CN1557836A - 免疫抑制多肽的制备及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种天然免疫抑制多肽的制备及应用，尤其涉及一种采用过敏原致敏乳牛，诱发其免疫系统产生免疫抑制多肽，并从其分泌的牛奶中分离提取活性多肽，应用于各类过敏症患者，以降低其过敏症状和体征，其特征是，选择合适的过敏原制备单独或复合过敏原疫苗，采用多种途径和方式致敏健康乳牛，从致敏乳牛分泌的牛奶中通过生物分离、提取和纯化的方式制备免疫抑制多肽制剂，应用于治疗各类过敏症患者。

Description

免疫抑制多肽的制备及应用

所属技术领域

本发明涉及一种天然免疫抑制多肽的制备及应用，尤其涉及一种采用过敏原致敏乳牛，诱发其免疫系统产生免疫抑制多肽，并从其分泌的牛奶中分离提取活性多肽，应用于各类过敏症患者，以降低其过敏症状和体征。

发明技术背景

过敏症是一种常见病、多发病，其致病的原因是过敏原所致的变态反应，过敏原多种多样，包括各种植物花粉、蜂毒、尘埃，以及各种类型动物旦白等。很多过敏原是属于动物旦白或多肽，比碳水化合物和脂肪更容易引起过敏反应。

目前治疗过敏症的主要方法是尽量避免接触过敏原和对过敏症状和体征进行治疗，前者有时不容易实现，而后者并不能防止过敏再次发生。

系统脱敏疗法是一种较为有效的治疗过敏症的方法，首先通过系统测试寻找过敏原的类型及方式，用已找出的过敏原作脱敏剂，从非常小的剂量开始，逐次增量注射，使机体产生免疫耐受性，达到脱敏目的。经此疗法治疗的病人，体内可产生大量特异性IgG封闭抗体，可阻断抗原与IgE抗体的结合，降低介质细胞的敏感性，从而起到治疗作用。尽管这种免疫治疗方法对某些过敏症患者有一定疗效，但是具体实施有很多危险和困难，首先，让患者接触过敏原是非常危险的，可能引发严重的变态反应而危及生命，所以，系统脱敏疗法需要在非常专业的专家指导下进行，其次，寻找过敏原的过程十分复杂，并非每个患者都能找到明确的过敏原，而且脱敏过程漫长，通常需2～3年时间，费用昂贵。

现代研究证实，通过修饰过敏原致敏过敏症患者，在不引发过敏症发作的情况下，同样可以起到系统脱敏疗法的效果。美国专利(4469677)公布的技术中介绍了通过某些特定的酶将过敏原旦白质酶解为多肽后，能够安全地用于脱敏疗法，既能达到抑制过敏反应又不会引发过敏症发作，这些经过修饰的、已脱除致敏性的过敏原采用口服方式，能起到诱发“免疫耐受”的效果，可以理想地用于过敏症治疗。但是，由于过敏原种类繁多，而不同种类过敏原经过酶解产生的多肽，作为致敏原诱发不同种类的过敏反应，所产生的免疫抑制作用较弱，在普及推广过程中受到限制。

进一步研究证实，在过敏原致敏的乳牛的牛奶中，含有该过敏原的多肽，这种多肽具有明确的抑制免疫反应的功效，能诱发过敏症患者产生免疫耐受而不会引发过敏反应。

本发明所需解决的技术问题是，通过选择合适的过敏原致敏健康乳牛，从致敏乳牛分泌的牛奶中制备免疫抑制多肽。

发明内容

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是，选择合适的过敏原制备单独或复合过敏原疫苗，采用多种途径和方式致敏健康乳牛，从致敏乳牛分泌的牛奶中通过生物分离、提取和纯化的方式制备免疫抑制多肽制剂，应用于治疗各类过敏症患者。

本发明的技术特征是，被选择作为过敏原的物质，是引起和诱发人类过敏症的主要过敏原，包括但不限于：各类植物花粉如各类花、草花粉；各种动物的分泌液和毒液如蛇毒、蜂毒；各种食物过敏原如各类动物旦白、海鱼、海虾、海生植物等，各种粉尘如石棉、灰尘、媒尘、石英尘等。

