CN1596264A - 有关肥胖及2型糖尿病的差异表达基因 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及编码与调节肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或代谢能量水平有关的表达产物的核酸分子。本发明的核酸分子和表达产物由重组方法制备或分离自天然来源。本发明的核酸分子和表达产物及其衍生物、同系物、类似物和模拟物可用作肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或能量失衡的治疗及诊断剂，或者用作设计和/或鉴定其活性和/或功能调节剂的靶标。本发明核酸分子和表达产物通过使用差异显示技术进行鉴定。
Description
发明领域
本发明一般涉及在不同生理条件下使用差异显示技术鉴定的至少在胃、下丘脑或肝中表达的核酸分子。本发明认为该核酸分子编码与调节肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或代谢能量水平有关的表达产物。更特别而言，本发明涉及核酸分子以及利用重组方法从该核酸分子制备或从天然来源中分离的表达产物，及其在诸如肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或能量失衡的疾病治疗和诊断方案中的用途。本发明的核酸分子和表达产物及其衍生物、同系物、类似物和模拟物因而可用作肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或能量失衡的治疗及诊断剂，或者用作设计和/或鉴定其活性和/或功能调节剂的靶标。
发明背景
本说明书提供的参考文献细节列于篇末。
本说明书参考的任何现有技术不是也不应视为认可或任何形式的暗示该现有技术构成任何国家普通常识的一部分。
重组DNA技术日益精深，极大促进了医疗、兽医及相关人和动物健康领域的研究和开发。在研究某些疾病相关的遗传基础时尤其如此。处于发病及致死起点的一个特别重要的疾病是肥胖及其并发2型糖尿病(旧称非胰岛素依赖性糖尿病或NIDDM)和心血管疾病。
肥胖可定义为身体脂肪的病理性超标，由能量摄取及消耗的长时间不平衡造成。肥胖是富裕国家最常见的代谢性疾病。这些国家的肥胖发生率惊人之高，为10％直至某些种群超过50％(Bouchard，The genetics ofobesity.Boca Raton：CRC Press，1994)。特别令人关注的是，肥胖发生率似乎在富裕社会中持续上升，如今较不富裕国家在变得更为富裕或接受了来自更富裕国家的文化习惯后也迅速上升(Zimmet，Diabetes Care15(2)：232-247，1992)。
例如澳大利亚1995年有19％的成年人口肥胖(BMI＞30)。1995年的妇女比1980年平均体重多出4.8kg，男人多出3.6kg(AustralianInstitute of Health and Welfare，Heart，Stroke and Vasculardiseases，Australian facts.AIHW Cat.No.CVD 7 Canberra：AIHW andthe Heart Foundation of Australia，1999)。最近，1999-2000年进行的AusDiab研究显示，认为年龄介于25-64岁的65％男性和45％女性超重(de Looper and Bhatia，Australia′s Health Trends 2001.AustralianInstitute of Health and Welfare(AIHW)Cat.No.PHE 24.Canberra：AIHW，2001)。美国1991-1998的肥胖发生率也大幅上升，该时期从12％上升到18％的美国人(Mokdad等人，JAMA.282(16)： 1519-1522，1999)。
肥胖发生率高并日益上升总体上对个人及社会具有严重影响。肥胖是复杂的不均一性疾病，由于肥胖增加了许多其它代谢疾病、包括2型糖尿病和心血管疾病的危险，因而被认定是可预防性发病率和致死率的主要危险指标(Must等人，JAMA.282(16)：1523-1529，1999；Kopelman，Nature404：635-643，2000)。糖尿病的患病率伴随肥胖持续快速升高。据估计1995年澳大利亚有约700,000名糖尿病人，美国糖尿病的患病率从1990年的4.9％升高到1999年的6.9％(Mokdad，Diabetes Care 24(2)：412，2001)。在澳大利亚，保守估计1992-3年糖尿病及其它疾病相关的肥胖每年花费约AU$810百万(National Health and Medical Research Council，Acting on Australia′s weight：A strategy for the prevention ofoverweight and obesity.Canberra：National Health and MedicalResearch Council，1996)。在美国，国家健康访问调查中心(the NationalHealth Interview Survey，NHIS)估计1995年肥胖的经济耗费约US$990亿，从而占美国当年总健康费用的5.7％(Wolf和Colditz，Obes Res.6：97-106，1998)。
在双胞胎研究、领养研究以及基于群体的分析中特别揭示了肥胖病原学的遗传基础，提示遗传作用影响一般人群体重变化的25-80％(Bouchard，1994，同上；Kopelman等人，Jut J Obesity 18：188-191，1994；Ravussin，Metabolism 44(Suppl 3)：12-14，1995)。据认为基因决定个体体重的可能范围，环境则在某一特定时期影响个体在该范围内所处的位置(Bouchard，1994，同上)。然而，尽管大量研究深入到据认为与肥胖发病机理有关的基因，但意外的是，该领域的重大发现很少。此外，在各种群体组中进行基因组范围扫描，没有得到对肥胖具有主要影响的染色体区域的确切证明。
肥胖及2型糖尿病的病理生理学涉及许多器官/组织，特别关注下丘脑、胃和肝。长期公认下丘脑是调节能量摄取的关键脑区(Stellar，Psychol Rev 61：5-22，1954)，目前普遍接受下丘脑在能量体内稳态、整合并协调下丘脑产生和/或作用于下丘脑的大量因子中具有重要作用。已经研究了其中许多因子在能量平衡和体重调节中的作用，包括神经肽Y(neuropeptide Y)、促肾上腺皮质素释放激素(corticotropin-releasinghormone)、黑色素聚集激素(melanin-concentrating hormone)、瘦素(leptin)和胰岛素。已经提出，干扰下丘脑调节能量平衡的代谢途径的遗传变化，导致发生肥胖、进而糖尿病。因此，理解下丘脑调节动物代谢功能的重要步骤需要鉴定这些激素的靶标。该靶标可能是整个器官以及通过这些激素的存在来调节其表达的基因。
据认为胃在调节食物摄取的作用涉及两种信号类型：胃扩张程度以及胃肠壁化学受体的活化(Koopmans，Experimental studies on thecontrol of food intake.In：Handbook of Obesity，Eds.GA Bray，CBouchard，WPT James pp 273-312，1998)。肠是体内最大的内分泌器官，在餐后释放大量胃肠激素。一些例子有胃泌素(gastrin)、生长抑素(somatostatin)、胆囊收缩素(cholecystokinin)、胃抑制性多肽(gastricinhibitory polypeptide)和神经降压素(neurotensin)。尽管普遍同意胃提供了限制一餐中食物摄取的部分信号，但仍待确定该信号的性质及其如何传递到脑。最有可能通过神经或激素将有关胃扩张程度以及胃肠壁存在营养物的信息传递到脑。迄今鉴定的胃肠激素在调节食物摄取中的作用尚待大致确定。
肝在许多重要生理途径中也具有重要作用。它具有调节葡萄糖、氨基酸和脂肪代谢的主要作用。此外，肝是通过门静脉与大量摄取吸收的食物直接接触的唯一器官(除胃肠以外)，因此肝能够″感觉″或监控进入体内的营养物水平，特别是蛋白质和糖类的量。已经提出肝通过传递有关胃肠营养吸收和全身代谢变化的未知信号中继信息到脑，可能还具有摄食调节的作用(Russek，Nature 200：176，1963)。肝还通过调节诸如糖异生和糖原分解途径，而具有维持循环中葡萄糖浓度的重要作用。葡萄糖体内稳态的改变是葡萄糖耐量降低以及发生2型糖尿病的病理生理学的重要因素。
根据本发明，寻找特定脊椎动物组织或器官中在进食、再进食或禁食条件之间、或糖尿病与非糖尿病条件之间差异表达的遗传序列。鉴定在上述一种或两种条件下，至少于胃、肝和/或下丘脑中差异表达的新基因。根据本发明，本发明人已经分离了提示关联与疾病状态(例如但不限于肥胖、厌食、糖尿病或能量平衡)有关的一种或多种生物学功能的基因。
发明概述
贯穿本说明书，除非上下文需要，否则单词包含(comprise)或其变体(例如comprises或comprising)应当理解为是指包含所述成分或整体、或者成分或整体组，而不排除任何其它的成分或整体、或者成分或整体组。
根据序列识别编号(SEQ ID NO：)提及核苷酸和氨基酸序列。SEQ ID NOs：以编号对应于序列标识符<400>1(SEQ ID NO：1)、<400>2(SEQ ID NO：2)等。表1提供了序列标识符总览。序列表提供于权利要求书之后。
使用胃、下丘脑和肝组织的遗传物质分析，来鉴定与健康状态或生理条件(例如肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或代谢能量水平)有关的候选遗传序列。使用包含以色列沙鼠(Israeli Sand Rat，(Psammomysobesus))的动物模型。使用3组动物，根据代谢表型命名为以下A、B和C组：
A组：消瘦动物(血糖正常；胰岛素正常)；
B组：肥胖、非糖尿病动物(血糖正常；胰岛素过多)；以及
C组：肥胖、糖尿病动物(血糖过多；胰岛素过多)。
使用的技术包括胃、肝或下丘脑组织mRNA的差异显示PCR分析、抑制消减杂交(SSH)以及扩增片段长度多态性分析，来鉴定在进食(fed)、再进食(refed)和禁食(fasted)哺乳动物、或糖尿病和非糖尿病哺乳动物中差异表达的遗传序列。发现以色列沙鼠(Psammomys obesus)特别适用于这种分析。在一个优选实施方案中，鉴定了7条差异表达序列，此处命名为AGT-119[SEQ ID NO：1]、AGT-120[SEQ ID NO：2]、AGT-121[SEQID NO：3]、AGT-122[SEQ ID NO：5]、AGT-422[SEQ ID NO：6]、AGT-123[SEQ ID NO：7]以及AGT-504[SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9]。SEQ ID NO：9是AGT-504的基因组形式，也如SEQ ID NO：8所示。
使用差异显示PCR最初在胃组织中检测到AGT-119，与禁食或再进食动物相比，它在进食动物中的表达升高。使用差异显示PCR最初在胃组织中检测到AGT-120，与禁食或再进食动物相比它在进食动物中的表达升高。使用差异显示PCR最初在下丘脑中鉴定出AGT-121，当根据基因型分离时，与进食动物相比，它在禁食的糖尿病、非糖尿病以及消瘦动物中的表达水平升高。使用差异显示PCR最初在肝中鉴定出AGT-122，显示与进食的糖尿病或非糖尿病动物相比在禁食动物中的表达水平升高。使用抑制消减杂交在肝组织中鉴定出AGT-422，与进食的糖尿病动物相比它在进食的消瘦动物中的表达水平升高，与禁食的消瘦动物相比进食的消瘦动物升高，进食的非糖尿病动物高于禁食的非糖尿病动物，进食的糖尿病动物高于禁食的糖尿病动物。使用差异显示PCR在下丘脑组织中鉴定出AGT-123，发现它在禁食的消瘦、非糖尿病动物和糖尿病动物中的表达高于进食动物。使用扩增片段长度多态性分析在基因组DNA中鉴定出AGT-504，它在糖尿病动物肝组织中的表达高于消瘦或非糖尿病动物。表1提供了AGT基因总览。
表1
差异表达基因总览
| 基因 | SEQ ID NO： | 组织 | 特征 | 检测方法 |
| AGT-119 | 1 | 胃 | 在进食动物中的表达高于禁食或再进食动物 | 差异显示PCR |
| AGT-120 | 2 | 胃 | 在进食动物中的表达高于禁食或再进食动物 | 差异显示PCR |
| AGT-121 | 3和4 | 下丘脑 | 当根据基因型分离时，在禁食的糖尿病、非糖尿病以及消瘦动物中的表达高于进食动物 | 差异显示PCR |
| AGT-122 | 5 | 肝 | 在禁食动物中的表达高于进食的糖尿病和非糖尿病动物 | 差异显示PCR |
| AGT-422 | 6 | 肝 | 在进食的消瘦动物中的表达高于进食的糖尿病动物，进食的消瘦动物高于禁食的消瘦动物，进食的非糖尿病动物高于禁食的非糖尿病动物，进食的糖尿病动物高于禁食的糖尿病动物 | 抑制消减杂交(代表性差异分析) |
| AGT-123 | 7 | 下丘脑 | 在禁食的消瘦、非糖尿病和糖尿病动物中的表达高于进食动物 | 差异显示PCR |
| AGT-504 | 8(基因组)和9(cDNA) | 肝 | 在糖尿病动物中的表达高于消瘦或非糖尿病动物 | 扩增片段长度多态性分析 |
因此，本发明提供了包含编码表达产物或其衍生物、同系物、类似物或模拟物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子，其中所述核酸分子在进食或不进食或糖尿病或非糖尿病条件下，于胃、肝或下丘脑一种或多种组织中差异表达。
本发明另外提供了包含编码表达产物或其衍生物、同系物、类似物或模拟物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子，其中该核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8或SEQ IDNO：9所示、或是与全部或部分的SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ IDNO：8或SEQ ID NO：9具有至少约30％相似性的核苷酸序列、和/或能够在42℃低严谨性条件下与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9中一种或多种或其互补形式杂交，其中该核酸分子在进食或不进食或糖尿病或非糖尿病条件下，于胃、肝或下丘脑组织一种或多种中差异表达。
本发明还提供了分离的表达产物或其衍生物、同系物、类似物或模拟物，该表达产物由在进食或不进食或糖尿病或非糖尿病条件下，于胃、肝或下丘脑一种或多种组织中差异表达的核苷酸序列编码。
更特别而言，本发明涉及分离的表达产物或其衍生物、同系物、类似物或模拟物，其中该表达产物由基本上如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ IDNO：8或SEQ ID NO：9所示、或是与全部或部分的SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ IDNO：8或SEQ ID NO：9具有至少约30％相似性的核苷酸序列、和/或能够在42℃低严谨性条件下与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9的一种或多种或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
本发明优选的遗传序列是指此处AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504编码的表达产物分别是指此处AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。表达产物可能是RNA(例如mRNA)或蛋白质。表达产物是RNA时，本发明扩展到与其有关的RNA相关分子，例如其RNAi或内含子或外显子序列。
本发明另一方面涉及一种组合物，其包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物或模拟物或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的激动剂或拮抗剂连同一种或多种药物可接受的载体和/或稀释剂。
本发明另一方面包括治疗受试者的方法，其包含在足以有效治疗的时间和条件下，给予该受试者治疗有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物或模拟物或其编码遗传序列、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504活性或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504基因表达的激动剂或拮抗剂。
根据本发明这一方面以及其它方面，此处包括的治疗包括但不限于肥胖、厌食、特征维持、能量失衡和糖尿病。可能通过给予药物组合物或通过基因治疗给予遗传序列进行治疗。治疗预期用于人类受试者以及动物，例如家畜工业的重要动物。
本发明更深一方面涉及用于监控或诊断诸如但不限于肥胖、厌食、体重维持、能量失衡和/或糖尿病等疾病的诊断剂，所述诊断剂选自AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物或模拟物的抗体以及包含特别用于PCR、杂交、RFLP分析或AFLP分析的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504相关的核苷酸链或能够与其退火的遗传序列。
表2提供了本说明书通篇所用序列标识符的总览。
表2
| SEQ ID NO： | 描述 |
| 1 | AGT-119核苷酸序列 |
| 2 | AGT-120核苷酸序列 |
| 3 | AGT-121核苷酸序列 |
| 4 | SEQ ID NO：3对应氨基酸序列 |
| 5 | AGT-122核苷酸序列 |
| 6 | AGT-422核苷酸序列 |
| 7 | AGT-123核苷酸序列 |
| 8 | AGT-504(基因组)核苷酸序列 |
| 9 | AGT-504(cDNA)核苷酸序列 |
| 10 | 引物 |
| 11 | 引物 |
| 12 | AGT-119(组合1)正向引物 |
| 13 | AGT-119(组合1)反向引物 |
| 14 | AGT-119(组合2)正向引物 |
| 15 | AGT-119(组合2)反向引物 |
| 16 | AGT-120正向引物 |
| 17 | AGT-120反向引物 |
| 18 | AGT-121正向(插入)引物 |
| 19 | AGT-121正向(缺失)引物 |
| 20 | AGT-121反向引物 |
| 21 | AGT-122正向引物 |
| 22 | AGT-122反向引物 |
| 23 | AGT-422正向引物 |
| 24 | AGT-422反向引物 |
| SEQ ID NO： | 描述 |
| 25 | AGT-123正向引物 |
| 26 | AGT-123反向引物 |
| 27 | AGT-504正向引物 |
| 28 | AGT-504反向引物 |
| 29 | β-肌动蛋白正向引物 |
| 30 | β-肌动蛋白反向引物 |
| 31 | β-肌动蛋白探针 |
| 32 | 亲环蛋白(Cyclophilin)正向引物 |
| 33 | 亲环蛋白反向引物 |
| 34 | 亲环蛋白探针 |
附图简述
图1是显示进食、禁食和再进食的以色列沙鼠(Psammomys obesus)中AGT-119胃基因的表达的图形。
图2是显示进食、禁食和再进食的以色列沙鼠中AGT-120胃基因的表达的图形。
图3是显示AGT-121表达的组织分布的图形。
图4是显示(1)心；(2)脑；(3)胎盘；(4)肺；(5)肝；(6)骨骼肌；(7)肾以及(8)胰脏中AGT-121表达的Northern分析的照片。
图5是显示能量受限的下丘脑中AGT-121的表达的图形。
图6是显示AGT-121随体重水平的表达的图形。
图7是显示AGT-121随葡萄糖水平变化的表达的图形。
图8是显示AGT-121随scap脂肪的表达的图形。
图9是显示A、B和C组进食和禁食的以色列沙鼠中AGT-122肝基因的表达的图形。
图10是显示进食和禁食的以色列沙鼠中AGT-122肝基因的表达(混合数据)的图形。
图11是显示进食的以色列沙鼠中AGT-122肝基因表达与体重的关系图。
图12是显示A、B和C组进食和禁食的以色列沙鼠中AGT-422肝基因的表达数据图。
图13是显示所有进食和禁食的以色列沙鼠中AGT-422肝基因的表达(混合数据)图。
图14是显示A、B和C组进食和禁食的以色列沙鼠中AGT-123肝基因的表达图。
图15是显示A、B和C组以色列沙鼠中AGT-504肝基因的表达图。
优选实施方案详述
本发明部分基于与肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或代谢能量水平调节特别相关的新基因的鉴定。在进食、再进食与禁食的哺乳动物、或糖尿病与非糖尿病的哺乳动物中差异筛选胃、肝或下丘脑组织一种或多种的mRNA以后，鉴定了这些基因。选择胃、肝或下丘脑并非意在暗示其它组织中不存在差异表达。
因此，本发明一方面提供了包含编码表达产物或其衍生物、同系物、类似物或模拟物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子，其中所述核酸分子在进食(或再进食)或不进食、或糖尿病或非糖尿病条件下，于胃、肝或下丘脑组织一种或多种中差异表达。
术语″差异表达″使用其最广义，包括一种组织相比另一组织、或同一组织在不同条件下的表达产物水平提高，例如mRNA、或蛋白质、或次级产物例如cDNA。不同条件的例子包括在进食、再进食和禁食动物或糖尿病和非糖尿病动物的组织中差异表达。利用包括聚合酶链式反应(PCR)如实时PCR在内的技术，可以方便测定差异表达。其它技术包括抑制消减杂交(SSH)和扩增片段长度多态性(AFLP)分析。
