CN1618285A - 黄芩提取物作为农用杀菌剂的应用以及含有之的农用杀菌组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及黄芩提取物作为农用杀菌剂防治农作物病害的应用，以及涉及含有黄芩提取物和嘧霉胺、乙霉威和腐霉利中任意一种化合物的组合作为活性成分的杀菌组合物。黄苓提取物及含有之的农用杀菌组合物对多种农作物病害有很好的防治效果，并且对环境友好，具有残留低、防效高、杀菌谱广等特点。

Description

黄芩提取物作为农用杀菌剂的应用 以及含有之的农用杀菌组合物

【技术领域】

本发明涉及黄芩提取物作为农用杀菌剂的应用，以及涉及含有黄芩提取物与嘧霉胺、乙霉威或腐霉利的组合作为活性成分的农用杀菌组合物。

【背景技术】

农作物由于病虫害造成作物产量损失巨大，为此每年均需要施用大量的农药进行病虫害防治以挽回作物产量损失。近年来病虫害对农作物上的危害越来越重，而且由于农药滥用，是作物病原对农药产生了越来越严重的抗性，造成病虫害防治效果逐年降低，同时由于施药量过大，对环境造成一定程度的污染。因此，仍就需要具有更好的病原控制效果的农药品种。

将能够有效控制植物病原生长的植物提取物应用于农业病害防治，或者将之与其他杀菌化合物混配，从而最大限度降低农药残留，提供更安全有效的农用化学产品，一直是研究人员所追求的，但现有的杀菌剂在杀菌活性和残留等方面都并不能令人满意。

本发明人从大量的植物中筛选可以用于农业病害防治的一系列提取化合物，发现黄苓提取物具有良好的农业病害防治效果，并通过大量的药效试验加以证实。同时，本发明人还将黄苓提取物与已知的杀菌化合物组合，筛选出一些增效的农用杀菌组合物，结果证实，本发明杀菌组合物对许多农作物病害具有很好的防治作用，并且对环境友好，具有残留低、防效高、杀菌谱广等特点，于是完成了本发明。

【发明内容】

所解决的技术问题

本发明的目的是提供黄芩提取物作为农用杀菌剂的应用。

本发明的另一目的是提供一种含有黄芩提取化合物与与嘧霉胺、乙霉威或腐霉利的组合作为活性成分的农用杀菌组合物，它具有宽广的杀菌谱和优异的增效防治效果。

本发明的再一目的是提供所述杀菌组合物防治农作物病害的应用。

技术方案

本发明提供黄苓提取物作为农用杀菌剂防治农作物病害的应用。

在本发明中，黄芩提取物主要含有至少一种下列黄苓提取化合物：黄芩甙(Baicalin，又名黄芩苷)、汉黄芩甙(Wogonoside，又名汉黄芩苷)、黄芩素(Baicalein)、汉黄芩素(Wogonin)、黄芩新素I(SkullcapflavoneI，又名黄芩黄酮I)和黄芩新素II(Skullcapflavone II，又名黄芩黄酮II)。上述黄苓提取化合物的具体结构可参见例如《中药化学成分提取分离手册》(杨云、冯卫生主编，北京，中国中医药出版社，1998)。优选的是例如黄芩甙。黄苓提取物可以是上述提取化合物的混合物，也可是其单体。通常它们可以从市场上购得，例如黄芩甙单体可从浙江宁波双林中药有限公司购得。

显然，黄苓提取物也可以采用本领域技术人员公知的方法从黄芩中直接提取。例如将黄芩干粉加入乙醚进行提取，得到乙醚提取物和药渣，乙醚提取物经过聚酰胺柱层析，氯仿洗脱后，第二黄色带经甲醇重结晶得到黄芩素，第一黄色带再经过聚酰胺柱层析和60％乙醇洗脱后出现的第一黄色带经甲醇重结晶得到黄芩新素，出现的第二黄色带经80％乙醇重结晶得到汉黄芩素；乙醚提取黄芩干粉时得到的药渣经95％乙醇回流提取后趁热过滤，将滤液放冷后再过滤得到的沉淀溶于水，用聚酰胺柱层析，水洗脱后出现的黄色带用50％的乙醇重结晶得到汉黄芩甙，乙醚提取黄芩干粉时得到的药渣经乙醇回流提取后过滤，得到的滤渣再加水煮沸并过滤，得到的滤液加HCl至不再生成沉淀，过滤取沉淀用含2％HCl的乙醇液洗涤，再以甲醇重结晶即可得到黄芩甙。

