CN1600350A

CN1600350A - 一种颈椎通络胶囊

Info

Publication number: CN1600350A
Application number: CN 03146950
Authority: CN
Inventors: 陈和亮
Original assignee: XINGGUANG PHARM Manufacturing Co Ltd ZHUHAI
Current assignee: Xingguang Pharm Mfg. Co., Ltd., Zhuhai
Priority date: 2003-09-26
Filing date: 2003-09-26
Publication date: 2005-03-30
Anticipated expiration: 2023-09-26
Also published as: CN1269519C

Abstract

本发明公开了一种颈椎通络胶囊及其制备方法，旨在提供一种疗效好、毒性作用小的治疗颈椎病的胶囊。该胶囊的内容物主要是由桂枝、白芍、制草乌、威灵仙、莪术、僵蚕、葛根、牛蒡子、黄芪、磁石、续断作原料药制成，它具有温经通络、活血止痛的功能。本发明适于治疗神经根性颈椎病。

Description

一种颈椎通络胶囊

技术领域

本发明涉及一种颈椎通络胶囊及其制备方法。

背景技术

颈椎病是指因颈椎退行性变引起颈椎管或椎间孔变形、狭窄，刺激、压迫颈部脊髓、神经根、交感神经造成其结构或功能性损害所引起的临床表现。此病多见于40岁以上患者。根据病理变化，颈椎病可分为五型：(1)脊髓型；(2)神经根型；(3)椎动脉型；(4)交感神经型；(5)混合型。

颈椎病的病因一般为：(1)先天因素，如先天性颈椎管狭窄、先天性颈椎畸形等；(2)慢性劳损；(3)急性损伤。病理变化一般为颈椎间盘退行性变，纤维环弹力减退而向四周膨出或髓核疝出可压迫神经根、脊髓、椎动脉；椎间隙狭窄，椎体边缘骨质增生，黄韧带肥厚、变性，使神经根管及椎管容积变小，小关节及钩突关节退行性变致小关节脱位可造成颈椎退行性滑脱。脊髓型颈椎病表现为四肢无力、僵硬、肌张力高、腱反射亢进，可引出病理反射；神经根型颈椎病表现为颈部僵硬、活动受限，上肢放射痛、麻木、浅感觉迟钝、肌力减退、反射弱；椎动脉型颈椎病表现为头痛、头晕等脑血管痉挛症状及眩晕、恶心、耳呜、视物不清等脑缺血症状；交感神经型颈椎病出现霍纳氏综合症、心动过速或过缓、双上肢及头面部血管痉挛或扩张，肢体少汗或多汗；混合型颈椎病有上述两种以上的临床表现。

目前，国内外治疗颈椎病的方法很多，常见的有手术和药物治疗等疗法。手术疗法具有一定的危险性，增加了病人的痛苦；现有的用于治疗颈椎病的药物，其疗效差、毒性作用大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种用于治疗神经根性颈椎病的颈椎通络胶囊及其制备方法，该胶囊疗效好、毒性作用小。

本发明所采用的技术方案是：一种颈椎通络胶囊，它的内容物主要是由下列重量份的原料药制成：

桂枝 166.6份白芍 500份制草乌 200份

威灵仙 500份莪术 500份僵蚕 266.7份

葛根 666.7份牛蒡子500份黄芪 500份

磁石 1000份续断 500份

其制备方法包括下列步骤：

(1)取所述重量配比的桂枝粉碎成细粉，备用；

(2)取所述重量配比的葛根粉碎成粗粉，分别加8倍、6倍量75％乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并回流提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；

(3)取所述重量配比白芍、制草乌、威灵仙、莪术、僵蚕、牛蒡子、黄芪、磁石、续断加水煎煮提取二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；

(4)合并所述步骤(2)、(3)制得的稠膏，加入所述步骤(1)制得的桂枝细粉，混匀，在65℃下干燥，粉碎成细粉，加入适量淀粉，混匀，分装胶囊。

本发明的有益效果是：本发明的颈椎通络胶囊的内容物主要是由桂枝、白芍、制草乌、威灵仙、莪术、僵蚕、葛根、牛蒡子、黄芪、磁石、续断作原料药制成，它具有温经通络、活血止痛的功能，对颈椎病治疗效果效好、毒性作用小，特别适于治疗寒瘀阻络型神经根性颈椎病。

以下通过试验例来进一步阐述本发明所述的颈椎通络胶囊的有益效果：

试验例一、颈椎通络胶囊主要药效学试验

摘要：颈椎通络胶囊功能：温经通络，活血止痛；主治神经根性颈椎病(属寒瘀阻络型)。经动物实验证实，颈椎通络胶囊对急性实验性颈椎神经根炎模型大鼠血浆6-酮-前列腺素F_1α(6-K-PGF_1α)含量明显增加，对其模型大鼠血浆血栓素B₂(TXB₂)含量明显降低；对化学物质—醋酸所致动物疼痛模型，及对热板刺激所致动物疼痛模型，均具有明显的镇痛作用；对二甲苯致小鼠耳肿，对冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增强，对角叉菜胶所致大鼠足肿及小鼠足肿的急性炎症，对棉球所致大鼠肉芽肿的慢性炎症，对炎症模型大鼠炎症局部组织(小鼠足部)内前列腺素E₂(PGE₂)的含量增多等，均有明显的对抗作用；对急性实验性血瘀证模型大鼠血流变性具有明显的改善作用，对该模型大鼠血小板聚集功能有明显的抑制作用。以上各项实验结果均能说明：颈椎通络胶囊对急性炎症渗出过程、慢性炎症组织增生过程，均有明显的抑制作用；对化学刺激及热板刺激诱发的疼痛均具有明显的抑制作用；并且具有良好的活血化瘀作用，为临床应用提供科学依据。

实验目的：采用清洁级标准化动物进行主要药效学作用的实验，证实颈椎通络胶囊(颈椎通络)的温经通络、活血止痛的功效，为临床检验提供实验依据。

1 颈椎通络胶囊对颈神经根炎模型大鼠血浆6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1a)、血栓素(TXB2)含量的影响

1.1 实验材料

1.1.1 药物：受试药为颈椎通络胶囊，口服胶囊剂型，每粒装0.4g，合生药5.3g，由珠海星光制药有限公司提供，批号20011222，临床拟定成人日用量为(每日3次，每次5粒，每粒装0.4g，成人体重按60kg计算)0.10g/kg，合生药1.325g/kg。实验时用蒸馏水配制成14％、7.0％、3.5％不同浓度的混悬液，以10ml/kg体重灌胃给药。阳性对照药——伸筋丹胶囊(伸筋丹)由威海人生药业集团股份有限公司提供，批号020105，每粒装0.15g，口服胶囊剂型，成人日用量(每日3次，每次5粒，每粒0.15g，成人体重按60kg计算)0.0375g/kg；实验时将伸筋丹内容物用蒸馏水配制成2.6％的混悬液以10ml/kg体重灌胃给药。戊巴比妥钠由广东佛山市医药公司提供，批号981012。6-酮-前列腺素F_1α(6-K-PGF_1α)及血栓素B₂(TXB₂)放射免疫试剂盒由北京东州生物制品研究所提供，批号20020901。

1.1.2 实验动物大鼠wistar，体重220～230g，雌雄各半，由贵阳医学院实验动物中心提供，清洁级，合格动物，合格证号0200021。

1.1.3 主要仪器3-9型血流变学、微循环、红细胞变形系列仪器，由成都麦塞科贸公司提供。

1.2 实验方法与结果

1.2.1 模型制作：模拟颈神经根炎模型大鼠制作的方法如下：

造模型之前用8％硫化钡溶液脱毛剂外涂大鼠颈部脱毛后，逐只以3％戊巴比妥钠0.1ml/100g体重腹腔注射(ip)麻醉，俯卧固定于动物小手术台上，颈部皮肤常规备皮消毒后铺洞巾，以第2胸椎脊突为标记，以颈7为中心，沿棘突纵形切开皮肤1.5cm及皮下组织，用尖刀锐性分离颈突两侧的肌肉，暴露横突以上椎板，用眼科剪刀剪断颈6、7两侧横突以上椎板，暴露出椎管内的脊髓，用神经剥离子将脊髓推向一侧，各显露出双侧颈6、7神经根，将浸有福尔马林的定量滤纸片贴放在颈6、7神经腋下，仔细止血，逐层缝合，无菌包扎，制作颈神经根炎模型手术完毕。