可以利用动物模型方便地研究不同条件下动物组织中基因表达的差异。特别而言，本发明使用饮食诱导肥胖和2型糖尿病的Psainmoinysobesus(以色列沙鼠)动物模型来举例说明。在其天生的沙漠栖息地，活跃的生活方式和盐生灌木食物确保其保持消瘦和血糖正常(Shafrir和Gutman，J.Basic Clin.Physiol.Pharm.4：83-99，1993)。但在给予随意(ad libitum chow)食物的实验室环境中(其中许多其它动物种类保持健康)，观察到许多病理生理学反应(Barnett等人，Diabetologia 37：671-676，1994a；Barnett等人，Int.J.Obesity 18：789-794，1994b；Barnett等人，Diabete Nutr.Metab.8：42-47，1995)。至16周龄，半数以上的动物变得肥胖，约三分之一形成2型糖尿病。只有多食动物继续形成高血糖症，提示过度能量摄取在以色列沙鼠肥胖和2型糖尿病中的重要性(Collier等人，Ann.New York Acad.Sci.827：50-63，1997a；Walder等人，Obesity Res.5：193-200，1997a)。发现的其它表型包括胰岛素过多、血脂障碍以及葡萄糖耐量降低(Collier等人，1997a，同上；Collier等人，Exp.Clin.Endocrinol.Diabetes 105：36-37，1997b)。以色列沙鼠显示的各种体重、血糖及胰岛素水平形成了连续曲线，与在人群中发现的模式极其类似，包括血糖和胰岛素之间的倒U型关系，称为″胰腺Starling′s曲线″(Barnett等人，1994a，同上)。以色列沙鼠表型反应的异质性使其成为研究肥胖和2型糖尿病病原学和病理生理学的理想模型。
将动物方便地分为3组，命名为A、B和C组。
A组：动物消瘦；
B组：动物肥胖、非糖尿病；以及
C组：动物肥胖、糖尿病。
根据本发明，在处于不同饲养方式(即进食、再进食或禁食)、或糖尿病或非糖尿病条件下的以色列沙鼠的胃、肝或下丘脑组织中，鉴定了许多差异表达的遗传序列。
本发明另一方面提供了包含编码表达产物或其衍生物、同系物、类似物或模拟物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：1(AGT-119)或SEQ ID NO：2(AGT-120)或SEQ ID NO：3(AGT-121)或SEQ ID NO：5(AGT-122)或SEQ IDNO：6(AGT-422)或SEQ ID NO：7(AGT-123)或SEQ ID NO：8(AGT-504基因组)或SEQ ID NO：9(AGT-504 cDNA)所示、或是与全部或部分的SEQ IDNO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9具有至少约30％相似性的核苷酸序列、和/或能够在42℃低严谨性条件下与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9或其互补形式的一种或多种杂交，并且其中该核酸分子在进食或不进食或糖尿病或非糖尿病条件下，于胃、肝或下丘脑一种或多种组织中差异表达。
本发明也包括较高的相似性，例如大于约40％或50％或60％或70％或80％或90％或95％或96％或97％或98％或99％或以上。
表达产物包括RNA分子例如mRNA转录本以及蛋白质。某些基因是非蛋白质编码基因，产生mRNA或其它RNA分子，与调节RNA:DNA、RNA:RNA或RNA:蛋白质的相互作用有关。RNA(例如mRNA)可能直接、或通过其它分子例如RNAi的诱导、或通过剪接事件的产物介导(例如外显子或内含子)而起作用。其它基因编码mRNA转录本，然后翻译成蛋白质。蛋白质包括多肽。差异表达的核酸分子因而可能只编码mRNA，或者也编码蛋白质。mRNA和蛋白质是″表达产物″的形式。
此处提及相似性一般在至少15个连续或基本连续核苷酸比较的水平。然而，通过最佳比对后比较总体或完整序列来确定相似性，则特别方便。
此处所用术语″相似性″包括所比较的序列在核苷酸水平上的完全一致性。在核苷酸水平上具有不一致性时，″相似性″包括可能编码不同氨基酸、但在结构、功能、生物化学和/或构象水平上仍然彼此相关的序列差异。特别优选的实施方案中，在一致性而非相似性水平上进行核苷酸序列比较。
用于描述两个或多个多核苷酸之间序列关系的术语包括″参考序列″、″比较窗口″、″序列相似性″、″序列一致性″、″序列相似性百分比″、″序列一致性百分比″、″基本相似″和″基本一致″。″参考序列″为长度至少12个、但一般15-18个、通常至少25个或以上、例如30个单体单位。由于两个多核苷酸可能各自包含(1)两个多核苷酸之间的相似序列(即只是完整多核苷酸序列的一部分)，以及(2)两个多核苷酸之间的差异序列，一般通过在″比较窗口″比较两个多核苷酸序列来鉴别和比较局部区域的序列相似性，进行两个(或多个)多核苷酸之间的序列比较。″比较窗口″是指与参考序列比较的、一般12个连续残基的概念性片段。比较窗口与参考序列(其中不包含添加或缺失)相比，可能包含大约20％或更少的添加或缺失(即空位)，用于两个序列间的最佳比对。通过计算机化执行算法(Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group，575 Science Drive Madison，WI，USA)，或者通过所选任何方法得到校验和最佳比对(即在比较窗口产生最高同源性百分比)，进行序列的最佳比对，用于排列比较窗口。也可以参考BLAST程序家族，例如Altschul等人(Nucl.Acids Res.25：3389，1997)公开的程序。可以在Ausubel等人的19.3单元找到序列分析的详细论述(″Current Protocols in Molecular Biology″John Wiley & SonsInc，Chapter 15，1994-1998)。可能使用多种其它算法比较核酸和氨基酸序列，例如但不限于PILEUP、CLUSTALW、SEQUENCHER或VectorNTI。
此处所用术语″序列相似性″和″序列一致性″是指序列在比较窗口中基于核苷酸对核苷酸的一致程度、或功能或结构上相似的程度。因此，例如″序列一致性百分比″的计算，是在比较窗口中比较两个最佳比对的序列，确定两个序列中存在的相同核酸碱基(例如A、T、C、G、I)的位点数，得到匹配位点数，将匹配位点数除以比较窗口中的位点总数(即窗口大小)，结果乘以100，得到序列一致性百分比。为了本发明目的，″序列一致性″应当理解为是指通过DNASIS计算机程序(windows 2.5版；得自Hitachi Software engineering Co.，Ltd.，South San Francisco，California，USA)、采用软件所附参考手册中使用的标准缺省值计算的″匹配百分比″。类似说明适用于有关序列相似性。
此处提及的低严谨性包括并涵盖至少约0-15％v/v甲酰胺和至少约1-2M盐用于杂交以及至少约1-2M盐用于洗涤条件。一般低严谨性为约25-30℃至约42℃。温度可能改变，较高温度用于取代甲酰胺和/或给出另外的严谨性条件。必要时可应用另外的严谨性条件，例如中严谨性，其包括并涵盖至少约16％-30％v/v甲酰胺和至少约0.5M-0.9M盐用于杂交以及至少约0.5M-0.9M盐用于洗涤条件，或高严谨性，其包括并涵盖至少约31％-50％v/v甲酰胺和至少约0.01M-0.15M盐用于杂交以及至少约0.01M-0.15M盐用于洗涤条件。一般在Tm＝69.3+0.41(G+C)％进行洗涤(Marmur和Doty，J.Mol.Biol.5：109，1962)。但双链DNA的错配碱基对数目每增加1％，其Tm降低1℃(Bonner和Laskey，Eur.J.Biochena.46：83，1974)。在这些杂交条件中，甲酰胺是可选的。因此，如下确定特别优选的严谨性水平：低严谨性为6xSSC缓冲液、0.1％w/v SDS、25-42℃；中严谨性为2xSSC缓冲液、0.1％w/v SDS、温度20℃-65℃；高严谨性为0.1xSSC缓冲液、0.1％w/vSDS、温度至少65℃。
本发明的核苷酸序列或氨基酸序列可能完全对应于天然存在的基因(或相应cDNA)、或蛋白质、或其它表达产物的相同序列，或可能携带一个或多个核苷酸或氨基酸的替换、添加和/或缺失。SEQ ID NO：1(AGT-119)、SEQ ID NO：2(AGT-120)和SEQ ID NO：3(AGT-121)或SEQ IDNO：5(AGT-122)或SEQ ID NO：6(AGT-422)或SEQ ID NO：7(AGT-123)或SEQ ID NO：8(AGT-504基因组)或SEQ ID NO：9(AGT-504 cDNA)所示核苷酸序列对应于括号内所指的新基因。相应的表达产物为AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。适当时，此处提及的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504包括涉及的基因组基因或cDNA以及任何天然存在或诱导的衍生物。例如，基因组形式的AGT-504如SEQ ID NO：8所示。除核苷酸序列的替换、缺失和/或添加以外，本发明另外包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504对应核苷酸序列的突变、片段、局部或部分。
本发明另一方面提供了包含编码表达产物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或类似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：1(AGT-119)所示、或其衍生物、同系物或模拟物、或与SEQ ID NO：1的全部或部分具有至少约30％相似性，或者能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：1或其互补形式杂交的核苷酸序列。
本发明另一方面提供了包含编码表达产物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或类似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：2(AGT-120)所示、或其衍生物、同系物或模拟物、或与SEQ ID NO：2的全部或部分具有至少约30％相似性，或者能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：2或其互补形式杂交的核苷酸序列。
本发明再一方面提供了包含编码表达产物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或类似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：3(AGT-121)所示、或其衍生物、同系物或模拟物、或与SEQ ID NO：3的全部或部分具有至少约30％相似性，或者能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：3或其互补形式杂交的核苷酸序列。
本发明再一方面提供了包含编码表达产物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或类似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：5(AGT-122)所示、或其衍生物、同系物或模拟物、或与SEQ ID NO：5的全部或部分具有至少约30％相似性，或者能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：5或其互补形式杂交的核苷酸序列。
本发明再一方面提供了包含编码表达产物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或类似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：6(AGT-422)所示、或其衍生物、同系物或模拟物、或与SEQ ID NO：6的全部或部分具有至少约30％相似性，或者能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：6或其互补形式杂交的核苷酸序列。
本发明另一方面提供了包含编码表达产物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或类似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：7(AGT-123)所示、或其衍生物、同系物或模拟物、或与SEQ ID NO：7的全部或部分具有至少约30％相似性，或者能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：7或其互补形式杂交的核苷酸序列。
本发明另一方面提供了包含编码表达产物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或类似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：8(AGT-504基因组)所示、或其衍生物、同系物或模拟物、或与SEQ ID NO：8的全部或部分具有至少约30％相似性，或者能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：8或其互补形式杂交的核苷酸序列。
本发明另一方面提供了包含编码表达产物的核苷酸序列、或与该编码序列互补的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或类似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO：9(AGT-504 cDNA)所示、或其衍生物、同系物或模拟物、或与SEQ ID NO：9的全部或部分具有至少约30％相似性，或者能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：9或其互补形式杂交的核苷酸序列。
特别测定了AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的表达模式，以表明与肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或能量代谢的一种或多种的调节有关。除了AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504在进食与禁食、或糖尿病与非糖尿病动物的胃、肝或下丘脑一种或多种组织中差异表达之外，这些基因也可能在其它组织中表达，包括但不限于脑、肌肉、脂肪组织、胰腺和胃肠道。编码每种AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504的核酸分子优选是DNA，例如cDNA序列或基因组DNA。基因组序列也可能包含外显子和内含子。基因组序列也可能包括启动子区或其它调节区。
同系物被认为是与AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504之一具有相同或大于30％相似性和/或具有类似功能的其它动物种类的基因。此处举例说明上述来自以色列沙鼠的胃、肝或下丘脑的基因。然而本发明扩展到根据核苷酸序列和/或功能确定的、来自人、灵长类、家畜类动物(例如牛、羊、猪、马、猴)、实验室实验动物(例如小鼠、豚鼠、仓鼠、兔)、伴侣动物(例如猫、狗)以及捕获的野生动物(例如啮齿动物、狐狸、鹿、袋鼠)的同源基因。
本发明的核酸、特别是AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504及其衍生物和同系物可能处于分离或纯化形式和/或连接到载体例如表达载体中。可能在真核细胞系(例如哺乳动物、昆虫或酵母细胞)或原核细胞(例如大肠杆菌)或两者中表达。″分离的″是指经历至少一次纯化步骤的核酸分子，例如可方便定义为通过分子量、编码活性、核苷酸序列、碱基组成或其它方便方法测定，相对于其它组分，包含至少约10％目的核酸分子、优选至少约20％、更优选至少约30％、再优选至少约40-50％、另优选至少约60-70％、再优选至少约80-90％或更多的目的核酸分子的组合物。在一个优选实施方案中，也可能认为本发明的核酸分子是生物纯。核酸分子可能连接到能够在原核细胞(例如大肠杆菌)或真核细胞(例如酵母细胞、真菌细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞或植物细胞)中表达的表达载体。核酸分子也可能与编码另一实体例如信号肽的核酸分子连接或融合或结合。也可能包含在3′或5′端部分、或3′和5′两端部分与其融合、连接或结合的另外的核苷酸序列信息。核酸分子也可能是部分载体例如表达载体。
本发明核酸分子的衍生物包括寡核苷酸、PCR引物、反义分子、适用于共同抑制的分子以及融合核酸分子。本发明也包括针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其mRNA的核酶和DNA酶。能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ IDNO：8或SEQ ID NO：9或其互补形式的一种或多种杂交的核苷酸序列方便地包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的衍生物和同系物。
衍生物包括来自天然、合成或重组来源包括融合核酸分子的片段、局部、部分、突变体、变体和模拟物。衍生物可能来源于核苷酸的插入、缺失或替换。
本发明另一方面提供了分离的表达产物或其衍生物、同系物、类似物或模拟物，它在肥胖动物中与消瘦动物相比、或进食(包括再进食)动物与禁食动物相比、或糖尿病与非糖尿病状态动物相比，于胃、肝或下丘脑一种或多种组织中产生的量较多或较少。
上述表达产物可能是RNA或蛋白质。产物是蛋白质的情况下，衍生物包括氨基酸插入性衍生物例如氨基和/或羧基端融合以及单个或多个氨基酸的序列内插入。插入性氨基酸序列变体是将一种或多种氨基酸残基引入蛋白质的预定位点，尽管通过适当筛选所得产物也可能随机插入。缺失性变体的特征在于从序列中去除了一个或多个氨基酸。替换性氨基酸变体是去除序列中至少一个残基并在其位置插入一个不同残基。替换性氨基酸变体的例子有保守性氨基酸替换。保守性氨基酸替换一般包括下列组的替换：甘氨酸和丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；丝氨酸和苏氨酸；赖氨酸和精氨酸；苯丙氨酸和酪氨酸。添加氨基酸序列包括与其它肽、多肽或蛋白质融合。
表达产物AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504蛋白质形式的化学和功能性等价物应当理解为显示这些分子的任何一种或多种功能活性的分子，并可能来源于任何来源，例如化学合成、或通过筛选方法鉴定，例如天然产物筛选或筛选化学文库。
衍生物包括具有特定表位的片段或融合肽、多肽或其它蛋白质性或非蛋白质性分子的完整蛋白质部分。
此处提及AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504包括提及分离的或纯化的天然存在的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504及其任何衍生物、同系物、类似物和模拟物。衍生物包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的部分、片段和局部，若表达产物是蛋白质，包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的单个和多个氨基酸替换、缺失和/或添加。AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504的衍生物方便地包括于能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8或SEQ IDNO：9杂交的核苷酸序列所编码的分子中。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的其它衍生物包括化学类似物。此处涵盖的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的类似物包括但不限于侧链修饰、引入非天然氨基酸和/或其肽、多肽或蛋白质合成中的衍生物，以及使用交联剂及其它方法给予蛋白质性分子或其类似物构象限制。
本发明涵盖的侧链修饰的例子包括氨基修饰，例如通过与乙醛反应然后经NaBH4还原进行还原性烷基化；利用methylacetimidate氨基化；利用乙酸酐酰化；利用氰酸酯进行氨基的氨甲酰化；利用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)进行氨基的三硝基苄基化；利用琥珀酸酐和四氢邻苯二甲酸酐进行氨基的酰化；利用吡哆醛-5-磷酸然后经NaBH4还原进行赖氨酸的吡醇羟乙酯化。
可能利用试剂例如2，3-丁二酮、苯乙二醛和乙二醛形成杂环缩合产物来修饰精氨酸残基的胍基。可能通过形成O-acylisourea进行碳二亚胺活化、然后衍生为例如对应的酰胺来修饰羧基。
可能利用许多方法修饰Sulphydryl基，例如利用碘乙酸或碘乙酰胺进行羧甲基化；过氧甲酸氧化为半胱磺酸；与其它巯基化合物形成混合的二硫化物；与马来酰亚胺、马来酸酐或其它取代的马来酰亚胺反应；使用4-氯汞苯甲酸、4-氯汞苯磺酸、氯化苯汞、2-氯汞-4-硝基酚及其它汞制剂形成汞衍生物；在碱性pH下利用氰酸酯进行氨甲酰化。
色氨酸残基的修饰可能通过例如利用N-溴代琥珀酰亚胺氧化、或利用2-羟-5-硝苄基溴或sulphenyl halides进行吲哚环的烷基化。另一方面，可能通过利用四硝基甲烷硝化形成3-硝基酪氨酸衍生物而改变酪氨酸。
可能通过利用吲哚乙酸衍生物进行烷基化、或利用焦碳酸二乙酯进行N-乙酯基化进行组氨酸咪唑环的修饰。
在肽合成过程中引入非天然氨基酸及衍生物的例子包括但不限于使用正亮氨酸、4-氨基丁酸、4-氨基-3-羟基-5-苯戊酸、6-氨基己酸、t-丁基甘氨酸、正缬氨酸、苯基甘氨酸、鸟氨酸、肌氨酸、4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸、2-噻吩基丙氨酸和/或氨基酸的D-异构体。此处包括的非天然氨基酸列表如表3所示。
表3
非常见氨基酸代码
非常见氨基酸 代码 非常见氨基酸 代码
α-氨基丁酸 Abu L-N-甲基丙氨酸 Nmala
α-氨基-α-甲基丁酸酯 Mgabu L-N-甲基精氨酸 Nmarg
氨基环丙烷羧酸酯 Cpro L-N-甲基天冬酰胺 Nmasn
L-N-甲基天冬氨酸 Nmasp
氨基异丁酸 Aib L-N-甲基半胱氨酸 Nmcys
氨基正冰片基羧酸酯 Norb L-N-甲基谷氨酰胺 Nmgln
L-N-甲基戊二酸 Nmglu
丙氨酸环己酯 Chexa L-N甲基组氨酸 Nmhis
丙氨酸环戊酯 Cpen L-N-甲基异亮氨酸 Nmile
D-丙氨酸 Dal L-N-甲基亮氨酸 Nmleu
D-精氨酸 Darg L-N-甲基赖氨酸 Nmlys
D-天冬氨酸 Dasp L-N-甲基甲硫氨酸 Nmmet