黄苓提取物可用于防治多种农作物病害，例如可以例举由下列病原引起的农作物病害：立枯丝核菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌、马铃薯晚疫病菌、棉花枯萎病菌、番茄早疫病菌、棉花炭疽病菌或番茄灰霉病菌。优选的是，立枯丝核菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌或番茄灰霉病菌。

本发明还提供一种增效的农用杀菌组合物，它含有a)黄芩提取物与b)嘧霉胺、乙霉威或腐霉利中任意一种化合物作为活性成分，组分a)与组分b)的比例可以是任意的，只要能产生增效作用即可。一般而言，所述的组分a)与组分b)的重量比为1∶0.01-100，优选的是1∶0.1-10，更优选的是1-3∶3-1。

在本发明组合物中，黄芩提取物主要含有至少一种下列黄苓提取化合物：黄芩甙、汉黄芩甙、黄芩素、汉黄芩素、黄芩新素I和黄芩新素II。优选的是例如黄芩甙。黄苓提取物可以是上述提取化合物的混合物，也可是其单体。

黄苓提取物和含有之的本发明组合物可以转换成常规制剂如乳油、可湿性粉剂、粒剂、可溶性粉剂、水分散粒剂、油悬浮剂、水悬浮剂、水乳剂、微乳剂、乳剂、粉剂、粗粉剂、泡腾剂、膏剂和水面漂浮剂剂型。

施用形式取决于特定的使用；在各种情况下，须保证它们的分散尽可能的细微和均匀。

这些制剂可以用已知的方式制备，例如通过将活性化合物与溶剂和/或载体混合，如果需要，可以采用乳化剂和分散剂来填充，当用水作稀释剂时，也可以同时采用其它的有机溶剂作助溶剂。

适合用于此目的的助溶剂主要是：

-溶剂如芳族化合物(例如二甲苯)、氯代芳族化合物(例如氯苯)、石蜡(例如石油馏份)、醇类(例如甲醇、丁醇)、酮类(例如环已酮)、胺类(例如乙醇胺、二甲基甲酰胺)和水；

-载体如研碎的天然矿物质(例如高岭土、矾土、滑石、白垩)和研碎的合成矿物质(例如高分散的硅酸、硅酸盐)；

-乳化剂如非离子和阴离子乳化剂(例如聚氧乙烯脂肪醇醚、烷基磺酸盐和芳基磺酸盐)；

-分散剂如木素亚硫酸盐废液或甲基纤维素。

适合的表面活性物质是芳族磺酸(例如木素磺酸、苯酚磺酸、萘磺酸和二丁基萘磺酸)和脂肪酸的碱金属、碱土金属和铵盐，烷基磺酸盐和烷基芳基磺酸盐，烷基硫酸盐、月桂基醚硫酸和脂肪醇硫酸盐，以及硫酸化的十六-、十七-和十八醇以及脂肪醇醚的盐，磺化萘和其衍生物与甲醛的的缩合产物，萘或萘磺酸与苯酚和甲醛的缩合产物，聚氧乙烯辛基酚醚、乙氧基烷化的异辛基-、辛基-或壬基酚，烷基苯酚或三丁基苯基聚乙二醇醚，烷基芳基聚醚醇，异三癸基醇、脂肪醇环氧乙烷缩合物，乙氧基化蓖麻油，聚氧乙烯-或聚氧丙烯烷基醚，月桂醇聚乙二醇醚乙酸酯、失水山梨醇酯，木素亚硫酸盐废液或甲基纤维素。

