt    3120

gtgaaagact caacgaacac aaggcacttt ttattaaaca atattctcct ccccaagtta    3180

tacatgcaca ccaatacacc attagcattc agaggatata ttaatggaac ttggggacgt    3240

ctgcctgttc gcagagtctg gaacggtgat gtgttggaga ttctaactct ggcgtgtata    3300

tcttgttttg gcaaactctc gcgtgtatat ccatcaatgc aaaatttatt aaatatgggc    3360

catgcatgcc tcccctcgat ctactccggc gagcccgttg attcgcctcc attcagtctg    3420

cagctctggc ggtcagtggc ggggagggga atcctggtgc ctcggctccg gctagtatat    3480

aggttcaggt tttagtcctc gcaggagtgt agctcggacg gatggcgccg cttcttcttc    3540

gagtcagtct ttcggactcc gatcctcaca aagttcgtac gtcgggacgg attagacgga    3600

gcttcgttgt agattccagc tagctccttg gggcggcgag gtttgggttg cgagatttgg    3660

tgtctggttc ttcggatcga ttcaaaggtt caacagtgag ggttgcggct ctggggcact    3720

ggtccttagg ggcacatcca tgaagacttc tcagctgtca tcgacaaggt tcggctagct    3780

ctggtatggg agcggcgata gcggcgtgtc ggctgctcgt tctggcagcg gcagtggtca    3840

ttcggtggtc cagggatttt gatgtagttt ttgttacagt tggggtgctt tgtacttctg    3900

gtgaaccttt atagtagatc tgagtccttt tcgaaaaaaa tacaaaggga gacaggaggc    3960

aggaacgtga agtggtatga gttgagagaa tgcgagatct ttacctaata ataaaggacg    4020

gaagctttca tagttcttca tacgtcgctc ctttatcttc gttaatttta tgttaacttg    4080

aaagatcggc ggttgagatt taaaagaagg aaggtttctc tttttttctc agggtaaggt    4140

ttcccgttcc acctcttttc gtcaagctcc tatgatcgat gatcgatcag tcctctctcg    4200

cgattgagcg atctcatctg actgggtcca agtcgatcaa cccaagccca gcgagcccta    4260

tccttcccac gatcatctct cctctcccaa tgactcaaac ccacttacac acgtctccaa    4320

agcaaggaag ctaatgcggc ctctcctttt tcctccgatc gagccctaga tgctttgatc    4380

cgatggctct ttttcttcaa cctccttgac ctcttcagat ccagagtatg gaagaaagac    4440

gacgcgcgtg gaggacgcat ccctagctag cacggtcacc acgaggacga tgcaagaagg    4500

acgacgcgac acagatgacg cagcgctagc tagcacgggc accacggcga cacggacgac    4560

gcggaggaca cagccctagc tagccgggta cgacggggac gacgcaagaa ggacggcgcg    4620

acacggcgct agcacatatt tttaaactct ataatattta taaataacat actctataca    4680

atgtttacca aaaggaggtt tccttacatc tgattatatc actttgatat gagatgggtt    4740

gtaaatagtt gtctctaaat tttaccactg ttgtaattta ccttctgtaa gctagaccat    4800

gtagtgtgca tttgcagaga caaaataact aattattatg catacatttt tacaccatag    4860

tgtggtgtgg aggaggcatg ccgggacatg tgtaggacct tccctctctc cataaaataa    4920

gtccatattc aaaagcgagg ggcaatatga ggaatggtgt atggaccata tgcaggggac    4980

atgtattgtg tgtgcagagg gactcaggaa gggtggccct catgtccagc ccgatagttt    5040

aattcagata ttttcttttg cggatgtagt tcaagaacgg gtttgccaag aggtgattga    5100

ccttatcacc tcgggattaa ccatatctag acatgttgtg cttagctgga cactgtgacc    5160

atcatcggcg aggctgggtc ggaggataag agcatggtta atagtaaagc cagctgctga    5220

ctataagcca atatcatgtc atatacagcc catcttatag ttaagatgta caataataga    5280

ttaaaagagt gtactatttt tttattatat gacccatctt tcattctcac aaagtgtcta    5340

ggagcacgtg ctagagctgg ctcttcacga agagcccgct taccttctct ctcctcttct    5400

ctttccttca actaagcaaa aatatactag tttattcctt atagcccgct gactcagctc    5460

tattgtactt gatctaagtg ttatcacttg tgggttgtcg tgttcaaata gatgacgtgg    5520

accgaggagg aagggtcctt gaatgcttat tatggttaga gtgtgtgatt tcttttctcc    5580

cgttgcaacg cacggacatt tgtgctagta gtttataaaa agagaatgcg aggataaggc    5640

ggaggtgacc ccacagctag ccggtgaact cggctacatg tgaatcgcac ggttgagctc    5700

gttctcttct ctccacggct tggctacact atagaaatct acactctttc atgtttgcca    5760

agtgtgaaac tcggcagaca ttgtctagtg ccctaggcaa tcggcaaagt tggaaattcc    5820

agtagtgcta gcacgtgaac cagagagggg agagatcttt ctataaatat acccctacat    5880

cgtcagccac aacacacaca aactaagaca agctcagtcc agctagccat cctagtaagc    5940

tacaacttga gcattagtat tctccccg                                       5968

Claims (5)

1、一种小麦VER2基因启动子，是下列核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ ID №：1的DNA序列；

2)与序列表中SEQ ID №：1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA序列。

2、根据权利要求1所述的启动子，其特征在于：所述小麦VER2基因启动子是序列表中SEQ ID №：1。

3、含有权利要求1所述小麦VER2基因启动子的表达盒。

4、含有权利要求1所述小麦VER2基因启动子的表达载体。

5、含有权利要求1所述小麦VER2基因启动子的细胞系。

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