D-半胱氨酸 Dcys L-N-甲基正亮氨酸 Nmnle
D-谷氨酰胺 Dgln L-N-甲基正缬氨酸 Nmnva
D-谷氨酸 Dglu L-N-甲基鸟氨酸 Nmorn
D-组氨酸 Dhis L-N-甲基苯丙氨酸 Nmphe
D-异亮氨酸 Dile L-N-甲基脯氨酸 Nmpro
D-亮氨酸 Dieu L-N-甲基丝氨酸 Nmser
D-赖氨酸 Dlys L-N-甲基苏氨酸 Nmtrr
D-甲硫氨酸 Dmet L-N-甲基色氨酸 Nmtrp
D-鸟氨酸 Dorn L-N-甲基酪氨酸 Nmtyr
D-苯丙氨酸 Dphe L-N-甲基缬氨酸 Nmval
D-脯氨酸 Dpro L-N-甲基乙基甘氨酸 Nmetg
D-丝氨酸 Dser L-N-甲基-t-丁基甘氨酸 Nmtbug
D-苏氨酸 Dthr L-正亮氨酸 Nle
D-色氨酸 Dtrp L-正缬氨酸 Nva
D-酪氨酸 Dtyr α-甲基-氨基异丁酸 Maib
D-缬氨酸 Dval α-甲基-γ-氨基丁酸 Mgabu
D-α-甲基丙氨酸 Dmala α-甲基环己基丙氨酸 Mchexa
D-a-甲基精氨酸 Dmarg α-甲基环戊基丙氨酸 Mcpen
D-α-甲基天冬酰胺 Dmasn α-甲基-α-萘基丙氨酸 Manap
D-α-甲基天冬氨酸 Dmasp α-甲基青霉胺 Mpen
D-α-甲基半胱氨酸 Dmcys N-(4-氨基丁基)甘氨酸 Nglu
D-α-甲基谷氨酰胺 Dmgln N-(2-氨基乙基)甘氨酸 Naeg
D-α-甲基组氨酸 Dmhis N-(3-氨基丙基)甘氨酸 Norn
D-α-甲基异亮氨酸 Dmile N-氨基-α-甲基丁酸 Nmaabu
D-α-甲基亮氨酸 Dmleu α-萘基丙氨酸 Anap
D-α-甲基赖氨酸 Dmlys N-苄基甘氨酸 Nphe
D-α-甲基甲硫氨酸 Dmmet N-(2-氨甲酰乙基)甘氨酸 Ngln
D-α-甲基鸟氨酸 Dmorn N-(氨甲酰甲基)甘氨酸 Nasn
D-α-甲基苯丙氨酸 Dmphe N-(2-羧乙基)甘氨酸 Nglu
D-α-甲基脯氨酸 Dmpro N-(羧甲基)甘氨酸 Nasp
D-α-甲基丝氨酸 Dmser N-环丁基甘氨酸 Ncbut
D-α-甲基苏氨酸 Dmthr N-环庚基甘氨酸 Nchep
D-α-甲基色氨酸 Dmtrp N-环己基甘氨酸 Nchex
D-α-甲基酪氨酸 Dmty N-环癸基甘氨酸 Ncdec
D-α-甲基缬氨酸 Dmval N-环十二烷基甘氨酸 Nedod
D-N-甲基丙氨酸 Dnmala N-环辛基甘氨酸 Ncoct
D-N-甲基精氨酸 Dnmarg N-环丙酯基甘氨酸 Ncpro
D-N-甲基天冬酰胺 Dnmasn N-环十一烷基基甘氨酸 Ncund
D-N-甲基天冬氨酸 Dnmasp N-(2，2-联苯乙基)甘氨酸 Nbhm
D-N-甲基半胱氨酸 Dnmcys N-(3，3-联苯丙基)甘氨酸 Nbhe
D-N-甲基谷氨酰胺 Dnmgln N-(3-胍基丙基)甘氨酸 Narg
D-N-甲基谷氨酸 Dnmglu N-(1-羟乙基)甘氨酸 Nthr
D-N-甲基组氨酸 Dnmhis N-(羟乙基)甘氨酸 Nser
D-N-甲基异亮氨酸 Dnmile N-(咪唑乙基)甘氨酸 Nhis
D-N-甲基亮氨酸 Dnmleu N-(3-吲哚乙基)甘氨酸 Nhtrp
D-N-甲基赖氨酸 Dnmlys N-甲基-γ-氨基丁酸 Nmgabu
N-甲基环己基甘氨酸 Nmchexa D-N-甲基甲硫氨酸 Dnmmet
D-N-甲基鸟氨酸 Dnmorn N-甲基环戊基甘氨酸 Nmcpen
N-甲基甘氨酸 Nala D-N-甲基苯丙氨酸 Dnmphe
N-甲基氨基异丁酸 Nmaib D-N-甲基脯氨酸 Dnmpro
N-(1-甲基丙基)甘氨酸 Nile D-N-甲基丝氨酸 Dnmser
N-(2-甲基丙基)甘氨酸 Nleu D-N-甲基苏氨酸 Dmnthr
D-N-甲基色氨酸 Dnmtrp N-(1-甲基乙基)甘氨酸 Nval
D-N-甲基酪氨酸 Dnmtyr N-甲基α-萘基丙氨酸 Nmanap
D-N-甲基缬氨酸 Dnmval N-甲基青霉胺 Nmpen
γ-氨基丁酸 Gabu N-(p-羟苯基)甘氨酸 Nhtyr
L-t-丁基甘氨酸 Tbug N-(硫甲基)甘氨酸 Ncys
L-乙基甘氨酸 Etg 青霉胺 Pen
L-同型苯丙氨酸 Hphe L-α-甲基丙氨酸 Mala
L-α-甲基精氨酸 Marg L-α-甲基天冬酰胺 Masn
L-α-甲基天冬氨酸 Masp L-α-甲基-t-丁基甘氨酸 Mtbug
L-α-甲基半胱氨酸 Mcys L-甲基乙基甘氨酸 Metg
L-α-甲基谷氨酰胺 Mgln L-α-甲基谷氨酸 Mglu
L-α-甲基组氨酸 Mhis L-α-甲基同型苯丙氨酸 Mhphe
L-α-甲基异亮氨酸 Mile N-(2-甲基硫乙基)甘氨酸 Nmet
L-α-甲基亮氨酸 Mleu L-α-甲基赖氨酸 Mlys
L-α-甲基甲硫氨酸 Mmet L-α-甲基正亮氨酸 Mnle
L-α-甲基正缬氨酸 Mnva L-α-甲基鸟氨酸 Mom
L-α-甲基苯丙氨酸 Mphe L-α-甲基脯氨酸 Mpro
L-α-甲基丝氨酸 Mser L-α-甲基苏氨酸 Mthr
L-α-甲基色氨酸 Mtrp L-α-甲基酪氨酸 Mtyr
L-α-甲基缬氨酸 Mval L-N-甲基同型苯丙氨酸 Nmhphe
N-(N-(2，2-联苯乙基) Nnbhm N-(N-(3.3-联苯丙基)氨甲 Nnbhe
氨甲酰甲基)甘氨酸 酰甲基)甘氨酸
1-羧基-1-(2，2-联苯-Nmbc
乙氨基)环丙烷
可以使用交联剂，例如，为稳定3D构象，使用同源双功能交联剂例如具有(CH2)n(n＝1-6)间隔基团的双功能亚胺酯、戊二醛、N-羟基琥珀酰亚胺酯以及通常包含氨基反应性基团(例如N-羟基琥珀酰亚胺)以及另一基团特异反应性基团(例如maleimido或二硫基团(SH)或碳二亚胺(COOH))的异源双功能试剂。此外，可以对肽进行构象限制，例如通过掺入Cα和Nα-甲基氨基酸、在氨基酸的Cα和Cβ原子之间引入双键以及通过引入共价键形成环肽或类似物，例如在N和C端之间、两条侧链之间或侧链和N或C端之间形成酰氨键。
所有这些修饰也可能有益于稳定AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504分子，用于体内给药方案或诊断目的。
如上所述，表达产物可能是RNA或蛋白质。
术语″蛋白质″应当理解为包括肽、多肽和蛋白质。蛋白质可能糖基化或非糖基化和/或可能包含许多融合、连接、结合或联合到蛋白质的其它分子，例如氨基酸、酯类、糖类或其它肽、多肽或蛋白质。此处提及的″蛋白质″包括包含氨基酸序列的蛋白质以及结合其它分子例如氨基酸、酯类、糖类或其它肽、多肽或蛋白质的蛋白质。
在一个特别优选的实施方案中，该表达产物由包含SEQ ID NO：1的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物编码，包括与SEQ ID NO：1具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：1或其互补形式杂交的核苷酸序列。
在另一特别优选的实施方案中，该表达产物由包含SEQ ID NO：2的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物编码，包括与SEQ ID NO：2具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：2或其互补形式杂交的核苷酸序列。
在另一特别优选的实施方案中，该表达产物由包含SEQ ID NO：3的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物编码，包括与SEQ ID NO：3具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：3或其互补形式杂交的核苷酸序列。
在另一特别优选的实施方案中，该表达产物由包含SEQ ID NO：5的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物编码，包括与SEQ ID NO：5具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：5或其互补形式杂交的核苷酸序列。
在另一特别优选的实施方案中，该表达产物由包含SEQ ID NO：6的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物编码，包括与SEQ ID NO：6具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：6或其互补形式杂交的核苷酸序列。
在另一特别优选的实施方案中，该表达产物由包含SEQ ID NO：7的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物编码，包括与SEQ ID NO：7具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：7或其互补形式杂交的核苷酸序列。
在另一特别优选的实施方案中，该表达产物由包含SEQ ID NO：8的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物编码，包括与SEQ ID NO：8具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：8或其互补形式杂交的核苷酸序列。
在另一特别优选的实施方案中，该表达产物由包含SEQ ID NO：9的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物编码，包括与SEQ ID NO：9具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：9或其互补形式杂交的核苷酸序列。
本发明也包括较高的相似性，例如大于约40％或50％或60％或70％或80％或90％或95％或96％或97％或98％或99％或以上。
本发明另一方面涉及选自以下的分离的表达产物：
(i)新核酸分子编码的mRNA或蛋白质或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物，该分子在进食或禁食条件下的以色列沙鼠动物、或糖尿病或非糖尿病动物的胃、肝或下丘脑一种或多种组织中差异表达；
(ii)新核酸分子编码的mRNA或蛋白质或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物，该分子在进食或禁食条件下的以色列沙鼠动物、或糖尿病或非糖尿病动物的胃、肝或下丘脑一种或多种组织中差异表达；
(iii)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(iv)由包含SEQ ID NO：1的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(vi)基本如包含SEQ ID NO：2所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(vii)基本包含SEQ ID NO：3所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(viii)包含基本如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(ix)基本包含SEQ ID NO：5所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(x)基本包含SEQ ID NO：6的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(xi)基本包含SEQ ID NO：7的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(xii)基本包含SEQ ID NO：8的核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(xiii)基本包含SEQ ID NO：9所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(xiv)能够在低严谨性条件下与包含SEQ ID NO：1的核苷酸序列或其互补形式、或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xv)能够在低严谨性条件下与包含SEQ ID NO：2的核苷酸序列或其互补形式、或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xvi)能够在低严谨性条件下与包含SEQ ID NO：3的核苷酸序列或其互补形式、或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xvii)能够在低严谨性条件下与包含SEQ ID NO：5的核苷酸序列或其互补形式、或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xviii)能够在低严谨性条件下与包含SEQ ID NO：6的核苷酸序列或其互补形式、或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xix)能够在低严谨性条件下与包含SEQ ID NO：7的核苷酸序列或其互补形式、或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xx)能够在低严谨性条件下与包含SEQ ID NO：8的核苷酸序列或其互补形式、或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xxi)能够在低严谨性条件下与包含SEQ ID NO：9的核苷酸序列或其互补形式、或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
表达产物的例子是SEQ ID NO：4所示氨基酸序列(AGT-121)。
本发明的蛋白质优选处于分离形式。″分离″是指蛋白质分子经历至少一次纯化步骤，例如可方便定义为通过分子量、氨基酸序列或其它方便方法测定，相对于其它组分，包含至少约10％目的蛋白质、优选至少约20％、更优选至少约30％、再优选至少约40-50％、另优选至少约60-70％、再优选至少约80-90％或更多的目的蛋白质的组合物。在一个优选实施方案中，也可能认为本发明的蛋白质是生物纯。
不限制理论或本发明的作用模式，认为AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的表达与调节体重和葡萄糖稳态有关。据认为这些基因的表达调节特别通过作用于能量摄取以及糖/脂代谢而调节能量平衡。能量摄取作用很可能由中枢神经系统介导，但对糖和脂代谢的外周作用也有可能。这些基因的表达也可能受禁食和进食调节。因此，调节这些基因或其表达产物的表达和/或活性提供了调节体重和能量代谢、包括糖和脂代谢的机制。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的鉴定使得可以得到很多能够调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表达或能够调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504活性的治疗性分子。本发明涵盖的调节剂包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表达的激动剂和拮抗剂。AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表达的拮抗剂包括反义分子、核酶和共抑制分子(包括诱导RNAi的任何分子)。激动剂包括提高启动子活性或干扰负调节机制的分子。AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的拮抗剂包括抗体和抑制剂肽片段。这类分子首先可能需要修饰，以使其穿透细胞膜。另外，可能利用病毒剂引入遗传元件，来调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的表达。就AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504与其它基因例如编码瘦素的ob基因联合作用而言，该治疗性分子可能靶向AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504以及ob基因或其翻译产物。
因此，本发明包括调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504在哺乳动物中表达的方法，所述方法包含在足以上调或下调或调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和AGT-504表达的时间和条件下，使AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-423和AGT-504接触有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-123和AGT-504表达的调节剂。
例如，可能将编码AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-423和AGT-504或其衍生物或同系物的核酸分子引入细胞中，以增强该细胞产生AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-5 04的能力，反之，引入AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和AGT-504正义和/或反义序列例如寡核苷酸，以便在转录、转录后或翻译水平上降低基因表达。正义序列优选编码发夹RNA分子或双链RNA分子。
本发明另一方面包括调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504在哺乳动物中活性的方法，所述方法包含在足以升高或降低AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504活性的时间和条件下，给予所述哺乳动物调节有效量的一种分子。该分子可能是蛋白质性分子或化学体，也可能是AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其配基的衍生物。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和AGT-504的表达、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的活性或功能的调节水平，在许多疾病例如肥胖、厌食、能量失衡、糖尿病、代谢综合症、血脂障碍、高血压和胰岛素耐受的治疗中很重要。也可能用于农业产业，以帮助产生瘦肉型动物，或需要时产生更为肥胖的动物。因此，本发明涵盖的哺乳动物包括但不限于人类、灵长类、家畜动物(例如猪、羊、牛、马、驴)、实验室实验动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔)、伴侣动物(例如狗、猫)以及捕获的野生动物(例如狐狸、袋鼠、鹿)。特别优选的宿主是人类、灵长类或家畜动物。
因此，本发明包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的表达产物、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和AGT-504的遗传突变体和/或其激动剂或拮抗剂的治疗性和预防性用途。
本发明因而包括调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504在哺乳动物中表达的方法，所述方法包含在足以上调、下调或调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表达的时间和条件下，使AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和/或AGT-504基因接触有效量的一种试剂。
本发明另一方面包括调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504在受试者中活性的方法，所述方法包含在足以升高或降低AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504活性或功能的时间和条件下，给予所述受试者调节有效量的一种物质。
通过给予哺乳动物一种物质来调节活性可以利用若干技术之一来实现，包括但不限于将蛋白质性或非蛋白质性分子引入哺乳动物，该分子可以：
(i)调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和/或AGT-504的表达；
(ii)作为AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的拮抗剂起作用；和/或
(iii)作为AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的激动剂起作用。
根据本发明可能给予哺乳动物的分子也可能连接到靶向物质例如单克隆抗体，它提供了这些分子到靶细胞的特异性传递。
本发明另一方面涉及本发明有关哺乳动物疾病的用途。例如，本发明特别用于治疗性或预防性治疗肥胖、厌食、糖尿病或能量失衡。
因此，本发明另一方面涉及治疗遭受以肥胖、厌食、糖尿病和/或能量失衡中一种或多种症状为特征的疾病的哺乳动物的方法，所述方法包含在足以调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504表达或足以调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504活性的时间和条件下，给予所述哺乳动物有效量的一种笏质。
另一方面，本发明涉及治疗遭受以肥胖、厌食、糖尿病或能量失衡中一种或多种症状为特征的疾病的哺乳动物的方法，所述方法包含给予所述哺乳动物有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504。
物质包括蛋白质性或非蛋白质性分子，例如抗体、天然产物、化学体或核酸分子(包括反义分子、正义分子、核酶、ds-RNA分子或DNA靶向分子)。