1.2.2 实验分组及给药：另取10只正常大鼠做空白对照组，与手术后的大鼠均常规饲养；观察3天；除因手术失误致死之大鼠外，按表1所示分组，空白对照组及模型组灌胃给予蒸馏水10ml/kg体重，颈椎通络胶囊组及伸筋丹组按表1剂量灌胃给药，容量同空白对照组，每日一次，连续14次。

1.2.3 测定6-K-PGF_1α、TXB₂含量：采用放射免疫测定法测定6-K-PGF_{1 α}、TXB₂含量。末次药后24h，经股静脉取空腹血5ml(按6-K-PGF_1α及TXB₂放射免疫试剂盒说明要求防凝)。分离血浆，测定6-K-PGF_1α及TXB₂含量(报告单位：贵阳中医学院附属医院一附院血流变研究室)。结果见表1。

由表1可见：颈椎通络胶囊大剂量组能使颈神经根炎模型大鼠血浆中6-K-PGF_1α含量明显增多，与空白对照组、模型组、颈椎通络胶囊中、小剂量组及伸筋丹组比较，差异非常显著，P＜0.01；颈椎通络胶囊中、小剂量组、伸筋丹组均有升高趋势。颈椎通络胶囊大、中剂量组，均可使血浆中TXB₂含量降低，与空白对照组近似，优于伸筋丹，与模型组相比差异显著P＜0.05；伸筋丹和小剂量组作用不明显。

前列腺素I₂(PGI₂)具有很强的扩血管及抗血小板聚集的作用；但是PGI₂极不稳定，难以精确测定。而6-K-PGF_1α是PGI₂较稳定的存在酶裂解产物，可用6-K-PGF_1α放射免疫分析法分析PGI₂的定量；6-K-PGF_1α含量增加，即表明血浆中PGI₂也增多，表明颈椎通络胶囊扩血管、抗血小板聚集作用增强。而TXA₂是花生四烯酸(AA)重要代谢产物之一，具有诱导血小板聚集，降低CAMP含量，收缩血管作用；但也不稳定，很快水解成TXB₂；而测定TXB₂方法较简便、灵敏高，所以用放免方法测定血浆TXB₂能代表TXA₂含量。

由表1可见，颈椎通络胶囊能使6-K-PGF_1α含量增多，TXB₂含量减少，使颈神经根部毛细血管通透性降低，减轻局部水肿发生的程度及血液凝聚状态。瘀血减少，血流通畅，温经通络，活血止痛，消除瘀血；符合中医通则不痛、痛则不通、“治痛必治瘀”的理论。该结果表明颈椎通络胶囊温经通络，活血化瘀作用的机理。

表1对颈神经根炎模型大鼠血浆内6-K-PGF_1α、TXB₂含量的影响(x±s)

剂量动物数 6-K-PGF_1α TXB₂

组别

(g/kg) (只) (pg/ml) (pg/ml)

空白对照组 - 10 746.48±540.0 1173.4±142.0^#

病理模型组 - 10 554.00±282.40 1323.9±133.6

颈椎通络(大) 1.40 10 3584.90±3033.0^**##ΔΔs 1163.5±126.3^#

颈椎通络(中) 0.70 10 1506.10±1977.0 1186.8±143.5^#

颈椎通络(小) 0.35 10 1257.50±1028.6 1228.8±238.0

伸筋丹胶囊 0.26 10 550.49±157.60 1233.4±238.0

注：各组与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01

各组与模型组比较#P＜0.05 ##P＜0.01

各组与伸筋丹比较ΔP＜0.05 ΔΔP＜0.01

颈椎通络胶囊大剂量组与小剂量组比较 sp＜0.05

2 颈椎通络胶囊抗炎作用

2.1 实验材料

2.1.1 药物受试药物颈椎通络胶囊由珠海星光制药有限公司提供，批号20011222，口服胶囊剂型，每粒装0.4g，含生药5.3g，每1g胶囊内容物合生药13.25g，临床成人日用剂量(每日3次，每次5粒，每粒装0.4g，成人体重按60kg计)为0.10g/kg，合生药1.325g/kg；阳性对照药——伸筋丹胶囊由威海人生药业集团股份有限公司提供，批号：020105，每粒装0.15g，口服胶囊剂型，成人日用量为(一日三次，一次5粒，成人体重按60kg计算)0.0375g/kg；醋酸，由重庆南方化学试剂厂提供，批号921102；伊文思兰，由上海化学试剂站经销，批号：821102；角叉菜胶，由辽宁省药物研究所提供，批号：860304；二甲苯，由上海化学试剂厂提供，批号：9610120。

2.1.2 实验动物：小鼠昆明种系，清洁级，体重20±2g，♀♂兼用；大鼠wistar，清洁级，体重210～230g，♀♂各半；均由贵阳医学院实验动物中心提供，实验动物质量合格证书号为NO：200200018。

2.1.3 主要实验仪器：JN-A型精密扭力天平、TMP-1型上皿式电子称，由湖南仪表厂生产；定时钟由上海第三钟表厂生产。VIS型721分光光度计，由上海第三分析仪器厂生产；游标卡尺，由上海医疗器械厂生产；DU-70紫外分光光度计，由成都贝克曼公司提供。

2.2 实验方法与结果

2.2.1 颈椎通络胶囊对二甲苯诱发小鼠耳肿抑制作用

取小鼠110只，随机分为5组，即空白对照组(对照组)灌胃(po)，给予蒸馏水20ml/kg；颈椎通络胶囊大、中、小剂量组，剂量分别为成人日用药量20倍、10倍、5倍，即2.0g、1.0g、0.5g/kg；将颈椎通络胶囊内容物用蒸馏水配制成10％、5％、2.5％浓度的混悬液，给予po；阳性对照药伸筋丹胶囊(伸筋丹)组，将伸筋丹胶囊内容物，用蒸馏水配制成1.85％混悬液po，容量均同空白对照组20ml/kg，每日1次，连续3d(天)；末次药后60、120min，以二甲苯0.03ml/只分别涂于各鼠右耳的前后两面，左耳作对照，15min后将各鼠右、左耳剪下，取相同部位以直径为8mm的打孔器取下右、左两耳片，分别称重(mg)，计算各鼠耳肿胀度(右耳-左耳重量)mg，并计算各鼠耳肿胀抑制率。结果见表2。

从表2可见：不同批次实验颈椎通络胶囊组小鼠耳肿胀度均比空白对照组明显减轻，药后1h抗炎作用比2h作用强；大、中剂量组与伸筋丹作用近似。即表明颈椎通络胶囊对二甲苯致小鼠急性炎症于药后1h即可产生明显抑制作用，该作用可延续2h之久。

表2颈椎通络胶囊抑制二甲苯致小鼠耳肿胀作用(x±s)

给药1h 给药2h

剂量

组别

(g/kg) 动物数肿胀度抑制率动物数肿胀度抑制率

(只) (mg) ％ (只) (mg) (％)

对照组 - 10 15.0±1.71 - 11 10.83±2.33 -

颈椎通络 2.0 10 5.6±1.28^*** 63 11 6.28±1.90^*** 42

胶囊(大)

颈椎通络 1.0 10 10.3±3.01^*** 31 11 6.19±2.00^** 22

胶囊(中)

颈椎通络 0.5 10 11.6±4.1^* 23 11 8.20±2.22^* 24

胶囊(小)