本发明的技术特征是，既可选择单独一种过敏原制备致敏疫苗，也可以选择多种过敏原混合制备复合致敏疫苗，选择作为致敏疫苗的任何过敏原，必须能够诱发过敏反应，否则，应选择其他过敏原。制备复合致敏疫苗时，可以将多种过敏原混悬在等量的无菌生理盐水内制备混悬液，在接种动物前必须经过严格灭菌程序，可以采用高温灭菌、紫外灯灭菌等多种已知的灭菌方式，在灭菌同时，不能改变过敏原的生物结构。

本发明的技术特征是，应选择健康的乳牛，接种前应全面检查乳牛的健康状态，包括结核菌素试验，任何怀疑的致病乳牛都不应被选择，由于免疫细胞处理外来过敏原是处于免疫反应的最早阶段，因此，在采用过敏原致敏乳牛后应尽早和及时收集含有免疫抑制多肽的牛奶，通常在接种过敏原后24小时～1周内。为了获得足够的免疫抑制多肽，重复接种过敏原是必须的，通常应每周～每2周接种一次过敏原。

本发明的技术特征是，接种过敏原的途径及方式是多种多样的，包括但不限于口服、灌肠、肌肉内注射、皮下注射、腹腔内注射等，最佳接种方式是肌肉内注射，为了提高免疫抑制多肽的产生，有时可以采用联合接种方式，如口服加肌肉注射的方式。

本发明的技术特征是，从免疫接种乳牛的牛奶中制备免疫抑制多肽的方法是，采用离心方式脱脂后，分装或喷雾干燥，成为含有免疫抑制多肽的牛奶或奶粉，也可以离心脂脱后，直接用超滤设备和分子量为10,000D的超微滤膜直接浓缩后制备免疫抑制多肽的浓缩液，或喷雾干燥制备干粉，为了制备纯度更高的产品，还可以在离心脱脂后，用HCL等酸剂调PH至4.7～4.8，加热35℃～45℃约30分钟，使酪旦白凝固后用离心方式或过滤方法除去酪旦白，然后用分子量为40,000的超微滤膜进行分离，收集上清液后用分子量为5000的超微滤膜浓缩后冷冻干燥或喷雾干燥成粉，以获得高纯度活性多肽制剂。

本发明的技术特征是，采用本发明方法制备的免疫抑制的多肽制剂中，主要含有经修饰的、已脱除致敏性的过敏原多肽，这些多肽类物质是由各种过敏原进入母牛体内，产生免疫反应，通过各种酶的分解而变成具有免疫抑制作用的多肽。制备的免疫抑制多肽制剂，给过敏症患者口服后可以诱发免疫耐受，抑制免疫反应及过敏反应，消除或减轻过敏症状和体征。

本发明的技术特征是，本发明方法制备的具有免疫抑制作用多肽制剂，主要采用口服方式使用，可以是以牛奶或奶粉形式服用，也可以是与其他辅料或辅剂制备成冲剂、颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液、含片、咀嚼片或与油性辅料制备软胶囊等多种形式，还可以作为食品添加到各种食品中，如酸奶、果冻、布丁、奶酪、饼干等，或者添加到各类饮料中成为咖啡、茶等。

本发明的技术特征是，本发明方式制备的免疫抑制多肽制剂是一种口服形式的脱敏物质，是一种天然的口服脱敏疫苗，可以作为脱敏疗法的重要组成成份，以这种免疫抑制多肽为基础的脱敏疗法无需专家指导，无需注射，没有疼痛，价格低廉，可以暴露过敏原引发免疫耐受反应，又不会导致过敏症的发生。

这种在致敏乳牛中被诱发，经酶解处理、已脱除致敏性的过敏原多肽较未经处理的过敏原应用于临床时更安全可靠，它所诱发的免疫反应是非过敏性的、具有免疫抑制作用的免疫耐受过程，有助于治疗过敏症，而且在系统脱敏过程中不会发生严重的过敏反应或变态反应。

任何类型和形式的过敏原，只要能引起宿主的免疫反应，都可以作为致敏的过敏原疫苗，经宿主体内免疫反应后，，产生具有免疫抑制作用的多肽，因此，任何新形式的特异性过敏原，均可以采用这种方法，制备相应的免疫抑制多肽，用于某种已明确过敏原的过敏症患者的系统脱敏治疗，应用这种系统脱敏治疗的免疫抑制多肽不会引起严重的变态反应，不会产生危险，可以诱发特异性免疫耐受，从而治疗特定过敏症，而对于未明确过敏原的过敏症患者，则可以采用含有多种非致敏性过敏原多肽的方法，抑制可能发生的多种过敏原构成的过敏症。