″有效量″是指至少部分获得理想的免疫应答(例如针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504)、或延迟特定疾病发作、或抑制其发展、或完全阻止其发作或发展所需的量。
按照这些方法，AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504、或能够调节所述分子表达或活性的物质可能与一种或多种其它化合物或其它分子共同给药。″共同给药″是指通过相同或不同途径在同一制剂或两种不同制剂中同时给药、或通过相同或不同途径顺序给药。″顺序″给药是指在给予两种分子之间秒、分、小时或天的时间差异。这些分子可能按任何顺序给药。
另一方面，本发明涉及能够调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物或类似物表达的物质的用途，用于制备供治疗以肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或能量失衡为特征的疾病的药物。
再一方面，本发明涉及能够调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物活性的物质的用途，用于制备供治疗以肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或能量失衡为特征的疾病的药物。
另一方面，本发明涉及AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物或类似物、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物的用途，用于制备供治疗以肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或能量失衡为特征的疾病的药物。
本发明另一方面涉及用于调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物或类似物的物质。
另一方面涉及用于调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504活性或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物的物质。
本发明另一方面涉及AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物或类似物、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物用于治疗以肥胖、厌食、体重维持、糖尿病和/或能量失衡的一种或多种症状为特征的疾病。
在本发明的一个相关方面，受到治疗的哺乳动物可能是需要治疗性或预防性治疗的人或动物。
因此，本发明在一个实施方案中涵盖包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表达、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504活性的调节剂以及一种或多种药物可接受载体和/或稀释剂的组合物。在另一实施方案中，该组合物包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物、类似物或模拟物以及一种或多种药物可接受载体和/或稀释剂。该组合物也可能包含瘦素、或瘦素或ob表达的调节剂。
简言之，该组合物的所有这类组分称为″活性组分″。
适合注射使用形式的活性组分的组合物包括无菌水溶液(水溶性)以及可即时制备无菌注射液的无菌粉末。在任何情况下，该形式必须无菌，一定程度上必须是能容易注射的液体。它在生产和贮存条件下必须稳定，并必须防止微生物例如细菌和真菌的污染作用。
载体可以是溶剂或其它基质，包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其适当的混合物以及植物油。
可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟苯甲酸酯、氯代丁醇、酚、山梨酸、thirmerosal等防止微生物作用。在很多情况下，优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。通过在组合物中使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以延长注射组合物的吸收。
将所需量的活性组分掺入含有按需任选的其它成分的合适溶剂中，然后通过例如过滤除菌、照射或其它方便方法灭菌，制备无菌注射液。至于供制备无菌注射液的无菌粉末，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，从前述无菌过滤的溶液中得到活性成分外加任何其它所需成分的粉末。
如能适当地保护AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504，它们可以例如与惰性稀释剂或可吸收的食用载体一起、或装入硬壳或软壳胶囊中、或压成片剂、或直接混入膳食中，经口服给药。对于口服治疗给药，该活性化合物可以与赋形剂混合，以可吸收的片剂、颊含片、锭剂、胶囊剂、酏剂、悬浮液、糖浆剂、干胶片等形式使用。这种组合物和制剂应当包含至少1％以重量计的活性化合物。该组合物和制剂的百分比当然可能改变，可能适当地介于单位重量的约5-80％。活性化合物在该治疗用组合物中的量应使其能够获得合适剂量。制备本发明的优选组合物或者制剂，使其口服单位剂型包含约0.1μg-2000mg的活性化合物。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等也可能包含下列：粘合剂，例如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸氢钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等；润滑剂，例如硬脂酸镁；以及甜味剂例如蔗糖、乳糖或可以添加的糖精，或调味剂例如薄荷油、冬青油、或樱桃香精。如果单位剂型是胶囊剂，则除上述类型材料之外，还可能包含液体载体。其它各种材料可能以包衣存在，或改变剂量单位的物理形式。例如，可能利用虫胶、糖或这两者包被片剂、丸剂、或胶囊剂。糖浆剂或酏剂可能包含活性化合物、甜味剂蔗糖、防腐剂甲基及羟苯丙酯、染料以及香料例如樱桃或柑桔香料。当然，用于制备任何单位剂型的任何材料应该是药学纯，并在所用剂量内基本上没有毒性。此外，可能将活性化合物掺入缓释制剂和剂型中。
药学上可接受的载体和/或稀释剂包括任意溶剂、分散剂、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。为药学活性物质而使用此类介质和试剂为本领域所公知。除非与该活性成分不相容，本发明包括在治疗组合物中使用任何常规介质或试剂。组合物中也可以掺入补充的活性成分。
按便于给药和一致剂量的单位剂型配制非肠道组合物特别有利。此处所用单位剂型是指物理上的分立单位，适合用作待治疗哺乳动物受试者的单个剂量；每个单位包含产生目的治疗效果的预定量的活性物质连同所需的药用载体。本发明新单位剂型的特征取决并直接依赖于(a)活性物质的独特特征以及希望达到的特定治疗效果，以及(b)现有技术对复合此类活性物质以用于治疗患病活受试者疾病所固有的限制，所述受试者如此处详述身体健康受到损害。
在单位剂型中，主要活性成分可以有效量与药学上可接受的合适载体方便混合和有效给药。例如，一个单位剂型包含数量为0.5μg-约2000mg的主要活性化合物。按比例表示，通常每ml载体含活性化合物约0.5μg-2000mg。就包含补充活性成分的组合物而言，参照所述成分的常用剂量和给药方式，确定其剂量。
一般而言，AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的有效量将是0.01ng/kg/体重至10,000mg/kg/体重以上。其它的量为0.1ng/kg/体重至1000mg/kg/体重以上。根据所治疗的疾病，可能按分钟、小时、天、周、月或年给予该活性成分。给药途径可能改变，包括静脉内、腹膜内、皮下、肌内、鼻内、通过栓剂、输注、滴注、口服或其它常规方式。
药物组合物也可能包含遗传分子，例如能够转染靶细胞的载体，其中该载体携带能够调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表达、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504活性的核酸分子。例如，该载体可能是病毒性载体。
在AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504是蛋白质的情况下，本发明另一方面涉及AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504及其衍生物和同系物的抗体。该抗体可能是单克隆或多克隆抗体，可能选自天然存在的针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的抗体，或可能针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物或同系物特异性生成。就后者而言，AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物或同系物可能首先需要与载体分子结合。本发明的抗体和/或重组AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物可特别用作治疗剂或诊断剂。″针对″一种分子的抗体包括所述分子的特异性抗体。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504及其衍生物可用于筛选可能存在于某些自身免疫疾病中的针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的天然存在抗体。或者，可以使用特异性抗体筛选AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。用于此类分析的技术为本领域公知，例如包括夹心分析和ELISA。
本发明针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的抗体可能是单克隆或多克隆抗体，并可能选自针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的天然存在抗体，或可能针对AGT-119、AGT-120和AGT-121或其衍生物特异性生成。就后者而言，AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504蛋白质可能需要首先与载体分子结合。或者，可能使用抗体片段，例如Fab片段。另外，本发明扩展到重组及合成抗体以及抗体杂合体。此处认为″合成抗体″包括抗体片段及杂合体。本发明这一方面的抗体特别用于免疫治疗，可能也用作诊断工具或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的纯化手段。
例如，特异性抗体可用于筛选AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504蛋白质。后者很重要，例如用于筛选细胞提取物或其它生物液体中的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的水平，或从培养上清液中纯化利用重组方法制备的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。用于此类分析的技术为本领域公知，例如包括夹心分析和ELISA。
在本发明范围内包括任何针对上述第一抗体的第二抗体(单克隆、多克隆抗体或片段)。第一和第二抗体均可能用于检测分析中，或可能使用第一抗体以及可商业获得的抗免疫球蛋白抗体。此处涵盖的抗体包括特异性针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504任何区域的抗体。
利用酶或蛋白质免疫可以获得多克隆和单克隆抗体，每种类型均可用于免疫分析。获得两种类型血清的方法为本领域公知。并不优选多克隆血清，但它通过给合适的实验室动物注射有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其抗原性部分，收集动物血清，并利用任何已知的免疫吸附技术分离特异性血清，相对容易制备。尽管此方法产生的抗体实际上可用于任何类型的免疫分析，但由于产物可能具有不均一性，一般并不喜欢。
由于单克隆抗体能够大量产生以及产物的均一性，特别优选用于免疫分析。利用本领域技术人员公知的技术，通过将永生细胞系与针对免疫原性制剂致敏的淋巴细胞融合，可以制备用于产生单克隆抗体的杂交瘤细胞系。(参见例如Douillard和Hoffinan，Basic Facts about Hybridomas，in Compendium of Immunology Vol.II，ed.by Schwartz，1981；Kohler和Milstein，Nature 256：495-499，1975；Kohler和Milstein，EuropeanJournal of Immunology 6：511-519，1976.)
本发明另一方面包括检测受试者生物样品中AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物或同系物的方法，所述方法包含在足以形成复合物的时间和条件下，使所述生物样品接触AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其抗原性衍生物或同系物的特异性抗体，然后检测该复合物。
存在该复合物表示存在AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。该分析可能是定量或半定量分析，以确定发展肥胖或其它疾病的倾向或监控治疗方案。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504存在可能通过很多方法、例如Western印迹和ELISA方法进行。可利用多种免疫分析技术，如参见美国专利4,016,043、4,424,279和4,018,653。其中当然包括非竞争型的单位点和双位点或″夹心″分析，以及传统的竞争性结合分析。这些分析也包括标记的抗体直接结合靶对象。
夹心分析属于最有效的常用分析。夹心分析技术具有很多改变，本发明意在包括其全部。简言之，在典型的正向分析中，将未标记的抗体固定化于固相基质，使待测样品与结合的分子相接触。在适当的温育期之后，该时间足以使抗体-AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504复合物形成，然后加入利用能够产生可检测信号的报告分子标记的、特异性针对AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的第二抗体并温育，使时间足够形成另一复合物，抗体-AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504-标记的抗体。洗去任何未反应的物质，通过观测该报告分子产生的信号来确定AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的存在。结果可能通过简单观测可视信号而定性，或可能通过与包含已知量半抗原的对照样品比较而定量。正向分析的改变包括将样品和标记抗体同时加入结合抗体中的同时分析。这些技术为本领域技术人员公知，包括显而易见的任何微小改变。根据本发明，可能包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的样品包括细胞提取物、组织活检或可能有血清、唾液、粘膜分泌物、淋巴液、组织液和呼吸液。因而样品一般是包含生物液体的生物样品，但也扩展到发酵液和上清液(例如来自细胞培养物)。
固相表面一般为玻璃或多聚物，最常用的多聚物为纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。固相支持物可能是管、球、皿或微孔板形式，或适合进行免疫分析的任何表面。结合方法为本领域公知，一般包括交联共价结合或物理吸附多聚物-抗体复合物到固相表面，然后在测试样品制剂中洗涤。然后将一等份待测样品加入固相复合物中，在足够的时间(例如2-40分钟、或更合适则过夜)以及合适条件下(例如室温至约37℃)温育，使结合抗体中存在的任何亚基。温育时间之后，洗涤抗体亚基固相、干燥，与特异性针对部分AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的第二抗体温育。第二抗体与报告分子相连，用于显示第二抗体与AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的结合。
另一方法包括固定化生物样品中的靶分子，然后使固定化的靶分子暴露于可能标记或未标记报告分子的特异性抗体。根据靶分子的量以及报告分子信号的强度，可能通过抗体直接标记来检测结合的靶分子。或者，使特异性针对第一抗体的标记的第二抗体接触靶分子-第一抗体复合物，形成靶分子-第一抗体-第二抗体三元复合物。利用报告分子发出的信号检测该复合物。
本发明所用″报告分子″是指通过其化学本质提供可检测结合抗原的抗体的分析识别信号的分子。可能定性或定量检测。此类分析最常使用的报告分子为酶、包含荧光团或放射性核素(即放射性同位素)的分子以及化学发光分子。
就酶免疫分析而言，一般利用戊二醛或高碘酸盐方法将酶缀合到第二抗体。但应当容易承认，存在技术人员易于获取的多种不同的缀合技术。常用的酶包括辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶以及碱性磷酸酶等。一般根据经相应酶水解后能产生可检测的颜色变化，来选择用于特定酶的底物。合适酶的例子包括碱性磷酸酶和过氧化物酶。也可能利用可产生荧光产物的生荧光底物，而非上述显色底物。在所有情况下，将酶标抗体加入第一抗体半抗原复合物中，使其结合，然后洗去过量的试剂。然后将包含合适底物的溶液加入抗体-抗原-抗体复合物中。底物将与连接第二抗体的酶反应，产生定性的可视信号，通常可能利用分光光度计进一步定量，以指示样品中存在的半抗原的量。″报告分子″也扩展到使用细胞聚集或聚集抑制，例如在乳胶小球上的血红细胞等。
或者，荧光化合物例如荧光素和罗丹明(rhodamine)可能与抗体化学偶联，而不改变其结合能力。利用特定波长的光照射活化时，荧光色素标记的抗体吸收光能，诱导分子激发态，然后发射特征颜色的光，可利用光学显微镜进行视觉检测。与EIA中一样，容许荧光标记的抗体结合第一抗体-半抗原复合物。洗去未结合试剂，然后使留下的三元复合物暴露合适波长的光线。观察到荧光表示存在目的半抗原。免疫荧光和EIA技术均为本领域内公知，为本发明方法特别优选。然而，也可能使用其它报告分子例如放射性同位素、化学发光或生物发光分子。
本发明还涵盖遗传分析，例如包括PCR分析，以检测AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物。
实时PCR也特别用于分析特定的遗传分子。
本发明由以下非限制性实施例进一步描述。
实施例1
以色列沙鼠
在以下实施例中，使用以色列沙鼠进行不同条件下的差异表达研究。根据代谢表型，将大鼠分为如下3组：
A组动物：消瘦
B组动物：肥胖、非糖尿病
C组动物：肥胖、糖尿病
实施例2
以色列沙鼠AGT-119的部分序列
使用进食、禁食和再进食以色列沙鼠胃cDNA的差异显示PCR鉴定AGT-119。
部分核苷酸序列如下：
AATGAAAGAATTGATTGATACGCAACCAAATTAGCCAGTGAGGTTAGNNNCNGGATTATCG
TGACCAGATAGGAGCCTTGGAAAATGACTAAGAAAAATGAAAAACAGCCTAAAATGTCATT
AGCCCAACAAGATGCGTTAAAACGCCTGGATCAAGTTAGAANGCAGAAAAGCGAAAGCC
[SEQ ID NO：1]
实施例3
AGT-119基因表达
实时PCR分析发现AGT-119在禁食和再进食动物中的表达水平显著低于进食动物(图1)。多数禁食和再进食动物的AGT-119水平不可检测。禁食进行16小时，进食动物可任意获取实验室食物，再进食动物禁食16小时后可任意获取实验室食物1小时。利用靶向目的基因的两套引物证实这些结果。
实施例4
AGT-119序列同源性
AGT-119序列未显示与公共数据库任何序列的显著同源性(BLASTN版本2.2.1)。
实施例5
以色列沙鼠AGT-120的部分序列
使用进食、禁食和再进食以色列沙鼠胃cDNA的差异显示PCR鉴定AGT-120。
部分核苷酸序列序列如下：
GCTGATGGCGATGAATGAACACTGCGTTTGCTGGCCTTATCAATTCCCGCTTTTTCTTGGA
TGAAAAAGACTAACCATGATCGGGCCCAACGGCGGAAGTCGCTTTTGTCACCAGTAGTGAT
GGTGCCGGGATCAAGTGCCACGATTGAGCGTTTCAATTCACTGATTGCGATGCTTAATAAA
GATTCGCCGCACCCTCACAGTGTGTTAAAGATTAAAGTCATGAAAGATGGCAGTTTAAA
ATACAAGGGCAGCATTAATCGCGGTGATAATGAACCCTTTATTGTGATTGGTTTTGAAA
ATAATAAAGATGGCTATAGTAATATTAAGAAGCAAGCAAGCTGGCTAGATATTGCCTTTTA
TGAGATCTCGCNAACTTATAAATTTAACAACTTTAAGGCCTTTGGCCATTCAAATGGAG
GGCTGGTGTGGACATATTGGTTAGAGCATTATTATTCAGAGTATGAGTCAGAAATCA
AAATCAAGCGGTTGATGACTTTGGCTTCACCATTTAACTTTGACGAAGACAATCTGAAT
CACCGGACCCAGATGCTGGCTGACTTTATTAAATATCGGAAACGACTTCCAAAAACGCTC
AAAGTTTATTCACTGACTGGTGGCCAGACCTATGAATCTGACGGGATTGTTCCTGAAAA
TAGTGTAGCCGCAGCCAAGTATATTTTCCAAAATCAAGTGAAGAGCTTTATGGAAAT
TACGGTTACGGGTAAGCAGCTAATCACTCAGATTTACCGCAAAATGAACAAGTAGTGCTA
GTGATGAATCCACCACTCACTAAAGATAATAAAAAAAAAAA[SEQ ID NO：2].