伸筋丹胶囊 0.37 10 7.2±2.1^*** 52 11 7.43±1.97^** 35

注：各给药组与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001

2.2.2 颈椎通络胶囊对小鼠腹腔毛细血管通透性增强的影响

取小鼠50只，随机分组，给药同实验项目2.2.1；末次药后1h，逐只尾静脉注射(尾iv)2％伊文思兰溶液0.1ml/10g体重，立即腹腔注射(ip)0.6％醋酸溶液0.2ml/只；20min断头处死小鼠；向小鼠逐只ip蒸馏水5ml，轻轻揉小鼠腹部，剖开腹腔收集腹腔液体，将这些液体分别注入试管，置于离心机以1000r/min离心5min；取上清液3ml，用721型分光光度计比色，于波长590nm处读取光密度(0D)。各组OD值经统计学处理，进行组间t检验。

结果见表3。

从表3可见颈椎通络胶囊大、中、小剂量组OD值均明显低于空白对照组；与伸筋丹作用近似，表明各给药组对化学物质醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性增强具有明显的抑制作用。提示颈椎通络胶囊具有明显抑制急性炎症作用。

表3颈椎通络胶囊抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增强作用(x±s)

剂量动物数光密度

组别

(g/kg) (只) (OD)

对照组 - 10 0.4989±0.1322

颈椎通络胶囊(大) 2.0 10 0.1868±0.0530^***

颈椎通络胶囊(中) 1.0 10 0.2265±0.0444^***

颈椎通络胶囊(小) 0.5 10 0.2955±0.0637^***

伸筋丹胶囊 0.37 10 0.2014±0.0637^***

注：各给药组与对照组比较，**P＜0.01 ***＜0.001

2.2.3 颈椎通络胶囊对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀抑制作用

大鼠50只♀♂各半，随机分成5组，每组10只。首先用游标卡尺常规测定各组大鼠右后足跖厚度(mm)，同时分别称重，po给药，剂量按表4所示，每日1次，连续3次；末次药后立即以1％角叉菜胶0.1ml/只注射于大鼠右后足跖部皮下，诱发足跖炎症；测定致炎后1h、2h、4h、8h大鼠右后足跖厚度，计算足肿胀度，同时经统计学处理，进行组间t检验。结果见表4。

由表4可见：颈椎通络胶囊大、中、小剂量均能非常显著的抑制角叉菜胶所致大鼠足跖亚急性炎症，肿胀度比同时限对照组及伸筋丹组低，且显效快，持续时间长达8h之久，肿胀抑制率比对照组及伸筋丹组明显增高。

表4颈椎通络胶囊对角叉菜胶诱发大鼠足肿胀的抑制作用(x±s n＝10)

剂量足肿胀度mm 肿胀抑制率(％)

组别 (g/kg

) 1h 2h 4h 8h 1h 2h 4h 8h

对照组 - 2.29±0.26 2.82±0.46 2.97±0.56 3.06±0.31 - - - -

颈椎通络 1.40 1.09±0.4^*** 2.23±0.32^*** 2.49±0.30^* 2.34±0.27^* 52 21 16 24

胶囊(大)

颈椎通络 0.70 1.43±0.48^*** 2.28±0.6^** 2.35±0.57^* 2.57±0.67^* 38 19 21 16

胶囊(中)

颈椎通络 0.35 1.89±0.22^** 2.20±0.43^* 2.63±0.43^* 2.64±0.42^* 18 22 11 14

胶囊(小)

伸筋丹胶囊 0.26 2.09±0.55 2.46±0.45 2.45±0.33^* 2.52±0.34^* 9 13 18 18

注：各给药组与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***＜0.001

2.2.4 颈椎通络胶囊对角叉菜胶致小鼠足肿抑制作用

昆明种系小鼠100只，随机分成5组，按表5所示药物、剂量po给药，每日一次，连续4次；末次药后1h以1％角叉菜胶生理盐水溶液0.05ml/只注射于各鼠右后足跖部皮下致炎，于致炎后2h、4h分别取出各组小鼠10只，剪取各鼠左、右两足(以后肢长毛与短毛交界处为剪足标准)分别称重(mg)，计算各鼠肿胀度后，剥皮剪碎放入5ml生理盐水30min，滤过，取滤液3ml置于DU-70紫外分光光度计比色杯中，于波长278nm处测定前列腺素E₂(PGE₂)含量光密度(OD)值，将OD值数据统计学处理，进行组间t检验，结果见表5。

由表5可见：颈椎通络胶囊大、中剂量及伸筋丹灌胃给药后2小时，对角叉菜胶所致小鼠足跖炎症具有明显的抑制作用；小剂量组及药后4小时作用不明显；而各给药组均可使小鼠炎症局部的PGE₂含量明显减少；说明颈椎通络胶囊抗炎作用与其抑制PGE₂合成和释放有密切关系。PGE₂在体内是一种致炎物质，颈椎通络胶囊使PGE₂含量减少，是该制剂抗炎作用的依据。

表5颈椎通络胶囊对角叉菜胶致小鼠足肿胀抑制作用(x±s n＝10)

剂量足肿胀度(mg) PGE₂含量

组别

(g/kg) 药后2h 药后4h (pg)

对照组 - 96.3±16.23 106.15±25.87 0.3382±0.035

颈椎通络胶囊 2.0 62.0±17.80^*** 86.31±15.61 0.1637±0.060^***

(大)

颈椎通络胶囊 1.0 80.3±13.54^* 88.31±15.61 0.1751±0.096^***

(中)

颈椎通络胶囊 0.5 86.80±12.30 89.42±23.34 0.1104±0.027^***

(小)

伸筋丹胶囊 0.37 77.00±17.68^* 85.42±1 8.00 0.0915±0.023^***

注：各给药组与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001

2.2.5 颈椎通络胶囊对大鼠棉球肉芽肿组织增生抑制作用

♂wistar大鼠50只，逐只以麻醉乙醚进行吸入麻醉，双侧腹股部剪毛常规消毒皮肤，切开约0.5cm，将预先准备的含有青霉素800u的10mg无菌干棉球埋入切口，缝合皮肤切口；正常饲养2天，将棉球未脱落的大鼠50只，随机分成5组，分别称重后，按表6所示药物、剂量po给药8天，每天一次；第9天打开切口将棉球连同周围组织合并取出，分别称湿重，减去原棉球10mg干重，其差值为该鼠的肉芽组织湿重(mg)；烘干后再分别称重，即为肉芽肿干重，计算抑制率；经统计学处理，进行组间t检验。结果见表6。

由表6可见：颈椎通络胶囊大、中剂量组对大鼠棉球肉芽组织增生具有明显的抑制作用，与伸筋丹作用近似，表明颈椎通络胶囊对慢性炎症具有明显的抑制作用；颈椎通络胶囊小剂量抑制作用不明显，具有量—效正相关关系。

表6颈椎通络胶囊对大鼠棉球肉芽肿增生抑制作用(x±s n＝10)

棉球肉芽肿重量(mg) 抑制率％

剂量

组别

(g/kg)

湿重干重湿重干重

对照组 - 104.7±14.6 31.1±4.5 - -

颈椎通络胶 1.40 82.9±18.8^** 25.4±3.5^** 21 19

囊(大)

颈椎通络胶 0.70 88.2±10.3^** 26.6±3.4^** 16 18

囊(中)

颈椎通络胶 0.35 100.2±15.1 29.3±6.9 4 6

囊(小)

伸筋丹胶囊 0.26 90.3±10.4^* 26.2±3.6^** 11 16

注：各给药组与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01

3 颈椎通络胶囊镇痛作用

3.1 实验材料

3.1.1 药物受试药颈椎通络胶囊(由珠海星光制药有限公司提供，批号：20011222，口服胶囊剂型)，每粒装0.4g，合生药5.3g，临床成人日用量为0.10g/kg(合生药1.325g/kg)，实验时用蒸馏水配制成不同浓度混悬液置冰箱内保存备用。阳性对照药——伸筋丹胶囊，由威海人生药业集团股份有限公司提供，批号：020105，临床成人日用量为0.0375g/kg，实验时用蒸馏水配制成1.85％浓度，冰箱保存备用。醋酸，由重庆南方化学试剂厂提供，批号：921102，实验时用生理盐水配制成0.6％醋酸溶液。