在应用过敏原疫苗致敏乳牛时，并不需要引发或维持其体内的高敏感免疫状态，也不需要其产生足够的免疫球旦白，仅需要注射足够剂量的过敏原，让其体内免疫细胞有足够的时间处理过敏原变成一种具有免疫抑制作用的并存在于牛奶中的多肽形式。

本发明的技术特征是，制备免疫抑制多肽制剂，应该同时采用多种过敏原制备的疫苗致敏多头乳牛，并收集多头乳牛的牛奶，制备含有多种非致敏性过敏原多肽制剂，不同的乳牛含有不同的基因特征，对过敏原产生的免疫反应各不相同，产生的免疫抑制多肽种类也各不相同，而产生的多种类型多肽可以采用层析方法进行监测、分离和提纯，并进行成份分析和品质监管。

本发明的有益效果是，与现有技术相比本发明利用哺乳类动物有机体免疫系统和多种活性酶来分解过敏原变成免疫抑制多肽，无需根据特定的过敏原选择特定的生物酶，而是通过采用多种过敏原组成的复合抗原疫苗，制备含有多种类型、具有免疫抑制作用的多肽，可以适用于多种类型的过敏症患者使用，在应用于系统脱敏疗法时，无需检测致敏的特异性抗原，不会引起严重的变态反应和过敏症状，安全可靠，属于天然食品。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明：

                             实例1

              制备复合过敏原疫苗，接种乳牛，收获含活性多肽牛奶

采购下列商品化抗原抽提物，重量：容积以1∶100方式混合配制，混合配制薄型链格孢霉(Alternaria tenuis)10ml、黑曲霉(Aspergillus niger)10ml、白色念球菌(Moniliaalbicans)10ml、丝状菌旦白(Hormodendrum hordei)10ml、小羊肉(Lambs quarter)10ml、尘埃(House dust)10ml、蠕虫(Helminthosporium)10ml、俄罗斯蓟(Russian thistle)、草种(Careless weed)10ml、多刺藜(Spiny pigweed)10ml、普通艾属植物(mugwort)10ml、细长豚草(Ragweed，slender)10ml、南方豚草(Ragweed，southern)10ml、人工豚草(Ragweed，false)10ml、短豚草(Ragweed，short)10ml、大豚草(Ragweed，giant)10ml、红根藜(Pigweed，redroot)10ml、须发癣菌(Trichophyton mentag)10ml、鼠尾草(Goldenrod)10ml、帕麦尔氏制剂(Palmer’s Amaranth)10ml、大草原撒尔维亚的叶(Sage，prairie)10ml、弯孢霉菌(Curvularia sp.)10ml、芽霉菌(Pullularia pullulans)10ml、白霉菌(Mucor Plumbeus)10ml、念珠状镰刀菌(Fusarium moniliforme)10ml、混合土(GsMold Mix 2^#)30ml、拾种混合树叶(GS 10 Tree Mix)30ml、酒曲霉菌(Rhizopusnigricans)30ml，上述溶液混合，加等量生理盐水稀释，每头健康乳牛每次肌肉注射5ml，每两周重复注射一次，在注射后24小时收集牛奶。

                             实施例2

                   从致敏乳牛的牛奶中制备免疫抑制多肽

收集致敏乳牛分泌的牛奶20升，采用脂肪分离机去脂，去脂牛奶采用分子量为10,000的超微滤膜进行过滤分离，最终得到12升分离过滤液，直接冷藏或冷冻干燥制备干粉。

                             实施例3

                   应用于过敏症患者的临床验证

随机选取24位过敏症患者，每天服用实施例2制备的冻干粉8g，用温水冲服，持续三个月，83.8％患者主诉过敏症状明显改善，包括充血症状好转，头痛减轻，呼吸状态改善，痒的症状减轻，肿胀减轻，咳嗽好转等，通常在服用制剂一个月起出现症状缓解表现。

Claims (10)

1.本发明涉及一种天然免疫抑制多肽的制备及应用，尤其涉及一种采用过敏原致敏乳牛，诱发其免疫系统产生免疫抑制多肽，并从其分泌的牛奶中分离提取活性多肽，应用于各类过敏症患者，以降低其过敏症状和体征，其特征是，选择合适的过敏原制备单独或复合过敏原疫苗，采用多种途径和方式致敏健康乳牛，从致敏乳牛分泌的牛奶中通过生物分离、提取和纯化的方式制备免疫抑制多肽制剂，应用于治疗各类过敏症患者。