含水的施用形式可以通过加水，例如由乳油、分散液、膏剂、可湿性粉剂、泡腾剂或水可分散颗粒剂制备。制备乳剂、膏剂、油分散液或液态水面漂浮剂时，通过加入润湿剂、粘合剂、分散剂或乳化剂，将物质于水中均质化或溶于油或溶剂中。而且，也可以制备由活性物质、润湿剂、粘合剂、分散剂或乳化剂和可能的溶剂或油组成的浓缩物，该浓缩物适合于用水稀释。

粉剂、撒施粉剂、泡腾剂、固态水面漂浮剂组合物可以通过将活性物质与固体载体混合或一起研磨而生产。

颗粒剂(例如，涂敷、浸渍或均质颗粒剂)可以通过将活性化合物粘合到固体载体上而制备。

固体载体是矿石土如硅胶、硅酸、硅酸盐、滑石、高岭土、石灰石、石灰、白垩、红玄武土、黄土、陶土、白云石、硅藻土、硫酸钙和硫酸镁、氧化镁，研碎的合成材料、化肥，如硫酸铵、磷酸铵、硝酸铵、尿素和植物产物如面粉、树皮粉、木粉和坚果壳粉、纤维素粉和其它固体载体。在直接可用制剂中的活性化合物浓度可以在相对宽的范围内变化。

通常，组合物含有按重量计0.01至90％的活性成分，且通常根据制剂类型的不同，优选含有按重量计0.5至50％的活性成分。

防治农作物病害时，制剂含有按重量计0.0001至10％，优选按重量计0.01至1％的活性化合物是优选的。

本发明组合物施用剂量，根据不同的作物、施用时间、气候条件等因素的不同，一般为1-1000g a.i./ha，优选为5-300g a.i./ha。一般采用叶面施用，例如叶面喷雾处理。也可以做其他处理如拌种、灌根等，在这种情况下，可以根据需要调整施用剂量。例如在土壤处理防治时，施用剂量介于10-3000g a.i./ha的范围内。

本发明杀菌组合物可用于防治多种农作物病害，特别是对于番茄灰霉病的防治具有显著增效作用。

有益效果

黄苓提取物及含有之的本发明杀菌组合物对许多农作物病害具有很好的防治作用，并且对环境友好，具有残留低、防效高、杀菌谱广等特点。

【具体实施例】

本发明用下列实施例进行说明，但不限制本发明。

制剂实施例

制剂实施例1：1.5％乳油

    原料                          用量(重量份)

    黄芩甙                        0.5

    嘧霉胺                        1

    脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠        10

     氮酮                     5

     氯仿                     83.5

称取活性成分溶解于溶剂氯仿中，然后再加入乳化剂和渗透剂，搅拌均匀，即制得所述的1.5％乳油。

制剂实施例2：2％乳油

     原料                     用量(重量份)

     黄芩甙                   0.5

     乙霉威                   1.5

     农乳2201                 10

     YZ-901                   15

     二甲苯                   73

称取活性成分溶解于溶剂中，然后再加入乳化剂和渗透剂，搅拌均匀，即制得所述的2％乳油。

制剂实施例3：10％乳油

     原料                     用量(重量份)

     汉黄芩甙                 4

     腐霉利                   6

     农乳2201                 15

     YZ-901                   10

     二甲苯                   65

称取活性成分溶解于溶剂中，然后再加入乳化剂和渗透剂，搅拌均匀，即制得所述的10％乳油。

制剂实施例4：8％乳油

     原料                     用量(重量份)

     汉黄芩甙                 2

     黄芩新素II               2

     腐霉利                   4

     农乳2201                 15

     YZ-901                   10

     二甲苯                   67

称取活性成分溶解于溶剂中，然后再加入乳化剂和渗透剂，搅拌均匀，即制得所述的8％乳油。

制剂实施例5：6％乳油

     原料                     用量(重量份)