3.1.2 动物：昆明种系小鼠，体重20±2g，♀♂兼用，由贵阳医学院实验动物中心提供健康清洁级小鼠，合格证No：0200015。

3.1.3 主要仪器：GJ-8402型热板测痛仪，由浙江宁海白石电子医药仪器厂生产；计时器，由上海钟表厂三厂生产。

3.2 实验方法与结果

3.2.1 颈椎通络胶囊对化学物质刺激诱发疼痛反应的抑制作用

昆明种小鼠100只，随机分组，po给药，剂量均按表7所示。一次给药后0.5h及2h时，分别以0.6％醋酸0.2ml/只ip，立即记录各组各鼠各时限疼痛反应——扭体反应潜伏期(min)及扭体反应次数(15min内)；经统计学处理，进行组间t检验。结果见表7。

由表7可见颈椎通络胶囊具有明显的镇痛作用，与对照组比较在给药后0.5h及2h时小鼠扭体反应潜伏期均明显延长，扭体反应次数均明显减少；表明颈椎通络胶囊po给药0.5h即可产生镇痛作用，该作用可延续2h之久。颈椎通络胶囊大剂量组镇痛作用最强，优于伸筋丹。

表7颈椎通络胶囊对醋酸致小鼠疼痛反应镇痛作用(扭体法)(x±s n＝10)

药后0.5h扭体反应药后2h扭体反应

剂量

组别 15min内扭

(g/kg) 潜伏期潜伏期 15min扭体次数

体次数

(min) (min) (次)

(次)

对照组 - 4.45±1.05 31.9±5.13 3.71±1.45 30.4±4.12

颈椎通络胶 2.0 7.75±2.30^*** 15.3±6.39^*** 6.80±2.38^** 12.7±4.72^***

囊(大)

颈椎通络 1.0 6.08±1.69^* 23.0±6.96^** 6.08±1.84^** 22.6±6.08^**

胶囊(中)

颈椎通络 0.5 6.25±2.47^* 18.8±4.18^*** 5.84±2.70^* 22.2±8.04^*

胶囊(小)

伸筋丹胶 0.37 6.54±2.48^* 19.4±5.68^*** 6.94±2.43^** 24.9±6.72^*

囊

注：各给药组均与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001

3.2.2 颈椎通络胶囊对热板致小鼠疼痛反应的抑制作用

昆明种系♀性小鼠，体重20±2g；预先采用GJ-8402型热板测痛仪，在热板温度为55±0.5℃时测定小鼠(以舔后足为痛指标)痛阈值，取痛阈值为5～30秒的小鼠50只，随机分为5组同上述实验项目4.2.1；逐只测定正常时(给药前0时)痛阈值，按表8所示po给药后30、60、90min时，用上述方法分别测定各组各鼠痛阈值并计算镇痛百分率(％)。结果见表8。

从表8可见：颈椎通络胶囊大、中、小剂量组均能提高小鼠痛阈值，表明该制剂具有明显的镇痛作用，药后30min即起效，并能延续90min之久，大、中剂量组与对照组比较P＜0.001，小剂量组30min、60min镇痛作用与对照组比较P＜0.05，90min时P＜0.01，给药前与给药后比较大剂量组P＜0.001，中剂量及小剂量组90minP＜0.01，小剂量组在30、60min时P＜0.05；伸筋丹组对热刺激无明显的镇痛作用。

表8颈椎通络胶囊对热板刺激致小鼠疼痛反应抑制作用(x±s n＝10)

组别剂量痛阈值(s) 镇痛率％

g/kg 0min 30min 60min 90min 30min 60min 90min

对照组 - 13.7±4.57 14.4±5.0 16.6±5.70 15.7±3.4 - - -

颈椎通络胶 2.0 15.2±6.29 38.7±10.9^***ΔΔΔ 43.4±14.1^***ΔΔΔ 47.8±14.1^***ΔΔ 154.6 185.5 214.5

囊(大)

颈椎通络胶 1.0 16.6±6.40 38.0±12.5^***ΔΔ 40.5±13.9^***ΔΔ 37.3±11.0^***ΔΔ 128.9 143.9 124.7

囊(中)

颈椎通络胶 0.5 14.7±4.50 28.8±16.4^*Δ 32.0±16.9^*Δ 31.0±12.6^**ΔΔ 95.9 117.7 110.9

囊(小)

伸筋丹胶囊 0.37 17.2±3.90 19.9±4.3 21.2±8.80 17.3±5.0 15.7 23.3 0.58

注：各给约组与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001

各组给药前与给药后相比较^ΔP＜0.05 ^ΔΔP＜0.01 ^ΔΔΔP＜0.001

4 颈椎通络胶囊活血化瘀作用

4.1 实验材料

4.1.1 药物受试药颈椎通络胶囊批号为2001122，口服胶囊剂型，每粒装0.4g，由珠海星光制药有限公司提供，成人日用量为(每日3次，每次5粒，0.4g/粒，成人体重按每60kg计算)0.10g/kg(合生药1.325g/kg)，实验用成人日用量的14倍、7倍、3.5倍，即1.40g、0.70g、0.35g/kg。实验时用蒸馏水配制成14.0％、7.0％、3.5％不同浓度的混悬液，po给药，容量为10ml/kg。阳性药对照组——伸筋丹，实验时用成人等效剂量(成人用量的7倍)0.26g/kg，用蒸馏水配制成2.6％的伸筋丹混悬液po给药，容量同上。0.1％肾上腺素(Adr)注射液由上海制剂公司提供，批号20010212。

4.1.2 实验动物：wistar大鼠250～280g，♀♂兼用，由贵阳医学院实验动物中心提供的清洁级动物，合格证：0200020。

4.1.3 主要仪器：3-9型血流变学、微循环、红细胞变形系列仪器，由成都麦赛科贸公司提供。

4.2 实验方法与结果

4.2.1 颈椎通络胶囊对急性实验性血瘀证模型大鼠血液流变性影响

取wistar大鼠60只，随机分为空白对照组，血瘀模型组，颈椎通络胶囊大、中、小剂量组，伸筋丹组；每组10只，♀♂各半，按表9所示药物、剂量po给药；空白对照组及血瘀模型组以蒸馏水po 10ml/kg，每日1次，连续8次。第9天药后1h除空白对照组外，其余各组均以0.1％Adr0.08ml/100g体重皮下注射，2h后将各鼠浸入冰水中，5min后取出，又一次皮下注射0.1％Adr0.08ml/100g体重制作血瘀证模型大鼠；常规管理，禁食不禁饮；次晨取各组大鼠空腹血5ml，肝素防凝，测定各鼠血液流变学指标(报告单位：贵阳中医学院附属医院一附院血流变室)。结果见表9。

由表9可见：各给药组大鼠全血粘度、血浆粘度、红细胞比重明显降低，红细胞电泳明显加快；除伸筋丹组外，其余各组红细胞聚集指数明显降低；除颈椎通络胶囊小剂量组对红细胞沉降率有减慢趋势外，其余各组红细胞沉降率明显减慢；表明颈椎通络胶囊具有活血化瘀作用，其作用优于伸筋丹。全血粘度降低，组织血流加快，微循环血流瘀滞减轻，无疑对颈椎病变部位产生有利作用。

表9颈椎通络胶囊对急性实验性血瘀证模型大鼠血液流变性影响(x±s n＝10)

剂量全血粘度(mpa·s) 血浆粘度血小板红细胞红细胞沉

红细胞聚红细胞电泳

组别 (g/kg 相对粘度聚集比容降率

300l/s 115l/s 1.00l/s 集指数时间(s)

) mpa·s (％) (％) (mm/h)

空白对照组 - 3.71±0.38^*** 4.29±0.45^*** 1254±1.29^*** 1.89±0.16 1.97±0.17^* 6.66±0.56^** 18.67±6.12 44.3±8.8^* 7.43±1.72^** 20.63±3.83^**

血瘀模型组 - 4.94±0.44 5.65±0.50 16.70±1.45 2.24±0.11 2.20±0.20 7.46±0.67 18.88±5.19 55.0±9.48 11.40±2.78 15.07±2.96