实施例6
AGT-120基因表达
进食组(n＝8)AGT-120的表达显著高于禁食(n＝12)和再进食动物(n＝8)。禁食和再进食动物之间没有差异(图2)。AGT-120表达与胃重、胃容量、葡萄糖或胰岛素水平之间没有发现显著相关性。
实施例7
AGT-120基因同源性
AGT-120序列显示与加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)假定蛋白质(NZ AAAB01000011)的同源性。人的同源性尚待鉴定。
实施例8
以色列沙鼠AGT-121序列
使用糖尿病和非糖尿病以色列沙鼠下丘脑cDNA的差异显示PCR鉴定AGT-121。
AGT-121是最初通过差异显示鉴定的下丘脑基因。进食/禁食下丘脑的主要基因表达数据令人关注，因为B组和C组动物的表达大幅提高，而且动物之间信号的不一致性较大。
核苷酸序列如下：
CAGACTCCTTGGAAATTAAGGAATGCAATTCTGCCACCATGATGGAAGGACTGAAAAAACGT
ACAAGGAAGGCCTTTGGAATACGGAAGAAAGAAAAAGACACTGACTCTACAGGCTCACCAGA
TCGAGATGGAATGCAGCCCAGCCCACACGAGCTCCCCTACCATAGCAAAGCAGAGTGTGCCC
GAGAAGGAGGGAACAAAGCTTCGAAGAAAAGCAATGGGGCACCAAATGGATTTTATGCGGAA
ATTGATTGGGAAAGATATAACTCACCTGAGCTGGATGAAGAAGGTTACAGCATCAGACCTGA
GGAACCAGGCTCTACCAAAGGAAAGCACTTTTATTCTTCAAGTGAATCCGAAGAGGAGGAAG
AATCGCACAAGAAGTTCAATATCAAGATTAAACCCTTGCAGTCCAAGGACATCCTTAAGAAT
GCTGCAACAGTAGACGAGCTGAAGGCTTCCATAGGCAACATTGCACTTTCCCCTTCGCCTGT
GAGGAAAAGTCCGAGGCGCAGCCCGGGTGCAATTAAAAGGAACTTATCCAGTGAAGAAGTCG
CAAGACCCAGGCGTTCCACCCCAACTCCAGAACTTACAAGCAAGAAGCCTCTGGACGACACT
CTGGCCCTTGCTCCCCTCTTTGGCCCACCGTTAGAATCTGCTTTTGATGGACACAAGACGGA
AGTTCTTTTAGATCAGCCTGAGATATGGGGTTCAGGCCAACCAGTTAACCCAAGCATGGAGT
CACCAAAGCTAGCAAGACCTTTTCCCACTGGAACCCCTCCACCTCTGCCTCCAAAAACTGTA
CCAGCCACCCCGCCTCGGACAGGCTCCCCCTTAACAGTGGCGACAGGAAATGACCAGGCAGC
CACAGAGGCCAAAATTGAGAAACTACCATCCATCAGTGACCTGGACAGCATTTTTGGCCCCG
TGTTGTCCCCCAAGTCTGTTGCTGTTAATACTGAGGAGACGTGGGTCCATTTCTCTGATGCA
TCCCCGGAACATGTTACTCCAGAGTTGACTCCAAGGGAAAAGGTGGTGACCCCACCAGCTGC
ATCAGACATCCCAGCTGACTCCCCAACTCCAGGCCCGCCTGGCCCCCCAGGCTCGGCAGGTC
CCCCAGGGCCTCCTGGTCCTCGCAATGTACCATCTCCGCTCAATTTAGAAGAAGTCCAGAAG
AAAGTCGCTGAGCAGACCTTCATTAAAGATGATTACTTAGAAACACTCTCATCTCCTAAAGA
GTGTGGGTTGGGACAGAGAGCAACTCCACCTCCCCCACCACCACCCACCTACAGGACTGTGG
TTTCGTCCCCCGGACCTGGCTCGGGCAGTGGTACGGGGACCGCCAGTGGTGCATCGTCCCCT
GCTCGGCCAGCCACCCCCTTAGTTCCTTGCAGCTGCTCCACTCCGCCTCCACCTCCTCCCCG
GCCTCCATCCCGGCCAAAGCTACCTCCAGGAAAGCCTGGAGTTGGAGACGTGTCCAGACCTT
TTAGCCCACCCATACACTCCTCCAGCCCTCCTCCAATAGCACCCTTAGCCCGGGCTGAAAGC
ACTTCTTCAATATCATCAACCAATTCCCTGAGCGCAGCCACCACTCCCACAGTTGAGAATGA
ACAGSCTTCCCTCGTTTGGTTTGACAGAGGAAAGTTTTATTTGACTTTTGAAGGTTCTTCCA
GGGGACCCAGTCCTCTAACTATGGGGGCCCAGGACACCCTCCCGGTTGCAGCAGCATTCACA
GAAACTGTCAATGCCTACTTCAAAGGAGCAGATCCAAGCAAATGCATTGTTAAGATCACGGG
AGAAATGGTGTTGTCCTTTCCTGCTGGCATCACCAGACACTTTGCCAACAACCCATCCCCAG
CTGCTCTGACTTTTCGAGTGATAAATTCCAGCAGGTTAGAGCACGTCCTGCCGAACCCCCAG
CTCCTCTGCTGCGATAACACACAAAATGATGCCAATACCAAGGAATTCTGGGTAAACATGCC
AAATTTGATGACCCACCTGAAGAAGGTCTCTGAACAAAAACCCCAGGCTACATATTACAATG
TGGACATGCTCAAGTATCAGGTGTCAGCCCAGGGCATTCAGTCCACACCTCTGAACTTGGCG
GTGAACTGGCGCTGTGAGCCTTCCAGCACTGACCTGCGCATAGATTATAAGTACAACACGGA
TGCCATGTCCACCGCAGTGGCCCTTAACAACGTGCAGTTCCTGGTCCCCATTGATGGAGGAG
TGACCAAGCTCCAGGCTGTCCTTCCTCCAGCAGTCTGGAATGCTGAACAACAAAGAATATTA
TGGAAGATTCCTGATATCTCCCAGAAGTCAGAAAATGGAGGCGTAGGTTCTTTACTGGCAAG
ATTTCAATTAGCCGAAGGCCCAAGCAAACCTTCCCCACTGGTCGTGCAGTTCACGAGTGAAG
GGAGCACTCTGTCTGGCTGCGACATTGAGCTTGTCGGAGCAGGGTACGGGTTTTCACTCATC
AAGAAGAGGTTTGCTGCAGGAAAATACTTGGCCGATAACTAATAAAATGTCATGCAAGGATT
TTGAAGATCCATGTCCTGGAGAACTGTTGTCTGAGAGACATATTTTAATCTGGTTTGAGGAA
AACAAACCAACCGATGTCTGTACGTGGGCTCTGTCAGCTGGAAGGTCCCGGCTTTCAGCCGT
GATTTCCCACACCCAGTACAAGGAGGATCAGTTCTACAGTACTTACTTCTAGGTGTACTATT
GTTAATGGTTTTAAAATGTAATTATTGTATTTGTAAACTGTACCTTCATTCCAGTAAGGCAG
TTAGACACCTGAGTTTTAGCTTTTTTTTCCATTCCTGAAACGGATGTAATTTAAACTGCGGT
ATGTAAATTTAATAGTAGTACTGTCGAATGGCACAATGCTTACAGAGATACAGTGCATTTTG
TCAATATATAAAATTTAAATATAATGTTGATAGTTACCATAAAGGGGGTGCCACACATCAAG
AACCTTAAATGGAACCAGAAACAAGCAAGCAAACAAACAAACAAACAAACAAAACCTTACTT
TTCTTCACTCCTTATTACATTTTCCTCTAGAGCTAAAGAAACTTCTAGCTTCGGTTTAGTGG
GTTAAATTCAGAAACTATTTCAGAAAAAAAAAAAAATTCTGAAGTTACAGCATATTCAAAGA
GAAGCATTAATTACCACTTTTTTAAAAGCTTTTTTTTCAAACCGCAAATTTCATAAAAATGC
AAACTGTGTAAACAGGGCCTCTTATTTTTATAACTTGTGTAAAAAGGGAAAATCAATTCATA
TTTAAAGTTTAAGTAGTATTAAATTATATCCAAGAGTGAAGAGGATGTTGAAATCTTACCTG
ACCCCATGCCCCTTCTTTGCAGTTTAGCAAATGTTGAGATTGCTAAATCATCAGATTAAAGC
CAACTTGATTTTTAAAGTTTCAAGACTTTCTGAAGCTGAACTGGTTAAAACTTTTGCACAAT
TGCTTGGAACGGAGGGGGAGGGGCCTCTCTGGTCCAGCACAGGTACCTTGTTTCTTCCCTAC
TCACAAGAATCAAAACAATGAAAGTCAAGAACCACAGAGGGGGGAAATTAGTTCCCTGTTCA
GTCCAAAAGGAGAACTTTAAACTTATCATTTACGTCTTTGGGGAAGGAAGAAATAAGCTTTA
TAAGTGAAATCCTATTCACCTTGTTGTCCTATGAATGTTTTCGGGGTGACTTTAAGATTCAT
TGTATACATGTGCGAGTCTCTGCTATTCTTGGGGAGTTGAAAGCAGAGCCAGGCCAGTGGCC
TTGAAGTTCAGTAAATGCCACAGTTCTGGGGCAAAGGTAGGCATGAGGGTTCTGCCCCTCAG
CACAGGAATCAGAGCAGTGTCTTGTAAGGTCTAAAGATTAAGTCTTCCAGTAAGCCACAAGT
TATTTTGTAACAGAGTTGGGGAGTTTTGGCACTCGCTGCTGACTTTCATTTTGTATCCACTC
AAATGGAGTCTTCAACTCTTTTCAACTTTAGAATCAAATTAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
TTTTTACACAAGGTTTACTCTGTGTAACTGTCCTGGATGTTCTGGAACTCTTTTTGTAGACC
AGGCTGGCCTCGAACTCAGAGAGATCCACCTGCCTGTGCTCCCCAAGTGCTGGGATTAAAGG
CGTGTGCCACCATGCCTGGCTTAGATTAAATTTTTTAAGTCTTACTTCACCAGTGAGATTGT
GATTGGCAGTTGTTTCGAGAGAGCTTTGTAGCTTAATCTATGTTCTCTTCAATCAATGCTTG
CTACCAAAAGAATGTCCAAAATGATCTATTTTTCCTGGGAACAATTCATCTATTTAAATAGG
CTCTTGCCTAGTTCCCCAAAGCAGCCTGTCTTTGAAGGTTTTTTTGAACAAAATAATTTTTT
CACAAAAAGTTTGGTTTTGAAATCAAAATAGAGAAATAAAATGTAAATTTTAAATCTAATGG
AACATGAGGAAATGAAAAAACTTAAGCCAATGGAGAGTAAAAGCAGAAAAAAATGAAACTTA
CCTAGAATGTGATTATATTATGTTTTTAAGTAGTCAATTCATGGAAAAATATTGAATATTAA
CACAAAGCATATTAAAAATATGTAAATATTACTGTTTCTCATGTCTTTCTCTTTATATCTTA
TTTTATATAGTTTTAGAATGAATTGGTCATTAAATACAGTGTTTCTTTCCAAAGAATAATTT
TGTTGATATTGTAAAAATGTAATTAAAGATAGAGACTTGAATAGTCTCTAACATTATCCAAA
TGTTTCTAGGAACCAAATTCAAAGCTGTGAAGAAAGCTTGCAATCCCTGAATTGGCTTTTGT
GAAATGGAATGACGGTGGGTAATCTCAAAATTCAGACTTGAATAGTCAGAGCTGAAGTGGGG
AATGGGTGGTTCCTTCTGGTTCAGAAAATAGGTCAAATAACAGCATTTGCTCGCATCAGGGA
TGGAGATGTTGGTGATGTTTGGTTTTACTCTCGCAGGCTTTCGTCTCCTGTTGAAGGTGTAT
CTGTAGCCCAGTGGGATAAGAGTTCATGTTCTGAGATGTGGTCCTAGACAAGGCAGGCAAGG
TTTCAGTCATCAATACCTATCAGGTCAGGTTCCCTTTTGTCTATACAAAATGGGTTAGCTCA
TAGCCAGATGGTTTGCAGGACAGTGAGCTAAATTAGGACAAGATTCTGGTTAGCCAAAGAGC
TGTTTCCTAAGCACTCTGATTTTTTTTTAAAGCTGATAGAAAGTGTAAATGTTCTATTTTGA
CGACATGGAAAGTATGTTTTCCTCTTCAAATAAATCCCTTATTTTTATGAAATTTTCAAAAA
TAAATTCTTGTTTAAAATAGTCTGAATGTTATCATAGTTGGAACTTGGCAATTACTAATTTG
AAATTCTATGAGATGTATCTCCAGCTAAAATGGCAATTCCCTGTATGCTATCTGGGGCTCAG
TTTACCTCTAAGGAAGACTGTCAGAGTGCAAATGGTTTTGAGTGACGGGAAAGTCAAAGGGC
AAATGTTTGTGCTTTTTTCTTTTTCTGTCTTATATACTTCTTCTTGGTCTCAGAATGCAAAG
TATCAGAGCCATAGTTACACACATTTCCACTTTTAACGCTTCTTTTGAAGGAAGCAGATCCA
CTTTTGCCCCGCCACTCATGCCTGCTGTGCAGACTCAGACGAGTCCCTGCCCTCTTCACGCC
TTTGGGGTGAGAGGGGAGCCATATGTAAGTAGTTTTCAAGCTTTTCTTAATGGGACTTTTCT
TTTTCTAATAAAATCATGCCTGGAATCCTGTAAAGATTGTTGCCTGGCTGTGAAGGGGCTTC
TCCAGATCCTGAAATATAGCATCACAATACGTAAATGACTCCCGATGGATCTCCCAGCTCTG
AAGACTTGCTCTTCTACTTCACATGTGTAGCCACGACGATCAGCTGGCACACAGTACAATTA
GCTGTGTAGTGAGTGCTCCCCAGCTATCAGTCATGAAACATATCACTTTGCTCAACCTGTTT
TTAAAAAAGCTCCAAAATGGTAAAAATGCTTTTCAGTCTTTGTTTTCCCAATAATGGTATTG
AGGCCTAAGCTGATTAACTTCCCCCAAAGTGGTACCACAGCTGGTAACGACCCCAATGATCC
TGAAAAAAATGGAATGAGTACCTTGCTGTTTCRTTTAGTTYATTTTGGGAAAATAATCCATT
TGAATGTCAAGATAAAAAGGCACCAGGAAAAGTCCTCATTGGAAGGATTAAAGATGAGCCTG
GTAAGATGTTAAGATGTAAGATGTTAAGATGTGTTACTGTAAAAAAAAAAAGCTT[SEQ
ID NO：3].
