CN1634421A

CN1634421A - 一种具有显著广谱抗病毒作用的药物

Info

Publication number: CN1634421A
Application number: CN 200410086891
Authority: CN
Inventors: 张文芳
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2004-11-04
Filing date: 2004-11-04
Publication date: 2005-07-06

Abstract

本发明公开了一种含有厚朴提取物具有显著广谱抗病毒作用的药物制剂及其制备方法。本发明首次提出含有厚朴提取物(其中总酚含量在50－99％之间)制成的药物制剂，具有显著的广谱抗病毒作用，对开发新一代中药抗病毒药物具有非常重要的意义。

Description

一种具有显著广谱抗病毒作用的药物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含有厚朴提取物(其中厚朴总酚的含量在50-99％之间)具有显著广谱抗病毒作用的药物制剂。

背景技术

厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.属木兰科木兰属乔木，其树皮为我国传统中药材。厚朴树皮含厚朴酚、和厚朴酚、异厚朴酚等成份。

厚朴的主要药理作用有：抗菌、防龋、抗溃疡、抗痉挛、镇痛、抗炎等。根据文献资料，发现只有一篇王承南，夏传格写的“厚朴药理作用及综合利用研究进展”综述文章中提到厚朴中厚朴酚、和厚朴酚及单萜木兰醇是TPA诱导Epstein-Barr病毒早期抗原(EBV-EA)活化作用的拮抗剂，没有文献报道厚朴总酚对甲、乙、丙三型流鼻病毒(RNA病毒)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(DNA病毒)、柯萨奇病毒、流行性出血热病毒(EHF)、人类免疫缺陷病毒、I型、II型单纯疱疹病毒(包括初发和复发的生殖器疱疹)、带状疱疹病毒、水疱性口炎病毒(VSV)、SASE及禽流感病毒等的抑制作用。

用本发明的药物研究了对以上病毒的结抗作用发现厚朴提取物(其中厚朴总酚的含量在50-99％之间)具有显著的抗病毒作用，是非常有前途的抗病毒药物。

发明内容

本发明中发现含有厚朴提取物(其中厚朴总酚的含量在50-99％之间)的药物制剂对甲、乙、丙三型流鼻病毒(RNA病毒)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(DNA病毒)、柯萨奇病毒、流行性出血热病毒(EHF)、人类免疫缺陷病毒、I型、II型单纯疱疹病毒(包括初发和复发的生殖器疱疹)、带状疱疹病毒、水疱性口炎病毒(VSV)、SASE及禽流感病毒等均有显著的抑制作用，是非常有前途的病毒抗生素。

本发明的药物制剂，是指含有厚朴提取物作为抗病毒的活性成分，厚朴提取物的存在状态可以是液体、也可以是固体，其给药途径可以是口服，也可以是肌肉注射或静脉点滴或局部给药。

厚朴提取物的提取方法：采用超临界CO2萃取

将厚朴粉碎后，投入萃取釜中，用正交试验确定萃取的最佳温度和压力。当萃取釜、解析釜I、解析釜II的温度分别达到40℃时，通过高压泵对萃取釜、两个解析釜进行加压。当压力分别达到23MPa、8MPa和7MPa时，开始循环萃取，并保持恒温恒压，每隔一定时间从解析釜I、解析釜II放料，得淡黄色浸膏。

本发明的药物制剂包括药剂学中提到的所有制剂，包括：注射剂、粉针剂、合剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴眼剂等，都用常规方法制成。

下面介绍几种含有厚朴提取物药物制剂的制备方法：

由于通过CO₂超临界萃取得到的厚朴总酚水溶性很差，要想实现肌肉注射和静脉点滴首先要解决与水混溶的问题，为此本发明中采用了以下制备方法：

1、包合物

配方：厚朴提取物 1g

羟丙基倍他环糊精 10g

称取10g羟丙基β环糊精，置于50mL小烧杯中，加入30mL水溶解，放于磁力搅拌器上。称取1g厚朴总酚，用20mL乙醇溶解，60℃，边搅拌，边加入厚朴提取物的沸乙醇溶液。加完后，继续搅拌3h，取出，放于冰箱中冷藏24h，抽滤，用少量乙醇洗涤包合物结晶，60℃烘干，即得厚朴提取物的羟丙基倍他环糊精包合物晶体。