大剂量组 1.40 3.65±0.31^*** 4.18±0.35^*** 1253±132^*** 1.96±0.11^** 1.86±0.14^*** 6.29±0.47^*** 19.22±7.84 43.8±8.47^* 1±1.22^** 19.60±3.13^**

中剂量组 0.70 3.99±0.33^*** 4.55±0.38^*** 1337±1.09^*** 2.09±0.12^** 1.91±0.17^** 6.44±0.57^** 16.89±5.86 43.11±8.12^** 7.99±1.31^** 19.82±4.66^*

小剂量组 0.35 3.97±0.26^*** 4.27±0.27^*** 14.82±1.87^* 2.00±0.17^** 1.90±0.10^*** 6.40±0.34^*** 19.67±5.48 44.11±4.94^** 9.90±1.71 19.22±5.13^*

伸筋丹组 0.26 4.10±0.79^** 4.70±0.90^** 13.85±2.66^** 1.97±0.20^** 207±0.24 7.00±0.82 21.11±7.13 44.22±5.93^** 9.24±0.96^* 19.52±2.57^**

注：各组与血瘀模型组比较^*P＜0.05 ^**P＜0.01 ^***P＜0.001，各给药组与对照组比较各项指标均无明显差异P＞0.05

表10颈椎通络胶囊对急性血瘀证模型大鼠血小板聚集功能抑制作用(x±s n＝10)

剂量

组别 Ht₁ Ht₃ Ht₅ Ht_m Gt₁ Gt₃ Gt₅ Gt_m Qj jd

(g/kg)

空白对照组 - 18.2±6.40^*** 21.4±6.96^** 21.0±5.68^** 30.2±15.2^* 0.083±0.075^*** 0.12±0.064^*** 0.12±0.07 0.245±0.17 0.29±0.26 2.0±2.22

血瘀模型组 - 28.4±4.28 29.3±3.97 29.4±7.04 2.8±4.81 0.20±0.05 0.22±0.03 0.19±0.09 0.30±0.05 0.46±0.34 2.7±1.84

大剂量组 1.40 16.2±4.86^*** 17.8±6.32^*** 18.0±6.61^** 323±9.44^** 0.089±0.06^*** 0.14±0.06^** 0.11±0.05^* 0.29±0.17 0.39±0.18 3.41±1.04

中剂量组 0.70 17.3±6.14^*** 21.4±4.10^*** 19.7±4.50^** 30.2±11.5^** 0.09±0.06^*** 0.13±0.05^*** 0.11±005^* 0.28±0.13 0.41±0.16 3.23±1.58

小剂量组 0.35 19.7±3.54^*** 19.8±4.00^*** 19.9±4.00^** 30.9±10.1^** 0.10±0.05^**** 0.10±0.05^*** 0.10±0.05^* 0.23±0.11 0.42±0.40 3.08±1.0

伸筋丹组 0.26 18.3±5.20^*** 19.11±4.17^*** 192±3.50^*** 28.7±6.18^*** 0.09±0.06^*** 0.10±0.04^*** 0.11±0.06^* 0.22±0.07^** 0.35±0.15 2.87±0.62

注：各组与模型组比较^*P＜0.05 ^**P＜0.01 ^***P＜0.001；各给药组与空白对照组比较各项指标均无明显差异P＞0.05。

4.2.2 颈椎通络胶囊对急性实验性血瘀证模型大鼠血小板聚集功能抑制作用

wistar大鼠60只，随机分组、给药、制作急性实验性血瘀模型大鼠均同上述实验项目4.2.1；分别取空腹血5ml测定血小板聚集功能(报告单位：贵阳中医学院附属医院一附院血流变室)。结果见表10。

由表10可见：血瘀模型大鼠1、3、5分钟血小板聚集率(Ht₁、Ht₃、Ht₅)、最大聚集值(Htm)及1、3、5分钟聚集强度(Gt₁、Gt₃、Gt₅)明显升高；最大聚集强度(Gtm)、解集率(QJ)、聚集陡度(jd)有升高趋势，表明血瘀证模型建立。而颈椎通络胶囊能使血小板聚集功能明显降低，各项指标与空白对照组比较差异极显著；表明颈椎通络胶囊各剂量组灌胃给药，对血小板聚集功能具有明显的抑制作用，该作用与伸筋丹相近。

5 结语

经主要药效学实验结果表明，颈椎通络胶囊能够提高实验性颈神经根炎模型大鼠血浆6-K-PGF_1α及降低血浆TXB₂含量；因此，可以认为该制剂能使颈神经根部位血管扩张，血流通畅，瘀血减少，活血通络，消肿止痛。颈椎通络胶囊对二甲苯致小鼠耳肿，醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增强，角叉菜胶致大鼠、小鼠足肿，及棉球致肉芽肿均具有明显的抑制作用，且重现性好；使局部组织PGE₂含量明显减少；对化学物质及热板刺激诱发的疼痛均有明显的镇痛作用，且持续时间久；颈椎通络胶囊能够明显的改善急性实验性血瘀证模型大鼠血液流变性，抑制血瘀模型大鼠血小板聚集，表明该制剂具有明显的活血化瘀作用。以上实验结果为临床试用提供科学依据，颈椎通络胶囊适用于寒瘀阻络型神经根性颈椎病。

试验例二、颈椎通络胶囊急性毒性试验

摘要：观察口服给药途径，测定颈椎通络胶囊最大给药量试验。结果表明：小鼠口服颈椎通络胶囊内容物水混悬液，最大给药量为28g/kg，合生药371g/kg，相当于成年人每日用药量280倍。所以，可以认为临床拟定成人口服给药剂量0.10g/kg(合生药1.325g/kg)体重是安全的；因此本品可以提供临床试用。

目的：观察颈椎通络胶囊短期口服给予动物后，所产生的毒性反应及死亡情况，或最大给药剂量，或推算临床成人用量安全倍数，综合评价该药物的安全性。

1 实验材料

1.1 受试药物颈椎通络胶囊(由珠海星光制药有限公司提供)，批号：20011222，口服胶囊剂型，每1g胶囊内容物合生药13.25g，临床拟定成人日用剂量为(每日3次，每次5粒，每粒装0.4g，成人体重按60kg计算)0.10g/kg，合生药1.325g/kg。

1.2 实验动物昆明种小鼠，清洁级，体重20±2g，♀♂各半，由贵阳医学院实验动物中心提供。合格证号：0200015。先予饲养3天适应环境，第4天进行实验。

1.3 实验药物的制备：将受试药物胶囊内容物用蒸馏水配制成棕色混悬液，浓度为0.35g/ml，合生药4.6375g/ml；放于冰箱内存放备用。

2 实验方法

2.1 预试实验取小鼠6只，以颈椎通络胶囊混悬液最大浓度0.35g/ml(合生药4.6375g/ml)、最大容积0.4ml/10g体重，给予小鼠14g/kg(合生药185.5g/kg)颈椎通络胶囊内容物混悬液一次灌胃，相当于成年人每日剂量0.10g/kg(合生药1.325g/kg)的140倍。观察7天，不引起小鼠死亡，不能测出药物的半数致死量(LD₅₀)，故进行本制剂最大给药量正式试验。

2.2 正式实验

昆明种小鼠20只，♀♂各半，体重20±2g，禁食不禁水12小时，于24h内给予小鼠0.35g/ml(合生药4.6375g/ml)的颈椎通络胶囊内容物混悬液0.4ml/10g体重灌胃2次，给药量共计28g/kg(合生药371g/kg)，按体重计算此剂量相当于成年人每日剂量0.10g/kg(合生药1.325g/kg)的280倍，给药后将小鼠常规饲养7天，逐日观察小鼠表现。

3 实验结果

小鼠药后7天内除给药后动物出现短暂的活动减少，不喜啃咬，摄食减少外，未见动物出现毒性反应及死亡现象。此结果表明24小时内给予小鼠2次灌胃颈椎通络胶囊28g/kg(合生药371g/kg)，观察7天不引起动物死亡。按体重计算，即小鼠能耐受颈椎通络胶囊的剂量(371g生药/kg)，相当于成人每日剂量0.10g/kg(1.325g生药/kg)的280倍，而不致死亡。据文献报道：“一般认为按体重计算小鼠最大耐受量相当于人用量100倍以上则较为安全，可以提供临床试用”。因此可以认为颈椎通络胶囊口服给药对动物的急性毒性甚小，表明应用较安全，故可为临床试用提供试验依据。

