CN1594299A - 双苯并异唑酮类化合物及其合成和应用 - Google Patents
双苯并异唑酮类化合物及其合成和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1594299A CN1594299A CN 03156590 CN03156590A CN1594299A CN 1594299 A CN1594299 A CN 1594299A CN 03156590 CN03156590 CN 03156590 CN 03156590 A CN03156590 A CN 03156590A CN 1594299 A CN1594299 A CN 1594299A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bis
- compound
- benzisothiazol
- radical
- ethane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及双苯并异唑酮类化合物的合成及其组合物的制备，以及双苯并异唑酮类化合物的药学用途，尤其在制备抗肿瘤、抗病毒和抗菌药物中的应用。
Description
发明领域
本发明涉及双苯并异唑酮类化合物，合成方法和含有其的药物组合物，以及双苯并异唑酮类化合物的药学用途，尤其在制备抗肿瘤、抗病毒和抗菌药物中的应用。
背景技术
近二十年来，硒的生物化学研究取得一系列重要突破和进展，有机硒化合物在生命科学方面的特征及其广泛的药理作用日益受到重视。研究表明，有机硒化合物在抗炎、抗氧化、抗肿瘤和治疗心脑血管疾病方面有明显的作用，并能对免疫系统进行调节。代表性的有机硒药物依布硒啉(Ebselen)已进入III期临床研究。
依布硒啉，即2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮(INN：Ebselen)，是国外开发中的抗炎新药，其特点是低毒并具有广泛的药理活性，为活性氧相关疾病的治疗提供了一个很有前途的手段，并为有机硒药物的发展展示了广阔的前景。理论认为该化合物是模拟谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)最成功的小分子有机硒化合物，可催化GSH还原分解各种有机氢过氧化物。
其类似物苯并异噻唑酮是较强的抗氧化剂，同时也是一种很好的杀菌剂，对细菌、真菌均有抑制作用，具有较为广泛的生物功能特点。它不仅可杀菌同时还可以抑制血小板聚集防止血栓的形成，抗动脉粥样硬化，防止心脏病的发作。在抗炎活性与其含硒类似物Ebselen的作用相似。异噻唑酮对逆转录病毒还有很好的抑制作用。但双苯并异唑酮类化合物合成及其应用如：双异噻唑酮的对称结构；双异碲唑酮的对称结构；异噻唑酮与异硒唑酮的不对称结构；异噻唑酮与异碲唑酮的不对称结构；异硒唑酮与异碲唑酮的不对称结构，尚未有人报道。在生物活性研究方面，如以上一系列双苯并异唑酮类化合物的含硫、碲有机化合物的抗肿瘤、抗菌研究尚未见报道。
我们选择苯并异硒唑酮作为基本母核，将硒替换成其同族元素硫，碲合成了相应的双苯并异唑酮类化合物，并研究了其抗肿瘤、抗菌活性。
发明内容
本发明涉及以下通式的双苯并异唑酮类化合物及其药物学上可接受的盐：
其中R1和R2是相同或不同的，彼此独立选自S，Se或Te；
其中R是C1-C20线性或支化、饱和或不饱和的二价烃基，C6-C30亚芳基，C5-C20亚环烷基，C5-C20亚杂环基，含有碳环、杂环或芳环的C4-C30二价烃基，其中碳环、杂环或芳环可以位于链中或链端，有机基磺酰基，或羰基有机基羰基(有机基包括亚烷基、亚烯基、亚芳基、亚杂环基等)，所有这些基团是取代或未取代的，例如被酸基、酯基、羟基、氨基、卤素、酰胺基等取代，其碳链可以任意插入选自O、N和S中的一个或多个杂原子；
其中R优选是(-CH2)n-，其中n是1-8；或-(C6H4)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-SS-(CH2)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-NH-(CH2)n-，其中n是1-3；或-C(＝O)-R’-C(＝O)-，其中R’是二价烃基，如亚烷基，亚烯基，亚芳基，亚环烷基或亚杂环基；或-(CH2)n-O-(CH2)n-，其中n是1-4。
尤其优选的是以下结构式的化合物：
n＝2-8；
R1＝R2或R1≠r2 其中R1、r2＝S或Se或Te
n ＝1-3；
R1＝R2或R1≠R2 其中R1、R2＝S或Se或Te
n ＝1-3；
R1＝R2或R1≠R2 其中R1、R2＝S或Se或Te
本发明的另一个目的是提供上述通式化合物的制备方法，包括以下步骤：让以下结构式III和IV的化合物：
与结构式H2N-R-NH2的化合物在-20℃到5℃的温度下，在惰性溶剂中，在碱性条件下，在惰性气体保护下反应制得所需的化合物。
其中R1和R2是相同或不同的，彼此独立选自S，Se或Te；
其中R是C1-C20线性或支化、饱和或不饱和的二价烃基，C6-C30亚芳基，C5-C20亚环烷基，C5-C20亚杂环基，含有碳环、杂环或芳环的C4-C30二价烃基，其中碳环、杂环或芳环可以位于链中或链端，有机基磺酰基，或羰基有机基羰基，所有这些基团的碳链可以任意插入选自O、N和S中的一个或多个杂原子；
其中R优选是(-CH2)n-，其中n是1-8；-(C6H4)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-SS-(CH2)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-NH-(CH2)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-O-(CH2)n-，其中n是1-4。