对应氨基酸序列如下：
MMEGLKKRTRKAFGIRKKEKDTDSTGSPDRDGMQPSPHELPYHSKAECAREGGNKASKKSNG
APNGFYAEIDWERYNSPELDEEGYSIRPEEPGSTKGKHFYSSSESEEEEESHKKFNIKIKPL
QSKDILKNAATVDELKASIGNIALSPSPVRKSPRRSPGAIKRNLSSEEVARPRRSTPTPELT
SKKPLDDTLALAPLFGPPLESAFDGHKTEVLLDQPEIWGSGQPVNPSMESPKLARPFPTGTP
PPLPPKTVPATPPRTGSPLTVATGNDQAATEAKIEKLPSISDLDSIFGPVLSPKSVAVNTEE
TWVHFSDASPEHVTPELTPREKVVTPPAASDIPADSPTPGPPGPPGSAGPPGPPGPRNVPSP
LNLEEVQKKVAEQTFIKDDYLETLSSPKECGLGQRATPPPPPPPTYRTVVSSPGPGSGSGTG
TASGASSPARPATPLVPCSCSTPPPPPPRPPSRPKLPPGKPGVGDVSRPFSPPIHSSSPPPI
APLARAESTSSISSTNSLSAATTPTVENEQASLVWFDRGKFYLTFEGSSRGPSPLTMGAQDT
LPVAAAFTETVNAYFKGADPSKCIVKITGEMVLSFPAGITRHFANNPSPAALTFRVINSSRL
EHVLPNPQLLCCDNTQNDANTKEFWVNMPNLMTHLKKVSEQKPQATYYNVDMLKYQVSAQGI
QSTPLNLAVNWRCEPSSTDLRIDYKYNTDAMSTAVALNNVQFLVPIDGGVTKLQAVLPPAVW
NAEQQRILWKIPDISQKSENGGVGSLLARFQLAEGPSKPSPLVVQFTSEGSTLSGCDIELVG
AGYGFSLIKKRFAAGKYLADN[SEQ ID NO：4].
实施例9
AGT-121 Taqman组织分布
利用Taqman PCR在以色列沙鼠多种组织中研究AGT-121的组织分布(图3)。发现脑中水平最高，脾中也有很低水平。
实施例10
AGT-121-Clontech MTN人RNA印迹
还利用Clontech多组织RNA印迹的Northern分析检测了AGT-121在人组织中的组织分布。在脑中观察到约6kb的特异性条带(图4)。认为AGT-121具有脑特异性。
实施例11
AGT-121等位基因与肥胖有关
原始专利中所述插入和缺失等位基因与肥胖有关。对8只消瘦和肥胖的以色列沙鼠个体存在缺失、或插入、或这两者进行基因分型。不考虑糖尿病动物。基因型与以色列沙鼠所见肥胖表型显著相关。结果如表4和5所示。
表4 结果总结
| 表型 | 总计 | |||
| 消瘦 | 肥胖 | |||
| 基因型 | 插入 | 24 | 9 | 33 |
| 杂合子 | 17 | 15 | 32 | |
| 缺失 | 5 | 10 | 15 | |
| 总计 | 46 | 34 | 80 | |
表5 卡方检验
| 量值 | df | 近似概率(Asymp.Sig.)(双侧) | |
| Pearson卡方 | 6.967 | 2 | .031 |
| 似然比 | 7.092 | 2 | 0.29 |
| 线性相关 | 6.879 | 1 | .009 |
| 有效记录数 | 80 |
实施例12
能量受限下丘脑中的AGT-121基因表达
在以色列沙鼠AGT-121编码区设计寡核苷酸引物。在能量受限的下丘脑中分析AGT-121的表达。观察到对照动物的体重、所有动物的葡萄糖变化以及所有动物肩胛下脂肪量的正相关(图5-8)。
实施例13
AGT-121序列同源性
AGT-121：ISR蛋白质在核苷酸及蛋白质水平均显示与人假定蛋白质DKFZp761D221(DKFZp761D221)[登录号：NP_115667]具有很强同源性。该蛋白质预计包含pfam00928.5，Adap_comp_sub结构域，被鉴定为接头复合物介质亚基家族(adaptor complexes medium subunit family)。该家族也包含cocatomer亚基成员。该基因已被定位于人染色体1p31.2。
实施例14
以色列沙鼠AGT-122的部分序列
使用糖尿病和非糖尿病以色列沙鼠肝cDNA的差异显示PCR鉴定AGT-122。
部分核苷酸序列如下：
TCGCGGATCCAGACGCTGCGTTTGCTGGCTTTGATGAAATTTTTAATTTTTCAATATCAGG
AATGTTTAACTATGCCATGAATTTATGGTAGTCAAGGTTGGAAGGCAGGGGAGAGGACACA
GGGAGTAAAGGCACTTGCCCCCAAGCCTTACAACCTGAATTCCATCCCAGAGTGCCTAATG
GTTGAAGGACGGAACTGAATATCTCTAGCTGTCCTCTATCCTCCACAGATACACAGTGAAT
GCATCAACGTAAAAAATTACAGCTAGAAATAATGTCGTGCCATTCATTGTATTTTACATTN
GTNCATCTTNGNTTTTCCATANTAAAAATGTCTNAGACATACCACTTAAAAAAAAAAGCTT
[SEQ ID NO：5].
实施例15
AGT-122基因表达
与B组(p＝0.001)和C组(p＝0.005)动物相比，A组进食状态的AGT-122基因表达具有显著差异(图9)。在禁食状态下，组间没有显著差异。各动物组内，只在B组禁食动物(p＝0.009)中观察到表达显著提高。混合各组数据，未见显著差异(图10)。
分组的禁食动物的AGT-122表达显示与体重、葡萄糖或胰岛素无关。进食动物的AGT-122表达显示与体重(p＝0.005；图11)、葡萄糖(p＝0.003)和胰岛素(p＝0.015)显著负相关。
实施例16
AGT-122序列同源性
AGT-122序列显示与不同小鼠染色体很多区域具有显著同源性。在公共数据库中没有同源序列(BLASTN版本2.2.1)。
实施例17
以色列沙鼠AGT-422的部分序列
利用糖尿病及非糖尿病以色列沙鼠肝cDNA的抑制消减杂交(SSH)[也称为代表性差异分析(RDA)]鉴定AGT-422。
部分核苷酸序列如下：
CCCTATCCGCTACCCCTGGGAGGGACACAAAAACACATTTTGTGTTTTTGAAAAAACTGAG
GTCACCAGACTCTTGTATTGTCTTCTTGGACTTCTCTCAGGAACACTCAGGACTCTCCCCA
CACAACACCGTTCTTGAACCGTTCTAACAAATGTTTAAAGTGGTTTCCTTTGAACCACATT
AAATTTAGTTTAAGCAGTCACCAGTGGGCTAGCAGTTCTGGGTTGGGCAGCACATCTTGTA
CAAGCTCTTCCATCTGCCAGGATCACCACCTCTCTGACTTGCACATTTGTGGGTTCCCCAC
AGACGAATGGGATGAGTGAAAGAGTGAGTATGTTCTGTTGGGCCTTCAGTAACAGAAGACT
GATTCAGAAAGTAGCACACGTCACATTTTTCTGTAGGTTGGTTTGTTTAGTTTCATTTTTG
ATTTGTGGAACAAAA[SEQ ID NO：6].
实施例18
AGT-422基因表达
AGT-422正常分布。带有LSD析因检验(post hoc test)的一元方差分析(one way ANOVA)发现进食A组动物的基因表达趋向高于进食C组(p＝0.068)。进食A组动物的基因表达显著高于禁食A组(p＝0.002)，进食B组动物显著高于禁食B组(p＝0.014)，进食C组动物显著高于禁食C组(p＝0.039)[图12]。独立样品T检验发现，合并组数据时，进食动物的AGT-422基因表达高于禁食动物(p＜0.001；图13)。
实施例19
AGT-422序列同源性
AGT-422序列显示与褐鼠(Rattus norvegicus)克隆CH230-213K1的序列同源性。全基因及开放阅读框架尚待鉴定，人同系物也尚未确定。
实施例20
以色列沙鼠AGT-123的部分序列
使用糖尿病和非糖尿病以色列沙鼠下丘脑cDNA的差异显示PCR鉴定AGT-123。
部分核苷酸序列如下：
TGAGAGTCCATCTCAGCTTATTTCATTGAGATGTTTTGATTAAGAAGTATGACTAGATTAA
AAAATTCTATATAGCTTGGCATTGTTGATAGTTTATATATTTCACTGATTTCTGGTCCCTT
GAAAGTTACTTGGTGATCAACATAGTGTAGTGAAAGGATTGGGATGGACATTAAAAAAAAA
AAGCTT[SEQ ID NO：7]
实施例21
AGT-123基因表达
A组动物(p＝0.06)趋向随禁食提高下丘脑AGT-123的表达，B组和C组动物则随禁食显著提高(分别p＝0.02以及p＝0.01)[图14]。合并所有进食及禁食动物时，禁食动物比进食动物显著提高表达(p＝0.001)[图14]。AGT-123的表达与葡萄糖或胰岛素浓度不相关。AGT-123的表达与体重之间的关系存在倾向性，尽管统计学不显著(p＝0.08)。
实施例22
AGT-123序列同源性
AGT-123序列匹配3种小鼠已表达序列标志(gb|BG797393.1|BG797393 icl4h03.xl Kaestner ngn3 wt小鼠(Musmusculus)；gb|AI661150.1|AI661150 vaOlaO2.xl Soares小鼠淋巴结NbMLN；dbj|BB257743.1|BB257743 BB257743 RIKEN全长富集，7d)，但相应基因尚未鉴定(BLASTN版本2.2.1)。
实施例23
以色列沙鼠AGT-504的部分序列
使用糖尿病及非糖尿病以色列沙鼠基因组DNA的扩增片段长度多态性(AFLP)筛选来鉴定AGT-504。发现其在糖尿病及非糖尿病以色列沙鼠肝中表达。
部分核苷酸序列如下：
基因组DNA：
TGGNTACTCTTGNAAGCACCTTGAAAGTTCAGCCTGCTAACTTACCTTTTTAGCTTTAGAT
TGCTTAGATATTCAAATGAGAGTGTGGTGCAAATCCTGATTACAAGGAGTTTGAGTTTGGA
GTGATTGGCAATGCACTTGTGAGGCTGTGTGCCTATGGTCCTAGGACTTAGGAGGCAGGGA
TAGAAGGACCAGGTGCTGAAAGACAGCCTTGGCTAGTTAGTGGACAGATACATAAATGTAC
TGCATGAGATTCTTTCAGAATAACAACCTCCTTTTAAAGAAGTTACTTCTGACATGGAATC
TGTTGCCTGCTTTTGGATCACTACCCCCTGGTGGGACACCTTTGCCAGACCATGGAGGAAG
AACTGTCTTGAT[SEQ ID NO：8].