     黄芩甙                   0.5

     汉黄芩甙                 0.5

     黄芩新素I                0.5

     黄芩新素II               0.5

     汉黄芩素                 1

     黄芩素                   1

     乙霉威                   2

     农乳2201                 10

     YZ-901                   15

     二甲苯                   69

称取活性成分溶解于溶剂中，然后再加入乳化剂和渗透剂，搅拌均匀，即制得所述的6％乳油。

制剂实施例6：12％可湿性粉剂

     原料                     用量(重量份)

     黄芩新素I                2

     嘧霉胺                   10

     白炭黑                   2

     十二烷基苯磺酸钠         5

     轻质碳酸钙               81

先将轻质碳酸钙预粉碎，然后将之与上述其他成分充分混合，再采用气流粉碎法加工，即制得所述得12％可湿性粉剂。

制剂实施例7：2％可湿性粉剂

     原料                    用量(重量份)

     黄芩甙                  0.5

     乙霉威                  1.5

     十二烷基苯磺酸钠        8

     NNO                     5

     白炭黑                  10

     陶土                    75

先将陶土预粉碎，然后将之与上述其他成分充分混合，再采用气流粉碎法加工，即制得所述得2％可湿性粉剂。

制剂实施例8：5％油悬浮剂

     原料                    用量(重量份)

     汉黄芩素                3

     嘧霉胺                  2

     邻苯二甲酸二甲脂         20

     脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠   15

     矿物油                   60

称取活性成分，加入矿物油和上述加工辅助成分，经过球磨、砂磨处理，即制得所述的5％由悬乳剂。

制剂实施例9：15％水悬浮剂

     原料                     用量(重量份)

     黄芩素                   5

     腐霉利                   10

     乙二醇                   5

     脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠   15

     水                       60

称取活性成分，加入水和上述加工辅助成分，经过球磨、砂磨处理，即制得所述的15％水悬乳剂。

制剂实施例10：20％可湿性粉剂

     原料                     用量(重量份)

     黄芩甙                   20

     十二烷基苯磺酸钠         8

     NNO                      5

     白炭黑                   10

     陶土                     57

先将陶土预粉碎，然后将之与上述其他成分充分混合，再采用气流粉碎法加工，即制得所述得20％可湿性粉剂。

生物实施例

黄芩提取物的制备：称取20g黄芩干粉，加入100ml 80％乙醇，置于25℃的摇床上振荡2天，然后400rmp离心20分钟，四层纱布过滤，40℃下旋转蒸发至干，然后用50％的乙醇定容至20ml，即为提取原液保存备用。

生物实施例1：黄芩提取物抑菌谱试验

取1ml黄芩提取物原液与100ml PDA培养基(马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂12g，水1000ml)混合均匀，倒皿，待冷却后，在8.5cm平皿中央接一直径0.6cm的供试菌菌盘。每处理重复4次，以混有50％乙醇1ml的PDA和纯PDA培养基作为对照。置于25℃恒温培养箱培养5天(其中棉花黄萎病菌培养10天，马铃薯晚疫病菌在18℃下培养10天)，观察记录菌落大小，用十字交叉法测量菌落直径，计算抑菌率。

抑菌率(％)＝(CK净生长量-处理净生长量)/CK净生长量×100

(注：净生长量＝菌落直径-菌盘直径)

试验结果见表1。

       表1.黄芩提取物对11种植物病原真菌菌丝生长的抑制作用结果

供试真菌	50％乙醇抑菌率(％)	黄芩提取物抑菌率(％)
			立枯丝核菌	2.58	82.21
小麦根腐病菌	-4.87	78.65
			小麦赤霉病菌	9.36	66.52
玉米大斑病菌	8.06	60.28
			马铃薯晚疫病菌	3.09	54.19
棉花枯萎病菌	16.46	51.92
			番茄早疫病菌	9.09	29.68
棉花炭疽病菌	4.70	26.45
			梨黑斑病菌	1.34	16.04
苹果斑点落叶病菌	-1.15	5.66
			棉花黄萎病菌	-3.37	0.00

从表1中可以看出，黄芩提取物原液100倍液对供试的11种真菌中的10种均有不同程度的抑制作用，其中对立枯丝核菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌这4种病原菌的抑制率在60％以上，其中对小麦根腐病菌的抑菌率为78.65％，对立枯丝核菌的抑菌率最高为82.21％。因此说明黄芩提取物对植物病原的杀菌谱广。