适宜的惰性溶剂包括例如四氢呋喃，二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，二氯甲烷，乙醚等。
适合的碱性条件例如为pH8-11。
按照上述方法，获得了本发明结构式I和II的两种异构体，这两种异构体一般以1∶1的摩尔比共同存在。
本发明的又一个目的是提供上述通式化合物在制备抗肿瘤、抗病毒和抗菌药物中的应用。
本发明的另一个目的是提供含有药学有效量的上述通式(I)或(II)化合物与药物学上可接受的赋形剂或载体或任选的添加剂如香味剂、甜味剂等组成的药物组合物。其中通式(I)或(II)的化合物在药物组合物中的含量例如可以为1-95％。
本发明的药物组合物还可按常规技术制成胶囊、片剂、口服液、注射或输液剂型，并根据需要制成控释或缓释系统给药。
本发明的通式(I)或(II)的化合物可以独自使用或以组合物的形式使用。
本发明的通式(I)或(II)的化合物的剂量根据病人年龄、体重、病程、疾病的轻重等因素来决定。例如，作为参考，在口服剂型的情况下，本发明的化合物的用量可以是0.1-10mg/kg/d，在注射剂型的情况下，本发明的化合物用量可以为0.1-5mg/kg/d。
具体实施例
在以下实施例中，按照下述合成路线合成了以下化合物，应该指出的是，这些实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的范围。虽然只给出了本发明化合物的一种异构体形式，但在本文中还包括了其异构体形式。
化合物：1，4-二[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-苯的合成
化合物EIS：1，2-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-乙烷的合成
化合物EIIS：1，3-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-丙烷的合成
化合物EIIIS：1，4-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-丁烷的合成
化合物EITe：1，2-二[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]-乙烷的合成
化合物Ebs-1：1-[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成
化合物EsTe：1-[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成
化合物EbTe：1-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成
1，2-二[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)甲基]-二硫醚
1，4-二[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-苯磺酰化合物
1，2-二[(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮-2-基)羰基]乙烷
实施例1 中间产物的合成
中间产物1：重氮盐的合成
将含有18g邻氨基苯甲酸和1∶1盐酸51.4mL溶液用冰浴冷至小于5℃，搅拌下缓慢滴加入亚硝酸钠溶液制得重氮盐。
中间产物2：2-硒氯苯甲酰氯的合成
(1)2，2’-二硒化双苯甲酸的制备：
在室温氮气保护下，向6g硒粉与50mL水混合的悬浮液中缓慢滴加硼氢化钾水溶液。硒粉全部溶解，再加入等量6g硒粉，得到黑红色溶液。室温搅拌0.5小时，再加入氢氧化钠水溶液，然后滴加入重氮盐溶液。滴加完毕，升温至60℃反应2小时，继续反应3小时。加入1∶1盐酸酸化，过滤水洗后将所得红褐色固体加入到100mL碳酸钠溶液中，除去不溶物。冷却后再加入1mol/L的盐酸至PH值小于1，减压过滤，水洗后干燥得49.6g淡黄色固体。即为2，2’-二硒化双苯甲酸。
(2)2-硒氯苯甲酰氯的制备：
以6g，2，2-二硒化双苯甲酸加30ml二氯亚砜混合，搅拌下加热回流3小时之后旋蒸出多余的二氯亚砜。剩下的物质用正己烷重结晶，得黄色固体3.4g，即为2-硒氯苯甲酰氯。
中间产物3：2-硫氯苯甲酰氯的合成
(1)2，2’-二硫化双苯甲酸的制备：
在室温氮气保护下，向2.4g硫粉与50mL水混合的悬浮液中缓慢滴加硼氢化钾水溶液。硫粉少部分溶解，再加入等量2.4g硫粉，室温搅拌1小时45分钟，溶液从无色变为黄绿色再变为黄色最后变为棕红色，硫粉大部分溶解。再加入氢氧化钠水溶液(20g氢氧化钠+50mL水)，然后滴加入重氮盐溶液，产生橙红色气泡，硫粉基本溶解。滴加完毕，升温至60℃反应2小时，继续反应3小时。加入1∶1盐酸酸化，过滤水洗后将所得浅黄色固体加入到100mL碳酸钠溶液中，除去不溶物。冷却后再加入1mol/L的盐酸至PH值小于1，减压过滤，水洗后干燥得47.6g白色固体。即为2，2’-二硫化双苯甲酸。
(2)2-硫氯苯甲酰氯的制备
以9.1g2，2-二硫化双苯甲酸加59.34ml二氯亚砜混合，搅拌下加热回流3小时之后旋蒸出多余的二氯亚砜。剩下的物质用正己烷重结晶，得金黄色固体3.7g，即为2-硫氯苯甲酰氯。
中间产物4：2-碲氯苯甲酰氯的合成
(1)2，2’-二碲化双苯甲酸的制备：