cDNA：
AACGTGAGCTTTTTGGAAGGCCCAGANAATTTAAGGAAAGTGTCCCGGCAAATCCTGATTA
CAAGGAGTTTGAGTTTGGAGTGATTGGCAATGCACTTGTGAGGCTGTGTGCCTATGGTCCT
AGGACTTAGGAGGCAGGGATAGAAGGACCAGGTGCTGAAAGACAGCCTTGGCTAGTTAGTG
GACAGATACATAAATGTACTGCATGAGATTCTTTCAGAATAACAACCTCCTTTTAAAGAAG
TTACTTCTGACATGGAATCTGTTGCCTGCTTTTGGATCACTACCCCCTGGTGGGACACCTT
TGCCAGACCATGGAGGAAGAACTGTCTTGATGGGANN[SEQ ID NO：9]
实施例24
AGT-504基因表达
肝AGT-504的表达正常分布，带有LSD析因(LSD post hoc)分析的方差分析(ANOVA)显示C组动物的AGT-504基因表达显著高于A组(p＝0.014)和B组(p＝0.02)(图15)。
实施例25
扩增片段长度多态性(AFLP)技术
AFLP技术是基于使用聚合酶链式反应(PCR)的基因组限制性片段亚群的扩增。利用限制性酶(EcoRI和MseI)切割DNA，将双链接头连接到DNA片段末端，产生用于扩增的模板DNA。接头序列及邻近限制性位点作为引物结合位点，用于随后的限制性片段扩增。PCR引物的3’端包含选择性核苷酸，因而只引发限制性片段亚群的DNA扩增。该方法将鉴定与肥胖/糖尿病表型有关的限制性位点中的序列差异。
使用GibcoBRL″AFLP分析系统I″和″AFLP起始引物″试剂盒，按厂家说明书进行AFLP。
在256种引物对的AFLP筛选中使用每组以色列沙鼠(n＝15)的6种基因组DNA混合物，等于按约1.4cM的密度进行基因组扫描。动物按性别分开，然后分成3组，对应于消瘦(A组)、肥胖(B组)和肥胖/糖尿病(C组)。
在下列条件下于20μl中进行PCR：94℃、30秒；65℃、30秒；以及72℃、60秒的一个循环，然后每一连续循环的退火温度下降0.7℃，进行12个循环。这产生13个循环的touchdown期。后接94℃30秒、56℃30秒和72℃60秒的23个循环。
一经扩增，便利用6％(w/v)聚丙烯酰胺凝胶分离片段，以观察(一般)50-150个条带。从胶中切下据认为动物组间差异的条带。使用以下PCR条件重新扩增目的条带：94℃2分钟、40个(94℃30秒；54℃30秒；72℃60秒)循环、72℃5分钟以及下列引物：F 5′-GTA GAC TGC GTACCA ATT C-3′[SEQ ID NO：10]和R 5′-GAC GAT GAG TCC TGA GTA A-3′[SEQID NO：11]。扩增的条带利用Applied Biosystems Big Dye测序试剂盒测序。
实施例26
引物
用于扩增并分析每个基因的引物和探针(按5′-3′方向显示)。
SYBR Green分析
AGT-119
组合1
正向：ggattatcgtgaccagataggagc [SEQ ID NO：12]
反向：acgcatcttgttgggctaatg [SEQ ID NO：13]
组合2
正向：cgcaaccaaattagccagtg [SEQ ID NO：14]
反向：gcatcttgttgggctaatgacat [SEQ ID NO：15]
AGT-120
正向：acccagatgctggctgact [SEQ ID NO：16]
反向：ctggccaccagtcagtgaataa [SEQ ID NO：17]
AGT-121
正向(插入)：aaaacatgagagaagccatactaattca [SEQ ID NO：18]
正向(缺失)：cacaaaacatgagatactaattcataagtga [SEQ ID NO：19]
反向：tgaaaccaagatagcacaaacgaa [SEQ ID NO：20]
AGT-122
正向：catcccagagtgcctaatggtt [SEQ ID NO：21]
反向：acgttgatgcattcactgtgtatct [SEQ ID NO：22]
AGT-422
正向：cagtcaccagtgggctagca [SEQ ID NO：23]
反向：cctggcagatggaagagctt [SEQ ID NO：24]
AGT-123
正向：gcttggcattgttgatagtttatatatttc [SEQ ID NO：25]
反向：cactacactatgttgatcaccaagtaactt [SEQ ID NO：26]
AGT-504
正向：gaatctgttgcctgcttttgg [SEQ ID NO：27]
反向：ctccatggtctggcaaaggt [SEQ ID NO：28]
Taqman分析
β-肌动蛋白正向：gcaaagacctgtatgccaacac [SEQ ID NO：29]
β-肌动蛋白反向：gccagagcagtgatctctttctg [SEQ ID NO：30]
探针：FAM-tccggtccacaatgcctgggaacat-TAMRA [SEQ ID NO：31]
亲环蛋白正向：cccaccgtgttcttcgaca [SEQ ID NO：32]
亲环蛋白反向：ccagtgctcagagcacgaaa [SEQ ID NO：33]
探针：FAM-cgcgtctccttcgagctgtttgc-TAMRA [SEQ ID NO：34]
本领域技术人员应当理解，此处所述本发明容许所明确描述之外的变化和修改。应当理解，本发明包括所有此类变化和修改。本发明也包括本说明书涉及或表明的所有步骤、特征、组合物和化合物，不论单个或全体，以及任何两个或多个所述步骤或特征的任意及全部组合。
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Zimmet，Paul(US only)Z
Walder，Ken(US only)
McMillan，Janine(US only)
de Silva，Andrea(US only)M
Windmill，Kelly(US only)
<120>有关肥胖和2型糖尿病的差异表达基因
<130>2574822/EJH
<140>International
<141>2002-10-16
<150>US 60/330,149
<151>2001-10-16
<160>34
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>181
<212>DNA
<213>以色列沙鼠(Psammomys obesus)
<220>
<221>misc-特征
<222>(48)..(50)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(52)..(52)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(164)..(164)
<223>n＝任意核苷酸
<400>1
aatgaaagaa ttgattgata cgcaaccaaa ttagccagtg aggttagnnn cnggattatc 60
gtgaccagat aggagccttg gaaaatgact aagaaaaatg aaaaacagcc taaaatgtca 120
ttagcccaac aagatgcgtt aaaacgcctg gatcaagtta gaangcagaa aagcgaaagc 180
c 181
<210>2
<211>814
<212>DNA
<213>以色列沙鼠
<220>
<221>misc-特征
<222>(374)..(374)
<223>n＝任意核苷酸
<400>2
gctgatggcg atgaatgaac actgcgtttg ctggccttat caattcccgc tttttcttgg 60
atgaaaaaga ctaaccatga tcgggcccaa cggcggaagt cgcttttgtc accagtagtg 120
atggtgccgg gatcaagtgc cacgattgag cgtttcaatt cactgattgc gatgcttaat 180
aaagattcgc cgcaccctca cagtgtgtta aagattaaag tcatgaaaga tggcagttta 240
aaatacaagg gcagcattaa tcgcggtgat aatgaaccct ttattgtgat tggttttgaa 300
aataataaag atggctatag taatattaag aagcaagcaa gctggctaga tattgccttt 360
tatgagatct cgcnaactta taaatttaac aactttaagg cctttggcca ttcaaatgga 420
gggctggtgt ggacatattg gttagagcat tattattcag agtatgagtc agaaatcaaa 480
atcaagcggt tgatgacttt ggcttcacca tttaactttg acgaagacaa tctgaatcac 540
cggacccaga tgctggctga ctttattaaa tatcggaaac gacttccaaa aacgctcaaa 600
gtttattcac tgactggtgg ccagacctat gaatctgacg ggattgttcc tgaaaatagt 660
gtagccgcag ccaagtatat tttccaaaat caagtgaaga gctttatgga aattacggtt 720
acgggtaagc agctaatcac tcagatttac cgcaaaatga acaagtagtg ctagtgatga 780
atccaccact cactaaagat aataaaaaaa aaaa 814
<210>3
<211>6317
<212>DNA
<213>以色列沙鼠
<400>3
cagactcctt ggaaattaag gaatgcaatt ctgccaccat gatggaagga ctgaaaaaac 60
gtacaaggaa ggcctttgga atacggaaga aagaaaaaga cactgactct acaggctcac 120
cagatcgaga tggaatgcag cccagcccac acgagctccc ctaccatagc aaagcagagt 180
gtgcccgaga aggagggaac aaagcttcga agaaaagcaa tggggcacca aatggatttt 240
atgcggaaat tgattgggaa agatataact cacctgagct ggatgaagaa ggttacagca 300
tcagacctga ggaaccaggc tctaccaaag gaaagcactt ttattcttca agtgaatccg 360
aagaggagga agaatcgcac aagaagttca atatcaagat taaacccttg cagtccaagg 420
acatccttaa gaatgctgca acagtagacg agctgaaggc ttccataggc aacattgcac 480
tttccccttc gcctgtgagg aaaagtccga ggcgcagccc gggtgcaatt aaaaggaact 540
tatccagtga agaagtcgca agacccaggc gttccacccc aactccagaa cttacaagca 600
agaagcctct ggacgacact ctggcccttg ctcccctctt tggcccaccg ttagaatctg 660
cttttgatgg acacaagacg gaagttcttt tagatcagcc tgagatatgg ggttcaggcc 720
aaccagttaa cccaagcatg gagtcaccaa agctagcaag accttttccc actggaaccc 780
ctccacctct gcctccaaaa actgtaccag ccaccccgcc tcggacaggc tcccccttaa 840
cagtggcgac aggaaatgac caggcagcca cagaggccaa aattgagaaa ctaccatcca 900
tcagtgacct ggacagcatt tttggccccg tgttgtcccc caagtctgtt gctgttaata 960
ctgaggagac gtgggtccat ttctctgatg catccccgga acatgttact ccagagttga 1020
ctccaaggga aaaggtggtg accccaccag ctgcatcaga catcccagct gactccccaa 1080
ctccaggccc gcctggcccc ccaggctcgg caggtccccc agggcctcct ggtcctcgca 1140
atgtaccatc tccgctcaat ttagaagaag tccagaagaa agtcgctgag cagaccttca 1200
ttaaagatga ttacttagaa acactctcat ctcctaaaga gtgtgggttg ggacagagag 1260
caactccacc tcccccacca ccacccacct acaggactgt ggtttcgtcc cccggacctg 1320
gctcgggcag tggtacgggg accgccagtg gtgcatcgtc ccctgctcgg ccagccaccc 1380
ccttagttcc ttgcagctgc tccactccgc ctccacctcc tccccggcct ccatcccggc 1440
caaagctacc tccaggaaag cctggagttg gagacgtgtc cagacctttt agcccaccca 1500
tacactcctc cagccctcct ccaatagcac ccttagcccg ggctgaaagc acttcttcaa 1560
tatcatcaac caattccctg agcgcagcca ccactcccac agttgagaat gaacagsctt 1620
ccctcgtttg gtttgacaga ggaaagtttt atttgacttt tgaaggttct tccaggggac 1680
ccagtcctct aactatgggg gcccaggaca ccctcccggt tgcagcagca ttcacagaaa 1740
ctgtcaatgc ctacttcaaa ggagcagatc caagcaaatg cattgttaag atcacgggag 1800
aaatggtgtt gtcctttcct gctggcatca ccagacactt tgccaacaac ccatccccag 1860
ctgctctgac ttttcgagtg ataaattcca gcaggttaga gcacgtcctg ccgaaccccc 1920
agctcctctg ctgcgataac acacaaaatg atgccaatac caaggaattc tgggtaaaca 1980
tgccaaattt gatgacccac ctgaagaagg tctctgaaca aaaaccccag gctacatatt 2040
acaatgtgga catgctcaag tatcaggtgt cagcccaggg cattcagtcc acacctctga 2100
acttggcggt gaactggcgc tgtgagcctt ccagcactga cctgcgcata gattataagt 2160
acaacacgga tgccatgtcc accgcagtgg cccttaacaa cgtgcagttc ctggtcccca 2220
ttgatggagg agtgaccaag ctccaggctg tccttcctcc agcagtctgg aatgctgaac 2280
aacaaagaat attatggaag attcctgata tctcccagaa gtcagaaaat ggaggcgtag 2340
gttctttact ggcaagattt caattagccg aaggcccaag caaaccttcc ccactggtcg 2400
tgcagttcac gagtgaaggg agcactctgt ctggctgcga cattgagctt gtcggagcag 2460
ggtacgggtt ttcactcatc aagaagaggt ttgctgcagg aaaatacttg gccgataact 2520
aataaaatgt catgcaagga ttttgaagat ccatgtcctg gagaactgtt gtctgagaga 2580
catattttaa tctggtttga ggaaaacaaa ccaaccgatg tctgtacgtg ggctctgtca 2640
gctggaaggt cccggctttc agccgtgatt tcccacaccc agtacaagga ggatcagttc 2700
tacagtactt acttctaggt gtactattgt taatggtttt aaaatgtaat tattgtattt 2760
gtaaactgta ccttcattcc agtaaggcag ttagacacct gagttttagc ttttttttcc 2820
attcctgaaa cggatgtaat ttaaactgcg gtatgtaaat ttaatagtag tactgtcgaa 2880
tggcacaatg cttacagaga tacagtgcat tttgtcaata tataaaattt aaatataatg 2940
ttgatagtta ccataaaggg ggtgccacac atcaagaacc ttaaatggaa ccagaaacaa 3000
gcaagcaaac aaacaaacaa acaaacaaaa ccttactttt cttcactcct tattacattt 3060
tcctctagag ctaaagaaac ttctagcttc ggtttagtgg gttaaattca gaaactattt 3120
cagaaaaaaa aaaaaattct gaagttacag catattcaaa gagaagcatt aattaccact 3180
tttttaaaag cttttttttc aaaccgcaaa tttcataaaa atgcaaactg tgtaaacagg 3240
gcctcttatt tttataactt gtgtaaaaag ggaaaatcaa ttcatattta aagtttaagt 3300
agtattaaat tatatccaag agtgaagagg atgttgaaat cttacctgac cccatgcccc 3360
ttctttgcag tttagcaaat gttgagattg ctaaatcatc agattaaagc caacttgatt 3420
tttaaagttt caagactttc tgaagctgaa ctggttaaaa cttttgcaca attgcttgga 3480
acggaggggg aggggcctct ctggtccagc acaggtacct tgtttcttcc ctactcacaa 3540
gaatcaaaac aatgaaagtc aagaaccaca gaggggggaa attagttccc tgttcagtcc 3600
aaaaggagaa ctttaaactt atcatttacg tctttgggga aggaagaaat aagctttata 3660
agtgaaatcc tattcacctt gttgtcctat gaatgttttc ggggtgactt taagattcat 3720
tgtatacatg tgcgagtctc tgctattctt ggggagttga aagcagagcc aggccagtgg 3780
ccttgaagtt cagtaaatgc cacagttctg gggcaaaggt aggcatgagg gttctgcccc 3840
tcagcacagg aatcagagca gtgtcttgta aggtctaaag attaagtctt ccagtaagcc 3900
acaagttatt ttgtaacaga gttggggagt tttggcactc gctgctgact ttcattttgt 3960
atccactcaa atggagtctt caactctttt caactttaga atcaaattaa tttttttttt 4020
tttttttttt tttttacaca aggtttactc tgtgtaactg tcctggatgt tctggaactc 4080
tttttgtaga ccaggctggc ctcgaactca gagagatcca cctgcctgtg ctccccaagt 4140
gctgggatta aaggcgtgtg ccaccatgcc tggcttagat taaatttttt aagtcttact 4200
tcaccagtga gattgtgatt ggcagttgtt tcgagagagc tttgtagctt aatctatgtt 4260
ctcttcaatc aatgcttgct accaaaagaa tgtccaaaat gatctatttt tcctgggaac 4320
aattcatcta tttaaatagg ctcttgccta gttccccaaa gcagcctgtc tttgaaggtt 4380
tttttgaaca aaataatttt ttcacaaaaa gtttggtttt gaaatcaaaa tagagaaata 4440
aaatgtaaat tttaaatcta atggaacatg aggaaatgaa aaaacttaag ccaatggaga 4500
gtaaaagcag aaaaaaatga aacttaccta gaatgtgatt atattatgtt tttaagtagt 4560
caattcatgg aaaaatattg aatattaaca caaagcatat taaaaatatg taaatattac 4620
tgtttctcat gtctttctct ttatatctta ttttatatag ttttagaatg aattggtcat 4680
taaatacagt gtttctttcc aaagaataat tttgttgata ttgtaaaaat gtaattaaag 4740
atagagactt gaatagtctc taacattatc caaatgtttc taggaaccaa attcaaagct 4800
gtgaagaaag cttgcaatcc ctgaattggc ttttgtgaaa tggaatgacg gtgggtaatc 4860
tcaaaattca gacttgaata gtcagagctg aagtggggaa tgggtggttc cttctggttc 4920
agaaaatagg tcaaataaca gcatttgctc gcatcaggga tggagatgtt ggtgatgttt 4980
ggttttactc tcgcaggctt tcgtctcctg ttgaaggtgt atctgtagcc cagtgggata 5040
agagttcatg ttctgagatg tggtcctaga caaggcaggc aaggtttcag tcatcaatac 5100
ctatcaggtc aggttccctt ttgtctatac aaaatgggtt agctcatagc cagatggttt 5160
gcaggacagt gagctaaatt aggacaagat tctggttagc caaagagctg tttcctaagc 5220
actctgattt ttttttaaag ctgatagaaa gtgtaaatgt tctattttga cgacatggaa 5280
agtatgtttt cctcttcaaa taaatccctt atttttatga aattttcaaa aataaattct 5340
tgtttaaaat agtctgaatg ttatcatagt tggaacttgg caattactaa tttgaaattc 5400
tatgagatgt atctccagct aaaatggcaa ttccctgtat gctatctggg gctcagttta 5460
cctctaagga agactgtcag agtgcaaatg gttttgagtg acgggaaagt caaagggcaa 5520
atgtttgtgc ttttttcttt ttctgtctta tatacttctt cttggtctca gaatgcaaag 5580
tatcagagcc atagttacac acatttccac ttttaacgct tcttttgaag gaagcagatc 5640
cacttttgcc ccgccactca tgcctgctgt gcagactcag acgagtccct gccctcttca 5700
cgcctttggg gtgagagggg agccatatgt aagtagtttt caagcttttc ttaatgggac 5760
ttttcttttt ctaataaaat catgcctgga atcctgtaaa gattgttgcc tggctgtgaa 5820
ggggcttctc cagatcctga aatatagcat cacaatacgt aaatgactcc cgatggatct 5880
cccagctctg aagacttgct cttctacttc acatgtgtag ccacgacgat cagctggcac 5940
acagtacaat tagctgtgta gtgagtgctc cccagctatc agtcatgaaa catatcactt 6000
tgctcaacct gtttttaaaa aagctccaaa atggtaaaaa tgcttttcag tctttgtttt 6060
cccaataatg gtattgaggc ctaagctgat taacttcccc caaagtggta ccacagctgg 6120
taacgacccc aatgatcctg aaaaaaatgg aatgagtacc ttgctgtttc rtttagttya 6180
ttttgggaaa ataatccatt tgaatgtcaa gataaaaagg caccaggaaa agtcctcatt 6240
ggaaggatta aagatgagcc tggtaagatg ttaagatgta agatgttaag atgtgttact 6300
gtaaaaaaaa aaagctt 6317
<210>4
<211>827
<212>PRT
<213>以色列沙鼠
<400>4
Met Met Glu Gly Leu Lys Lys Arg Thr Arg Lys Ala Phe Gly Ile Arg
1 5 10 15
Lys Lys Glu Lys Asp Thr Asp Ser Thr Gly Ser Pro Asp Arg Asp Gly
20 25 30
Met Gln Pro Ser Pro His Glu Leu Pro Tyr His Ser Lys Ala Glu Cys
35 40 45
Ala Arg Glu Gly Gly Asn Lys Ala Ser Lys Lys Ser Asn Gly Ala Pro
50 55 60
Asn Gly Phe Tyr Ala Glu Ile Asp Trp Glu Arg Tyr Asn Ser Pro Glu
65 70 75 80
Leu Asp Glu Glu Gly Tyr Ser Ile Arg Pro Glu Glu Pro Gly Ser Thr
85 90 95
Lys Gly Lys His Phe Tyr Ser Ser Ser Glu Ser Glu Glu Glu Glu Glu
100 105 110
Ser His Lys Lys Phe Asn Ile Lys Ile Lys Pro Leu Gln Ser Lys Asp
115 120 125
Ile Leu Lys Asn Ala Ala Thr Val Asp Glu Leu Lys Ala Ser Ile Gly
130 135 140
Asn Ile Ala Leu Ser Pro Ser Pro Val Arg Lys Ser Pro Arg Arg Ser
145 150 155 160
Pro Gly Ala Ile Lys Arg Asn Leu Ser Ser Glu Glu Val Ala Arg Pro
165 170 175
Arg Arg Ser Thr Pro Thr Pro Glu Leu Thr Ser Lys Lys Pro Leu Asp
180 185 190
Asp Thr Leu Ala Leu Ala Pro Leu Phe Gly Pro Pro Leu Glu Ser Ala
195 200 205
Phe Asp Gly His Lys Thr Glu Val Leu Leu Asp Gln Pro Glu Ile Trp
210 215 220
Gly Ser Gly Gln Pro Val Asn Pro Ser Met Glu Ser Pro Lys Leu Ala
225 230 235 240
Arg Pro Phe Pro Thr Gly Thr Pro Pro Pro Leu Pro Pro Lys Thr Val
245 250 255
Pro Ala Thr Pro Pro Arg Thr Gly Ser Pro Leu Thr Val Ala Thr Gly
260 265 270
Asn Asp Gln Ala Ala Thr Glu Ala Lys Ile Glu Lys Leu Pro Ser Ile
275 280 285
Ser Asp Leu Asp Ser Ile Phe Gly Pro Val Leu Ser Pro Lys Ser Val
290 295 300
Ala Val Asn Thr Glu Glu Thr Trp Val His Phe Ser Asp Ala Ser Pro
305 310 315 320
Glu His Val Thr Pro Glu Leu Thr Pro Arg Glu Lys Val Val Thr Pro
325 330 335
Pro Ala Ala Ser Asp Ile Pro Ala Asp Ser Pro Thr Pro Gly Pro Pro
340 345 350
Gly Pro Pro Gly Ser Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Arg Asn
355 360 365
Val Pro Ser Pro Leu Asn Leu Glu Glu Val Gln Lys Lys Val Ala Glu
370 375 380
Gln Thr Phe Ile Lys Asp Asp Tyr Leu Glu Thr Leu Ser Ser Pro Lys
385 390 395 400
Glu Cys Gly Leu Gly Gln Arg Ala Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro
405 410 415
Thr Tyr Arg Thr Val Val Ser Ser Pro Gly Pro Gly Ser Gly Ser Gly
420 425 430
Thr Gly Thr Ala Ser Gly Ala Ser Ser Pro Ala Arg Pro Ala Thr Pro
435 440 445
Leu Val Pro Cys Ser Cys Ser Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro Arg Pro
450 455 460
Pro Ser Arg Pro Lys Leu Pro Pro Gly Lys Pro Gly Val Gly Asp Val
465 470 475 480
Ser Arg Pro Phe Ser Pro Pro Ile His Ser Ser Ser Pro Pro Pro Ile
485 490 495