生物实施例2：黄芩提取物对番茄灰霉病的防治试验

将提取分离的黄芩甙、汉黄芩甙、黄芩素、黄芩新素、汉黄芩素测定对番茄灰霉病的防治效果，结果如表2所示。

                   表2.黄芩提取物中活性成分防效测试

处理	普遍率(％)	病情指数	防效(％)	差异显著性
					乙霉威	50.00	11.99	85.08	ns
黄芩甙500倍	50.00	13.63	83.04	ns
					汉黄芩素500倍	75.00	17.07	78.76	ns
黄芩新素500倍	75.00	22.14	72.45	*
					黄芩素500倍	66.67	23.92	70.24	*
汉黄芩甙500倍	100.00	37.52	53.32	*
					乙酸1500倍	100.00	76.88	4.34	*
乙酸1000倍	100.00	78.52	2.30	*
					50％乙醇	100.00	82.00	-2.04	*
乙酸2000倍	100.00	82.00	-2.04	*
					乙酸2500倍	100.00	83.64	-4.08	*
清水	100.00	80.36	-	*

注：ns表示处理与乙霉威之间差异不显著(5％显著水平)；*表示处理与乙霉威之间差异显著。

从表2数据中可以看出黄芩提取物中几种主要成分对番茄灰霉病都具有很好的防治效果。

生物实施例3：黄芩提取物与乙霉威组合的毒力测定试验

通过黄芩提取物与乙霉威在不同配比下对番茄灰霉病菌(Botrytiscinerea Pers.)的毒力测定结果如表3所示。

         表3.黄芩提取物与乙霉威配比测试结果

处理	Ec50(μg/mL)	共毒系数
			黄芩提取物	3.69
乙霉威	4.78
			1∶1(黄芩提取物∶乙霉威)	2.30	181.08
1∶2(黄芩提取物∶乙霉威)	2.66	163.59
			1∶3(黄芩提取物∶乙霉威)	2.12	209.97
2∶1(黄芩提取物∶乙霉威)	2.20	181.53
			3∶1(黄芩提取物∶乙霉威)	2.35	166.51

注：表中黄芩提取物都以黄芩甙的量计量

根据表3所示，由共毒系数可知，黄芩提取物与乙霉威按1∶3～3∶1的比例配比对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea Pers.)具有明显的增效作用，二者可按比例混配。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基本上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.黄苓提取物作为农用杀菌剂防治农作物病害的应用。

2.根据权利要求1的应用，其中，所述的黄芩提取物主要含有至少一种下列黄芩提取化合物：黄芩甙、汉黄芩甙、黄芩素、汉黄芩素、黄芩新素I和黄芩新素II。

3.根据权利要求1或2的应用，其中，所述的农作物病害的病原为下列：立枯丝核菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌、马铃薯晚疫病菌、棉花枯萎病菌、番茄早疫病菌、棉花炭疽病菌或番茄灰霉病菌。

4.根据权利要求1-3之任一的应用，其中，所述的农作物病害的病原为下列：立枯丝核菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌或番茄灰霉病菌。

5.一种农用杀菌组合物，其特征在于，它含有a)黄芩提取物与b)嘧霉胺、乙霉威或腐霉利的组合作为活性成分，组分a)与组分b)的重量比为1∶0.01-100。

6.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于，组分a)与组分b)的重量比为1∶0.1-10。

7.根据权利要求1或2所述的杀菌组合物，其中，黄芩提取物主要含有至少一种下列黄苓提取化合物：黄芩甙、汉黄芩甙、黄芩素、汉黄芩素、黄芩新素I和黄芩新素II。

8.根据权利要求3所述的杀菌组合物，其中，组分a)为黄芩甙，组分b)为乙霉威。

9.权利要求5-8之任一所述的杀菌组合物防治农作物灰霉病的应用。

10.根据权利要求9的应用，其中，所述的农作物灰霉病是番茄灰霉病。