在室温氮气保护下，向4.85g碲粉与25mL水混合的悬浮液中缓慢滴加硼氢化钾水溶液。碲粉部分溶解，溶液变黑又变澄清最后变为紫色。再加入等量4.85g碲粉，液面产生大量气泡，最后气泡消失，溶液变成黑红色。再加入氢氧化钠水溶液，然后滴加入重氮盐溶液，生成白雾，黑色气泡，溶液变为黑红色。滴加完毕，升温至60℃反应2小时，继续反应3小时，得到深紫红色溶液。加入1∶1盐酸酸化，过滤水洗后将所得绿色粘稠固体加入到50mL碳酸钠溶液中，除去不溶物。冷却后再加入1mol/L的盐酸至PH值小于1，减压过滤，水洗后干燥得12.7g黄色固体。即为2，2’-二碲化双苯甲酸。
(2)2-碲氯苯甲酰氯的制备
以6.0g2，2-二碲化双苯甲酸加24.13ml二氯亚砜混合，搅拌下加热回流3小时之后旋蒸出多余的二氯亚砜。剩下的物质用苯重结晶，得金黄色固体5.2g，即为2-碲氯苯甲酰氯。
实施例2
化合物EIS：1，2-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-乙烷的合成
向250ml三口瓶中加入12ml四氢呋喃、0.37ml乙二胺、3.44ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。称取2.2g硫氯固体放入小烧杯加53.5ml四氢呋喃，硫氯溶解，得到黄色透明溶液。将此溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，滴加速度较快。有浅黄色固体生成，溶液颜色变为黄色。瓶内有小的白色絮状物漂浮。硫氯溶液滴加完毕反应三小时后，减压过滤。得到黄色固体，水洗滤液呈黄色。重结晶，得到无色针状晶体0.4g。产率23.0％，m.p.206℃。EI-MS：(M+)328。
实施例3
化合物EIIS：1，3-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-丙烷的合成
向250ml三口瓶中加入2.25ml四氢呋喃、0.41ml丙二胺、3.23ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。称取2.0g硫氯固体放入小烧杯加30ml四氢呋喃，硫氯溶解，得到黄色透明溶液。将此溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，滴加速度较快。有浅黄色粘稠固体生成，溶液颜色变为黄色。瓶内有小的白色絮状物漂浮。硫氯溶液滴加完毕反应三小时后，减压过滤。水洗得到白色固体，滤液呈黄色。重结晶，得到无色针状晶体1g。产率60.6％，m.p.163℃。FAB-MS：(M+)342。
实施例4
化合物EIIIS：1，4-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-丁烷的合成
向250ml三口瓶中加入2.5ml四氢呋喃、0.43ml丁二胺、2.87ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。称取1.78g硫氯固体放入小烧杯加30ml四氢呋喃，硫氯溶解，得到黄色透明溶液。将此溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，滴加速度较快。有浅黄色粘稠固体生成，溶液颜色变为黄色。瓶内有小的白色絮状物漂浮。硫氯溶液滴加完毕反应三小时后，减压过滤。水洗得到白色固体，滤液呈黄色。重结晶，得到无色针状晶体1.1g。产率64.3％，m.p.207℃。FAB-MS：(M+1)357。
实施例5
化合物EITe：1，2-二[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]-乙烷的合成
向250ml三口瓶中加入5.9ml四氢呋喃、0.18ml 乙二胺、1.68ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。称取1.6g碲氯固体放入小烧杯加26.5ml四氢呋喃，碲氯溶解，得到棕红色溶液。将此溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，滴加速度较快。有黄色固体生成，溶液颜色变为黄色。瓶内有小的白色絮状物漂浮。碲氯溶液滴加完毕反应三小时后，减压过滤。得到黄色固体，滤液呈黄色。用蒸馏水洗涤固体数次，固体颜色变浅，滤液颜色为黄色。再用无水乙醚少量洗涤此固体产品，滤液颜色为黄绿色。水洗涤此固体产品，滤液颜色为黄绿色。产品干燥得到1.2g，产率86.5％，m.p.203℃。FAB-MS：(M+)523；1HNMR：δ8～7.6(m，8H，ArH)，δ2.7(s，4H，-CH2-)。
实施例6
化合物Ebs-1：1-[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成
向250ml三口瓶中加入12ml四氢呋喃、0.37ml乙二胺、3.44ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。称取1.1g硫氯固体放入小烧杯加26.5ml四氢呋喃，硫氯溶解，得到黄色透明溶液。再称取1.35g硒氯固体放入小烧杯加26.5ml四氢呋喃，硒氯溶解，得到棕色透明溶液。将以上两种溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，同时滴加，且速度相同，滴加速度较快。有浅黄色固体生成，溶液颜色变为黄色。瓶内有小的白色絮状物漂浮。溶液滴加完毕后继续反应三小时，将反应液减压过滤。得到淡黄色固体，滤液呈黄色。用蒸馏水洗涤固体数次，固体颜色变浅，滤液颜色为黄色。再用无水乙醚少量洗涤此固体产品，滤液颜色为黄绿色。最后用无水乙醚少量洗涤此固体产品，滤液颜色为黄绿色。产品干燥得到1.8g，产率90.5％，m.p.268℃。EI-MS：(M+)375；1HNMR：δ8～7.3(m，8H，ArH)，δ4.3～3.3(s，4H，-CH2-)。