4 结语

受药物浓度和容积的限制，对小鼠1次灌胃给药无法测出LD₅₀。经最大给药量测定，1日内分2次给予小鼠灌胃给药，其最大给药量相当于临床用药量的280倍；故可认为本品的急性毒性低，临床拟定成人每日服用量0.10g/kg(合生药1.325g/kg)体重是安全的，可以提供临床试用。

试验例三、颈椎通络胶囊长期毒性试验资料及文献资料

摘要：大鼠连续给予5.0g、3.0g、1.5g/kg体重，合生药66.25g、39.75g、19.875g/kg三种剂量——分别为成人日用剂量0.10g/kg(合生药1.325g/kg)的50倍、30倍、15倍——颈椎通络胶囊混悬液灌胃12周及停药2周。三种剂量给药组与给予蒸馏水灌胃的空白对照组比较，各组大鼠体重、进食量均逐日增长，无明显差异。各组大鼠行为、活动、皮毛、大小便、血液细胞、血液生化(肝、肾功能)无异常变化。各组大鼠主要器官：心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺指数无明显差异；各主要脏器：心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺及性腺器官等，病理组织检查未见异常。

1 目的

观察较大剂量，较长时间连续给予大鼠重复灌胃颈椎通络胶囊12周对大鼠所产生毒性反应，严重程度及首先出现的症状；毒性反应的靶器官及恢复和发展情况，确定无毒反应剂量，为拟定成人应用安全剂量提供依据。

2 实验材料

2.1 药物颈椎通络胶囊由珠海星光制药有限公司提供，批号：20011222，口服胶囊剂，每粒装0.4g，合生药5.3g，每1g胶囊内容物合生药13.25g，成人日用量为(每日3次，每次5粒，0.4g/粒，成人体重按60kg计)0.10g/kg(合生药1.325g/kg)体重。颈椎通络胶囊内容物为棕色粉末，实验时用蒸馏水配制成不同浓度混悬液，冰箱保存备用。

2.2 动物wistar大鼠80只，♀♂各半，体重100~120g，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：200200018。

2.3 主要仪器：SC-970全自动血细胞分析仪，贝肯公司瑞士生产；日立7170A全自动生化分析仪，美国柯达生产。

2.4 实验数据统计：以X±S表示，进行组间t检验。

3 实验方法

3.1 实验条件给药前后的大鼠均每笼单性别群养，每笼同性别5只大鼠，饲以全价颗粒饲料由贵阳医学院实验动物中心提供，自由饮水，室温20～25℃，湿度55％～65％。

3.2 分组和剂量

取wistar大鼠80只，随机分为4组，每组20只，♀♂各半，分别作为高、中、低颈椎通络胶囊3种剂量组及空白对照组(对照组)。给药组剂量分别为5.0g、3.0g、1.5g/kg，各合生药66.25g、39.75g、19.875g/kg，分别为临床成人日用量0.10g/kg(合生药1.325g/Kg)体重的50倍、30倍、15倍。实验前将颈椎通络胶囊内容物用蒸馏水配制成33％、20％、10％的颈椎通络胶囊混悬液，置于冰箱内保存备用。灌胃容积均为15ml/kg体重。

3.3 给药途径及方法

因为颈椎通络胶囊临床用药途径是口服给药，所以各组均灌胃给药，每日上午8时动物空腹时灌胃一次，连续12周；每周称动物体重一次，根据动物体重增长变化调整给药剂量。

3.4 试验周期

实验总周期为14周，前12周为给药时间，后2周为停药恢复时间，首先观察给药12周期间动物有无毒性反应，每组取半数动物处死，测定以下各项指标，观察动物反应，其余半数动物停药饲养2周后，同上述方法检测各项指标，观察动物停药的恢复状况。

4 检查项目

4.1 一般观察进食量、体重、外观形态体征、行为活动、大便性状等，发现中毒动物立即隔离重点观察，发现死亡或濒死动物即刻尸检。

4.2 检测项目连续给药12周，末次药后24小时，称大鼠体重后，每组动物各取10只，♀♂各半，股静脉取血进行测试血液细胞学、血液生化学指标后将动物处死，立即剖取各鼠主要器官心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺分别称重，计算器官系数。另取性腺器官：子宫、卵巢、输卵管、睾丸、附睾、精囊腺，及心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺，于同一部位取材浸泡于10％甲醛溶液固定，进行石蜡包埋，切片，HE染色，置光学显微镜观察并与对照组比较；首先对比检查高剂量组与对照组动物组织切片，观察器官组织形态变化。血液学检查指标：红细胞(RBC)计数、红细胞体积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、血红蛋白(Hgb)、血红蛋白平均量(MCH)、血小板(PLT)、白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LY)、粒细胞(GR)、单核细胞(MO)。血液生化学(肝、肾功能)检查指标：总胆固醇(CHOL)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLQ)、ALB/GLO比值(A/G)、碱性磷酸酶(AKP)含量。

4.3 指标观察时间每天全面观察所有实验动物的一般状况，动物活动行为，大便性状，外观体征，饲料夜耗量；每周称体重一次，给药12周，末次药后24小时及停药2周恢复期末各进行一次各项指标的全面检查。

5 实验结果

5.1 颈椎通络胶囊对大鼠一般情况的影响在颈椎通络胶囊连续给药12周及停药2周内，各给药组与对照组比较观察，动物活动、行为、饮食、大便、毛发光泽情况相似，未见明显异常变化。在同一时间内大鼠摄食量雄性鼠比雌性鼠稍有增加，但无明显差异。

结果见表1-1、表1-2。

5.2 颈椎通络胶囊对大鼠体重的影响实验结果见表2-1、表2-2、表2-3、表2-4。

从表内可见，颈椎通络胶囊高、中、低三种剂量对大鼠连续给药不同时间后的体重，与对照组比较，其差异无统计学意义(P均＞0.05)；但雄鼠体重比雌鼠体重增长略高。即实验结果表明颈椎通络胶囊在较大剂量，较长疗程(12周)用药及停药2周对大鼠生长发育(体重增长)无毒性影响。

5.3 颈椎通络胶囊对大鼠血液细胞学影响实验结果见表3-1、表3-2。

从表中可见：颈椎通络胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药12周及停药2周，对大鼠的血液细胞学均未见显著影响，各给药组动物RBC、Hgb、PCT、WBC等数值与对照组的数值接近；与对照组相比，经统计学处理P均＞0.05，因此可以认为颈椎通络胶囊较大剂量、较长时间(12周)给药及停药2周，对大鼠的造血功能无毒性影响。

5.4 颈椎通络胶囊对大鼠血液生化学(肝功、肾功)的影响实验结果见表4-1、表4-2。

从表中可见：颈椎通络胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药12周及停药2周，大鼠的肝功能及肾功能各项生化指标数值分别与对照组相应数值相比较，未见明显差异，P均＞0.05。故表明颈椎通络胶囊较大剂量连续用药12周及停药2周，对大鼠肝功能、肾功能均无毒性作用。

5.5 颈椎通络胶囊对大鼠主要器官系数的影响实验结果见表5-1、表5-2。

从表中可见：颈椎通络胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药12周及停药2周，大鼠重要器官(心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺)重量系数的数值与对照组均相近。经统计学处理，各给药组各项指标数值与对照组比较，其差异均无显著性(P均＞0.05)。表明较大剂量长期(12周)灌胃及停药2周，对大鼠器官重量系数无明显影响。

5.6 颈椎通络胶囊对大鼠主要器官组织的病理形态的影响对颈椎通络胶囊连续给药12周及停药2周的两批次，杀取各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺等脏器，并相同部位取材，用10％甲醛溶液浸泡固定；将对照组与高剂量组大鼠随机抽查6只鼠的器官制作组织切片，进行病理学检查。结果被抽查动物的器官各种结构正常，细胞染色均匀，无明显改变。