2、乳剂

精密称取适量的厚朴提取物、大豆油、甘油和磷脂，加热溶化，混合均匀后加入到热水中乳化，制成初乳，再经过高压乳匀机处理，使成1um以下的微乳。

3、脂质体

精密称取适量的卵磷脂、胆固醇、双鲸蜡磷脂酸、α生育酚和厚朴提取物于50m1圆底烧瓶中，加入5ml有机溶剂溶解，减压蒸发去有机溶剂，在瓶内壁上形成一层脂质薄膜，加入适量乙醚，溶解脂质膜后，加入Tris HCl缓冲液，在水浴型超声仪上超声至混合物形成单相体系，再将混合液在恒温水浴下减压蒸发除去有机溶剂至凝胶形成，继续减压蒸发至形成水性悬浊液，之后再重复此操作以进一步去除残留有机溶剂，最后充氮气至醚味完全消失，再冰浴超声一定时间，即制备得到厚朴提取物脂质体。

4、滴丸

滴丸是用滴制法制成的丸剂。其优点在于溶出速度快，生物利用度高。

制法：将聚乙二醇4000和聚乙二醇6000按1∶1的比例加入滴丸机的铅锅内，于油浴上加热至90-100℃，待全部熔融后，加入含有厚朴提取物的药物，搅拌至熔解，转移至贮液瓶中，密闭并保温在80-90℃，调节液滴定量阀门，滴入10-15℃的液体石蜡中，捞取滴丸沥尽并擦除液状石蜡，置石灰缸里干燥，既得。

5、软胶囊

将适量含有厚朴提取物的药物，加入适量的植物油、蜂蜡压制而成。

抗病毒药效实验

1、厚朴提取物对病毒的作用

1.1 材料和方法

单纯疱疹病毒1型(HSV-1)SM44株、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)333株、流感病毒甲型A3及水疱性口炎病毒(VSV)Indiana株、柯萨奇病毒(Cox)B3、柯萨奇病毒(Cox)B6、人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)B株、流感病毒及SASE病毒。

VERO细胞(猴肾细胞)、DCK细胞(狗肾细胞)。2株细胞的生长液均为EMEM，10％新生小牛血清，每3天传代1次。除流感病毒外，其它病毒均在VERO细胞内传代及实验，流感病毒在鸡胚内传代，在MDCK细胞内实验。

厚朴提取物(其中厚朴总酚含量在50-99％之间)，用羟丙基倍他环糊精制成包合物，配成10mmol/L母液，4℃保存。临用前用组织培养液稀释至所需浓度，动物实验用2％吐温80配成悬液。

1.2 抗病毒试验

1.2.1 细胞病变法(CPE)采用96孔塑胶细胞培养板，制备成每ml含2×105～3×105细胞，每孔加0.1ml，于5％CO2，37℃生长24～48h，待细胞长成单层后，弃生长液，加约100TCID₅₀病毒液50μl，37℃吸附1～2h，弃病毒液，加用维持液稀释的药液0.1ml，于5％CO2，37℃继续培养。48h后，当病毒对照细胞达病变时(细胞病变＜25％为+，25％～50％为++，50％～75％为+++，＞75％为-)判断结果，以ReedandMuench法计算IC₅₀。实验同时设细胞对照，病毒对照及病毒100TCID₅₀的滴定。

1.2.2 蚀斑法(PFU)采用24孔塑胶细胞培养板，每孔种2×105～3×105细胞，于5％CO₂，37℃生长48h后，弃生长液，感染一定量病毒，37℃吸附1～2h，弃病毒液，加含有不同浓度药物的上层1ml，于5％CO₂，37℃继续培养2～3d后，用结晶紫染色，计数蚀斑。实验同时设正常细胞对照、病毒对照。流感病毒上层含EMEM、牛血清白蛋白0.12％、胰酶0.005％、琼脂糖0.3％、药液及碳酸氢钠。其它病毒上层含EMEM、甲基纤维素0.5％、牛血清白蛋白0.12％、新生小牛血清10％、药液及碳酸氢钠。