实施例7
化合物EsTe：1-[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成
向250ml三口瓶中加入5.9ml四氢呋喃、0.18ml乙二胺、1.68ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。称取0.6g硫氯固体放入小烧杯加13.25ml四氢呋喃，硫氯溶解，得到黄色透明溶液。再称取0.8g碲氯固体放入小烧杯加13.25ml四氢呋喃，碲氯溶解，得到棕色溶液。将以上两种溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，同时滴加，且速度相同，滴加速度较快。有黄色固体生成，溶液颜色变为黄色。瓶内有小的白色絮状物漂浮。溶液滴加完毕后继续反应三小时，将反应液减压过滤。得到黄色固体，滤液呈黄色。用蒸馏水洗涤固体数次，固体颜色变浅，滤液颜色为黄色。再用无水乙醚少量洗涤此固体产品，滤液颜色为黄色。最后用水少量洗涤此固体产品，滤液颜色为黄色。产品干燥得到1.1g，产率89.4％，m.p.287℃。FAB-MS：(M+K)463。
实施例8
化合物EbTe：1-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成
向250ml三口瓶中加入5.9ml四氢呋喃、0.18ml乙二胺、1.68ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。称取0.68g硒氯固体放入小烧杯加13.25ml四氢呋喃，硒氯溶解，得到橙红透明溶液。再称取0.8g碲氯固体放入小烧杯加13.25ml四氢呋喃，碲氯溶解，得到棕色溶液。将以上两种溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，同时滴加，且速度相同，滴加速度较快。有黄色固体生成，溶液颜色变为黄色。瓶内有小的白色絮状物漂浮。溶液滴加完毕后继续反应三小时，将反应液减压过滤。得到黄色固体，滤液呈黄色。用蒸馏水洗涤固体数次，固体颜色变浅，滤液颜色为黄色。产品干燥得到1.2g，产率95.23％，m.p.247℃。FAB-MS：(M+)471；1HNMR：δ8～7.3(m，8H，ArH)，δ4.0～2.9(s，4H，-CH2-)。
实施例9
1，4-二[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-苯的合成
0.38g苯胺，1.3ml三乙胺溶于10mlTHF中，冰浴通N2搅拌，1g硒氯溶于20mlTHF中，慢慢滴入苯胺溶液中，1h内滴完.继续搅拌三小时以上.得黄色沉淀，过滤，用THF和乙醇洗涤沉淀，烘干.母液浓缩后静置结晶。产率5％，mp＞300℃；EI-MS：(M+)474。
实施例10
1，2-二[2(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-二硫醚的合成
向250ml三口瓶中加入6.9ml四氢呋喃、1.18ml二硫醚二胺、1.68ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。称取1.6g硒氯固体放入小烧杯加26.5ml四氢呋喃，硒氯溶解，滴入三口瓶，有黄色固体生成，溶液颜色变为黄色。滴加完毕反应三小时后，减压过滤。得到黄色固体，滤液呈黄色。用蒸馏水洗涤固体数次，固体颜色变浅。产品干燥得到1.2g，产率76.5％，m.p.183℃。
实施例11
1，4-二[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-苯磺酰的合成
称取1.6g硒氯固体放入小烧杯加26.5ml四氢呋喃，硒氯溶解。向250ml三口瓶中加入6.9ml四氢呋喃、与硒氯等摩尔量的4-氨基苯磺酰胺、1.68ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。将硒氯滴入三口瓶，有黄色固体生成，溶液颜色变为黄色。滴加完毕反应三小时后，减压过滤。得到黄色固体，滤液呈黄色。用蒸馏水洗涤固体数次，固体颜色变浅。熔点：260℃-315℃
实施例12
1，2-二[(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮-2-基)羰基]乙烷的合成
称取1.6g硒氯固体放入小烧杯加26.5ml四氢呋喃，硒氯溶解。向250ml三口瓶中加入6.9ml四氢呋喃、与硒氯等摩尔量的丁二酰胺、1.68ml三乙胺，冰浴搅拌下通入氮气。将硒氯滴入三口瓶，有黄色固体生成，溶液颜色变为黄色。滴加完毕反应三小时后，减压过滤。得到黄色固体，滤液呈黄色。用蒸馏水洗涤固体数次，固体颜色变浅。熔点：280℃-320℃
实施例13
将本发明的上述化合物20mg，加入土温80搅拌助溶后，加入注射用生理盐水2ml，并使土温80的最终浓度为0.1％，经过滤灭菌灌装制成注射剂。
实施例14
将本发明的上述化合物50mg与乳糖180mg，淀粉260mg，和硬脂酸镁10mg混和均匀后，按常规工艺制成片剂。
本发明的化合物还可与其他药学上可接受的赋形剂或载体按常规工艺制成口服液、胶囊或输液等剂型，并可根据需要制成控释或缓释系统给药。
实施例15化合物药理活性研究
一、上述合成化合物的体外抗肿瘤活性研究
(一)体外细胞计数法观察肿瘤细胞抑制率：
1.将本发明的化合物按如下方法配制药液，在该方法中所使用的化合物为：
EbS-1
EIS
EI Te
将上述三种化合物用DMSO溶解后，加入不含胎牛血清的1640培养基，将其稀释成终浓度为50μM.L-1，500μM L-1的药液，其中DMSO的最终含量少于0.1％(v/v)，且每个细胞孔的给药体积为细胞悬液和药液体积总和的1/10，即上述化合物的最终给药浓度为5μM.L-1和50μM L-1。