由于上述病理结果未见到高剂量组各器官毒理学病理变化，故对中、低剂量组未进行器官组织切片检查，而只保存器官组织标本。

表1-1颈椎通络胶囊对雌性大鼠日平均摄食量的影响(g/天/只X±s)

用次空白对照组高剂量组中剂量组低剂量组

1 12.71±1.11 12.57±1.81 12.14±1.35 12.14±1.35

2 15.71±2.14 15.71±2.14 15.43±1.72 15.14±1.68

3 21.57±1.50 21.43±1.62 22.00±2.16 22.57±2.82

4 23.14±2.67 22.14±1.95 23.71±2.67 25.00±1.29

5 25.94±1.46 25.40±1.42 25.17±1.51 25.41±1.88

6 26.14±1.68 26.43±1.90 26.14±1.77 27.71±3.35

7 28.00±3.00 28.14±3.98 28.00±3.16 28.14±3.02

8 29.0.0±3.87 29.71±4.39 29.57±6.29 30.57±6.45

9 30.14±3.13 30.57±4.76 30.71±5.74 31.14±6.54

10 31.43±3.21 32.14±4.10 32.86±4.67 32.86±4.13

11 33.43±3.26 33.71±3.99 33.43±3.69 34.00±3.96

12 34.57±1.99 34.00±2.38 35.57±2.51 35.14±3.24

13 36.10±3.72 35.40±3.70 37.28±2.88 36.14±3.78

14 37.00±1.60 36.20±1.70 40.40±2.28 37.00±2.00

注：各给药组与对照组同一周次摄食量比较P均＞0.05，随周次延长，摄食量逐渐增多。1～12周为给药期间n＝10；13～14周为停药期间n＝5

表1-2颈椎通络胶囊对雄性大鼠日平均摄食量的影响(g/天/只X±s)

周次空白对照组高剂量组中剂量组低剂量组

1 13.43±1.27 14.00±1.41 14.00±1.15 13.71±1.11

2 17.14±1.21 16.57±1.90 17.14±1.35 17.57±1.72

3 23.71±1.38 24.29±1.11 24.43±1.72 24.00±2.16

4 25.29±1.11 25.14±1.34 25.57±1.92 25.00±1.29

5 26.00±2.38 27.17±3.29 27.27±3.29 26.74±1.54

6 26.71±1.11 29.29±2.56 28.00±3.37 29.86±5.11

7 30.25±3.33 30.71±3.50 30.29±4.96 31.00±6.19

8 31.14±3.29 32.00±4.83 31 43±6.02 32.43±4.76

9 32.57±2.64 33.14±5.30 33.29±5.77 33.29±5.77

10 36.14±1.77 35.14±2.55 36.00±2.45 35.71±3.25

11 37.86±1.57 36.43±2.23 37.71±1.98 36.14±2.12

12 40.14±2.48 37.57±2.51 38.00±2.16 37.14±2.12

13 40.14±2.88 39.86±2.90 40.14±2.50 39.60±1.98

14 41.28±2.56 40.86±4.46 43.30±5.22 44.44±4.28

注：各给药组与对照组同一周次摄食量比较P均＞0.05，随周次延长，摄食量逐渐增多。1～12周为给药期间摄食量n＝10；13～14周为停药期间摄食量n＝5

表2-1颈椎温通胶囊连续给药12周对雌性大鼠体重增长的影响

(体重g X±s n＝10)

周次对照组高剂量组中剂量组低剂量组

1 111.2±9.48 113.1±6.24 109.6±7.78 111.9±6.57

2 128.8±8.73 133.2±8.09 127.1±5.74 131.3±9.79

3 145.7±8.12 149.9±8.97 141.9±4.65 145.4±8.93

4 161.5±13.75 165.0±11.55 162.8±7.74 165.3±14.22

5 175.0±22.14 176.5±10.81 172.3±7.27 175.1±12.02

6 188.7±11.83 189.0±11.74 186.1±12.70 189.2±14.33

7 201.3±10.79 198.1±11.33 201.3±12.82 203.8±16.05

8 219.3±14.43 213.5±14.92 215.6±12.17 227.5±21.37

9 240.5±19.07 229.1±13.45 231.3±14.02 236.7±12.51

10 256.0±18.97 244.8±14.54 246.3±14.34 250.4±13.38

11 272.9±12.41 262.3±12.87 270.7±16.86 263.9±13.46

12 292.9±13.21 277.1±12.64 280.7±16.86 281.5±16.79

注：各给药组在各给药时间的体重分别与对照组比较均无明显差异，P均＞0.05。

表2-2颈椎通络胶囊连续给药12周后停药2周对雌性大鼠体重增长影响

(体重g X±s n＝5)

周次对照组高剂量组中剂量组低剂量组

1 304.0±10.75 299.0±11.40 299.2±11.32 327.0±18.23

2 313.0±18.91 322.2±10.18 322.0±17.89 317.0±21.97

注：各组在停药2周期间体重无明显差异P均＞0.05。

表2-3颈椎通络胶囊连续给药12周对雄性大鼠体重增长的影响

(体重g X±s n＝10)

周次对照组高剂量组中剂量组低剂量组

1 116.5±6.92 113.1±6.01 114.8±6.56 116.0±7.75

2 133.4±7.78 133.5±7.84 133.7±8.31 135.0±7.82

3 153.0±7.04 151.9±8.62 152.7±5.12 153.0±7.15

4 170.8±10.57 173.0±12.06 171.9±9.75 168.6±7.28

5 182.1±10.35 187.5±13.59 186.0±10.07 185.9±10.02

6 189.0±12.66 199.9±14.98 203.5±11.33 205.5±17.07

7 208.9±16.43 214.1±14.49 223.1±11.57 224.4±22.44

8 221.0±20.39 227.9±12.24 239.6±14.70 238.5±27.89

9 241.0±18.38 242.7±15.67 258.9±15.86 258.8±31.35

10 261.0±18.83 257.5±14.22 276.6±18.43 278.1±31.43

11 282.5±16.20 270.9±14.87 292.1±16.14 292.3±32.07

12 302.0±10.78 298.6±15.60 311.8±21.96 308.5±31.23

表2-4颈椎通络胶囊连续给药12周后停药2周对雄性大鼠体重增长的影响

(体重g X±s n＝5)

周次对照组高剂量组中剂量组低剂量组

1 321.6±10.68 313.6±17.46 320.2±21.64 338.0±18.23

2 336.2±14.37 349.0±20.43 335.6±39.11 348.2±28.17

注：各组在停药2周期间体重无明显差异P均＞0.05。

表3-1颈椎通络胶囊连续给药12周对大鼠血液细胞学影响(X±s n＝10)

剂量 RBC HCT MCV Hgb MCH PLT WBC Ly MO GR

组别

g/kg ×10¹²/L ％ f1 g/L Pg ×10⁹/L ×10⁹/L ％％％

对照组 - 7.31±0.61 41.66±3.3 57.0±1.49 138.8±7.32 18.9±0.57 23.1±261.8 8.97±3.79 67.1±10.62 3.4±0.97 29.6±7.52

颈椎通 5.0 7.83±0.67 43.56±4.11 55.5±1.72 149.1±10.42 19.1±0.99 750.3±232.6 9.67±2.62 74.0±6.77 32±1.03 22.8±6.29

络胶囊

颈椎通 3.0 7.47±0.87 45.59±5.03 56.5±2.07 149.2±15.53 18.5±0.53 687.2±96.07 10.63±3.79 71.9±7.19 3.0±0.82 25.1±6.79

络胶囊

颈椎通 1.5 7.69±0.84 44.58±4.85 55.8±1.55 146.4±12.43 18.4±0.63 825.4±211.24 11.4±2.69 72.4±4.67 3.4±0.84 24.2±5.07

络胶囊

注：各给药组大鼠血液细胞学指标数值分别与对照组相应指标数值比较P均＞0.05

表3-2颈椎通络胶囊连续给药12周停药2周对大鼠血液细胞学影响(X±s n＝10)