Ala Pro Leu Ala Arg Ala Glu Ser Thr Ser Ser Ile Ser Ser Thr Asn
500 505 510
Ser Leu Ser Ala Ala Thr Thr Pro Thr Val Glu Asn Glu Gln Ala Ser
515 520 525
Leu Val Trp Phe Asp Arg Gly Lys Phe Tyr Leu Thr Phe Glu Gly Ser
530 535 540
Ser Arg Gly Pro Ser Pro Leu Thr Met Gly Ala Gln Asp Thr Leu Pro
545 550 555 560
Val Ala Ala Ala Phe Thr Glu Thr Val Asn Ala Tyr Phe Lys Gly Ala
565 570 575
Asp Pro Ser Lys Cys Ile Val Lys Ile Thr Gly Glu Met Val Leu Ser
580 585 590
Phe Pro Ala Gly Ile Thr Arg His Phe Ala Asn Asn Pro Ser Pro Ala
595 600 605
Ala Leu Thr Phe Arg Val Ile Asn Ser Ser Arg Leu Glu His Val Leu
610 615 620
Pro Asn Pro Gln Leu Leu Cys Cys Asp Asn Thr Gln Asn Asp Ala Asn
625 630 635 640
Thr Lys Glu Phe Trp Val Asn Met Pro Asn Leu Met Thr His Leu Lys
645 650 655
Lys Val Ser Glu Gln Lys Pro Gln Ala Thr Tyr Tyr Asn Val Asp Met
660 665 670
Leu Lys Tyr Gln Val Ser Ala Gln Gly Ile Gln Ser Thr Pro Leu Asn
675 680 685
Leu Ala Val Asn Trp Arg Cys Glu Pro Ser Ser Thr Asp Leu Arg Ile
690 695 700
Asp Tyr Lys Tyr Asn Thr Asp Ala Met Ser Thr Ala Val Ala Leu Asn
705 710 715 720
Asn Val Gln Phe Leu Val Pro Ile Asp Gly Gly Val Thr Lys Leu Gln
725 730 735
Ala Val Leu Pro Pro Ala Val Trp Asn Ala Glu Gln Gln Arg Ile Leu
740 745 750
Trp Lys Ile Pro Asp Ile Ser Gln Lys Ser Glu Asn Gly Gly Val Gly
755 760 765
Ser Leu Leu Ala Arg Phe Gln Leu Ala Glu Gly Pro Ser Lys Pro Ser
770 775 780
Pro Leu Val Val Gln Phe Thr Ser Glu Gly Ser Thr Leu Ser Gly Cys
785 790 795 800
Asp Ile Glu Leu Val Gly Ala Gly Tyr Gly Phe Ser Leu Ile Lys Lys
805 810 815
Arg Phe Ala Ala Gly Lys Tyr Leu Ala Asp Asn
820 825
<210>5
<211>366
<212>DNA
<213>以色列沙鼠
<220>
<221>misc-特征
<222>(305)..(305)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(308)..(308)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(315)..(315)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(317)..(317)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(327)..(327)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(339)..(339)
<223>n＝任意核苷酸
<400>5
tcgcggatcc agacgctgcg tttgctggct ttgatgaaat ttttaatttt tcaatatcag 60
gaatgtttaa ctatgccatg aatttatggt agtcaaggtt ggaaggcagg ggagaggaca 120
cagggagtaa aggcacttgc ccccaagcct tacaacctga attccatccc agagtgccta 180
atggttgaag gacggaactg aatatctcta gctgtcctct atcctccaca gatacacagt 240
gaatgcatca acgtaaaaaa ttacagctag aaataatgtc gtgccattca ttgtatttta 300
cattngtnca tcttngnttt tccatantaa aaatgtctna gacataccac ttaaaaaaaa 360
aagctt 366
<210>6
<211>442
<212>DNA
<213>以色列沙鼠
<400>6
ccctatccgc tacccctggg agggacacaa aaacacattt tgtgtttttg aaaaaactga 60
ggtcaccaga ctcttgtatt gtcttcttgg acttctctca ggaacactca ggactctccc 120
cacacaacac cgttcttgaa ccgttctaac aaatgtttaa agtggtttcc tttgaaccac 180
attaaattta gtttaagcag tcaccagtgg gctagcagtt ctgggttggg cagcacatct 240
tgtacaagct cttccatctg ccaggatcac cacctctctg acttgcacat ttgtgggttc 300
cccacagacg aatgggatga gtgaaagagt gagtatgttc tgttgggcct tcagtaacag 360
aagactgatt cagaaagtag cacacgtcac atttttctgt aggttggttt gtttagtttc 420
atttttgatt tgtggaacaa aa 442
<210>7
<211>189
<212>DNA
<213>以色列沙鼠
<400>7
tgagagtcca tctcagctta tttcattgag atgttttgat taagaagtat gactagatta 60
aaaaattcta tatagcttgg cattgttgat agtttatata tttcactgat ttctggtccc 120
ttgaaagtta cttggtgatc aacatagtgt agtgaaagga ttgggatgga cattaaaaaa 180
aaaaagctt 189
<210>8
<211>378
<212>DNA
<213>以色列沙鼠
<220>
<221>misc-特征
<222>(4)..(4)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(13)..(13)
<223>n＝任意核苷酸
<400>8
tggntactct tgnaagcacc ttgaaagttc agcctgctaa cttacctttt tagctttaga 60
ttgcttagat attcaaatga gagtgtggtg caaatcctga ttacaaggag tttgagtttg 120
gagtgattgg caatgcactt gtgaggctgt gtgcctatgg tcctaggact taggaggcag 180
ggatagaagg accaggtgct gaaagacagc cttggctagt tagtggacag atacataaat 240
gtactgcatg agattctttc agaataacaa cctcctttta aagaagttac ttctgacatg 300
gaatctgttg cctgcttttg gatcactacc ccctggtggg acacctttgc cagaccatgg 360
aggaagaact gtcttgat 378
<210>9
<211>342
<212>DNA
<213>以色列沙鼠
<220>
<221>misc-特征
<222>(27)..(27)
<223>n＝任意核苷酸
<220>
<221>misc-特征
<222>(341)..(342)
<223>n＝任意核苷酸
<400>9
aacgtgagct ttttggaagg cccaganaat ttaaggaaag tgtcccggca aatcctgatt 60
acaaggagtt tgagtttgga gtgattggca atgcacttgt gaggctgtgt gcctatggtc 120
ctaggactta ggaggcaggg atagaaggac caggtgctga aagacagcct tggctagtta 180
gtggacagat acataaatgt actgcatgag attctttcag aataacaacc tccttttaaa 240
gaagttactt ctgacatgga atctgttgcc tgcttttgga tcactacccc ctggtgggac 300
acctttgcca gaccatggag gaagaactgt cttgatggga nn 342
<210>10
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>10
gtagactgcg taccaattc 19
<210>11
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>11
gacgatgagt cctgagtaa 19
<210>12
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-119(set1)正向引物
<400>12
ggattatcgt gaccagatag gagc 24
<210>13
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-119(set1)反向引物
<400>13
acgcatcttg ttgggctaat g 21
<210>14
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-119(set2)正向引物
<400>14
cgcaaccaaa ttagccagtg 20
<210>15
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<223>AGT-119(set2)反向引物
<400>15
gcatcttgtt gggctaatga cat 23
<210>16
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-120正向引物
<400>16
acccagatgc tggctgact 19
<210>17
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-120反向引物
<400>17
ctggccacca gtcagtgaat aa 22
<210>18
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-121正向(插入)引物
<400>18
aaaacatgag agaagccata ctaattca 28
<210>19
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-121反向(缺失)引物
<400>19
cacaaaacat gagatactaa ttcataagtg a 31
<210>20
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-121反向引物
<400>20
tgaaaccaag atagcacaaa cgaa 24
<210>21
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-122正向引物
<400>21
catcccagag tgcctaatgg tt 22
<210>22
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-122反向引物
<400>22
acgttgatgc attcactgtg tatct 25
<210>23
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-422正向引物
<400>23
cagtcaccag tgggctagca 20
<210>24
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-422反向引物
<400>24
cctggcagat ggaagagctt 20
<210>25
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-123正向引物
<400>25
gcttggcatt gttgatagtt tatatatttc 30
<210>26
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-123反向引物
<400>26
cactacacta tgttgatcac caagtaactt 30
<210>27
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-504正向引物
<400>27
gaatctgttg cctgcttttg g 21
<210>28
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AGT-504反向引物
<400>28
ctccatggtc tggcaaaggt 20
<210>29
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>β-肌动蛋白正向引物
<400>29
gcaaagacct gtatgccaac ac 22
<210>30
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>β-肌动蛋白反向引物
<400>30
gccagagcag tgatctcttt ctg 23
<210>31
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>β-肌动蛋白探针
<400>31
tccggtccac aatgcctggg aacat 25
<210>32
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>亲环蛋白正向引物
<400>32
cccaccgtgt tcttcgaca 19
<210>33
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>亲环蛋白反向引物
<400>33
ccagtgctca gagcacgaaa 20
<210>34
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>亲环蛋白探针
<400>34
cgcgtctcct tcgagctgtt tgc 23
Claims (47)
1.一种核酸分子，其包含编码表达蛋白质或其衍生物或同系物的核苷酸序列、或与编码表达蛋白质或其衍生物或同系物的序列互补的核苷酸序列，其中所述核酸分子在肥胖动物中与消瘦动物相比、或在禁食动物与进食动物相比、或在糖尿病动物与非糖尿病动物相比，于胃、肝和/或下丘脑组织中差异表达。
2.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：1所示核苷酸序列、或与其具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：1或其互补形式杂交的核苷酸序列。
3.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：2所示核苷酸序列、或与其具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：2或其互补形式杂交的核苷酸序列。
4.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：3所示核苷酸序列、或与其具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：3或其互补形式杂交的核苷酸序列。
5.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：5所示核苷酸序列、或与其具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：5或其互补形式杂交的核苷酸序列。
6.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：6所示核苷酸序列、或与其具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：6或其互补形式杂交的核苷酸序列。
7.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：7所示核苷酸序列、或与其具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：6或其互补形式杂交的核苷酸序列。
8.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：8所示核苷酸序列、或与其具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：6或其互补形式杂交的核苷酸序列。
9.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：9所示核苷酸序列、或与其具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：6或其互补形式杂交的核苷酸序列。
10.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：1所示核苷酸序列。
11.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：2所示核苷酸序列。
12.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：3所示核苷酸序列。
13.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含编码SEQ IDNO：4所示氨基酸序列的核苷酸序列。
14.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：5所示核苷酸序列。
15.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：6所示核苷酸序列。
16.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：7所示核苷酸序列。
17.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：8所示核苷酸序列。
18.权利要求1的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含SEQ ID NO：9所示核苷酸序列。
19.包含由一种核酸分子编码的核苷酸或氨基酸序列的分离的分子，该核酸分子在肥胖动物中与消瘦动物相比、或在禁食动物与进食动物相比、或在糖尿病动物与非糖尿病动物相比，于胃、肝和/或下丘脑组织中差异表达。
20.权利要求19的分离的分子，由SEQ ID NO：1所示核酸分子、或与SEQID NO：1具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：1或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
21.权利要求19的分离的分子，由SEQ ID NO：2所示核酸分子、或与SEQID NO：2具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：2或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
22.权利要求19的分离的分子，由SEQ ID NO：3所示核酸分子、或与SEQID NO：3具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：3或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
23.权利要求19的分离的分子，由SEQ ID NO：5所示核酸分子、或与SEQID NO：5具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：5或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
24.权利要求19的分离的分子，由SEQ ID NO：6所示核酸分子、或与SEQID NO：6具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：6或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
25.权利要求19的分离的分子，由SEQ ID NO：7所示核酸分子、或与SEQID NO：7具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：7或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
26.权利要求19的分离的分子，由SEQ ID NO：8所示核酸分子、或与SEQID NO：8具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：8或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
27.权利要求19的分离的分子，由SEQ ID NO：9所示核酸分子、或与SEQID NO：9具有至少约30％相似性的核苷酸序列、或能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：9或其互补形式杂交的核苷酸序列编码。
28.权利要求19的分离的分子，其中该分子是蛋白质。
29.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：1所示核苷酸序列编码。
30.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：2所示核苷酸序列编码。
31.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：3所示核苷酸序列编码。
32.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：4所示核苷酸序列编码。
33.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：5所示核苷酸序列编码。
34.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：6所示核苷酸序列编码。
35.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：7所示核苷酸序列编码。
36.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：8所示核苷酸序列编码。
37.权利要求28的分离的蛋白质，由SEQ ID NO：9所示核苷酸序列编码。
38.分离的蛋白质，选自：
(i)在肥胖动物中与消瘦动物相比差异表达于下丘脑或肌肉组织中的核酸分子编码的蛋白质或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(ii)在禁食动物中与进食动物相比差异表达于肝组织中的核酸分子编码的蛋白质或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(iii)基本如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(iv)基本如SEQ ID NO：2所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(v)基本如SEQ ID NO：3所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(vi)基本如SEQ ID NO：4所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(vii)基本如SEQ ID NO：5所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(viii)基本如SEQ ID NO：6所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(ix)基本如SEQ ID NO：7所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(x)基本如SEQ ID NO：8所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(xi)基本如SEQ ID NO：9所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物、或编码与该序列具有至少约30％相似性的氨基酸序列的序列编码的蛋白质，或所述蛋白质的衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物；
(xii)能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：1所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xiii)能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：2所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xiv)能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：3所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xv)能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xvi)能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：6所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xvii)能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：7所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xviii)能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：8所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xix)能够在低严谨性条件下与SEQ ID NO：9所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或类似物杂交的核酸分子编码的蛋白质；
(xx)段落(i)-(xix)中任一项定义的同源二聚体形式的蛋白质；以及
(xxi)段落(i)-(xix)中任一项定义的异源二聚体形式的蛋白质。
39.调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504中一种或多种在哺乳动物中表达的方法，所述方法包含在足以上调或下调或调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504表达的时间和条件下，使AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504接触有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504表达的调节剂。
40.调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504在哺乳动物中活性的方法，所述方法包含在足以升高或降低AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504活性的时间和条件下，给予所述哺乳动物调节有效量的一种分子。
41.治疗遭受以肥胖、厌食、糖尿病和/或能量失衡中的一种或多种症状为特征的疾病的哺乳动物的方法，所述方法包含在足以调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504表达或足以调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504活性的时间和条件下，给予所述哺乳动物有效量的一种因子。
42.治疗遭受以肥胖、厌食、糖尿病或能量失衡中的一种或多种症状为特征的疾病的哺乳动物的方法，所述方法包含给予所述哺乳动物有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504。
43.能够调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物、同系物或类似物表达的物质在制备用于治疗以肥胖、厌食、糖尿病和/或能量失衡为特征的疾病的药物中的用途。
44.能够调节AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物活性的物质在制备用于治疗以肥胖、厌食、糖尿病和/或能量失衡为特征的疾病的药物中的用途。
45.AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物、同系物或类似物、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物、同系物、类似物、化学等价物或模拟物在制备用于治疗以肥胖、厌食、糖尿病和/或能量失衡为特征的疾病的药物中的用途。
46.包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504表达、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504活性调节剂以及一种或多种药物可接受载体和/或稀释剂的组合物。
47.检测受试者生物样品中AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物或同系物的方法，所述方法包含在足以形成复合物的时间和条件下，使所述生物样品接触AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其抗原性衍生物或同系物的特异性抗体，然后检测该复合物。
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