2.细胞计数：用96％酒精冲洗计数板后擦净，另擦净盖片一张；把盖片覆在计数板上面，使之微微移向一侧，露出计数板台面少许，把计数板平放在显微镜台上，立即从计数板边缘轻轻地加1-2滴的细胞悬液，使之充满计数板和盖片间空隙中。镜下观察可见细胞分散各处，健康细胞胞体完整，透明不着色，凡着色细胞均为不健康者。计算四角大方格内的细胞数，压中线者只计算左线和上线者，右线和下线不计算在内。计数时间为给药后24h、48h、72h。并按照公式1)-3)计算细胞数和化合物对细胞的抑制率。
1)细胞数/毫升原悬液＝4大格细胞总数/4×10000稀释倍数
2)细胞存活率％＝(加药组细胞数/对照组细胞数)×100
3)细胞增殖抑制率％＝[1-(加药组细胞数/对照组细胞数)]×100
3.实验结果见表1和表2
表1：最终给药浓度为5μM.L-1
| 5μM.L-1组 | 0h | 24h | 48h | 72h |
| EIS | 0 | 43.36％ | 36.90％ | 81.78％ |
| EbS-1 | 0 | -62.29％ | -34.05％ | -11.56％ |
| EI Te | 0 | 37.94％ | 65.06％ | 38.19％ |
表2：最终给药浓度为50μM.L-1
| 50μM.L-1组 | 0h | 24h | 48h | 72h |
| EIS | 0 | 59.79％ | 90.22％ | 77.55％ |
| EbS-1 | 0 | 75.06％ | 74.23％ | 91.81％ |
| EI Te | 0 | 75.36％ | 94.66％ | 95.43％ |
(二)SRB法和MTT法研究化合物对肿瘤细胞的生长抑制作用
1.其中贴壁细胞采用SRB法，悬浮细胞采用MTT法来研究化合物对肿瘤细胞的生长抑制作用，所使用化合物药液按上述方式配制。
2.SRB法：取对数生长期的细胞(3-5×104 cells/ml)，分别接种于96孔培养板中(180ul/孔)，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中培养24h后，加入20ul不同浓度的受试化合物，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中再分别继续培养所需时间。细胞在加药培养结束后，弃掉培养液，加入10％三氯醋酸(TCA)100ul并置于4℃冰箱，固定细胞1小时。弃掉细胞固定液后，用去离子水冲洗培养板小孔5遍。甩干水后，将96孔板置于空气中干燥。每孔加入0.4％的SRB溶液(用1％HAC溶液配制)50μl，室温放置10分钟。弃掉多余的SRB后，用1％的醋酸溶液冲洗96孔板5遍，去除未与蛋白结合的SRB。将96孔板甩干后，置于空气干燥。每孔加入10mmol/L非缓冲Tris碱液(PH10.5)150μl，完全溶解细胞结合的SRB。经平板摇床摇匀后，在TECAN SUNRISE Magellan 96 Well酶标仪(USA)的540nm处，测定每个小孔的OD值。
3.MTT法：取对数生长期的细胞(3-5×104cells/ml)，分别接种于96孔培养板中(180ul/孔)，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中培养4-6h后，加入20ul不同浓度的受试化合物，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中再分别继续培养所需时间。细胞在加药培养结束后，每孔加入5mg/ml的MTT溶液(用灭菌1×PBS溶液配制)20μl，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中继续培养4h。然后，将培养板置于离板机上，进行离心，3000r/min×30min。弃掉上清后，将培养板在避光的情况下，进行空气干燥。之后，每孔加入酸化异丙醇150μl，完全溶解活细胞生成的Formazan后，在TECAN SUNRISEMagellan 96 Well酶标仪(USA)的570nm处，测定每个小孔的OD值。
4.实验结果的分析方法
计算所用的测试孔OD值＝测试孔OD值-本底OD值(即完全培养基加MTT、SRB，无细胞)。重复孔的OD值为平均值±SD。
细胞存活率％＝(加药细胞的OD值/对照细胞的OD值)×100
细胞增殖抑制率％＝[1-(加药细胞的OD值/对照细胞的OD值)]×100
5.本发明化合物对几种肿瘤细胞的生长抑制作用结果小结
备注：
(1)上述各种肿瘤细胞来源于北京大学药学院筛选中心。
(2)其中HL-60为人白血病细胞，也是悬浮培养细胞，Bel-7402为人肝癌细胞，Hela为人宫颈癌细胞，BGC823为人胃癌细胞，MDA-MB-435为人乳腺癌，PC-3MIE8为人前列腺癌。
二、本发明化合物的体外抗病毒活性研究
(一)EITe、EIIIS和EIIISe的体外抗病毒试验
HBV-DNA转染人类肝癌细胞株Hep G2所建立的2.2.15细胞株能有效表达HBV复制的全部标志，本实验以2.2.15细胞株为靶细胞，通过检测培养上清液中HBsAg和HBeAg的含量，检测EITe、EIIIS和EIIISe的抗病毒作用，并观察其他化合物的抗病毒作用。
将EITe、EIIIS和EIIISe加适量的DMSO溶解后，加入蒸馏水稀释10倍后，制得所需浓度的化合物水溶液，经进行0.2um过滤除菌后对细胞给药。
取生长良好状态的2.2.15细胞，接种于24孔培养板，在37℃培养48小时后，换用含不同药物浓度的培养液，每隔3天更换一次新鲜的含药培养液(具体浓度见下表)，共两次，给药共计8天后收集上清液，-20℃保存，待检HBeAg，同时测定药物的细胞毒性。