剂

RBC HCT MCV Hgb MCH PLT WBC Ly MO GR

组别量

×10¹²/L ％ f1 g/L Pg ×10⁹/L ×10⁹/L ％％％

g/kg

对照组 - 7.55±0.56 43.39±3.46 57.5±1.96 144.1±7.89 19.1±1.10 769.4±168.9 20.06±6.36 69.5±6.70 3.6±0.97 26.9±6.12

颈椎通 5.0 7.40±0.67 41.99±3.77 56.8±1.55 137.0±9.85 18.6±0.70 720.1±89.19 21.53±7.66 64.2±8.37 3.8±1.03 32.1±8.81

络胶囊

颈椎通 3.0 7.52±0.93 42.30±5.71 56.1±1.37 146.2±14.8 19.3±1.06 881.6±203.2 17.96±4.89 66.9±10.13 3.9±0.74 28.4±10.25

络胶囊

颈椎通 1.5 7.45±0.55 42.19±3.09 56.7±0.95 140.8±14.02 18.8±0.92 747.0±192.7 18.07±5.23 66.0±11.44 3.4±0.84 30.1±11.55

络胶囊

表4-1颈椎通络胶囊连续给药12周对大鼠血液生化学(肝、肾功能)指标的影响(X±s n＝10)

剂量 CHOL BUN CreA ALT AST TP ALB GCO AKP

组别 A/G

g/kg mmol/L mmol/L μmol/L U/L u/L g/L g/L g/L U/L

对照组 - 1.22±0.32 9.15±1.97 29.8±3.65 34.7±162 315.3±65.62 75.69±4.81 32.1±2.34 43.53±5.35 0.76±0.13 469.1±82.76

颈椎通络 5.0 1.25±0.34 10.61±1.21 29.5±4.09 78.1±21.1 267.2±67.3 76.6±4.65 31.5±2.80 45.03±2.97 0.69±0.07 482.8±79.20

颈椎通络 3.0 1.42±0.20 10.45±1.37 29.6±3.50 78.3±14.5 354.2±120.5 75.77±4.38 34.7±2.96 47.00±3.34 0.73±0.09 407.6±149.33

颈椎通络 1.5 1.27±0.28 10.25±3.27 33.3±12.23 77.0±18.4 286.8±43.4 6.09±3.59 33.4±3.61 43.09±4.86 0.78±0.10 431.8±124.82

注：各给药组各项指标数值分别与对照组相应指标数值比较P均＞0.05

表4-2颈椎通络胶囊连续给药12周后停药2周对大鼠血液生化学(肝、肾功能)指标的影响(X±s n＝10)

剂量 CHOL BUN Crea ALT AST TP ALB GCO AKP

组别 A/G

g/kg mmol/L mmol/L μmol/L U/L u/L g/L g/L g/L U/L

对照组 - 1.62±0.38 9.38±2.05 41.8±13.97 62.0±15.5 364.2±66.12 89.6±5.22 35.9±3.37 50.9±5.43 0.68±0.11 337.4±74.8

颈椎通络 5.0 1.58±0.23 7.93±1.22 36.9±4.07 65.1±16.8 321.1±50.52 87.14±6.84 36.6±5.18 50.6±3.84 0.73±0.11 301.8±119.8

胶囊

颈椎通络 3.0 1.51±0.34 9.05±2.18 38.4±4.72 69.7±135 3159±57.67 85.9±5.59 34.8±2.27 51.1±4.98 0.69±0.07 311.7±39.1

胶囊

颈椎通络 1.5 1.56±0.20 9.04±213 35.1±2.87 63.5±15.7 320.5±58.61 83.38±5.43 34.1±3.36 48.3±4.85 0.71±0.12 283.6±55.3

胶囊

表5-1颈椎通络胶囊连续给药12周对大鼠主要器官重量系数的影响(X±s n＝10 g/100g体重)

剂量

组别心肝脾肺肾肾上腺胸腺

g/kg

对照组 - 0.315±0.04 3.68±0.68 0.396±0.06 0.750±0.10 0.720±0.05 0.03±0.007 0.012±0.001

颈椎通络 5.0 0.313±0.04 3.72±0.49 0.399±0.11 0.671±0.13 0.715±0.07 0.03±0.004 0.013±0.003

胶囊

颈椎通络 3.0 0.321±0.02 3.66±0.40 0.350±0.05 0.790±0.15 0.677±0.12 0.03±0.007 0.010±0.004

胶囊

颈椎通络 1.5 0.323±0.05 3.59±0.71 0.390±0.09 0.741±0.14 0.731±0.07 0.03±0.005 0.010±0.002

胶囊

注：各给药组各指标数值分别与对照组相应指标数值比较P均＞0.05

表5-2颈椎通络胶囊连续给药停药2周对大鼠主要器官重量系数的影响(X±s n＝10 g/100g体重)

剂量

组别心肝脾肺肾肾上腺胸腺

g/kg

对照组 - 0.351±0.04 3.453±0.22 0.370±0.07 0.659±0.05 0.567±0.17 0.033±0.012 0.014±0.002

颈椎通络胶 5.0 0.52±0.07 3.457±0.58 0.384±0.08 0.692±0.06 0.563±0.13 0.034±0.016 0.013±0.003

囊

颈椎通络胶 3.0 0.350±0.10 3.429±0.13 0.368±0.13 0.661±0.16 0.631±0.10 0.032±0.006 0.012±0.002

囊

颈椎通络胶 1.5 0.332±0.02 3.310±0.42 0.364±0.07 0.672±0.13 0.634±0.05 0.032±0.08 0.014±0.003

囊

5 结语

经大鼠长期毒性试验结果表明，以颈椎通络胶囊5.0g、3.0g、1.5g/kg(分别合生药66.25g、39.75g、19.875g/kg)体重3种剂量——分别为临床拟定成人日用量0.10g/kg(合生药1.325g/kg)体重的50倍、30倍、15倍，每日一次，连续12周对大鼠灌胃给药，以及停药后2周，与灌胃蒸馏水的对照组比较：各种剂量给药对大鼠的一般状态(外观形态、活动、大便形状等)、生长发育(体重增长)、造血功能(血液细胞学)、肝功能、肾功能(血液生化学)、重要器官重量系数等，均未发现有明显的毒性作用；经病理学检查证明，高剂量组与对照组比较观察对大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺，以及子宫、卵巢、输卵管、睾丸、附睾、精囊腺等性腺器官组织均未发现明显的毒性损伤变化。所以，可以认为较大剂量，较长疗程服用颈椎通络胶囊的毒性较低，临床拟定成人日用剂量是安全的，因此该制剂可以提供临床试用。

具体实施方式

实施例：

本发明的胶囊，其内容物主要是由下列重量的原料药制成：

桂枝 166.6g 白芍 500g 制草乌 200g

威灵仙 500g 莪术 500g 僵蚕 266.7g

葛根 666.7g 牛蒡子500g 黄芪 500g

磁石 1000g 续断 500g

以上原料药制成胶囊1000粒。

其制备方法包括下列步骤：

(1)所述重量的桂枝粉成细粉，备用；

(2)取所述重量的葛根粉碎成粗粉，分别加8倍、6倍量75％乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并回流提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；

(3)取所述重量白芍、制草乌、威灵仙、莪术、僵蚕、牛蒡子、黄芪、磁石、续断加水煎煮提取二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；

(4)合并所述步骤(2)、(3)制得的稠膏，加入所述步骤(1)制得的桂枝细粉，混匀，在65℃下干燥，粉碎成细粉，加入适量淀粉，混匀，分装成胶囊1000粒。

Claims

1.一种颈椎通络胶囊，其特征在于，它的内容物主要是由下列重量份的原

料药制成：

桂枝 166.6份白芍 500份制草乌200份

威灵仙500份莪术 500份僵蚕 266.7份

葛根 666.7份牛蒡子500份黄芪 500份

磁石 1000份续断 500份

2.一种权利要求1所述的颈椎通络胶囊的制备方法，其特征在于，它包括下列步骤：

(1)取所述重量配比的桂枝粉碎成细粉，备用；