1.2.3 人免疫缺陷病毒1型核抗原P24测定采用HIV-1P24试剂盒，按试剂盒方法测定。

表1 厚朴提取物在细胞培养内抗病毒活性

病毒细胞培养细胞病变法蚀斑法 P24 MTT TD₅₀/IC₅₀

单纯疱疹病毒1型 VERO + ++ 9100

单纯疱疹病毒2型 VERO + + 182 7583

水疱性口炎病毒 VERO ++ + 182 479

柯萨奇病毒B3 VERO - ++ 182 161

人免疫缺陷病毒1型 C8166 + 0.036 1111

H93 ++ 0.048 67

柯萨奇病毒B6 VERO + ++ 151 327

腺病毒 VERO ++ - 182 438

SASE病毒 MDCK ++ + 151 540

1)：IC₅₀(μmol/L)为抑制50％病毒复制的药物浓度；2)：TD₅₀(mol/L)为抑制50％细胞活性的药物浓度；3)：H9为HIV-慢性感染细胞株。

结论：厚朴提取物对以上病毒均有不同的抑制作用。

2、厚朴提取物对甲、乙型流感以及禽流感病毒的影响

该实验采用半体内法，厚朴提取物四个剂量组20、10、1.0、0.5mg/L，阳性对照组病毒唑10.0、5、2.5、1.25mg/L，正常对照组及病毒对照组，将不同浓度的药物分别与病毒直接作用，立即接种于鸡胚尿囊腔，用石腊封接种孔，置37℃孵箱培养，48h收取每胚之尿液，用0 5％鸡红血球凝集试验，判断药物的抗病毒活性，结果见表2。

表2 厚朴提取物对甲、乙型流感以及禽流感病毒的影响

组别剂量(mg/L) 甲型流感病毒乙型流感病毒禽流感

厚朴提取物 20.00 - + -

10.00 - + +

1.00 + + +

0.50 + ++ ++

病毒唑 10.00 - - +

5.0 - + ++

2.5 - + ++

1.25 + + +++

病毒对照 - +++ +++ +++

正常对照 - - - -

-代表无病毒生长，+代表少量病毒生长，++代表较多病毒生长，+++代表大量病毒生长结论：厚朴提取物对甲、乙型流感以及禽流感病毒具有显著抑制，与对照药病毒唑相当。

Claims

1、一种具有显著广谱抗病毒作用的药物制剂。其特征在于：

(1)对DNA和RNA病毒均有显著抑制活性；

(2)含有厚朴提取物，其中厚朴提取物中总酚含量在50-99％之间；

(3)药物制剂，是指含有厚朴提取物作为抗病毒的活性成分，厚朴提取物的存在状态可以是液体、也可以是固体，其给药途径可以是口服，也可以是肌肉注射或静脉点滴。

2、根据权利要求1中的DNA和RNA病毒，具体包括以下病毒：

(1)流行性感冒病毒：如甲、乙、丙三型流鼻病毒(RNA病毒)及禽流感病毒等；

(2)急性呼吸道感染病毒：如呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(DNA病毒)、柯萨奇病毒及SASE病毒等；

(3)流行性出血热病毒(EHF)、人类免疫缺陷病毒、I型、II型、单纯疱疹病毒(包括初发和复发的生殖器疱疹)、带状疱疹病毒、水疱性口炎病毒(VSV)等。

3、根据权利要求1中的药物制剂，可以制成药剂学上的任何一种。

4、根据权利要求1中的药物制剂，包括含有厚朴提取物的包合物、乳剂以及脂质体。

5、根据权利要求4中的含有厚朴提取物的包合物，选用的辅料包括：环糊精及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮和泊洛沙姆中的一种或两种。

6、根据权利要求4中的含有厚朴提取物的乳剂，包括微乳、纳米乳和亚纳米乳。

7、根据权利要求6中的含有厚朴提取物的乳剂，选用的辅料包括：氢化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油、亚油酸乙酯、磷脂、脂肪酸甘油酯、甘油中的一种或两种以上。

8、根据权利要求4中的含有厚朴提取物的脂质体，选用的辅料包括：磷脂和胆固醇。