上清液中HBsAg和HBeAg的检测，于试验8天时，吸取培养上清液采用ELISA测定(试剂盒购自英科新创科技有限公司)，按说明书所示方法检测。抑制率(％)＝(对照孔A595-实验孔A595)/(对照孔A595-2.1)×100％，ID50为HBeAg抑制率为50％时的药物浓度。
通过MTT法测定细胞存活率以表征药物的细胞毒性。细胞存活率(％)＝实验孔(A595-A650)/对照孔(A595-A650)×100％，CD50是实验组存活细胞为对照组的50％时的药物浓度。
用治疗指数(Treaty Index：TI)评价受试药物的抗-HBV活性，其中TI＝CD50/ID50。当TI＜1时，受试药物为低效有毒，当1≤TI≤2时受试药物有效有毒，当TI≥2.1时，受试药物高效低毒，TI越大，则表明该药物对HBV的抑制作用越强，细胞毒性小。本实验对EITe、EIIIS和EIIISe的研究结果如下：
| 30ug/ml | 15ug/ml | 7.5ug/ml | 3.75ug/ml | 1.38ug/ml | CD50 | ED50 | TI | |
| EI Te细胞存活率 | 4.2 | 5.3 | 10.0 | 44.7 | 77.4 | 2.97 | ||
| HbsAg抑制率 | 100 | 100 | 100 | 64.7 | 49.8 | 1.57 | 1.89 | |
| HbeAg抑制率 | 73.4 | 64.1 | 64.1 | 48.4 | 31.3 | 4.57 | 0.65 | |
| EIIIS细胞存活率 | 51.5 | 60.1 | 65.3 | 90.2 | 95.9 | 22.52 | ||
| HbsAg抑制率 | 100 | 80.4 | 58.8 | 56.8 | 49.8 | 2.94 | 7.65 | |
| HbeAg抑制率 | 56.3 | 53.1 | 40.6 | 31.3 | 17.2 | 14.44 | 1.56 | |
| EIIISe细胞存活率 | 46.4 | 58.1 | 69.3 | 74.3 | 100 | 17.14 | ||
| HbsAg抑制率 | 100 | 100 | 62.8 | 54.9 | 37.3 | 2.89 | 5.39 | |
| HbeAg抑制率 | 62.5 | 51.6 | 40.6 | 31.3 | 28.1 | 12.40 | 1.58 |
结果分析：EIIIS和EIIISe药物HBsAg的TI＞2.1，说明二者药物具有抑制细胞HBsAg的作用，而EITe的TI＜2.1，则可能无效。
三、上述合成化合物的体外抗菌研究
将所合成一系列化合物送临床药理所进行临床常见菌种抗菌活性实验，所用测试方法是标准平皿二倍稀释法(参考微生物检验技术，郭积燕 主编2001年)。实验结果如下：
苯并异噻唑、苯并异碲唑衍生物的MIC结果
其中EbS-1对5株金黄色葡萄球菌的MIC值为8mg/L，具有抑菌作用。
Claims (10)
1、以下通式I或II的双苯并异唑酮类化合物：
其中R1和R2是相同或不同的，彼此独立选自S，Se或Te；
其中R是C1-C20线性或支化、饱和或不饱和的二价烃基，C6-C30亚芳基，C5-C20亚环烷基，C5-C20亚杂环基，含有碳环、杂环或芳环的C4-C30二价烃基，其中碳环、杂环或芳环可以位于链中或链端，有机基磺酰基，或羰基有机基羰基，所有这些基团是取代或未取代的，其碳链可以任意插入选自O、N和S中的一个或多个杂原子。
2、根据权利要求1的双苯并异唑酮类化合物，其中R是(-CH2)n-，其中n是1-8；-(C6H4)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-SS-(CH2)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-NH-(CH2)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-O-(CH2)n-，其中n是1-4。
3.权利要求1-2任一所述的通式I或II化合物，选自：
1)1，2-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-乙烷；
2)1，3-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-丙烷；
3)1，4-二[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-丁烷；
4)1，2-二[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]-乙烷；
5)1-[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]乙烷；
6)1-[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]乙烷；
7)1-[2-(1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]乙烷；
8)1-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并异碲唑-3(2H)-酮)]乙烷；
9)1，2-二[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)甲基]-二硫醚；
10)1，4-二[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-苯；
11)1，4-二[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]-苯磺酰；和