2.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，被选择作为过敏原的物质，是引起和诱发人类过敏症的主要过敏原，包括但不限于：各类植物花粉如各类花、草花粉；各种动物的分泌液和毒液如蛇毒、蜂毒；各种食物过敏原如各类动物旦白、海鱼、海虾、海生植物等，各种粉尘如石棉、灰尘、媒尘、石英尘等。

3.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，既可选择单独一种过敏原制备致敏疫苗，也可以选择多种过敏原混合制备复合致敏疫苗，选择作为致敏疫苗的任何过敏原，必须能够诱发过敏反应，否则，应选择其他过敏原。制备复合致敏疫苗时，可以将多种过敏原混悬在等量的无菌生理盐水内制备混悬液，在接种动物前必须经过严格灭菌程序，可以采用高温灭菌、紫外灯灭菌等多种已知的灭菌方式，在灭菌同时，不能改变过敏原的生物结构。

4.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，应选择健康的乳牛，接种前应全面检查乳牛的健康状态，包括结核菌素试验，任何怀疑的致病乳牛都不应被选择，由于免疫细胞处理外来过敏原是处于免疫反应的最早阶段，因此，在采用过敏原致敏乳牛后应尽早和及时收集含有免疫抑制多肽的牛奶，通常在接种过敏原后24小时～1周内。为了获得足够的免疫抑制多肽，重复接种过敏原是必须的，通常应每周～每2周接种一次过敏原。

5.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，接种过敏原的途径及方式是多种多样的，包括但不限于口服、灌肠、肌肉内注射、皮下注射、腹腔内注射等，最佳接种方式是肌肉内注射，为了提高免疫抑制多肽的产生，有时可以采用联合接种方式，如口服加肌肉注射的方式。

6.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，从免疫接种乳牛的牛奶中制备免疫抑制多肽的方法是，采用离心方式脱脂后，分装或喷雾干燥，成为含有免疫抑制多肽的牛奶或奶粉，也可以离心脂脱后，直接用超滤设备和分子量为10,000D的超微滤膜直接浓缩后制备免疫抑制多肽的浓缩液，或喷雾干燥制备干粉，为了制备纯度更高的产品，还可以在离心脱脂后，用HCL等酸剂调PH至4.7～4.8，加热35℃～45℃约30分钟，使酪旦白凝固后用离心方式或过滤方法除去酪旦白，然后用分子量为40,000的超微滤膜进行分离，收集上清液后用分子量为5000的超微滤膜浓缩后冷冻干燥或喷雾干燥成粉，以获得高纯度活性多肽制剂。

7.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，采用本发明方法制备的免疫抑制的多肽制剂中，主要含有经修饰的、已脱除致敏性的过敏原多肽，这些多肽类物质是由各种过敏原进入母牛体内，产生免疫反应，通过各种酶的分解而变成具有免疫抑制作用的多肽。制备的免疫抑制多肽制剂，给过敏症患者口服后可以诱发免疫耐受，抑制免疫反应及过敏反应，消除或减轻过敏症状和体征。

8.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明方法制备的具有免疫抑制作用多肽制剂，主要采用口服方式使用，可以是以牛奶或奶粉形式服用，也可以是与其他辅料或辅剂制备成冲剂、颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液、含片、咀嚼片或与油性辅料制备软胶囊等多种形式，还可以作为食品添加到各种食品中，如酸奶、果冻、布丁、奶酪、饼干等，或者添加到各类饮料中成为咖啡、茶等。

9.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明方式制备的免疫抑制多肽制剂是一种口服形式的脱敏物质，是一种天然的口服脱敏疫苗，可以作为脱敏疗法的重要组成成份，以这种免疫抑制多肽为基础的脱敏疗法无需专家指导，无需注射，没有疼痛，价格低廉，可以暴露过敏原引发免疫耐受反应，又不会导致过敏症的发生。

10.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，制备免疫抑制多肽制剂，应该同时采用多种过敏原制备的疫苗致敏多头乳牛，并收集多头乳牛的牛奶，制备含有多种非致敏性过敏原多肽制剂，不同的乳牛含有不同的基因特征，对过敏原产生的免疫反应各不相同，产生的免疫抑制多肽种类也各不相同，而产生的多种类型多肽可以采用层析方法进行监测、分离和提纯，并进行成份分析和品质监管。