12)1，2-二[(1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮-2-基)羰基]乙烷。
4、权利要求1所述的通式I或II化合物的制备方法，包括以下步骤：
将以下结构式III和IV的化合物：
与结构式为H2N-R-NH2的化合物在-20℃到5℃的温度下，在惰性溶剂中，在碱性条件下，在惰性气体保护下反应，
其中R1和R2是相同或不同的，彼此独立选自S，Se或Te；
其中R是C1-C20线性或支化、饱和或不饱和的二价烃基，C6-C30亚芳基，C5-C20亚环烷基，C5-C20亚杂环基，含有碳环、杂环或芳环的C4-C30二价烃基，其中碳环、杂环或芳环可以位于链中或链端，有机基磺酰基，或羰基有机基羰基，所有这些基团的碳链可以任意插入选自O、N和S中的一个或多个杂原子。
5、根据权利要求4的制备方法，其中R是(-CH2)n-，其中n是1-8；-(C6H4)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-SS-(CH2)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-NH-(CH2)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-O-(CH2)n-，其中n是1-3。
6、权利要求1-3任一所述的通式I或II的化合物在制备抗肿瘤的药物中的应用。
7、权利要求1-3任一所述的通式I或II的化合物在制备抗病毒药物中的应用。
8、权利要求1-3任一所述的通式I或II的化合物在制备抗菌药物中的应用。
9、一种用于抗肿瘤、抗病毒或抗菌的药物组合物，其特征在于含有药学有效量的权利要求1-3任一所述的通式I和/或II的化合物和药学上可接受的载体。
10、根据权利要求8所述的药物组合物，其药物剂型可选自片剂、胶囊、口服液、注射剂、输液制剂或缓释或控释给药系统。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 03156590 CN1280279C (zh) | 2003-09-10 | 2003-09-10 | 双苯并异唑酮类化合物及其合成和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 03156590 CN1280279C (zh) | 2003-09-10 | 2003-09-10 | 双苯并异唑酮类化合物及其合成和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1594299A true CN1594299A (zh) | 2005-03-16 |
| CN1280279C CN1280279C (zh) | 2006-10-18 |
Family
ID=34660035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 03156590 Expired - Fee Related CN1280279C (zh) | 2003-09-10 | 2003-09-10 | 双苯并异唑酮类化合物及其合成和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1280279C (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013043881A (ja) * | 2011-08-26 | 2013-03-04 | Sumitomo Seika Chem Co Ltd | １，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン化合物の製造方法 |
| US20140088149A1 (en) * | 2006-05-22 | 2014-03-27 | Thioredoxin Systems Ab | Bacterial thioredoxin reductase inhibitors and methods for use thereof |
| CN106146371A (zh) * | 2015-04-23 | 2016-11-23 | 凯熙医药（天津）有限公司 | 苯并异硒唑酮类化合物代谢物、其合成方法及其应用 |
| CN110801449A (zh) * | 2018-08-06 | 2020-02-18 | 上海元熙医药科技有限公司 | 苯并异硒唑衍生物用于制备治疗肿瘤药物中的应用 |
| CN110856717A (zh) * | 2018-08-06 | 2020-03-03 | 上海元熙医药科技有限公司 | 一种肿瘤免疫调节剂及其用途 |
| CN113372296A (zh) * | 2020-03-10 | 2021-09-10 | 杭州汉菁生物科技有限公司 | 用于抑制多重耐药的金黄色葡萄球菌的硒啉类化合物及用途 |
| CN113527301A (zh) * | 2020-04-13 | 2021-10-22 | 凯熙医药（武汉）股份有限公司 | 含四嗪取代基的芳并异硒唑类化合物及其合成方法和应用 |
| WO2021223780A3 (zh) * | 2020-05-06 | 2021-12-30 | 上海元熙医药科技有限公司 | 苯并异硒唑衍生物用于抗冠状病毒及控制冠状病毒相关的间质性肺疾病（ild）的用途 |
-
2003
- 2003-09-10 CN CN 03156590 patent/CN1280279C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140088149A1 (en) * | 2006-05-22 | 2014-03-27 | Thioredoxin Systems Ab | Bacterial thioredoxin reductase inhibitors and methods for use thereof |
| JP2013043881A (ja) * | 2011-08-26 | 2013-03-04 | Sumitomo Seika Chem Co Ltd | １，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン化合物の製造方法 |
| CN106146371A (zh) * | 2015-04-23 | 2016-11-23 | 凯熙医药（天津）有限公司 | 苯并异硒唑酮类化合物代谢物、其合成方法及其应用 |
| CN106146371B (zh) * | 2015-04-23 | 2018-05-15 | 南京凯熙医学科技有限公司 | 苯并异硒唑酮类化合物代谢物、其合成方法及其应用 |
| CN110801449A (zh) * | 2018-08-06 | 2020-02-18 | 上海元熙医药科技有限公司 | 苯并异硒唑衍生物用于制备治疗肿瘤药物中的应用 |
| CN110856717A (zh) * | 2018-08-06 | 2020-03-03 | 上海元熙医药科技有限公司 | 一种肿瘤免疫调节剂及其用途 |
| CN113372296A (zh) * | 2020-03-10 | 2021-09-10 | 杭州汉菁生物科技有限公司 | 用于抑制多重耐药的金黄色葡萄球菌的硒啉类化合物及用途 |
| CN113527301A (zh) * | 2020-04-13 | 2021-10-22 | 凯熙医药（武汉）股份有限公司 | 含四嗪取代基的芳并异硒唑类化合物及其合成方法和应用 |
| CN113527301B (zh) * | 2020-04-13 | 2024-05-17 | 凯熙医药（武汉）股份有限公司 | 含四嗪取代基的芳并异硒唑类化合物及其合成方法和应用 |
| WO2021223780A3 (zh) * | 2020-05-06 | 2021-12-30 | 上海元熙医药科技有限公司 | 苯并异硒唑衍生物用于抗冠状病毒及控制冠状病毒相关的间质性肺疾病（ild）的用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1280279C (zh) | 2006-10-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1026322C (zh) | 苯并哑唑衍生物的制备方法 | |
| CN1208336C (zh) | 叔丁基－(7－甲基咪唑并[1,2－a]吡啶－3－基)胺衍生物 | |
| CN1280266C (zh) | 酰基苯基脲衍生物,其制备方法和作为药物的用途 | |
| CN1656094A (zh) | 作为c－Jun N－末端激酶抑制剂用于治疗神经变性疾病的7－氮杂吲哚类化合物 | |
| CN1023700C (zh) | 芳族及杂环甲酰胺衍生物抗肿瘤剂的制备 | |
| CN1990484A (zh) | 水飞蓟宾酯类衍生物及其制备方法和用途 | |
| CN1028992C (zh) | 1，4，-苯并硫杂吖庚因衍生物的制备方法 | |
| CN1223579A (zh) | 取代的3,5－二苯基－1,2,4－三唑及其作为药用金属螯合剂的用途 | |
| CN1889960A (zh) | 用于功能上影响不同类型的细胞和用于治疗免疫、炎症、神经和其他疾病的新的二肽基肽酶iv抑制剂 | |
| CN1437583A (zh) | 用作杀菌剂的三氟甲基吡咯羧酰胺和三氟甲基吡咯乙硫异酰胺 | |
| CN1589264A (zh) | 用于治疗恶性肿瘤的方法 | |
| CN1117044A (zh) | 取代的杂芳酰胍、其制法、药用及含有它们的药品 | |
| CN1331076A (zh) | 稠合的吡唑基化合物、包含该化合物的组合物及该化合物的应用 | |
| CN1399633A (zh) | 嘧啶衍生物 | |
| CN1594299A (zh) | 双苯并异唑酮类化合物及其合成和应用 | |
| CN1142227A (zh) | 新的噻唑烷-4-酮衍生物 | |
| CN87104734A (zh) | 二苯甲氧乙基哌嗪衍生物，其制备方法以及含此衍生物的药物组合物 | |
| CN1057520C (zh) | N,n’－取代亚氨基二碳亚胺酸二酰胺 衍生物,含有它的药物组合物及其用途 | |
| CN1033271A (zh) | 2，2-二氟环丙基乙烷衍生物的制备方法及其作为杀虫剂的用途 | |
| CN1202486A (zh) | 稠合哌啶化合物 | |
| WO2018191642A1 (en) | Novel amodiaquine analogs and methods of uses thereof | |
| CN1060763C (zh) | 脲取代的苯甲酰胍、制法和用途及含苯甲酰胍的药物 | |
| CN101074189A (zh) | 苯乙烯酸衍生物及其在制备血管靶向剂药物中的应用 | |
| CN1145360A (zh) | 取代的苄氧羰基胍、其制备方法、作为药剂或诊断剂的应用以及含有它的药剂 | |
| CN1349404A (zh) | 多环2－氨基噻唑体系在预防或治疗肥胖的药物制备中的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20061018 Termination date: 20120910 |